JP3469551B2 - 子宮内膜癌および子宮癌の検出及び監視のための新規な方法 - Google Patents

子宮内膜癌および子宮癌の検出及び監視のための新規な方法

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】発明の利用分野 本発明は、癌、特に子宮内膜癌および子宮癌の新規に開
発された診断方法に関する。 発明の背景 子宮内膜癌は一年当たり約４４，５００人の新しい症例
の割合で発生し、１年当たり約１０，０００人が死亡す
る。早期に診断され治療され、癌がまだ子宮内膜に限定
されていれば、子宮切除によって約９５％治癒を達成出
来る。パパニコロー塗抹によって子宮内膜癌を示せる
が、症例の５０％のみに有効である。残りは異常な膣出
血が子宮内膜癌の典型的な最初の臨床的徴候である。器
官限定子宮内膜癌の検出のための感度のよい方法が大い
に必要とされている。
【０００２】子宮の肉腫、すなわち女性の非常に希な種
類の癌は、癌（悪性）細胞が子宮の筋肉または他の支持
組織の中で成長し始める疾患である。子宮の肉腫は子宮
内膜癌、すなわち癌細胞が子宮の内層で成長し始める疾
患とは異なる。骨盤に高用量のｘ−線による治療（外部
ビーム放射線治療）を受けてきた女性は子宮肉腫の発症
について高い危険率にある。これらのｘ−線は女性に時
として子宮からの出血を止めるために照射される。ほと
んどの癌同様、子宮肉腫は早期に見つけられ（診断され
る）た場合、最善に処置される。
【０００３】そのような癌の徴候を患者がしめした場
合、医者は癌のチェックのための特定の試験、通常内部
（骨盤内）検査で開始される試験を行うであろう。この
試験の間に、医者は骨盤器官の組織に塊または変化を感
じるであろう。次いで、医者はパパニコロ−試験を行う
かもしれない。子宮の肉腫は内部から始まるので、この
癌は通常パパニコロー試験上表れないであろう。医者は
また、子宮頚を延ばして小さなスプーン状の器具を子宮
内に挿入して子宮内層片を取り出すことによって頚管拡
張子宮内膜掻爬術（Ｄ＆Ｃ）を行うかもしれない。この
組織は次いで顕微鏡で癌細胞を検査される。
【０００４】予後（機会および快復）および治療の選択
は、肉腫の病期（子宮だけに存在するのか他の場所に拡
がったかどうか）、腫瘍細胞がどのくらい速く生育する
か、および患者の健康の全般的状態にかかっている。
【０００５】上述のように、個人の治療の決定は該個人
に存在するそのような癌の病期と関連する。しかし、現
在の子宮内膜癌および子宮癌病期診断法は限定され、最
初転移なしと診断された癌が、実は転移していることも
ある。転移した癌の患者は予後が悪く、局在された癌の
患者とは有意に異なる療法を必要とするので転移の発見
は有意義である。
【０００６】したがって、これらの癌を診断するより感
受性の高い方法が必要なだけではなく、ヒトの子宮内膜
癌または子宮癌の病期を診断してそのような癌が転移し
たか否か決定し、転移が開始されていないヒトにおける
そのような癌の進行を監視する感受性ある方法が大いに
必要である。
【０００７】ウテログロブリンおよびＣＣ１０等のステ
ロイド結合蛋白質は、ポリ塩素化ビフェニル類のメチル
スルホニル代謝物といっしょにステロイドに結合する一
群の蛋白質である。この蛋白質群の蛋白質の正確な機能
は特定されていない。ウテログロブリンはＰＬＡ２が仲
介する反応を阻害することが示された。
【０００８】本発明に有用な遺伝子および遺伝子産物
は、ウテログロブリンおよびＣＣ１０に相同性を示し、
子宮内膜癌試料においてｍＲＮＡの高い発現を示し、哺
乳動物において発現される。これらの遺伝子および遺伝
子産物は、ヒト子宮内膜特異的ステロイド結合因子I,II
およびIIIと題された公開された特許出願ＷＯ９７／３
４９９７に記載されており、該出願は参照により本明細
書に取り込まれる。本明細書明細書において、遺伝子お
よびそれらのコード化された産物は、ＷＯ９７／３４９
９７において公開されたヒト子宮内膜特異的ステロイド
結合因子I（ｈＥＳＦ Ｉ）に対応するヒト子宮内膜特
異的ステロイド結合因子I（ｈＥＳＦ Ｉ）と称され
る。ＷＯ９７／３４９９７は不全と関連するｈＥＳＦ
Ｉ、IIおよびIIIの変異体が、ｈＥＳＦ Ｉ、IIおよびI
IIの発現不足、発現過剰または発現変化から生じる疾患
またはその疑いの診断に付け加えるあるいは診断を明確
にできる診断手段を提供するであろうことを教示してい
る。たとえば、変異した遺伝子は遺伝性喘息または子宮
内膜癌の指標になり得ることが示唆されている。ＷＯ９
７／３４９９７はまた、新生物の存在の検出に使用する
ためのｈＥＳＦ Ｉ、IIおよびIIIの発現過剰または発
現不足の検出の診断的アッセイを開示している。
【０００９】今や、ｈＥＳＦ Ｉは子宮内膜癌および子
宮癌の癌マーカーとして有用であるこが見出された。 発明の総括 これらのおよび他の目的のため、患者から試料を取り、
そして、試料中の、ｈESF Iをコード化する核酸配列ま
たはｈESF I核酸配列によってコード化された蛋白質生
成物を検出することを含む、患者における癌マーカーｈ
ESF Iの発現を検出する方法を提供することが本発明の
目的である。
【００１０】子宮内膜癌または子宮癌に罹っていると疑
われる患者から得られた細胞、組織または体液中の、ｈ
ESF Iポリペプチドのレベルを測定し；そして該測定さ
れたレベルを正常な細胞、組織または体液中のｈESF I
のレベルと比較し、ここで患者のｈESF Iレベルの正常
な細胞、組織または体液中のｈESF Iのレベルに対する
増加は子宮内膜癌および／または子宮癌を示すものであ
ることからなる子宮内膜癌または子宮癌に罹っていると
疑われる患者の子宮内膜癌および／または子宮癌を検出
するための診断方法を提供することはもう１つの目的で
ある。
【００１１】子宮内膜癌および／または子宮癌に罹って
いると疑われる患者から得られた細胞、組織または体液
中の、ｈESF Iの転写レベルを測定し；そして該測定さ
れた転写レベルを正常な細胞、組織または体液中のｈES
F I転写レベルと比較し、ここで患者のｈESF I転写レベ
ルの正常な細胞、組織または体液中のｈESF I転写レベ
ルに対する増加は子宮内膜癌および／または子宮癌と関
連することからなる、子宮内膜癌および／または子宮癌
に罹っていると疑われる患者の子宮内膜癌または子宮癌
を検出するための診断方法を提供することはもう１つの
目的である。
【００１２】転移したことが知られていない子宮内膜癌
および／または子宮癌に罹っている患者を同定し；該患
者からの体液の試料中のｈESF Iレベルを測定し；そし
て該測定されたｈESF Iレベルを正常な対照試料のｈESF
Iのレベルと比較し、ここで患者のｈESF Iレベルの正
常な対照のｈESF Iのレベルに対する増加は転移した癌
と関連することからなる、転移して転移の発症をしてい
ない患者の子宮内膜癌および／または子宮癌を監視する
方法を提供することはもう１つの目的である。
【００１３】子宮内膜癌または子宮癌に罹っている患者
を同定し；該患者からの体液の試料中のｈESF Iレベル
を測定して該患者にとっての基底ｈESF Iレベルを確立
し；該患者からの同じ体液お試料中のｈESF Iレベルを
続く時間に測定し；そして、該測定されたｈESF Iレベ
ルを基底ｈESF Iのレベルと比較し、ここで患者の測定
されたｈESF Iレベルの同じ患者の基底ｈESF Iレベルに
対する増加は進行する癌と関連し、患者の測定されたｈ
ESF Iレベルの同じ患者の基底ｈESF Iレベルに対する減
少は退行しているまたは軽快している癌と関連する、子
宮内膜癌および／または子宮癌に罹っている患者の子宮
内膜癌および／または子宮癌の病期を監視する方法を提
供することはさらにもう１つの目的である。
【００１４】本発明の他の目的、特徴、有利性および態
様は下記記載から当業者には明らかであろう。しかし、
下記記載および特定の実施例は本発明の好適具体例をし
めすものの、説明にすぎない。下記記載を読むことおよ
び本明細書の他の部分を読むことにより、開示された本
発明の精神と範囲以内での種々の変化と修飾が容易に明
瞭となろう。 発明の説明 本発明は正常および異常レベルの測定を含む、細胞、組
織および体液中のｈESF IポリペプチドまたはｈESF I核
酸のレベルを検出するための定量的及び定性的の両方の
診断アッセイに関する。”ｈESF Iポリペプチド”と
は、ＷＯ９７／３４９９７中にｈESF Iについて開示さ
れたと同一のあるいは実質的に類似のアミノ酸配列を有
する蛋白質またはその断片をいう。ＷＯ９７／３４９９
７に開示されたｈESF I蛋白質と”実質的に類似の”ポ
リペプチドはｈESF I蛋白質の構造および活性を変えな
い保存的アミノ酸置換を含むこともできる。”ｈESF I
核酸”とは、ＷＯ９７／３４９９７中にｈESF Iについ
て開示されたｈESF I蛋白質またはそれと同一の構造お
よび活性を有するポリペプチドをコード化化しているRN
AおよびDNAの両方を含むことを意味する。かくして、高
いポリペプチドまたは転写レベルの検出により正常な対
照体液または組織試料に比較されたｈESF Iポリペプチ
ドの過剰発現を検出するための本発明の診断アッセイを
使用して子宮内膜癌および子宮癌を含む癌の存在を検出
することができる。
【００１５】宿主から得られた試料において、本発明の
ポリペプチドのレベルまたはｈESFIのような遺伝子の転
写レベルを決定するのに使用できるアッセイ技術は当業
者に周知である。そのようなアッセイは、ラヂオイムノ
アッセイ、逆転写酵素PCR（RT-PCR）アッセイ、グリデ
イング、免疫組織化学アッセイ、インジッツハイブリダ
イゼーションアッセイ、競合的結合アッセイ、ウエスタ
ーン・ブロット分析およびELISAアッセイであるが、こ
れらに限定されない。これらの内、ELISAアッセイは生
物学的液体中の遺伝子の発現された蛋白質を検出するの
にしばしば好んで使用される。ELISAアッセイは抗体が
容易に市販のものから入手されないときは、最初にｈES
F Iに特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を
調製することからなる。さらに、ｈESF Iに特異的に結
合するリポーター抗体が一般的に調製される。リポータ
ー抗体は放射性、蛍光性または酵素的試薬、たとえば、
西洋ワサビペルオキシダーゼ酵素またはアルカリ性ホス
ファターゼのような検出可能な試薬に結合される。
【００１６】ELISAを行うため、ｈESF Iに特異的な抗体
を該抗体と結合する固体支持体、たとえば、ポリスチレ
ン皿の上でインキュベートする。次いで、上記皿の上の
いかなる遊離蛋白質結合部位も、ウシ血清アルブミンの
ような非特異的蛋白質とインキュベートすることによっ
て被覆される。
【００１７】次に、分析サンプルを、ｈＥＳＦ Ｉ がポ
リスチレン皿に付着させた特異的抗体と結合する間、皿
内でインキュベートする。非結合サンプルをバッファー
で洗い流す。ｈＥＳＦ Ｉ を特異的に指し示し、西洋わ
さびのペルオキシダーゼに連結したレポーター抗体を、
皿内に置くと、その結果、ｈＥＳＦ Ｉ に結合した任意
のモノクローナル抗体とレポーター抗体が結合する。次
いで、付着しなかったレポーター抗体を洗浄除去する。
次に、比色基質を含むペルオキシダーゼ活性用試薬を皿
に加える。ｈＥＳＦ Ｉ 抗体に連結した固定化ペルオキ
シダーゼは、着色反応生成物を生成する。与えられた時
間内の発色量は、サンプル内に存在するｈＥＳＦ Ｉ タ
ンパク質量と比例する。定量結果は、典型的には、標準
曲線を参考にして得られる。典型的には、定量診断アッ
セイ用に本発明を限定するわけではないが、疾病を示す
（＋）の結果または異常な高レベルは、血液レベルが正
常な健康個体集団の平均血液レベルの三標準偏差（集団
の９９．８６％）より高いレベルである。
【００１８】固体支持体に付着させたｈＥＳＦ Ｉ 特異
抗体および標識ｈＥＳＦ Ｉ および宿主から誘導したサ
ンプルを、固体支持体に負荷して、競合アッセイを行う
と、固体支持体に付着した標識検出量は、サンプル中の
ｈＥＳＦ量と相関する。
【００１９】また、核酸法を用いると、子宮内膜癌およ
び／または子宮癌の異常な細胞増殖指標のマーカーとし
て、ｈＥＳＦ Ｉ の転写レベルを検出することもでき
る。ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）、ならびに、リガー
ゼ鎖反応（ＬＣＲ）(ligase chain reaction) および核
酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＡＢＡ）(nucleic acid se
quence based amplification) の様なその他の核酸法を
用いて、悪性細胞を検出し、様々な悪性疾患を診断およ
びモニターすることも出来る。例えば、逆転写酵素(reb
erse-transcriptase) ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）は、数千
種の他のｍＲＮＡの複合混合物中の特定のｍＲＮＡ集団
の存在を検出するために用いることの出来る強力な技術
である。ＲＴ−ＰＣＲでは、酵素逆転写酵素を用いて、
ｍＲＮＡ種を最初に相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に逆転写
し；次に、ｃＤＮＡを標準ＰＣＲ反応で増幅する。この
ように、ＲＴ−ＰＣＲは、増幅によって、一つのｍＲＮ
Ａ種の存在を示すことが出来る。従って、ｍＲＮＡがそ
れを生成する細胞に高い特異性を持つならば、特定の型
の細胞の存在を同定するために、ＲＴ−ＰＣＲを用いる
ことが出来る。
【００２０】グリッド上に並んだクローンへのハイブリ
ダイゼーションを用いると、その遺伝子の発現を検出
し、そしてその発現レベルを定量する（グリッディン
グ）(gridding)ことが両方とも出来る。この研究方法で
は、ｈＥＳＦ Ｉ 遺伝子をコード化するｃＤＮＡを基体
に固定する。基体は、限定するつもりはないが、ガラ
ス、ニトロセルロース、ナイロンまたはプラスチックを
含む任意の適当な型であることが出来る。ｈＥＳＦ Ｉ
クローンをコード化するＤＮＡを基体に付着させ、次い
で、分析物と共にインキュベートする。分析物は、興味
ある組織から単離されたＲＮＡまたはＲＮＡの相補的Ｄ
ＮＡ（ｃＤＮＡ）コピーであることが出来る。基体結合
クローンと分析物間のハイブリダイゼーションは、限定
するつもりはないが、分析物の放射性標識あるいは蛍光
標識、またはハイブリドを検出するために設計された第
二の分子を含む、様々な手段によって検出し定量するこ
とが出来る。遺伝子の発現レベルの定量は、既知の標準
から定量されたそれと比較した分析物からのシグナルの
強度の比較によって行うことが出来る。標準は、標的遺
伝子をインビトロでの転写し、収率を定量し、次にその
物質を用いて標準曲線を作成することによって、得るこ
とが出来る。
【００２１】上記の試験を、血液、尿、唾液、組織生検
および検死物質からのような患者体液ならびに組織抽出
物（ホモジネートまたは可溶化組織）から誘導されたサ
ンプルで行うことが出来る。ポリペプチドあるいは転写
レベルを測定することによって子宮内膜癌または子宮癌
に苦しむと予想される患者からの細胞、組織または体液
で定量されたｈＥＳＦ Ｉ レベルを、正常あるいは対照
の細胞、組織または体液中のｈＥＳＦ Ｉ レベルと比較
する。正常な健康個体から得られた同一の細胞、組織ま
たは体液中のレベルと比較して、患者で測定されたｈＥ
ＳＦ Ｉ レベルが上昇している場合、その患者が子宮内
膜癌および／または子宮癌であることを示している。
「レベル上昇」とは、同一の正常細胞、組織または体液
内のｈＥＳＦ Ｉ と比較して、患者内で測定されたｈＥ
ＳＦ Ｉ が、少なくともおおよそ２倍上昇していること
を意味する。上昇したｈＥＳＦ Ｉ レベルの検出は、子
宮内膜癌および子宮癌の両方の診断に有用である。
【００２２】さらに、子宮内膜癌および／または子宮癌
であると診断された患者のｈＥＳＦＩ をモニターする
ことは、未だ転移していない癌の転移の初動期の決定
に、さらに癌の段階の決定に、有用である。例えば、ｈ
ＥＳＦ Ｉ の検出は、転移の初動期で未だ転移していな
い患者の子宮内膜癌または子宮癌をモニターする方法と
して用いることが出来る。この方法では、転移している
ことを知らない子宮内膜癌または子宮癌に苦しむ患者が
同定される。まず、患者からの体液サンプルのｈＥＳＦ
Ｉレベルを測定する。次に、これらの測定されたｈＥＳ
Ｆ Ｉ レベルを、正常な対照サンプルからの同一の体液
型のｈＥＳＦ Ｉ レベルと比較する。正常対照に対して
患者で測定されたｈＥＳＦ Ｉ レベルの増加は、癌の転
移と関連する。
【００２３】子宮内膜癌または子宮癌に苦しむ患者の子
宮内膜癌または子宮癌の段階もまた、決定することが出
来る。この方法では、子宮内膜癌または子宮癌に苦しむ
患者が同定される。患者からの体液サンプル内のｈＥＳ
Ｆ Ｉ レベルを測定して、前記患者のｈＥＳＦ Ｉ レベ
ルの基準線を確立する。次に、同一体液サンプル内のｈ
ＥＳＦＩレベルを、患者の主治医と共に予定した健康診
断のような次の機会に定量する。次に、測定されたｈＥ
ＳＦ Ｉ レベルを、患者のｈＥＳＦ Ｉ 基準線レベルと
比較する。この方法では、患者のｈＥＳＦ Ｉ 基準線レ
ベルに対する測定された患者のｈＥＳＦＩレベルの増加
は、癌の進行と関連し、ｈＥＳＦＩ基準線レベルに対す
る測定されたｈＥＳＦＩレベルの減少は、癌の後退また
は緩解と関連する。また、患者で確立されたｈＥＳＦ
Ｉ 基準線レベルと比較して測定されたｈＥＳＦ Ｉ レ
ベルの増加は、転移を示すであろう。 実施例 本発明は、以下の実施例によって、さらに説明される。
実施例は、具体的実施態様の参考として本発明を説明す
るためにのみ提供される。これらの例示は、本発明のあ
る具体的な態様を説明するものであるが、開示された本
発明の範囲を制限または限定を示すものではない。
【００２４】すべての実施例は、詳細に記載されている
ものを除いて、当業者らに周知の日常的な標準的技術を
用いて行われる。以下の実施例の日常的な分子生物学的
技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ Ｃ
ＬＯＮＩＮＧ： Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵ
ＡＬ、第二版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ．Ｎ．Ｙ．，１９８９（以後”
Ｓａｍｂｒｏｏｋ”と称す）の様な、標準的研究室マニ
ュアルに記載されている方法に従って、実行することが
出来る。
【００２５】以下の実施例に示すすべての量は、明記し
ない限り、重量である。特に記載されていない限り、以
下の実施例のフラグメントのサイズ分離は、Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋ、および、例えばＮｏｅｄｄｅｌら、Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ ＡｃｉｄｓＲｅｓ．，８，４０５７、１９８０の
様な数多くのその他の参考文献に記載の、アガロースお
よびポリアクリルアミドゲル電気泳動（”ＰＡＧＥ）の
標準技術を用いて行われる。 実施例１． ｈＥＳＦ Ｉ の組織分布 ｈＥＳＦ Ｉ 発現の組織分布を決定するために、ｍＲＮ
ＡおよびｃＤＮＡを様々な組織から調製し、ｈＥＳＦ
Ｉ プライマーを用いて、ポリメラーゼ鎖反応を行っ
た。結果を以下に示す。
【００２６】
【表１】
【００２７】実施例２． 遺伝子発現の相対的定量 蛍光ＴａｇＭａｎプローブでの即時定量ＰＣＲは、Ｔａ
ｑ ＤＮＡポリメラーゼの５’−３’ヌクレアーゼ活性
を用いた定量検出システムである。方法は、５’をレポ
ーター染料および下流の３’を消光剤染料で標識した内
部蛍光オリゴヌクレオチドプローブ（ＴａｑＭａｎ）を
用いる。ＰＣＲの間に、Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼの
５’−３’ヌクレアーゼ活性はレポーターを放出し、次
に、その蛍光を、レーザー検出器、Ｍｏｄｅｌ ７７０
０ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔ
ｅｍ（ＰＥ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、
Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）によって検出
する。
【００２８】内因性対照の増幅を用いて、反応物に加え
られたサンプルＲＮＡの量を標準化し、逆転写酵素（Ｒ
Ｔ）の効率を標準化する。シクロフィリン、グリセルア
ルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤ
Ｈ）、または１８ＳリボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）のい
ずれかが、この内因性対照として用いられる。研究した
全サンプル間の相対的定量を計算するために、一つのサ
ンプルでの標的ＲＮＡレベルを、相対結果（キャリブレ
ーター）の基準として用いる。標準曲線法または比較法
（Ｕｓｅｒ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ＃２： ＡＢＩ ＰＲ
ＩＳＭ ７７００Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏ
ｎ Ｓｙｓｔｅｍ）を用いると、「キャリブレーター」
に相関した定量を得ることが出来る。
【００２９】組織分布ならびに正常組織および腫瘍組織
内のｈＥＳＦ Ｉ のレベルを評価するために、全ＲＮＡ
を、正常組織、腫瘍組織、ならびに腫瘍およびそれと関
連する正常組織、から抽出した。次に、第一鎖ｃＤＮＡ
を逆転写酵素で調製し、ｈＥＳＦ Ｉ に特異的なプライ
マーおよびＴａｑＭａｎプローブを用いてポリメラーゼ
鎖反応を行った。ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７７００ Ｓｅｑ
ｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒを用いて、結果を分析し
た。絶対数は、キャリブレーターと比較したＨＥＳＦ
Ｉ の相対的発現レベルである。
【００３０】絶対数は、胸腺（キャリブレーター）と比
較したＨＥＳＦ Ｉ の１２の正常組織での相対的発現レ
ベルである。これらのＲＮＡサンプルは、異なる個人の
特定の組織からのサンプルをプールすることによって得
られた。
【００３１】
【表２】
【００３２】相対的発現レベルは、ｈＥＳＦ Ｉ ｍＲＮ
Ａの発現が、分析されたプールサンプルのその他の１２
の正常組織と比較して、正常な子宮のプール（６９８）
では１０倍より高い、ことを示している。第二のより高
く発現する精巣（４３．３）は、男性組織であり、子宮
内膜癌または子宮癌の診断への問題とはならないであろ
う。これらの結果は、ｈＥＳＦ Ｉ ｍＲＮＡの発現が、
子宮、主に子宮内膜からなる組織で特異的に高いこと
を、示している。
【００３３】絶対数は、異なる個体からのサンプルプー
ルに対応し、それらを、以下の表の単一個体のサンプル
から得られた絶対数と比較することはできない。以下の
表では、絶対数は、３６ペアのマッチング(matching)サ
ンプルの、胸腺（キャリブレーター）と比較したｈＥＳ
Ｆ Ｉ の相対的発現レベルである。それぞれのマッチン
グペアは、特定組織の癌サンプルおよび同一個体の同一
組織の隣接する正常サンプルを含む。
【００３４】
【表３】
【００３５】マッチングサンプルを分析した場合、より
高い発現レベルは、子宮内膜および子宮で認められ、こ
れらの二組織に高度な組織特異性を示す。これらの結果
から、正常組織で得られた組織特異性結果が確認され
る。さらに、同一個体からの癌サンプルと同系の正常な
隣接組織内でのｍＲＮＡ発現レベルを、比較した。これ
らのデータは、対応する正常な隣接組織と比較した場
合、子宮内膜癌組織、２、６、７および９で、ｈＥＳＦ
Ｉ の過剰発現を示している。同様に、癌での過剰発現
は、子宮サンプル２および４でも認められる。診断用マ
ーカーＰＳＡおよびＰＬＡ２をコード化する遺伝子につ
いての以前のｍＲＮＡ発現分析では、分析したマッチン
グサンプルの４０％から８０％で、ｍＲＮＡの過剰発現
を示した。
【００３６】概して言えば、試験した子宮内膜および子
宮のマッチングサンプルのおおよそ半数に認められた高
レベルの組織特異性＋ｍＲＮＡの過剰発現は、ｈＥＳＦ
Ｉが子宮内膜癌および子宮癌の良好な診断マーカーで
あることを、証明している。
フロントページの続き (72)発明者 バークザク，ジョン・ディー アメリカ合衆国カリフォルニア州95054, サンタ・クララ，ヴィスタ・クラブ・サ ークル 1526，アパートメント 301 (56)参考文献 国際公開97／034997（ＷＯ，Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/68 G01N 33/53 ＢＩＯＳＩＳ／ＣＡ／ＭＥＤＬＩＮＥ／Ｗ ＰＩＤＳ（ＳＴＮ)

Claims (6)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 患者の試料中の癌マーカーｈESF Iの発
    現を検出するための方法であって、 試料中の、ｈESF Iをコードする核酸配列またはｈESF I
    核酸配列によりコードされた蛋白質生成物を検出するこ
    とを含む方法。
  2. 【請求項２】 子宮内膜癌または子宮癌に罹っていると
    疑われる患者から得た細胞、組織または体液において子
    宮内膜癌または子宮癌の存在を検出する方法であって、 （ａ）子宮内膜癌または子宮癌に罹っていると疑われる
    患者から得た細胞、組織または体液においてｈESF Iポ
    リペプチドのレベルを測定し；そして （ｂ）上記の測定されたレベルを、正常な細胞、組織ま
    たは体液中のｈESF Iポリペプチドのレベルと比較し、
    ここで、患者から得た細胞、組織または体液のｈESF I
    レベルの、正常な細胞、組織または体液中のｈESF Iレ
    ベルに対する増加が子宮内膜癌または子宮癌を示すもの
    であることを含む方法。
  3. 【請求項３】 子宮内膜癌または子宮癌に罹っていると
    疑われる患者から得た細胞、組織または体液において子
    宮内膜癌または子宮癌の存在を検出する方法であって、 （ａ）子宮内膜癌または子宮癌に罹っていると疑われる
    患者から得た細胞、組織または体液においてｈESF Iの
    転写レベルを測定し；そして （ｂ）上記の測定されたｈESF I転写レベルを、正常な
    細胞、組織または体液中のｈESF I転写レベルと比較
    し、ここで、患者から得た細胞、組織または体液のｈES
    F I転写レベルの、正常な細胞、組織または体液中のｈE
    SF I転写レベルに対する増加が子宮内膜癌または子宮癌
    を示すものであることを含む方法。
  4. 【請求項４】 転移していない患者から得た体液の試料
    において転移の開始に関して子宮内膜癌または子宮癌を
    監視する方法であって、 （ａ）転移したことが知られていない子宮内膜癌または
    子宮癌に罹っている患者から得た体液の試料中のｈESF
    Iレベルを測定し；そして （ｂ）上記の測定されたｈESF Iレベルを、正常な細
    胞、組織または体液中のｈESF Iポリペプチドのレベル
    と比較し、ここで、患者から得た体液試料中のｈESF I
    レベルの、正常な細胞、組織または体液中のｈESF Iレ
    ベルに対する増加が転移した癌と関連することを含む方
    法。
  5. 【請求項５】 子宮内膜癌または子宮癌に罹っている患
    者から得た体液の試料において子宮内膜癌または子宮癌
    の病期を監視する方法であって、 （ａ）子宮内膜癌または子宮癌に罹っている患者から得
    た体液の試料においてｈESF Iレベルを測定して、該患
    者にとっての基底ｈESF Iレベルを確立し； （ｂ）上記患者からの同じ体液の複数の試料中のｈESF
    Iレベルをのちの一定時間測定し；そして （ｃ）上記の測定されたｈESF Iレベルを、基底ｈESF I
    レベルと比較し、ここで、患者のｈESF Iレベルの、同
    じ患者の基底ｈESF Iレベルに対する増加が進行する癌
    と関連し、患者のｈESF Iレベルの、同じ患者の基底ｈE
    SF Iレベルに対する減少が退行している癌または軽快し
    ている癌と関連するものであることを含む方法。
  6. 【請求項６】 患者の体液試料中の測定されたｈESF I
    レベルの同じ患者の基底ｈESF Iレベルに対する増加が
    転移した癌に関連する、請求項５記載の方法。
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