KR101785120B1 - 병적 장애의 치료 및/또는 예방에 이용되는 항-ｌｐｓ 풍부한 면역글로블린 조제물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 포유류 초유 또는 조류 알로부터 유도된 항 LPS 항체들이 풍부하고, 선택적으로 만성 간 질환, 간경변 및 이와 관련된 질병 또는 임의의 여병과 같은 병적 장애의 치료, 진행의 지연 또는 저지를 위하여 질병-관련된 항원, 초유, 우유 또는 우유 산물 성분(들)에 대항하는 추가 항체와 임의의 어쥬번트가 포함된 조제물의 용도를 제공한다. 본 발명은 항-LPS 풍부한 항체 조제물과 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 항체의 조합을 포함하는 복합 조성물과 면역-관련된 장애의 치료에 이의 용도에 더 관계한다.

Description

병적 장애의 치료 및/또는 예방에 이용되는 항-ＬＰＳ 풍부한 면역글로블린 조제물{ANTI-LPS ENRICHED IMMUNOGLOBULIN PREPARATION FOR USE IN TREATMENT AND/OR PROPHYLAXIS OF A PATHOLOGIC DISORDER}
본 발명은 만성 간 질환, 간경변 및 이와 관련된 질병 또는 임의의 여병과 같은 병적 장애(pathologic disorder)의 치료, 진행을 지연 또는 진행을 방지하기 위하여 포유류 초유 또는 조류 알로부터 유도한 항-LPS 항체들, 그리고 임의로 질병-관련된 항원, 초유, 우유 또는 우유 산물 성분(들)에 대한 추가 항체들 그리고 임의의 어쥬번트가 풍부한 조제물(preparations)의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 항-LPS 풍부한 항체 조제물과 병적 장애에 대해 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 항체들의 조합을 포함하는 복합 조성물 및 면역-관련된 장애의 치료에 이를 사용하는 용도에 관한 것이다.
본 출원을 통하여 언급된 모든 공고들은 여기에서 언급된 모든 참조를 포함하는 전문이 참고문헌에 통합된다.
만성 간염은 최소한 6개월 지속되는 간의 염증이다. 급성 간염보다는 비록 덜 빈번하지만, 만성 간염은 수년간, 심지어 10년간 지속될 수 있다. 대부분의 사람들에게서 상당히 가볍고, 심각한 간 손상을 야지하지 않는다. 그러나, 일부 사람들에게서 지속적인 염증은 서서히 간을 손상시키고, 종국에는 간경변 (간의 심각한 반흔), 간 부전을 초래하고, 간혹 간암이 된다. 만성 간염은 주로 B형 간염 바이러스 (HBV), C형 간염 바이러스 (HCV) 및 약물이 원인이다.
만성 C형 간염 바이러스 (HCV) 감염은 유효한 면역 반응을 확립하기 위하여 숙주의 무능을 특징으로 한다. 동시에, 만성 HCV 감염은 지속적인, 비정상적으로 높은 수준의 면역 활성화와 관련있다. 이러한 활성화는 간 손상 및 질환진행에 기여한다. 만성 HCV 감염을 가진 환자들은 임상 과정이 상당히 다양한데, 일부는 간경변으로 전개되며, 다른 일부는 간 질환으로 진행을 보이지 않는다.
에탄올 소비를 포함한 부수적인 몇 가지 위험 인자들은 가속화된 간 손상 및 간경변으로의 진행과 관련있다. 만성 HCV 및 에탄올 소비를 한 환자들은 간 질환으로 진행이 가속화된 것을 볼 수 있었다. 이는 LPS의 증가된 수준과 관련있다 [Bedogni, G. Am. J. Gastroenterol. 103(9): 2248-53 (2008)]. 흥미로운 것은, 최근 연구에서 HCV 비구조적 단백질 NS5A는 LPS에 의해 활성화되는 Toll-유사 수용체 (TLR) 4를 활성화시킨다는 것을 밝혔다[Machida, K. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106(5):1548-53 (2009].
LPS는 간 질환의 진행과 연관될 뿐만 아니라, 만성 감염의 영구화와도 연관될 수 있다. 자가 제어 방식의 감염 환자와 비교하였을 때, 만성 HCV를 가진 환자의 단핵세포는 HCV 코어 단백질 또는 LPS에 반응하여 상당히 많은 IL-10 및 TNF 알파를 생산한다 [Martin-Blondel, G. et al. J. Virus. Hepatitis (March 11, 2009)]. 따라서, 장 미생물 산물의 전위, 면역 활성화 및 간 질환의 진행이 밀접하게 연결된 것으로 보이지만, 인과관계 증명이 부족하다. 추가로, LPS 수준과 바이러스 제거 사이에 연관은 있지만, 이는 더 밝혀져야 할 필요가 있다. 따라서, 이들의 상관관계를 명확하게 하기 위한 의도의 연구가 필요하다. 미생물의 전위(translocation)가 면역 활성화 및 간 질환의 진행을 추진한다면, 이에 따라서 미생물의 전위를 감소 또는 방지하는 전략이 면역 활성화에 상당한 영향을 줄 수 있으며, 따라서 만성 HCV 감염의 자연적 내력에도 영향을 줄 수 있을 것이다.
자발적 세균성 복막염 (SBP)은 간경변, 문맥 고혈압 및 복수와 같은 만성 간 질환의 공통적 그리고 심각한 여병(complication)이다. SBP는 환자의 최대 30%까지 발생하고, 이는 병원내 사망률의 최대 25%와 연관된다. 정체된 그리고 면역 고갈된 복막 유체로의 세균성 전위는 SBP의 주요 병리 기전으로 간주된다. 천자술(paracentesis) 및 광범위한 항생제 요법은 급성 감염의 유효한 치료로 구성되지만, 많은 환자들은 항생제 요법에 저항성이 증가된 병원균과 BSP의 재발을 겪고 있다[Song, K.H. et al. BMC Infect Dis. 9(1): 41 (2009)]. 만성 항생제를 이용한 SBP 예방 방법은 논쟁의 의지가 있으며, 항생제 저항 종의 출현과 연관된다 [Cohen, M.J. et al. Cochrane Database Syst Rev. 2: CDO04791 (2009)].
최근, 세균성 전위와 간경변의 여병의 발생 사이에 증가된 연관성이 밝혀졌다. 혈청내 세균성 산물(리보좀 16s RNA) 또는 내독소혈증 (LPS 또는 LBP)의 수준은 간경변 환자에서 볼 수 있는 정맥류 출혈, 간신증후군 및 과역동적 순환 상태와 관련있다[El-Naggar, M.M. 'et al. J. Med. Microbiol. 57(Pt 12):1533-8 (2008)].
수십년간, 농장 동물들의 유선을 통하여 면역원-특이적 항체들의 증가된 분비를 얻기위한 다양한 시도들이 있었다. 이러한 시도들은 우유를 통하여 면역원-특이적 항체들의 대량 생산을 목적으로 한다. 그러나, 성숙한 우유안에 항체 수준은 초유에서 얻을 수 있는 수준과 비교하였을 때 여전히 낮다(대략 10배 범위).
초유 (또한 첫 번째 우유로도 알려짐)는 임신 말기 및 출생후 수일내에 유선에서 만들어지는 형태의 우유다. 인간의 경우, 초유는 고농도의 영양소 및 항체들을 보유하지만, 그 양이 작다. 초유는 탄수화물, 단백질, 미네랄 염, 비타민 및 면역글로블린이 높다. 초유는 또한 과립 및 간엽 세포, 호중구, 단핵세포/대식세포 그리고 림프구와 같은 다양한 부유 세포들을 포함하며 그리고 성장 인자들, 호르몬 및 사이토킨을 포함한다.
바이러스 및 세균으로부터 보호할 수 있는 백혈구는 초유에 다수 존재한다. 초유 백혈구는 신생 소의 수동 면역을 강화시키는데, 특히 내장 면역에 기본적인 항체들 및 면역글로블린 종류에 대해 강화된다.
초유에서 발현되는 다수의 분비성 항체들은 신생아의 목구멍, 폐 및 내장의 점막의 보호를 돕는다. 소의 초유 (BC)는 3가지 주요 면역글로블린: IgG, IgM 및 IgA를 포함한다.
상기에서 나타낸 것과 같이, 초유는 유선의 뚜렷한 생리학적 그리고 기능적 상태로 발생하는 상당히 독특한 산물이다. 반추동물에서, 초유와 성숙 우유 사이의 주요 구성적 차이는 락토페린 및 면역글로블린과 같은 생체활성 성분이 높고, 면역글로블린중 IgG는 80-90%로 구성된다 [Tarbell, K.V. et al. J. Exp. Med. 199:1467-77 (2004); Bluestone, J.A. and Tang, Q. J. Autoimmun 24:55-62 (2005); Putnam, A.l. et al J.Autoimmun. 24:55-62 (2005)].
소와 같은 동물을 특이적 항원으로 면역주사하면, 면역 반응을 조절하는데 이용할 수 있는 특이적 항체의 생산 및 수확이 가능하여, 따라서 면역-관련된 장애의 치료에 이용할 수 있다. 따라서, 이러한 방법은 항원-특이적 항체들 및 면역 어쥬번트를 생산하는 간단하고 안전한 수단으로 작용한다.
본 발명의 일부 발명자들의 몇 가지 기존 특허 및 특허 출원들은 감염성 질환의 수동 치료에 소의 초유에서 구한 특이적 세균성 병원균 항체들의 이용을 설명하였다. 예를 들면, 본 발명의 일부 발병자들의 WO 04/078209는 장내 세균, 특히, 그람 음성 세균의 하나 이상의 세포 벽 항원을 포함하는 백신을 숙주 동물에 면역주사하여 준비된 위장 장애 치료 또는 예방용 화합물 및 조성물을 설명한다. 생산된 과면역 물질은 경구 투여용 테블릿 형태다. WO 03/097094는 공중 병원성 세균으로부터 발생되는 증상을 예방하기 위한 목적으로 비강 투여용 포유류 초유 및 초유 추출물과 콘쥬게이트된, 항체들 (전체 IgG), 또는 F(ab')2 항체들의 생산에 과면역 초유의 이용을 설명한다.
점막 내성은 독성의 결여, 투여의 용이성 그리고 항원-특이적 작용 기전으로 인하여 자가면역 및 염증 질환 치료를 위한 매력적인 방법으로 간주된다[Wershil, B.K. and Furuta, G.T. J. Allergy Clin. Immunol. 121:S380-3; quiz S415 (2008); Faria, A.M. and Weiner, H.L. Clin. Dev. Immunol. 13:143-57 (2006)]. 따라서, 구강 및 점막 투여에 적합한 안정적인 초유에서 유도된 산물을 생산하려는 시도들이 있었다. 예를 들면, 본 발명의 일부 발명자들에 의한 WO 95/08562는 항체가 풍부한 초유로부터 고순도 면역글로블린을 얻는 방법과 활성의 실질적인 손상없이 이러한 초유-항체들을 태블릿으로 압착하는 가능성을 설명한다. 특이적 항체들은 대장균(E. coli), 살모넬라(Salmonela) 및 쉬겔라(Shigella)와 같은 장독성 세균에 대항하여 특이적 항원으로 포유동물을 면역주사하여 수득할 수 있다. 본 발명의 일부 발명자들에 의한 WO 06/053383은 과다 면역 초유, 락토페린 또는 락토페라신의 생체활성 물질 조성물에게 상당히 다양한 위장 pH 하에 안정성을 부여하는 카르복실산 및 알칼리화 모이어티를 설명한다. 끝으로, 본 발명의 일부 발명자들에 의한 WO 03/080082는 위장 환경에서 불안정한 생체활성 물질, 바람직하게는 면역글로블린 또는 이의 단편들 또는 효소의 생존능력을 개선시키는 방법을 설명하는데, 생체활성 물질 및 포유류 초유 및 초유 추출물의 혼합물을 형성하는 것을 포함한다. 이러한 결합은 효소 또는 낮은 pH 조건에 의해 야기되는 단백질가수분해로부터 항체들 또는 항체들 단편들을 보호하고, 그리고 위 또는 반추 또는 적대적 환경에서 이들 기능을 보존한다.
장 점막은 신체의 최다 림프모양의 기관이다. 장 점막은 영양소 흡수의 이중 역할을 하며, 장 내용물에 대해 물리적 그리고 면역학적 장벽을 유지한다. 일정한 항원 자극에도 불구하고, 염증 억제를 통지한다. 바이러스 질환 및 이의 여병을 초유로 치료하는데 두 가지 주요 개념이 관여한다: 점막 미생물의 전위 및 “경구 내성”으로 명명된 질환 항원의 경구 공급으로 강화된 면역 조절.
증가된 점막 미생물의 전위: 이는 질환 발병학에서 사라지는 개념(immerging concept)이다. LPS 및 세균성 DNA의 존재에 의해 정량화되는 미생물 전위의 더 높은 수준은 면역 고갈 및 자가면역 손상을 설명하는 만성 면역 활성화 상태의 중심이다.
장 점막을 통한 자극은 관용성 면역 반응을 야기하는 경향이 있다. 이러한 특징은 자가-항원에 대한 내성을 유도하는데 유익하게 이용할 수 있고, 이러한 방식에서 자가면역(autoimmune)을 억제한다. 실재로, "경구 내성" 은 여러 상이한 질환 모델에서 경구로 공급된 항원에 대해 면역 반응을 유효하게 감소시키는 것으로 나타났다[Safadi, R. et al. Am. J. Gastroenterol. 98(11): 2505-15 (2003)].
소에서 유도된 초유 조제물은 독소-매개된 내장 이상의 치료에 이용할 수 있다는 것은 이미 밝혀졌다. 장내독성발생 대장균 농도로 경구 공격을 받은 10명의 지원자 연구에서, 상응하는 대장균 균주로 소에게 면역주사하여 수득한 소 항체 농축물의 투여는 이 산물을 제공받은 10명의 모든 참가자에서 설사 발생을 막았다; 대조적으로 9/10 대조군에서는 설사가 발생되었다. [Tacket, C.O. et al. N. Engl. J. Med. 318(19): 1240-3 (1988)]. 또다른 연구에서, 장내독성발생 대장균 콜리니화 인자에 대항한 우유에서 유도된 항체를 투여하면, 플라시보를 제공받은 피험자와 비교하였을 때(10명중 7명), 15명중 14명의 피험자들이 설사로부터 보호를 받았다. [Freedman, D.J. et al. J. Infect. Dis. 177(3): 662-7 (1998)].
유사한 병인학을 가진 또다른 질환은 가막성(pseudomembranous) 대장염이다. C. 디피실(C. difficile) 비활성화된 독소 및 전체-세포 사멸된 C. 디피실로 소를 면역주사하여 수득한 면역 유장 단백질의 효과를 평가하였는데, 한 연구에서 C. 디피실 질병의 재발을 방지하는 것으로 나타났다. 16명의 환자들은 2주 동안 C. 디피실 대장염의 만성 발생에 대해 표준 치료후 이 산물을 제공받았다. 한 경우를 제외하고 모든 환자의 대변에서 C. 디피실 독소가 사라졌고, 333일간의 추적 후 재발은 없었다. [van Dissel, J.T. et al. J. Med. Microbiol. 54(2): 197-205 (2005)].
집단적으로, 이러한 관찰은 소로부터 유도된 초유 제조물은 경구로 복용하였을 때 생물학적 활성 농도의 특이적 항체들을 내장 관강으로 전달하고, 이러한 기전에 의해 장에서 다양한 형태의 세균성 독소를 차단시킬 수 있다고 암시한다.
미생물의 전위가 면역 활성화 및 간 질환의 진행을 추진하기 때문에, 미생물의 전위를 감소 또는 방지하는 전략은 면역 활성화에 유의적인 영향을 줄 수 있고, 따라서 만성 HCV 감염의 자연 내력에도 영향을 줄 수 있다. 지금 본 발명은 면역화된 소로부터 높은 수준의 항체를 포함하는 소의 초유 분말 (BPC) 조제물을 LPS와 같은 미생물의 산물에 반응시켜 면역 활성화를 감소시킬 수 있는 면역-조절물질로 사용하는 것을 설명한다. 임의의 이론에 결부되지 않고, 본 발명자들은 미생물의 항원에 BPC 항체들의 부착은 미생물 항원을 혈류로 전위되는 것을 예방하여 면역 반응을 제한시킬 수 있다고 가정한다. 면역계에 이들 효과는 면역계가 관련된 감염성 질환의 치료용으로 이러한 초유 조제물을 사용할 수 있도록 한다. 더 구체적으로, 본 발명은 고농도의 항-LPS 항체들을 포함하는 초유에서 유도된 조제물을 만성 간 질환의 치료 및 개선에 이용하는 용도를 제공한다.
미생물의 전위는 바이러스 매개된, 약물 매개된, 비-알코올성 지방간염 및 임의의 기타 간 질환을 포함하는 상이한 간 장애에서 간 염증의 변화와도 관련된다. 미생물의 전위는 인슐린 저항성, 유형 2 당뇨병, 비만 및 과체중과도 관련될 수 있다. 본 발명에서 나타낸 것과 같이, 조절 T 세포의 제어 또는 면역계의 임의의 기타 성분들과 함께, 본 발명의 항-LPS 풍부한 초유를 이용하여, 질병-특이적 항원을 인지하는 항체들이 풍부한 초유 조제물, 예를 들면, 항-인슐린 풍부한 초유와 L-LPS 풍부한 초유의 조합을 이용하면 이러한 전위를 예방할 수 있다. 따라서, 본 발명은 임의의 급성 또는 만성 간 질환, 당뇨병 및 이와 관련된 임의의 여병, 지방 간, 비 알코올성 지방간염, 및 비만의 치료를 위한 조성물, 복합 조성물 및 방법을 더 제공한다.
따라서, 본 발명의 목적은 만성 간 질환의 진행, 간경변 및 이와 관련된 질병 또는 임의의 여병의 치료, 지연 또는 예방 방법 및 조성물에 초유- 또는 조류 알에서 유도된 항-LPS간 풍부한 면역글로블린 조제물의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 항-LPS 항체들이 풍부한 초유와 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 항체들의 조합을 포함하는 복합 조성물과 면역-관련된 장애의 치료에 이의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 이러한 목적들과 기타 목적들은 설명이 진행됨에 따라 더 명백해질 것이다.
발명의 요약
한 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다. 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도할 수 있다.
한 구체예에서, 병적 장애는 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 또는 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병이다. 또다른 구체예에서, 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 및 이와 관련된 임의의 질환 또는 여병은 간성 뇌증, 자발적 세균성 복막염 (SBP), 복수, 정맥류 출혈, 간경변 관련된 과다역동 순환, 간신증후군, 간폐 증후군, 폐동맥 고혈압, 정맥류 출혈, 부신피질 기능장애 및 의식수준의 변경으로 구성된 군으로부터 선택된다. 또다른 구체예에서, 병적 장애는 간 손상이다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 및 이와 관련된 임의의 장애, 감염성 질환, 그리고 증식성 장애로 구성된 군으로부터 선택된 면역-관련된 장애다.
대안으로, 병적 장애는 2차 복막염 및 수술 후 감염, 간성 심근병증 및 저혈압, 간부신 증후군, 간세포 암종, Alzheimer 질환, 임의의 유형의 기억 상실, 임의의 유형의 치매, 주의력 결핍 장애 (ADHA), 임의의 유형의 학습 장애, 뇌에 알코올 또는 약물 효과, 천식을 포함하는 임의의 유형의 면역 매개된 질환, 및 복막염으로 구성된 군으로부터 선택된 선택될 수 있다.
또다른 구체예에서, 조성물은 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하는 면역글로블린을 포함하는 면역글로블린 조제물을 더 포함한다. 추가 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도할 수 있다.
한 구체예에서, 조성물은 조절 T 세포를 조절하여, 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 또는 사전-염증 Th1 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형의 조절로 연결되어, 상기 질환에 대해 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시킨다.
또다른 구체예에서, 조성물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하고, 이에 의해 상기 질환에 대해 특이적인 면역 반응을 억제하고, 그리고 이때 상기 조성물은 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 및 유형 2 당뇨병, 인슐린 저항성, 비만 및 과체중으로부터 선택된 이와 관련된 임의의 장애중 임의의 하나의 치료용이다.
또다른 구체예에서, 조성물은 대사 증후군 또는 비 알코올성 지방간염 또는 이 둘 모두의 치료 및/또는 예방을 위한 것이다. 또다른 구체예에서, 조성물은 당뇨병의 치료, 및/또는 예방, 포도당 내성의 감소, 혈청 인슐린 수준의 감소, 간성 트리글리세리드 수준의 감소, 또는 콜레스테롤 수준의 감소와 같은 손상된 포도당 내성의 치료용이다.
한 구체예에서, 조성물은 사전-염증 Th1/Th2 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 강화시키고, 이때 상기 조성물은 감염성 질환, 및 증식성 장애의 치료용이다.
조성물은 치료제, 운반체 또는 어쥬번트 및/또는 비-과다면역 초유를 더 포함할 수 있다.
조성물은 경구 투여, 에어로졸과 같은 흡입에 의해, 또는 장관외, 질내, 비강내, 점막, 설하, 국소 또는 직장 투여 또는 임의의 이의 조합에 맞게 조제될 수 있다.
한 구체예에서, 면역글로블린 조제물 또는 이의 임의의 분획물은 LPS 또는 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합한다.
또다른 구체예에서, 조성물은 미생물의 전위를 억제한다. 또다른 구체예에서 조성물은 미생물의 전위를 억제하여, 이에 의해 면역 활성화를 조정한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 피험자에서 면역 내성을 조절하기 위하여 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공하고, 또는 또다른 측면에서, 피험자에서 경구 내성을 조절하기 위한 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 간에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 간에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ NK1.1+ 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP- T 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP+ T 세포를 증가시키고, 비장에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 지방 조직에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하기 위하여 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공한다.
항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다.
또다른 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 약물 조제에 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물의 용도를 제공한다.
항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다.
한 구체예에서, 병적 장애는 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 또는 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병이다.
또다른 구체예에서, 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 및 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병은 간성 뇌증, 자발적 세균성 복막염 (SBP), 복수, 정맥류 출혈, 간경변 관련된 과다역동 순환, 간신 증후군, 간폐 증후군, 폐동맥 고혈압, 정맥류 출혈, 부신피질 기능장애 및 의식의 변경된 수준으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또다른 구체예에서, 약물은 간 손상의 치료 및/또는 예방용이다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 및 임의의 이와 관련된 장애, 감염성 질환, 그리고 증식성 장애로 구성된 군으로부터 선택된 면역-관련된 장애다. 대안으로, 병적 장애는 2차 복막염 및 수술 후 감염, 간성 심근병증 그리고 저혈압, 간부신 증후군, 간세포 암종, Alzheimer 질환, 임의의 유형의 기억 상실, 임의의 유형의 치매, 주의력 결핍 장애 (ADHA), 임의의 유형의 학습 장애, 뇌에 알코올 또는 약물 효과, 천식을 포함한 임의의 유형의 면역 매개된 질환, 그리고 복막염으로 구성된 군으로부터 선택된다.
약물은 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하는 면역글로블린을 포함하는 면역글로블린 조제물을 더 포함할 수 있다. 추가 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다..
한 구체예에서, 약물은조절 T 세포를 조절하여 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 또는 사전-염증 Th1 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형의 조절로 이어지고, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시킨다.
또다른 구체예에서, 약물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 이에 의해 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제하고, 이때 상기 조성물은 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 및 유형 2 당뇨병, 인슐린 저항성, 비만 및 과체중으로부터 선택된 임의의 이와 관련된 장애중 임의의 하나의 치료용이다.
또다른 구체예에서, 약물은 대사 증후군 또는 비 알코올성 지방간염 또는 이둘 모두의 치료 및/또는 예방, 당뇨병의 치료 및/또는 예방, 포도당 내성의 감소, 혈청 인슐린 수준의 감소, 간성 트리글리세리드 수준의 감소, 또는 콜레스테롤 수준의 감소와 같은 손상된 포도당 내성의 치료용이다.
한 구체예에서, 약물은 사전-염증 Th1/Th2 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 강화시키고, 이때 상기 조성물은 감염성 질환, 및 증식성 장애의 치료용이다.
약물은 치료제, 운반체 또는 어쥬번트 및/또는 비-과다 면역 초유를 더 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 약물은 경구 투여, 에어로졸과 같은 흡입에 의해, 또는 장관외, 질내, 비강내, 점막, 설하, 국소 또는 직장 투여 또는 임의의 이의 조합에 맞게 조제될 수 있다.
또다른 구체예에서, 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물은 LPS 또는 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합한다.
또다른 구체예에서 조성물은 점막 미생물의 전위를 감소 또는 억제시켜, 이에 의해 면역 활성화를 조절한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 피험자에서 면역 내성을 조절하기 위하여 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공하고, 또는 또다른 측면에서, 피험자에서 경구 내성을 조절하기 위한 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공한다
또다른 측면에서, 본 발명은 간에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 간에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ NK1.1+ 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP- T 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP+ T 세포를 증가시키고, 비장에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 지방 조직에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하기 위한 약물의 제조에 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 용도를 제공한다.
항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 제공하는데, 이 방법은 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다.
한 구체예에서, 병적 장애는 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 또는 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병이다.
또다른 구체예에서, 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 및 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병은 간성 뇌증, 자발적 세균성 복막염 (SBP), 복수, 정맥류 출혈, 간경변 관련된 과다역동 순환, 간신증후군, 간폐 증후군, 폐동맥 고혈압, 정맥류 출혈, 부신피질 기능장애 및 의식의 변경된 수준으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 간 손상이다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 및 이와 관련된 임의의 장애, 감염성 질환, 그리고 증식성 장애로 구성된 군으로부터 선택된 면역-관련된 장애다. 대안으로, 병적 장애는 2차 복막염 및 수술 후 감염, 간성 심근병증 그리고 저혈압, 간부신 증후군, 간세포 암종, Alzheimer 질환, 임의의 유형의 기억 상실, 임의의 유형의 치매, 주의력 결핍 장애 (ADHA), 임의의 유형의 학습 장애, 뇌에 알코올 또는 약물 효과, 천신을 포함한 임의의 유형의 면역 매개된 질환, 그리고 복막염으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또다른 구체예에서, 조성물은 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하는 면역글로블린을 포함하는 면역글로블린 조제물을 더 포함한다. 추가 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다.
또다른 구체예에서, 조성물은 조절 T 세포를 조절하여 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 또는 사전-염증 Th1 면역 반응쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형의 조절로 이어지고, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시킨다.
또다른 구체예에서, 조성물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하고, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제하며, 이때 상기 조성물은 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 그리고 유형 2 당뇨병, 인슐린 저항성, 비만 및 과체중으로 구성된 군으로부터 선택된 이와 관련된 임의의 장애중 임의의 하나의 치료용이다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 대사 증후군 또는 비 알코올성 지방간염 또는 이둘 모두이다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 당뇨병이다. 또다른 구체예에서, 병적 장애는 손상된 포도당 내성이다.
또다른 구체예에서, 상기 방법은 포도당 내성의 감소, 혈청 인슐린 수준의 감소, 간성 트리글리세리드 수준의 감소, 또는 콜레스테롤 수준의 감소시킨다.
또다른 구체예에서, 상기 방법은 사전-염증 Th1/Th2 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하고, 이에 의해 상기 질환에 대해 특이적인 면역 반응을 강화시키고, 이때 상기 조성물은 감염성 질환, 및 증식성 장애의 치료용이다.
또다른 구체예에서, 조성물은 비-과다 면역 초유 및/또는 치료제, 운반체 또는 어쥬번트를 더 포함한다.
조성물은 경구 투여, 에어로졸과 같은 흡입에 의해, 또는 장관외, 질내, 비강내, 점막, 설하, 국소 또는 직장 투여 또는 임의의 이의 조합에 맞게 조제될 수 있다.
또다른 구체예에서, 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물 LPS 또는 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합한다.
또다른 구체예에서, 상기 방법은 점막 미생물의 전위를 감소 또는 억제시킨다. 또다른 구체예에서, 상기 방법은 점막 미생물의 전위를 감소 또는 억제시키고, 이에 의해 면역 활성화를 조절한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 본 발명은 면역 내성을 조절하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 대안으로, 이 방법은 경구 내성을 조절하는데 이용할 수 있다.
피험자의 간에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하는 방법은 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 치료 유효량을 이를 필요로하는 피험자에 투여하는 단계를 포함한다. 또다른 구체예에서, 이 방법은 간에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 간에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ NK1.1+ 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP- T 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP+ T 세포를 증가시키고, 비장에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 지방 조직에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하기 위한 것일 수 있다.
또다른 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및 예방을 위한 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 활성 성분으로 포유류 항-리포폴리사카라이드 (항-LPS) 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물, 그리고 임의로 추가 초유, 우유 또는 우유 산물 성분(들), 그리고 임의의 어쥬번트(들)을 포함한다. 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물은 LPS 및 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합한다. 임의의 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 상기 질환에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 더 포함할 수 있고, 이에 따라 상기 질환에 특이적인 면역 반응을 활성화 또는 억제할 수 있다. 이러한 복합 조성물은 임의로 추가 치료제 또는 임의의 운반체 및 어쥬번트를 더 포함할 수 있다.
따라서, 하나의 특이적 구체예에 따르면, 본 발명은 포유류 항-리포폴리사카라이드 (LPS) 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 활성 성분으로 포함하는 조성물을 제공한다. 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 및 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병의 치료, 방지 및 예방에 특별히 이용할 수 있는 이러한 조성물은 추가 치료제 또는 임의의 운반체 및 어쥬번트를 더 포함한다.
또다른 선택적 구체예에 따르면, 본 발명은 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물과 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하는 면역글로블린을 포함하는 최소한 하나의 초유- 또는 조류로부터 유도된 면역글로블린 조제물의 복합물을 포함하는 복합 조성물을 제공한다. 이러한 복합 조성물은 추가 치료제 또는 임의의 운반체 및 어쥬번트를 더 포함한다. 이러한 복합 조성물은 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 그리고 유형 2 당뇨병, 인슐린 저항성, 비만 및 과체중와 같은 임의의 이와 관련된 장애중 임의의 하나를 치료하는데 이용할 수 있다.
또다른 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및 예방을 위한 조성물의 제조를 위하여 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물과 선택적으로 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 용도를 제공한다. 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물은 반드시 LPS 및 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합해야 할 것이다. 임의의 구체예에 따르면, 본 발명은 상기 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 면역글로블린을 포함하는 최소한 하나의 면역글로블린 조제물과 추가 복합되는 본 발명의 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물의 용도를 제공한다. 이러한 복합된 조성물은 상기 질환에 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시키는 면역-조절 조성물로 이용될 수 있다.
추가 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 포유류 초유에서 유도된 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물의 치료 유효량 또는 이를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물은 반드시 LPS 및 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합해야 할 것이다. 이러한 방법은 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 및 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병의 치료, 저지 및 예방에 이용될 수 있다. 선택적 구체예에 따르면, 본 발명의 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 상기 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 최소한 하나의 면역글로블린과 추가 복합되어, 상기 질환에 특이적인 면역 반응을 활성 또는 억제시킬 수 있다. 이러한 방법은 면역-관련된 장애를 치료하는데 특별히 적용될 수 있다. 본 발명의 방법에 이용되는 조성물 및 복합 조성물은 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 그리고 유형 2 당뇨병, 인슐린 저항성, 비만 및 과체중과 같은 임의의 이와 관련된 장애 중 임의의 하나를 치료하는데 또한 적용시킬 수 있다는 것을 특별히 인지해야 할 것이다.
도 1. 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 간 효소를 감소시킨다.
값은 평균 ± SD이다. AST; 아스파르트 트란스아미나제, 그리고 ALT; 알라닌아미노트란스퍼라제.
도 2: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 간에서 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
A; 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B; FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 3: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 간에서 CD25+CD4+LAP-, CD45+LAP+ 및 CD3+LAP+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다. 값은 평균이다.
A; 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. B; FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 4: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 비장에서 CD45+LAP+ 및 CD8+LAP+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
A; 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B; FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 5: 경구 T-IgG-초유는 Ob/Ob 마우스에서 혈청 인슐린을 감소시킨다.
값은 평균 ± SD이다.
도 6: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 Ob/Ob 마우스에서 포도당 내성을 감소시킨다.
도 7: 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 Ob/Ob 마우스에서 간 손상을 감소시킨다.
값은 평균 ± SD이다. AST; 아스파르트 트란스아미나제, 그리고 ALT; 알라닌아미노트란스퍼라제.
도 8: 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 Ob/Ob 마우스에서 간성 트리글리세리드(TGs)를 감소시킨다.
값은 평균 ± SD이다.
도 9: 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 비장에서 CD3+LAP+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
A; 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B; FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 10: 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 비장에서 CD8+CD25+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
값은 평균 ± SD이다.
도 11: 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 비장에서 CD8+CD25+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 12: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 지방 조직에서 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
A; 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B; FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 13. 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 지방 조직에서 CD3+LAP+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
A; 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B; FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 14: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 기질 혈관 세포(사전(pre)-지방세포 포함)에서 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
A; 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B; FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 15: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 기질 혈관 세포(사전(pre)-지방세포 포함)에서 CD4+CD25+LAP+ 림프구의 발현을 증가시킨다.
A; 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B; FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 16: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 Ob/Ob 마우스에서 간 효소를 감소시킨다.
값은 평균 ± SD이다. AST; 아스파르트 트란스아미나제, 및 ALT; 알라닌아미노트란스퍼라제.
도 17: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 Ob/Ob 마우스에서 총 콜레스테롤을 감소시킨다.
값은 평균 ± SD이다.
도 18: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 Ob/Ob 마우스에서 간성 TG를 감소시킨다.
T-IgG 및 HIBC 초유의 경구 투여는 Ob/Ob 마우스에서 간성 TGs를 감소시킨다. 값은 평균 ± SD이다. D, E, F에 대해 A군에서 감소가 유의적이었다 (* p<0.05).
도 19: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 Ob/Ob 마우스의 간에서 CD3+NK1.1+ 세포를 감소시켰다.
A. T-IgG 1㎍, 1㎎, 3㎎과 100㎍ HIBC을 경구투여하면, Ob/Ob 마우스의 간에서 CD3+NK1.1+ 세포가 감소되었다. 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B: 1㎍ 및 100㎍의 T-IgG를 경구투여하면 Ob/Ob 마우스의 간에서 CD3+NK1.1+ 세포가 감소되었다. FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 20: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 Ob/Ob 마우스의 간에서 CD4+CD25+LAP-/LAP+ 세포를 증가시킨다.
A; 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B; FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 21: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 CD25+LAP- 간성 림프구의 변화를 유도한다.
T-IgG 및 HIBC-초유의 경구 투여는 CD25+LAP- 간성 림프구의 변화를 유도한다. FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 22: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 CD25+LAP+ 비장 림프구를 감소시킨다.
A. T-IgG 및 HIBC-초유의 경구 투여는 CD25+LAP+ 비장 림프구를 감소시킨다. 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B: FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 23: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 CD4+CD25+LAP- 비장 림프구를 증가시킨다.
A. 1 및 3㎎의 T-IgG 및 100㎎의 HIBC-초유의 경구 투여는 CD4+CD25+LAP- 비장 림프구를 증가시킨다.
도 24: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 지방 조직에서 CD4+CD25+를 증가시킨다.
A. T-IgG -초유의 경구 투여는 지방 조직에서 CD4+CD25+를 증가시킨다. 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다.
도 25: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 지방세포에서 CD4+CD25+를 증가시킨다.
A. 100㎎의 T-IgG -초유의 경구 투여는 지방세포에서 CD4+CD25+를 증가시킨다. 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B. 1㎍, 100㎎ 및 1 ㎎의 T-IgG -초유의 경구 투여는 지방세포에서 CD4+CD25+를 증가시킨다. FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 26: 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 지방세포에서 CD3+LAP+를 증가시킨다.
A. T-IgG-초유의 경구 투여는 지방세포에서 CD3+LAP+를 증가시킨다. 림프구에서 표식들의 평균 표면 발현. 값은 평균 ± SD이다. B: FACS 분석으로부터 유도된 대표적인 도트 블랏.
도 27: 경구 항-LPS 농축된 초유-유래된 면역글로불린 제조물은 지방세포에서 CD4+CD25+LAP-를 증가시킨다.
본 발명의 상세한 설명
생산성 면역 반응은 본태성 그리고 적응성 면역 세포 모두에 영향을 가지는 양성 및 음성 신호의 유효한 통합으로 인한 것이다. 양성 신호가 주도할 때, 세포 활성화 및 사전-염증 반응이 일어나고, 병인성 미생물, 바이러스 그리고 형질전환된 세포가 제거된다. 이러한 생산성 자극 없이, 세포 활성화가 차단되고, 활성 항-염증 반응이 일어날 수 있다. 이러한 이중 시스템의 조절은 사이토킨 작용, 하류 신호 경로 및 세포-세포 접촉을 통하여 발생한다. 이러한 임계치 혼란으로 병원성 미생물을 다루는데 불충분한 이상 반응을 야기할 수 있거나 또는 내성의 상실 및 자가면역 반응의 유도를 결과할 수 있다. 본 발명은 면역-관련된 장애의 치료에 적극적인 방식으로 작용할 수 있는 항-리포폴리사카라이드 (LPS) 항체들에 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 면역 조절 효과를 나타낸다.
조절 T 세포 (Tregs)는 적응성 면역 시스템의 중요한 면역조절 성분으로 점차 인지되고 있다. 면역 제어이상(dysregulation)은 만성 인슐린 무감각에 대한 촉발자로써 만성 염증을 유도할 수 있다. 본 발명은 초유에서 유도된 항-LPS 항체들을 경구 투여하면 지방 조직 및 지방 조직 관련된 기질 맥관구조에서 Trges를 촉진시킨다는 것을 특정 실시예에서 보여준다. 이러한 변이는 ob/ob 마우스 모델에서 대사 증후군 및 간 손상의 완화와 연관된다. 따라서, 본 발명은 대사 증후군의 완화 및 치료용 신규한 치료 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 경구로 투여된 항-LPS 항체들이 간, 비장, 지방 조직 및 SV (기질-혈관세포)에서 Tregs를 촉진시켰다는 것을 보여주었다. CD25+ LAP+ T 세포, CD4+ CD25+ T 세포, CD4+ CD25+ LAP- T 세포, CD45+ LAP+ T 및 CD3+ LAP+ T 세포는 간에서 유도된다. CD45+ LAP+ T 세포, CD8+ LAP+ T 세포, CD3+ LAP+ T 세포, CD8+ CD25+ T 세포는 비장에서 유도된다. CD4+ CD25+ T 세포, CD3+ LAP+ T 세포, CD4+ CD25+ LAP- T 세포는 지방 조직에서 유도된다. CD4+ CD25+ T 세포 및 CD4+ CD25+ LAP+ T 세포는 기질 혈관세포에서 유도되고, 간에서 CD3+ NK1.1+ 세포와 CD25+ LAP- T 세포는 간에서 감소된다.
지방 조직의 다양한 구성 요소들 가령, 성숙 지방세포들 및 기질 혈관세포는 별개의 기능을 가진다. 이들은 아디포킨(adipokines)이라고 불리는 상이한 종류의 생체활성 분자를 발현하고, 분비한다. 변경된 아디포킨 분비 패턴은 유형 2 당뇨병(DM)의 주요 위험 인자들인 비만 및 인슐린 저항성을 특징짓는다. 뚱뚱한 Zucker 쥐와 마른 Zucker 쥐의 기질-혈관 세포에는 지역적 그리고 유전적 차이가 있다. [Turkenkopf, I. J. et al. Int. J. Obes. 12:515-24 (1988)]. DNA 마이크로어레이를 이용한 유전자 발현 프로파일링에서 지방 조직, 지방세포들, 그리고 기질 혈관세포 [Permana (2008) ibid.] 사이에 차이가 있었다. 본 발명은 이들 조직에서 Tregs의 분포가 대사 증후군 및 간 질환에 중요하다는 것을 보이는 이러한 개념을 더 뒷받침한다.
본 발명은 항-LPS 항체들의 투여에 의한 지방 조직 및 SV에서 Tregs의 촉진은 인슐린 저항성 완화와 관련된다는 것을 더 보여준다. 이는 포도당 내성 테스트에 의해 설명된다. 추가로, 간 효소의 감소로 명백해진 것과 같이, 본 발명에 의해 염증성 간 손상이 완화된다.
상기에서 설명된 것과 같이, 본 발명은 항-LPS 항체들이 풍부한 초유의 경구 투여는 지방 조직 및 지방 조직 관련된 기질 맥관구조에서 Tregs를 촉진시키는 수단으로 작용할 수 있다는 것을 보여준다.
본 발명은 또한 Tregs의 분포에 대한 영향으로 초유에서 유도된 성분들과 항-LPS 항체들 사이에 시너지를 제공한다. 숙주 방어 기작에 관련된 고유 면역 시스템의 고농도 중개물질들[Poggi, M. et al. Diabetologia (2009)]을 포함하는 몇 가지 단백질을 젖에서 확인하였다[Kahn, S. E. et al. Nature 444:840-6 (2006)]. 이들 중개물질들 중에 다중 디펜신(defensin) 단백질, 스핑고리피드, 오스테오폰틴, 엑소좀, TLRs, 카텔리시딘, 에오시노필-유래된 신경독소, 및 고이동성 그룹 박스 단백질 1, 그리고 LL-37 [Poggi (2009) ibid.; Nagatomo, T. et al. Clin. Exp. Immunol. 138:47-53 (2004); Admyre, C. et al. J. Immunol. 179:1969-78 (2007); Oppenheim, J. J. and Yang, D. Curr. Opin. Immunol. 17:359-65 (2005)]이 있다. 이들은 고유 및 적응성 면역 시스템을 활성화시킬 수 있다. 이들 단백질중 일부는 면역 시스템의 동원에 이들의 역할 인지에서 “알라르민스(alarmins)”로 불린다 [Oppenheim (2005) ibid.]. 알라르민스는 APCs에 화학주성 및 활성화 효과를 모두 가지며, 그리고 따라서 위험 신호에 대해 고유 및 Ag- 특이적 면역 반응을 증폭시킨다[Yang, D. et al. J. Immunol. 173:6134-42 (2004); Oppenheim, J. J. et al. Adv. Exp. Med. Biol. 601:185- 94 (2007)]. BC (소의 초유)는 높은 수준의 β- 글리코스핑고리피드 (BGS)를 포함한다[Martin, M.J. et al. Lipids 36:291-8 (2001); SaIa-Vila, A. et al. Nutrition 21:467-73 (2005); Van, Y.H. et al. Diabetes 58:146-55 (2009); Nagatomo, T. et al. Clin. Exp. Immunol. 138:47-53 (2004)], the composition of which can determine the effect of APCs or other components of the gut-immune system [Novak, J. et al. Int. Kev. Immunol. 26:49-72 (2007); Nowak, M. and Stein-Streilein, J. Int. Rev. Immunol. 26:95-119 (2007); Nikoopour, E. and Schwartz, J.A. Inflamm. Allergy Drug Targets 7:203-10 (2008); Admyre, C. et al. J. Immunol. 179:1969-78 (2007); Oppenheim, J. J. and Yang, D. Curr. Opin. Immunol. 17:359-65 (2005); Yang, D. et al. J. Immunol. 173:6134-42 (2004); Oppenheim, J. J. et al. Adv. Exp. Med. Biol. 601:185-94 (2007)]. 이들 중개물질들 중 일부는 점막 어쥬번트로 작용하여 장 점막에서 APCs의 하위집단과 Tregs 사이에 응수(cross talk)를 강화시킨다[Vignali, D.A. et al. Nat. Rev. Immunol. 8:523-32 (2008); Margalit, M. et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. 319:105-10 (2006); Godfrey, D.I. and Berzins, S.P. Immunol. 7:505-18 (2007; Margalit, M. and Ilan, Y. 간 Int. 25:501-4 (2005); Novak, J. et al. Int. Rev. Immunol. 26:49-72 (2007); Nowak, M. and Stein-Streilein, J. Int. Rev. Immunol. 26:95-119 (2007); Nikoopour, E. and Schwartz, J.A. Inflamm. Allergy Drug Targets 7:203-10 (2008)]. Treg 세포의 유도는 췌장 배수 림프절(PLNs)에서 국소 면역 조절에 의해 매개된 β 세포 항원에 대해 장기-지속된 내성을 야기할 수 있다 [Homann, D. et al. J. Immunol. 163:1833-8 (1999); Homann, D. et al. 면역 11:463-72 (1999)]. 이러한 중재는 동물 모델에서 상당한 전망을 보였지만, 인간에서의 시도에서는 거의 효과가 없었다. 당뇨병 예방 시도에서, 치료된 환자들중 하위 소수만이 섬 자가항원으로의 면역화에 유익한 효과를 나타내었다[Skyler, J.S. et al. Diabetes Care 28:1068-76 (2005)]. 환자들이 전-당뇨병 상에 있는 동안 면역주사를 맞았을 때에만 유형 1 당뇨병의 예방을 볼 수 있었고, 그리고 면역주사로 최근-개시된 당뇨병을 되돌릴 수는 없었다. [Larche, M. and Wraith, D. C. Nat. Med. ll:S69-76 (2005)]. 따라서, 항원-특이적 중재를 인간에서 성공적으로 사용하기 위하여, 특히 최근 개시된 당뇨병에서 성공적으로 사용하기 위하여 추가 어쥬번트를 요구할 수 있다[Harlan (2005) ibid.].
본 발명자들은 면역 시스템 상에 투약량 의존적 효과를 보여주었다.
요약하면, 본 발명은 초유 어쥬번트와 함께 항-LPS 항체들은 Treg 세포 축적을 촉진시켜, 이에 의해 염증 반응을 완화시키고, 간 손상을 개선시키고, 그리고 대사 증후군 여병을 개선시키는 수단으로 작용한다는 것을 분명하게 설명한다. 더욱이, 본 발명에 따르면, 지방 조직 및 SV에서 조절 T 림프구는 대사 증후군 환자들에서 새로운 치료 표적으로 작용할 수 있다. 더욱이, 초유내 면역글로블린은 방관자(bystander) 항원을 표적화하거나 또는 관련없는 항원을 겨냥함으로써, 항원 특이적 및 비-특이적 방식으로, 조절 T 세포 또는 임의의 기타 세포를 촉진시킬 수 있다.
따라서, 제 1 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공한다. 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다.
여기에서 사용된 것과 같이, "치료"는 질환의 증상의 심각성을 감소 또는 제거, 이러한 증상이 나타나는 빈도를 감소 또는 제거, 또는 이둘 모두를 말한다.
여기에서 사용된 것과 같이, “예방”은 질환의 증상을 완전하게 또는 부분적으로 방지 또는 억제하거나, 이러한 증상이 나타나는 빈도를 방지 또는 억제하는 것을 말한다.
한 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및 예방을 위한 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 활성 성분으로 포유류 항-리포폴리사카라이드 (항-LPS) 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물과 임의로 추가 초유, 우유 또는 우유 산물 성분(들), 그리고 임의의 어쥬번트(들)을 포함한다. 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물은 LPS 및 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합한다. 선택적으로, 본 발명의 조성물은 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된-면역글로블린 조제물과 상기 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 면역 글로블린을 포함하는 최소한 하나의 면역글로블린 조제물의 조합을 포함하여, 이에 의해 상기 장애에 대해 특이적인 면역 반응을 활성화 또는 억제할 수 있다. 본 발명의 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 면역 시스템의 임의의 성분을 변경시킬 수 있는 기타 초유 유도된 항체들, 기타 항원, 기타 어쥬번트, 기타 사이토킨 또는 임의의 유형의 분자를 포함하나 이에 한정되지 않는 임의의 기타 면역 조절 약물과 복합될 수 있다는 것을 명심해야 한다. 이러한 조합은 한번의 생성물로 투여되거나, 또는 2개 이상의 별도 생성물로 투여될 수 있다. 이러한 조합은 함께 투여되거나 또는 서로 따로 투여될 수 있다.
한 특정 구체예에 따라, 초유에서 유도된 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 IgG, IgA 및 IgM 그리고 이의 임의의 단편들로 구성된 군으로부터 선택된 단량체, 이량체 또는 다량체 면역글로블린을 포함할 수 있다. 위에서 나타낸 것과 같이, 반추동물에서, 초유와 성숙 우유의 주요 구성적 차이는 매우 높은 함량의 초유 면역글로블린이며, 이중 IgG 부류가 80-90%를 이룬다.
따라서, 특이적 구체예에 따르면, 본 발명의 초유에서 유도된 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 주로 IgG, 특히, IgG1 및 IgG2를 포함한다.
여기에서 사용된 것과 같이, 면역글로블린 G (IgG)는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄로 만들어진 다량체 면역글로블린이다. 각 복합체는 2개의 항원 결합 부위를 가진다. 이는 가장 풍부한 면역글로블린이며 혈액과 조직 액체에 대략 균일하게 분포되며, 인간에서 혈청 면역글로블린의 75%를 구성한다. 일반적으로, IgG 하위 부류의 수는 토끼의 한 개 하위 부류로부터 말의 7가지 하위 부류 범위까지 상이한 종간에 다양하여, 상동유전자(orthologues)를 찾는 것을 어렵게 만든다. 인간에서, 예를 들면, IgG1 및 IgG3은 최대의 사전-염증성 IgG 하위부류다. 그러나, 마우스에서, IgG2a 및 IgG2b는 많은 생체내 모델 시스템에서 마우스 IgG1과 IgG3 보다 더 큰 활성을 나타내는 최대 사전-염증성 IgG 분자다.
임의로 또는 선택적으로, 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 분비성 항체, 특히, sIgA를 포함할 수 있다.
이량체 및 다량체 IgA 및 IgM은 다수의 엑소크린 조직에 의해 분비된다. IgA는 초유, 타액, 눈물, 기관지 분비물, 코 점막, 전립선 유체, 질 분비물, 및 소장의 점막 분비물에 존재하는 주요 분비성 면역글로블린이다. IgA 생산이 기타 모든 면역글로블린을 초과하면, 매일 신체에서 주요 항체를 생산되게 만들고, 사람의 젖, 유장 및 초유에서 발현되는 주요 면역글로블린이다. IgM 분비는 다소 덜 풍부하지만 IgA 분비의 결핍을 보충하기 위하여 증가될 수 있다. 엑소크린 세포의 기저막 바로 아래에 있는 중간 층(lamina propria)에 위치한 혈장 B 면역세포에 의해 IgA를 포함하는 J 쇄가 생산되고 분비된다. IgA는 2개의 중쇄(Mr 55,000) 및 2개의 경쇄(Mr 23,000)로 구성된 4개 쇄 구조(Mr 160,000)의 전형적인 면역글로블린을 가진다. 인간에서는 IgA의 2개의 하위부류가 존재한다. 이들은 각각 한 개의 중쇄 및 2개의 중쇄를 가지는 IgA1 및 IgA2다. IgA는 단량체, 이량체, 삼량체 또는 다량체로 발생될 수 있다. 혈장에서, 총 IgA의 10%는 다량체이며, 나머지 90%는 단량체다. 분비된 IgA는 대부분의 점막 세포의 바닥측면 표면에 위치한 Mr 100,000 poly-Ig 수용체에 결합한다. 그 다음, 수용체-IgA 복합체는 IgA가 분비되는 정점 표면으로 전위된다. poly-Ig 수용체에 이량체 IgA의 결합은 전적으로 J 쇄의 존재에 의존한다. 단량체 IgA는 이 수용체에 결합하지 않을 것이다.
IgG와 IgA의 기능의 차이는 이들 분자들이 작용하는 위치에 따른다. IgA는 면역 세포 및 화학물질을 운반하는 조직 유체가 거의 없는 점막 표면에서 주로 발견된다. 따라서, IgA (종종 이량체로)는 병원체의 물리적 중화에 바람직하게는 유용할 수 있을 것이며, 그리고 다른 면역 기능에도 역시 유효할 수 있다. IgGs는 조직 유체 및 혈액에 존재하며, 백혈구, 보체(commplement) 시스템, 대식세포 등의 완전한 수집은 유효하게 물리적으로 병원균을 중화시킬 수 있으며, 소통/제공 역할에서 IgA보다 더 유효하여, 이들은 식작용(가령, 킬러 T 세포 및 대식세포)에 의한 옵소닌화를 더 잘 유도하고, 보체 시스템을 더 잘 가동시킨다.
더 구체적으로, 본 발명의 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유, 초유 혈청, 과다면역화된 우유 또는 초유, 초유 유장 (치즈 또는 카세인), 탈지우유로부터 직접얻은 치즈 또는 카세인 유장, 전유, 또는 이러한 스트림의 재구성 형태중 하나로부터 얻을 수 있다.
본 발명의 조성물내에 포함된 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유의 임의의 분획물일 수 있다는 것을 인지해야만 한다. 따라서, 여기에서 사용된 용어 초유는 초유, 가공된 초유 가령, 하나 이상의 지방, 세포 찌꺼기, 락토즈 및 카제인을 부분적으로 또는 완전하게 제거하기 위하여 가공된 초유를 포함한다.
항-LPS 항체들과 선택적으로 항원-특이적 항체들을 포함하는 초유 또는 우유는 동물의 초유 또는 젖을 짜서 바람직하게 수거할 수 있고, 따라서 수거된 것을 바로 이용하거나 또는 항-LPS와 선택적으로 항원-특이적 항체들을 정제하기 위하여 추가 가공할 수 있다. 초유 또는 우유로부터 (LPS 및 선택적으로 항원-특이적) 항체들의 정제(부분적) 방법은 당업계에 공지되어 있다.
임의의 어쥬번트를 본 발명의 조성물에 추가할 수 있다는 것을 더 인지해야 한다. 따라서, 적합한 어쥬번트는 직접 그리고 간접 방식으로 항원 제공 세포의 기능 또는 면역 시스템에 관련된 임의의 기타 세포의 기능을 활성화 또는 변경시킬 수 있는 임의의 항원, 항체, 글리코스핑고리피드, 단백질, 사이토킨, 유착 분자들 및 성분들일 수 있다.
대안으로, 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 친화력 정제된 항체 또는 이의 임의의 단편일 수 있다. 용어 "항체"는 고유 분자들과 이의 단편들 예를 들면, 항원에 결합할 수 있는 Fab 및 F(ab')2와 같은 단편들을 모두 포함한다. Fab 및 F(ab')2 단편들은 고유 항체의 Fc 단편이 없기 때문에 순환계에서 훨씬 더 빨리 제거되며, 그리고 고유 항체보다는 다소 비-특이적 조직 결합을 할 수 있다. Fab 및 F(ab')2 그리고 본 발명에 유용한 기타 항체 단편들은 고유 항체 분자들에 대해 공지된 방법에 따라 면역-조절에 이용할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 이러한 단편들은 파파인 (Fab 단편들을 만들기 위하여) 또는 펩신 (F(ab')2 단편들을 만들기 위하여)과 같은 효소를 이용하여 단백질분해 절단에 의해 일반적으로 만들어진다.
항체가 특정 실시예에서 특정 면역-관련된 장애에 특이적 항원 또는 항원 혼합물인 항원에 특이적으로 반응하여, 이에 의해 이 분자가 항체에 결합하게 되는 경우, 항체는 특정 항원을 “특이적으로 인지할 수 있다”고 말한다.
"항원"은 항체에 의해 결합할 수 있는 분자 또는 분자의 일부분이며, 이 항원에 결합할 수 있는 항체의 생산을 동물에서 추가적으로 유도할 수 있다. 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. “에피토프(epitope)”는 항체가 인지하고, 결합될 수 임의의 분자의 일부분을 말한다. 에피토프 또는 “항원 결정부위”는 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자들의 화학적으로 활성 표면 그룹으로 통상 구성되며, 그리고 특이적 3차원 구조적 특징과 특이적 하전 특징을 가진다.
또다른 구체예에서, 본 발명의 조성물의 활성 성분으로 이용되는 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 LPS 또는 이의 임의의 단편들로 면역주사된 포유동물로부터 수득할 수 있다. 선택적으로, LPS에 추가하여, 특정 구체예에 따른 이러한 포유동물은 최소한 하나의 항원 또는 상기 장애에 특이적인 최소한 2개의 항원 혼합물로 면역화되고, 그리고 이 질환과 관련된 최소한 2개의 상이한 항원에 대항하는 최소한 2개의 상이한 항체들의 혼합물로 추가 면역화될 수 있다.
한 구체예에 따르면, 상기 포유동물, 바람직하게는 소 또는 조류를 면역화시키는데 이용되는 LPS 또는 임의의 항원은 단리된 그리고 정제된 펩티드, 정제된 재조합 단백질, 융합 단백질, 상기 장애를 앓고 있는 피험자로부터 수득한 조직 배양 세포, 1차 세포 또는 조직 시료중 임의의 하나의 세포질 조제물중 임의의 하나의 세포 용해물, 막 조제물, 핵 조제물, 또는 세포질 조제물중 임의의 하나로 제공될 수 있다.
또다른 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 선택적으로 예를 들면, 알라민스, 디페넨신(defenensins), 콜로스트리닌과 같은 초유 성분(들), 그리고 면역 반응의 조정을 추가 강화 또는 억제시킬 수 있는 임의의 기타 초유 또는 우유에서 유도된 탄수화물, 당지질 또는 임의의 기타 분자들 또는 성분들, 또는 임의의 조제물, 혼합물 또는 이의 조합을 더 포함할 수 있다. 더욱이, 본 발명의 조성물은 임의의 추가 어쥬번트를 더 포함할 수 있다. 따라서, 적합한 어쥬번트는 직접 그리고 간접 방식으로 항원 제공 세포의 기능 또는 면역 시스템에 관련된 임의의 기타 세포의 기능을 활성화 또는 변경시킬 수 있는 임의의 항원, 항체, 글리코스핑고리피드, 단백질, 사이토킨, 유착 분자들 및 성분들일 수 있다.
조성물의 일부 구체예들에서, 조성물은 조류의 알의 구성분을 포함할 수 있는데, 이때 조류 알은 LPS 또는 이의 단편에 특이적인 IgY를 포함한다. 천연 그대로의 알 노른자는 항체 원천으로 이용될 수 있다. 그러나, 조류 항체들은 통상 사용전 정제되거나 또는 농축된다. 조류 알의 구성분들은 당업계에 숙련자들이 인지하는 바와 같이 필요할 경우 농축하거나 정제할 수 있다. 조성물의 일부 구체예들에서, 조성물은 알의 노른자 또는 임의의 IgY 항체를 함유하는 이의 분획물을 포함한다. 노른자는 알의 흰자보다 바람직한데, 그 이유는 노른자가 일반적으로 흰자보다 훨씬 높은 농도의 IgY를 포함하기 때문이다. 그러나, 흰자는 일부 용도에 충분한 IgY 농도를 포함할 수 있다.
항체 조성물의 일부 구체예들에서, 조류 알의 구성분으로부터 농축, 단리 또는 정제된다. 이는 다양한 방법에 의해 실시될 수 있다. 일부 구체예들에서, 물 희석 방법으로 항체들을 정제할 수 있다. 침전물은 원심분리를 포함하는 임의의 통상적 방법에 의해 제거할 수 있다. 그 다음 상층액은 예를 들면 -20℃에서 냉동 보관할 수 있다. IgY는 황산암모늄에 의해 침전 그리고 연속 투석을 통하여 단리될 수 있다. 원하는 경우, 면역 분석, 예를 들면, ELISA에 의해 IgY 항체들의 역가를 결정할 수 있다. 물 희석 방법은 공지의 문헌, 예를 들면 Akita and Nakai (1993)에 더 상세하게 설명되며, 이는 전문이 참고문헌에 통합된다. 기타 유용한 방법들은 예를 들면, 미국 특허 4,550,019, 미국 특허 4,748,018, 그리고 미국 특허 공개 2004/0161427(전문이 참고문헌에 통합된다)에서 설명된다. 시판되는 키트는 예를 들면, Promega Corporation (Madison, Wisconsin)의 것을 이용할 수 있다.
항체 조성물의 일부 구체예들은 실질적으로 단리된다. 일부 구체예에서, 비-항체 노른자 성분의 주요 분획이 제거되었다. 비-항체 노른자 성분은 예를 들면, 노른자의 지질 성분, 노른자의 탄수화물 성분, 노른자 과립, 노른자의 소수성 성분, 노른자의 스테로이드 성분, 그리고 노른자의 비-면역글로블린 단백질 성분일 수 있다. 제거된 성분의 분획물은 최소한 50%다. 일부 구체예들에서, 제거된 분획물은 최소한 60%, 75%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 99.9%이다. 더 많이 제거된 분획물은 더 순수한 항체 조성물을 생산하는 이점을 가진다. 더 적게 제거된 분획물은 더 적은 가공을 요구하는 장점을 가진다.
항체 조성물의 일부 구체예들은 실질적으로 농축된다. 일부 구체예들에서, IgY의 농도는 알 노른자에서보다 조성물에서 더 클 수 있다. 실질적으로 농축된 항체 조성물은 노른자에서보다 최소한 2배의 IgY를 포함한다. 실질적으로 농축된 항체 조성물의 일부 구체예들은 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 100, 1000, 또는 10,000배 농축된다. 더 많이 농축된 항체 조성물은 더 적은 체적에 동일한 양의 항체를 제공하는 장점을 가진다. 덜 농축된 항체 조성물은 처리를 덜 요구하는 장점을 가진다.
본 내용의 항체 조성물들은 IgG 및 IgY를 제외한 모든 이소타입을 거의 다 제거하기 위하여 처리될 수 있다. 일부 구체예들에서, 면역글로블린은 다수의 기증자로부터 유도될 수 있다. 임의의 수의 기증자를 이용할 수 있다. 일부 구체예들에서, 항체들은 하나의 기증자로부터 유도된다. 추가 구체예들에서, 항체들은 1-10명의 기증자로부터 유도된다. 추가 구체예들에서, 항체들은 10-100명의 기증자로부터 유도된다. 추가 구체예들에서, 항체들은 100-1000명의 기증자로부터 유도된다. 추가 구체예들에서, 항체들은 1000이상의 기증자로부터 유도된다.
항체 조성물의 일부 구체예들에서, 조성물은 인플루엔자에 대해 이미 면역주사를 맞은 가금이 낮은 알을 얻고, 알의 노른자로부터 항체 분획물을 분리시키는 것을 포함하는 방법으로 만든다. 조성물의 일부 구체예들에서, 가금은 백신주사에 의해 활발하게 면역화되었다. 가금은 길들여진 가금이다. 길들여진 가금은 닭, 오리, 백조, 거위, 칠면조, 공작, 암컷 뿔닭, 타조, 비둘기, 매츠라기, 꿩, 비둘기 또는 기타 길들여진 가금이다. 길들여진 가금은 바람직하게는 닭이다. 길들여진 가금은 주로 알 또는 고기 생산을 위해 키운 길들여진 닭이다. 가금은 임의의 계통의 인플루엔자, 임의의 하위 유형의 인플루엔자, 임의의 유형의 인플루엔자, 또는 이의 조합에 대항하여 면역화될 수 있다.
알 또는 고기 생산을 위해 키운 그리고 이러한 목적에 따라 백신접종된 닭의 알을 이용하면 대량으로 그리고 매우 낮은 가격으로 상업적으로 이용하는 가공 알에 대한 공급 원료로 이용의 큰 이점을 가진다. 이전에 항체 생산에 이용된 동물들은 이 목적으로만 유일하게 또는 주로 사육되었고, 매우 고비용으로 소수 유지되었다.
항체 조성물의 일부 구체예들에서, 항체 조성물은 암탉을 항원으로 활발하게 면역화시키고, 면역 기간 후 암탉으로부터 알을 수집하고, 알의 노른자로부터 항체 분획물을 분리시키는 것을 포함하는 방법으로 만들었다. 선택적으로, 암탉으로부터 알의 수거는 면역화 시간후 지속적으로 일어날 수 있다. 조류의 면역화는 당업계에 공지되어 있는 임의의 방법으로 실시할 수 있다. 예를 들면, 조류에게서 면역 반응을 유효하게 유도하는 것으로 알려진, 또는 포유동물에게서 면역 반응을 유효하게 유도하는 것으로 알려진 백신을 조류에게 투여할 수 있다. 이러한 많은 인플루엔자 백신은 상업적으로 이용가능하며, 과도한 실험없이 당업계에 숙련자에 일상적으로 개발될 수 있으며, 특이적 표적을 가진 IgY를 생산하는 추가 방법들은 당업계에 숙련자들에 공지되어 있다.
이러한 방법들은 예를 들면, 미국 특허 4,550,019, 미국 특허 4,748,018, 및 미국 특허 공개 2004/0161427, 및 미국 특허 6,537,500에서 볼 수 있으며, 전문이 참고문헌에 통합된다.
한 구체예에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및/또는 예방에 사용을 위한 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공하며, 이때 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 조류 알로부터 유도되며, 추가로 비-과다면역 초유를 더 포함한다.
한 구체예에서, 병적 장애는 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 또는 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병이다. 또다른 구체예에서, 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 그리고 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병은 간성 뇌증, 자발적 세균성 복막염 (SBP), 복수, 정맥류 출혈, 간경변 관련된 과다역동 순환, 간신증후군, 간폐 증후군, 폐동맥 고혈압, 정맥류 출혈, 부신피질 기능장애 및 의식의 변경된 수준으로 구성된 군으로부터 선택된다. 또다른 구체예에서, 병적 장애는 간 손상이다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 그리고 임의의 이와 관련된 장애, 감염성 질환, 및 증식성 장애으로 구성된 군으로부터 선택된 면역-관련된 장애다.
대안으로, 병적 장애는 2차 복막염 및 수술 후 감염, 간성 심근병증 그리고 저혈압, 간부신 증후군, 간세포 암종, Alzheimer 질환, 임의의 유형의 기억 상실, 임의의 유형의 치매, 주의력 결핍 장애 (ADHA), 임의의 유형의 학습 장애, 뇌에 알코올 또는 약물 효과, 천식을 포함한 임의의 유형의 면역 매개된 질환 및 복막염으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명의 면역-조절 조성물은 점막 미생물의 전위를 감소, 제거 또는 억제하여, 이에 의해 면역 활성화를 조절할 수 있다. 면역 시스템의 만성 활성화는 진행성 바이러스 감염의 특징이며, 그리고 질환 결과를 예측한다. "점막 미생물의 전위"로도 알려진 쥐 장관으로부터 유사하게 유도된 순환 미생물 산물은 바이러스-관련된 전신 면역 활성화의 주요 원인이라는 것은 이미 밝혀졌다. 따라서, 특정 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 면역 기능을 조절할 수 있고, 또는 대안으로 면역 시스템의 변경과 관련되지 않는 세균 또는 세균 관련 산물의 수를 감소 또는 변경시킬 수 있다.
한 구체예에 따르면, 본 발명은 활성 성분으로 포유류 항-리포폴리사카라이드 (LPS) 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 및 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병의 치료, 저지 및 예방에 특히 이용할 수 있고, 상기 조성물은 추가 치료제 또는 임의의 운반체 및 어쥬번트를 더 포함한다.
좀더 구체적으로, 본 발명에 따르면, 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 및 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병은 예를 들면, 간성 뇌증, 자발적 세균성 복막염 (SBP), 복수, 정맥류 출혈, 간경변 관련된 과다역동 순환, 간신증후군, 간폐 증후군, 폐동맥 고혈압, 정맥류 출혈, 부신피질 기능장애 및 의식의 변경된 수준중 최소한 하나일 수 있다.
추가 구체예에서, 본 발명의 조성물은 HCV, HBV, CMV, 및 EBV을 포함하는 임의의 유형의 바이러스 질환과 같은 병적 장애의 치료에 이용할 수 있다.
따라서, 이러한 초유에서 유도된 조제물은 추가 치료제로서 간 질환에 이용되는 임의의 약물과 복합될 수 있다는 것도 명심해야 한다.
여기에서 사용된 것과 같이, 용어 "간경변"은 간 조직이 섬유성 반응 조직으로 대체, 유괴의 재생을 특징으로 하여 간 기능의 점진적 상실로 이어지는 다양한 광범위한 만성 간 질환의 최종 공통적 조직학적 결과를 말한다. 간경변은 B형 및 C형 간염 바이러스, 알코올 중독 및 지방 간 질환에 의해 주로 야기된다.
여기에서 사용된 것과 같이, "복수(ascites)"는 가장 흔하게는 간경변 및 심각한 간 질환에 의해 복강내 병인성 유체의 축적 상태를 설명한다.
따라서, 이러한 초유에서 유도된 조제물은 임의의 면역조절 치료제(들) 또는 이의 임의의 조합 또는 이의 혼합물과 복합되어, 면역-관련된 장애, 비-알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 그리고 임의의 이와 관련된 장애, 감염성 질환, 악성 또는 감염성 장애의 치료 및/또는 방지를 위하여 복합된 면역조절 조성물을 만들 수 있다는 것을 주지해야만 한다.
본 발명의 초유에서 유도된 조성물은 임의의 첨가된 어쥬번트를 더 포함할 수 있다는 것을 주지해야만 한다.
미생물의 전위는 또한 바이러스-매개된, 약물-매개된, 비 알코올성 지방간염 그리고 임의의 기타 간 질환을 포함한 많은 간 장애, 그리고 인슐린 저항성, 유형 2 당뇨병, 비만 및 과체중과 함께, 간 염증의 변화와 관련있기 때문에, 본 발명의 조성물에 의한 이러한 전위의 예방은 이러한 장애의 치료에 적용시킬 수 있다는 것을 주지해야만 한다. 따라서, 본 발명은 임의의 급성 또는 만성 간 질환, 당뇨병, 그리고 임의의 당뇨병 여병, 지방 간, 비 알코올성 지방간염, 및 비만의 치료에서 질환과 관련된 항원에 직접적인 항체, 예를 들면, 항-인슐린 항체들이 풍부한 초유 조제물과 선택적으로 복합된, 본 발명의 항-LPS 조성물의 용도를 더 제공한다.
또다른 구체예에서, 조성물은 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하는 면역글로블린을 포함하는 면역글로블린 조제물을 더 포함한다. 더 포함된 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다.
한 가지 선택적 구체예에 따르면, 본 발명은 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물과 최소한 하나의 초유에서 유도된 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하는 면역글로블린을 포함하는 면역글로블린 조제물의 조합을 포함하는 복합 조성물을 제공하여, 이에 의해 면역-조절 세포, 특히, 조절 T 세포를 조절한다. 이러한 조절은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제한다는 것을 주지해야 한다.
상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하여, 이에 따라 면역-조절 세포, 특히, 조절 T 세포를 조절하는 면역글로블린은 다음을 포함한다:
인플루엔자의 치료 및/또는 예방을 위한 항-인플루엔자 항체들; HCV 감염과 관련된 임의의 유형의 간암 또는 급성 및 만성 간 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 항 HCV 항체들; HBV 감염과 관련된 임의의 유형의 간암 또는 급성 및 만성 간 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 항 HBV 항체들; CMV 감염과 관련된 급성 및 만성 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 항 CMV 항체들; Alzheimer 질환, 간성 뇌증, 임의의 유형의 기억 상실, 주의력 결핍 장애 (ADHA), 임의의 유형의 학습 장애, 뇌에 알코올 또는 약물 효과의 치료 및/또는 예방을 위한 항-아밀로이드 항체들; 임의의 바이러스, 세균성, 스피로헤타(spirochetal), 프레온(preon), 기생충, 포자 또는 곰팡이 관련 감염과 연관된 급성 및 만성 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 상기 관련된 것들에 대항하는 항체들; 인슐린 저항성과 관련된 임의의 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 항-인슐린 항체들; 표적 항원에 관련된 전이 및 비-전이, 고형 및 비-고형을 포함하는 임의의 악성 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 임의의 유형의 암 관련된 항원에 대항하는 항체들; 임의의 유형의 면역 매개된 또는 자가면역 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 질환 특이적 그리고 질환 관련된 항원에 대항하는 항체들; 바이러스 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 항-HSV, JC 바이러스, 아데노바이러스, 파라인플루엔자 바이러스 및 RSV 항체들; 폐렴 치료 및/또는 예방을 위한 항-미코플라즈마/레지오넬라 항체들; 종양 분비 치료 및/또는 예방을 위한 항-PTHrp, 알도스테론, 스테로이드, GH 및 프로락틴 항체들; IBD의 치료 및/또는 예방을 위한 항-IL12, omp C 항체; 거대 적모구성 빈혈의 치료 및/또는 예방을 위한 항-내인자 항체들; H. 피로리(pylori) 감염의 치료 또는 예방을 위한 항-H. 피로리 항체들; Burkitt 림프종의 치료 및/또는 예방을 위한 항-EBV 항체들; 그리고 자가면역 췌장염, 만성 폐 질환 가령, CF, 천식 등, 간경변, 간 섬유증 (CCL4), 그리고 고칼슘혈증 관련된 항원에 특이적인 항체들.
또다른 대안 구체예에 따르면, 본 발명의 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 치료된 장애에 특이적이지 않은 항원에 대한 면역글로블린을 더 포함할 수 있다. 이러한 항원은 면역-반응에서 조절 효과를 가지는 임의의 표적 면역-관련된 성분일 수 있다. 이에 의해, 본 발명의 면역글로블린 조제물에 의한 이러한 질환 비-특이적 항원의 인지로 면역-반응의 변경을 초래할 수 있다. 이러한 조절은 예를 들면, 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응에 대한 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제할 수 있다. 또다른 구체예에 따르면, 본 발명의 복합 조성물은 선택적으로 추가 치료제 또는 임의의 운반체 및 어쥬번트를 더 포함할 수 있다.
대안으로 또는 추가로, 본 발명의 복합된 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물과 이로부터 유도된 면역-조절 조성물은 조절 세포, 또는 항원 제공 세포의 측정 하위 집단의 활성화 또는 촉진에 의해, 또는 임의의 유형의 세포-세포 접촉에 의해 간접적인 방식으로 작용할 수 있다. 이러한 항-LPS 풍부한 복합된 조성물은 면역-시스템의 상이한 성분들을 지향할 수 있다. 예를 들면, 특이적 조절 T 세포, B 세포 또는 항원 제공 세포, 또는 면역 시스템에 영향과 관련된 임의의 기타 세포의 활성화는 사이토킨 또는 케모킨의 분비를 유도하거나 또는 임의의 다른 방식으로 면역 시스템에 영향을 준다. 면역 세포의 변경 또는 촉진은 임의의 유형의 조절 세포, 바람직하게는, 조절 T 세포, 예를 들면, Th3 세포, Trl, T17 세포 또는 임의의 기타 유형의 조절, 효과물질 또는 억제물질 세포의 유도와 더 관련될 수 있다. Th17 세포는 CD4 T 헬퍼 세포의 최근-확인된 하위군이라는 것을 주지해야한다. 이들은 외부 환경과 내부 환경 사이의 경계면, 가령, GI 기관의 라이닝과 피부 사이의 경계면에서 발견된다. 좀더 구체적으로, 본 발명의 초유에서 유도된 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 방관자(bystander) 항원을 표적화하거나 또는 관련없는 항원을 겨냥함으로써, 항원 특이적 및 비-특이적 방식으로, 조절 T 세포 또는 면역 시스템 관련된 임의의 기타 세포를 촉진시킬 수 있다.
따라서, 또다른 구체예에 따르면, 본 발명은 본 발명의 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물과 상기 장애와 관련된 최소한 하나의 항원에 대한 면역글로블린을 포함하는 최소한 하나의 추가 면역글로블린 조제물의 조합을 제공함으로써, 면역-관련된 장애를 치료하는 복합 조성물을 만들 수 있다. 이러한 조성물은 따라서 항원 또는 질환 특이적일 수 있으며, 또는 대안으로, 면역 방관자 효과를 포함하는, 비-항원 특이적 방식으로 면역 시스템의 특이적 세포 또는 일부를 증강 또는 유도할 수 있다.
한 구체예에서, 조성물은 조절 T 세포를 조절하여 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 또는 사전-염증 Th1 면역 반응쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절함으로써, 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시킨다.
또다른 구체예에서, 조성물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제하고, 이때 상기 조성물은 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 그리고 유형 2 당뇨병, 인슐린 저항성, 비만 및 과체중으로 구성된 군으로부터 선택된 이와 관련된 임의의 장애중 하나의 치료를 위한 것이다.
또다른 구체예에서, 조성물은 대사 증후군 또는 비 알코올성 지방간염 또는 이둘 모두의 치료 및/또는 예방을 위한 것이다. 또다른 구체예에서, 조성물은 당뇨병의 치료 및/또는 예방, 포도당 내성의 감소, 혈청 인슐린 수준의 감소, 간성 트리글리세리드 수준의 감소, 또는 콜레스테롤 수준의 감소와 같은 손상된 포도당 내성의 치료용이다.
한 구체예에서, 조성물은 사전-염증 Th1/Th2 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 강화시키고, 이때 상기 조성물은 감염성 질환, 및 증식성 장애의 치료용이다.
조성물은 치료제, 운반체 또는 어쥬번트 및/또는 비-과다면역 초유를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 활성 또는 수동 치료에 이용될 수 있다는 것을 더 인지해야만 한다.
본 발명의 면역-조절 조성물의 추가 구체예에서, 상기 면역-관련된 장애는 자가면역 질환, 감염성 질환, 및 증식성 장애중 임의의 하나이다.
본 발명의 조성물은 급성 여병, 또는 이러한 여병의 발달 또는 재발을 방지하는데 적용시킬 수 있다는 것을 주지해야 한다.
한 구체예에 따르면, 본 발명의 복합 조성물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제한다. 이러한 조절은 조절 T 세포, 항원 제공 세포, 임의의 유형의 T 세포 또는 B 세포, 면역 시스템, 또는 임의의 유형의 사이토킨 또는 케모킨, 또는 어쥬번트와 직간접적으로 관련된 임의의 세포의 기능과 관련될 수 있다. 이러한 특이적 구체예에 따르면, 이러한 조성물은 자가면역 질환의 치료에 적용시킬 수 있다. 자가면역 장애의 예로는 원형탈모증, 낭창, 강직성 척추염, Meniere 질환, 항인지질 증후군, 혼합형 결합조직 질환, 자가면역 Addison 질환, 다발성 경화증, 자가면역 용혈성 빈혈, 중증 근무력증, 자가면역 간염, 심상성 천포창, Behcet 질환, 악성 빈혈, 수포유천포창(Polyarthritis Nodosa), 결절다발 동맥염(Polyarthritis Nodosa), 심근병증, 다발성연골염(Polychondritis), 세리악 스프루우-피부염(Celiac Sprue-Dermatitis), 다선성 증후군(Polyglandular syndroms), 만성 피로 증후군(CFIDS), 류마티스성 다발성근육통(Polymyalgia Rheumatica), 만성 염증성 탈수초화(Demyelinating), 다발성근염 및 피부다발성근염(Polymyositis and Dermatomyositis), 만성 염증 다발성신경병증, 원발성 무감마글로블린혈증(Primary Agamaglobulinemia), Churg-Strauss 증후군, 원발성 담즙성 간경변, 반흔성 유천포창(Cicatricial Pemphigoid), 건선, CREST 증후군, Raynaud 현상, 차가운 아글루티닌 질환, Reiter 증후군, Crohn 질환, 류마티즘 열, 원반모양의 낭창, 류마티스 관절염, 특발성 혼합 저온형글로불린혈증(Essential Mixed Cryoglobulinemia), 유육종즐(Sarcoidosis), 섬유근육통(Fibromyalgia), 경피증, Grave 질환, Sjogren 증후군, Guillain-Barre, Stiff-Man 증후군, Hashimoto 갑상선염, Takayasu 동맥염, 특발성 폐 섬유증, 일과성 동맥염/거대 세포 동맥염, 특발성 혈소판감소증 자반증(ITP), 궤양성, IgA 신증, 포도막염, 인슐린 의존적 당뇨병 (Type I), 맥관염, 편평태선(Lichen Planus), 및 백피(Vitiligo)를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 여기에서 설명된 복합 조성물은 세포, 조직 또는 장기 이식, 가령, 간 및 심장 이식과 관련된 비정상적 또는 원하지 않는 면역 반응과 관련된 장애, 예를 들면, 이식편 숙주 질환(GVHD)을 치료 또는 예방하거나, 또는 동종이식편 거부를 방지하기 위하여 피험자에 투여될 수 있다.
또다른 구체예에서, 본 발명의 복합 조성물은 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 및 임의의 이와 관련된 장애 예를 들면, 유형 2 당뇨병, 인슐린 저항성, 비만 및 과체중에서 임의의 하나를 치료하는데 이용할 수 있다.
대안으로, 본 발명의 복합 조성물은 사전-염증 Th1/Th2 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절함으로써, 상기 질환에 특이적인 면역 반응을 강화시킬 수 있다. 이러한 조절은 조절 T 세포, 항원 제공 세포, 임의의 유형의 T 세포 또는 B 세포, 면역 시스템, 또는 임의의 유형의 사이토킨 또는 케모킨, 또는 어쥬번트와 직간접적으로 관련된 임의의 세포의 기능과 관련될 수 있다. 이러한 특이적 구체예에 따라, 이러한 조성물은 감염성 질환 및 증식성 장애의 치료에 적용시킬 수 있다.
한 가지 특이적 구체예에 따르면, 악성증식성 장애는 예를 들면, 암종, 육종, 흑색종, 백혈병, 골수종 또는 림프종과 같은 고형 또는 비-고형 종양일 수 있다.
또다른 특이적 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 간세포 암종, 전립선 암, 유방 암종, 결장 암종과 같은 암종의 예방 및/또는 치료를 위한 것이다. 또다른 구체예에서, 본 발명의 조성물은 백혈병, 좀더 구체적으로, 급성 또는 만성 백혈병의 예방 및/또는 치료에 이용할 수 있다.
본 발명을 설명하기 위하여 여기에서 서용된 것과 같이, "암", "종양" 및 "악성"은 조직 또는 장기의 과형성에 관련된다. 조직이 림프 또는 면역 시스템의 일부인 경우, 악성세포는 순환 세포의 비-고형 종양을 포함할 수 있다. 기타 조직 또는 장기의 악성은 고형 종양을 생산할 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 방법 및 조성물은 비-고형 및 고형 종양의 치료에 이용할 수 있다.
본 발명에서 고려되는 것과 같이 악성은 암종, 흑색종, 림프종 및 육종으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 본 발명에서 유용성을 발견할 수 있는 악성은 혈액암 (백혈병, 림프종 및 골수증식성 장애를 포함), 형성부전 및 무형성 빈혈(둘다 바이러스에 의해 유도된 그리고 특발성), 골수형성이상 증후군, 모든 유형의 부신생물 증후군(둘다 면역 매개된 그리고 특발성) 그리고 고형 종양(폐, 간, 유방, 결장, 전립선 GI 기관, 췌장 및 Karposi를 포함)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 좀더 구체적으로, 악성 장애는 간세포 암종, 결장 암, 흑색종, 골수종 및 급성 또는 만성 백혈병일 수 있다.
또다른 구체예에 따르면, 본 발명의 면역-조절 조성물은 감염성 질환, 예를 들면, HCV, HBV, CMV, 및 EBV와 같은 바이러스 병원균에 의한 이상에 특별히 적용할 수 있다.
한 특정 구체예에 따르면, 본 발명의 복합 면역조절 조성물은 Th2, Trl/Th3 항-염증 반응으로 이어질 수 있다. 좀더 구체적으로, 이러한 항-염증 반응은 IL-2, IL-17, IL-23, IFN-γ, IL-6과 같은 사전-염증 사이토킨의 양 또는 발현을 감소 또는 축소를 동반할 수 있다. 본 발명에 따른 이러한 감소 또는 축소는 치료를 받지 않는 기준과 비교하였을 때, 약 5% 내지 99%의 감소, 특히, 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99%의 감소일 수 있다. 또다른 특이적 구체예에 있어서, 본 발명의 조성물은 TGF-β, IL-10, IL-4, IL-5, IL-9 및 IL-13과 같은 항-염증 사이토킨의 양 또는 발현을 상승 및 증가시킬 수 있다. 좀더 구체적으로, 항-염증 사이토킨의 증가, 유도 또는 상승은 치료를 하지 않은 기준과 비교하였을 때, 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99%의 증가일 수 있다.
본 발명의 복합된 면역-조절 조성물의 항-염증 효과는 조절 세포, 항원 제공 세포 또는 임의의 유형의 세포-세포 접촉의 특이적 하위 부류의 활성화 또는 촉진에 의해 이루어질 수 있고, 또는 사이토킨 및/또는 케모킨의 직접적인 또는 간접적인 활성화를 통하여 이루어질 수 있다는 점을 인지해야만 한다. 임의의 유형의 조절 또는 작동자(effector) 세포, 구체적으로, Th3 및 Trl을 포함하는 조절 T 세포가 관련될 수 있다는 것을 더 주지해야 한다. 따라서, 본 발명의 초유에서 유도된 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 조절 T 세포 또는 항원 특이적 그리고, 방관자 항원을 표적으로 하여, 또는 관련안된 항원에 대항함으로써 비-특이적 방식으로 면역 시스템에 관련된 임의의 기타 세포를 촉진시킬 수 있다.
좀더 구체적으로, 본 발명의 조성물에 의해 활성화되거나 또는 촉진되는 면역-관련된 세포는 APC (가령, DC), Treg 세포 또는 혈소판, 대식세포, 임의의 유형의 B 세포, T 세포 (이중 네가티브 세포를 포함), 및 임의의 유형의 비-전문적 항원 제공 세포, 지방세포들, 내피 세포, 장기의 일부, 특히, 치료된 면역 관련된 장애에 연결된 장기의 일부인 임의의 유형의 세포 그리고 조절 강화 또는 억제 성질을 가진 임의의 유형의 세포를 포함하나 이에 한정되지 않는 면역 시스템과 직간접적으로 관련된 임의의 기타 세포일 수 있다. 좀더 구체적으로, 본 발명의 조성물은 특이적 T 조절 세포, 예를 들면, 지방세포들 및 항원 제공 세포 (APC), 가령 DC와 같은 면역-관련된 세포에 항-염증 효과를 설명한다. 따라서, 한 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 간 장애를 앓고 있는 개체에서 T 조절 (Treg) 세포, 또는 억제성 또는 유도성의 조절 성질을 가진 임의의 세포, 지방세포 그리고 항원 제공 세포 (APC)중 최소한 하나를 유도하는데 이용할 수 있다.
상기에서 표시된 것과 같이, 본 발명의 조성물 또는 선택적 복합 조성물은 병적 장애, 특히, 간 장애, 또는 면역-관련된 장애의 저지 및/또는 예방을 위한 것이다. 여기에서 사용된 것과 같이, 용어 "장애(disorder)"는 정상적인 기능에 혼란이 있는 상태를 지칭한다. "질환"은 병에 걸린 사람에게 또는 이 사람과 접촉한 사람에게 불편함, 기능이상 또는 괴로움을 주는 신체 또는 마음의 임의의 비정상적 상태를 말한다. 일부 경우, 이 용어는 손상, 무능, 증후군, 증상, 정상이 아닌 거동, 그리고 구조 및 기능의 비정상적 변이를 광범위하게 포함하는 것으로 이용되며, 다른 경우, 구별가능한 범주로 분리되기도 한다. 다음 용어들 "질환(disease)", "장애(disorder)", "이상(condition)" 및 "병(illness)"은 여기에서는 동등하게 사용된다는 것을 주지해야만 한다. "면역-관련된 장애 또는 질환" 또는 "간 장애"는 비-정상적 면역 반응의 원인이 되는, 이에 연결된 임의의 관련된 장애일 수 있다. 이러한 장애는 통상 장애가 있는 면역 반응과 함께 발생할 수 있거나, 또는 비정상적 면역 반응에 또는 이에 의해 영향을 받는 것으로 본다.
조성물은 경구 투여, 에어로졸과 같은 흡입에 의해, 또는 장관외, 질내, 비강내, 점막, 설하, 국소 또는 직장 투여 또는 임의의 이의 조합에 맞게 조제될 수 있다.
한 구체예에서, 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물 LPS 또는 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합한다.
또다른 구체예에서, 조성물은 미생물의 전위를 억제한다. 또다른 구체예에서, 조성물은 미생물의 전위를 억제하고, 그리고 이에 의해 면역 활성화를 조절한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 피험자에게서 면역 내성을 조절하기 위한, 또는 또다른 측면에서 피험자에게서 경구 내성을 조절하기 위한 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공한다.
한 가지 바람직한 구체예에 있어서, 본 발명의 임의의 조성물은 경구 투여, 에어로졸과 같은 흡입에 의해, 또는 장관외, 질내, 비강내, 점막, 설하, 국소 또는 직장 투여 또는 피하 투여 또는 임의의 이의 조합에 맞게 조제될 수 있다. 경구로 투여된 투여된 항체들은 위장관 내에서 낮은 위장 pH 및 위 및 내장 프로테아제의 존재로 인하여 분해될 것으로 예상된다. 그러나, 소 초유 IgG (BCIg)는 다른 면역글로블린에 비교하여 GI 파괴에 특히 저항성이 있다고 한다. BCIg의 초기 연구에서 “이종 기원의 숙주 내장에서 단백질분해성 절단에 저항성”이 두드러진다고 하였다. 소 IgG1은 트립신, 키모트립신 그리고 기타 Igs이외의 펩신에 의한 단백질분해에 더 저항성이 있다는 증거 또한 있다. 이러한 결과는 경구 항체 요법의 초기 개발을 더 이끌었다. 좀더 구체적으로, 본 발명의 조성물은 점막 투여, 예를 들면, 폐, 볼, 비강, 비강내, 설하, 직장, 질 투여 및 이의 임의의 조합에 적합할 것이다.
상기에서 나타낸 것과 같이, 경구 및 비강 투여가 바람직하지만, 임의의 기타 경로의 투여도 적용할 수 있는데, 예를 들면, 정맥내, 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 장관외, 질내, 비강내, 점막, 설하, 국소, 직장 또는 피하 투여, 또는 이의 임의의 조합으로 투여될 수 있음을 인지해야 한다.
더욱이, 본 발명의 조성물 및 복합된 조성물의 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 음식 첨가제, 수성 용액, 오일 조제물, 유상액, 겔, 등과 같은 조제물로 준비될 수 있으며, 그리고 이러한 조제물은 경구, 국소, 직장, 비강, 볼 또는 질로 투여될 수 있다. 조제물은 통상의 비-독성 용인되는 운반체를 포함하는 투약 제제로 투여될 수 있으며, 그리고 용인되는 염, 폴리머, 용매, 완충액, 부형제, 팽화제(bulking agents), 희석제, 부형제, 현탁제, 윤활제, 어쥬번트, 비이클, 전달 시스템, 유화제, 붕해제, 흡수제, 보존제, 계면활성제, 발색제, 풍미제 또는 감미제를 포함하는 하나 이상의 용인되는 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 임의의 투약형은 당업계에 공지되어 있는 기술을 이용하여 음료, 알약, 시럽, 캡슐, 테블릿, 과립, 비드, 씹을 수 있는 마름모꼴 정제에 혼성시킬 수 있는 분말 또는 음식 첨가제일 수 있다. 따라서, 본 발명의 면역-조절 조성물은 경구-활성 분말, 알약, 캡슐, 티, 추출물, 건조 추출물, 설하(subliguals), 스프레이, 분산액, 용액, 현탁액, 유상액, 포말, 시럽, 로현, 연고, 겔, 페이스트, 피부 패취, 주사가능물질(injectables), 질 크림 및 좌약으로 구성된 군으로부터 선택된 형태로 투여될 수 있다.
치료 제제는 임의의 통상의 투약 제제로 투여될 수 있다. 제제는 일반적으로 상기에서 정의한 바와 같이 최소한 하나의 활성 성분과 하나 이상의 용인되는 운반체를 포함한다.
각 운반체는 기타 성분들과 양립하고, 환자에게 유해하지 않아야 하는 점에서 약제학적으로 그리고 생리학적으로 모두 용인되어야 한다. 제제는 경구, 직장, 비강, 또는 장관외 (피하, 근육내, 정맥내 그리고 피부내를 포함하는 또는 흡입에 의해) 투여에 적합한 것을 포함한다. 제제는 통상적으로 단위 투약형으로 제공될 수 있고, 그리고 약제 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 준비될 수 있다. 피험자에서 원하는 효과들을 만들기 위하여 필수적인 유효량을 포함하는 이러한 모든 화합물의 성질, 이용가능성 및 원천은 당업계에 공지되어 있으며, 여기에서 상세하게 더 논의될 필요는 없다.
약제 조성물의 조제물은 당업계에 공지되어 있고, 많은 문헌 및 참고서에서 설명되고 있으며, 가령, 전문이 참고문헌에 통합된 Remington's Pharmaceutical Sciences, Gennaro A. R. ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990에 설명되어 있으며, 특히 pp. 1521-1712를 참고한다.
본 발명의 약제 조성물은 우수한 의학적 관행에 따라 투여되고 그리고 1회 복용량으로 투약될 수 있다.
본 발명의 조성물은 자유형의 활성 성분을 포함할 수 있고, 그리고 치료될 피험자에 바로 투여될 수 있다. 제제는 일반적으로 상기에서 정의한 최소한 하나의 활성 성분과 함께 하나 이상의 용인되는 운반체를 포함한다.
각 운반체는 기타 성분들과 양립하고, 환자에게 유해하지 않아야 하는 점에서 약제학적으로 그리고 생리학적으로 모두 용인되어야 한다.
제제는 경구, 직장, 비강, 또는 장관외 (피하(s.c.), 근육내(i.m.), 복막내 (i.p.), 정맥내(i.v.) 그리고 피부내를 포함하는 또는 폐 점막으로의 흡입에 의해) 투여에 적합한 것을 포함한다. 제제는 통상적으로 단위 투약형으로 제공될 수 있고, 그리고 약제 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 준비될 수 있다. 피험자에서 원하는 효과들을 만들기 위하여 필수적인 유효량을 포함하는 이러한 모든 화합물의 성질, 이용가능성 및 원천은 당업계에 공지되어 있으며, 여기에서 상세하게 더 논의될 필요는 없다.
본 발명의 약제 조성물은 완충제, 일반적으로 조성물의 삼투성을 조절하는 물질, 그리고 당업계에 공지된 것과 같은 선택적으로, 하나 이상의 약제학적으로 용인되는 운반체, 부형제 및/또는 첨가제를 포함한다. 보충 활성 성분은 또한 조성물에 혼입될 수 있다. 운반체는 예를 들면, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들면, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 그리고 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 유사한 것)을 포함하는 용매 또는 분산 매체, 이의 적합한 혼합물, 그리고 식물성 오일일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들면, 레시틴과 같은 피복을 이용하여, 분산의 경우 요구되는 입자 크기를 유지시켜, 그리고 계면활성제를 이용하여 유지될 수 있다.
여기에서 사용된 것과 같이, "약제학적으로 용인되는 운반체"는 임의의 그리고 모든 용매, 분산 배지, 코팅, 항균 및 항곰팡이제 및 이와 유사한 것을 포함한다. 약제학적 활성 물질로 이러한 배지 및 물질들의 사용은 당업계에 공지되어 있다. 활성 성분과 양립하지 못하는 임의의 통상의 배지 또는 물질을 제외하고, 치료 조성물에 사용이 고려된다.
테블릿 또는 캡슐 형태의 경구 투여의 경우, 활성 약물 성분 (항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물 또는 기타 면역글로블린 조제물과의 조합)은 락토즈, 전분, 슈크로즈, 포도당, 변형된 슈가, 변형된 전분, 메틸셀룰로오즈 및 이의 유도체, 인산이칼슘염, 황산칼슘염, 만니톨, 솔비톨, 그리고 기타 환원 및 비-환원당, 스테아레이트 마그네슘, 스테아르산, 스테아릴 퓨마레이트 나트륨, 글리세릴 베헤네이트, 스테아레이트 칼슘 및 유사한 것과 같은 비-독성 약제학적으로 용인되는 비활성 운반체와 복합될 수 있다. 액체형태의 경구 투여를 위한 경우, 활성 약물 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 및 유사한 것과 같은 비-독성 약제학적으로 용인되는 비활성 운반체와 복합될 수 있다. 원할 때 또는 요구될 때, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색 및 풍미제 또한 혼합물에 혼입될 수 있다. 항산화제, 프로필 갈레이트, 아스코르베이트 나트륨, 구연산, 메타비설피트 칼슘, 하이드로퀴논, 그리고 7-하이드록시쿠마린과 같은 안정화제가 투약형을 안정화시키기 위하여 첨가될 수 있다. 기타 적합한 화합물들은 젤라틴, 감미제, 아카시아, 트라가탄 또는 알긴산염과 같은 천연 및 합성 검, 카르복시메틸셀룰로오즈, 폴리에틸렌, 글리콜, 밀랍 및 이와 유사한 것을 포함할 수 있다.
또다른 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및 예방을 위하여 면역-조절 조성물의 제조에 있어서 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 사용과 선택적으로 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 사용하는 용도를 제공한다. 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물은 LPS 및 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합한다는 것을 주지해야만 한다. 선택적으로, 본 발명의 용도에 의해 준비된 조성물은 본 발명의 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물과 상기 질환에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 면역글로블린의 조합을 포함할 수 있다. 이러한 인지는 조절 T 세포의 변경으로 이어지고, 그 결과, 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 쪽으로 또는 사전-염증 Th1 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형이 조절된다. 이에 의해 상기 질환에 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시키는 복합 면역-조절 조성물이 만들어진다.
임의의 유형의 조절 또는 작동자 세포, 특히 Th3 및 Trl [TH3, T 세포는 점막 표면에서 선호적으로 유도되며, 그리고 형질변환 성장 인자 (TGF)-β를 분비함] 세포를 포함하는 조절 T 세포가 관련될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 초유에서 유도된 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 조절 T 세포 또는 항원 특이적 그리고, 방관자 항원을 표적으로 하여, 또는 관련안된 항원에 대항함으로써 비-특이적 방식으로 면역 시스템에 관련된 임의의 기타 세포를 촉진시킬 수 있다는 것을 주지해야 한다.
한 구체예에 따르면, 본 발명에 이용되는 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 IgG, IgA 및 IgM 그리고 이의 임의의 단편들로 구성된 군으로부터 선택된 단량체, 이량체 또는 다량체 면역글로블린을 포함할 수 있다.
또다른 구체예에 있어서, 초유에서 유도된, 우유 또는 우유 산물에서 유도된 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물의 본 발명에 따른 용도는 조성물 또는 초유, 우유 또는 우유 산물 성분(들) 그리고 임의의 어쥬번트(들), 바람직하게는, 알라민스, 디페넨신, 콜로스트리닌 및 임의의 조제물, 혼합물 또는 이의 조합을 더 포함하는 복합된 조성물을 제조하는 것이다. 본 발명의 조성물은 임의의 추가 어쥬번트를 포함할 수 있다는 것을 더 인지해야만 한다. 따라서, 적절한 어쥬번트는 임의의 항원, 항체, 글리코스핑고리피드, 단백질, 사이토킨, 유착 분자들, 그리고 직간접적으로 면역 시스템에 관련된 임의의 기타 세포 또는 항원 제공 세포의 기능을 활성화 또는 변경시킬 수 있는 성분일 수 있다는 것을 인지해야만 한다. 특정 구체예에 따르면, 면역조절 치료제의 면역 조절 효과를 강화시키기 위하여 면역 조절 효과를 강화시키기 위하여 본 발명의 복합된 조성물에 초유 또는 임의의 초유에서 유도된 조제물의 용도를 더 제공한다는 것이다.
용어 알라민(alarmin)은 감염 또는 조직 손상 동안 신속하게 방출되고, 그리고 숙주 방어 및 조직 복구에 바쁜 수용체를 발현시키는 세포에 동원(mobilizing) 및 활성화 효과를 가지는 구조적으로 다양한 다기능 숙주 단백질의 배열을 나타낸다. 알라민 기능을 가진 본유적인 면역 중개물질은 디펜신(defensins), 호산구-유도된 신경독소, 카텔리시딘 및 HMGB1을 포함한다.
디펜신은 척추동물 및 무척추동물 모두에서 발견되는 시스테인-풍부한 작은(15-20개 잔기) 양이온 단백질이다. 디펜신은 세균, 곰팡이 및 외피 바이러스에 대항하여 활성을 가진다. 디펜신은 6개 내지 8개의 보존된 시스테인 잔기들을 포함하는 15-20개 아미노산으로 구성된다. 예를 들면 호중구 과립세포 및 거의 모든 외피 세포내에 식균화된 세균의 사멸을 돕는 이러한 펩티드를 포함한다. 대부분의 디펜신은 전기적 견인 방식에 의해 미생물의 세포 막을 침투함으로써 기능을 하며, 그리고 일단 박히게 되면, 유출을 허용하는 구멍이 막에 형성된다.
여기에서 사용된 것과 같이, "콜로스트리닌(colonstrinin)"은 포유류 초유로부터 자연 형태로 수득된 폴리펩티드를 말한다. 콜로스트리닌은 흔히 "콜로스트린닌(colonstrinine)"으로도 알려져 있으며, 16,000 내지 26,000 Daltons 범위의 분자량을 가진다. 콜로스트리닌은 소단위의 이량체 또는 삼량체를 형성할 수 있고 (각각은 5,000 내지 10,000 Daltons, 바람직하게는 6,000 Daltons의 분자량을 가진다), 그리고 대부분 프롤린(프롤린의 양은 임의의 기타 단일 아미노산의 양보다 많다)을 포함한다.
콜로스트리닌은 사이토킨, 특히 감마 인터페론 (IFN-γ), 종양 괴사 인자 TNF-α), 인터루킨 (가령, IL-6 및 IL-10) 및 다양한 성장 인자들의 생산을 자극하는 것을 특징으로 한다.
상기에서 나타낸 것과 같이, 본 발명에 의해 이용되는 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물 및 임의의 기타 선택적 면역글로블린 조제물은 LPS 또는 이의 임의의 단편들 그리고 선택적으로, 추가하여, 치료될 질환에 특이적인 최소한 2개의 항원 혼합물로 면역주사를 맞은 포유동물로부터 수득할 수 있다. 본 발명의 수단 및 방법은 젖을 분비하는 임의의 포유동물의 초유, 우유 또는 우유 산물에서 장기적이고, 많은 양의 항원-특이적 상체 생산을 얻는데 적합하다. 바람직하게는, 상기 동물은 농장-동물이다. 농장 동물은 인간이 상업적 목적으로 이용하는 동물, 우유, 고기 또는 심지어 항체 생산을 위한 동물이다. 우유를 상업적 규모로 생산하는데 이미 이용되는 농장 동물이 본 발명에는 바람직한데, 그 이유는 이들 동물은 우유 생산을 위해 최적화된 특정 계통 및 품종이 존재하기 때문이다. 바람직하게는, 상기 농장 동물은 소 또는 염소다. 더 바람직하게는 상기 농장 동물은 소다.
본 발명의 이러한 용도의 한 구체예에서, 조성물은 점막 미생물의 전위를 감소 또는 억제시킨다. 본 발명의 이러한 용도의 한 구체예에서, 조성물은 점막 미생물의 전위를 감소 또는 억제시키고, 그리고 이에 의해 면역 활성화를 조절한다.
한 구체예에 따르면, 본 발명은 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 그리고 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병의 치료, 저지 및 예방을 위한 조성물을 제조에 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 이용하는 것에 관계하는데, 선택적으로 상기 조성물은 추가 치료제 또는 임의의 운반체 및 어쥬번트를 더 포함한다.
본 발명의 이러한 용도의 한 구체예에 따르면, 이러한 특정 조성물은 점막 미생물의 전위를 감소 또는 억제시키고, 이에 의해 문맥 고혈압 또는 임의의 기타 원인이건 간에 급성 또는 만성 간 질환-관련된 여병의 병원성에 세균 또는 임의의 기타 감염성 물질의 직접적인 효과를 변경시킨다.
좀더 구체적으로, 여기에서 사용된 것과 같이, 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 그리고 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병은 간성 뇌증, 자발적 세균성 복막염 (SBP), 복수, 간경변 관련된 과다역동 순환, 간신증후군, 간폐 증후군, 폐동맥 고혈압, 정맥류 출혈, 부신피질 기능장애 및 의식의 변경된 수준중 최소한 하나이다.
이러한 여병은 만성 HCV 감염, 알코올성 간염, 만성 HBV, 비-알코올성 지방간염, 약물에 의해 유도된 간 손상, 또는 임의의 기타 원인의 급성 또는 만성 간 질환으로 인한 것일 수 있다는 것을 인지해야 한다.
선택적 구체예에 따르면, 본 발명은 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물과 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하는 면역글로블린을 포함하는 최소한 하나의 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물과의 조합의 용도를 제공한다. 이러한 특정 구체예에 따르면, 이러한 조합의 용도는 조절 T 세포를 조절하여, 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 또는 사전-염증 Thl 면역 반응을 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형의 조절로 이어지고, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시키는 면역-조정 조성물을 준비하는 것이다. 선택적으로 이러한 복합된 조성물은 추가 치료제 또는 임의의 운반체 및 어쥬번트를 더 포함한다. 이러한 조성물은 조절 T 세포를 조절하여, 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 또는 사전-염증 Th1 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시킨다.
추가 구체예에서, 면역-관련된 장애는 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 대사 증후군 그리고 임의의 이와 관련된 장애, 감염성 질환, 그리고 증식성 장애중 임의의 하나일 수 있다.
본 발명의 용도의 한 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 급성 여병의 치료, 또는 이러한 여병의 발생을 저지 또는 재발을 저지하는데 이용할 수 있다.
또다른 구체예에 따르면, 본 발명의 복합된 조성물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제한다. 이러한 특이적 구체예에 따르면, 이러한 조성물은 자가면역 질환의 치료에 적용할 수 있다.
대안으로, 본 발명의 복합된 조성물은 사전-염증 Th1/Th2 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 이에 의해 상기 질환에 특이적인 면역 반응을 강화시킬 수 있다. 이러한 특이적 구체예에 따르면, 이러한 조성물은 감염성 질환, 그리고 증식성 장애의 치료에 적용시킬 수 있다.
본 발명의 상기 용도의 추가 구체예에 있어서, 본 발명의 조성물 경구 투여, 에어로졸과 같은 흡입에 의해, 또는 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 장관외, 경피, 질내, 비강내, 점막, 설하, 국소, 직장 또는 피하, 또는 이의 임의의 조합를 통하여 투여할 수 있다.
내성은 자기에 대해 반응의 부족, 또는 잠재적으로 해로운 면역 반응을 저지하고, 억제하고, 또는 해롭지 않는 부류의 면역 반응으로 전환시키는 임의의 기전으로 정의하였다. 따라서, 내성은 고유 성분에 대해 면역 시스템의 무분별이라기 보다는 생산적 자가-인식과 관련있다. 본 발명자들은 자가-항원이던 아니던 질병-관련된 항원에 노출은 면역 시스템의 일부를 활성화시키고, 반면 항원-특이적 방식으로 원하지 않는 면역성을 억제하는 것이라고 설명하였다. 이론에 결부되지 않고, 한편으로 경구 항원 투여는 특정 세포를 억제하고, 원하지 않는 자가면역을 경감시키는 세포의 특정 하위부류를 활성화시키고, 그리고 다른 한편으로, 항-바이러스 또는 항-종양-관련된 항원 면역 반응을 촉진시킨다. 면역 시스템이 역할을 하는 많은 임의의 면역-매개된 질환 또는 장애의 경우, 전신 면역 시스템에서 촉진되는 상이한 유형의 신호/세포 간의 균형은 최종 면역학적 효과를 결정할 것이다.
경구 내성은 자연적 경로를 통하여 신체에 접근하여, 신체의 일부가 되는 외부 물질을 처리하는데 관련된 것으로 보이는 외생 항원의 존재에 의해 구동되는 자연적 면역 과정이다. 장과 같은 위장 기관에서 항원의 경구 노출은 활성 면역 반응을 초래하며, 항원-특이적 요법은 해롭지 않는 또는 비-염증성 면역 환경에서 다루어지는 장 점막에 존재하는 항원에 대한 면역요법으로 매력적인 방식으로 간주된다. 따라서, 특이적 면역 세포는 활성화될 수 있고, 그리고 항원-특이적 요법은 만성 간염, 감염 물질, 대사 증후군 그리고 여기에서 논의된 기타 병적 장애에 면역치료로 작용할 수 있다.
위장 항상성을 담당하는 기전은 조절 T 세포를 포함하는 상이한 유형의 T 세포, 수지상 세포 (DCs), 천연 킬러 T (NKT) 세포, 그리고 위장 미세 환경 사이에 복합 상호작용에 관여한다.
난포-관련된 상피 (FAE)는 항원 취입(uptake) 및 후속적인 점막 면역의 유도에 주요 역할을 한다. 항원 (Ag) 운반의 표적화에 의해 FAE M 세포는 전신 및 점막 림프 조직 모두에서 Ag-특이적 CD4+ T 세포의 감소 및 형질변환 성장 인자 (TGF)-β와 인터루킨 (IL)-10-생산 CD25+CD4+ T- 조절 세포 (Tregs)의 증가된 수준을 통하여 경구 내성을 촉진한다.
내장 DCs는 병원성 면역, 경구 내성, 및 내장 염증의 주요 조절물질이다. 관련 DCs는 융모 점막의 PP, MLNs, 또는 LP에 있을 수 있다. 이들 조직 모두다 다수의 구별가능한 DC 하위부류를 포함하는데, 이들중 일부는 Tregs의 분화를 선호적으로 유도할 수 있는 것들을 포함한다.
NKT 세포는 NK 세포 및 기억 T 세포 모두와 성질을 공유하는 T 세포의 독특한 계통이다. 이러한 림프구의 하위부류는 CD4+ 또는 이중 네가티브일 수 있고, 그리고 CD1d 반응성이다. 이들 세포는 이들의 불변 Vα14-Jα18 TCR α-쇄에서 유일하며, 그리고 이들의 T-세포 수용체 (TCR) β-쇄는 Vβ8.2, Vβ2, 및 Vβ7쪽으로 편향되어 있다. NKT 세포는 이들의 당지질 항원 반응성 및 두드러진 사이토킨 생산에 있어서 유일하다. Th1 및 Th2 반응을 모두 생성시키는 NKT 세포의 능력은 면역조절 세포로서 이들의 중요성을 나타낸다. NKT 리간드를 사용하면 이들 세포의 적응성을 변경시킴으로써 심원 면역조절 효과를 유도한다.
본 발명자들은 경구 내성 유도에서 NKT 세포의 역할을 설명하였고, 그리고 Tregs와 NKT 세포 사이의 응수에 대한 최근 증거가 제공되었다. 이론에 구애되지 않고, NKT 세포는 활성화 신호에 노출 직후 사이토킨을 생산하고, 그리고 Tregs의 분화를 결정할 수 있는 것으로 본다.
간은 경구 내성에 중요한 것으로 간주된다. 간은 말초 면역 반응의 제거 상 동안 아팝토시스 CD8+ T 세포가 축적되는 부위다. 정상적인 마우스 간은 비정상적인 림프구 혼합물을 포함하는데, 자연 킬러(NK) 및 자연 킬러 T (NKT) 세포가 풍부하고, 아팝토시스성 T 세포 또한 존재한다. 이들 세포는 간내 T-세포 트랩핑(trapping) 및 사멸에 관련된다. 내장 세균으로부터 유도된 LPS에 다양한 간 세포 유형의 연속 노출은 사이토킨, 항원-제공 분자들, 그리고 T-세포 비활성화를 강요하는 공동-자극 신호의 발현을 촉진시키는 것으로 본다. 간에서 관용성 환경에 대한 기타 가능한 설명은 클론 결손, 내피 세포 또는 Kupffer 세포에 의한 특이적 항원 제공, 그리고 조절 T 세포를 유도하는 능력과 관계한다.
간 미세환경에서 상이한 자극은 T-세포 프라이밍 및 유효한 면역 반응의 생성과 연관되며, 반면, 기타는 내성을 야기한다. 수지상 세포와 이들의 간으로의 이동에 의해 간에서 항원 제공은 내장-간 축에서 상호작용의 일부를 나타낸다. 간-유도된 DCs는 피부 DCs와 비교하였을 때 원래부터 관용성이며, IL-10을 생산하고, 낮은 수준으로 공동 자극성 분자들을 발현시킨다. Kupffer 세포 및 간세포에 의한 IL-10 및 TGF-β의 국소 배출은 작동자 경로에 반대로 조절 생성 쪽으로 DC 기능을 편향시킬 수 있다. 간 동양혈관 내피 세포 (LSECs)는 MHC class I 상에 제공하도록 되어 있는 초기 엔도좀 격실로 항원을 이동(trafficking)시킬 수 있고, 이로서 CD8+ T 세포에 교차-제공 능력이 설명된다. LSECs에 의한 항원 제공의 결과는 보통 CD8+ T 세포의 아팝토시스, 그리고 CD4+ T 세포에 의한 IL-4 및 IL-10의 배출과 함께 내성이다. 활성화된 T 세포는 또한 전신 CD8 반응을 제어하는 동안 아팝토시스 경로를 조절하는 기전으로 동양 혈관내 세포간 유착 분자 (ICAM-1)-의존적 기전에 의해 붙잡힌다. 간세포 자체는 APCs로 기능을 하여 고유 T 세포를 활성화시킬 수 있다. 대부분 경우, 간세포에 의한 활성화는 항원-특이적 내성으로 이어지지만, 이 과정은 Tregs의 활성화와 관련있을 수 있다. 말초 Tregs는 미숙 DCs에 의해 고유 T 세포의 활성화로 생성되거나 또는 IL-10 및 TGF-β 존재하에 생성되는데, 이들 모두 간 미세 환경에 존재한다.
Tregs는 소화관-간 면역 축에서 중요하다. CD4+CD25+ Tregs는 LSECs, Kupffer 세포, 또는 간세포에 의해 CD4+ T 세포의 활성화를 억제한다. 이러한 공정이 TLR4 활성화에 의해 압도될 수 있기 때문에, Tregs, 병원균 및 기타 간 세포 사이에 상호작용은 간에서 면역 활성화의 결과를 결정한다. Tregs는 원하지 않는 면역 반응을 구속하고, 미생물총(microflora)에 대한 반응을 조절하고, 소화관의 다수의 만성 염증 질환에서 역할을 할 수 있다. Tregs는 낮은 창자내 공생 유기체에 대항하는 결정적인 염증 반응을 저지하여 염증성 장 질환으로부터 대비할 수 있다. 다양한 T 림프구의 하위집합은 자연 Tregs, 유도된 Tregs, Tr1, 및 Th3 세포를 포함하는 조절 기능을 나타내는 것으로 제안되었다. 이들 세포는 사이토킨에 의해 활성화될 수 있고, 그리고 이들의 유도성 상은 항원 구동성일 수 있다. 대부분CD4+ 조절 T 세포 (Tr1, Th3, 및 CD4+CD25+)는 수지상 세포와 상호작용하는 것으로 간주한다. CD8+ TrE 세포와 같은 다른 Tregs의 하위 집단은 내상 상피 세포에 의해 제공되는 항원을 인지할 수 있다.
CD4+CD25+ Tregs는 점막에서 역 반응을 조절하는 기구로 간주된다. TGF-β는 소화관에서 생산되는 가장 중요한 사이토킨중 하나로 드러났으며, CD4+CD25+ Tregs와의 상호작용은 T-세포 면역 및 내성 사이의 균형을 유지하는데 주요하다. CD4+CD25+ Tregs에서 안정적인 형태의 β-카테닌의 발현은 이들 세포의 생존을 두드러지게 강화시킨다. 염증성 장 질환으로부터 보호에 필요한 Tregs의 수는 안정적인 β-카테닌을 발현시키는 CD4+CD25+ Tregs를 이용할 때 실질적으로 감소될 수 있다. IL-35는 Treg 세포에 의해 생산되는 억제성 사이토킨이며, 최대 억제 활성에 요구된다. 하기에서 논의되는 것과 같이, 본 발명자들은 본 발명에 따른 조성물로 CD4+ CD25+ Treg 세포의 조정을 설명하였다.
Foxp3+ Tregs는 점막 내성의 확립 및 유지에 중요하다. 사이토킨-박탈-유도된 아팝토시스는 Tregs가 작동자 TCR을 억제하는 탁월한 기전이다. 이와 같이, CD4+CD25+Foxp3+ Tregs는 작동자 CD4+ T 세포에서 아팝토시스를 유도한다.
Th3 또는 기타 Treg 세포에 의한 TGF-β 분비는 경구 내성에 주요 인자로 간주된다. TGF-β-생산 세포는 경구 내성에 결정적이며 그리고 항원 공급에 의해 촉발되는 대부분의 기전의 마스터 조절물질일 수 있다. 잠복-관련된 펩티드 (LAP)는 TGF-β 전구 펩티드의 아미노-말단 도메인이며, 그리고 절단 후 TGF-β 펩티드와 비-공유적으로 관련된 상태로 유지되며, 잠복 (latent) 복합체를 형성한다. Tregs의 표면상에 막-결합된 TGF-β 또는 LAP의 존재는 Tregs의 억제성 기능과 TGF-β와 연계된다. TGF-β-분비 Th3 세포 및 CD8+ 조절 세포는 경구 내성과 관련되며, 그리고 TGF-β에 의존적이다. 하기에서 논의되는 것과 같이, 본 발명자들은 본 발명에 따른 조성물로 LAP+ 및 LAP- Treg 세포의 조정을 설명한다.
LAP를 포함하는 막-결합된 형태의 TGF-β를 설명하였다. LAP+CD4+ 세포는 TGF-β-의존적 기전을 통하여 소화관내에서 억제를 중재한다. 본 발명자들은 표면 LAP를 발현시키는 TGF-β-의존적 Tregs는 항-LPS 항체들의 경구 투여에 의해 유도되거나/촉진된다는 것을 보여주었다. TGF-β는 IL-10-생산하는 세포의 분화를 유도할 수 있고, 경구 내성 유도, 예를 들면, 자가면역을 억제하는 CD4+CD25LAP+ Tregs를 유도하는데 상이한 사이토킨을 생산하는 Tregs 사이의 응수가 존재할 수 있다는 것을 나타낸다.
CD8+ 림프구의 하위부류는 또한 내성 유도에도 관여한다. 내장 상피 세포 (IECs)는 CD8+ Tregs를 촉진시켜 항원을 가공하여 T 세포로 항원을 제공할 수 있다. IECs에 의해 활성화된 T 세포는 기능에서 억제성이지만, IECs는 CD8+ 말단 T 세포의 작은 분획물의 증식을 유도할 수 있다. IEC-활성화된 CD8+ T 세포의 CD8+CD28 하위부분은 CD101 및 CD103을 발현시키고, gp180을 통하여 IECs와 상호작용하며, 그리고 조절 기능을 보유한다. 조절 활성을 가진 CD8+ T 세포는 정상적인 건강한 개체의 LP에 존재하지만, 염증성 장 질환(IBD)을 가진 환자에서는 존재하지 않고, 이는 이들 세포가 점막 내성에 활발한 역할을 한다는 것을 말한다. “항원-교차-제공,” 또는 전문적인 APCs에 의해 제공되는 분자들이 주요 조직적합성 복합체 class I (MHC-I) 경로로 들어가, CD8+ T 세포로 제공되는 가능성은 있을 수 있는 기전이다. 대안으로, CD4+ T-세포 활성화와 관련된 APCs에 의한 CD8+의 “교차-프라이밍”은 억제를 담당하는 기전일 수도 있다. CD8+ T 세포는 TGF-β의 분비를 통하여 조절 역할을 한다. 항원-프라임된 CD8+ T-세포 집단은 IL-4 또는 IL-10을 생산하고, 그리고 내성 유도와 관련될 수 있다.
따라서, 또다른 측면에서, 본 발명은 간에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 간에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ NK1.1+ 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP- T 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP+ T 세포를 증가시키고, 비장에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 지방 조직에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하기 위하여 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물을 제공한다.
지방세포들은 지방으로 에너지를 저장하도록 특화된, 지방 조직으로 주로 구성된 세포다. 두 가지 유형의 지방 조직, 백색 지방 조직 (WAT)과 갈색 지방 조직 (BAT)이 있는데, 이들은 백색 지방 및 갈색 지방으로 각각 알려져 있으며, 이들은 두 가지 유형의 지방 세포를 포함한다. 백색 지방 세포 또는 단일공포(monovacuolar) 세포는 세포질 층에 둘러싸인 큰 지방 방울을 포함한다. 핵은 평평하며 주변에 위치한다. 전형적인 지방 세포는 직경이 0.1mm이며, 일부는 이 크기의 두배이고, 일부는 이 크기의 절반이다. 저장된 지방은 반-액체 상태이며, 그리고 주로 트리글리세리드와 콜레스테릴 에스테르로 구성된다. 백색 지방 세포는 레시스틴(resistin), 아디포넥틴, 그리고 렙틴을 분비한다. 갈색 지방 세포 또는 다수 공포(pluri vacuolar) 세포는 모양이 다각형이다. 백색 지방 세포와 달리, 이들 세포들은 상당량의 세포질을 가지고, 이들을 통하여 분산된 지질 방울을 가진다. 핵은 둥글고, 이상하게 위치하고 있지만, 세포의 주변에 있지는 않는다. 다량의 미토콘드리아로 인하여 갈색이 생겨났다.
실시예를 통하여 볼 수 있는 것과 같이, 본 발명의 조성물은 트리글리세리드, ALT, AST 및 포도당의 혈청 수준을 상당히 감소시켰다. 따라서, 한 구체예에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물은 간질환 또는 면역-관련 질환 예를 들면, 대사 증후군을 앓고 있는 개체에서 콜레스테롤, 트리글리세리드, ALT, AST 및 포도당의 혈청 수준 그리고 인슐린 저항성의 감소중 최소한 하나의 감소를 초래한다. 감소, 축소, 억제로 표현된 경우, 면역-관련 질환을 앓고 있는 개체에서 트리글리세리드, ALT, AST 및 포도당 중 임의의 하나의 혈청 수준을 약 5% 내지 99% 감소를 야기한다는 의미이다. 좀더 구체적으로, 이러한 축소는 치료 전 수준 또는 치료를 받지 않은 대조군의 수준과 비교하였을 때, 약, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 99% 이상의 축소일 수 있다. 증가, 상승, 강화로 표현된 경우, 본 발명의 조성물은 약 5% 내지 99%의 유도 또는 증가를 초래한다는 의미다. 좀더 구체적으로, 이러한 증가는 치료 전 수준 또는 치료를 받지 않은 대조군의 수준과 비교하였을 때, 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 99% 이상일 수 있다.
한 특이적 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 자가면역 질환의 저지 및/또는 치료를 위하여 이용될 수 있는데, 예를 들면, 대사 증후군 또는 이를 포함하는 임의의 이상, 이와 관련된, 이로 인한, 이에 연계된 임의의 이상, 또는 대사 증후군에 영향을 주는 것으로 보이는 이상, 예를 들면, 지단백대사이상 (고중성지방혈증, 고콜레스테롤지방혈증, 저 HDL-콜레스테롤), 비만, NIDDM (비-인슐린 의존적 진성 당뇨병 ), IGT (손상된 포도당 내성), 혈액 응고성, 혈액 섬유소분해 결손 및 고혈압중 최소한 하나의 이상을 저지 및/또는 치료를 위하여 이용될 수 있다.
대사 증후군은 한 사람에서 다음을 포함하는 대사 위험 인자군에 의해 특징화된다:
* 복부 비만 (복부에 그리고 복부 주변에 과도한 지방 조직);
* 아테롬성 이상지질혈증 (혈액 지방 장애 - 고(high) 트리글리세리드, 저(low) HDL 콜레스테롤 및 고 LDL 콜레스테롤-이들은 동맥 벽에 플라크 축적을 일으킨다);
*상승된 혈압;
*인슐린 저항성 또는 포도당 불내증;
*사전-혈전성 상태(Prothrombotic state) (가령, 혈액내 고 피브리노겐 또는 플라시미노겐 활성물질 억제제-1); 그리고
*사전-염증 상태(가령, 혈액내 상승된 C-반응성 단백질). 대사 증후군이 있는 사람들은 관상 심장 질환 및 동맥 벽에 플라크 축적과 관련된 기타 질환(가령, 발작, 및 말초 혈관 질환) 및 유형 2 당뇨병의 위험이 증가된다.
좀더 구체적으로, 본 발명의 조성물은 고중성지방혈증, 고콜레스테롤혈증 및 저 HDL-콜레스테롤, 비만, NIDDM (비-인슐린 의존성 유형 2 진성 당뇨병), IGT (손상된 포도당 내성), 혈액 응고성, 혈액 섬유소용해 결손 및 고혈압을 포함하는, 지단백대사이상의 치료용이다.
한 특이적 구체예에 따르면, 본 발명의 면역조절 조성물은 당뇨병, 특히, 유형 2의 당뇨병을 치료하는데 이용할 수 있다. 진성 당뇨병, 흔히, 당뇨병은 호르몬 인슐린의 낮은 수준으로 인한 또는 보상하기 위하여 인슐린 분비가 부적절한 수준과 결합된 인슐린 효과에 대해 비정상적 저항으로 인한 혼란이 생긴 대사 및 부적합하게 높은 혈당(과혈당증)을 특징으로 하는 증후군이다. 이러한 특징적인 증후는 과도한 뇨 생산(다뇨증), 지나친 갈증 및 유체 섭취 증가(조갈증), 및 침침한 시력이다. 이러한 증상은 혈당이 약간만 상승하여도 없을 것 같다.
세계보건기구(WHO)는 상이한 원인과 집단 분포를 가지는 유형 1, 유형 2 그리고 임신성 당뇨병 (임신 기간중에 발생) 3가지 주요 형태의 진성 당뇨병을 인정한다. 궁극적으로 모든 형태는 췌장의 베타 세포가 과다혈당을 막기 위하여 충분한 인슐린을 생산할 수 없기 때문이지만, 그 원인이 다르다. 유형 1 당뇨병은 췌장 베타 세포의 자가면역 파괴가 주요 원인이다. 유형 2 당뇨병은 표적 조직에서의 인슐인 저항성을 특징으로 하는데, 이는 비정상적으로 많은 양의 인슐린을 요구하게 되며, 베타 세포가 이러한 요구를 충족시키지 못할 때 당뇨병이 발생한다. 임신성 당뇨병은 인슐린 저항성이 관련된 유형 2 당뇨병과 유사한데, 임신중 호르몬은 유전적으로 이러한 상태를 발생시키기 쉬운 여성에서 인슐린 저항성을 야기시킬 수 있다.
질환이 적절하게 제어되지 못할 경우, 당뇨병의 급성 여병(저혈당, 케톤산증 또는 비-케톤성 고삼투압 혼수상태)이 발생할 수 있다. 심각한 장기적 여병은 심 혈관질환(두배의 위험), 만성 신부전, 망막 손상 (시력상실로 이어질 수 있음), 신경 손상 (몇 가지 종류의), 그리고 성적불능 및 난치를 야기할 수 있는 미세혈관손상을 포함한다. 상처의 빈약한 치유, 특히 발의 경우, 괴저로 이어질 수 있고, 절단해야할 수도 있다.
또다른 구체예에 따르면, 본 발명의 면역조절 조성물은 유형 1 당뇨병의 치료에 이용할 수 있다. 유형 1 진성 당뇨병은 췌장에서 랑게르한스섬의 인슐린을 생산하는 베타 세포의 상실로, 인슐린 결핍으로 이어지는 특징을 가진다. 이러한 베타 세포 상실의 주요 원인은 T-세포 매개된 자가면역 공격이다.
또다른 구체예에 따르면, 본 발명의 약제 조성물은 자가면역 장애의 치료에 이용할 수 있다. 자가면역 장애의 예로는 원형탈모증, 낭창, 강직성 척추염, Meniere 질환, 항인지질 증후군, 혼합형 결합조직 질환, 자가면역 Addison 질환, 다발성 경화증, 자가면역 용혈성 빈혈, 중증 근무력증, 자가면역 간염, 심상성 천포창, Behcet 질환, 악성 빈혈, 수포유천포창(Polyarthritis Nodosa), 결절다발 동맥염(Poly관절염 Nodosa), 심근병증, 다발성연골염(Polychondritis), 세리악 스프루우-피부염(Celiac Sprue-Dermatitis), 다선성 증후군(Polyglandular syndroms), 만성 피로 증후군(CFIDS), 류마티스성 다발성근육통(Polymyalgia Rheumatica), 만성 염증성 탈수초화(Demyelinating), 다발성근염 및 피부다발성근염(Polymyositis and Dermatomyositis), 만성 염증 다발성신경병증, 원발성 무감마글로블린혈증(Primary A감마globulinemia), Churg-Strauss 증후군, 원발성 담즙성 간경변, 반흔성 유천포창(Cicatricial Pemphigoid), 건선, CREST 증후군, Raynaud 현상, 차가운 아글루티닌 질환, Reiter 증후군, Crohn 질환, 류마티즘 열, 원반모양의 낭창, 류마티스 관절염, 특발성 혼합 저온형글로불린혈증(Essential Mixed Cryoglobulinemia), 유육종즐(Sarcoidosis), 섬유근육통(Fibromyalgia), 경피증, Grave 질환, Sjogren 증후군, Guillain-Barre, Stiff-Man 증후군, Hashimoto 갑상선염, Takayasu 동맥염, 특발성 폐 섬유증, 일과성 동맥염/거대 세포 동맥염, 특발성 혈소판감소증 자반증(ITP), 궤양성, IgA 신증, 포도막염, 인슐린 의존적 당뇨병 (Type I), 맥관염, 편평태선(Lichen Planus), 및 백피(Vitiligo)를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 여기에서 설명된 경구 조성물은 세포, 조직 또는 장기 이식, 가령, 간 및 심장 이식과 관련된 비정상적 또는 원하지 않는 면역 반응과 관련된 장애, 예를 들면, 이식편 숙주 질환(GVHD)을 치료 또는 예방하거나, 또는 동종이식편 거부를 방지하기 위하여 피험자에 투여될 수 있다.
특히 바람직한 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물에 의해 치료될 자가면역 질환은 류마티스 관절염, 유형 1 당뇨병, 유형 2 당뇨병, 죽상경화증, 천식, 급성 및 만성 이식편대 숙주 질환, 전신 홍반성 낭창, 경피증, 다발성 경화증, 염증성 장 질환, 건선, 포도막염, 갑상선염 및 면역 매개된 간염중 임의의 하나일 수 있다.
또다른 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 MS의 치료에 이용할 수 있다. 다발성 경화증 (MS)은 전형적으로 CNS에 병소에 의한 재발 또는 만성적으로 진행되는 사망성 기능이상을 특징으로 한다. 병리학적으로, 병소는 뇌, 시신경 및 척수를 침범하는 다중 부위의 탈수초화를 포함한다. 숨어있는 병인관계는 불확실하지만, MS는 최소한 부분적으로 자가면역 또는 면역-매개된 질환일 것으로 광범위하게 보고 있다.
따라서, 본 발명은 본 발명의 초유로부터 유도한 면역글로블린 조제물을 경구 또는 점막으로 투여하여 MS의 치료, 개시의 지연 또는 저지를 위한 조성물 및 방법을 포함한다. MS를 앓는 또는 앓을 위험이 있는 피험자에게 본 발명의 조성물을 경구로 투여하는 방법을 포함한다.
또다른 바람직한 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 RA의 치료에 이용할 수 있다. 류마티스 관절염 (RA)은 가장 흔한 만성 염증 관절염이며, 성인의 약 1%가 앓고 있으며, 남성보다는 여성이 2 내지 3배 더 많다. RA는 유아기와 같이 조기에 시작할 수 있지만, 일반적으로 5-6십대에 주로 시작한다.
진단은 류마티스 관절염의 분류에 대해 미국 류마티즘학회 기준(American Rheumatism Association Criteria)에 따라 이루어질 수 있다. 치료 유효량으로 다음중 하나 이상에서 개선을 야기할 수 있다: 염증을 일으킨 관절의 수, 팽창 정도 및 관절 움직임 범위. 실험실 측정(가령, ESR 및 헤마토크릿 값) 그리고 주관적 특징(가령, 통증, 아침 강성(morning stiffness)의 평가를 할 수 있다. 본 발명은 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 본 발명의 조성물의 치료 유효량을 피험자에 투여함으로써 피험자에서 자가면역 관절염, 가령 RA를 치료하는 방법을 또한 포함한다.
여기에서 설명하는 본 발명의 조성물은 이식 수용자에서 이식편 거부의 치료 또는 저지에 또한 이용할 수 있다. 예를 들면, 조성물은 광범위하게 다양한 조직 및 장기 이식 과정에 이용할 수 있는데, 가령, 조성물은 세포, 가령 골수와 같은 줄기 세포 및/또는 췌장 섬, 간, 신장, 심장, 폐, 피부, 근육, 신경 조직, 위 및 내장과 같은 기관 또는 조직 이식편 수용자에서 중심 내성을 유도하는데 이용할 수 있다. 따라서, 새로운 방법들은 세포, 조직 또는 기관 이식을 수반하는 질환 또는 이상의 치료(가령, 과콜레스테롤혈증을 치료하기 위한 간 이식, 근위축증을 치료하기 위한 근육 세포 이식, 또는 Huntington 질환 또는 Parkinson 질환을 치료하기 위한 신경 조직의 이식)에 이용할 수 있다.
또다른 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 IBD를 앓고 있는 피험자에서 항-Th2, Trl/Th3 반응 쪽으로 Thl/Th2, Th3 균형을 조절할 수 있다. 따라서, 이 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 IBD 치료를 위한 것이다. 염증성 장 질환 (IBD)은 면역 반응의 Thl-사전- 염증과 Th2-항-염증 하위유형 사이의 균형 이상 결과로 인식될 수 있는 통상의 위장 장애다.
IBD 환자들은 결장 세포의 성분들 그리고 몇 가지 상이한 세균성 항원에 대항하는 항체를 가진다. 이들 항원은 상피 손상 결과로 면역 시스템에 접근한다. 이러한 환자들에게서 피부 에너지 및 T 세포 자극에 대한 감소된 반응성을 포함하는 T-세포 매개된 면역의 비정상이 나타났다. 또한, 점막 IgG 세포의 농도 증가, T 세포 하위부류의 변화를 포함하는 점막 세포 매개된 면역의 변화가 확인되었는데, 이는 항원 자극을 나타낸다.
또다른 바람직한 구체예에 따르면, 본 발명의 조성물은 아테롬성동맥경화증 치료에 이용할 수 있다. 아테롬성동맥경화증은 동맥 벽내에 콜레스테롤의 축적을 특징으로 하는 서서히 진행되는 질환이다. 아데롬성 경화증성 진행은 혈관 벽내에 LDL-C가 포획되기 시작할 때 시작된다. LDL-C의 산화로 혈관 벽 안에 있는 내피 세포에 단핵 세포가 결합된다. 이들 단핵세포들이 활성화되고, 내피 공간으로 이동하여, 이곳에서 대식세포로 변형되어, LDL-C의 추가 산화를 야기한다. 산화된 LDL-C는 대식세포상에 청소(scavenger) 수용체를 통하여 흡수되어 포말(foam) 세포를 형성하게 된다. 동맥 평활근 세포의 증식 및 이동을 통하여 섬유성 캡이 생성되고, 따라서 아테롬경화성 플라크가 생성된다. 아테롬성 경화성 병소내 지질 침착은 지단백질을 포함하는 혈장 아포 B로부터 주로 유래된다. 이들은 킬로미크론(chylomicrons), LDL-C, IDL, 및 VLDL을 포함한다. 이러한 축적은 혈액의 흐름을 억제하는 거대한 플라크를 형성하여, 응혈이 최종적으로 형성되어, 동맥을 폐쇄하여 심장마비 또는 발작의 원인이 된다.
대안으로, 본 발명의 조성물에 의해 이용되는 면역글로블린 조제물은 치료될 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 이에 결합하고, 그리고 면역-조절 세포, 특히, 조절 T 세포를 조절할 수 있다. 이러한 조절은 사전-염증 ThI 면역 반응 쪽으로 Thl/Th2 세포 균형을 조절하게 하여, 이에 의해 상기 장애에 대한 특이적인 면역 반응을 활성화시킬 수 있다.
본 발명의 면역조절 조성물의 사전-염증 효과는 조절 세포의 특정 하위부류, 항원 제공 세포 또는 사이토킨, 및/또는 케모킨의 직간접적인 활성화를 통한 임의의 유형의 세포-세포 접촉을 활성화 또는 촉진에 의해 이루어질 수 있다는 것을 인지해야 한다.
이러한 특이적 구체예에 따르면, 사전-염증 Th1 반응 쪽으로 Thl/Th2, Th3 균형 조절은 항-염증 Th2, Trl/Th3 반응의 바람직하지 못한 불균형을 가진 면역 관련된 장애, 예를 들면, 악성 및 비-악성증식성 장애, 감염성 질환, 유전적 질환 및 신경퇴행성 장애에 특별히 적용시킬 수 있다.
또다른 측면에서, 본 발명은 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물을 병적 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 약물의 제조에 이용하는 용도를 제공한다. 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다.
한 구체예에서, 병적 장애는 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 또는 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병이다.
또다른 구체예에서, 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 및 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병은 간성 뇌증, 자발적 세균성 복막염 (SBP), 복수, 정맥류 출혈, 간경변 관련된 과다역동 순환, 간신증후군, 간폐 증후군, 폐동맥 고혈압, 정맥류 출혈, 부신피질 기능장애 그리고 의식의 변경된 수준으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또다른 구체예에서, 약물은 간 손상의 치료 및/또는 예방용이다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 그리고 임의의 이와 관련된 장애, 감염성 질환, 및 증식성 장애로 구성된 군으로부터 선택된 면역-관련된 장애다. 대안으로, 병적 장애는 2차 복막염 및 수술 후 감염, 간성 심근병증 및 저혈압, 간부신 증후군, 간세포 암종, Alzheimer 질환, 임의의 유형의 기억 상실, 임의의 유형의 치매, 주의력 결핍 장애 (ADHA), 임의의 유형의 학습 장애, 뇌에 알코올 또는 약물 효과, 천식을 포함하는 임의의 유형의 면역 매개된 질환, 및 복막염으로 구성된 군으로부터 선택된다.
약물은 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하는 면역글로블린을 포함하는 면역글로블린 조제물을 더 포함할 수 있다. 추가된 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다..
한 구체예에서, 약물은 조절 T 세포를 조절하여 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 또는 사전-염증 Th1 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시킨다.
또다른 구체예에서, 약물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제하고, 이때 상기 조성물은 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 그리고 유형 2 당뇨병, 인슐린 저항성, 비만 및 과체중으로 구성된 군으로부터 선택된 임의의 이와 관련된 장애중 임의의 하나의 치료용이다.
또다른 구체예에서, 약물은 대사 증후군 또는 비 알코올성 지방간염 또는 이둘 모두의 치료 및/또는 예방, 당뇨병의 치료 및/또는 예방, 포도당 내성의 감소, 혈청 인슐린 수준의 감소, 간성 트리글리세리드 수준의 감소, 또는 콜레스테롤 수준의 감소와 같은 손상된 포도당 내성의 치료용이다.
한 구체예에서, 약물은 사전-염증 Th1/Th2 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 강화시키고, 이때 상기 조성물은 감염성 질환, 및 증식성 장애의 치료용이다.
약물은 치료제, 운반체 또는 어쥬번트 및/또는 비-과다면역 초유를 더 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 약물 경구 투여, 에어로졸과 같은 흡입에 의해, 또는 장관외, 질내, 비강내, 점막, 설하, 국소 또는 직장 투여 또는 임의의 이의 조합에 맞게 조제될 수 있다.
또다른 구체예에서, 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물은 LPS 또는 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합한다.
또다른 구체예에서, 조성물은 점막 미생물의 전위를 감소시키거나 억제한다. 또다른 구체예에서, 조성물 점막 미생물의 전위를 감소 또는 억제시키고, 이에 의해 면역 활성화를 조절한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 피험자에서 포유류 항-LPS 풍부한 초유로부터 유도된 면역글로블린 조제물을 면역 내성을 조절하는 약물의 제조에, 또는 또다른 구체예에서, 피험자에서 경구 내성을 조절하는 약물의 제조에 사용하는 용도를 제공한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 간에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 간에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ NK1.1+ 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP- T 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP+ T 세포를 증가시키고, 비장에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 지방 조직에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하는 약물의 제조에 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 용도를 제공한다.
항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및/또는 예방 방법을 제공하는데, 이 방법은 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 피험자에 투여하는 단계를 포함한다. 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다.
한 구체예에서, 병적 장애는 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 또는 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병이다.
또다른 구체예에서, 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 및 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병은 간성 뇌증, 자발적 세균성 복막염 (SBP), 복수, 정맥류 출혈, 간경변 관련된 과다역동 순환, 간신증후군, 간폐 증후군, 폐동맥 고혈압, 정맥류 출혈, 부신피질 기능장애 그리고 의식의 변경된 수준으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 간 손상이다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 그리고 임의의 이와 관련된 장애, 감염성 질환, 그리고 증식성 장애로 구성된 군으로부터 선택된 면역-관련된 장애다. 대안으로, 병적 장애는 2차 복막염 및 수술 후 감염, 간성 심근병증 그리고 저혈압, 간부신 증후군, 간세포 암종, Alzheimer 질환, 임의의 유형의 기억 상실, 임의의 유형의 치매, 주의력 결핍 장애 (ADHA), 임의의 유형의 학습 장애, 뇌에 알코올 또는 약물 효과, 천식을 포함하는 임의의 유형의 면역 매개된 질환, 그리고 복막염으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또다른 구체예에서, 조성물은 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하는 면역글로블린을 포함하는 면역글로블린 조제물을 더 포함한다. 추가 면역글로블린 조제물은 초유 또는 조류 알로부터 유도될 수 있다..
또다른 구체예에서, 조성물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 또는 사전-염증 Th1 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형의 조절로 이어지도록 조절 T 세포를 조절하여 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시킨다.
또다른 구체예에서, 조성물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하여, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제하고, 이때 상기 조성물은 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 및 유형 2 당뇨병, 인슐린 저항성, 비만 및 과체중으로 구성된 군으로부터 선택된 임의의 이와 관련된 장애중 임의의 하나의 치료용이다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 대사 증후군 또는 비-알코올성 지방간염 또는 이둘 모두이다.
또다른 구체예에서, 병적 장애는 당뇨병이다. 또다른 구체예에서, 병적 장애는 손상된 포도당 내성이다.
또다른 구체예에서, 이 방법은 포도당 내성의 감소, 혈청 인슐린 수준의 감소, 간성 트리글리세리드 수준의 감소, 또는 콜레스테롤 수준을 감소시킨다.
또다른 구체예에서, 이 방법은 사전-염증 Th1/Th2 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형을 조절하고, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 강화시키고, 그리고 상기 조성물은 감염성 질환, 및 증식성 장애의 치료용이다.
또다른 구체예에서, 조성물은 비-과다면역 초유 및/또는 치료제, 운반체 또는 어쥬번트를 포함한다.
조성물은 경구 투여, 에어로졸과 같은 흡입에 의해, 또는 장관외, 질내, 비강내, 점막, 설하, 국소 또는 직장 투여 또는 임의의 이의 조합으로 투여될 수 있다.
또다른 구체예에서, 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물은 LPS 또는 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합한다.
또다른 구체예에서, 이 방법은 점막 미생물의 전위를 감소 또는 억제시킨다. 또다른 구체예에서, 이 방법은 점막 미생물의 전위를 감소 또는 억제시키고, 이에 의해 면역 활성화를 조절한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 피험자에서 면역 내성을 조절하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 피험자에 투여하는 단계를 포함한다. 대안으로, 이 방법은 경구 내성을 조절할 수 있다.
피험자의 간에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하는 방법은 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 피험자에 투여하는 단계를 포함한다. 또다른 구체예에서, 이 방법은 간에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 간에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD45+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 비장에서 CD8+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 지방조직에서 CD3+ LAP+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ T 세포를 유도하고, 기질 혈관 세포에서 CD4+ CD25+ LAP+ T 세포를 유도하고, 간에서 CD3+ NK1.1+ 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP- T 세포를 감소시키고, 간에서 CD25+ LAP+ T 세포를 증가시키고, 비장에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도하고, 지방 조직에서 CD4+ CD25+ LAP- T 세포를 유도할 수 있다.
추가 측면에서, 본 발명은 병적 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 포유류 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물 또는 이를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 피험자에 투여하는 단계를 포함한다. 면역글로블린 조제물 또는 임의의 이의 분획물은 LPS 및 이의 임의의 단편들을 인지하고, 이에 결합한다는 사실이다. 임의의 구체예에 따르면, 본 발명의 방법은 본 발명의 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물과 상기 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하는 면역글로블린을 포함하는 최소한 하나의 면역글로블린 조제물의 복합 조성물을 투여하는 단계를 포함하여, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 활성화 또는 억제시킨다.
한 구체예에 따르면, 본 발명의 방법에 의해 이용되는 초유에서 유도된, 우유 또는 우유 산물들로부터 유도된 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물 또는 임의의 단편 또는 혼합물, 조합, 또는 이의 임의의 조성물은 IgG, IgA 그리고 IgM 및 이의 임의의 단편들, 조제물, 혼합물 및 이의 조성물로 구성된 군으로부터 선택된 단량체, 이량체 그리고 다량체 면역글로블린을 포함한다. 좀더 구체적으로, 본 발명의 방법에 의해 이용되는 면역글로블린 조제물은 특이적으로 IgG, 특히, IgG1 및/또는 IgG2 및 이의 임의의 단편들을 포함할 수 있다. 대안으로 또는 추가로, 본 발명의 방법에 의해 이용되는 면역글로블린 조제물은 특히 분비성 이량체 IgA를 포함할 수 있다.
또다른 구체예에 따르면, 본 발명의 방법은 초유에서 유도된 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물을 포함하는 조성물 또는 복합 조성물을 이용할 수 있다. 이러한 조성물은 선택적으로 초유 성분(들), 바람직하게는, 알라민스, 디페넨신, 콜로스트리닌, 또는 임의의 당지질, 탄수화물 또는 임의의 조제물, 혼합물 및 이의 조합, 또는 임의의 기타 어쥬번트(들)을 더 포함한다. 본 발명은 면역조절 치료제의 면역 조절 효과를 강화하기 위한 초유 또는 임의의 초유에서 유도된 조제물의 용도를 더 제공한다는 점을 인지해야만 한다. 한 특이적 구체예에서, 본 발명의 방법에 의해 이용되는 조성물 또는 복합된 조성물은 임의의 추가 어쥬번트를 함할 수 있다. 따라서, 적합한 어쥬번트는 임의의 항원, 항체, 글리코스핑고리피드, 단백질, 사이토킨, 유착 분자들, 그리고 항원 제공 세포의 기능 또는 직간접 방식으로 면역 시스템에 관련된 임의의 기타 세포의 기능을 활성화 또는 변경시킬 수 있는 성분들일 수 있다.
또다른 구체예에 따르면, 본 발명에 이용되는 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물 또는 임의의 기타 면역글로블린 조제물은 LPS와 선택적으로, 추가로, 치료될 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원 또는 최소한 2개의 항원 혼합물로 면역주사를 맞은 포유동물, 바람직하게는 소로부터 얻을 수 있다.
한 구체예에 따르면, 본 발명의 방법은 포유류 항-리포폴리사카라이드 (LPS) 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물 또는 이를 포함하는 임의의 조성물의 치료 유효량을 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 방법은 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 그리고 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병의 치료, 저지 및 예방에 특이 이용할 수 있다는 것을 인지해야 한다.
좀더 구체적으로, 급성 또는 만성 간 질환, 간경변 그리고 임의의 질환 또는 이와 관련된 여병은 간성 뇌증, 자발적 세균성 복막염 (SBP), 복수, 간경변 관련된 과다역동 순환, 간신증후군, 간폐 증후군, 폐동맥 고혈압, 정맥류 출혈, 부신피질 기능장애 그리고 의식의 변경된 수준중 최소한 하나이다.
이러한 여병은 만성 HCV 감염, 알코올성 간염, 만성 HBV, 비-알코올성 지방간염, 약물에 의해 유도된 간 손상, 또는 임의의 기타 원인의 급성 또는 만성 간 질환으로부터 발생될 수 있다는 점을 주지해야 한다.
하나의 임의적 구체예에 따르면, 본 발명은 면역-관련된 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 특이적 구체예에 따르면, 본 발명의 방법은 항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물과 최소한 하나의 초유에서 유도된 상기 병적 장애에 특이적인 최소한 하나의 항원을 인지하고 결합하는 면역글로블린을 포함하는 면역글로블린 조제물의 조합, 또는 이러한 조합과 선택적으로 추가 치료제 또는 임의의 운반체 및 어쥬번트를 포함하는 복합 조성물의 치료 유효량을 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다.
이 구체예에 따르면, 본 발명에 이용되는 조합물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 또는 사전-염증 Th1 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형의 조절을 야기하기 위하여 조절 T 세포를 조절하고, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제 또는 활성화시킨다.
또다른 구체예에 따르면, 본 발명의 방법은 면역-관련된 장애, 예를 들면, 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 대사 증후군 그리고 임의의 이와 관련된 장애, 감염성 질환, 그리고 증식성 장애의 치료에 특이 적용시킬 수 있다.
또다른 구체예에서, 본 발명은 손상된 포도당 내성의 치료 방법을 제공한다.
또다른 구체예에서, 본 발명은 포도당 내성의 감소 방법을 제공한다.
또다른 구체예에서, 본 발명은 혈청 인슐린 수준을 감소시키는 방법을 제공한다.
또다른 구체예에서, 본 발명은 간성 트리글리세리드 수준을 감소시키는 방법을 제공한다.
또다른 구체예에서, 본 발명은 콜레스테롤수준을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 방법은 급성 여병의 치료용, 이러한 여병의 발생 및/또는 재발을 저지하기 위한 것임을 주지해야 한다.
한 구체예에 따르면, 본 발명의 방법에 의해 이용되는 복합된 조성물은 항-염증 Th2, Trl/Th3 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형의 조절로 이어져, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 억제한다. 이러한 특이적 구체예에 따르면, 이러한 조성물은 자가면역 질환, 비 알코올성 지방간염, 지방 간, 아테롬성동맥경화증, 대사 증후군 그리고 임의의 이와 관련된 장애 예를 들면, 유형 2 당뇨병, 인슐린 저항성, 비만 및 과체중중 임의의 하나의 치료에 적용할 수 있다.
대안으로, 본 발명의 방법에 이용된 복합된 조성물은 사전-염증 Th1/Th2 면역 반응 쪽으로 Th1/Th2, Trl/Th3 세포 균형의 조절을 유도하여, 이에 의해 상기 장애에 특이적인 면역 반응을 강화시킬 수 있다. 이러한 특이적 구체예에 따르면, 이러한 조성물은 감염성 질환, 그리고 증식성 장애의 치료에 적용시킬 수 있다.
한 구체예에 따르면, 본 발명의 방법은 HCV, HBV, CMV, 및 EBV를 포함하는 바이러스 질환의 치료에 특이적으로 적용시킬 수 있다.
본 발명의 상기 방법의 추가 구체예에 있어서, 항-LPS-풍부한 면역글로블린 조제물, 또는 이를 포함하는 임의의 조성물은 경구로 또는 에어로졸과 같은 흡입에 의해, 또는 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 장관외, 경피, 질내, 비강내, 점막, 설하, 국소, 직장 또는 피하 투여, 또는 이의 임의의 조합으로 투여할 수 있다.
특히 바람직한 구체예에 따르면, 본 발명의 방법은 포유류 개체의 치료에 적합한다. 치료 목적으로 "포유동물" 또는 "포유류"는 사람, 연구용 동물, 가정 및 농장 동물, 동물원, 스포츠 또는 애완 동물, 가령, 개, 말, 소 등을 포함하는 포유동물로 분류된 동물을 말한다. 특정 구체예에서, 상기 포유류 개체는 사람이다.
"치료"는 건강에 도움이 되는 처치를 말한다. 치료를 요하는 자들은 면역-관련된 질환을 앓고 있는 포유류 개체다. "환자" 또는 "도움이 필요한 피험자"는 이러한 고통을 저지, 극복 또는 지연시키기 위하여 본 발명의 면역 조절 조성물의 투여를 원하는 임의의 포유류를 의미한다.
"유효량" 또는 "충분한 양"은 선택된 결과를 얻는데 필요한 양이다. "유효한 치료량"은 예방 또는 치료 목적과 관련된 질환의 중증도, 투여 경로 및 환자의 전반적인 상태(나이, 성별, 체중 및 의사들이 알고 있는 기타 고려사항등)에 의해 결정된다.
상기에서 나타낸 것과 같이, 일반적으로, 치료 효과를 얻는데 필요한 투약량은 환자의 나이, 성별, 체중 및 투여 방식과 같은 인자뿐만 아니라, 질환진행 정도, 관련 질환의 특정 장애에 이용되는 특정 유도체의 효능에 따라 달라질 것이다.
면역-관련된 질환 발생 위험을 저지 또는 감소시키는 것 또한 본 발명의 범위에 속한다는 것을 인지해야만 한다. 이러한 방법은 본 발명의 조성물의 예방학적으로 유효량 또는 이러한 조성물내에 포함된 활성 성분의 유효량을 질환 발생 위험에 처한 사람에게 투여하는 것을 포함할 수 있다.
"예방학적으로 유효량"은 연구원, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 조직, 시스템, 동물 또는 인간에서 예방되기를 바라는 생물학적 또는 의학적 사건의 발생 위험을 저지 또는 감소시킬 약제학적 복합 조성물의 양을 의미한다.
본 발명에서 제공되는 치료 및 예방 방법을 위하여, 상기 치료 유효량, 또는 투여량은 치료될 질환의 중증도 및 반응에 따라 달라지며, 치료 과정은 수일 또는 수개월 지속되거나, 또는 치료가 효과있거나 또는 질환 상태가 감소될 때까지 지속된다. 임의의 투약 일정은 환자 체내 약물 축적으로부터 계산할 수 있다. 당업자는 용이하게 최적 투약량, 투약 방법 및 반복률을 결정할 수 있다. 일반적으로, 투약량은 체중에 의해 계산되며, 일일 1회 이상, 주단위, 월단위 또는 년단위, 심지어 매 2 년 내지 20년 마다 제공될 수 있다. 당업계의 숙련자는 체내 유체 또는 조직에서 본 발명의 조성물의 농도 및 측정된 잔류 시간에 근거하여 투약의 반복율을 용이하게 예측할 수 있다. 성공적 치료후, 질환 상태의 재발을 방지하기 위하여 환자는 유지 요법을 받는 것이 바람직할 수 있고, 이때, 본 발명의 조성물은 유지 투여량을 일일 1회 이상 투여한다.
공개된 그리고 설명된 것과 같이, 본 발명은 특정 실시예, 방법 단계에 한정되지 않으며, 여기에서 공개된 조성물, 이러한 방법 단계 및 조성물에 다소 변화가 있을 수 있다는 것을 이해해야 한다. 또한 여기에서 사용된 용어는 특정 구체예들을 설명하기 위함이며, 이에 한정시키고자 함은 아니며, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위 및 이의 등가에 의해서만 한정될 것이다.
명세서 및 청구범위에서 사용된 것과 같이, 단수형은 내용에서 명시적으로 언급하지 않는 한, 다수의 개념을 포함한다는 것을 지적한다.
이 명세서 및 실시예 그리고 이어서 나오는 청구범위를 통하여, 다른 요구사항이 기재되지 않는 한, 용어 “포함하는(comprise)” 및 이의 변이(“comprises” 및 “comprising”)은 언급된 정수 또는 단계 또는 정수군 또는 단계들을 포함하지만, 임의의 다른 정수 또는 단계 또는 정수군 또는 단계들을 배제하지는 않는다는 것을 이해할 것이다.
다음의 실시예는 본 발명의 측면들을 실행하기 위하여 발명자들이 이용한 대표적인 기술들이다. 이들 기술들은 본 발명의 실행을 위한 바람직한 구체예의 예시이며, 당업자는 본 내용의 견지에서 본 발명의 범위 및 사상으로부터 벗어나지 않고 다양한 변형이 있을 수 있다는 것을 인지할 것이다.
실시예
다음의 실시예는 본 발명의 측면들을 실행하기 위하여 발명자들이 이용한 대표적인 기술들이다. 이들 기술들은 본 발명의 실행을 위한 바람직한 구체예의 예시이며, 당업자는 본 내용의 견지에서 본 발명의 범위 및 사상으로부터 벗어나지 않고 다양한 변형이 있을 수 있다는 것을 인지할 것이다.
실시예 1: 초유에서 유도된 항- LPS 풍부한 조제물의 준비
산물 'BioGARD'는 Anadis Limited에서 공급하는 독점적인 초유 조제물이다. 각 Anadis BioGARD 테블릿은 피복안된 1.2g 경구 테블릿으로, 여기에는 부형제와 함께 600 ㎎의 냉동-건조된 소 초유 분말 (BCP)을 포함한다. BioGARD 테블릿내 활성 물질은 영업적으로 착유하는 소치기로부터 짠 냉동-건조된 소 초유 분말 (BCP)이다. 통상의 소 병원균에 대해 백신접종을 맞은 이들 소(가축)는 인간 소화관 세균총중 주요 유기체인 대장균 세균의 다수 균주의 외측 세포 벽 항원에 대해 독점적 Anadis 백신으로 백신접종을 받았다. Anadis BCP는 새끼를 낳은 후 수거한 영리목적의 축산유의 첫 번째 젖으로부터 유도된 고단백질(>80%), 락토즈- 및 지방-감소된 천연 산물이다. 농축된, 동결 건조된 분말로 테블렛에 제공된다.
Anadis BCP는 건분말에 대략 40% 항체들 (면역글로블린)을 포함한다. BioGARD의 BCP 내의 면역글로블린은 그람-음성 세균의 리포폴리사카라이드 (LPS)에 대항하여 높은 결합 활성을 가진다. LPS의 결합은 표준화된 ELISA 및 면역-블랏팅 탐지 시스템을 이용한 Anadis에 의해 분석한다.
3마리 젖소는 LPS 항원의 혼합물로 면역화시킨다. 항원 백신을 임신 마지막 8주 동안 투여하였다. 착유 첫 2일간 초유를 수거하였다. 우유 지방을 제거하였고, 탈지 우유는 56℃에서 30분간 저온살균(pasteurized)하고, 그 다음 Hilpert, Human Milk Banking 1984에서 레넷팅(renetting)에 의해 응고시켰다. 카제인을 함유하는 응유를 제거한 후, 유장을 원심분리시켰고, 미세 침전물을 버렸다. 동량의 포화 황산암모늄 용액을 Brandon et al. [Brandon et al., Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 49:613 (1971)]에서 설명한 것과 같은 지속적으로 혼합시키면서 상층액에 서서히 첨가하였다. 원심분리 후, 생성된 침전물을 보관하고, 락토즈와 염을 포함하는 상청액은 버렸다.
침전물을 0.32M NaCl (고유 체적의 30%)을 포함하는 0.01M TRIS-HCl 완충액 pH 8에 용해시켰다. 이 용액은 Amicon 나선형 막 SIY30 카트릿지를 이용하여 동일한 완충액 5배 용적에 대해 광범위하게 투석시켰다. 그 다음 항체 용액을 10%로 농축시키고, 순간 냉동시키고, 동결 건조시켰다. ■
초유로부터 항체 단편들의 생산. Jones R.G.A. and Landon J. [Jones R.G.A. and Landon J. J. Immunol. Methods 263: 57-74 (2002)]에서 설명하는 방법들에 근거하여 변형 방법에 따라 항체 단편들을 제조한다. 간단하게 설명하면, 동량의 0.2M 아세테이트 나트륨 완충액 pH 4.0을 상기에서 설명된 것과 같이 면역화된 동물에서 얻은 초유 모듬에 첨가한다. 희석된 초유 모둠의 pH를 4.6으로 조절하였고, 카제인을 침전시키기 위하여 2시간 동안 37℃에서 항온처리하였다. 그 다음, 초유를 원심분리하고, 여과하여(0.45㎛) 카제인을 제거한다. 생성된 초유 유장의 pH를 4.0으로 조절하였고, 5.0% w/w에서 펩신(1:15,000 활성의 효소 Solution)을 첨가하였고, 45℃에서 20시간 항온처리하였다. 0.5 vol.의 1M Tris pH8을 첨가하여 펩신 절단을 중단시키고, 생성 혼합물을 4℃로 냉각시켰다. 반응물의 pH를 7.0으로 조정하고, F(ab')2 믹스는 30kD 한외여과막 및 dia-여과액 vs. >50 배 체적의 20mM 인산나트륨염/150mM NaCl pH 6.0 완충액을 이용하여 농축시켰다. 그 다음 작은 펩티드들은 제거되며, F(ab')2, 펩신 및 큰 펩티드들을 포함하는 생성 용액은 펩신 및 산성 응집물에 결합하는 Q Sepharose 음이온 교환 컬럼에 넣었다. 정제된 F(ab')2를 얻기 위하여, 남아있는 Fc와 절단안된 Ig는 단백질 G 또는 Prometic Mabsorbent AlP 크로마토그래피에 의해 F(ab')2 (남아있는 큰 펩티드와 절단안된 Ig와 혼합된)로부터 제거한다.
2- 멀캅토에틸아민 ( MEA )에 의한 Fab '의 제조. Fab′을 준비하기 위하여, 새로 만든 5mM EDTA-이나트륨을 포함하는 0.1M 인산나트륨 완충액 pH 6.0중 50㎕(1/9 vol.)의 0.1M 2-멀캅토에틸아민 (MEA)을 0.45㎖의 0.1 M 인산나트륨 완충액, pH 6.0중 0.1-3.0 ㎎의 F(ab')2 에 첨가한다. 그 다음 혼합물을 37℃에 90분간 항온처리한다. 그 다음, 반응 혼합물을 PD-10 컬럼 또는 적합한 G25 컬럼에 얹고, 과량의 MEA를 제거한다. 0.1M 인산나트륨염 (pH 6.0, 5mM EDTA-이나트륨과 함께)을 이동(running) 완충액으로 이용한다. Fab'를 포함하는 첫 번째 단백질 피크를 수거하고, 하기에서 설명하는 것과 같이 대응하는 상이한 징후를 치료하는데 이용한다.
항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물의 준비를 위하여, 대략 200 마리의 영리목적의 젖소로부터 초유를 수거하였다. 통상의 소 병원균에 대해 백신접종을 맞은 가축, 소는 인간 소화관 세균총중 주요 유기체인 대장균 세균의 다수 균주의 외측 세포 벽 항원에 대해 독점적 Anadis 백신으로 백신접종을 받았다. 수득한 초유는 테스트를 위하여 개별 주머니에 냉동시켰다. 가공을 위하여, 초유를 해동시키고, 모우고, 지방을 제거하였다. 각 배취를 저온살균하였다. 초유는 동결건조전 체적을 감소시키기 위하여 한외-여과에 의해 농축시켰다. 한외-여과 단계는 최종 분말에서 락토즈를 7%미만으로 낮춘다(약 50%에서).
실시예 2: 간염 치료에 초유에서 유도된 항- LPS 풍부한 면역글로블린 조제물의 사용
면역 매개된 간염 모델로, 11 내지 12주령의 수컷 C57/bl 마우스의 꼬리 정맥으로 간염을 유도하는 것으로 알려진 Con A (MP Biornedicals, USA)을 50mM Trig pH 7, 150mM NaCl, 4mM CaCl2에 용해시켜 마우스당 500㎍(대략 15 ㎎/kg)의 약량으로 주사하였다. 모든 테스트된 군의 동물에게 특이적 항체들의 상이한 농도의 조제물 또는 실험 과정에서 설명한 BioGARD 조제물을 경구 투여하여, 처리안된 대조군과 비교한다. 모든 테스트된 군의 동물은 다음의 매개변수에 따른다: 혈청 아스파라테이트 아미노트란스퍼라제 (AST) 및 알라닌아미노트란스퍼라제 (ALT) 수준, 간 견본의 조직학적 검사, NKT 마커에 대한 간내 그리고 비장 림프구의 FACS 분석, 혈청 사이토킨 수준의 측정 및 전사 인자들 STAT 1, 4 및 6 그리고 NFKB의 발현에 대한 웨스턴 블랏 분석, 그리고 대조군과 비교한다.
실시예 3: 항- LPS 항체들이 풍부한 초유의 경구 투여
항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물의 준비를 위하여, 대략 200 마리의 영리목적의 젖소로부터 초유를 수거하였다. 통상의 소 병원균에 대해 백신접종을 맞은 가축, 소는 인간 소화관 세균총중 주요 유기체인 대장균 세균의 다수 균주의 외측 세포 벽 항원에 대해 독점적 Anadis 백신으로 백신접종을 받았다. 수득한 초유는 테스트를 위하여 개별 주머니에 냉동시켰다. 가공을 위하여, 초유를 해동시키고, 모우고, 지방을 제거하였다. 각 배취를 저온살균하였다. 초유는 동결건조전 체적을 감소시키기 위하여 한외-여과에 의해 농축시켰다. 한외-여과 단계는 최종 분말에서 락토즈를 7%미만으로 낮춘다(약 50%에서).
초유내 LPS에 대한 고농축된 항체들(IgG 포함)을 생산하기 위하여 다수의 대장균 균주들로부터 준비한 세균성 세포벽 항원으로 임신한 소들을 백신접종하여 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 2가지 조성물을 준비하였다. 다음 실시예들에서, 이러한 조성물을‘HIBC’으로 표시한다.
초유내 LPS에 대한 고농축된 항체들(IgG 포함)을 생산하기 위하여 다수의 대장균 균주들, LPS 및 기타 표면 항원이 풍부한 백신을 임신한 소들에게 백신접종하여 제 2 조제물을 준비하였다. 그 다음 이러한 초유 조제물로부터 IgG를 정제하였다. 다음 실시예들에서, 이러한 조성물은‘T-IgG’로 나타낸다.
실험계획
군 DDW 초유 조제물 투여
A, N=10 30㎖ - PO
B, N=10 - 30㎖ PO
실험 군. 2개군의 마우스 (표 1)를 연구하였다. 마우스 (군당 10마리)에게 매일 7일간 30㎕의 물 (대조군, A군) 또는 30㎕ (대략 3㎎) 의 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물 (B군)-물에 용해시킴-을 공급(경구로)하였다. 7일 후, 마우스를 죽였다. 죽인 날, 심장 혈액을 표준 기술을 이용하여 수거하였고, 그 다음 앞으로 사용을 위하여 혈청을 수득하였다.
동물. 순수 C57Bl/6 마우스 (11-12 주령)를 이용하였다. 마우스는 were obtained from Harlan Laboratories (Jerusalem, Israel)에서 구하였고, Hadassah-Hebrew University Medical School의 Animal Core에 두었다. 마우스에게 표준 실험실용 먹이 및 물을 임의로 투여하였고, 12시간 주기의 명/암을 유지시켰다. 실험실 동물의 취급 및 사용에 관한 Hebrew University-Hadassah Institutional Committee의 지침에 따라, 그리고 위원회의 승인에 의해 동물 실험을 실행하였다.
간: 간을 수거한 후, 냉각 PBS로 옮기고, 절단하고, 다지고, 그리고 dounce 균질화기를 이용하여 9㎖의 멸균 냉각 용해 완충액 1로 균질화시키고, 에펜도르프 튜브에 나눠넣고(각 튜브에 1.5㎖ 씩), 30분간 얼음위에 두고, 초음파분쇄(25초씩 5회)하고, 원심분리(4℃, 14,000 RPM, 15분)하였다. 상청액을 얼음위에서 수거하고, Bradford 기술을 이용하여 단백질 정량화를 위하여 샘플을 취하고, -20℃에 보관한다.
비장. 잘라낸 후, 비장을 RPMI 1640 배지에서 세포 해리 그리드(60 mesh)에서 잘게 부수고, 원심분리하고(4°C, 1,400 RPM, 10분간) 그리고 상청액은 버린다; 적혈 세포는 1㎖의 냉각 RBC 용해 완충액 (155mM 염화 암모니움)을 첨가하여 용해시키고, 냉각 PBS로 3회 헹군 후, 원심분리시킨다.
비장의 세포질 분획물의 준비. 냉각 완충액 1을 비장 세포 펠렛(완충액 대 펠렛의 비율은 6:1)에 첨가하고, 세포를 2㎖ 바이알에 나누어 넣고, 30분간 얼음위에 두고, 5회 초음파분쇄(매 25초)하고, 그리고 원심분리(4°C, 14,000 RPM, 15분)하고; 모든 바이알로부터 상청액을 수거하고, 단백질 정량화를 위하여 샘플링하고, -20℃에 유지시킨다.
비장의 막 분획물의 준비. 세포질 분획화의 상기 언급한 원심분리 단계로부터 남아있는 펠렛에 100-250 ㎖의 완충액를 첨가하고, 4℃에서 30분간 교반시키고, 원심분리한다(4°C, 14,000 RPM, 15분). 모든 바이알로부터 상청액을 수거하고, 단백질 정량화를 위하여 샘플링하고, -20℃에 유지시킨다.
T 세포 하위집단을 결정하기 위하여 비장 및 간 림프구의 단리. 상이한 실험 모델의 마우스를 지정된 날에 죽인다. 비장 림프구와 NKT 세포를 단리하고, 적혈구 세포를 제거한다. 간내 림프구는 다음과 같이 단리한다: 횡경막위 하위 대정맥을 절단한 후, 간의 색이 옅어질 때까지 냉각 PBS를 붇고, 연결조직 및 담낭을 제거한다. 간과 비장은 RPMI-1640 + FCS에 유지시켰다. 그 다음 비장을 70㎛ 나일론 세포 여과기(strainer) (Falcon)를 통하여 눌러 부수고, 세포 찌꺼기를 제거하기 위하여 원심분리(1250 rpm, 7분)한다. 적혈구 세포는 1㎖의 냉각 155mM 염화암모늄 용해 완충액으로 용해시키고, 바로 원심분리시킨다(1250 rpm, 3분). 그다음 비장세포를 세척하였고, 1㎖ RPMI + FCS에 재현탁시켰다. 남아있는 연결조직을 제거하였다. 트립판 블루 착색에 의한 생존능은 90%이상이었다. 간내 림프구의 경우, 간을 우선 스테인레스 메쉬(크기 60, Sigma)를 통하여 잘게 부수고, 세포 현탁액을 5분간 50㎖ 튜브에 넣어, 세포 찌거기가 가라앉도록 하였다. 10㎖의 Lymphoprep (Ficoll, Axis-Shield PoC AS, Oslo, Norway)를 50㎖ 튜브내 동일한 용적의 세포 현탁액에 서서히 넣었다. 그 다음 튜브를 18분간 1800 rpm에서 원심분리하였다. 경계면에 있는 세포를 수거하고, 새로운 튜브로 옮기고, 다시 10분간 1800 rpm에서 원심분리하여, 최종 용적이 250㎕의 간세포가 없는 세포 펠렛을 수득하였다. 마우스 한 마리 간으로부터 대략 1x106 세포를 회수하였다. 세포 생존능은 트립판 블루 착색으로 탐지하였다.
지방세포들의 단리. 지방 조직 (내장 지방 패드)를 잘게 저미고, 10 mM 포도당 및 2.5% 소 혈청 알부민을 포함하는 Krebs- Ringer 중탄산염 완충액 (3 mL/g 지방 조직)에서 840 U/g 콜라게나제 유형 I (Sigma, Rehovot, Israel)과 함께, 37℃에서 1시간 동안 부드럽게 교반시키면서 항온처리하였다. 그 다음 시폰 메쉬(100 ㎛)를 통하여 2차례 여과시키고, 5분간 50xg에서 원심분리시켰다. 그 다음, 기질 맥관구조 (SV) 분획물의 펠렛으로부터 부유하는 지방세포들를 분리하였다. 하위 분획물을 제거하였고, SV 세포를 펠렛화하기 위하여 5분간 200xg에서 원심분리하였다. 그 다음 세포 수를 카운트하였다.
림프구의 상이한 하위 부분을 결정하기 위한 유동 세포계측 분석( FACS ). 혈액, 비장 또는 임의의 장기로부터 림프구 단리 후, 2-5× 105 세포/500㎕ PBS의 3벌을 Falcon 2052 튜브에 넣고, 10분간 4㎖의 1% BSA와 항온처리하고, 5분간 1400 rpm에서 원심분리하였다. 세포를 다음의 림프구 표식에 대해 1:20 라벨된(FITC, APC 또는 PE-라벨된) 1차 항체와 함께 10㎕ FCS에서 재현탁시켰다: CD3, CD4, CD8, NKl.1, CD25, FOX p3, LAP 세포, IL-17, Annexiin 그리고 T 세포활성화에 대한 표면 마커. 세포-항체 혼합물은 30분간 매 10분씩 혼합한다. 세포는 각각 항-CD3 및 항-CD4, 항-CD8, 그리고 항-NKl.l를 이용하여 단리한다. 세포를 1% BSA에서 2차례 세척하고, 판독할 때까지 4℃에서 유지시킨다. 대조군의 경우, 5㎕의 1% BSA만을 첨가한다. 세포를 항체들과 항-CD 16/32 (blocks Fc, eBioscience)와 함께 PBS 및 0.5% BSA를 포함하는 FACS 완충액에서 4℃에서 30분간 항온처리하여 표면 착색을 실행하였다. 세포를 FACS 완충액으로 추가 2차례 더 세척하고, FACS 완충액에 재현탁시키고, 유동세포계측기로 분석하였다. 각 군으로부터 1× 104개 세포에서 형광-활성화된 세포 분석기(FACStar Plus, Becton Dickinson)를 이용하여 분석용 세포 분류를 실행한다. 모든 실험에서 적합한 이소타입 기준을 이용하였다. FACSCalibur 기구(Becton Dickinson, San Jose, CA)를 이용하여 분석을 실행하였다. 살아있는 세포만을 카운트하였고, 비-항체-처리된 림프구로부터 배경 형광은 배제하였다. 죽은 세포 및 적혈구세포를 배제하기 위하여 전방 및 측면 범위에 게이트를 두었다. Consort 30 2색 윤곽 플랏을 이용하여 (Becton Dickinson, Oxnard, CA, USA) 또는 Cell Quest 프로그램을 이용하여 데이터를 분석하였다.
NKT 림프구 비율의 결정을 위한 FACS 분석. 림프구 단리후 즉시, 2-5× 104 세포/500㎕ PBS의 3벌을 Falcon 2052 튜브에 넣고, 10분간 4㎖의 1% BSA와 항온처리하고, 5분간 350g에서 원심분리하였다. NKT 림프구 비율을 결정하기 위하여, 항-CD3 및 항-DX5 항체들을 이용한다(Pharmingen, USA). 각 군으로부터 1× 104개 세포에서 형광-활성화된 세포 분석기(FACStar Plus, Becton Dickinson)를 이용하여 분석용 세포 분류를 실행한다. 살아있는 세포만을 카운트하였고, 비-항체-처리된 림프구로부터 배경 형광은 제하였다. 죽은 세포 및 적혈구세포를 배제하기 위하여 전방 및 측면 범위에 게이트를 두었다. Consort 30 2색 윤곽 플랏을 이용하여 (Becton Dickinson, Oxnard, CA) 또는 Cell Quest 프로그램을 이용하여 데이터를 분석하였다.
NKT 림프구의 단리. 세포 단리는 자석 세포 분류기(MACS, Miltenyi Biotec, Germany)를 이용하여 제조업자의 지시에 따라 실시한다. NKT 림프구 단리를 위하여 항-CD 3 및 항-DX5 자석 비드를 이용한다. 비드는 제조업자의 지시에 따라 두 단계 사이에서 제거한다. 세포의 FACS 분석은 95% 이상의 정확도를 얻는다.
간세포 손상. 혈청 아스파르트 트란스아미나제 (AST) 및 알라닌아미노트란스퍼라제 (ALT) 활성을 이용하여 간 손상을 평가하는데, 자동 분석기를 통하여 결정된다.
측정. 다음 변수들을 측정하였다: 혈액 포도당, 총 콜레스테롤 및 트리글리세리드. 혈액 포도당 값은 표준 혈당측정기(glucometer)로 측정하였다. 혈장 트리글리세리드 및 전체 콜레스테롤 값은 임상 화학 분석기 Reflovet Plus 기계(Roche Diagnostics, GmbH, Mannheim, Germany)를 이용하여 측정하였다.
포도당 내성 테스트. 마우스는 30일 시점에 하룻밤 금식 후 포도당 내성 테스트(GTT)를 받았다. 포도당을 경구로 투여하였다(1.25 g per kg). 혈청 포도당 측정은 3시간 동안 매 15분마다 꼬리-정맥 혈액으로 실행하였다. 표준 포도당측정기를 이용하여 포도당 수준을 측정하였다.
아침 포도당 수준. 휴식 후(금식없음) 연구 군에서 아침 포도당 수준을 평가하였다.
사이토킨 측정. 시판하는 키트(Quantikine, R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 "샌드위치" ELISA에 의해, 혈청에서 IFN-γ 및 TGF-β 수준을 측정하였다. 또한, 혈청 인슐린은 Mercodia AB (Uppsala, Sweden)의 시판되는 키트를 이용하여 제조업자의 지시에 따라 "샌드위치" ELISA에 의해 결정하였다.
통계. unpaired, two-tailed Student's t test를 이용하여 통계학적 유의성을 결정하였고, p < 0.05의 값만을 나타낸다.
트리글리세리드 측정. 지정한 날에, 분광광도계 (Cobas DP-25P)를 이용하여 혈청 트리글리세리드 수준을 측정한다.
간 지방간염 수치. 각 마우스의 간 분절은 10% 포름알데히드에 고정시키고, 조직 분석을 위하여 파라핀에 박아두었다. 5개 단편(5㎛)은 헤마토실린/에오신으로 착색하고, 블라인드 방식으로 2명의 병리학자가 검사하였다. 지방간염 등급 시스템을 이용하여 조직학적 검사 및 지방간염 등급 수치(NASH 수치)를 실행한다.
조직학적 검사. 파라핀에 박아둔 간 분절의 헤마토실린/에오신 착색을 실행한다. 실험조건에 대해 모르고 있는 2명의 유경험 병리학자(VD, YS)가 단편들을 검사한다.
실시예 4: 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 간 효소를 감소시킨다.
발명자들은 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 경구로 투여받은 동물의 간 효소 수준(간 손상을 나타내는)이 치료로 인하여 개선되었는지를 평가하였다. 아스파르틸 트란스아미나제 (AST) 및 알라닌아미노트란스퍼라제 (ALT) 활성 수준은 임상 화학 분석기, Reflovet Plus (Roche Diagnostics, GmbH, Mannheim, Germany)를 이용하여 결정하였다. 도 1은 A군 대 B군에서 AST가 유의적으로 감소되었음을 설명한다(* p<0.001). 이는 대조군과 비교하여 ALT 및 AST 혈청 수준의 명백한 그리고 유의적인 감소로 명백하게 나타난 것과 같이, 간 손상의 개선을 설명한다.
실시예 5. 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 경구 조제물은 간에서 CD4 + CD25 + 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
간내 림프구의 단리. 마우스를 죽인 후 다음과 같이 간내 림프구를 단리하였다: 간을 제거한 후, 이를 배지(RPMI-1640+FCS)에 유지시킨다. 그 다음, 간을 스테인레스 메쉬(크기 60, Sigma)를 통하여 잘게 부수고, 세포 현탁액을 5분간 50㎖ 튜브에 넣어두었다. 10㎖의 Lymphoprep (Ficoll, Axis-Shield PoC AS, Oslo, Norway)를 50㎖ 튜브내 유사한 용적의 세포 현탁액에 넣었다. 튜브를 18분간 1800 rpm에서 원심분리하였다. 경계면에 있는 세포를 수거하고, 10분간 1800 rpm에서 원심분리하여, 최종 용적이 250㎕의 간세포가 없는 세포 펠렛을 수득하였다. 마우스 한 마리 간으로부터 대략 1x106 세포를 회수하였고, 유동세포계측으로 분석하였다.
유동세포계측( Flow Cytometry ). 세포의 표면 2 내지 3가지 색 착색은 다음의 표면 항체로 실행하였다: 항-CD4-FITC 및 항-CD25-PE. (항체들은 eBioscience, San Diego, CA로부터 구입하였다). 표면 착색은 항체들과 항-CD16/32 (blocks Fc, eBioscience) 과 함께 새로 단리된 세포를 PBS 및 0.5% BSA을 포함하는 FACS 완충액에서 4℃, 30분한 항온처리하여 실행하였다. 세포를 FACS 완충액으로 2회 세척하였고, FACS 완충액에 재현탁시키고, 유동세포계측으로 분석하였다. 모든 실험에서 적절한 이소타입 대조군을 이용하였다. FACSCalibur 기구(Becton Dickinson, San Jose, CA)와 FCS express V.3 소프트웨어 (DeNovo software, Los Angeles, CA)를 이용하여 분석을 실행하였다.
통계학적 분석. student t test를 이용하여 통계학적 분석을 실행하였다. P≤0.05는 유의적인 것으로 간주하였다.
간에서 조절 T 세포의 증가 특이성을 결정하기 위하여, 간 림프구상에 표식(CD4+CD25+)의 평균 표면 발현은 3.0 ㎎ 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물로 처리된 모든 마우스에서 7일 시점(희생되던 날) 유동세포계측기를 이용하여 측정하였다. 도 2A는 간에서 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다는 것을 설명한다. 게이트(Gating)는 CD4에 있었고, 값은 평균 ± SD이다.
도 2B는 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물로 처리된 마우스(B 군) 또는 처리안된 대조군(A 군)의 간으로부터 단리된 림프구에서 실행된 FACS로부터 유도된 대표적인 도트 블랏을 나타내는데, 이는 경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 간에서 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다는 것을 보여준다.
실시예 6: 경구 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 간에서 CD25 + CD4 + LAP -, CD45+LAP+ 및 CD3 + LAP + 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
상기에서 설명된 것과 같이, 간내 림프구의 단리 및 FACS 분석을 실행하였다.
유동세포계측( Flow Cytometry ). LAP 착색을 위하여, 다음 항체들을 이용하였다: 항-CD3-Alexa-fluor 405, 항-CD45-PerCP-Cy5.5 및 항-LAP-APC. 친화력-정제된 바이오티닐화된 염소 항-LAP 특이적 다클론 항체는 R&D Systems (Minneapolis, MN, USA)으로부터 구입하였고, 그리고 스트렙타아비딘-APC을 바이오티닐화된 1차 항체 (R&D)를 탐지하는 2차 시약을 이용하였다. LAP 착색을 위하여, 세포를 20분간 LAP/기준 항체로 사전-항온처리하였고, 그리고 CD3-Alexa-fluor 405 또는 CD45-PerCP-Cy5.5로 착색하였고, 스트렙타아비딘-APC 착색하였다.
경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물이 Tregs를 촉진시키는 지를 결정하기 위하여, 발명자들은 조절 T 세포의 조직 유도된 하위집단상에 경구 투여 효과를 검사하였다. 도 3은 3.0 ㎎으로 치료된 모든 마우스에서 7일 시점(희생된 날)에 유동세포계측을 이용하여 측정된 간 림프구에서 표식 (CD25+CD4+LAP-, CD45+LAP+ 및 CD3+LAP+)의 평균 표면 발현을 나타낸다. 값은 평균이다. 도 3A 및 B는 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구투여는 간에서 CD25+CD4+LAP-, CD45+LAP+ 및 CD3+LAP+ 조절 T 세포의 하위부분을 증가시켰다는 것을 설명한다.
실시예 7: 경구 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 비장에서 CD45 + LAP + 및 CD8+LAP+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물이 Tregs를 촉진시키는 지를 결정하기 위하여, 발명자들은 비장에서 조절 T 세포의 조직 유도된 하위집단상에 경구 투여 효과를 검사하였다. 도 4는 3.0 ㎎으로 치료된 모든 마우스에서 7일 시점(희생된 날)에 유동세포계측을 이용하여 측정된 비장 림프구에서 표식 (CD45+LAP+ 및 CD8+LAP+)의 평균 표면 발현을 나타낸다. 값은 평균이다. 도 4A와 B는 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 비장에서 CD45+LAP+ 및 CD8+LAP+ 조절 T 세포의 하위집단을 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 8: Ob / Ob 마우스에게 항- LPS 항체가 풍부한 초유의 경구 투여
실험 계획
군 PBS T- IgG HIBC
A N=4 30 - -
B N=4 - 100㎎/㎖ -
C N=4 - - 100㎎/㎖
실험 군. 3개 군의 마우스 (표 2)를 연구하였다. Ob/Ob 마우스 (군당 4마리)에게 30㎕ PBS (대조군, A군) 또는 30㎕ (=100㎍)의 T-IgG 초유 (B 군)-물에 용해됨-와 함께, 또는 30㎕ (=100㎍)의 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물 (C군)를 25일간(주당 5일)매일 공급하였다(PO). 4주 후, 마우스를 희생시켰다. 희생되건 날, 심장 혈액은 표준 기술을 이용하여 수집하였고, 그 다음 혈청을 수득하였다.
동물. Ob/Ob 모델을 위하여, 우리는 Harlan Laboratories (USA)에서 구입한 어린(6-7주령) 수컷 C57BL/6 Ob/Ob 마우스를 이용하였다. 모든 마우스는 Hadassah-Hebrew University Medical School의 Animal Core에 유지시켰다. 마우스에게 표준 실험실용 먹이와 물을 임의로 투여하겼고, 12시간의 명암 주기를 유지시켰다. 실험실 동물의 취급 및 사용에 관한 Hebrew University-Hadassah Institutional Committee의 지침에 따라, 그리고 위원회의 승인에 의해 동물 실험을 실행하였다.
실시예 9: 경구 T- IgG 는 Ob / Ob 마우스에서 혈청 인슐린을 감소시킨다.
경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 효과를 더 평가하기 위하여, 4주의 T-IgG 또는 HIBC를 경구 투여한 후 A-C 군의 마우스에서 금식 후 혈청 인슐린의 수준을 결정하였다. 혈청 인슐린은 시판되는 Mercodia AB (Uppsala, Sweden)를 이용하여 제조업자의 지시에 따라 “샌드위치” ELISA에 의해 측정하였다. 30일 시점에 Ob/Ob 마우스를 희생시킨 후, 마우스로부터 혈청을 수거하였다. 도 5는 T-IgG가 투여된 마우스는 혈청 인슐린 수준의 감소를 나타낸다고 설명하며, 이는 인슐린 저항성에서 항-LPS 항체들의 유익한 효과를 나타낸다. 더욱이,관찰된 감소는 대사 효과에 초유에서 유도된 어쥬번트에 있어서 중요한 역할을 뒷받침하는 데이터를 제공한다.
실시예 10: 경구 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 Ob / Ob 마우스에서 포도당 내성을 감소시킨다.
경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물이 혈청 포도당 수준을 감소시킬 수 있는 지를 검사하기 위하여, Ob/Ob 마우스는 30일 시점에서 하룻밤 금식후에 포도당 내성 테스트(GTT)를 받았다. 포도당을 경구로 투여하였다(1.25g per kg). 혈청 포도당 측정은 3시간 동안 매 15분마다 꼬리-정맥 혈액으로 실시하였다. 표준 혈당측정기를 이용하여 포도당 수준을 측정하였다.
도 6에서 볼 수 있는 것과 같이, HIBC가 투여된 마우스는 대조군과 비교하였을 때 곡선 아래 면적의 감소로 포도당 내성 테스트에서 포도당 값이 낮아져 포도당 내성이 개선되었다. 이와 함께, 실시예 9 및 10에서 얻은 데이터는 본 발명에 따른 HIBC가 대사 증후군의 개선에 중요하다는 것을 뒷받침한다.
실시예 11. 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 Ob / Ob 마우스에서 간손상을 감소시킨다.
본 발명자들은 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물이 포도당 내성을 감소시키고, 그리고 혈청 인슐린을 감소시키는 것과 같이 다양한 대사 증후군 표식들을 개선시키는 것으로 보여주었고, 그 다음 제조물이 투여된 동물의 간 손상을 나타내는 간 효소 수준이 치료로 인하여 개선되었는 지를 평가하였다. AST 및 ALT 활성 수준은 임상 화학 분석기, Reflovet Plus (Roche Diagnostics, GmbH, Mannheim, Germany)에 의해 결정되었다. 도 7은 T-IgG-초유-처리된 마우스에서 AST 및 ALT 수준이 감소됨을 설명한다.
실시예 12. 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 Ob / Ob 마우스에서 간 TGs 를 감소시킨다.
항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여가 다양한 대사 증후군 표식을 개선시켰음을 보여주었고, 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물 및 T-IgG 초유의 간성 트리글리세리드 축적에 대한 효과는 연구 종료시에 마우스를 희생시킨 후 결정하였다. 간내에서 세포내 트리글리세리드(TGs)의 축적은 Folch 방법의 변형을 이용하여 정량화하였다. 순간-냉동된 간의 소량으로부터 TGs를 추출하였고, GPO-Trinder 키트(Sigma, Rehovot, Israel)를 이용하여 분광광학적으로 분석하고, 균질화물내 단백질 함량에 대해 표준화시켰다. 모든 처리군과 대조군에서 간 트리글리세리드 함량을 계산하였다.
도 8은 대조군의 마우스와 비교하였을 때, 경구 투여 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 간성 트리글리세리드 함량을 감소시켰다는 것을 설명한다. 이러한 감소는 대조군에 비해 HIBC에 대해 유의적이었다(* P<0.04).
실시예 13. 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 비장내에서 CD3+LAP+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물이 Tregs을 촉진시키는 지를 결정하기 위하여, 발명자들은 비장내에서 조절 T 세포의 조직 유도된 하위집단에서 경구 투여 효과를 검사하였다. 도 9는 모든 Ob/Ob 마우스내에서 25일째(마우스 희생일) 유동세포계측기를 이용하여 측정된 비장 림프구상에 표식(CD3+LAP+)의 평균 표면 발현을 나타낸다. 값은 평균 ± SD이다. 도 9A 및 B는 T-IgG의 경구 투여가 비장내에서 CD3+LAP+ 조절 T 세포의 하위부류를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 14. 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 경구 투여는 비장내에서 CD8+CD25+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물이 Tregs을 촉진시키는 지를 결정하기 위하여, 발명자들은 비장내에서 조절 T 세포의 조직 유도된 하위부류에 경구 투여의 효과를 검사하였다. 상기에서 설명된 것과 같이, 비장 림프구의 단리, 유동세포계측 과정, 분석 및 착색 항체를 실시하였다. 도 10 및 11은 모든 Ob/Ob 마우스내에서 25일째(마우스 희생일) 유동세포계측기를 이용하여 측정된 비장 림프구상에 표식(CD8+CD25+)의 평균 표면 발현을 나타낸다. 값은 평균 ± SD이다.
도 10과 11은 T-IgG의 경구 투여가 비장내에서 CD8+CD25+ 조절 T 세포의 하위부류를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 15. 경구 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 지방 조직내에서 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물이 지방조직에서 Tregs을 촉진시키는 지를 결정하기 위하여, 발명자들은 조절 T 세포의 조직 유도된 하위부류에 경구 투여의 효과를 검사하였다. 지방 조직으로부터 단리된 림프구에서 FACS 분석을 실행하였다. 지방 조직은 Ob/Ob 마우스를 희생시킨 직후 마우스로부터 단리되었다. 조직(내장 비장 패드)를 미세 조각으로 다졌다. 다져진 시료를 10mM 포도당 및 2.5% 소 혈청 알부민을 포함하는 Krebs-Ringer 중탄산염 완충액 (3 mL/g 지방 조직)에 두고, 37℃에서 1시간 동안 840 U/g 콜라게나제 유형 I(Sigma, Rehovot, Israel)과 함께 항온처리하였다. 세포를 쉬폰 메쉬(100㎛)를 통하여 2회 여과시켰고, 5분간 50g에서 원심분리하였다. 부유 지방세포들을 펠렛화된 지방 조직-관련된 기질-혈관(S/V) 세포로부터 분리하였다: 하층수(infranatant) 분획물을 제거하고 5분간 200g에서 원심분리하여 S/V 세포를 펠렛화시켰다. 도 12A 및 12B는 모든 Ob/Ob 마우스에서 25일 시점(마우스 희생일)에 유동세포계측기를 이용하여 측정된 지방 조직 림프구상에서 표식들(CD4+CD25+)의 평균 표면 발현을 나타낸다.
도 12는 T-IgG의 경구 투여가 지방 조직내에서 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 하위 부류를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 16. 경구 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 지방 조직내에서 CD3 + LAP + 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물이 지방조직에서 Tregs을 촉진시키는 지를 결정하기 위하여, 발명자들은 조절 T 세포의 조직 유도된 하위부류에 경구 투여의 효과를 검사하였다. 상기에서 설명된 방법으로 지방 조직으로부터 단리된 림프구에서 FACS 분석을 실행하였다. 도 13A 및 13B는 모든 Ob/Ob 마우스에서 25일 시점(마우스 희생일)에 유동세포계측기를 이용하여 측정된 지방 조직 림프구상에서 표식들(CD3+LAP+)의 평균 표면 발현을 나타낸다.
도 13은 T-IgG의 경구 투여가 지방 조직내에서 CD3+LAP+ 조절 T 세포의 하위 부류를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 17: 경구 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물은 기질 혈관세포 (사전지방세포( preadipocytes )들을 포함하는)내에서 CD4 + CD25 + 조절 T 세포의 발현을 증가시킨다.
경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물이 지방조직에서 Tregs을 촉진시키는 지를 결정하기 위하여, 발명자들은 조절 T 세포의 조직 유도된 하위부류에 경구 투여의 효과를 검사하였다. 상기에서 설명된 방법으로 단리된 사전지방세포들을 포함하는 기질 혈관세포로부터 단리된 림프구에서 FACS 분석을 실행하였다.
도 14A 및 14B는 모든 Ob/Ob 마우스에서 25일 시점(마우스 희생일)에 유동세포계측기를 이용하여 측정된 지방 조직 림프구상에서 표식들(CD4+CD25+)의 평균 표면 발현을 나타낸다.
도 14는 T-IgG의 경구 투여는 사전비장세포들을 포함하는 기질 혈관세포내에서 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 하위부류를 증가시킨다는 것을 설명한다.
이러한 세포 집단을 더 조사하기 위하여, 기질 혈관세포로부터 단리된 림프구 상에서 FACS 분석을 실행하여, (모든 Ob/Ob 마우스에서 25일 시점-마우스 희생일에) 표식(CD4+CD25+LAP+ )의 발현을 검사하였다.
도 15A 및 15B는 모든 Ob/Ob 마우스에서 25일 시점(마우스 희생일)에 유동세포계측기를 이용하여 측정된 지방 조직 림프구상에서 표식(CD4+CD25+LAP+)의 평균 표면 발현을 나타낸다.
도 15는 T-IgG의 경구 투여는 사전지방세포들을 포함하는 기질 혈관세포내에서 CD4+CD25+ 조절 T 세포의 하위부류를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 18: Ob / Ob 마우스에서 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 투약량 연구
실험 계획
Group PBS T- IgG T- IgG T- IgG T- IgG HIBC
A
N=5		 30㎕ - - - - -
B
N=5		 - 1㎍ - - - -
C
N=5		 - - 100㎍ - - -
D
N=5		 - - - 1㎎ - -
E
N=5		 - - - - 3㎎ -
F
N=5		 - - - - - 100㎎
실험 군: 마우스 6군(표 3)을 연구하였다. Ob/Ob 마우스 (군당 5마리)에게 25일간(주당 5일) 매일 30㎕의 PBS (대조군, A군) 또는 30㎕ (=1㎍)의 T-IgG 초유 (B 군), 또는 30㎕ (=100㎍)의 T-IgG 초유 (C군) 또는 30㎕ (=1㎎)의 T-IgG 초유 (D군) 또는 30㎕ (=3㎎)의 T-IgG 초유 (E군) 또는 30㎕(=100㎍)의 HIBC 초유 (F군)을 PO로 공급하였다. 모든 초유 조제물은 물에 용해시켰다.
4주후 마우스를 희생시켰다. 희생되던 날, 표준 기술을 이용하여 심장 혈액을 수거하였고, 그 다음 추가 목적으로 위하여 혈청을 수거하였다.
동물. Ob/Ob 모델을 위하여, 우리는 Harlan Laboratories (USA)에서 구입한 어린(6-7주령) 수컷 C57BL/6 Ob/Ob 마우스를 이용하였다. 모든 마우스는 Hadassah-Hebrew University Medical School의 Animal Core에 유지시켰다. 마우스에게 표준 실험실용 먹이와 물을 임의로 투여하겼고, 12시간의 명암 주기를 유지시켰다. 실험실 동물의 취급 및 사용에 관한 Hebrew University-Hadassah Institutional Committee의 지침에 따라, 그리고 위원회의 승인에 의해 동물 실험을 실행하였다.
실시예 19: 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린의 경구 투여는 Ob / Ob 마우스에서 간 효소를 감소시킨다.
상기에서 설명된 것과 같이, AST 및 ALT 활성 수준은 임상 화학 분석기를 이용하여 결정하였다. 도 16은 1㎎의 T-IgG가 간 효소를 감소시키는데 가장 유효한 투약량이라는 것을 설명한다.
실시예 20: 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린의 경구 투여는 Ob/Ob 마우스에서 총 콜레스테롤을 감소시킨다.
혈장 트리글리세리드 및 총 콜레스테롤은 상기에서 설명된 것과 같이, 임상 화학 분석기, Reflovet Plus (Roche Diagnostics, GmbH, Mannheim, Germany)를 이용하여 결정하였다. 도 17은 100㎍의 T-IgG가 총 콜레스테롤을 감소시키는데 가장 유효한 투약량이라는 것을 설명한다.
실시예 21: 항- LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린의 경구 투여는 Ob / Ob 마우스에서 간 TGs 를 감소시킨다.
간내에서 세포내 트리글리세리드(TGs)의 축적은 Folch 방법의 변형을 이용하여 정량화하였다. 순간-냉동된 간의 소량으로부터 TGs를 추출하였고, GPO-Trinder 키트(Sigma, Rehovot, Israel)를 이용하여 분광광학적으로 분석하고, 균질화물내 단백질 함량에 대해 표준화시켰다.
도 18은 간 트리글리세리드의 감소에 있어서 1㎎, 3㎎ 및 100㎍의 T-IgG가 가장 유효한 투약량이라는 것을 설명한다. 감소는 A군에 대해 D, E, F군에서 통계학적으로 유의적이었다(* p<0.05).
실시예 22: 100㎍의 HIBC 와 함께 1㎍, 1㎎, 3㎎의 T- IgG 의 경구 투여는 Ob / Ob 마우스의 간에서 CD3+NK1.1+ 세포를 감소시켰다.
Ob/Ob 마우스의 간으로부터 단리된 림프구상에서 FACS 분석을 실행하였다. 모든 Ob/Ob 마우스에서 25일째(희생일) 유동세포계측기를 이용하여 간성 림프구 상에서 표식 (CD3+NK1.1+)의 평균 발현을 측정하였다. 유동세포계측을 위하여 다음의 항체들을 이용하였다: 항-CD3-FITC 및 항-NK1.1-PE. 상기에서 설명된 것과 같이, 표면 착색 및 FACS 분석을 실행하였다.
도 19A는 100㎍의 HIBC와 함께 1㎍, 1㎎, 3㎎의 T-IgG의 경구 투여는 Ob/Ob 마우스의 간에서 CD3+NK1.1+ 세포를 감소시켰다는 것을 설명한다. 더욱이, 도 19B는 1㎍ 및 100㎍의 T-IgG의 경구 투여는 Ob/Ob 마우스의 간에서 CD3+NK1.1+ 세포를 감소시켰다는 것을 설명한다.
실시예 23: T- IgG 및 HIBC 초유의 경구 투여는 Ob / Ob 마우스의 간에서 CD4 + CD25 + LAP -/ LAP + 세포를 증가시킨다.
경구 항-LPS 풍부한 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물이 간에서 Tregs을 촉진시키는 지를 결정하기 위하여, 발명자들은 조절 T 세포의 조직 유도된 하위부류에 경구 투여의 효과를 검사하였다. 상기에서 설명된 방법으로 간으로부터 단리된 림프구에서 FACS 분석을 실행하였다. FACS 분석은 Ob/Ob 마우스의 간으로부터 단리된 림프구에서 실행하였다. 도 20은 모든 Ob/Ob 마우스에서 25일째(희생일) 표식(간성 림프구상에서 유동세포계측기를 이용하여 측정됨)의 발현 평균을 나타낸다.
도 20A는 T-IgG 및 HIBC 초유의 경구 투여는 Ob/Ob 마우스의 간에서 CD4+CD25+LAP-/LAP+ 세포를 증가시킨다는 것을 설명한다. 도 20B는 100 ㎍의 HIBC 초유의 경구 투여는 Ob/Ob 마우스의 간에서 CD4+CD25+LAP+ 세포를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 24: T- IgG 및 HIBC -초유의 경구 투여는 CD25 + LAP - 간성 림프구의 변화를 유도한다.
도 21은 100㎍의 HIBC와 함께 1㎍, 1㎎, 3㎎의 T-IgG의 경구 투여는 Ob/Ob 마우스의 간에서 CD25+LAP- 림프구에서 변화를 유도한다는 것을 설명한다.
실시예 25: T- IgG 및 HIBC -초유의 경구 투여는 CD25 + LAP + 비장 림프구의 변화를 유도한다.
도 22A는 T-IgG 및 HIBC-초유의 경구 투여는 CD25+LAP- 비장 림프구의 변화를 유도한다는 것을 설명한다. 도 22B는 T-IgG-초유의 경구 투여는 CD25+LAP+ 비장 림프구를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 26: 1㎎ 및 3㎎의 T- IgG 와 100㎍의 HIBC -초유의 경구 투여는 CD4 + CD25 + LAP - 비장 림프구를 증가시킨다.
Ob/Ob 마우스의 간으로부터 단리된 림프구에서 FACS 분석을 실행하였다. 도 23은 모든 Ob/Ob 마우스에서 25일째(희생일) 유동세포계측기를 이용하여 측정된 비장 림프구상에서 표식(CD4+CD25+LAP-)의 발현 평균을 나타낸다. 도 23은 1㎎ 및 3㎎의 T-IgG와 100㎍의 HIBC-초유의 경구 투여는 CD4+CD25+LAP- 비장 림프구를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 27: T- IgG -초유의 경구 투여는 지방 조직내에서 CD4 + CD25 +을 증가시킨다.
상기에서 설명된 것과 같이, Ob/Ob 마우스의 지방 조직으로부터 단리된 림프구에서 FACS 분석을 실행하였다. 도 24는 모든 Ob/Ob 마우스에서 25일째(희생일) 유동세포계측기를 이용하여 측정된 지방 세포상에서 표식(CD4+CD25+)의 발현 평균을 나타낸다. 도 24는 T-IgG-초유의 경구 투여는 지방 조직내에서 CD4+CD25+을 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 28: 100㎍의 T- IgG -초유의 경구 투여는 지방 세포들내에서 CD4 + CD25 +를 증가시킨다.
상기에서 설명된 것과 같이, Ob/Ob 마우스의 지방 조직으로부터 지방 세포들에서 FACS 분석을 실행하였다. 도 25A는 모든 Ob/Ob 마우스에서 25일째(희생일) 유동세포계측기를 이용하여 측정된 지방 세포상에서 표식(CD4+CD25+)의 발현 평균을 나타낸다.
도 25A는 100㎍의 T-IgG-초유의 투여는 지방 세포들내에서 CD4+CD25+를 증가시킨다는 것을 설명한다. 도 25B는 100㎍의 T-IgG-초유의 경구 투여는 지방 세포들내에서 CD4+CD25+를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 29: T- IgG -초유의 경구 투여는 지방 세포들내에서 CD3 + LAP +를 증가시킨다.
상기에서 설명된 것과 같이, Ob/Ob 마우스의 지방 조직으로부터 지방 세포들에서 FACS 분석을 실행하였다. 도 26은 모든 Ob/Ob 마우스에서 25일째(희생일) 유동세포계측기를 이용하여 지방 세포상에서 표식(CD3+LAP+)의 발현 평균을 측정하였다는 것을 나타낸다.
도 26A는 T-IgG -초유의 경구 투여가 지방 세포들에서 CD3+LAP+를 증가시킨다는 것을 설명한다. 도 26B는 T-IgG-초유의 경구 투여가 지방 세포들내에서 CD3+LAP+를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 30: T- IgG -초유의 경구 투여는 지방 세포들내에서 CD4 + CD25 + LAP -를 증가시킨다.
도 27A는 T-IgG-초유의 투여가 지방 세포들내에서 CD4+CD25+LAP-를 증가시킨다는 것을 설명한다.
실시예 31: 항- LPS 풍부한 초유의 경구 투여는 간염 모델에서 세균성 전위를 감소시킨다.
세균성 전위 및 간염을 검사하기 위하여, 마우스 군들을 다음과 같이 처리하였다:
A군: BCP: 항체 없는 초유로 처리함
B군: 초유를 함유하는 항-LPS
마우스에서 Con A 간염을 유도하기 전에 4일간 마우스에게 초유를 공급하였다.
Con A의 투여 및 혈청 트란스아미나제 활성의 측정. Con A는 MP Biomedicals (Ohio, USA)으로부터 구입하였다. Con A (0.5 ㎎, 20㎎/kg)를 200㎕의 50 mM Tris (pH 7), 150 mM NaCl, 4 mM CaCl2에 용해시켰고, 그리고 마우스의 정맥으로 주사하였다. 개별 마우스의 혈청은 Con A 주사후 8시간 또는 20시간에 수거하였다. 알라닌 아미노트란스퍼라제 (ALT) 및 아스파라테이트 아미노트란스퍼라제 (AST)의 혈청 활성은 자동 분석기를 이용하여 측정하였다.
세균성 전위 리포폴리사카라이드 (LPS) 수준을 평가하기 위하여 투구게 혈구추출액(limulus amebocyte lysate (LAL)) 발색 분석을 이용하여 측정하였다; LAL 는 세균성 전위의 수준에 대한 척도이다.
표 4는 평균 LAL 수준의 감소로 나타난 것과 같이, 항-LPS 초유의 경구 투여는 세균성 전위를 감소시켰다는 것을 설명한다.
Figure 112011091716549-pct00001
중요한 것은 표 5에서 볼 수 있는 것과 같이, 감소된 세균성 전위는 간 손상의 표식이 되는 간 효소 ALT의 개선과 관련되어 있었다.
Figure 112011091716549-pct00002
실시예 32: 초유에서 유도된 항- LPS 풍부한 조제물 및 항-인슐린 항체들을 포함하는 조성물의 조제
항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물의 조제를 위하여, 대략 200 마리의 영리목적의 젖소로부터 초유를 수거하였다. 통상의 소 병원균에 대해 백신접종을 맞은 소(가축)는 인간 소화관 세균총중 주요 유기체인 대장균 세균의 다수 균주의 외측 세포 벽 항원에 대해 독점적 Anadis 백신으로 백신접종을 받았다. 항-인슐린 풍부한 면역글로블린 조제물의 제조를 위하여, 3마리의 젖소는 항원으로 KLH에 콘쥬게이트된 인슐인으로 면역주사를 맞는다. 항원 백신은 임신 최종 8주 동안 투여된다. 초유는 젖분비 첫 양일간 수거한다. 수득한 초유는 테스트를 위하여 개별 주머니에 냉동시켰다. 가공을 위하여, 초유를 해동시키고, 모우고, 지방을 제거하였다. 각 배취를 저온살균하였다. 초유는 동결건조전 체적을 감소시키기 위하여 한외-여과에 의해 농축시켰다. 한외-여과 단계는 최종 분말에서 락토즈를 7%미만으로 낮춘다(약 50%에서).
항-LPS 풍부한 면역글로블린 조제물과 항-인슐린 풍부한 면역글로블린 조제물은 하기에서 설명되는 용도의 조성물을 만들기 위하여 혼합한다.
면역 매개된 간염 모델을 위하여, 11 내지 12주령의 수컷 C57/bl 마우스의 꼬리 정맥으로 간염을 유도하는 것으로 알려진 Con A (MP Biornedicals, USA)을 50mM Trig pH 7, 150mM NaCl, 4mM CaCl2에 용해시켜 마우스당 500㎍(대략 15 ㎎/kg)의 약량으로 주사하였다. 모든 테스트된 군의 동물에게 항-LPS와 항-인슐린이 풍부한 면역글로블린 조제물을 포함하는 상이한 농도의 조성물을 경구 투여(위관영양을 통하여)하고, 처리안된 대조군과 비교한다. 모든 테스트된 군의 동물은 다음의 매개변수에 따른다: 혈청 아스파라테이트 아미노트란스퍼라제 (AST) 및 알라닌 아미노트란스퍼라제 (ALT) 수준, 간 견본의 조직학적 검사, NKT 마커에 대한 간내 그리고 비장 림프구의 FACS 분석, TG의 측정, 총 콜레스테롤, 포도당 내성, 혈청 인슐린, 혈당, 사이토킨 수준 및 전사 인자들 STAT 1, 4 및 6 그리고 NFKB의 발현에 대한 웨스턴 블랏 분석, 그리고 대조군과 비교한다.

Claims (138)

  1. 만성 C형 간염, 비-알코올성 지방간염(NASH), 지방간, 및 간성 뇌증으로부터 선택된 개체의 만성 간 질환을 치료하기 위하여 간 기능 개선에 유용한, LPS를 포함하는 항원으로 면역화되어 항-LPS 농축된(enriched) 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물을 포함하는 약학 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 개체에서 아스파르테이트 아미노트란스퍼라제(AST) 또는 알라닌 아미노트란스퍼라제(ALT)의 상승된 수준을 보유하는, 약학 조성물.
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  4. 청구항 1에 있어서, 간 기능 개선은 개체에서 AST 또는 ALT 수준을 감소시키는 것을 포함하는, 약학 조성물.
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  9. 청구항 1에 있어서, 초유는 소의 초유인, 약학 조성물.
  10. 만성 C형 간염, 비-알코올성 지방간염(NASH), 지방간, 및 간성 뇌증으로터 선택된 만성 간질환을 가진 인간을 제외한 개체에서 간 기능을 개선시키는 방법에 있어서,
    LPS를 포함하는 항원으로 면역화되어 항-LPS 농축된(enriched) 초유에서 유도된 면역글로블린 조제물의 치료 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  11. 청구항 10에 있어서, 개체에서 아스파르테이트 아미노트란스퍼라제(AST) 또는 알라닌 아미노트란스퍼라제(ALT)의 수준을 근거하여 손상된 간 기능을 가진 개체를 확인하는 단계를 더 포함하는 방법.
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  14. 청구항 10에 있어서, 개체에서 아스파르테이트 아미노트란스퍼라제(AST) 또는 알라닌 아미노트란스퍼라제(ALT)의 수준을 측정하는 단계를 더 포함하며, 이때 AST 또는 ALT 수준 감소는 간 기능이 개선되었음을 나타내는, 방법.
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  21. 청구항 10에 있어서, 초유는 소의 초유인, 방법.
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  25. 청구항 1에 있어서, 만성 간 질환은 만성 C형 간염인, 약학 조성물.
  26. 청구항 1에 있어서, 만성 간 질환은 비-알코올성 지방간염(NASH)인, 약학 조성물.
  27. 청구항 1에 있어서, 만성 간 질환은 지방간인, 약학 조성물.
  28. 청구항 1에 있어서, 만성 간 질환은 간성 뇌증인, 약학 조성물.
  29. 청구항 10에 있어서, 개체는 만성 C형 간염을 가진, 방법.
  30. 청구항 10에 있어서, 개체는 비-알코올성 지방간염(NASH)을 가진, 방법.
  31. 청구항 10에 있어서, 개체는 지방간을 가진, 방법.
  32. 청구항 10에 있어서, 개체는 간성 뇌증을 가진, 방법.
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