KR101773643B1 - 양이온성 지질 - Google Patents

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도모유키 나오이
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교와 핫꼬 기린 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명은, 핵산을, 세포 내에 도입하는 것을 용이하게 하는, 화학식 (I)로 표시되는 양이온성 지질, 이 양이온성 지질 및 핵산을 함유하는 조성물, 이 양이온성 지질 및 핵산을 함유하는 조성물을 이용하여 핵산을 세포 내에 도입하는 방법 등을 제공하는 것을 목적으로 한다.
Figure 112012097261899-pct00034

(상기 식에서, R1 및 R2는 동일하거나 또는 상이하고, 알케닐 등이며, X1 및 X2는 수소 원자이거나 또는 함께 단결합 혹은 알킬렌을 형성하고, X3은 존재하지 않거나, 알킬 등이며, Y는 존재하지 않거나, 음이온이며, a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이며, L3은 단결합 등이고, R3은 알킬 등이며, L1 및 L2는 -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이다.)

Description

양이온성 지질{CATIONIC LIPID}
본 발명은, 핵산을, 예컨대, 세포내 등에 도입하는 것을 용이하게 하는 신규 양이온성 지질 및 이 양이온성 지질을 함유하는 신규 조성물 등에 관한 것이다.
양이온성 지질이란, 일반적으로 1개 또는 복수의 탄화수소기를 포함하는 지질 친화성 영역과, 1개 이상의 플러스로 대전된 극성 헤드 그룹을 포함하는 친수성 영역을 갖는 양친매성 분자이다. 양이온성 지질과 핵산 등의 거대 분자가, 총 하전으로서 플러스로 대전된 복합체를 형성함으로써, 핵산 등의 거대 분자가 세포의 원형질막을 통과하여 세포질에 들어가기 쉽게 되기 때문에, 양이온성 지질은 유용하다. 인 비트로(in vitro) 및 인 비보(in vivo)에서 행할 수 있는 이 프로세스는, 트랜스펙션으로서 알려져 있다.
전형적으로는, 양이온성 지질은 단독으로 이용되거나 또는 인지질 등의 중성 지질과 조합된다. 양이온성 지질과 중성 지질을 조합하는 것은, 정렬된 지질 이중층을 포함하는 소포(小胞)를 용이하게 형성할 수 있기 때문에 유용한 것이 알려져 있다. 양이온성 지질이 단독으로 또는 중성 지질과 조합되어 형성하는 소포 또는 리포좀은, 표면에 다수의 플러스 하전을 가지며, 이 하전에 의해, 폴리뉴클레오티드 또는 마이너스로 대전된 단백질 등의 다른 음이온 분자와 복합체를 형성할 수 있다. 폴리뉴클레오티드/양이온성 지질/중성 지질 복합체의 표면 상의 잔류 총 양이온 하전에 의해, 세포막 표면의 주로 마이너스의 전하와 강한 상호 반응을 일으키는 것이 가능하다.
다수의 상이한 종류의 양이온성 지질은, 트랜스펙션에 사용하기 위해서 합성되어 있고, 현재 시판되고 있다. 이러한 양이온성 지질에는, 예컨대, Lipofectin, Lipofectin ACE, Lipofect AMINE, Transfeactam, DOTAP 등이 있다.
특허문헌 1 중에서 개시되는 N-[1-(2,3-디올레일옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄클로라이드(DOTMA) 등은 당초에 개발된 양이온성 지질 중 하나이다. DOTMA 등은, 분자에 양이온 부위를 부여하는 제4급 질소를 갖는 프로판아미늄기 및 분자의 프로필 백본(backbone)에 에테르 결합하는 한 쌍의 고급 탄화수소에 의해 특징이 부여된다. 제4급 질소는, 메틸기 등의 비교적 단쇄의 알킬쇄로 3치환되어 있다. 구조상 유사한 양이온성 지질, N-(2,3-디-(9-(Z)-옥타데세노일옥시))-프로파-1-일-N,N,N-트리메틸암모늄클로라이드(DOTAP)는, 에테르 결합한 알킬기가 아니라, 아실기를 포함한다.
특허문헌 2 및 특허문헌 3 중에서 개시되는, 예컨대, N-[1-(2,3-디올레일옥시프로필)]-N,N-디메틸-N-히드록시에틸브롬화암모늄(DORIE), 2,3-디올레일옥시-N-[2-(스페르민카르복시아미드)에틸]-N,N-디메틸-1-프로판아미늄트리플루오로아세트산(DOSPA) 등은, 분자에 양이온 부위를 부여하는, 제4급 질소를 갖는 프로판아미늄기 및 분자의 프로필 백본에 에테르 결합하는 한 쌍의 고급 탄화수소에 의해 특징이 부여되고, 또한, 제4급 질소는, 메틸기 등의 비교적 단쇄의 알킬쇄와 히드록시알킬로 3치환되어 있음으로써 특징이 부여된다.
또한, 특허문헌 4 중에는 예컨대 1,2-디리놀레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판(DLinDMA) 등이 개시되어 있다. DLinDMA 등은 보다 유연한 양이온성 지질을 개발하는 것, 이것에 의해 리포좀 등의 막 유동성을 높이는 것을 목적으로, 구조상 유사한 양이온성 지질인 DOTAP 및 DOTMA의 고급 알킬기를, 불포화 부위를 2곳 이상 포함하는 고급 알킬기로 함으로써 특징이 부여된다. 또한, 특허문헌 5 중에는, 예컨대, 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥솔란(DLin-K-DMA) 등이 개시되어 있다.
특허문헌 1 : 일본 특허 공개 소화 제61-161246호 공보(미국 특허 제5049386호 명세서) 특허문헌 2 : 국제 공개 제91/16024호 팜플렛 특허문헌 3 : 국제 공개 제97/019675호 팜플렛 특허문헌 4 : 국제 공개 제2005/121348호 팜플렛 특허문헌 5 : 국제 공개 제2009/086558호 팜플렛
본 발명의 목적은, 핵산을, 예컨대, 세포내 등에 도입하는 것을 용이하게 하는 신규 양이온성 지질 및 이 양이온성 지질을 함유하는 신규 조성물 등을 제공하는 것에 있다.
본 발명은 이하의 (1) 내지 (27)에 관한 것이다.
(1) 화학식 (I)로 표시되는 양이온성 지질.
Figure 112012097261899-pct00001
(상기 식에서, R1 및 R2는 동일하거나 또는 상이하고, 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알킬, 알케닐 또는 알키닐이거나, 또는 R1 및 R2가 함께 디알킬메틸렌, 디알케닐메틸렌, 디알키닐메틸렌 혹은 알킬알케닐메틸렌을 형성하며,
X1 및 X2는 수소 원자이거나, 또는 함께 단결합 혹은 알킬렌을 형성하고,
X3은 존재하지 않거나, 탄소수 1∼6의 알킬 또는 탄소수 3∼6의 알케닐이며,
X3이 존재하지 않는 경우에는,
Y도 존재하지 않고, a 및 b는 0이며, L3은 단결합이고, R3은 탄소수 1∼6의 알킬, 탄소수 3∼6의 알케닐, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이고, L1 및 L2는 -O-이거나,
Y도 존재하지 않으며, a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이며, 또한 a와 b가 모두 0이 아니고, L3은 단결합이며, R3은 탄소수 1∼6의 알킬, 탄소수 3∼6의 알케닐, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이거나,
Y도 존재하지 않으며, a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이며, L3은 단결합이고, R3은 수소 원자이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이거나, 또는
Y도 존재하지 않으며, a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이며, L3은 -CO- 또는 -CO-O-이고, R3은 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일, 모르폴린-3-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이고, 상기 치환기 중 1개 이상은 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 피롤리디닐, 피페리딜 또는 모르폴리닐이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이며,
X3이 탄소수 1∼6의 알킬 또는 탄소수 3∼6의 알케닐인 경우에는,
Y는 제약상 허용되는 음이온이고, a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이고, L3은 단결합이며, R3은 탄소수 1∼6의 알킬, 탄소수 3∼6의 알케닐, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이다.)
(2) L1 및 L2가 -O- 또는 -O-CO-이고, R1 및 R2가 도데실, 테트라데실, 헥사데실, 옥타데실, 이코실, 도코실, 테트라코실, (Z)-테트라데카-9-에닐, (Z)-헥사데카-9-에닐, (Z)-옥타데카-6-에닐, (Z)-옥타데카-9-에닐, (E)-옥타데카-9-에닐, (Z)-옥타데카-11-에닐, (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐, (9Z,12Z,15Z)-옥타데카-9,12,15-트리에닐, (Z)-이코사-11-에닐, (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐, 3,7,11-트리메틸도데카-2,6,10-트리에닐 또는 3,7,11,15-테트라메틸헥사데카-2-에닐인 상기 (1)에 기재된 양이온성 지질.
(3) L1 및 L2가 -CO-O-이고, R1 및 R2가 트리데실, 펜타데실, 헵타데실, 노나데실, 헤니코실, 트리코실, (Z)-트리데카-8-에닐, (Z)-펜타데카-8-에닐, (Z)-헵타데카-5-에닐, (Z)-헵타데카-8-에닐, (E)-헵타데카-8-에닐, (Z)-헵타데카-10-에닐, (8Z,11Z)-헵타데카-8,11-디에닐, (8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14-트리에닐, (Z)-노나데카-10-에닐, (10Z,13Z)-노나데카-10,13-디에닐, (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐, 2,6,10-트리메틸운데카-1,5,9-트리에닐 또는 2,6,10,14-테트라메틸펜타데카-1-에닐인 상기 (1)에 기재된 양이온성 지질.
(4) a 및 b가 모두 0 또는 1인 상기 (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 기재된 양이온성 지질.
(5) L3이 단결합이고, R3이 수소 원자, 메틸, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이고, L1 및 L2가 -O-인 상기 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 양이온성 지질.
(6) L3이 -CO- 또는 -CO-O-이고, R3이 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이고, 상기 치환기 중 1개 이상은, 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐이며, L1 및 L2가 동일한 -CO-O- 또는 -O-CO-인 상기 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 양이온성 지질.
(7) X1 및 X2가 함께 단결합 혹은 알킬렌을 형성하는 상기 (1) 내지 (6) 중 어느 하나에 기재된 양이온성 지질.
(8) X1 및 X2가 함께 단결합 혹은 알킬렌을 형성하고, R3이 수소 원자, 메틸 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 히드록시 혹은 카르바모일로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐인 상기 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 양이온성 지질.
(9) X1 및 X2가 수소 원자이고, R3이 수소 원자, 메틸 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 히드록시 혹은 카르바모일로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐인 상기 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 기재된 양이온성 지질.
(10) X1 및 X2가 함께 단결합 혹은 알킬렌을 형성하고, R3이 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 히드록시 혹은 카르바모일로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐인 상기 (6)에 기재된 양이온성 지질.
(11) X1 및 X2가 수소 원자이고, R3이 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 히드록시 혹은 카르바모일로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐인 상기 (6)에 기재된 양이온성 지질.
(12) X3이 존재하지 않거나, 메틸인 상기 (1) 내지 (11) 중 어느 하나에 기재된 양이온성 지질.
(13) 상기 (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 기재된 양이온성 지질 및 핵산을 함유하는 조성물.
(14) 상기 (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 기재된 양이온성 지질과 핵산과의 복합 입자, 또는 이 양이온성 지질에 중성 지질 및/또는 고분자를 조합한 것과 핵산과의 복합 입자를 함유하는 조성물.
(15) 상기 (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 기재된 양이온성 지질과 핵산과의 복합 입자, 또는 이 양이온성 지질에 중성 지질 및/또는 고분자를 조합한 것과 핵산과의 복합 입자 및 이 복합 입자를 봉입하는 지질막으로 구성된 지질 미립자를 함유하는 조성물.
(16) 핵산이 RNA 간섭(RNAi)을 이용한 표적 유전자의 발현 억제 작용을 갖는 핵산인 상기 (13) 내지 (15) 중 어느 하나에 기재된 조성물.
(17) 표적 유전자가, 종양 또는 염증에 관련된 유전자인 상기 (16)에 기재된 조성물.
(18) 상기 (14) 내지 (17) 중 어느 하나에 기재된 조성물을 이용하여 상기 핵산을 세포 내에 도입하는 방법.
(19) 세포가, 포유류의 종양 또는 염증 부위에 있는 세포인 상기 (18)에 기재된 방법.
(20) 세포가, 포유류의 간장, 폐, 신장 또는 비장에 있는 세포인 상기 (18) 또는 (19)에 기재된 방법.
(21) 세포 내에 도입하는 방법이, 정맥내 투여에 의해 세포 내에 도입하는 방법인 상기 (19) 또는 (20)에 기재된 방법.
(22) 상기 (17)에 기재된 조성물을 포유동물에게 투여하는 암 또는 염증 질환의 치료 방법.
(23) 투여하는 방법이 정맥내 투여인 상기 (22)에 기재된 방법.
(24) 상기 (16)에 기재된 조성물을 포함하고, 이 조성물을 포유동물에게 투여하여, 질환의 치료에 이용하기 위한 의약.
(25) 투여하는 방법이 정맥내 투여인 상기 (24)에 기재된 의약.
(26) 상기 (17)에 기재된 조성물을 포함하고, 이 조성물을 포유동물에게 투여하여, 암 또는 염증 질환의 치료에 이용하기 위한 암 또는 염증 질환의 치료제.
(27) 투여하는 방법이 정맥내 투여인 상기 (26)에 기재된 암 또는 염증 질환의 치료제.
본 발명의 신규 양이온성 지질 및 핵산을 함유하는 조성물을, 포유류 등에 투여함으로써, 상기 핵산을 예컨대, 세포내 등에 용이하게 도입할 수 있다.
도 1은 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 1∼10을 이용한 제제)를 인간 간암 유래 세포주 HepG2 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다. 종축은 음성 대조를 1로 한 경우의 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타내고, 횡축은 핵산 농도(nM), 사용한 양이온성 지질의 화합물 번호를 나타낸다.
도 2는 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 11∼20을 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 3은 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 21∼30을 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 4는 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 31∼37을 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 5는 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 38∼48을 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 6은 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 49∼58을 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 7은 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 59∼68을 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 8은 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 69∼79를 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 9는 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 80∼90을 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 10은 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 91∼100을 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 11은 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 101∼110을 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 12는 도 1과 마찬가지로 실시예 118에서 얻어진 제제(화합물 111∼115를 이용한 제제)를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
도 13은 도 1과 마찬가지로 비교예 1∼8에서 얻어진 제제를 세포 내에 도입한 후의, 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타낸다.
본 발명의 양이온성 지질은, 화학식 (I)로 표시된다.
Figure 112012097261899-pct00002
(상기 식에서, R1 및 R2는 동일하거나 또는 상이하고, 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알킬, 알케닐 또는 알키닐이거나, 또는 R1 및 R2가 함께 디알킬메틸렌, 디알케닐메틸렌, 디알키닐메틸렌 혹은 알킬알케닐메틸렌을 형성하며,
X1 및 X2는 수소 원자이거나, 또는 함께 단결합 혹은 알킬렌을 형성하고,
X3은 존재하지 않거나, 탄소수 1∼6의 알킬 또는 탄소수 3∼6의 알케닐이며,
X3이 존재하지 않는 경우에는,
Y도 존재하지 않고, a 및 b는 0이며, L3은 단결합이고, R3은 탄소수 1∼6의 알킬, 탄소수 3∼6의 알케닐, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이고, L1 및 L2는 -O-이거나,
Y도 존재하지 않으며, a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이며, 또한 a와 b가 모두 0이 아니고, L3은 단결합이며, R3은 탄소수 1∼6의 알킬, 탄소수 3∼6의 알케닐, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이거나,
Y도 존재하지 않으며, a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이며, L3은 단결합이고, R3은 수소 원자이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이거나, 또는
Y도 존재하지 않으며, a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이며, L3은 -CO- 또는 -CO-O-이고, R3은 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일, 모르폴린-3-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이고, 상기 치환기 중 1개 이상은 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 피롤리디닐, 피페리딜 또는 모르폴리닐이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이며,
X3이 탄소수 1∼6의 알킬 또는 탄소수 3∼6의 알케닐인 경우에는,
Y는 제약상 허용되는 음이온이고, a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이고, L3은 단결합이며, R3은 탄소수 1∼6의 알킬, 탄소수 3∼6의 알케닐, 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일, 모르폴린-3-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이다.)
이하, 화학식 (I)로 표시되는 화합물을 화합물 (I)이라고 하는 경우도 있다. 다른 화학식 번호의 화합물에 대해서도 동일하다.
화학식 (I)의 각 기의 정의에 있어서, 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알킬로는 예컨대 도데실, 트리데실, 테트라데실, 2,6,10-트리메틸운데실, 펜타데실, 3,7,11-트리메틸도데실, 헥사데실, 헵타데실, 옥타데실, 6,10,14-트리메틸펜타데칸-2-일, 노나데실, 2,6,10,14-테트라메틸펜타데실, 이코실, 3,7,11,15-테트라메틸헥사데실, 헤니코실, 도코실, 트리코실, 테트라코실 등을 들 수 있다.
탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알케닐로는 1∼3개의 2중 결합을 포함하는 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알케닐이면 좋고, 예컨대 (Z)-트리데카-8-에닐, (Z)-테트라데카-9-에닐, (Z)-펜타데카-8-에닐, (Z)-헥사데카-9-에닐, (Z)-헵타데카-5-에닐, (Z)-옥타데카-6-에닐, (Z)-헵타데카-8-에닐, (Z)-옥타데카-9-에닐, (E)-헵타데카-8-에닐, (E)-옥타데카-9-에닐, (Z)-헵타데카-10-에닐, (Z)-옥타데카-11-에닐, (8Z,11Z)-헵타데카-8,11-디에닐, (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐, (8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14-트리에닐, (9Z,12Z,15Z)-옥타데카-9,12,15-트리에닐, (Z)-노나데카-10-에닐, (Z)-이코사-11-에닐, (10Z,13Z)-노나데카-10,13-디에닐, (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐, 2,6,10-트리메틸운데카-1,5,9-트리에닐, 3,7,11-트리메틸도데카-2,6,10-트리에닐, 2,6,10,14-테트라메틸펜타데카-1-에닐, 3,7,11,15-테트라메틸헥사데카-2-에닐, 바람직하게는 (Z)-펜타데카-8-에닐, (Z)-헥사데카-9-에닐, (Z)-헵타데카-5-에닐, (Z)-옥타데카-6-에닐, (Z)-헵타데카-8-에닐, (Z)-옥타데카-9-에닐, (8Z,11Z)-헵타데카-8,11-디에닐, (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐 등을 들 수 있다.
탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알키닐로는 1∼3개의 3중 결합을 포함하는 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알키닐이면 좋고, 예컨대 도데카-11-이닐, 트리데카-12-이닐, 펜타데카-6-이닐, 헥사데카-7-이닐, 펜타데카-4,6-디이닐, 헥사데카-5,7-디이닐, 헵타데카-8-이닐, 옥타데카-9-이닐 등을 들 수 있다.
알킬렌으로는 예컨대 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌 등을 들 수 있다.
탄소수 1∼6의 알킬로는 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 시클로프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 시클로부틸, 시클로프로필메틸, 펜틸, 이소펜틸, sec-펜틸, 네오펜틸, tert-펜틸, 시클로펜틸, 헥실, 시클로헥실 등을 들 수 있고, 바람직하게는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 이소펜틸, sec-펜틸, tert-펜틸, 네오펜틸, 헥실 등을 들 수 있고, 더욱 바람직하게는 메틸, 에틸, 프로필 등을 들 수 있다.
탄소수 3∼6의 알케닐로는 예컨대 알릴, 1-프로페닐, 부테닐, 펜테닐, 헥세닐 등을 들 수 있고, 바람직하게는 알릴 등을 들 수 있다.
치환된 탄소수 1∼6의 알킬에 있어서의 알킬 부분 및 치환된 탄소수 3∼6의 알케닐에 있어서의 알케닐 부분으로서는, 각각 상기 탄소수 1∼6의 알킬 및 탄소수 3∼6의 알케닐과 동일하다.
디알킬메틸렌, 디알케닐메틸렌, 디알키닐메틸렌 혹은 알킬알케닐메틸렌에 있어서의 알킬, 알케닐 및 알키닐 부분은, 각각 상기 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알킬, 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알케닐 및 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알키닐과 동일하다. 또한, 디알킬메틸렌, 디알케닐메틸렌 및 디알키닐메틸렌에 있어서의 알킬, 알케닐 및 알키닐 부분은 각각 동일한 것이 더욱 바람직하다.
본 발명에 있어서, 제약상 허용되는 음이온으로는 예컨대 염화물 이온, 브롬화물 이온, 질산 이온, 황산 이온, 인산 이온 등의 무기 이온, 아세트산 이온, 옥살산 이온, 말레산 이온, 푸마르산 이온, 시트르산 이온, 안식향산 이온, 메탄술폰산 이온 등의 유기산 이온 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일 및 모르폴린-3-일은 각각 고리 중의 질소 원자 상에 결합한 수소 원자가, 메틸 또는 에틸로 변환된 것을 포함한다.
모노알킬아미노 및 디알킬아미노로서는, 각각 1개 및 동일하거나 또는 상이하게 2개의, 탄소수 1∼6의 알킬(상기와 동일) 또는, 아미노, 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬(상기와 동일)로 치환된 아미노이면 좋고, 예컨대 메틸아미노, 에틸아미노, 프로필아미노, 부틸아미노, 펜틸아미노, 헥실아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, 에틸메틸아미노, 메틸프로필아미노, 부틸메틸아미노, 메틸펜틸아미노, 헥실메틸아미노, 아미노에틸아미노, 아미노프로필아미노, (아미노에틸)메틸아미노, 비스(아미노에틸)아미노 등을 들 수 있고, 바람직하게는 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, 아미노프로필아미노, 비스(아미노에틸)아미노 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 아미노, 모노알킬아미노 및 디알킬아미노는 각각 질소 원자 상의 고립 전자쌍에, 수소 이온이 배위하여, 암모니오, 모노알킬암모니오 및 디알킬암모니오를 형성하고 있어도 좋고, 아미노, 모노알킬아미노 및 디알킬아미노는 각각 암모니오, 모노알킬암모니오 및 디알킬암모니오를 포함한다.
트리알킬암모니오로는 동일하거나 또는 상이하게 3개의, 탄소수 1∼6의 알킬(상기와 동일) 또는, 아미노, 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬(상기와 동일)로 치환된 암모니오이면 좋고, 예컨대 트리메틸암모니오, 에틸디메틸암모니오, 디에틸메틸암모니오, 트리에틸암모니오, 트리프로필암모니오, 트리부틸암모니오, 트리펜틸암모니오, 트리헥실암모니오, 트리스(아미노에틸)암모니오, (아미노에틸)디메틸암모니오, 비스(아미노에틸)메틸암모니오 등을 들 수 있으며, 바람직하게는 트리메틸암모니오, 트리에틸암모니오, 트리스(아미노에틸)암모니오, (아미노에틸)디메틸암모니오, 비스(아미노에틸)메틸암모니오 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 아미노, 모노알킬아미노 및 디알킬아미노의 질소 원자 상의 고립 전자쌍에, 수소 이온이 배위한 암모니오, 모노알킬암모니오 및 디알킬암모니오, 및 트리알킬암모니오는, 제약상 허용되는 음이온(상기와 동일)과 염을 형성하고 있어도 좋다.
알콕시로는 탄소수 1∼6의 알킬(상기와 동일) 또는, 아미노, 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬(상기와 동일)로 치환된 히드록시이면 좋고, 예컨대 메톡시, 에톡시, 프로필옥시, 부틸옥시, 펜틸옥시, 헥실옥시, 아미노에톡시, 메틸아미노에톡시 등을 들 수 있으며, 바람직하게는 메톡시, 에톡시, 아미노에톡시, 메틸아미노에톡시 등을 들 수 있다.
모노알킬카르바모일 및 디알킬카르바모일로는 각각 1개 및 동일하거나 또는 상이하게 2개의, 탄소수 1∼6의 알킬(상기와 동일) 또는, 아미노, 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬(상기와 동일)로 치환된 카르바모일이면 좋고, 예컨대 메틸카르바모일, 에틸카르바모일, 프로필카르바모일, 부틸카르바모일, 펜틸카르바모일, 헥실카르바모일, 디메틸카르바모일, 디에틸카르바모일, 에틸메틸카르바모일, 메틸프로필카르바모일, 부틸메틸카르바모일, 메틸펜틸카르바모일, 헥실메틸카르바모일, 아미노에틸카르바모일, 아미노프로필카르바모일, (아미노에틸)메틸카르바모일, 비스(아미노에틸)카르바모일 등을 들 수 있고, 바람직하게는 메틸카르바모일, 에틸카르바모일, 디메틸카르바모일 등을 들 수 있다.
또한, 화학식 (I)에 있어서, R1 및 R2는 동일한 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알킬, 알케닐 또는 알키닐인 것이 보다 바람직하다. 또한, R1 및 R2가 어느 쪽의 경우도, 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알킬, 알케닐이 보다 바람직하다.
또한, L1 및 L2는 동일한 -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-인 것이 보다 바람직하다.
또한, L1 및 L2 중 1개 이상이 -O-인 경우에는, -O-에 결합하는 R1 및 R2는 동일하거나 또는 상이하게 도데실, 테트라데실, 헥사데실, 옥타데실, 이코실, 도코실, 테트라코실, (Z)-테트라데카-9-에닐, (Z)-헥사데카-9-에닐, (Z)-옥타데카-6-에닐, (Z)-옥타데카-9-에닐, (E)-옥타데카-9-에닐, (Z)-옥타데카-11-에닐, (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐, (9Z,12Z,15Z)-옥타데카-9,12,15-트리에닐, (Z)-이코사-11-에닐, (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐, 3,7,11-트리메틸도데카-2,6,10-트리에닐, 3,7,11,15-테트라메틸헥사데카-2-에닐이거나, 또는 R1 및 R2가 함께 디알킬메틸렌 혹은 디알케닐메틸렌을 형성하는 것이 보다 바람직하며, 테트라데실, 헥사데실, 옥타데실, (Z)-헥사데카-9-에닐, (Z)-옥타데카-6-에닐, (Z)-옥타데카-9-에닐, (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐이거나, 또는 R1 및 R2가 함께 디(테트라데실)메틸렌, 디(헥사데실)메틸렌, 디(옥타데실)메틸렌, 디((Z)-헥사데카-9-에닐)메틸렌, 디((Z)-옥타데카-6-에닐)메틸렌, 디((Z)-옥타데카-9-에닐)메틸렌, 디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐)메틸렌을 형성하는 것이 보다 바람직하다. 또한, 어느 쪽의 경우도, R1 및 R2는 동일하거나 또는 R1 및 R2가 함께 알킬, 알케닐 혹은 알키닐 부분이 동일한 디알킬메틸렌, 디알케닐메틸렌 혹은 디알키닐메틸렌을 형성하는 것이 보다 바람직하다.
또한, L1 및 L2 중 1개 이상이 O-CO-인 경우에는, -O-CO-에 결합하는 R1 및 R2는 동일하거나 또는 상이하게 도데실, 테트라데실, 헥사데실, 옥타데실, 이코실, 도코실, 테트라코실, (Z)-테트라데카-9-에닐, (Z)-헥사데카-9-에닐, (Z)-옥타데카-6-에닐, (Z)-옥타데카-9-에닐, (E)-옥타데카-9-에닐, (Z)-옥타데카-11-에닐, (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐, (9Z,12Z,15Z)-옥타데카-9,12,15-트리에닐, (Z)-이코사-11-에닐, (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐, 3,7,11-트리메틸도데카-2,6,10-트리에닐, 3,7,11,15-테트라메틸헥사데카-2-에닐인 것이 보다 바람직하며, 테트라데실, 헥사데실, 옥타데실, (Z)-헥사데카-9-에닐, (Z)-옥타데카-6-에닐, (Z)-옥타데카-9-에닐, (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐인 것이 보다 바람직하다. 또한, 어느 쪽의 경우도, R1 및 R2는 동일한 것이 더욱 바람직하다.
또한, L1 및 L2 중 1개 이상이 -CO-O-인 경우에는, -CO-O-에 결합하는 R1 및 R2는 동일하거나 또는 상이하게 트리데실, 펜타데실, 헵타데실, 노나데실, 헤니코실, 트리코실, (Z)-트리데카-8-에닐, (Z)-펜타데카-8-에닐, (Z)-헵타데카-5-에닐, (Z)-헵타데카-8-에닐, (E)-헵타데카-8-에닐, (Z)-헵타데카-10-에닐, (8Z,11Z)-헵타데카-8,11-디에닐, (8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14-트리에닐, (Z)-노나데카-10-에닐, (10Z,13Z)-노나데카-10,13-디에닐, (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐, 2,6,10-트리메틸운데카-1,5,9-트리에닐, 2,6,10,14-테트라메틸펜타데카-1-에닐이거나, 또는 R1 및 R2가 함께 디알킬메틸렌, 디알케닐메틸렌, 디알키닐메틸렌 혹은 알킬알케닐메틸렌을 형성하는 것이 보다 바람직하고, 트리데실, 펜타데실, 헵타데실, (Z)-펜타데카-8-에닐, (Z)-헵타데카-5-에닐, (Z)-헵타데카-8-에닐, (8Z,11Z)-헵타데카-8,11-디에닐인 것이 보다 바람직하다. 또한, 어느 쪽의 경우도, R1 및 R2는 동일하거나, 또는 R1 및 R2가 함께 알킬, 알케닐 혹은 알키닐 부분이 동일한 디알킬메틸렌, 디알케닐메틸렌 혹은 디알키닐메틸렌을 형성하는 것이 보다 바람직하다.
또한, a 및 b는 동시에 0 또는 1인 것이 보다 바람직하다.
또한, a 및 b가 동시에 1인 경우에는, X1 및 X2는 함께 단결합 혹은 알킬렌을 형성하는 것이 보다 바람직하다.
또한, X1 및 X2는 함께 단결합 혹은 알킬렌을 형성하는 것이 보다 바람직하다. 또한, X1 및 X2가 함께 단결합 혹은 알킬렌을 형성하는 경우에는, R3이 수소 원자, 메틸, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 혹은 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이 보다 바람직하고, 수소 원자, 메틸 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 히드록시 혹은 카르바모일로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이 더욱 바람직하고, 수소 원자, 메틸, 2,3-디히드록시프로필, 3-히드록시프로필, 아미노메틸, 1,2-디아미노에틸, 2-아미노에틸, 1,3-디아미노프로필, 1,4-디아미노부틸, 1,5-디아미노펜틸, 3-아미노프로필, 4-아미노부틸, 5-아미노펜틸, 2-카르바모일에틸 등이 가장 바람직하다. 또한, X1 및 X2가 함께 단결합을 형성하는 경우에, L3이 -CO- 또는 -CO-O-, 바람직하게는 -CO-인 것도 본 발명의 보다 바람직한 형태 중 하나이다. 이 경우에는, R3이 아미노메틸, 1,2-디아미노에틸, 2-아미노에틸, 1,3-디아미노프로필, 1,4-디아미노부틸, 1,5-디아미노펜틸, 3-아미노프로필, 4-아미노부틸, 5-아미노펜틸 등이 더욱 바람직하고, 1,2-디아미노에틸, 1,3-디아미노프로필, 1,4-디아미노부틸, 1,5-디아미노펜틸인 것이 가장 바람직하다.
또한, X1 및 X2가 함께 단결합을 형성하는 경우에, a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3, 바람직하게는 1인 것도 본 발명의 보다 바람직한 형태 중 하나이다. 이 경우에, L1 및 L2가 동일한 -CO-O- 또는 -O-CO-, 바람직하게는 -CO-O-이고, R3이 메틸인 것도 본 발명의 더욱 바람직한 형태 중 하나이며, 그 경우에는, R1 및 R2는 동일하거나 또는 상이하게 (Z)-헵타데카-8-에닐 또는 (8Z,11Z)-헵타데카-8,11-디에닐인 것이 보다 바람직하며, 동일하게 (Z)-헵타데카-8-에닐 또는 (8Z,11Z)-헵타데카-8,11-디에닐인 것이 가장 바람직하다.
또한, X1 및 X2가 함께 단결합을 형성하는 경우에, X3이 탄소수 1∼6의 알킬 또는 탄소수 3∼6의 알케닐, 바람직하게는 메틸인 것도 본 발명의 보다 바람직한 형태 중 하나이다. 이 경우, L1 및 L2는 동일한 -CO-O- 또는 -O-CO-인 것이 더욱 바람직하고, -CO-O-인 것이 가장 바람직하다.
또한, X1 및 X2가 수소 원자인 경우에는, R3이 수소 원자, 메틸, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이 보다 바람직하며, 수소 원자, 메틸 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 히드록시 혹은 카르바모일로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이 더욱 바람직하며, 수소 원자, 메틸, 2,3-디히드록시프로필, 3-히드록시프로필, 아미노메틸, 1,2-디아미노에틸, 2-아미노에틸, 1-아미노-2-히드록시에틸, 1,3-디아미노프로필, 1,4-디아미노부틸, 1,5-디아미노펜틸, 3-아미노프로필, 4-아미노부틸, 5-아미노펜틸, 2-카르바모일에틸 등이 가장 바람직하다.
또한, L3은 단결합인 것이 보다 바람직하다. 또한, L3이 단결합인 경우에는, L1 및 L2는 -O-인 것이 보다 바람직하다.
또한, L3이 단결합인 경우에는, R3은 수소 원자, 메틸, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐인 것이 보다 바람직하며, 수소 원자, 메틸, 히드록시메틸, 2-히드록시에틸, 2,3-디히드록시프로필, 2-히드록시프로필, 3-히드록시프로필, 2-히드록시-3-메톡시프로필, 아미노메틸, 2-아미노에틸, 3-아미노프로필, 4-아미노부틸, 5-아미노펜틸, 2-(N,N-디메틸아미노)에틸, 3-(N,N-디메틸아미노)프로필, 2-카르바모일에틸, 2-디메틸카르바모일에틸, 1-메틸피페리딘-4-일 등이 더욱 바람직하고, 수소 원자, 메틸, 2,3-디히드록시프로필, 3-히드록시프로필, 2-아미노에틸, 3-아미노프로필, 4-아미노부틸, 5-아미노펜틸, 2-카르바모일에틸 등이 가장 바람직하며, 어느 쪽의 경우도, L1 및 L2는 -O-인 것이 보다 바람직하다.
또한, X3이 존재하지 않고, Y도 존재하지 않으며, L3이 단결합이고, R3이 수소 원자인 경우에는, L1 및 L2가 동일한 -CO-O- 또는 -O-CO-, 바람직하게는 -CO-O-인 것도, 본 발명의 보다 바람직한 형태 중 하나이다. 이 경우에는, R1 및 R2는 동일하거나 또는 상이하게 (Z)-헵타데카-5-에닐 또는 (Z)-헵타데카-8-에닐인 것이 보다 바람직하며, 동일하게 (Z)-헵타데카-5-에닐 또는 (Z)-헵타데카-8-에닐인 것이 가장 바람직하다.
또한, L3이 -CO- 또는 -CO-O-인 경우에는, L1 및 L2는 동일한 -CO-O- 또는 -O-CO-인 것이 보다 바람직하고, -CO-O-인 것이 더욱 바람직하다.
또한, L3이 -CO- 또는 -CO-O-인 경우에는, R3은 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이며, 상기 치환기 중 1개 이상은, 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐 것이 보다 바람직하고, R3은 아미노메틸, 1,2-디아미노에틸, 2-아미노에틸, 1,3-디아미노프로필, 3-아미노프로필, 1,4-디아미노부틸, 4-아미노부틸, 1,5-디아미노펜틸, 5-아미노펜틸, (N,N-디메틸아미노)메틸, 2-(N,N-디메틸아미노)에틸, 3-(N,N-디메틸아미노)프로필, 1-아미노-2-히드록시에틸 등이 더욱 바람직하며, 1,2-디아미노에틸, 2-아미노에틸, 1,3-디아미노프로필, 3-아미노프로필, 1,4-디아미노부틸, 4-아미노부틸, 1,5-디아미노펜틸, 5-아미노펜틸 등이 가장 바람직하다.
L3이 -CO- 또는 -CO-O-의 경우에, R3이 아미노메틸, 1-히드록시-2-아미노에틸, 2-아미노에틸, 1,3-디아미노프로필, 3-아미노프로필, 1,4-디아미노부틸, 4-아미노부틸, 1,5-디아미노펜틸, 5-아미노펜틸이며, L1 및 L2는 동일한 -O-인 것도 본 발명의 더욱 바람직한 형태 중 하나이다. 이 경우에는, R1 및 R2는 동일하거나 또는 상이하게 (Z)-옥타데카-9-에닐 또는 (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐인 것이 보다 바람직하며, 동일하게 (Z)-옥타데카-9-에닐 또는 (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐인 것이 가장 바람직하다.
또한, X3은 존재하지 않거나, 메틸인 것이 보다 바람직하다. X3이 메틸인 경우에는, R3은 메틸인 것이 보다 바람직하고, L1 및 L2는 동일한 -CO-O- 또는 -O-CO-인 것이 보다 바람직하며, -CO-O-인 것이 더욱 바람직하다.
다음에 화합물 (I)의 제조법에 대해서 설명한다. 또한, 이하에 나타내는 제조법에 있어서, 정의한 기가 상기 제조법의 조건 하에서 변화되거나 또는 상기 제조법을 실시하는 데 부적절한 경우, 유기 합성 화학에서 상용되는 보호기의 도입 및 제거 방법[예컨대, 프로텍티브 그룹스 인 오가닉 신세시스 제3판(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition), 그린(T. W. Greene) 저, John Wiley & Sons Inc. (1999년) 등에 기재된 방법] 등을 이용함으로써, 목적 화합물을 제조할 수 있다. 또한, 필요에 따라 치환기 도입 등의 반응 공정의 순서를 바꿀 수도 있다.
제조법 1
화합물 (I) 중, L1 및 L2가 -O-이고, L3은 단결합이며, X3 및 Y는 존재하지 않는, 화합물 (Ia)는 이하의 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00003
(상기 식에서, R1, R2, R3, X1, X2, a 및 b는 각각 상기와 동일하고, Z는 염소 원자, 브롬 원자, 요오드 원자, 트리플루오로메탄술포닐옥시, 메탄술포닐옥시, 벤젠술포닐옥시, p-톨루엔술포닐옥시 등의 이탈기를 나타낸다.)
공정 1 및 공정 2
화합물 (IIb)는 화합물 (IIa)와 화합물 (IIIa)를 용매 중, 실온과 150℃ 사이의 온도에서 1∼30당량의 염기 존재 하, 5분간∼100시간 동안 처리하고, 단리함으로써 제조할 수 있다. 또한, 화합물 (Ia)는 화합물 (IIb)와 화합물 (IIIb)를 용매 중, 실온과 150℃ 사이의 온도에서 1∼30당량의 염기 존재 하, 5분간∼100시간 동안 처리하고, 단리함으로써 제조할 수 있다.
용매로는 예컨대 톨루엔, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, N,N-디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈, 디메틸술폭시드 등을 들 수 있고, 이들은 단독 또는 혼합하여 이용할 수 있다.
염기로는 예컨대 수소화나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 나트륨 tert-부톡시드, 칼륨 tert-부톡시드 등을 들 수 있다.
화합물 (IIa)는 시판품 또는 공지된 방법[예컨대, “케미컬 & 파마슈티컬 브렌치(Chem. Pharm. Bull)”, 1991년, 제39권, p.2219, 국제 공개 제2006/10036호 팜플렛] 혹은 각각에 준한 방법 또는 참고예에 기재된 방법에 의해 얻을 수 있다.
화합물 (IIIa) 및 화합물 (IIIb)는 시판품 또는 공지된 방법[예컨대, 제5판 실험화학강좌 13 유기화합물의 합성 I」, 제5판, p. 374, 마루젠(2005년)] 혹은 그것에 준한 방법에 의해 얻을 수 있다.
R1과 R2가 동일한 경우의 화합물 (Ia)는, 공정 1에 있어서, 2당량 이상의 화합물 (IIIa)를 이용함으로써 얻을 수 있다.
제조법 2
화합물 (I) 중, L1 및 L2가 -CO-O-이고, L3은 단결합이며, X3 및 Y는 존재하지 않는, 화합물 (Ib)는 이하의 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00004
(상기 식에서, R1, R2, R3, X1, X2, a 및 b는 각각 상기와 동일하다.)
공정 3 및 공정 4
화합물 (IIc)는 화합물 (IIa)와 화합물 (IVa)를 용매 중, -20℃와 150℃ 사이의 온도에서 1∼30당량의 축합제의 존재 하, 5분간∼100시간 동안 처리하고, 단리함으로써 제조할 수 있다. 또한, 화합물 (Ib)는 화합물 (IIc)와 화합물 (IVb)를 용매 중, -20℃와 150℃ 사이의 온도에서 1∼30당량의 축합제의 존재 하, 5분간∼100시간 동안 처리하고, 단리함으로써 제조할 수 있다. 공정 3 및 공정 4에 있어서, 0.01∼30당량의 첨가제 및/또는 1당량∼대과잉량의 염기를 첨가하여 반응을 촉진시킬 수도 있다.
용매로는 예컨대 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 디메틸술폭시드 등을 들 수 있고, 이들은 단독 또는 혼합하여 이용할 수 있다.
축합제로는 예컨대 1,3-디시클로헥실카르보디이미드, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염, 카르보닐디이미다졸, 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄헥사플루오로포스페이트, (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 요오드화 2-클로로-1-메틸피리디늄 등을 들 수 있다.
첨가제로는 예컨대 1-히드록시벤즈트리아졸, 4-디메틸아미노피리딘 등을 들 수 있다.
염기로는 예컨대 아세트산칼륨, 탄산수소나트륨, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 나트륨메톡시드, 칼륨 tert-부톡시드, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, 피리딘, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센 등을 들 수 있다.
화합물 (IVa) 및 화합물 (IVb)는 시판품 또는 공지된 방법[예컨대, 제5판 실험화학 강좌 16 유기 화합물의 합성 IV」, 제5판, p. 1, 마루젠(2005년)] 혹은 그것에 준한 방법에 의해 얻을 수 있다.
R1와 R2가 동일한 경우의 화합물 (Ib)는, 공정 3에 있어서, 2당량 이상의 화합물 (IVa)를 이용함으로써 얻을 수 있다.
제조법 3
화합물 (I) 중, L1 및 L2가 -O-CO-이고, L3은 단결합이며, X3 및 Y는 존재하지 않는, 화합물 (Ic)는 이하의 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00005
(상기 식에서, R1, R2, R3, X1, X2, a 및 b는 각각 상기와 동일하다.)
공정 5 및 공정 6
화합물 (IIe)는 화합물 (IId)와 화합물 (Va)를 용매 중, -20℃와 150℃ 사이의 온도에서 1∼30당량의 축합제의 존재 하, 5분간∼100시간 동안 처리하고, 단리함으로써 제조할 수 있다. 또한, 화합물 (Ic)는, 화합물 (IIe)와 화합물 (Vb)를 용매 중, -20℃와 150℃ 사이의 온도에서 1∼30당량의 축합제의 존재 하, 5분간∼100시간 동안 처리하고, 단리함으로써 제조할 수 있다. 공정 5 및 공정 6에 있어서, 0.01∼30당량의 첨가제 및/또는 1당량∼대과잉량의 염기를 첨가하여 반응을 촉진시킬 수도 있다.
용매, 축합제, 첨가제 및 염기로는 각각 제조법 2와 동일한 것을 들 수 있다.
화합물 (IId)는 시판품 또는 공지된 방법[예컨대, 제5판 실험화학강좌 16 유기 화합물의 합성 IV」, 제5판, p. 1, 마루젠(2005년)] 혹은 그것에 준한 방법에 의해 얻을 수 있다.
화합물 (Va) 및 화합물 (Vb)는 시판품 또는 공지된 방법[예컨대, 제5판 실험화학강좌 14 유기 화합물의 합성 II」, 제5판, p. 1, 마루젠(2005년)] 혹은 그것에 준한 방법에 의해 얻을 수 있다.
R1과 R2가 동일한 경우의 화합물 (Ic)는 공정 5에 있어서, 2당량 이상의 화합물 (Va)를 이용함으로써 얻을 수 있다.
제조법 4
화합물 (I) 중, L3은 단결합이고, R3은 수소 원자이며, X3 및 Y가 존재하지 않는, 화합물 (Id)는 이하의 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00006
(상기 식에서, R1, R2, L1, L2, X1, X2, a 및 b는 각각 상기와 동일하다.)
공정 7
화합물 (Id)는 화합물 (VI)과 클로로포름산 1-클로로에틸을 불활성 용매 중에서, -20℃와 230℃ 사이의 온도에서 5분간∼100시간 동안 처리하고, 계속해서 1∼대과잉량의 알코올을 첨가하여 -20℃와 230℃ 사이의 온도에서 5분간∼100시간 동안 처리함으로써 제조할 수 있다.
불활성 용매로는 예컨대 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈 등을 들 수 있고, 이들은 단독으로 또는 혼합하여 이용된다.
알코올로는 예컨대 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올 등을 들 수 있고, 이들은 단독으로 또는 혼합하여 이용된다.
화합물 (VI)는 제조법 1, 제조법 2 또는 제조법 3의 방법에 준한 방법에 의해 얻을 수 있다.
제조법 5
화합물 (I) 중, L3은 단결합이고, R3은 -CHRARB(RA 및 RB는 동일하거나 또는 상이하게 수소 원자, 탄소수 1∼5의 알킬, 탄소수 3∼5의 알케닐, 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일, 모르폴린-3-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼5의 알킬 혹은 탄소수 3∼5의 알케닐이거나, 또는 인접하는 탄소 원자와 함께 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일 혹은 피페리딘-4-일을 형성하고, RA 및 RB가 함께 수소 원자인 경우를 제외하고, RA 및 RB의 알킬, 치환된 알킬의 알킬 부분, 알케닐 및 치환된 알케닐의 알케닐 부분의 탄소수의 합계는 1∼5이며, RA 및 RB 중 어느 하나가 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일 또는 모르폴린-3-일인 경우에는, 상기 RA 및 RB의 다른 한쪽은 수소 원자, 탄소수 1∼5의 알킬, 탄소수 3∼5의 알케닐, 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일, 모르폴린-3-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1개 또는 2개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼5의 알킬 혹은 탄소수 3∼5의 알케닐이며, RA 및 RB가 치환된 알킬 또는 알케닐인 경우에는, 상기 치환기의 총수는 2 또는 3임)이며, X3 및 Y가 존재하지 않는, 화합물 (Ie)는 이하의 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00007
(상기 식에서, R1, R2, RA, RB, L1, L2, X1, X2, a 및 b는 각각 상기와 동일하다.)
공정 8
화합물 (Ie)는 화합물 (Id)를 바람직하게는 1∼10당량의 화합물 (VII)와, 용매 중, 바람직하게는 1∼대과잉량의 환원제 및 필요에 따라 바람직하게는 1∼10당량의 산의 존재 하, -20℃와 150℃ 사이의 온도에서 5분간∼72시간 동안 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
용매로는 예컨대 메탄올, 에탄올, 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 물 등을 들 수 있고, 이들은 단독으로 또는 혼합하여 이용된다.
환원제로는 예컨대 트리아세톡시수소화붕소나트륨, 시안화수소화붕소나트륨 등을 들 수 있다.
산으로는 예컨대 염산, 아세트산 등을 들 수 있다.
화합물 (VII)은 시판품 또는 공지된 방법[예컨대, 제5판 실험화학 강좌 15 유기 화합물의 합성 III」, 제5판, p. 1, 마루젠(2005년), 제5판 실험화학 강좌 15 유기 화합물의 합성 III」, 제5판, p. 153, 마루젠(2005년)] 혹은 그것에 준하여 얻을 수 있다.
제조법 6
화합물 (I) 중, L3이 단결합이고, X3 및 Y가 존재하지 않는, 화합물 (If)는 이하의 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00008
(상기 식에서, R1, R2, R3, L1, L2, X1, X2, a, b 및 Z는 각각 상기와 동일하다.)
공정 9
화합물 (If)는 화합물 (Id)를 화합물 (VIII)과, 무용매로 또는 용매 중, 필요에 따라 바람직하게는 1∼10당량의 첨가제의 존재 하, 및/또는 필요에 따라 바람직하게는 1∼10당량의 염기의 존재 하, -20℃와 150℃ 사이의 온도에서 5분간∼72시간 동안 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
용매로는 예컨대 메탄올, 에탄올, 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 피리딘, 물 등을 들 수 있고, 이들은 단독으로 또는 혼합하여 이용된다.
염기로는 예컨대 탄산칼륨, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 나트륨메톡시드, 칼륨 tert-부톡시드, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, 피리딘, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센(DBU) 등을 들 수 있다.
첨가제로는 예컨대 요오드화나트륨, 요오드화칼륨, 요오드화테트라 n-부틸암모늄 등을 들 수 있다.
화합물 (VIII)은 시판품으로서 얻을 수 있거나 또는 공지된 방법[예컨대, 제5판 실험화학 강좌 13 유기 화합물의 합성 I」, 제5판, p. 374, 마루젠(2005년)] 혹은 그것에 준하여 얻을 수 있다.
제조법 7
화합물 (I) 중, L3이 -CO-이고, X3 및 Y가 존재하지 않는, 화합물 (Ig)는 이하의 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00009
(상기 식에서, R1, R2, R3, L1, L2, X1, X2, a 및 b는 각각 상기와 동일하다.)
공정 10
화합물 (Ig)는 화합물 (Id)와 화합물 (IX)를 용매 중에서, -20℃와 150℃ 사이의 온도에서 1당량∼대과잉량의 축합제로 5분간∼100시간 동안 처리함으로써 제조할 수 있다. 이 때, 필요에 따라 바람직하게는 0.01∼10당량의 첨가제의 존재 하, 및/또는 필요에 따라 바람직하게는 1∼대과잉량의 염기를 첨가하여 반응을 촉진시킬 수도 있다.
용매로는 예컨대 메탄올, 에탄올, 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 디메틸술폭시드, 물 등을 들 수 있고, 이들은 단독으로 또는 혼합하여 이용된다.
축합제, 첨가제 및 염기로는 각각 제조법 2와 동일한 것을 들 수 있다.
화합물 (IX)는, 시판품 또는 공지된 방법[예컨대, 제5판 실험화학 강좌 16 유기 화합물의 합성 IV」, 제5판, p. 1, 마루젠(2005년)] 혹은 그것에 준하여 얻을 수 있다.
제조법 8
화합물 (I) 중, L3이 -CO-O-이고, X3 및 Y가 존재하지 않는, 화합물 (Ih)는 이하의 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00010
(상기 식에서, R1, R2, R3, L1, L2, X1, X2, a 및 b는 각각 상기와 동일하다.)
공정 11
화합물 (Ih)는 화합물 (Id)를 화합물 (X)과, 무용매로 또는 용매 중, 필요에 따라 바람직하게는 1∼10당량의 첨가제의 존재 하, 및/또는 필요에 따라 바람직하게는 1∼10당량의 염기의 존재 하, -20℃와 150℃ 사이의 온도에서 5분간∼72시간 동안 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
용매 및 첨가제로는 제조법 2와 동일한 것을 들 수 있다.
염기로는 예컨대 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, 피리딘, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센 등을 들 수 있다.
화합물 (X)은 시판품 또는 공지된 방법[예컨대, “저널 오브 아메리칸 케미컬 소사이어티(J. Am. Chem. Soc.)”, 1981년, 제103권, p. 4194-4199] 혹은 그것에 준한 방법에 의해 얻을 수 있다.
제조법 9
화합물 (I) 중, L3은 단결합이고, R3은 -CH2-C(OH)RCRD(RC 및 RD는 동일하거나 또는 상이하게 수소 원자, 탄소수 1∼4의 알킬, 탄소수 3∼4의 알케닐, 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일, 모르폴린-3-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1개 또는 2개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼4의 알킬 혹은 탄소수 3∼4의 알케닐이며, RC 및 RD가 함께 수소 원자인 경우를 제외하고, RC 및 RD의 알킬, 치환된 알킬의 알킬 부분, 알케닐 및 치환된 알케닐의 알케닐 부분의 탄소수의 합계는 1∼4이며, RC 및 RD 중 어느 하나가 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일 또는 모르폴린-3-일인 경우에는, 이 RC 및 RD의 다른 한쪽은 수소 원자, 탄소수 1∼4의 알킬, 탄소수 3∼4의 알케닐, 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일, 모르폴린-3-일 또는 1개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼4의 알킬 혹은 탄소수 3∼4의 알케닐이고, RC 및 RD가 치환된 알킬 또는 알케닐인 경우에는, 상기 치환기의 총수는 2임)이며, X3 및 Y가 존재하지 않는, 화합물 (Ii)는 이하의 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00011
(상기 식에서, R1, R2, RC, RD, L1, L2, X1, X2, a 및 b는 각각 상기와 동일하다.)
공정 12
화합물 (Ii)는 화합물 (Id)와 화합물 (XI)를 용매 중 또는 무용매로, 0℃와 230℃ 사이의 온도에서 5분간∼100시간 동안 처리함으로써 제조할 수 있다.
용매로는 예컨대 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 디메틸술폭시드 등을 들 수 있고, 이들은 단독으로 또는 혼합하여 이용된다.
화합물 (XI)는 시판품 또는 공지된 방법[예컨대 제5판 실험화학 강좌 17 유기 화합물의 합성 V」, 제5판, p. 186, 마루젠(2005년)] 혹은 그것에 준하여 얻을 수 있다.
제조법 10
화합물 (I) 중, L3이 단결합이고, X3이 탄소수 1∼6의 알킬 또는 탄소수 3∼6의 알케닐이며, Y가 제약상 허용되는 음이온인 화합물 (Ij)는 이하의 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00012
(상기 식에서, R1, R2, R3, L1, L2, X1, X2, X3, Y, a, b 및 Z는 각각 상기와 동일하다.)
공정 13 및 공정 14
화합물 (Ij-A)는 화합물 (If)와 화합물 (XII)를 용매 중 또는 무용매로, 0℃와 230℃ 사이의 온도에서 5분간∼100시간 동안 처리함으로써 제조할 수 있다. 화합물 (Ij)는 화합물 (Ij-A)를 Y형의 음이온 교환 수지로 처리함으로써 제조할 수 있다.
용매로는 예컨대 메탄올, 에탄올, 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, 피리딘 등을 들 수 있고, 이들은 단독으로 또는 혼합하여 이용된다.
화합물 (XII)는 시판품 또는 공지된 방법[예컨대, 제5판 실험화학 강좌 13 유기 화합물의 합성 I」, 제5판, p. 374, 마루젠(2005년)] 혹은 그것에 준하여 얻을 수 있다.
또한, Z와 Y가 동일한 경우에는, 공정 14를 생략함으로써 (Ij)를 제조할 수 있다.
제조법 11
화합물 (I) 중, L3은 단결합이고, R3은 수소 원자이며, X3 및 Y가 존재하지 않는, 화합물 (Id)는 이하의 방법에 의해서도 제조할 수 있다.
Figure 112012097261899-pct00013
(상기 식에서, R1, R2, L1, L2, X1, X2, a 및 b는 각각 상기와 동일하다.)
공정 15
화합물 (Id)는 화합물 (XIII)를 무용매로 또는 용매 중, 바람직하게는 1∼대과잉량의 산의 존재 하, -20℃와 150℃ 사이의 온도에서 5분간∼100시간 동안 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
용매로는 제조법 2와 동일한 것을 들 수 있다.
산으로는 예컨대 트리플루오로아세트산, 염산, 황산을 들 수 있다.
화합물 (XIII)은 제조법 1, 제조법 2 또는 제조법 3의 방법에 준한 방법에 의해 얻을 수 있다.
화합물 (I)에 있어서의 R1, R2 또는 R3에 포함되는 작용기의 변환은 공지된 방법[예컨대, 컴프리헨시브 오가닉 트랜스포메이션즈 제2판(Comprehensive Organic Transformations 2nd edition), R. C. 라록(Larock) 저, Vch Verlagsgesellschaft Mbh(1999년) 등에 기재된 방법]에 의해 또는 이들에 준하여 행할 수도 있다.
상기 각 제조법에 있어서의 중간체 및 목적 화합물은, 유기 합성 화학에서 상용되는 분리 정제법, 예컨대, 여과, 추출, 세정, 건조, 농축, 재결정, 각종 크로마토그래피 등으로 처리하여 단리 정제할 수 있다. 또한, 중간체에 있어서는 특별히 정제하지 않고 다음 반응에 제공하는 것도 가능하다.
화합물 (I)에 있어서, 구조 중의 질소 원자 상의 고립 전자쌍에 수소 이온이 배위하여도 좋고, 이 질소 원자는, 제약상 허용되는 음이온(상기와 동일)과 염을 형성하고 있어도 좋으며, 화합물 (I)에는 이 질소 원자 상에 고립 전자쌍에 수소 이온이 배위한 화합물도 포함한다. 또한, 본 발명에 있어서, X3이 존재하지 않는 경우란, 수소 이온이 배위하고 있는 경우도 포함한다.
화합물 (I) 중에는 기하 이성체, 광학 이성체 등의 입체 이성체, 호변 이성체 등이 존재할 수 있는 것도 있지만, 화합물 (I)은 이들을 포함시켜 모든 가능한 이성체 및 이들의 혼합물을 포함한다.
화합물 (I) 중의 각 원자의 일부 또는 전부는 각각 대응하는 동위체 원자로 치환되어 있어도 좋고, 화합물 (I)은 이들 동위체 원자로 치환된 화합물도 포함한다. 예컨대, 화합물 (I) 중의 수소 원자의 일부 또는 전부는 원자량 2의 수소 원자(중수소 원자)여도 좋다.
화합물 (I) 중의 각 원자의 일부 또는 전부가 각각 대응하는 동위체 원자로 치환된 화합물은, 시판되고 있는 빌딩 블록을 이용하여 상기 각 제조법과 동일한 방법에 의해 제조할 수 있다. 또한, 화합물 (I) 중의 수소 원자의 일부 또는 전부가 중수소 원자로 치환된 화합물은, 예컨대, 1) 과산화중수소를 이용하여 염기성 조건 하에 카르복실산 등을 중수소화하는 방법(미국 특허 제3849458호 명세서 참조), 2) 이리듐 착체를 촉매로서 이용하고, 중수를 중수소원으로서 이용하여 알코올, 카르복실산 등을 중수소화하는 방법[저널 오브 아메리칸 케미컬 소사이어티(J. Am. Chem. Soc.), Vol. 124, No. 10,2092(2002) 참조], 3) 팔라듐 카본을 촉매로서 이용하고, 중수소원으로서 중수소 가스만을 이용하여 지방산을 중수소화하는 방법[리피즈(LIPIDS), Vol. 9, No. 11, 913(1974) 참조], 4) 백금, 팔라듐, 로듐, 루테늄, 이리듐 등의 금속을 촉매로서 이용하고, 중수 또는 중수 및 중수소 가스를 중수소원으로서 이용하여 아크릴산, 아크릴산메틸, 메타크릴산, 메타크릴산메틸 등을 중수소화하는 방법(일본 특허 공고 평성 제5-19536호 공보, 일본 특허 공개 소화 제61-277648호 공보 및 일본 특허 공개 소화 제61-275241호 공보 참조), 5) 팔라듐, 니켈, 구리 또는 아크롬산구리 등의 촉매를 이용하고, 중수를 중수소원으로서 이용하여 아크릴산, 메타크릴산메틸 등을 중수소화하는 방법(일본 특허 공개 소화 제63-198638호 공보 참조) 등을 이용하여 합성할 수도 있다.
본 발명에 의해 얻어지는 화합물 (I)의 구체예를 표 1 내지 표 17에 나타낸다. 단, 본 발명의 화합물은 이들에 한정되는 것은 아니다.
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Figure 112012097261899-pct00015
Figure 112012097261899-pct00016
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또한, 본 발명에서 이용되는 핵산으로는 뉴클레오티드 및/또는 이 뉴클레오티드와 동등한 기능을 갖는 분자가 중합한 분자라면, 어떠한 분자여도 좋고, 예컨대 리보뉴클레오티드의 중합체인 RNA, 데옥시리보뉴클레오티드의 중합체인 DNA, RNA와 DNA로 이루어진 키메라 핵산 및 이들 핵산 중 1개 이상의 뉴클레오티드가 이 뉴클레오티드와 동등한 기능을 갖는 분자로 치환된 뉴클레오티드 중합체를 들 수 있다. 또한, 뉴클레오티드 및/또는 이 뉴클레오티드와 동등한 기능을 갖는 분자가 중합한 분자를 1개 이상 포함하는 유도체도, 본 발명의 핵산에 포함된다. 또한, 본 발명에 있어서, RNA 중의 우리딘(U)과, DNA에 있어서는 티민(T)은 각각 대체할 수 있다.
뉴클레오티드와 동등한 기능을 갖는 분자로는 예컨대 뉴클레오티드 유도체 등을 들 수 있다.
뉴클레오티드 유도체로는 뉴클레오티드에 수식을 행한 분자라면 어떠한 분자여도 좋지만, 예컨대 RNA 또는 DNA와 비교하여 뉴클레아제 내성을 향상시키거나 혹은 그 밖의 분해 인자로부터 안정화시키기 위해서, 상보쇄 핵산과의 친화도(affinity)를 높이기 위해서, 세포 투과성을 높이기 위해서 또는 가시화시키기 위해서, 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드에 수식을 행한 분자 등이 적합하게 이용된다.
뉴클레오티드 유도체로는 예컨대 당부 수식 뉴클레오티드, 인산디에스테르 결합 수식 뉴클레오티드, 염기 수식 뉴클레오티드 등을 들 수 있다.
당부 수식 뉴클레오티드로는 뉴클레오티드의 당의 화학 구조의 일부 또는 전부에 대하여, 임의의 치환기로 수식 혹은 치환한 것, 또는 임의의 원자로 치환한 것이면 어떠한 것이어도 좋지만, 2'-수식 뉴클레오티드가 바람직하게 이용된다.
당부 수식 뉴클레오티드의 수식기로는 예컨대 2'-시아노, 2'-알킬, 2'-치환 알킬, 2'-알케닐, 2'-치환 알케닐, 2'-할로겐, 2'-O-시아노, 2'-O-알킬, 2'-O-치환 알킬, 2'-O-알케닐, 2'-O-치환 알케닐, 2'-S-알킬, 2'-S-치환 알킬, 2'-S-알케닐, 2'-S-치환 알케닐, 2'-아미노, 2'-NH-알킬, 2'-NH-치환 알킬, 2'-NH-알케닐, 2'-NH-치환 알케닐, 2'-SO-알킬, 2'-SO-치환 알킬, 2'-카르복시, 2'-CO-알킬, 2'-CO-치환 알킬, 2'-Se-알킬, 2'-Se-치환 알킬, 2'-SiH2-알킬, 2'-SiH2-치환 알킬, 2'-ONO2, 2'-NO2, 2'-N3, 2'-아미노산 잔기(아미노산의 카르복실산으로부터 수산기가 제거된 것), 2'-O-아미노산 잔기(상기 아미노산 잔기와 동일)를 들 수 있고, 펩티드 핵산(PNA)[Acc. Chem. Res., 32, 624(1999)], 옥시펩티드핵산(OPNA)[J. Am. Chem. Soc., 123, 4653(2001)], 펩티드리보핵산(PRNA)[J. Am. Chem. Soc., 122, 6900(2000)] 등도 더 들 수 있다. 또한, 2' 위의 수식기가 4' 위의 탄소 원자에 가교한 구조를 갖는 가교 구조형 인공 핵산(Bridged Nucleic Acid)(BNA), 보다 구체적으로는, 2'위의 산소 원자와 4'위의 탄소 원자가 메틸렌을 통해 가교한 잠금 인공 핵산(Locked Nucleic Acid)(LNA) 및 에틸렌 가교 구조형 인공 핵산(Ethylene bridged nucleic acid)(ENA)[Nucleic Acid Research, 32, e175(2004)] 등도 본 발명에 있어서의 2'위에 있어서 수식기로 치환된 리보오스에 포함된다.
당부 수식 뉴클레오티드의 수식기로서, 2'-시아노, 2'-할로겐, 2'-O-시아노, 2'-알킬, 2'-치환 알킬, 2'-O-알킬, 2'-O-치환 알킬, 2'-O-알케닐, 2'-O-치환 알케닐, 2'-Se-알킬, 2'-Se-치환 알킬이 바람직하고, 2'-시아노, 2'-플루오로, 2'-클로로, 2'-브로모, 2'-트리플루오로메틸, 2'-O-메틸, 2'-O-에틸, 2'-O-이소프로필, 2'-O-트리플루오로메틸, 2'-O-[2-(메톡시)에틸], 2'-O-(3-아미노프로필), 2'-O-[2-(N,N-디메틸)아미노옥시]에틸, 2'-O-[3-(N,N-디메틸아미노)프로필], 2'-O-{2-[2-(N,N-디메틸아미노)에톡시]에틸}, 2'-O-[2-(메틸아미노)-2-옥소에틸], 2'-Se-메틸 등이 보다 바람직하고, 2'-O-메틸, 2'-O-에틸, 2'-플루오로 등이 더욱 바람직하며, 2'-O-메틸, 2'-O-에틸이 가장 바람직하다.
또한, 당부 수식 뉴클레오티드의 수식기는, 그 크기로부터 바람직한 범위를 정의할 수도 있고, 플루오로의 크기로부터 -O-부틸의 크기에 상당하는 것이 바람직하며, -O-메틸의 크기로부터 -O-에틸의 크기에 상당하는 크기의 것이 보다 바람직하다.
당부 수식 뉴클레오티드의 수식기에 있어서의 알킬은, 본 발명의 양이온성 지질에 있어서의 탄소수 1∼6의 알킬과 동일하다.
당부 수식 뉴클레오티드의 수식기에 있어서의 알케닐은, 본 발명의 양이온성 지질에 있어서의 탄소수 3∼6의 알케닐과 동일하다.
당부 수식 뉴클레오티드의 수식기에 있어서의 할로겐으로는 불소 원자, 염소 원자, 브롬 원자, 요오드 원자를 들 수 있다.
아미노산 잔기에 있어서의 아미노산으로는 예컨대 지방족 아미노산(구체적으로는, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신 등), 히드록시아미노산(구체적으로는, 세린, 트레오닌 등), 산성 아미노산(구체적으로는, 아스파라긴산, 글루타민산 등), 산성 아미노산아미드(구체적으로는, 아스파라긴, 글루타민 등), 염기성 아미노산(구체적으로는, 리신, 히드록시리신, 아르기닌, 오르니틴 등), 황 함유 아미노산(구체적으로는, 시스테인, 시스틴, 메티오닌 등), 이미노산(구체적으로는, 프롤린, 4-히드록시프롤린 등) 등을 들 수 있다.
당부 수식 뉴클레오티드의 수식기에 있어서의 치환 알킬 및 치환 알케닐의 치환기로는 예컨대 할로겐(상기와 동일), 히드록시, 술파닐, 아미노, 옥소, -O-알킬(이 -O-알킬의 알킬 부분은 상기 알킬과 동일), -S-알킬(이 -S-알킬의 알킬 부분은 상기 알킬과 동일), -NH-알킬(이 -NH-알킬의 알킬 부분은 상기 알킬과 동일), 디알킬아미노옥시(이 디알킬아미노옥시의 2개의 알킬은 동일하거나 또는 상이하고 상기 알킬과 동일), 디알킬아미노(이 디알킬아미노의 2개의 알킬은 동일하거나 또는 상이하고 상기 알킬과 동일), 디알킬아미노알킬렌옥시(이 디알킬아미노알킬렌옥시의 2개의 알킬은 동일하거나 또는 상이하고 상기 알킬과 동일하며, 알킬렌 부분은 상기 알킬로부터 수소 원자가 하나 제외된 것을 의미함) 등을 들 수 있고, 치환수는 바람직하게는 1∼3이다.
인산디에스테르 결합 수식 뉴클레오티드로서는, 뉴클레오티드의 인산디에스테르 결합의 화학 구조의 일부 또는 전부에 대하여, 임의의 치환기로 수식 혹은 치환한 것, 또는 임의의 원자로 치환한 것이면 어떠한 것이라도 좋고, 예컨대, 인산디에스테르 결합이 포스포로티오에이트 결합으로 치환된 뉴클레오티드, 인산디에스테르 결합이 포스포로디티오에이트 결합으로 치환된 뉴클레오티드, 인산디에스테르 결합이 알킬포스포네이트 결합으로 치환된 뉴클레오티드, 인산디에스테르 결합이 포스포로아미데이트 결합으로 치환된 뉴클레오티드 등을 들 수 있다.
염기 수식 뉴클레오티드로서는, 뉴클레오티드의 염기의 화학 구조의 일부 또는 전부에 대하여, 임의의 치환기로 수식 혹은 치환한 것, 또는 임의의 원자로 치환한 것이면 어떠한 것이라도 좋고, 예컨대, 염기 내의 산소 원자가 황 원자로 치환된 것, 수소 원자가 탄소수 1∼6의 알킬기로 치환된 것, 메틸기가 수소 원자 혹은 탄소수 2∼6의 알킬기로 치환된 것, 아미노기가 탄소수 1∼6의 알킬기, 탄소수 1∼6의 알카노일기 등의 보호기로 보호된 것을 들 수 있다.
또한, 뉴클레오티드 유도체로서, 뉴클레오티드 또는 당부, 인산디에스테르 결합 혹은 염기 중 1개 이상이 수식된 뉴클레오티드 유도체에 지질, 인지질, 페나진, 엽산, 페난트리딘, 안트라퀴논, 아크리딘, 플루오레세인, 로다민, 쿠마린, 색소 등, 별도의 화학 물질을 부가한 것도 들 수 있고, 구체적으로는, 5'-폴리아민 부가 뉴클레오티드 유도체, 콜레스테롤 부가 뉴클레오티드 유도체, 스테로이드 부가 뉴클레오티드 유도체, 담즙산 부가 뉴클레오티드 유도체, 비타민 부가 뉴클레오티드 유도체, Cy5 부가 뉴클레오티드 유도체, Cy3 부가 뉴클레오티드 유도체, 6-FAM 부가 뉴클레오티드 유도체 및 비오틴 부가 뉴클레오티드 유도체 등을 들 수 있다.
또한, 뉴클레오티드 유도체는, 핵산 내의 다른 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체와 알킬렌 구조, 펩티드 구조, 뉴클레오티드 구조, 에테르 구조, 에스테르 구조 및 이들 중 1개 이상을 조합시킨 구조 등의 가교 구조를 형성하여도 좋다.
본 발명에서 이용되는 핵산으로서는, 바람직하게는 표적 유전자의 발현을 억제하는 핵산을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 RNA 간섭(RNAi)을 이용한 표적 유전자의 발현 억제 작용을 갖는 핵산을 들 수 있다.
본 발명에서 이용되는 표적 유전자로서는, mRNA를 생성하여 발현되는 유전자라면 특별히 한정되지 않지만, 예컨대, 종양 또는 염증에 관련된 유전자가 바람직하고, 예컨대 혈관 내피 증식 인자(vascular endothelial growth factor, 이하 VEGF라 약기함), 혈관 내피 증식 인자 수용체(vascular endothelial growth factor receptor, 이하 VEGFR이라 약기함), 선유아세포 증식 인자, 선유아세포 증식 인자 수용체, 혈소판 유래 증식 인자, 혈소판 유래 증식 인자 수용체, 간세포 증식 인자, 간세포 증식 인자 수용체, 크루펠양 인자(Kruppel-like factor, 이하 KLF라 약기함), Ets 전사 인자, 핵 인자, 저산소 유도 인자 등의 단백질을 코딩하는 유전자 등을 들 수 있고, 구체적으로는 VEGF 유전자, VEGFR 유전자, 선유아세포 증식 인자 유전자, 선유아세포 증식 인자 수용체 유전자, 혈소판 유래 증식 인자 유전자, 혈소판 유래 증식 인자 수용체 유전자, 간세포 증식 인자 유전자, 간세포 증식 인자 수용체 유전자, KLF 유전자, Ets 전사 인자 유전자, 핵 인자 유전자, 저산소 유도 인자 유전자 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명에서 이용되는 표적 유전자로서는 예컨대 간장, 폐, 신장 또는 비장에 있어서 발현되는 유전자가 바람직하고, 예컨대 상기한 종양 또는 염증에 관련된 유전자, 비형 간염 바이러스 게놈, C형 간염 바이러스 게놈, 아포리포단백질(APO), 히드록시메틸글루타릴(HMG) CoA 환원 효소, 켁신 9형 세린프로테아제(PCSK9), 제12 인자, 글루카곤 수용체, 글루코코르티코이드 수용체, 류코트리엔 수용체, 트롬복산 A2 수용체, 히스타민 H1 수용체, 탄산 탈수 효소, 안지오텐신 변환 효소, 레닌, p53, 티로신포스파타아제(PTP), 나트륨 의존성 글루코오스 수송 담체, 종양 괴사 인자, 인터류킨 등의 단백질을 코딩하는 유전자 등을 들 수 있다.
표적 유전자의 발현을 억제하는 핵산으로서는, 예컨대 단백질 등을 코딩하는 유전자(표적 유전자)의 mRNA의 일부의 염기서열에 대하여 상보적인 염기서열을 포함하고, 또한 표적 유전자의 발현을 억제하는 핵산이라면, 예컨대 siRNA(short interference RNA), miRNA(micro RNA) 등의 이중쇄 핵산, shRNA(short hairpin RNA) 등의, 안티센스 핵산, 리보자임 단일쇄 핵산 등, 어느 쪽의 핵산을 이용하여도 좋지만, 이중쇄 핵산이 적합하게 이용된다.
표적 유전자의 mRNA의 일부의 염기서열에 대하여 상보적인 염기서열을 포함하는 핵산을 안티센스쇄 핵산이라 하고, 안티센스쇄 핵산의 염기서열에 대하여 상보적인 염기서열을 포함하는 핵산을 센스쇄 핵산이라고도 한다. 센스쇄 핵산은, 표적 유전자의 일부의 염기서열로 이루어진 핵산 그 자체 등, 안티센스쇄 핵산과 대합(對合)하여 이중쇄 형성부가 생기는 핵산을 말한다.
이중쇄 핵산이란, 2개의 쇄가 대합하여 이중쇄 형성부를 갖는 핵산을 말한다. 이중쇄 형성부란, 이중쇄 핵산을 구성하는 뉴클레오티드 또는 그 유도체가 염기쌍을 구성하여 이중쇄를 형성하고 있는 부분을 말한다. 이중쇄 형성부를 구성하는 염기쌍은 통상 15∼27 염기쌍으로서, 15∼25 염기쌍이 바람직하고, 15∼23 염기쌍이 보다 바람직하며, 15∼21 염기쌍이 더욱 바람직하고, 15∼19 염기쌍이 특히 바람직하다.
이중쇄 형성부의 안티센스쇄 핵산으로서는, 표적 유전자의 mRNA의 일부 서열로 이루어진 핵산, 또는 이 핵산에 있어서 1∼3 염기, 바람직하게는 1∼2 염기, 보다 바람직하게는 1 염기가 치환, 결실 혹은 부가되고, 또한 표적 단백질의 발현 억제 활성을 갖는 핵산이 적합하게 이용된다. 이중쇄 핵산을 구성하는 단일쇄의 핵산 길이는 통상 15∼30 염기로 이루어지지만, 15∼29 염기가 바람직하고, 15∼27 염기가 보다 바람직하며, 15∼25 염기가 더욱 바람직하고, 17∼23 염기가 특히 바람직하며, 19∼21 염기가 가장 바람직하다.
이중쇄 핵산을 구성하는 안티센스쇄, 센스쇄 중 어느 한쪽 또는 양쪽의 핵산은, 이중쇄 형성부에 계속되는 3'측 또는 5'측에 이중쇄를 형성하지 않는 추가의 핵산을 가져도 좋다. 이 이중쇄를 형성하지 않는 부분을 돌출부(오버행)라고도 한다.
돌출부를 갖는 이중쇄 핵산으로서는, 적어도 한쪽 쇄의 3' 말단 또는 5' 말단에 1∼4 염기, 통상은 1∼3 염기로 이루어진 돌출부를 갖는 것이 이용되지만, 2염기로 이루어진 돌출부를 갖는 것이 바람직하게 이용되며, dTdT 또는 UU로 이루어진 돌출부를 갖는 것이 보다 바람직하게 이용된다. 돌출부는, 안티센스쇄만, 센스쇄만 및 안티센스쇄와 센스쇄 모두를 가질 수 있지만, 안티센스쇄와 센스쇄의 양쪽에 돌출부를 갖는 이중쇄 핵산이 바람직하게 이용된다.
또한, 이중쇄 형성부에 계속되어 표적 유전자의 mRNA와 일부 또는 전부가 일치하는 서열, 또는 이중쇄 형성부에 계속되어 표적 유전자의 mRNA의 상보쇄의 염기서열과 일치하는 서열을 이용하여도 좋다. 또한, 표적 유전자의 발현을 억제하는 핵산으로서는, 예컨대 Dicer 등의 리보뉴클레아제의 작용에 의해 상기한 이중쇄 핵산을 생성하는 핵산 분자(국제 공개 제2005/089287호 팜플렛)나, 3' 말단이나 5' 말단의 돌출부를 갖고 있지 않은 이중쇄 핵산 등을 이용할 수도 있다.
또한, 상기한 이중쇄 핵산이 siRNA인 경우, 안티센스쇄는, 5' 말단측에서 3' 말단측을 향해 적어도 1∼17번째의 염기의 서열이, 표적 유전자의 mRNA의 연속되는 17 염기의 서열과 상보적인 염기의 서열로서, 바람직하게는, 상기 안티센스쇄는, 5' 말단측에서 3' 말단측을 향해 1∼19번째의 염기의 서열이, 표적 유전자의 mRNA의 연속되는 19 염기의 서열과 상보적인 염기의 서열이거나, 1∼21번째의 염기의 서열이, 표적 유전자의 mRNA의 연속되는 21 염기의 서열과 상보적인 염기의 서열이거나, 10∼25번째의 염기의 서열이, 표적 유전자의 mRNA의 연속되는 25 염기의 서열과 상보적인 염기의 서열이다.
또한, 본 발명에서 이용되는 핵산이 siRNA인 경우, 바람직하게는 이 핵산 중의 당의 10∼70%, 보다 바람직하게는 15∼60%, 더욱 바람직하게는 20∼50%가, 2'위에 있어서 수식기로 치환된 리보오스이다. 본 발명에 있어서의 리보오스의 2'위에 있어서 수식기로 치환되었다고 하는 것은, 2'위의 수산기가 수식기로 치환되어 있는 것을 의미하고, 리보오스의 2'위의 수산기와 입체 배치가 동일하여도 좋고 상이하여도 좋지만, 바람직하게는 리보오스의 2'위의 수산기와 입체 배치가 동일하다. 2'위에 있어서 수식기로 치환된 리보오스는, 당부 수식 뉴클레오티드에 있어서의 2'-수식 뉴클레오티드에 포함되고, 2'위에 있어서 수식기로 치환된 리보오스의 수식기는 2'-수식 뉴클레오티드의 수식기와 동일하다.
본 발명에서 이용되는 핵산에는, 핵산의 구조 중의 인산부, 에스테르부 등에 포함되는 산소 원자 등이, 예컨대 황 원자 등의 다른 원자로 치환된 유도체를 포함한다.
또한, 안티센스쇄 및 센스쇄의 5' 말단의 염기에 결합하는 당은, 각각 5'위의 수산기가, 인산기 혹은 상기한 수식기, 또는 생체 내의 핵산 분해 효소 등에 의해 인산기 혹은 상기한 수식기로 변환되는 기에 의해 수식되어 있어도 좋다.
또한, 안티센스쇄 및 센스쇄의 3' 말단의 염기에 결합하는 당은, 각각 3'위의 수산기가, 인산기 혹은 상기한 수식기, 또는 생체 내의 핵산 분해 효소 등에 의해 인산기 혹은 상기한 수식기로 변환되는 기에 의해 수식되어 있어도 좋다.
단일쇄의 핵산으로서는, 표적 유전자의 연속되는 15∼27 염기, 바람직하게는 15∼25 염기, 보다 바람직하게는 15∼23 염기, 더욱 바람직하게는 15∼21 염기, 특히 바람직하게는 15∼19 염기로 이루어진 서열의 상보 서열로 이루어진 핵산, 또는 이 핵산에 있어서 1∼3 염기, 바람직하게는 1∼2 염기, 보다 바람직하게는 1염기가 치환, 결실 혹은 부가되고, 또한 표적 단백질의 발현 억제 활성을 갖는 핵산이라면 어느 것이라도 좋지만, 15∼30 염기 이하, 바람직하게는 15∼29 염기, 보다 바람직하게는 15∼27 염기, 더욱 바람직하게는 15∼25 염기, 특히 바람직하게는 15∼23 염기의 단일쇄 핵산이 적합하게 이용된다.
단일쇄 핵산으로서, 상기한 이중쇄 핵산을 구성하는 안티센스쇄 및 센스쇄를, 스페이서 서열을 통해 연결한 것을 이용하여도 좋다. 스페이서 올리고 뉴클레오티드로서는 6∼12 염기의 단일쇄 핵산 분자가 바람직하고, 그 5' 말단측의 서열은 2개의 U인 것이 바람직하다. 스페이서 올리고 뉴클레오티드의 예로서, UUCAAGAGA의 서열로 이루어진 핵산을 들 수 있다. 스페이서 올리고 뉴클레오티드에 의해 연결될 수 있는 안티센스쇄 및 센스쇄의 순서는 어느 쪽이 5'측이 되어도 좋다. 상기 단일쇄 핵산으로서는 스템 루프 구조에 의해 이중쇄 형성부를 갖는 shRNA 등의 단일쇄 핵산인 것이 바람직하다. shRNA 등의 단일쇄 핵산은 통상 50∼70 염기 길이이다.
리보뉴클레아제 등의 작용에 의해, 상기한 단일쇄 핵산 또는 이중쇄 핵산을 생성하도록 설계한, 70 염기 길이 이하, 바람직하게는 50 염기 길이 이하, 더욱 바람직하게는 30 염기 길이 이하의 핵산을 이용하여도 좋다.
또한, 본 발명에서 이용되는 핵산은, 기지의 RNA 또는 DNA 합성법 및 RNA 또는 DNA 수식법을 이용하여 제조하면 좋다. 예컨대 홋카이도 시스템 사이언스 주식회사 등에 화학 합성을 의뢰하여 얻을 수 있다.
본 발명의 조성물로서는, 예컨대 본 발명의 양이온성 지질과 핵산과의 복합 입자, 또는 본 발명의 양이온성 지질에 중성 지질 및/또는 고분자를 조합한 것과 핵산과의 복합 입자를 함유하는 조성물, 이 복합 입자 및 이 복합 입자를 봉입하는 지질막으로 구성된 지질 미립자 등을 들 수 있다. 이 지질 미립자로서는 상기 복합 입자 및 이 복합 입자를 봉입하는 지질 이중막으로 구성된 리포좀을 함유하는 조성물 등을 들 수 있다. 상기 복합 입자로서는 핵산과 지질 이중층으로 이루어진 막과의 복합체, 핵산과 리포좀과의 복합체, 핵산과 미셀과의 복합체 등을 들 수 있고, 바람직하게는 핵산과 미셀과의 복합체 또는 핵산과 리포좀과의 복합체를 들 수 있다.
본 발명에 있어서의 조성물은, 공지된 제조 방법 또는 그것에 준하여 제조할 수 있고, 어떠한 제조 방법으로 제조된 것이어도 좋다. 예컨대, 조성물의 하나인 리포좀의 제조에는, 공지된 리포좀의 조제 방법을 적용할 수 있다. 공지된 리포좀의 조제 방법으로는 예컨대 뱅햄(Bangham) 등의 리포좀 조제법[“저널 오브 몰레큘러 바이올로지(J. Mol. Biol.)”, 1965년, 제13권, p. 238-252 참조], 에탄올 주입법[“저널 오브 셀 바이올로지(J. Cell Biol.)”, 1975년, 제66권, p. 621-634 참조], 프렌치 프레스법[“에프이비에스 레터즈(FEBS Lett.)”, 1979년, 제99권, p. 210-214 참조], 동결 융해법[“아카이브스 오브 바이오케미스트리 앤드 바이오피직스(Arch. Biochem. Biophys.)”, 1981년, 제212권, p. 186-194 참조], 역상 증발법[“프로시딩즈 오브 더 내셔널 아카데미 오브 사이언스 유나이티드 스테이츠 오브 아메리카(Proc. Natl. Acad. Sci. USA)”, 1978년, 제75권, p. 4194-4198 참조] 또는 pH 구배법(예컨대 일본 특허 제2572554호 공보, 일본 특허 제2659136호 공보 등 참조) 등을 들 수 있다. 리포좀의 제조시에 리포좀을 분산시키는 용액으로서는 예컨대 물, 산, 알칼리, 여러 가지 완충액, 생리적 식염액 또는 아미노산 수액 등을 이용할 수 있다. 또한, 리포좀의 제조시에는, 예컨대 시트르산, 아스코르브산, 시스테인 또는 에틸렌디아민사아세트산(EDTA) 등의 항산화제, 예컨대 글리세린, 포도당 또는 염화나트륨 등의 등장화제 등의 첨가도 가능하다. 또한, 지질 등을 예컨대 에탄올 등의 유기 용매에 용해하고, 용매를 증류 제거한 후, 생리 식염수 등을 첨가, 진탕 교반하고, 리포좀을 형성시킴으로써도 리포좀을 제조할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은, 예컨대, 본 발명의 양이온성 지질을 클로로포름에 미리 용해하고, 계속해서 핵산의 수용액과 메탄올을 첨가하여 혼합하여 양이온성 지질/핵산의 복합체를 형성시키며, 또한 클로로포름층을 취출하고, 이것에 폴리에틸렌글리콜화 인지질과 중성의 지질과 물을 첨가하여 유중수형(W/O) 에멀젼을 형성하고, 역상 증발법으로 처리하여 제조하는 방법(일본 특허 공표 제2002-508765호 공보 참조)나, 핵산을, 산성 전해질 수용액에 용해하고, 지질(에탄올 중)을 첨가하여 에탄올 농도를 20 v/v%까지 낮추어 상기 핵산 내포 리포좀을 조제하고, 사이징 여과하여, 투석에 의해 과잉의 에탄올을 제거한 후, 시료를 pH를 더 높여서 투석하여 리포좀 표면에 부착된 핵산을 제거하여 제조하는 방법(일본 특허 공표 제2002-501511호 공보 및 바이오키미카 엣 바이오피지카 악타(biochimica et Biophysica Acta), 2001년, 제1510권, p. 152-166 참조) 등에 의해 제조할 수 있다.
본 발명의 조성물 중, 본 발명의 양이온성 지질과 핵산과의 복합 입자, 또는 본 발명의 양이온성 지질에 중성 지질 및/또는 고분자를 조합한 것과 핵산과의 복합 입자 및 이 복합 입자를 봉입한 지질 이중막으로 구성된 리포좀은, 예컨대, 국제 공개 제02/28367호 팜플렛 및 국제 공개 제2006/080118호 팜플렛 참조 등에 기재한 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.
중성 지질로는 단순 지질, 복합 지질 또는 유도 지질 중 어떠한 것이라도 좋고, 예컨대 인지질, 글리세로 당지질, 스핑고 당지질, 스핑고이드 또는 스테롤 등을 들 수 있지만 이들에 한정되지 않는다.
중성 지질에 있어서의 인지질로는 예컨대 포스파티딜콜린[구체적으로는 대두 포스파티딜콜린, 난황 포스파티딜콜린(EPC), 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린(POPC), 디미리스토일포스파티딜콜린(DMPC), 디올레오일포스파티딜콜린(DOPC) 등], 포스파티딜에탄올아민[구체적으로는 디스테아로일포스파티딜에탄올아민(DSPE), 디팔미토일포스파티딜에탄올아민(DPPE), 디올레오일포스파티딜에탄올아민(DOPE), 디미리스토일포스파티딜에탄올아민(DMPE), 16-0-모노메틸 PE, 16-0-디메틸 PE, 18-1-트랜스 PE, 팔미토일올레오일-포스파티딜에탄올아민(POPE), 1-스테아로일-2-올레오일-포스파티딜에탄올아민(SOPE) 등], 글리세로 인지질(구체적으로는 포스파티딜세린, 포스파티딘산, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨, 팔미토일올레오일포스파티딜글리세롤(POPG), 리조포스파티딜콜린 등), 스핑고 인지질(구체적으로는 스핑고 미엘린, 세라미드포스포에탄올아민, 세라미드포스포글리세롤, 세라미드포스포글리세로인산 등), 글리세로 포스포노지질, 스핑고 포스포노지질, 천연 레시틴(구체적으로는 난황 레시틴, 대두 레시틴 등) 또는 수소 첨가 인지질(구체적으로는 수소 첨가 대두 포스파티딜콜린 등) 등의 천연 또는 합성의 인지질을 들 수 있다.
중성 지질에 있어서의 글리세로 당지질로는 예컨대 술폭시리보실글리세리드, 디글리코실디글리세리드, 디갈락토실디글리세리드, 갈락토실디글리세리드 또는 글리코실디글리세리드 등을 들 수 있다.
중성 지질에 있어서의 스핑고 당지질로는 예컨대 갈락토실 세레브로시드, 락토실 세레브로시드 또는 강글리오시드 등을 들 수 있다.
중성 지질에 있어서의 스핑고이드로는 예컨대 스핑간, 이코사스핑간, 스핑고신 또는 이들의 유도체 등을 들 수 있다. 유도체로는 예컨대 스핑간, 이코사스핑간 또는 스핑고신 등의 -NH2를 -NHCO(CH2)xCH3(식 중, x는 0∼18의 정수이며, 그 중에서도 6, 12 또는 18이 바람직함)으로 변환한 것 등을 들 수 있다.
중성 지질에 있어서의 스테롤로는 예컨대 콜레스테롤, 디히드로콜레스테롤, 라노스테롤, β-시토스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라시카스테롤, 에르고카스테롤, 푸코스테롤 또는 3β-[N-(N',N'-디메틸아미노에틸)카르바모일]콜레스테롤(DC-Chol) 등을 들 수 있다.
고분자로는 예컨대 단백질, 알부민, 덱스트란, 폴리펙트(polyfect), 키토산, 덱스트란 황산, 예컨대 폴리-L-리신, 폴리에틸렌이민, 폴리아스파라긴산, 스티렌말레산 공중합체, 이소프로필아크릴아미드-아크릴피롤리돈 공중합체, 폴리에틸렌글리콜 수식 덴드리머, 폴리젖산, 폴리젖산폴리글리콜산 또는 폴리에틸렌글리콜화폴리젖산 등의 고분자 또는 이들 염의 1이상을 포함하는 미셀을 들 수 있다.
여기서, 고분자에 있어서의 염은 예컨대 금속염, 암모늄염, 산부가염, 유기아민 부가염, 아미노산 부가염 등을 포함한다. 금속염으로는 예컨대 리튬염, 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리 금속염, 마그네슘염, 칼슘염 등의 알칼리 토류 금속염, 알루미늄염 또는 아연염 등을 들 수 있다. 암모늄염으로는 예컨대 암모늄 또는 테트라메틸암모늄 등의 염을 들 수 있다. 산부가염으로는 예컨대 염산염, 황산염, 질산염 또는 인산염 등의 무기산염 및 아세트산염, 말레산염, 푸마르산염 또는 시트르산염 등의 유기산염을 들 수 있다. 유기아민 부가염으로는 예컨대 모르폴린 또는 피페리딘 등의 부가염을 들 수 있다. 아미노산 부가염으로는 예컨대 글리신, 페닐알라닌, 아스파라긴산, 글루타민산 또는 리신 등의 부가염을 들 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서의 조성물은, 예컨대 당, 펩티드, 핵산 및 수용성 고분자로부터 선택되는 1개 이상의 물질의 지질 유도체 혹은 지방산 유도체 또는 계면활성제 등을 함유할 수 있다. 당, 펩티드, 핵산 및 수용성 고분자로부터 선택되는 1개 이상의 물질의 지질 유도체 혹은 지방산 유도체 또는 계면활성제는, 복합 입자에 함유되어도 좋고, 복합 입자 외에 첨가하여 이용하여도 좋다.
당, 펩티드, 핵산 및 수용성 고분자로부터 선택되는 1개 이상의 물질의 지질 유도체 혹은 지방산 유도체 또는 계면활성제로는, 바람직하게는, 당지질 또는 수용성 고분자의 지질 유도체 혹은 지방산 유도체를 들 수 있고, 보다 바람직하게는, 수용성 고분자의 지질 유도체 또는 지방산 유도체를 들 수 있다. 당, 펩티드, 핵산 및 수용성 고분자로부터 선택되는 1개 이상의 물질의 지질 유도체 혹은 지방산 유도체 또는 계면활성제는, 분자의 일부가 조성물의 다른 구성 성분과 예컨대 소수성 친화력, 정전적 상호 작용 등에 의해 결합하는 성질을 지니며, 다른 부분이 조성물의 제조시의 용매와 예컨대 친수성 친화력, 정전적 상호 작용 등에 의해 결합하는 성질을 지닌 2면성을 지닌 물질인 것이 바람직하다.
당, 펩티드 또는 핵산의 지질 유도체 또는 지방산 유도체로는 예컨대 자당, 소르비톨, 젖당 등의 당, 예컨대 카제인 유래 펩티드, 난백 유래 펩티드, 대두 유래 펩티드, 글루타치온 등의 펩티드 또는 예컨대 DNA, RNA, 플라스미드, siRNA, ODN 등의 핵산과, 상기 조성물의 정의 중에서 예로 든 중성 지질 혹은 본 발명의 양이온성 지질 또는 예컨대 스테아르산, 팔미트산, 미리스트산, 라우르산 등의 지방산이 결합하여 이루어진 것 등을 들 수 있다.
또한, 당의 지질 유도체 또는 지방산 유도체로는 예컨대 상기 조성물의 정의 중에서 예로 든 글리세로 당지질 또는 스핑고 당지질 등도 포함된다.
수용성 고분자의 지질 유도체 또는 지방산 유도체로는 예컨대 폴리에틸렌글리콜, 폴리글리세린, 폴리에틸렌이민, 폴리비닐알코올, 폴리아크릴산, 폴리아크릴아미드, 올리고당, 덱스트린, 수용성 셀룰로오스, 덱스트란, 콘드로이친황산, 폴리글리세린, 키토산, 폴리비닐피롤리돈, 폴리아스파라긴산아미드, 폴리-L-리신, 만난, 풀루란, 올리고글리세롤 등 또는 이들의 유도체와, 상기 조성물의 정의 중에서 예로 든 중성 지질 혹은 본 발명의 양이온성 지질 또는 예컨대 스테아르산, 팔미트산, 미리스트산 또는 라우르산 등의 지방산이 결합하여 이루어진 것 등을 들 수 있고, 보다 바람직하게는, 폴리에틸렌글리콜 유도체, 폴리글리세린 유도체 등의 지질 유도체 또는 지방산 유도체를 들 수 있고, 더욱 바람직하게는, 폴리에틸렌글리콜 유도체의 지질 유도체 또는 지방산 유도체를 들 수 있다.
폴리에틸렌글리콜 유도체의 지질 유도체 또는 지방산 유도체로는 예컨대 폴리에틸렌글리콜화지질(구체적으로는 폴리에틸렌글리콜-포스파티딜에탄올아민(보다 구체적으로는 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-2000](PEG-DSPE), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-2000](PEG-DMPE) 등), 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 60, 크레모포어 이엘(CREMOPHOR EL) 등), 폴리에틸렌글리콜소르비탄 지방산 에스테르류(구체적으로는 모노올레산폴리옥시에틸렌소르비탄 등) 또는 폴리에틸렌글리콜 지방산 에스테르류 등을 들 수 있고, 보다 바람직하게는, 폴리에틸렌글리콜화지질을 들 수 있다.
폴리글리세린 유도체의 지질 유도체 또는 지방산 유도체로는 예컨대 폴리글리세린화지질(구체적으로는 폴리글리세린-포스파티딜에탄올아민) 또는 폴리글리세린 지방산 에스테르류 등을 들 수 있고, 보다 바람직하게는, 폴리글리세린화지질을 들 수 있다.
계면활성제로는 예컨대 모노올레산폴리옥시에틸렌소르비탄(구체적으로는 폴리소르베이트 80 등), 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜(구체적으로는 플루로닉 F68 등), 소르비탄 지방산 에스테르(구체적으로는 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노올레에이트 등), 폴리옥시에틸렌 유도체(구체적으로는 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 60, 폴리옥시에틸렌라우릴알코올 등), 글리세린 지방산 에스테르 또는 폴리에틸렌글리콜알킬에테르 등을 들 수 있고, 바람직하게는, 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜, 글리세린 지방산 에스테르 또는 폴리에틸렌글리콜알킬에테르 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서의 조성물이 리포좀인 경우, 예컨대 고분자, 폴리옥시에틸렌 유도체 등에 의한 리포좀 등의 조성물의 표면 개질도 임의로 행할 수 있다[라직(D. D. Lasic), 마틴(F. Martin) 편저, “스텔스 리포좀스(Stealth Liposomes)”(미국), 씨알씨 프레스 잉크(CRC Press Inc), 1995년, p. 93-102 참조]. 표면 개질에 사용할 수 있는 고분자로는 예컨대 덱스트란, 풀루란, 만난, 아밀로펙틴 또는 히드록시에틸 전분 등을 들 수 있다. 폴리옥시에틸렌 유도체로는 예컨대 폴리소르베이트 80, 플루로닉 F68, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 60, 폴리옥시에틸렌라우릴알코올 또는 PEG-DSPE 등을 들 수 있다. 리포좀 등의 조성물의 표면 개질에 의해 조성물에 당, 펩티드, 핵산 및 수용성 고분자로부터 선택되는 1개 이상의 물질의 지질 유도체 혹은 지방산 유도체 또는 계면활성제를 함유시킬 수 있다.
본 발명에 있어서의 조성물의 평균 입자경은, 소망에 따라 자유롭게 선택할 수 있지만, 하기하는 조성물 직경으로 하는 것이 바람직하다. 리포좀의 평균 입자경을 조절하는 방법으로는 예컨대 익스트루전법, 커다란 다중막 리포좀(MLV)을 기계적으로 분쇄[구체적으로는 멘톤 고린(Menton Gaulin), 마이크로플루이다이저(Microfluidzer) 등을 사용]하는 방법[뮐러(R. H. Muller), 베니타(S. Benita), 뵘(B. Bohm) 편저, “에멀젼 앤드 나노서스펜션즈 포 더 포뮬레이션 오브 푸얼리 솔러블 드러그즈(Emulsion and Nanosuspensions for the Formulation of Poorly Soluble Drugs)”, 독일, 사이언티픽 퍼블리셔스 슈투트가르트(Scientific Publishers Stuttgart), 1998년, p. 267-294 참조] 등을 들 수 있다.
또한, 조성물인, 예컨대 지질 집합체, 리포좀, 고분자 미셀 등으로부터 선택되는 2개 이상을 조합한 복합체의 제조 방법은, 예컨대 수중에서 지질, 고분자 등을 혼합하기만 하여도 좋고, 소망에 따라 정립 공정이나 무균화 공정 등을 더 가할 수도 있다. 또한, 상기 복합체의 제조는 예컨대 아세톤 또는 에테르 등의 여러 가지 용매 중에서 행하는 것도 가능하다.
본 발명에 있어서의 조성물의 크기는, 평균 입자경이 약 10 ㎚∼1000 ㎚인 것이 바람직하고, 약 30 ㎚∼300 ㎚인 것이 보다 바람직하며, 약 50 ㎚∼200 ㎚인 것이 더욱 바람직하다.
본 발명의 조성물을, 포유류의 세포에 투여함으로써, 본 발명의 조성물 중의 핵산을 세포 내에 도입할 수 있다.
인 비트로에서 본 발명의 조성물을 포유류의 세포에 투여하는 방법은, 인 비트로에 있어서 행할 수 있는 공지된 트랜스펙션의 절차에 따라 행하면 좋다.
인 비보에서 본 발명의 조성물을 포유류의 세포에 투여하는 방법은, 인 비보에 있어서 행할 수 있는 공지된 트랜스펙션의 절차에 따라 행하면 좋다. 예컨대, 본 발명의 조성물을, 사람을 포함한 포유동물에게 정맥내 투여함으로써, 예컨대 암 또는 염증이 생긴 장기 또는 부위로 송달되며, 송달 장기 또는 부위의 세포 내에 본 발명의 조성물 중의 핵산을 도입할 수 있다. 암 또는 염증이 생긴 장기 또는 부위로서는 특별히 한정되지 않지만, 예컨대 위, 대장, 간장, 폐, 비장, 췌장, 신장, 방광, 피부, 혈관, 안구 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물을, 사람을 포함한 포유동물에게 정맥내 투여함으로써, 예컨대 혈관, 간장, 폐, 비장 및/또는 신장으로 송달되며, 송달 장기 또는 부위의 세포 내에 본 발명의 조성물 중의 핵산을 도입할 수 있다. 간장, 폐, 비장 및/또는 신장의 세포는 정상 세포, 암 혹은 염증에 관련된 세포 또는 그 밖의 질환에 관련된 세포 중 어느 것이라도 좋다.
본 발명의 조성물 중의 핵산이, RNA 간섭(RNAi)을 이용한 표적 유전자의 발현 억제 작용을 갖는 핵산이라면, 인 비보에서 포유류의 세포 내에, 유전자의 발현을 억제하는 RNA 등을 도입할 수 있고, 유전자 등의 발현의 억제를 할 수 있다. 투여 대상은 사람인 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 조성물에 있어서의 표적 유전자가, 예컨대 종양 또는 염증에 관련된 유전자라면, 본 발명의 조성물을, 암 또는 염증 질환의 치료제 또는 예방제, 바람직하게는 고형암 또는 혈관 혹은 혈관 근방의 염증의 치료제 또는 예방제로서 사용할 수 있다. 구체적으로는, 본 발명의 조성물에 있어서의 표적 유전자가, 혈관 신생에 관련된 유전자 등이라면, 혈관 평활근의 증식이나 혈관 신생 등을 억제할 수 있기 때문에, 본 발명의 조성물을, 예컨대 혈관 평활근의 증식이나 혈관 신생을 수반하는 암 또는 염증 질환의 치료제 또는 예방제로서 사용할 수 있다.
즉, 본 발명은, 상기 설명한 본 발명의 조성물을 포유동물에게 투여하는 암 또는 염증 질환의 치료 방법도 제공한다. 투여 대상은, 사람인 것이 바람직하고, 암 또는 염증 질환에 걸린 사람이 보다 바람직하다.
또한, 본 발명의 조성물은, 암 또는 염증 질환의 치료제 또는 예방제에 관한 인 비보의 스크리닝계에 있어서 피오씨[POC(Proof of concept)] 취득의 툴로서 사용할 수도 있다.
본 발명의 조성물은, 예컨대 혈액 성분 등의 생체 성분(예컨대 혈액, 소화관 등) 내에서의 상기 핵산의 안정화, 부작용의 저감 또는 표적 유전자의 발현 부위를 포함한 조직 또는 장기에의 약제 집적성의 증대 등을 목적으로 하는 제제로서도 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물을, 의약품의 암 또는 염증 질환 등의 치료제 또는 예방제로서 사용하는 경우, 투여 경로로는, 치료시에 가장 효과적인 투여 경로를 사용하는 것이 바람직하고, 구강내, 기도내, 직장내, 피하, 근육내 또는 정맥내 등의 비경구 투여 또는 경구 투여를 들 수 있고, 바람직하게는 정맥내 투여 또는 근육내 투여를 들 수 있으며, 보다 바람직하게는 정맥내 투여를 들 수 있다.
투여량은, 투여 대상의 병의 증상이나 연령, 투여 경로 등에 따라 상이하지만, 예컨대 핵산으로 환산한 1일 투여량이 약 0.1 ㎍∼1000 ㎎이 되도록 투여하면 좋다.
정맥내 투여 또는 근육내 투여에 적당한 제제로서는 예컨대 주사제를 들 수 있고, 전술한 방법에 의해 조제한 조성물의 분산액을 그대로 예컨대 주사제 등의 형태로서 이용하는 것도 가능하지만, 이 분산액으로부터 예컨대 여과, 원심분리 등에 의해 용매를 제거하여 사용할 수도 있고, 이 분산액을 동결 건조하여 사용하거나 및/또는 예컨대 만니톨, 락토오스, 트레할로오스, 말토오스 혹은 글리신 등의 부형제를 첨가한 분산액을 동결 건조하여 사용할 수도 있다.
주사제의 경우, 상기한 조성물의 분산액 또는 상기한 용매를 제거 또는 동결 건조한 조성물에, 예컨대 물, 산, 알칼리, 여러 가지 완충액, 생리적 식염액 또는 아미노산 수액 등을 혼합하여 주사제를 조제하는 것이 바람직하다. 또한, 예컨대 시트르산, 아스코르브산, 시스테인 혹은 EDTA 등의 항산화제 또는 글리세린, 포도당 혹은 염화나트륨 등의 등장화제 등을 첨가하여 주사제를 조제하는 것도 가능하다. 또한, 예컨대 글리세린 등의 동결 보존제를 첨가하여 동결 보존할 수도 있다.
다음에, 실시예 및 시험예에 의해 본 발명을 구체적으로 설명한다. 단, 본 발명은 이들 실시예 및 시험예에 한정되는 것은 아니다.
또한, 실시예 및 참고예에 나타낸 프로톤 핵자기공명 스펙트럼(1H NMR)은, 270MHz, 300MHz 또는 400MHz로 측정된 것으로서, 화합물 및 측정 조건에 따라 교환성 프로톤이 명료하게는 관측되지 않는 경우가 있다. 또한, 시그널 다중도의 표기로는 통상 이용되는 것을 이용하고 있지만, br이란 외관상 폭이 넓은 시그널인 것을 나타낸다.
참고예 1
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 VI-1)
수소화나트륨(유성, 60%, 5.80 g, 145 mmol)의 톨루엔(100 ㎖) 현탁액에, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올[다이버킨(Diverchim S. A.)사 제조, 3.50 g, 18.1 mmol]의 톨루엔(70 ㎖) 용액을 교반하면서 천천히 첨가한 후, (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐 메탄술포네이트[뉴체크 프렙(Nu-Chek Prep, Inc)사 제조, 15.6 g, 45.3 mmol]의 톨루엔(30 ㎖) 용액을 적하하였다. 얻어진 혼합물을 가열 환류 하에 밤새도록 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응을 포화 염화암모늄 수용액으로 정지시켰다. 얻어진 혼합물에 포화 식염수를 첨가하여 아세트산에틸로 2회 추출하였다. 유기층을 합하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(메탄올/클로로포름=0/100∼2/98)로 정제함으로써 화합물 VI-1(6.96 g, 55.7%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 691(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.9Hz, 6H), 1.26-1.38(m, 30H), 1.52-1.62(m, 6H), 2.05(q, J=6.3Hz, 8H), 2.50(dd, J=9.9, 4.3Hz, 2H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 2.85(dd, J=9.6, 5.9Hz, 2H), 3.37-3.45(m, 4H), 3.52-3.66(m, 2H), 3.83(t, J=4.6Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H), 7.23-7.33(m, 5H).
참고예 2
(3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디일 디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노에이트)(화합물 VI-2)
(3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 350 ㎎, 1.81 mmol)을 디클로로메탄(18 ㎖)에 용해시키고, 리놀산[알드리치(Aldrich)사 제조, 1.24 ㎖, 3.98 mmol], 디시클로헥실카르보디이미드(고꾸산카가쿠사 제조, 860 ㎎, 4.17 mmol), 4-디메틸아미노피리딘(도쿄카세이고교사 제조, 55.3 ㎎, 0.453 mmol)을 첨가하고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응액에 헥산(18 ㎖)을 첨가하여, 여과한 후, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/클로로포름=40/60∼20/80)로 정제함으로써 화합물 VI-2(1.21 g, 93.0%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 719(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.30-1.40(m, 28H), 1.55-1.64(m, 4H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.30(t, J=7.5Hz, 4H), 2.50(dd, J=10.3, 4.0Hz, 2H), 2.77(t, J=6.1Hz, 4H), 3.06(dd, J=10.3, 6.1Hz, 2H), 3.62(q, J=13.8Hz, 2H), 5.12(dd, J=5.3, 4.0Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H), 7.23-7.34(m, 5H).
참고예 3
(3R,4S)-1-벤질-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 VI-3)
참고예 1과 동일한 방법으로, (3R,4S)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 274 ㎎, 1.42 mmol) 및 (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 1.22 g, 3.54 mmol)를 원료로서 이용하여, 화합물 VI-3(398 ㎎, 40.7%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 691(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.6Hz, 6H), 1.29-1.40(m, 30H), 1.56(dd, J=13.0, 7.1Hz, 6H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.46(dd, J=9.5, 6.0Hz, 2H), 2.77(t, J=6.0Hz, 4H), 3.08(dd, J=9.5, 6.0Hz, 2H), 3.37-3.53(m, 4H), 3.63(s, 2H), 3.85-3.92(m, 2H), 5.28-5.43(m, 8H), 7.20-7.30(m, 5H).
참고예 4
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)피롤리딘(화합물 VI-4)
참고예 1과 동일한 방법으로, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 250 ㎎, 1.29 mmol) 및 (Z)-옥타데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 1.79 g, 5.17 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-4(507 ㎎, 56.4%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 695(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.36(m, 44H), 1.53-1.58(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.50(dd, J=9.9, 4.7Hz, 2H), 2.85(dd, J=9.9, 6.1Hz, 2H), 3.34-3.47(m, 4H), 3.59(q, J=12.6Hz, 2H), 3.83(t, J=4.7Hz, 2H), 5.29-5.40(m, 4H), 7.23-7.32(m, 5H).
참고예 5
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스(테트라데실옥시)피롤리딘(화합물 VI-5)
(3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 150 ㎎, 0.776 mmol)을 디메틸술폭시드(4 ㎖)에 용해시키고, 수산화칼륨(348 ㎎, 6.21 mmol)을 첨가하여 100℃에서 15분간 교반하였다. 반응 용액에 테트라데실 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 568 ㎎, 1.94 mmol)의 디메틸술폭시드(4 ㎖) 용액을 첨가하여 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 물을 첨가하고, 수층을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 물, 포화 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름 100%)로 정제함으로써 화합물 VI-5(449 ㎎, 98.6%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 587(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.25-1.33(m, 44H), 1.51-1.60(m, 4H), 2.50(dd, J=9.9, 4.7Hz, 2H), 2.85(dd, J=9.9, 6.0Hz, 2H), 3.35-3.47(m, 4H), 3.59(q, J=12.8Hz, 2H), 3.83(t, J=4.7Hz, 2H), 7.21-7.33(m, 5H).
참고예 6
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스((Z)-헥사데카-9-에닐옥시)피롤리딘(화합물 VI-6)
참고예 1과 동일한 방법으로, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 146 ㎎, 0.753 mmol) 및 (Z)-헥사데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 600 ㎎, 1.88 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-6(231 ㎎, 48.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 639(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.28-1.37(m, 36H), 1.50-1.60(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.50(dd, J=9.8, 4.6Hz, 2H), 2.85(dd, J=9.8, 5.9Hz, 2H), 3.34-3.47(m, 4H), 3.59(q, J=12.6Hz, 2H), 3.83(t, J=4.6Hz, 2H), 5.29-5.40(m, 4H), 7.20-7.34(m, 5H).
참고예 7
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스((Z)-옥타데카-6-에닐옥시)피롤리딘(화합물 VI-7)
참고예 1과 동일한 방법으로, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 134 ㎎, 0.693 mmol) 및 (Z)-옥타데카-6-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 600 ㎎, 1.73 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-7(196 ㎎, 40.7%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 695(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.37(m, 44H), 1.52-1.61(m, 4H), 1.97-2.05(m, 8H), 2.50(dd, J=9.9, 4.6Hz, 2H), 2.85(dd, J=9.9, 5.9Hz, 2H), 3.34-3.48(m, 4H), 3.59(q, J=11.8Hz, 2H), 3.83(t, J=4.6Hz, 2H), 5.28-5.41(m, 4H), 7.22-7.34(m, 5H).
참고예 8
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스((11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 VI-8)
참고예 1과 동일한 방법으로, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 124 ㎎, 0.644 mmol) 및 (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 600 ㎎, 1.61 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-8(210 ㎎, 43.7%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 747(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.40(m, 40H), 1.51-1.60(m, 4H), 2.05(q, J=6.5Hz, 8H), 2.50(dd, J=10.0, 4.5Hz, 2H), 2.77(t, J=6.1Hz, 4H), 2.85(dd, J=10.0, 6.1Hz, 2H), 3.35-3.47(m, 4H), 3.59(q, J=12.8Hz, 2H), 3.83(t, J=4.5Hz, 2H), 5.29-5.43(m, 8H), 7.22-7.33(m, 5H).
참고예 9
(3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디일 디((Z)-옥타데카-9-에노에이트)(화합물 VI-9)
참고예 2와 동일한 방법으로, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 500 ㎎, 2.59 mmol) 및 올레산(도쿄카세이고교사 제조, 1.61 g, 5.69 mmol)을 이용하여, 화합물 VI-9(1.85 g, 98.8%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 723(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 40H), 1.55-1.65(m, 4H), 2.01(q, J=5.6Hz, 8H), 2.30(t, J=7.4Hz, 4H), 2.50(dd, J=10.2, 4.1Hz, 2H), 3.06(dd, J=10.2, 6.3Hz, 2H), 3.63(q, J=12.9Hz, 2H), 5.12(dd, J=5.1, 4.1Hz, 2H), 5.28-5.40(m, 4H), 7.23-7.34(m, 5H).
참고예 10
(3S,4S)-1-벤질-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 VI-10)
참고예 1과 동일한 방법으로, (3S,4S)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 500 ㎎, 2.59 mmol) 및 (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 2.23 g, 6.47 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-10(966 ㎎, 54.1%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 691(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.4Hz, 6H), 1.28-1.38(m, 32H), 1.50-1.60(m, 4H), 2.04(q, J=6.6Hz, 8H), 2.49(dd, J=10.0, 4.1Hz, 2H), 2.75-2.88(m, 6H), 3.34-3.47(m, 4H), 3.59(q, J=11.2Hz, 2H), 3.82(t, J=4.9Hz, 2H), 5.27-5.43(m, 8H), 7.21-7.31(m, 5H).
참고예 11
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스(헥사데실옥시)피롤리딘(화합물 VI-11)
참고예 5와 동일한 방법으로, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 100 ㎎, 0.517 mmol) 및 헥사데실 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 415 ㎎, 1.29 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-11(324 ㎎, 97.6%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 643(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.25-1.33(m, 52H), 1.50-1.58(m, 4H), 2.50(dd, J=9.9, 4.8Hz, 2H), 2.85(dd, J=9.9, 6.0Hz, 2H), 3.35-3.47(m, 4H), 3.59(q, J=12.8Hz, 2H), 3.83(t, J=4.8Hz, 2H), 7.20-7.33(m, 5H).
참고예 12
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스(옥타데실옥시)피롤리딘(화합물 VI-12)
참고예 5와 동일한 방법으로, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 100 ㎎, 0.517 mmol) 및 옥타데실 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 451 ㎎, 1.29 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-12(319 ㎎, 88.3%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 699(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.25-1.33(m, 60H), 1.51-1.59(m, 4H), 2.50(dd, J=9.8, 4.5Hz, 2H), 2.85(dd, J=9.8, 6.2Hz, 2H), 3.35-3.47(m, 4H), 3.59(q, J=12.7Hz, 2H), 3.83(t, J=4.5Hz, 2H), 7.21-7.33(m, 5H).
참고예 13
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스((Z)-테트라데카-9-에닐옥시)피롤리딘(화합물 VI-13)
참고예 1과 동일한 방법으로, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 80.0 ㎎, 0.414 mmol) 및 (Z)-테트라데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 301 ㎎, 1.04 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-13(119 ㎎, 49.5%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 583(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=7.0Hz, 6H), 1.28-1.37(m, 28H), 1.51-1.60(m, 4H), 1.98-2.05(m, 8H), 2.50(dd, J=9.8, 4.6Hz, 2H), 2.85(dd, J=9.8, 6.0Hz, 2H), 3.35-3.47(m, 4H), 3.59(q, J=12.6Hz, 2H), 3.83(t, J=4.6Hz, 2H), 5.29-5.40(m, 4H), 7.21-7.34(m, 5H).
참고예 14
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스((Z)-옥타데카-11-에닐옥시)피롤리딘(화합물 VI-14)
참고예 1과 동일한 방법으로, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 112 ㎎, 0.577 mmol) 및 (Z)-옥타데카-11-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 500 ㎎, 1.44 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-14(244 ㎎, 60.8%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 695(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 44H), 1.51-1.59(m, 4H), 2.01(q, J=6.1Hz, 8H), 2.50(dd, J=9.9, 4.6Hz, 2H), 2.85(dd, J=9.9, 6.0Hz, 2H), 3.35-3.47(m, 4H), 3.59(q, J=12.8Hz, 2H), 3.83(t, J=4.6Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H), 7.21-7.34(m, 5H).
참고예 15
(3R,4R)-1-벤질-3,4-비스((Z)-이코사-11-에닐옥시)피롤리딘(화합물 VI-15)
참고예 1과 동일한 방법으로, (3R,4R)-1-벤질피롤리딘-3,4-디올(Diverchim S. A.사 제조, 103 ㎎, 0.534 mmol) 및 (Z)-이코사-11-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 500 ㎎, 1.34 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-15(251 ㎎, 62.7%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 751(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 52H), 1.50-1.60(m, 4H), 2.01(q, J=6.0Hz, 8H), 2.50(dd, J=9.8, 4.4Hz, 2H), 2.85(dd, J=9.8, 6.2Hz, 2H), 3.35-3.47(m, 4H), 3.59(q, J=12.8Hz, 2H), 3.83(t, J=4.4Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H), 7.21-7.34(m, 5H).
참고예 16
(트랜스-1-벤질피롤리딘-3,4-디일)디메탄올
국제 공개 제2009/027820호 팜플렛을 참고로 하여 합성한 트랜스-디에틸 1-벤질피롤리딘-3,4-디카르복실레이트(830 ㎎, 2.72 mmol)를 THF(24 ㎖)에 용해시키고, 0℃에서 수소화알루미늄리튬(206 ㎎, 5.44 mmol)을 첨가하고, 실온에서 1.3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 황산나트륨 10수화물, 클로로포름, 셀라이트를 첨가하고, 실온에서 더 교반하였다. 무수 황산마그네슘을 첨가한 후 여과하고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 헥산을 첨가하여 고체를 여과하여 취함으로써(트랜스-1-벤질피롤리딘-3,4-디일)디메탄올(565 ㎎, 93.9%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 222(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 2.17-2.28(m, 2H), 2.35(dd, J=9.0, 5.1Hz, 2H), 2.77(dd, J=9.0, 7.1Hz, 2H), 3.56-3.68(m, 6H), 7.22-7.34(m, 5H).
참고예 17
트랜스-1-벤질-3,4-비스(((Z)-헥사데카-9-에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 VI-16)
참고예 1과 동일한 방법으로, 참고예 16에서 얻어진 (트랜스-1-벤질피롤리딘-3,4-디일)디메탄올(150 ㎎, 0.678 mmol) 및 (Z)-헥사데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 540 ㎎, 1.70 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-16(372 ㎎, 82.3%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 667(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.28-1.35(m, 36H), 1.49-1.57(m, 4H), 1.95-2.10(m, 10H), 2.37(dd, J=9.2, 5.5Hz, 2H), 2.67(dd, J=9.2, 7.0Hz, 2H), 3.31-3.44(m, 8H), 3.57(dd, J=18.1, 13.0Hz, 2H), 5.29-5.40(m, 4H), 7.19-7.32(m, 5H).
참고예 18
N-벤질디에탄올아민
디에탄올아민(1.80 g, 17.1 mmol)의 클로로포름(46 ㎖) 용액에, 디이소프로필에틸아민(2.99 ㎖, 17.1 mmol)과 벤질 브로마이드(1.36 ㎖, 11.4 mmol)를 첨가하여 가열 환류 하에 5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 물, 포화 중조수, 포화 식염수로 세정하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(메탄올/클로로포름=0/100∼12/88)로 정제함으로써 N-벤질디에탄올아민(1.77 g, 79.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 196(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 2.29(br s, 2H), 2.73(t, J=5.3Hz, 4H), 3.63(t, J=5.3Hz, 4H), 3.71(s, 2H), 7.24-7.37(m, 5H).
참고예 19
N-벤질-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아민(화합물 VI-17)
참고예 1과 동일한 방법으로, 참고예 18에서 얻어진 N-벤질디에탄올아민(149 ㎎, 0.763 mmol) 및 (Z)-옥타데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 661 ㎎, 1.91 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-17(257 ㎎, 48.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 697(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27(br s, 44H), 1.50-1.58(m, 4H), 1.97-2.04(m, 8H), 2.74(t, J=6.2Hz, 4H), 3.37(t, J=6.6Hz, 4H), 3.50(t, J=6.2Hz, 4H), 3.71(s, 2H), 5.29-5.40(m, 4H), 7.21-7.35(m, 5H).
참고예 20
N-벤질-N,N-비스(2-((Z)-테트라데카-9-에닐옥시)에틸)아민(화합물 VI-18)
참고예 1과 동일한 방법으로, 참고예 18에서 얻어진 N-벤질디에탄올아민(171 ㎎, 0.876 mmol) 및 (Z)-테트라데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 636 ㎎, 2.19 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-18(424 ㎎, 82.9%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 585(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=7.1Hz, 6H), 1.25-1.35(m, 28H), 1.50-1.57(m, 4H), 1.97-2.05(m, 8H), 2.74(t, J=6.3Hz, 4H), 3.37(t, J=6.7Hz, 4H), 3.50(t, J=6.3Hz, 4H), 3.71(s, 2H), 5.29-5.40(m, 4H), 7.19-7.36(m, 5H).
참고예 21
N-벤질-N,N-비스(2-(테트라데실옥시)에틸)아민(화합물 VI-19)
참고예 5와 동일한 방법으로, 참고예 18에서 얻어진 N-벤질디에탄올아민(171 ㎎, 0.876 mmol) 및 테트라데실 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 640 ㎎, 2.19 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-19(173 ㎎, 33.6%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 589(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.25(br s, 44H), 1.50-1.58(m, 4H), 2.74(t, J=6.1Hz, 4H), 3.37(t, J=6.6Hz, 4H), 3.50(t, J=6.3Hz, 4H), 3.71(s, 2H), 7.21-7.36(m, 5H).
참고예 22
N-벤질-N,N-비스(2-(헥사데실옥시)에틸)아민(화합물 VI-20)
참고예 5와 동일한 방법으로, 참고예 18에서 얻어진 N-벤질디에탄올아민(171 ㎎, 0.876 mmol) 및 헥사데실 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 702 ㎎, 2.19 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-20(411 ㎎, 72.9%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 645(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.25(br s, 52H), 1.50-1.58(m, 4H), 2.74(t, J=6.3Hz, 4H), 3.37(t, J=6.6Hz, 4H), 3.50(t, J=6.3Hz, 4H), 3.71(s, 2H), 7.21-7.36(m, 5H).
참고예 23
N-벤질-N,N-비스(2-(옥타데실옥시)에틸)아민(화합물 VI-21)
참고예 5와 동일한 방법으로, 참고예 18에서 얻어진 N-벤질디에탄올아민(171 ㎎, 0.876 mmol) 및 옥타데실 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 763 ㎎, 2.19 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-21(421 ㎎, 68.7%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 701(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.25(br s, 60H), 1.49-1.58(m, 4H), 2.74(t, J=6.3Hz, 4H), 3.37(t, J=6.6Hz, 4H), 3.50(t, J=6.3Hz, 4H), 3.71(s, 2H), 7.19-7.35(m, 5H).
참고예 24
N-벤질-N,N-비스(2-((Z)-헥사데카-9-에닐옥시)에틸)아민(화합물 VI-22)
참고예 1과 동일한 방법으로, 참고예 18에서 얻어진 N-벤질디에탄올아민(277 ㎎, 1.42 mmol) 및 (Z)-헥사데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 1.13 g, 3.55 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-22(739 ㎎, 81.4%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 641(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.28-1.35(m, 36H), 1.49-1.58(m, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.74(t, J=6.2Hz, 4H), 3.37(t, J=6.6Hz, 4H), 3.50(t, J=6.2Hz, 4H), 3.71(s, 2H), 5.29-5.40(m, 4H), 7.19-7.35(m, 5H).
참고예 25
트랜스-1-벤질-3,4-비스(((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 VI-23)
참고예 1과 동일한 방법으로, 참고예 16에서 얻어진 (트랜스-1-벤질피롤리딘-3,4-디일)디메탄올(150 ㎎, 0.678 mmol) 및 (Z)-옥타데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 597 ㎎, 1.70 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-23(359 ㎎, 73.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 723(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.36(m, 44H), 1.48-1.57(m, 4H), 1.98-2.08(m, 10H), 2.37(dd, J=9.0, 5.1Hz, 2H), 2.67(dd, J=9.0, 7.2Hz, 2H), 3.31-3.43(m, 8H), 3.52-3.63(m, 2H), 5.29-5.40(m, 4H), 7.21-7.31(m, 5H).
참고예 26
트랜스-1-벤질-3,4-비스(((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 VI-24)
참고예 1과 동일한 방법으로, 참고예 16에서 얻어진 (트랜스-1-벤질피롤리딘-3,4-디일)디메탄올(150 ㎎, 0.678 mmol) 및 (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 584 ㎎, 1.70 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-24(384 ㎎, 78.9%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 719(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.4Hz, 6H), 1.28-1.40(m, 32H), 1.48-1.57(m, 4H), 2.05(q, J=6.6Hz, 10H), 2.37(dd, J=9.0, 4.9Hz, 2H), 2.67(dd, J=9.0, 7.1Hz, 2H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 3.30-3.43(m, 8H), 3.51-3.63(m, 2H), 5.28-5.43(m, 8H), 7.20-7.31(m, 5H).
참고예 27
트랜스-1-벤질-3,4-비스(((11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 VI-25)
참고예 1과 동일한 방법으로, 참고예 16에서 얻어진 (트랜스-1-벤질피롤리딘-3,4-디일)디메탄올(150 ㎎, 0.678 mmol) 및 (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 631 ㎎, 1.70 mmol)를 이용하여, 화합물 VI-25(423 ㎎, 80.6%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 775(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.38(m, 40H), 1.49-1.57(m, 4H), 2.05(q, J=6.7Hz, 10H), 2.37(dd, J=9.2, 5.1Hz, 2H), 2.67(dd, J=9.1, 7.1Hz, 2H), 2.77(t, J=6.0Hz, 4H), 3.31-3.43(m, 8H), 3.52-3.62(m, 2H), 5.29-5.43(m, 8H), 7.21-7.31(m, 5H).
참고예 28
트랜스-1-(tert-부톡시카르보닐)-3,4-비스(((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)메틸)피롤리딘(화합물 XIII-1)
참고예 2와 동일한 방법으로, 국제 공개 제2006/100036호 팜플렛을 참고로 하여 합성한 트랜스-3,4-비스(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸(156 ㎎, 0.674 mmol) 및 올레산(도쿄카세이고교사 제조, 419 ㎎, 1.48 mmol)을 이용하여, 화합물 XIII-1(280 ㎎, 54.6%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 761(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.25-1.46(m, 36H), 1.46(s, 9H), 1.46-1.66(m, 8H), 1.97-2.04(m, 8H), 2.27-2.38(m, 6H), 3.10-3.23(m, 2H), 3.53-3.66(m, 2H), 4.03(dd, J=10.8, 6.0Hz, 2H), 4.14(dd, J=10.8, 6.0Hz, 2H), 5.28-5.40(m, 4H).
참고예 29
트랜스-1-(tert-부톡시카르보닐)-3,4-비스(((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노일옥시)메틸)피롤리딘(화합물 XIII-2)
참고예 2와 동일한 방법으로, 국제 공개 제2006/100036호 팜플렛을 참고로 하여 합성한 트랜스-3,4-비스(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸(150 ㎎, 0.674 mmol) 및 리놀산(알드리치사 제조, 400 ㎎, 1.48 mmol)을 이용하여, 화합물 XIII-2(351 ㎎, 71.7%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 757(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.21-1.45(m, 26H), 1.46(s, 9H), 1.47-1.68(m, 6H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.26-2.38(m, 6H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 3.10-3.23(m, 2H), 3.53-3.66(m, 2H), 4.03(dd, J=11.0, 6.0Hz, 2H), 4.14(dd, J=11.0, 6.0Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 1
(3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 1)
참고예 1에서 얻어진 화합물 VI-1(6.96 g, 10.1 mmol)을 1,2-디클로로에탄(100 ㎖)에 용해시키고, 클로로포름산1-클로로에틸(도쿄카세이고교사 제조, 3.30 ㎖, 30.3 mmol)을 첨가하여 130℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 메탄올(100 ㎖)을 첨가하여 130℃에서 1시간 더 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 감압 하에 농축시키고, 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼92/8)로 정제하였다. 화합물을 포함하는 분획을 모아 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시킴으로써 화합물 1(5.56 g, 92.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 601(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.9Hz, 6H), 1.29-1.41(m, 30H), 1.49-1.60(m, 4H), 1.67(br s, 3H), 2.05(q, J=6.5Hz, 8H), 2.75-2.85(m, 6H), 3.09(dd, J=12.4, 5.1Hz, 2H), 3.37-3.49(m, 4H), 3.76(dd, J=5.0, 3.3Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 2
(3R,4R)-피롤리딘-3,4-디일 디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노에이트)(화합물 2)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 2에서 얻어지는 화합물 VI-2(1.51 g, 2.10 mmol)를 이용하여, 화합물 2(1.20 g, 90.9%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 629(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.41(m, 29H), 1.56-1.68(m, 4H), 2.05(q, J=6.4Hz, 8H), 2.30(t, J=7.6Hz, 4H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 2.87(dd, J=13.0, 3.0Hz, 2H), 3.32(dd, J=13.0, 5.0Hz, 2H), 5.08(dd, J=5.0, 3.0Hz, 2H), 5.28-5.44(m, 8H).
실시예 3
(3R,4S)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 3)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 3에서 얻어진 화합물 VI-3(346 ㎎, 0.501 mmol)을 이용하여, 화합물 3(245 ㎎, 81.3%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 601(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.7Hz, 6H), 1.30-1.40(m, 30H), 1.54-1.68(m, 8H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 3.00(d, J=5.0Hz, 3H), 3.41-3.55(m, 4H), 3.83(t, J=3.8Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 4
(3R,4R)-3,4-비스((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)피롤리딘(화합물 4)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 4에서 얻어진 화합물 VI-4(455 ㎎, 0.655 mmol)를 이용하여, 화합물 4(333 ㎎, 84.1%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 605(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3)δ: 0.88(t, J=6.5Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 38H), 1.50-1.58(m, 11H), 2.01(q, J=6.5Hz, 8H), 2.82(dd, J=12.4, 3.0Hz, 2H), 3.09(dd, J=12.4, 5.0Hz, 2H), 3.43(td, J=6.5, 1.3Hz, 4H), 3.76(dd, J=5.0, 3.0Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 5
(3R,4R)-3,4-비스(테트라데실옥시)피롤리딘(화합물 5)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 5에서 얻어지는 화합물 VI-5(454 ㎎, 0.775 mmol)를 이용하여, 화합물 5(331 ㎎, 86.1%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 497(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.34(m, 41H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.66(br s, 4H), 2.82(dd, J=12.6, 3.0Hz, 2H), 3.09(dd, J=12.6, 5.0Hz, 2H), 3.40-3.46(m, 4H), 3.76(dd, J=5.0, 3.0Hz, 2H).
실시예 6
(3R,4R)-3,4-비스((Z)-헥사데카-9-에닐옥시)피롤리딘(화합물 6)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 6에서 얻어진 화합물 VI-6(208 ㎎, 0.326 mmol)을 이용하여, 화합물 6(160 ㎎, 89.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 549(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.36(m, 34H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.82(br s, 3H), 2.01(q, J=6.2Hz, 8H), 2.84(dd, J=12.5, 3.0Hz, 2H), 3.10(dd, J=12.5, 5.0Hz, 2H), 3.43(t, J=6.8Hz, 4H), 3.77(dd, J=5.0, 3.0Hz, 2H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 7
(3R,4R)-3,4-비스((Z)-옥타데카-6-에닐옥시)피롤리딘(화합물 7)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 7에서 얻어진 화합물 VI-7(171 ㎎, 0.246 mmol)을 이용하여, 화합물 7(123 ㎎, 82.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 605(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.38(m, 40H), 1.51-1.61(m, 4H), 1.64(s, 5H), 1.97-2.06(m, 8H), 2.82(dd, J=12.5, 3.3Hz, 2H), 3.09(dd, J=12.5, 5.1Hz, 2H), 3.41-3.46(m, 4H), 3.76(dd, J=4.6, 3.3Hz, 2H), 5.29-5.41(m, 4H).
실시예 8
(3R,4R)-3,4-비스((11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 8)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 8에서 얻어진 화합물 VI-8(186 ㎎, 0.249 mmol)을 이용하여, 화합물 8(144 ㎎, 87.5%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 657(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.40(m, 36H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.64(s, 5H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.75-2.85(m, 6H), 3.09(dd, J=12.5, 5.0Hz, 2H), 3.43(td, J=6.7, 1.3Hz, 4H), 3.76(dd, J=5.0, 2.9Hz, 2H), 5.29-5.43(m, 8H).
실시예 9
(3R,4R)-피롤리딘-3,4-디일 디((Z)-옥타데카-9-에노에이트)(화합물 9)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 9에서 얻어진 화합물 VI-9(1.79 g, 2.48 mmol)을 이용하여, 화합물 9(965 ㎎, 61.6%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 633(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.36(m, 38H), 1.56-1.64(m, 7H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.30(t, J=7.6Hz, 4H), 2.87(dd, J=13.1, 2.8Hz, 2H), 3.32(dd, J=13.1, 5.1Hz, 2H), 5.09(dd, J=5.1, 2.8Hz, 2H), 5.28-5.41(m, 4H).
실시예 10
(3R,4R)-1-메틸-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 10)
실시예 1에서 얻어진 화합물 1(4.00 g, 6.67 mmol)을 1,2-디클로로에탄(50 ㎖), 메탄올(50 ㎖)에 용해시키고, 포름알데히드(4.96 ㎖, 66.7 mmol), 나트륨트리아세톡시보로하이드라이드[아크로스 오가닉스(Acros Organics)사 제조, 7.06 g, 33.3 mmol]를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 나트륨트리아세톡시보로하이드라이드(아크로스 오가닉스사 제조, 7.06 g, 33.3 mmol)를 첨가하고, 실온에서 2.5시간 더 교반하였다. 반응 용액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼95/5)로 정제함으로써 화합물 10(3.99 g, 97.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 615(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.30-1.41(m, 30H), 1.52-1.62(m, 4H), 1.70(br s, 2H), 2.05(q, J=6.5Hz, 8H), 2.31(s, 3H), 2.47(dd, J=9.9, 4.0Hz, 2H), 2.75-2.86(m, 6H), 3.36-3.49(m, 4H), 3.81(dd, J=5.5, 4.5Hz, 2H), 5.28-5.44(m, 8H).
실시예 11
(3R,4S)-1-메틸-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 11)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 3에서 얻어진 화합물 3(194 ㎎, 0.323 mmol)을 이용하여, 화합물 11(129 ㎎, 64.6%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 615(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.30-1.40(m, 28H), 1.54-1.62(m, 4H), 1.76(br s, 4H), 2.05(q, J=5.9Hz, 8H), 2.38(s, 3H), 2.46-2.51(m, 2H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 3.06-3.11(m, 2H), 3.39-3.55(m, 4H), 3.90(t, J=3.8Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 12
(3R,4R)-1-메틸-3,4-비스((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)피롤리딘(화합물 12)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 4에서 얻어진 화합물 4(100 ㎎, 0.166 mmol)를 이용하여, 화합물 12(81.0 ㎎, 79.4%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 619(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.23-1.35(m, 44H), 1.52-1.61(m, 4H), 2.01(q, J=5.8Hz, 8H), 2.31(s, 3H), 2.46(dd, J=9.8, 4.4Hz, 2H), 2.82(dd, J=9.8, 5.8Hz, 2H), 3.37-3.48(m, 4H), 3.81(t, J=4.4Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 13
(3R,4R)-1-메틸-3,4-비스(테트라데실옥시)피롤리딘(화합물 13)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 5에서 얻어진 화합물 5(74.0 ㎎, 0.149 mmol)를 이용하여, 화합물 13(73.6 ㎎, 96.8%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 511(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 44H), 1.52-1.61(m, 4H), 2.31(s, 3H), 2.47(dd, J=9.8, 4.2Hz, 2H), 2.83(dd, J=9.8, 5.5Hz, 2H), 3.37-3.48(m, 4H), 3.81(dd, J=5.5, 4.2Hz, 2H).
실시예 14
(3R,4R)-3,4-비스((Z)-헥사데카-9-에닐옥시)-1-메틸피롤리딘(화합물 14)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 6에서 얻어진 화합물 6(107 ㎎, 0.195 mmol)을 이용하여, 화합물 14(107 ㎎, 97.4%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 563(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.38(m, 34H), 1.52-1.62(m, 4H), 1.67(br s, 2H), 2.01(q, J=6.1Hz, 8H), 2.32(s, 3H), 2.47(dd, J=9.8, 4.4Hz, 2H), 2.83(dd, J=9.8, 5.8Hz, 2H), 3.36-3.49(m, 4H), 3.81(t, J=4.4Hz, 2H), 5.29-5.41(m, 4H).
실시예 15
(3R,4R)-1-메틸-3,4-비스((Z)-옥타데카-6-에닐옥시)피롤리딘(화합물 15)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 7에서 얻어진 화합물 7(80.0 ㎎, 0.132 mmol)을 이용하여, 화합물 15(75.3 ㎎, 91.8%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 619(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.41(m, 44H), 1.53-1.63(m, 4H), 1.97-2.06(m, 8H), 2.31(s, 3H), 2.46(dd, J=9.6, 4.2Hz, 2H), 2.82(dd, J=9.6, 5.6Hz, 2H), 3.36-3.49(m, 4H), 3.81(dd, J=5.6, 4.2Hz, 2H), 5.28-5.41(m, 4H).
실시예 16
(3R,4R)-3,4-비스((11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐옥시)-1-메틸피롤리딘(화합물 16)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 8에서 얻어진 화합물 8(90.0 ㎎, 0.137 mmol)을 이용하여, 화합물 16(87.4 ㎎, 95.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 671(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.41(m, 40H), 1.52-1.61(m, 4H), 2.05(q, J=6.5Hz, 8H), 2.31(s, 3H), 2.46(dd, J=10.0, 4.5Hz, 2H), 2.77(t, J=5.7Hz, 4H), 2.82(dd, J=10.0, 5.7Hz, 2H), 3.36-3.49(m, 4H), 3.81(t, J=4.5Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 17
(3R,4R)-1-에틸-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 17)
실시예 1에서 얻어진 화합물 1(70.0 ㎎, 0.117 mmol)을 에탄올(2 ㎖)에 용해시키고, 탄산칼륨(32.2 ㎎, 0.233 mmol), 요오드에탄(0.0104 ㎖, 0.128 mmol)을 첨가하고, 실온에서 2일간 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축시키고, 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼96/4)로 정제함으로써 화합물 17(33.3 ㎎, 45.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 629(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.9Hz, 6H), 1.11(t, J=6.8Hz, 2H), 1.30-1.38(m, 29H), 1.55(br s, 10H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.53(br s, 2H), 2.77(t, J=5.6Hz, 4H), 2.88(br s, 2H), 3.44(t, J=6.6Hz, 4H), 3.83(t, J=4.6Hz, 2H), 5.28-5.44(m, 8H).
실시예 18
(3R,4R)-1-에틸-3,4-비스((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)피롤리딘(화합물 18)
실시예 17과 동일한 방법으로, 실시예 4에서 얻어진 화합물 4(40.0 ㎎, 0.066 mmol)를 이용하여 화합물 18(13.4 ㎎, 32.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 633(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.08(t, J=7.1Hz, 3H), 1.23-1.35(m, 44H), 1.52-1.59(m, 4H), 2.01(q, J=6.2Hz, 8H), 2.37-2.52(m, 4H), 2.84(dd, J=9.5, 6.2Hz, 2H), 3.41-3.45(m, 4H), 3.81(t, J=4.9Hz, 2H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 19
(3R,4R)-1,1-디메틸-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리디늄클로라이드(화합물 19)
실시예 10에서 얻어진 화합물 10(24.6 ㎎, 0.0401 mmol)에 요오드메탄(1 ㎖)을 첨가하고, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 음이온 교환수지[Dowex 1x-200 염화물형(더 다우 케미컬 컴퍼니(The Dow Chemical Company)사 제조), 0.5 ㎖, 물과 메탄올로 예비 세정한 것]에 로드하여, 메탄올로 용출하였다. 용출액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(메탄올/클로로포름=0/100∼25/75)로 정제함으로써 화합물 19(24.9 ㎎, 93.5%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 629 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.29(s, 32H), 1.50-1.57(m, 4H), 1.58(s, 4H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 3.44-3.57(m, 4H), 3.67(s, 6H), 3.86(dd, J=13.4, 3.8Hz, 2H), 4.04-4.13(m, 4H), 5.29-5.42(m, 8H).
실시예 20
(3R,4R)-1,1-디메틸-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노일옥시)피롤리디늄클로라이드(화합물 20)
실시예 19와 동일한 방법으로, 참고예 30에서 얻어진 화합물 A-3(1.16 g, 1.81 mmol)을 이용하여, 화합물 20(1.21 g, 96.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 657 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.29-1.38(m, 26H), 1.57-1.67(m, 4H), 1.78(s, 2H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.39(t, J=7.6Hz, 4H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 3.78(s, 6H), 4.15(dd, J=14.0, 3.0Hz, 2H), 4.38(dd, J=14.0, 5.8Hz, 2H), 5.27-5.46(m, 10H).
실시예 21
(3R,4S)-1,1-디메틸-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리디늄클로라이드(화합물 21)
실시예 19와 동일한 방법으로, 실시예 11에서 얻어진 화합물 11(76.0 ㎎, 0.124 mmol)을 이용하여, 화합물 21(62.8 ㎎, 76.6%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 629 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.7Hz, 6H), 1.23-1.41(m, 30H), 1.52-1.61(m, 4H), 1.93-2.17(m, 2H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 3.41(s, 3H), 3.47-3.64(m, 9H), 4.43-4.50(m, 2H), 4.58(br s, 2H), 5.28-5.44(m, 8H).
실시예 22
(3R,4R)-1,1-디메틸-3,4-비스((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)피롤리디늄클로라이드(화합물 22)
실시예 4에서 얻어진 화합물 4(135 ㎎, 0.223 mmol)를 메탄올(2 ㎖)에 용해시키고, 탄산칼륨(154 ㎎, 1.12 mmol), 요오드메탄(0.699 ㎖, 11.2 mmol)을 첨가하고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 음이온 교환수지[Dowex 1x-200 염화물형(더 다우 케미컬 컴퍼니(The Dow Chemical Company)사 제조), 1 ㎖, 물과 메탄올로 예비 세정한 것]에 로드하여, 메탄올로 용출하였다. 용출액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(메탄올/클로로포름=0/100∼70/30)로 정제함으로써 화합물 22(27.8 ㎎, 18.6%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 633 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.36(m, 40H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.62(s, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 3.44-3.58(m, 4H), 3.66(s, 6H), 3.86(dd, J=13.2, 4.0Hz, 2H), 4.02-4.13(m, 4H), 5.29-5.41(m, 4H).
실시예 23
(3R,4R)-1,1-디메틸-3,4-비스((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)피롤리디늄클로라이드(화합물 23)
실시예 19와 동일한 방법으로, 참고예 31에서 얻어진 화합물 A-4(430 ㎎, 0.666 mmol)를 이용하여, 화합물 23(442 ㎎, 95.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 661 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 38H), 1.58-1.67(m, 4H), 1.76(br s, 2H), 2.01(q, J=5.1Hz, 8H), 2.38(t, J=7.5Hz, 4H), 3.78(s, 6H), 4.15(dd, J=13.6, 2.6Hz, 2H), 4.37(dd, J=13.6, 5.7Hz, 2H), 5.29-5.40(m, 4H), 5.43-5.46(m, 2H).
실시예 24
3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로판-1,2-디올(화합물 24)
실시예 1에서 얻어진 화합물 1(100 ㎎, 0.167 mmol)을 1-프로판올(1 ㎖)에 용해시키고, 글리시돌(0.111 ㎖, 1.67 mmol)을 첨가하고, 마이크로웨이브 조사(300 W, 100℃, 2시간)를 행하였다. 반응 용액에 물을 첨가하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼87/13)로 정제함으로써 화합물 24(30.4 ㎎, 27.1%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 675(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.9Hz, 3.0H), 0.93(t, J=7.3Hz, 3.0H), 1.26-1.38(m, 22.0H), 1.51-1.67(m, 8.0H), 2.05(q, J=6.4Hz, 8.0H), 2.33-2.42(m, 1.0H), 2.54(dd, J=10.2, 4.3Hz, 1.0H), 2.66-2.90(m, 7.0H), 3.04(dd, J=9.9, 5.9Hz, 1.0H), 3.40-3.58(m, 9.5H), 3.63-3.88(m, 7.5H), 5.28-5.44(m, 8.0H).
실시예 25
(3R,4R)-1-(2-(디메틸아미노)아세틸)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 25)
실시예 1에서 얻어진 화합물 1(100 ㎎, 0.167 mmol)을 클로로포름(2 ㎖)에 용해시키고, N,N-디메틸글리신염산염(도쿄카세이고교사 제조, 46.5 ㎎, 0.333 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.146 ㎖, 0.833 mmol), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트(와타나베카가쿠고교사 제조, 217 ㎎, 0.417 mmol)를 첨가하고, 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼95/5)로 정제함으로써 화합물 25(98.9 ㎎, 86.8%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 686(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.29-1.41(m, 32H), 1.49-1.57(m, 4H), 2.05(q, J=6.5Hz, 8H), 2.31(s, 6H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 3.06(s, 2H), 3.37-3.70(m, 8H), 3.84-3.91(m, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 26
(3R,4R)-1-(2-(디메틸아미노)아세틸)피롤리딘-3,4-디일 디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노에이트)(화합물 26)
실시예 25와 동일한 방법으로, 실시예 2에서 얻어지는 화합물 2(300 ㎎, 0.478 mmol) 및 N,N-디메틸글리신염산염(도쿄카세이고교사 제조, 133 ㎎, 0.955 mmol)을 이용하여, 화합물 26(297 ㎎, 87.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 714(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.29-1.40(m, 28H), 1.56-1.64(m, 4H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.27-2.35(m, 10H), 2.77(t, J=5.7Hz, 4H), 3.06(s, 2H), 3.66-3.91(m, 4H), 5.18(d, J=4.0Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 27
(3R,4R)-1-(2-(디메틸아미노)아세틸)피롤리딘-3,4-디일 디((Z)-옥타데카-9-에노에이트)(화합물 27)
실시예 25와 동일한 방법으로, 실시예 9에서 얻어진 화합물 9(200 ㎎, 0.316 mmol) 및 N,N-디메틸글리신염산염(도쿄카세이고교사 제조, 88 ㎎, 0.633 mmol)을 이용하여, 화합물 27(210 ㎎, 92.5%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 718(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 40H), 1.56-1.64(m, 4H), 2.01(q, J=6.2Hz, 8H), 2.27-2.34(m, 10H), 3.06(s, 2H), 3.66-3.91(m, 4H), 5.18(d, J=3.7Hz, 2H), 5.34(tt, J=11.2, 4.6Hz, 4H).
실시예 28
(3R,4R)-1-(3-(디메틸아미노)프로파노일)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 28)
실시예 25와 동일한 방법으로, 실시예 1에서 얻어진 화합물 1(63.0 ㎎, 0.105 mmol) 및 3-(디메틸아미노)프로피온산[매트릭스 사이언티픽(MATRIX Scientific)사 제조, 24.6 ㎎, 0.210 mmol]을 이용하여, 화합물 28(43.2 ㎎, 58.8%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 700(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.28-1.38(m, 32H), 1.48-1.57(m, 4H), 2.05(q, J=6.5Hz, 8H), 2.75-2.85(m, 6H), 2.95(s, 6H), 3.42-3.53(m, 8H), 3.59-3.66(m, 2H), 3.86-3.95(m, 2H), 5.28-5.44(m, 8H).
실시예 29
(3R,4R)-1-(3-(디메틸아미노)프로파노일)피롤리딘-3,4-디일 디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노에이트)(화합물 29)
실시예 25와 동일한 방법으로, 실시예 2에서 얻어지는 화합물 2(60.0 ㎎, 0.096 mmol) 및 3-(디메틸아미노)프로피온산(MATRIX Scientific사 제조, 22.4 ㎎, 0.191 mmol)을 이용하여, 화합물 29(57.6 ㎎, 82.9%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 728(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=7.0Hz, 6H), 1.26-1.40(m, 28H), 1.55-1.63(m, 4H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.27-2.34(m, 10H), 2.44(t, J=7.4Hz, 2H), 2.68(t, J=7.4Hz, 2H), 2.77(t, J=5.7Hz, 4H), 3.55(d, J=12.1Hz, 1H), 3.64-3.78(m, 2H), 3.82(dd, J=12.1, 4.0Hz, 1H), 5.18(d, J=4.0Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 30
(3R,4R)-1-(3-(디메틸아미노)프로파노일)피롤리딘-3,4-디일 디((Z)-옥타데카-9-에노에이트)(화합물 30)
실시예 25와 동일한 방법으로, 실시예 9에서 얻어진 화합물 9(200 ㎎, 0.316 mmol) 및 3-(디메틸아미노)프로피온산(MATRIX Scientific사 제조, 74.1 ㎎, 0.633 mmol)을 이용하여, 화합물 30(209 ㎎, 90.3%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 732(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 38H), 1.56-1.65(m, 4H), 1.74(br s, 2H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.28-2.34(m, 10H), 2.46(t, J=7.3Hz, 2H), 2.72(t, J=7.3Hz, 2H), 3.55(d, J=12.1Hz, 1H), 3.67-3.85(m, 3H), 5.19(d, J=3.7Hz, 2H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 31
(3R,4R)-1-((S)-2,6-디아미노헥사노일)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 31)
Nε-(tert-부톡시카르보닐)-Nα-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐]-L-리신(도쿄카세이고교사 제조, 125 ㎎, 0.267 mmol), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트(와타나베카가쿠고교사 제조, 146 ㎎, 0.280 mmol)를 클로로포름(1 ㎖)에 용해시켜, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 실시예 1에서 얻어진 화합물 1(80.0 ㎎, 0.133 mmol)의 클로로포름(2 ㎖) 용액을 첨가하고, 실온에서 7시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 Nε-(tert-부톡시카르보닐)-Nα-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐]-L-리신(도쿄카세이고교사 제조, 187 ㎎, 0.400 mmol), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트(와타나베카가쿠고교사 제조, 222 ㎎, 0.427 mmol)를 첨가하고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물에 Nε-(tert-부톡시카르보닐)-Nα-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐]-L-리신(도쿄카세이고교사 제조, 156 ㎎, 0.333 mmol), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트(Aldrich사 제조, 152 ㎎, 0.400 mmol)를 첨가하고, 실온에서 밤새도록, 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 패드에 통과시킴으로써, (5S)-5-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐아미노)-6-(3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)-6-옥소헥실카르바민산 tert-부틸에스테르의 조생성물을 얻었다.
얻어진 조생성물을 디클로로메탄(2 ㎖)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(0.103 ㎖, 1.33 mmol)을 첨가하고, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 트리플루오로아세트산(0.205 ㎖, 2.67 mmol)을 첨가하고, 실온에서 4.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼87/13)로 정제함으로써 (9H-플루오렌-9-일)메틸(2S)-6-아미노-1-(3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)-1-옥소헥산-2-일카르바메이트(66.1 ㎎, 두 공정에서 52.2%)를 얻었다.
얻어진 (9H-플루오렌-9-일)메틸(2S)-6-아미노-1-(3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)-1-옥소헥산-2-일카르바메이트(65 ㎎, 0.068 mmol)를 테트라히드로푸란(2 ㎖)에 용해시키고, 피롤리딘(0.5 ㎖)을 첨가하고, 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼60/40)로 정제함으로써 화합물 31(24.0 ㎎, 48.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 729(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.9Hz, 6H), 1.26-1.38(m, 32H), 1.50-1.74(m, 10H), 2.05(q, J=6.5Hz, 8H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 3.01(br s, 2H), 3.32-3.72(m, 8H), 3.86(br s, 2H), 3.93(br s, 1H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 32
N-메틸-N,N-비스(2-((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)에틸)아민(화합물 32)
참고예 1과 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 119 ㎎, 0.999 mmol) 및 (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 861 ㎎, 2.50 mmol)를 이용하여, 화합물 32(68.3 ㎎, 11.1%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 617(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.9Hz, 6H), 1.29(br s, 32H), 1.50-1.61(m, 4H), 2.00-2.09(m, 8H), 2.33(s, 3H), 2.64(t, J=6.1Hz, 4H), 2.77(t, J=5.6Hz, 4H), 3.41(t, J=6.8Hz, 4H), 3.52(t, J=6.1Hz, 4H), 5.27-5.44(m, 8H).
실시예 33
N-메틸-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아민(화합물 33)
참고예 1과 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 119 ㎎, 0.999 mmol) 및 (Z)-옥타데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 865 ㎎, 2.50 mmol)를 이용하여, 화합물 33(156 ㎎, 25.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 621(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.25-1.34(m, 44H), 1.51-1.60(m, 4H), 1.97-2.04(m, 8H), 2.33(s, 3H), 2.63(t, J=6.1Hz, 4H), 3.41(t, J=6.8Hz, 4H), 3.52(t, J=6.1Hz, 4H), 5.28-5.40(m, 4H).
실시예 34
N-메틸-N,N-비스(2-(테트라데실옥시)에틸)아민(화합물 34)
참고예 1과 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 119 ㎎, 0.999 mmol) 및 테트라데실 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 731 ㎎, 2.50 mmol)를 이용하여, 화합물 34(99.3 ㎎, 0.194 mmol)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 513(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26(br s, 44H), 1.51-1.60(m, 4H), 2.33(s, 3H), 2.64(t, J=6.1Hz, 4H), 3.41(t, J=6.8Hz, 4H), 3.52(t, J=5.9Hz, 4H).
실시예 35
N-메틸-N,N-비스(2-((Z)-헥사데카-9-에닐옥시)에틸)아민(화합물 35)
참고예 1과 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 82.6 ㎎, 0.693 mmol) 및 (Z)-헥사데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 530 ㎎, 1.66 mmol)를 이용하여, 화합물 35(199 ㎎, 50.9%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 565(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.29(br s, 36H), 1.51-1.56(m, 4H), 1.97-2.04(m, 8H), 2.33(s, 3H), 2.64(t, J=6.1Hz, 4H), 3.41(t, J=6.8Hz, 4H), 3.52(t, J=6.1Hz, 4H), 5.28-5.40(m, 4H).
실시예 36
N-메틸-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-6-에닐옥시)에틸)아민(화합물 36)
참고예 1과 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 66.3 ㎎, 0.557 mmol) 및 (Z)-옥타데카-6-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 463 ㎎, 1.34 mmol)를 이용하여, 화합물 36(205 ㎎, 59.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 621(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.24-1.37(m, 44H), 1.52-1.63(m, 4H), 1.97-2.06(m, 8H), 2.33(s, 3H), 2.64(t, J=6.1Hz, 4H), 3.41(t, J=6.6Hz, 4H), 3.52(t, J=6.1Hz, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 37
N-메틸-N,N-비스(2-(옥타데실옥시)에틸)아민(화합물 37)
참고예 5와 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 179 ㎎, 1.50 mmol) 및 1-브로모옥타데칸(도쿄카세이고교사 제조, 1.20 g, 3.60 mmol)을 이용하여, 화합물 37(218 ㎎, 23.3%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 625(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26(s, 60H), 1.51-1.60(m, 4H), 2.33(s, 3H), 2.64(t, J=6.1Hz, 4H), 3.41(t, J=6.6Hz, 4H), 3.52(t, J=6.1Hz, 4H).
실시예 38
(3R,4R)-3,4-비스(헥사데실옥시)피롤리딘(화합물 38)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 11에서 얻어진 화합물 VI-11(288 ㎎, 0.449 mmol)을 이용하여, 화합물 38(210 ㎎, 84.8%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 553(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.34(m, 50H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.66-1.68(m, 3H), 2.82(dd, J=12.5, 3.0Hz, 2H), 3.09(dd, J=12.5, 5.0Hz, 2H), 3.43(td, J=6.6, 0.7Hz, 4H), 3.76(dd, J=5.0, 3.0Hz, 2H).
실시예 39
(3R,4R)-3,4-비스(옥타데실옥시)피롤리딘(화합물 39)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 12에서 얻어진 화합물 VI-12(290 ㎎, 0.415 mmol)를 이용하여, 화합물 39(209 ㎎, 82.6%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 609(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.34(m, 58H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.64(br s, 3H), 2.82(dd, J=12.3, 3.1Hz, 2H), 3.09(dd, J=12.3, 5.0Hz, 2H), 3.43(t, J=6.6Hz, 4H), 3.77(dd, J=5.0, 3.1Hz, 2H).
실시예 40
(3R,4R)-3,4-비스((Z)-테트라데카-9-에닐옥시)피롤리딘(화합물 40)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 13에서 얻어진 화합물 VI-13(100 ㎎, 0.172 mmol)을 이용하여, 화합물 40(71.4 ㎎, 84.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 492(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.87-0.92(m, 6H), 1.29-1.35(m, 26H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.64(br s, 3H), 2.02(q, J=5.9Hz, 8H), 2.82(dd, J=12.5, 2.9Hz, 2H), 3.09(dd, J=12.5, 4.9Hz, 2H), 3.37-3.49(m, 4H), 3.76(dd, J=4.9, 2.9Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 41
(3R,4R)-3,4-비스((Z)-옥타데카-11-에닐옥시)피롤리딘(화합물 41)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 14에서 얻어진 화합물 VI-14(220 ㎎, 0.317 mmol)를 이용하여, 화합물 41(157 ㎎, 82.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 605(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.37(m, 42H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.87(br s, 2H), 2.01(q, J=6.1Hz, 8H), 2.83(dd, J=12.5, 2.9Hz, 2H), 3.10(dd, J=12.5, 5.0Hz, 2H), 3.43(t, J=6.8Hz, 4H), 3.77(dd, J=5.0, 2.9Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 42
(3R,4R)-3,4-비스((Z)-이코사-11-에닐옥시)피롤리딘(화합물 42)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 15에서 얻어진 화합물 VI-15(225 ㎎, 0.300 mmol)를 이용하여, 화합물 42(168 ㎎, 84.6%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 661(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.36(m, 50H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.78(br s, 2H), 2.01(q, J=6.2Hz, 8H), 2.82(dd, J=12.5, 2.9Hz, 2H), 3.09(dd, J=12.5, 5.0Hz, 2H), 3.43(td, J=6.7, 0.9Hz, 4H), 3.76(dd, J=5.0, 2.9Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 43
(3S,4S)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 43)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 10에서 얻어진 화합물 VI-10(929 ㎎, 1.35 mmol)을 이용하여, 화합물 43(728 ㎎, 90.1%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 601(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.9Hz, 6H), 1.30-1.41(m, 30H), 1.50-1.60(m, 4H), 1.65(br s, 3H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.75-2.85(m, 6H), 3.09(dd, J=12.5, 5.3Hz, 2H), 3.43(t, J=6.6Hz, 4H), 3.75-3.78(m, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 44
트랜스-3,4-비스(((Z)-헥사데카-9-에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 44)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 17에서 얻어진 화합물 VI-16(335 ㎎, 0.503 mmol)을 이용하여, 화합물 44(260 ㎎, 89.7%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 577(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.29-1.35(m, 36H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.96-2.07(m, 10H), 2.70(dd, J=11.1, 5.7Hz, 2H), 3.06(dd, J=11.1, 7.3Hz, 2H), 3.28-3.46(m, 8H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 45
(3R,4R)-3,4-비스(헥사데실옥시)-1-메틸피롤리딘(화합물 45)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 38에서 얻어진 화합물 38(175 ㎎, 0.317 mmol)을 이용하여, 화합물 45(182 ㎎)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 567(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 52H), 1.52-1.61(m, 4H), 2.31(s, 3H), 2.46(dd, J=9.6, 4.3Hz, 2H), 2.82(dd, J=9.6, 5.5Hz, 2H), 3.37-3.48(m, 4H), 3.81(dd, J=5.5, 4.3Hz, 2H).
실시예 46
(3R,4R)-1-메틸-3,4-비스(옥타데실옥시)피롤리딘(화합물 46)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 39에서 얻어진 화합물 39(174 ㎎, 0.286 mmol)를 이용하여, 화합물 46(169 ㎎, 95.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 623(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 60H), 1.52-1.61(m, 4H), 2.31(s, 3H), 2.46(dd, J=9.9, 4.3Hz, 2H), 2.82(dd, J=9.9, 5.6Hz, 2H), 3.37-3.48(m, 4H), 3.81(dd, J=5.6, 4.3Hz, 2H).
실시예 47
(3R,4R)-1-메틸-3,4-비스((Z)-테트라데카-9-에닐옥시)피롤리딘(화합물 47)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 40에서 얻어진 화합물 40(55 ㎎, 0.112 mmol)을 이용하여, 화합물 47(53.4 ㎎, 93.6%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 507(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.87-0.92(m, 6H), 1.26-1.35(m, 28H), 1.52-1.61(m, 4H), 1.98-2.05(m, 8H), 2.31(s, 3H), 2.46(dd, J=9.9, 4.2Hz, 2H), 2.82(dd, J=9.9, 5.6Hz, 2H), 3.37-3.48(m, 4H), 3.81(dd, J=5.6, 4.2Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 48
(3R,4R)-1-메틸-3,4-비스((Z)-옥타데카-11-에닐옥시)피롤리딘(화합물 48)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 41에서 얻어진 화합물 41(130 ㎎, 0.215 mmol)을 이용하여, 화합물 48(125 ㎎, 94.3%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 619(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.36(m, 44H), 1.52-1.61(m, 4H), 2.01(q, J=6.1Hz, 8H), 2.31(s, 3H), 2.46(dd, J=9.9, 4.0Hz, 2H), 2.82(dd, J=9.9, 5.9Hz, 2H), 3.37-3.48(m, 4H), 3.81(t, J=4.9Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 49
(3R,4R)-3,4-비스((Z)-이코사-11-에닐옥시)-1-메틸피롤리딘(화합물 49)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 42에서 얻어진 화합물 42(141 ㎎, 0.214 mmol)를 이용하여, 화합물 49(132 ㎎, 91.7%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 675(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.36(m, 52H), 1.52-1.61(m, 4H), 2.01(q, J=6.1Hz, 8H), 2.31(s, 3H), 2.46(dd, J=10.0, 4.2Hz, 2H), 2.82(dd, J=10.0, 5.9Hz, 2H), 3.37-3.48(m, 4H), 3.81(t, J=4.8Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 50
(3S,4S)-1-메틸-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 50)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 43에서 얻어진 화합물 43(325 ㎎, 0.542 mmol)을 이용하여, 화합물 50(330 ㎎, 99.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 615(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.7Hz, 6H), 1.29-1.38(m, 30H), 1.51-1.62(m, 4H), 1.71(br s, 2H), 2.05(q, J=6.5Hz, 8H), 2.31(s, 3H), 2.46(dd, J=10.0, 4.5Hz, 2H), 2.75-2.86(m, 6H), 3.36-3.49(m, 4H), 3.81(t, J=4.5Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 51
트랜스-3,4-비스(((Z)-헥사데카-9-에닐옥시)메틸)-1-메틸피롤리딘(화합물 51)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 44에서 얻어진 화합물 44(175 ㎎, 0.304 mmol)를 이용하여, 화합물 51(174 ㎎, 97.1%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 591(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 36H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.98-2.11(m, 10H), 2.33(s, 3H), 2.39(dd, J=9.2, 5.3Hz, 2H), 2.67(dd, J=9.2, 7.3Hz, 2H), 3.31-3.45(m, 8H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 52
(3S,4S)-1,1-디메틸-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리디늄클로라이드(화합물 52)
실시예 19와 동일한 방법으로, 실시예 50에서 얻어진 화합물 50(125 ㎎, 0.204 mmol)을 이용하여, 화합물 52(135 ㎎, 99.8%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 629 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.7Hz, 6H), 1.29-1.38(m, 30H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.72(br s, 2H), 2.05(q, J=6.5Hz, 8H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 3.43-3.57(m, 4H), 3.68(s, 6H), 3.87(dd, J=13.2, 3.6Hz, 2H), 4.03-4.13(m, 4H), 5.28-5.44(m, 8H).
실시예 53
(3R,4R)-1-(2,3-디히드록시프로필)피롤리딘-3,4-디일 디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-에노에이트)(화합물 53)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 2에서 얻어진 화합물 2(100 ㎎, 0.159 mmol), DL-2,3-디히드록시프로파날(알드리치사 제조, 143 ㎎, 1.59 mmol)을 이용하여, 화합물 53(95.4 ㎎, 85.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 703(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.25-1.40(m, 28H), 1.56-1.66(m, 4H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.31(t, J=7.5Hz, 4H), 2.39-2.48(m, 1H), 2.56(dd, J=10.8, 3.8Hz, 1H), 2.67-2.85(m, 6H), 3.09(dd, J=10.3, 5.9Hz, 1H), 3.24(dd, J=10.3, 5.9Hz, 1H), 3.50-3.56(m, 1H), 3.72-3.80(m, 2H), 5.11(dd, J=8.8, 5.1Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 54
1-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로판-2-올(화합물 54)
실시예 24와 같은 방법으로, 실시예 1에서 얻어진 화합물 1(100 ㎎, 0.167 mmol), 1,2-에폭시프로판(0.023 ㎖, 0.333 mmol)을 이용하여, 화합물 54(94.7 ㎎, 86.1%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 659(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.12(d, J=6.2Hz, 3H), 1.26-1.40(m, 28H), 1.52-1.61(m, 8H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.22-2.30(m, 1H), 2.41-2.52(m, 2H), 2.67(dd, J=10.1, 4.6Hz, 1H), 2.75-2.85(m, 5H), 3.03(dd, J=9.5, 5.9Hz, 1H), 3.38-3.49(m, 4H), 3.73-3.85(m, 3H), 5.29-5.43(m, 8H).
실시예 55
1-(3R,4R)-3,4-비스(((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)-3-메톡시프로판-2-올(화합물 55)
실시예 24와 동일한 방법으로, 실시예 1에서 얻어진 화합물 1(100 ㎎, 0.167 mmol), 2-(메톡시메틸)옥시란(0.035 ㎖, 0.333 mmol)을 이용하여, 화합물 55(92.9 ㎎, 80.8%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 689(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.30-1.38(m, 28H), 1.52-1.60(m, 8H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.33-2.43(m, 1H), 2.50-2.56(m, 1H), 2.59-2.68(m, 2H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 2.86(dd, J=9.7, 6.0Hz, 1H), 3.01(dd, J=9.7, 6.0Hz, 1H), 3.33-3.49(m, 9H), 3.79-3.87(m, 3H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 56
3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로판-1-올(화합물 56)
실시예 1에서 얻어진 화합물 1(100 ㎎, 0.167 mmol)을 에탄올(2 ㎖)에 용해시키고, 아크릴산에틸(0.181 ㎖, 1.67 mmol), 나트륨에톡시드(5.7 ㎎, 0.083 mmol)를 첨가하여 가열 환류 하에 5.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각시킨 후에 감압 하에 용매를 증류 제거하고, 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼97/3)로 정제함으로써 에틸 3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로파노에이트(107 ㎎, 91.2%)를 얻었다.
얻어진 에틸 3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로파노에이트(220 ㎎, 0.314 mmol)를 THF(4 ㎖)에 용해시키고, -78℃에서 1.0 mol/ℓ 수소화디이소부틸알루미늄톨루엔 용액(0.943 ㎖, 0.943 mmol)을 첨가하였다. -78℃에서 0℃까지 서서히 승온하면서 2시간 동안 교반하고, 반응 혼합물에 포화 염화암모늄 수용액을 첨가하였다. 수층을 아세트산에틸로 추출하고, 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/3∼93/7)로 정제함으로써 화합물 56(113 ㎎, 54.5%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 659(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(dd, J=7.5, 6.0Hz, 6H), 1.26-1.40(m, 32H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.66-1.73(m, 2H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.56-2.79(m, 8H), 2.90(dd, J=9.7, 5.7Hz, 2H), 3.41(t, J=6.6Hz, 4H), 3.76-3.81(m, 4H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 57
3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로판아미드(화합물 57)
실시예 56에서 얻어진 에틸 3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로파노에이트(180 ㎎, 0.257 mmol)를 에탄올(2 ㎖)에 용해시키고, 2 mol/ℓ 수산화나트륨 수용액(2 ㎖)을 첨가하여, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 1 mol/ℓ 염산 수용액을 첨가하여 pH 4로 한 후, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후에 여과하고, 감압 하에 농축시킴으로써 3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로판산(148 ㎎, 85.8%)을 얻었다.
얻어진 3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로판산(64 ㎎, 0.095 mmol)을 클로로포름(2 ㎖)에 용해시키고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU, 알드리치사 제조, 72 ㎎, 0.190 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.083 ㎖, 0.476 mmol), 2 mol/ℓ 암모니아메탄올 용액(0.238 ㎖, 0.476 mmol)을 첨가하고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 물, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼90/10)로 정제함으로써 화합물 57(46.1 ㎎, 72.1%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 672(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.40(m, 32H), 1.51-1.60(m, 4H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.39(t, J=6.0Hz, 2H), 2.56(dd, J=9.7, 4.2Hz, 2H), 2.63-2.80(m, 6H), 2.90(dd, J=9.7, 5.9Hz, 2H), 3.37-3.49(m, 4H), 3.81(t, J=4.2Hz, 2H), 5.24(br s, 1H), 5.28-5.43(m, 8H), 8.07(br s, 1H).
실시예 58
3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)-N,N-디메틸프로판아미드(화합물 58)
실시예 57에서 얻어진 3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로판산(63 ㎎, 0.094 mmol)을 클로로포름(2 ㎖)에 용해시키고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU, 알드리치사 제조, 71 ㎎, 0.187 mmol), 2 mol/ℓ 디메틸아민 THF 용액(0.234 ㎖, 0.469 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.082 ㎖, 0.469 mmol)을 첨가하고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 물, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼95/5)로 정제함으로써 화합물 58(60.7 ㎎, 92.6%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 700(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=7.0Hz, 6H), 1.26-1.40(m, 32H), 1.52-1.61(m, 4H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.51-2.56(m, 4H), 2.70-2.83(m, 6H), 2.87-2.95(m, 2H), 2.93(s, 3H), 3.00(s, 3H), 3.37-3.49(m, 4H), 3.81(t, J=4.8Hz, 2H), 5.29-5.43(m, 8H).
실시예 59
(3R,4R)-1-(3-N,N-디메틸아미노프로필)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 59)
실시예 56에서 얻어진 화합물 56(110 ㎎, 0.167 mmol)을 디클로로메탄(3 ㎖)에 용해시키고, 트리에틸아민(0.082 ㎖, 0.585 mmol), 무수 메탄술폰산(58 ㎎, 0.334 mmol)을 첨가하여, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 물, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시킴으로써 3-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)프로필 메탄술포네이트의 조생성물을 얻었다.
얻어진 조생성물을 THF(1 ㎖)에 용해시키고, 2.0 mol/ℓ 디메틸아민 THF 용액(0.835 ㎖, 1.67 mmol)을 첨가하고, 마이크로웨이브 조사(300 W, 100℃, 1시간)를 행하였다. 반응 용액을 농축시키고, 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼75/25)로 정제함으로써 화합물 59(96.6 ㎎, 84.4%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 686(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.40(m, 32H), 1.52-1.62(m, 4H), 1.63-1.76(m, 2H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.23(s, 6H), 2.29-2.52(m, 6H), 2.75-2.87(m, 6H), 3.37-3.49(m, 4H), 3.81(t, J=4.8Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 60
4-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)-1-메틸피페리딘(화합물 60)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 1에서 얻어진 화합물 1(100 ㎎, 0.167 mmol), 1-메틸피페리딘-4-온(알드리치사 제조, 0.205 ㎖, 1.67 mmol)을 이용하여, 화합물 60(72.0 ㎎, 62.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 698(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.29-1.40(m, 32H), 1.52-1.62(m, 6H), 1.77-1.83(m, 2H), 1.89-2.08(m, 11H), 2.24(s, 3H), 2.53(dd, J=9.6, 4.7Hz, 2H), 2.75-2.85(m, 6H), 2.92(dd, J=9.6, 6.2Hz, 2H), 3.37-3.49(m, 4H), 3.81(t, J=4.7Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 61
(3R,4R)-1-(2-아미노아세틸)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 61)
실시예 1에서 얻어진 화합물 1(100 ㎎, 0.167 mmol)을 클로로포름(2 ㎖)에 용해시키고, N-(tert-부톡시카르보닐)글리신(도쿄카세이고교사 제조, 55 ㎎, 0.250 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.146 ㎖, 0.833 mmol), HATU(O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트)(알드리치사 제조, 127 ㎎, 0.333 mmol)를 첨가하고, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 물, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼97/3)로 정제함으로써 tert-부틸 2-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸카르바메이트를 얻었다.
얻어진 tert-부틸 2-((3R,4R)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸카르바메이트를 디클로로메탄(2 ㎖)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(0.256 ㎖, 3.33 mmol)을 첨가하고, 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼85/15)로 정제함으로써 화합물 61(60.5 ㎎, 55.3%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 658(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.28-1.40(m, 32H), 1.49-1.58(m, 6H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 3.30-3.56(m, 9H), 3.69(d, J=12.5Hz, 1H), 3.86(d, J=4.8Hz, 1H), 3.92(d, J=3.7Hz, 1H), 5.29-5.43(m, 8H).
실시예 62
(3R,4R)-1-(3-아미노프로파노일)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 62)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 1에서 얻어진 화합물 1(96 ㎎, 0.160 mmol), N-(tert-부톡시카르보닐)-베타-알라닌(도쿄카세이고교사 제조, 45 ㎎, 0.240 mmol)을 이용하여, 화합물 62(52.5 ㎎, 49.1%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 672(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=7.0Hz, 6H), 1.26-1.38(m, 32H), 1.49-1.57(m, 4H), 1.88(br s, 2H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.43(td, J=6.0, 1.5Hz, 2H), 2.77(t, J=6.0Hz, 4H), 3.03(t, J=6.0Hz, 2H), 3.37-3.67(m, 8H), 3.85-3.91(m, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 63
(3R,4R)-1-((S)-2,5-디아미노펜타노일)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 63)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 1에서 얻어진 화합물 1(100 ㎎, 0.167 mmol), (S)-2,5-비스(tert-부톡시카르보닐아미노)펜탄산(와타나베카가쿠고교사 제조, 83 ㎎, 0.250 mmol)을 이용하여, 화합물 63(70.5 ㎎, 59.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 715(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=7.0Hz, 6H), 1.29-1.68(m, 40H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.69-2.79(m, 6H), 3.37-3.56(m, 7H), 3.64-3.69(m, 2H), 3.85-3.92(m, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 64
(3R,4R)-1-(6-아미노헥사노일)-3,4-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)피롤리딘(화합물 64)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 1에서 얻어진 화합물 1(100 ㎎, 0.167 mmol), 6-(tert-부톡시카르보닐아미노)헥산산(와타나베카가쿠고교사 제조, 58 ㎎, 0.250 mmol)을 이용하여, 화합물 64(85.5 ㎎, 71.7%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 714(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.71(m, 42H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.25(t, J=7.5Hz, 2H), 2.70-2.79(m, 6H), 3.37-3.65(m, 8H), 3.84-3.90(m, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 65
(3R,4R)-1-(2-아미노아세틸)피롤리딘-3,4-디일 디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-에노에이트)(화합물 65)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 2에서 얻어진 화합물 2(100 ㎎, 0.159 mmol), N-(tert-부톡시카르보닐)글리신(도쿄카세이고교사 제조, 41.8 ㎎, 0.239 mmol)을 이용하여, 화합물 65(73.4 ㎎, 67.3%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 686(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.40(m, 28H), 1.56-1.65(m, 4H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.27-2.34(m, 4H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 3.38-3.53(m, 3H), 3.68-3.81(m, 3H), 5.20(br s, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 66
(3R,4R)-1-((S)-2,6-디아미노헥사노일)피롤리딘-3,4-디일 디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-에노에이트)(화합물 66)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 2에서 얻어진 화합물 2(100 ㎎, 0.159 mmol), (S)-2,6-비스(tert-부톡시카르보닐아미노)헥산산(와타나베카가쿠 고교사 제조, 87 ㎎, 0.239 mmol)을 이용하여, 화합물 66(73.0 ㎎, 60.7%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 757(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.65(m, 38H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.28-2.34(m, 4H), 2.70(t, J=6.1Hz, 2H), 2.77(t, J=6.1Hz, 4H), 3.43(dd, J=7.3, 4.8Hz, 1H), 3.54(d, J=11.9Hz, 1H), 3.74(br s, 2H), 3.88(dd, J=11.9, 4.0Hz, 1H), 5.20-5.21(m, 2H), 5.29-5.43(m, 8H).
실시예 67
비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아민(화합물 67)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 19에서 얻어진 화합물 VI-17(243 ㎎, 0.349 mmol)을 이용하여, 화합물 67(212 ㎎, 69.5%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 607(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.25-1.35(m, 44H), 1.54-1.59(m, 4H), 1.65(s, 1H), 1.98-2.05(m, 8H), 2.80(t, J=5.3Hz, 4H), 3.42(t, J=6.8Hz, 4H), 3.53(t, J=5.3Hz, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 68
비스(2-((Z)-테트라데카-9-에닐옥시)에틸)아민(화합물 68)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 20에서 얻어진 화합물 VI-18(402 ㎎, 0.688 mmol)을 이용하여, 화합물 68(291 ㎎, 85.6%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 494(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.90(t, J=7.1Hz, 6H), 1.29(br s, 28H), 1.53-1.62(m, 4H), 1.97-2.06(m, 9H), 2.81(t, J=5.3Hz, 4H), 3.42(t, J=6.7Hz, 4H), 3.53(t, J=5.4Hz, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 69
비스(2-(테트라데실옥시)에틸)아민(화합물 69)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 21에서 얻어진 화합물 VI-19(150 ㎎, 0.255 mmol)를 이용하여, 화합물 69(79.2 ㎎, 62.4%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 499(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26(br s, 44H), 1.52-1.60(m, 4H), 1.89(br s, 1H), 2.81(t, J=5.4Hz, 4H), 3.43(t, J=6.7Hz, 4H), 3.54(t, J=5.3Hz, 4H).
실시예 70
비스(2-(헥사데실옥시)에틸)아민(화합물 70)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 22에서 얻어진 화합물 VI-20(389 ㎎, 0.604 mmol)을 이용하여, 화합물 70(244 ㎎, 72.9%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 555(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26(br s, 52H), 1.52-1.61(m, 4H), 1.91(br s, 1H), 2.82(t, J=5.4Hz, 4H), 3.43(t, J=6.7Hz, 4H), 3.54(t, J=5.4Hz, 4H).
실시예 71
비스(2-(옥타데실옥시)에틸)아민(화합물 71)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 23에서 얻어진 화합물 VI-21(399 ㎎, 0.570 mmol)을 이용하여, 화합물 71(151 ㎎, 43.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 611(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.7Hz, 6H), 1.25(br s, 60H), 1.51-1.60(m, 4H), 2.08(br s, 1H), 2.84(t, J=5.3Hz, 4H), 3.43(t, J=6.6Hz, 4H), 3.55(t, J=5.4Hz, 4H).
실시예 72
비스(2-((Z)-헥사데카-9-에닐옥시)에틸)아민(화합물 72)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 24에서 얻어진 화합물 VI-22(700 ㎎, 1.09 mmol)를 이용하여, 화합물 72(516 ㎎, 85.9%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 550(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 36H), 1.52-1.63(m, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.80(t, J=5.3Hz, 4H), 3.42(t, J=6.6Hz, 4H), 3.53(t, J=5.3Hz, 4H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 73
N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)에틸)아민(화합물 73)
tert-부틸 비스(2-히드록시에틸)카르바메이트(알드리치사 제조, 600 ㎎, 2.92 mmol)를 디클로로메탄(30 ㎖)에 용해시키고, 올레산(도쿄카세이고교사 제조, 1.82 g, 6.43 mmol)과 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염(1.29 g, 6.72 mmol)과 4-디메틸아미노피리딘(89 ㎎, 0.731 mmol)을 첨가하고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/클로로포름=50/50∼0/100)로 정제하고, tert-부틸 N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)에틸)카르바메이트(1.26 g, 58.7%)를 얻었다.
얻어진 tert-부틸 N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)에틸)카르바메이트(1.22 g, 1.66 mmol)를 디클로로메탄(30 ㎖)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(2.56 ㎖, 33.2 mmol)을 첨가하고, 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼96/4)로 정제함으로써 화합물 73(998 ㎎, 94.6%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 635(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 40H), 1.58-1.67(m, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.32(t, J=7.7Hz, 4H), 2.89(t, J=5.5Hz, 4H), 4.18(t, J=5.5Hz, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 74
N,N-비스(2-((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노일옥시)에틸)아민(화합물 74)
실시예 73과 동일한 방법으로, tert-부틸 비스(2-히드록시에틸)카르바메이트(알드리치사 제조, 415 ㎎, 2.02 mmol), 리놀산(알드리치사 제조, 1.25 g, 4.45 mmol)을 이용하여, 화합물 74(494 ㎎, 82.6%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 631(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.7Hz, 6H), 1.31(br s, 28H), 1.54(br s, 1H), 1.58-1.66(m, 4H), 2.00-2.09(m, 8H), 2.32(t, J=7.6Hz, 4H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 2.89(t, J=5.4Hz, 4H), 4.17(t, J=5.6Hz, 4H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 75
N-메틸-N,N-비스(2-((Z)-테트라데카-9-에닐옥시)에틸)아민(화합물 75)
참고예 1과 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 25.0 ㎎, 0.210 mmol) 및 (Z)-테트라데카-9-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 152 ㎎, 0.524 mmol)를 이용하여, 화합물 75(25.5 ㎎, 23.9%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 509(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.90(t, J=7.1Hz, 6H), 1.25-1.37(m, 28H), 1.51-1.62(m, 4H), 1.98-2.06(m, 8H), 2.33(s, 3H), 2.64(t, J=6.1Hz, 4H), 3.41(t, J=6.7Hz, 4H), 3.52(t, J=6.1Hz, 4H), 5.29-5.41(m, 4H).
실시예 76
N,N-비스(2-(헥사데실옥시)에틸)-N-메틸아민(화합물 76)
참고예 5와 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 60.0 ㎎, 0.504 mmol) 및 헥사데실 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 403 ㎎, 1.26 mmol)를 이용하여, 화합물 76(135 ㎎, 47.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 569(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26(br s, 52H), 1.52-1.61(m, 4H), 2.33(s, 3H), 2.64(t, J=6.0Hz, 4H), 3.41(t, J=6.8Hz, 4H), 3.52(t, J=6.0Hz, 4H).
실시예 77
N-메틸-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-11-에닐옥시)에틸)아민(화합물 77)
참고예 1과 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 80 ㎎, 0.671 mmol) 및 (Z)-옥타데카-11-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 582 ㎎, 1.68 mmol)를 이용하여, 화합물 77(198 ㎎, 47.5%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 621(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 44H), 1.56(dd, J=16.9, 10.3Hz, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.33(s, 3H), 2.64(t, J=6.0Hz, 4H), 3.41(t, J=6.8Hz, 4H), 3.52(t, J=6.0Hz, 4H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 78
N,N-비스(2-((Z)-이코사-11-에닐옥시)에틸)-N-메틸아민(화합물 78)
참고예 1과 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 64.1 ㎎, 0.538 mmol) 및 (Z)-이코사-11-에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 504 ㎎, 1.35 mmol)를 이용하여, 화합물 78(164 ㎎, 45.1%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 677(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.7Hz, 6H), 1.27(br s, 52H), 1.50-1.61(m, 4H), 1.96-2.06(m, 8H), 2.33(s, 3H), 2.64(t, J=6.1Hz, 4H), 3.41(t, J=6.7Hz, 4H), 3.52(t, J=6.1Hz, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 79
N,N-비스(2-((11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐옥시)에틸)-N-메틸아민(화합물 79)
참고예 1과 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 58.0 ㎎, 0.487 mmol) 및 (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐 메탄술포네이트(Nu-Chek Prep, Inc사 제조, 453 ㎎, 1.22 mmol)를 이용하여, 화합물 79(204 ㎎, 62.4%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 673(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.7Hz, 6H), 1.29(br s, 40H), 1.51-1.60(m, 4H), 2.01-2.09(m, 8H), 2.33(s, 3H), 2.64(t, J=6.1Hz, 4H), 2.77(t, J=5.6Hz, 4H), 3.41(t, J=6.7Hz, 4H), 3.52(t, J=6.1Hz, 4H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 80
N,N-디메틸-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아미늄클로라이드(화합물 80)
실시예 22와 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어진 화합물 67(104 ㎎, 0.172 mmol)을 이용하여, 화합물 80(114 ㎎, 99.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 635 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 44H), 1.51-1.60(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 3.44(s, 6H), 3.46(t, J=6.6Hz, 4H), 3.87-3.91(m, 4H), 3.97-4.01(m, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 81
N,N-디메틸-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)에틸)아미늄클로라이드(화합물 81)
실시예 22와 동일한 방법으로, 실시예 73에서 얻어진 화합물 73(100 ㎎, 0.158 mmol)을 이용하여, 화합물 81(86.9 ㎎, 79.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 663 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 40H), 1.56-1.65(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.35(t, J=7.7Hz, 4H), 3.53(s, 6H), 4.12-4.15(m, 4H), 4.58-4.62(m, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 82
3-(비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아미노)프로판-1,2-디올(화합물 82)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어진 화합물 67(150 ㎎, 0.247 mmol), DL-2,3-디히드록시프로파날(알드리치사 제조, 223 ㎎, 2.48 mmol)을 이용하여, 화합물 82(24.2 ㎎, 14.4%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 681(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.36(m, 44H), 1.52-1.61(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.67-2.69(m, 2H), 2.73-2.88(m, 4H), 3.41(t, J=6.8Hz, 4H), 3.45-3.54(m, 5H), 3.64-3.74(m, 2H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 83
3-(비스(2-((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)에틸)아미노)프로판-1,2-디올(화합물 83)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 73에서 얻어진 화합물 73(150 ㎎, 0.246 mmol), DL-2,3-디히드록시프로파날(알드리치사 제조, 222 ㎎, 2.46 mmol)을 이용하여, 화합물 83(42.2 ㎎, 24.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 709(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 40H), 1.56-1.66(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.31(t, J=7.5Hz, 4H), 2.59-2.72(m, 2H), 2.76-2.93(m, 4H), 3.45-3.52(m, 1H), 3.66-3.78(m, 2H), 4.09-4.21(m, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 84
3-(비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아미노)프로판아미드(화합물 84)
실시예 67에서 얻어진 화합물 67(400 ㎎, 0.660 mmol)을 에탄올(8 ㎖)에 용해시키고, 아크릴산에틸(3.59 ㎖, 33.0 mmol), 나트륨에톡시드(22.5 ㎎, 0.330 mmol)를 첨가하여 가열 환류 하에 밤새도록 교반하였다. 반응 용액을 냉각시킨 후에 감압 하에 용매를 증류 제거하고, 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼98/2)로 정제함으로써 에틸 3-(비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아미노)프로파노에이트(399 ㎎, 85.6%)를 얻었다.
얻어진 에틸 3-(비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아미노)프로파노에이트(200 ㎎, 0.283 mmol)를 에탄올(4 ㎖)에 용해시키고, 2 mol/ℓ 수산화나트륨 수용액(3 ㎖)을 첨가하고, 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 1 mol/ℓ 염산 수용액을 첨가하여 pH 6으로 한 후, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시킴으로써 3-(비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아미노)프로판산(188 ㎎, 98.0%)를 얻었다.
얻어진 3-(비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아미노)프로판산(85 ㎎, 0.125 mmol)를 클로로포름(3 ㎖)에 용해시키고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU, 알드리치사 제조, 95 ㎎, 0.251 mmol), 7 mol/ℓ 암모니아메탄올 용액(0.090 ㎖, 0.627 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.109 ㎖, 0.627 mmol)을 첨가하고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 물, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼88/12)로 정제함으로써 화합물 84(72.3 ㎎, 85.0%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 678(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 44H), 1.48-1.57(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.36(t, J=5.7Hz, 2H), 2.72-2.80(m, 6H), 3.39(t, J=6.8Hz, 4H), 3.48(t, J=5.7Hz, 4H), 5.18(br s, 1H), 5.29-5.40(m, 4H), 8.22(br s, 1H).
실시예 85
3-(비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아미노)-N,N-디메틸프로판아미드(화합물 85)
실시예 84 중의 3-(비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아미노)프로판산(80 ㎎, 0.118 mmol)를 클로로포름(3 ㎖)에 용해시키고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU, 알드리치사 제조, 90 ㎎, 0.236 mmol), 2 mol/ℓ 디메틸아민 THF 용액(0.295 ㎖, 0.590 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.103 ㎖, 0.590 mmol)을 첨가하고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 물, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼94/6)로 정제함으로써 화합물 85(71.1 ㎎, 85.6%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 706(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 44H), 1.51-1.59(m, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.56(br s, 2H), 2.79-2.96(m, 6H), 2.94(s, 3H), 3.02(s, 3H), 3.41(t, J=6.8Hz, 4H), 3.53(br s, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 86
2-아미노-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아세트아미드(화합물 86)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어진 화합물 67(100 ㎎, 0.165 mmol), N-(tert-부톡시카르보닐)글리신(도쿄카세이고교사 제조, 43 ㎎, 0.247 mmol)을 이용하여, 화합물 86(83.0 ㎎, 76.1%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 664(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 44H), 1.49-1.57(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 3.39(td, J=6.6, 2.2Hz, 4H), 3.48-3.51(m, 4H), 3.53(s, 2H), 3.56(s, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 87
3-아미노-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)프로판아미드(화합물 87)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어진 화합물 67(100 ㎎, 0.165 mmol), N-(tert-부톡시카르보닐)-베타-알라닌(도쿄카세이고교사 제조, 47 ㎎, 0.247 mmol)을 이용하여, 화합물 87(84.2 ㎎, 75.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 678(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 44H), 1.49-1.58(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.55(t, J=6.0Hz, 2H), 2.99(t, J=6.0Hz, 2H), 3.39(t, J=6.8Hz, 4H), 3.51-3.57(m, 8H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 88
6-아미노-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)헥산아미드(화합물 88)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어진 화합물 67(100 ㎎, 0.165 mmol), 6-(tert-부톡시카르보닐아미노)헥산산(와타나베카가쿠고교사 제조, 57 ㎎, 0.247 mmol)을 이용하여, 화합물 88(87.8 ㎎, 74.1%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 720(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.38(m, 44H), 1.41-1.56(m, 8H), 1.60-1.70(m, 2H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.39(t, J=7.5Hz, 2H), 2.69(t, J=6.8Hz, 2H), 3.39(t, J=6.4Hz, 4H), 3.49-3.56(m, 8H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 89
2-(디메틸아미노)-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아세트아미드(화합물 89)
실시예 25와 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어지는 화합물 67(100 ㎎, 0.165 mmol) 및 N,N-디메틸글리신염산염(도쿄카세이고교사 제조, 26 ㎎, 0.247 mmol)을 이용하여, 화합물 89(92.1 ㎎, 80.8%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 692(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 44H), 1.49-1.58(m, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.29(s, 6H), 3.20(s, 2H), 3.39(t, J=6.6Hz, 4H), 3.50-3.57(m, 6H), 3.68(t, J=5.5Hz, 2H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 90
3-(디메틸아미노)-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)프로판아미드(화합물 90)
실시예 25와 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어진 화합물 67(100 ㎎, 0.165 mmol), 3-(디메틸아미노)프로피온산[매트릭스 사이언티픽(MATRIX Scientific)사 제조, 29 ㎎, 0.247 mmol]을 이용하여, 화합물 90(53.7 ㎎, 46.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 706(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 44H), 1.49-1.58(m, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.26(s, 6H), 2.55-2.68(m, 4H), 3.39(t, J=6.6Hz, 4H), 3.50-3.59(m, 8H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 91
(S)-2-아미노-3-히드록시-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)프로판아미드(화합물 91)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어진 화합물 67(100 ㎎, 0.165 mmol), (S)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-히드록시프로판산(와타나베카가쿠고교사 제조, 51 ㎎, 0.247 mmol)을 이용하여, 화합물 91(31.0 ㎎, 27.1%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 694(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 44H), 1.49-1.58(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 3.37-3.45(m, 5H), 3.49-3.77(m, 9H), 3.92(dd, J=6.4, 4.9Hz, 1H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 92
(S)-2,3-디아미노-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)프로판아미드(화합물 92)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어진 화합물 67(100 ㎎, 0.165 mmol), (S)-2,3-비스(tert-부톡시카르보닐아미노)프로판산 디시클로헥실아민염(와타나베카가쿠고교사 제조, 120 ㎎, 0.247 mmol)을 이용하여, 화합물 92(91.3 ㎎, 80.1%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 693(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.28-1.35(m, 44H), 1.50-1.58(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.70(dd, J=12.6, 7.3Hz, 1H), 2.86(dd, J=12.6, 5.1Hz, 1H), 3.32-3.43(m, 5H), 3.47-3.58(m, 5H), 3.71-3.81(m, 3H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 93
(S)-2,5-디아미노-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)펜탄아미드(화합물 93)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어진 화합물 67(100 ㎎, 0.165 mmol), (S)-2,5-비스(tert-부톡시카르보닐아미노)펜탄산(와타나베카가쿠고교사 제조, 82 ㎎, 0.247 mmol)을 이용하여, 화합물 93(57.5 ㎎, 48.3%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 721(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 44H), 1.43-1.70(m, 8H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.68-2.73(m, 2H), 3.29-3.57(m, 10H), 3.65-3.81(m, 3H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 94
(S)-2,6-디아미노-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)에틸)헥산아미드(화합물 94)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 67에서 얻어진 화합물 67(100 ㎎, 0.165 mmol), (S)-2,6-비스(tert-부톡시카르보닐아미노)헥산산(와타나베카가쿠고교사 제조, 90 ㎎, 0.247 mmol)을 이용하여, 화합물 94(55.7 ㎎, 46.0%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 735(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.38(m, 46H), 1.41-1.62(m, 8H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.69(t, J=6.6Hz, 2H), 3.28-3.57(m, 10H), 3.65-3.82(m, 3H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 95
2-아미노-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)에틸)아세트아미드(화합물 95)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 73에서 얻어진 화합물 73(100 ㎎, 0.158 mmol), N-(tert-부톡시카르보닐)글리신(도쿄카세이고교사 제조, 41.4 ㎎, 0.237 mmol)을 이용하여, 화합물 95(72.8 ㎎, 66.7%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 692(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 40H), 1.55-1.64(m, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.30(td, J=7.7, 2.6Hz, 4H), 3.51(s, 2H), 3.53(t, J=7.0Hz, 2H), 3.63(t, J=5.7Hz, 2H), 4.17-4.25(m, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 96
2-아미노-N,N-비스(2-((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노일옥시)에틸)아세트아미드(화합물 96)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 74에서 얻어진 화합물 74(100 ㎎, 0.159 mmol)를 이용하여, 화합물 96(36.3 ㎎, 33.3%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 688(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.30(br s, 28H), 1.55-1.65(m, 4H), 2.01-2.08(m, 8H), 2.27-2.34(m, 4H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 3.50-3.66(m, 6H), 4.16-4.27(m, 4H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 97
(S)-2,6-디아미노-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)에틸)헥산아미드(화합물 97)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 73에서 얻어진 화합물 73(100 ㎎, 0.158 mmol), (S)-2,6-비스(tert-부톡시카르보닐아미노)헥산산(와타나베카가쿠고교사 제조, 86 ㎎, 0.237 mmol)을 이용하여, 화합물 97(49.1 ㎎, 40.8%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 763(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.65(m, 50H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.27-2.33(m, 4H), 2.70(t, J=6.2Hz, 2H), 3.37-3.56(m, 2H), 3.64-3.87(m, 3H), 4.18-4.24(m, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 98
2-(디메틸아미노)-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)에틸)아세트아미드(화합물 98)
실시예 25와 동일한 방법으로, 실시예 73에서 얻어지는 화합물 73(105 ㎎, 0.166 mmol) 및 N,N-디메틸글리신염산염(도쿄카세이고교사 제조, 25.6 ㎎, 0.248 mmol)을 이용하여, 화합물 98(72.1 ㎎, 60.5%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 720(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.34(m, 40H), 1.57-1.64(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.27-2.35(m, 10H), 3.15(s, 2H), 3.61(t, J=5.9Hz, 2H), 3.78(t, J=5.9Hz, 2H), 4.22(q, J=5.5Hz, 4H), 5.30-5.39(m, 4H).
실시예 99
3-(디메틸아미노)-N,N-비스(2-((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)에틸)프로판아미드(화합물 99)
실시예 25와 동일한 방법으로, 실시예 73에서 얻어진 화합물 73(100 ㎎, 0.158 mmol), 3-(디메틸아미노)프로피온산[매트릭스 사이언티픽(MATRIX Scientific)사 제조, 36.2 ㎎, 0.309 mmol]을 이용하여, 화합물 99(25.3 ㎎, 21.9%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 734(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 40H), 1.56-1.63(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.27-2.33(m, 10H), 2.52-2.68(m, 4H), 3.59-3.64(m, 4H), 4.18-4.23(m, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 100
(S)-2,6-디아미노-N,N-비스(2-((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노일옥시)에틸)헥산아미드(화합물 100)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 74에서 얻어진 화합물 74(100 ㎎, 0.159 mmol), (S)-2,6-비스(tert-부톡시카르보닐아미노)헥산산(와타나베카가쿠고교사 제조, 87 ㎎, 0.238 mmol)을 이용하여, 화합물 100(85.1 ㎎, 70.8%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 759(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.65(m, 38H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.30(td, J=7.4, 6.0Hz, 4H), 2.70(t, J=6.4Hz, 2H), 2.77(t, J=5.7Hz, 4H), 3.37-3.57(m, 2H), 3.64-3.87(m, 3H), 4.21(q, J=5.7Hz, 4H), 5.28-5.44(m, 8H).
실시예 101
트랜스-3,4-비스(((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 101)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 25에서 얻어진 화합물 VI-23(357 ㎎, 0.494 mmol)을 이용하여, 화합물 101(252 ㎎, 80.6%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 633(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 44H), 1.50-1.59(m, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 10H), 2.69(dd, J=11.3, 5.5Hz, 2H), 3.06(dd, J=11.3, 7.1Hz, 2H), 3.28-3.46(m, 8H), 5.30-5.40(m, 4H).
실시예 102
트랜스-3,4-비스(((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 102)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 26에서 얻어진 화합물 VI-24(382 ㎎, 0.532 mmol)를 이용하여, 화합물 102(276 ㎎, 82.7%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 629(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.29-1.40(m, 32H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.97-2.08(m, 10H), 2.69(dd, J=11.2, 5.7Hz, 2H), 2.77(t, J=6.0Hz, 4H), 3.06(dd, J=11.2, 7.1Hz, 2H), 3.28-3.46(m, 8H), 5.29-5.43(m, 8H).
실시예 103
트랜스-3,4-비스(((11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 103)
실시예 1과 동일한 방법으로, 참고예 27에서 얻어진 화합물 VI-25(420 ㎎, 0.542 mmol)를 이용하여, 화합물 103(316 ㎎, 85.2%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 685(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.40(m, 40H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.97-2.08(m, 10H), 2.69(dd, J=11.1, 5.8Hz, 2H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 3.06(dd, J=11.1, 7.3Hz, 2H), 3.28-3.46(m, 8H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 104
트랜스-3,4-비스(((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)메틸)피롤리딘(화합물 104)
참고예 28에서 얻어진 화합물 XIII-1(278 ㎎, 0.366 mmol)을 디클로로메탄(6 ㎖)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(0.563 ㎖, 7.31 mmol)을 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 소량의 메탄올에 용해시키고, 플라스틱 칼럼에 충전한 BONDESIL-SCX[바리안(VARIAN)사 제조, 6 g]의 상부에 흡착시켜, 메탄올로 세정하고, 계속해서 암모니아 메탄올 용액(도쿄카세이고교사 제조, 2 mol/ℓ)으로 목적물을 용출시켰다. 목적물을 포함하는 분획을 감압 하에 농축시킴으로써 화합물 104(162 ㎎, 67.2%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 661(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 40H), 1.56-1.64(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.09-2.16(m, 2H), 2.30(t, J=7.5Hz, 4H), 2.72(dd, J=11.3, 5.5Hz, 2H), 3.11(dd, J=11.3, 7.1Hz, 2H), 3.99-4.12(m, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 105
트랜스-3,4-비스(((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노일옥시)메틸)피롤리딘(화합물 105)
실시예 104와 동일한 방법으로, 참고예 29에서 얻어진 화합물 XIII-2(350 ㎎, 0.463 mmol)를 이용하여, 화합물 105(224 ㎎, 73.6%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 657(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.40(m, 28H), 1.57-1.66(m, 4H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.09-2.17(m, 2H), 2.31(t, J=7.5Hz, 4H), 2.72(dd, J=11.3, 6.0Hz, 2H), 2.77(t, J=6.2Hz, 4H), 3.11(dd, J=11.3, 7.3Hz, 2H), 3.99-4.13(m, 4H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 106
트랜스-1-메틸-3,4-비스(((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 106)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 101에서 얻어진 화합물 101(107 ㎎, 0.169 mmol)을 이용하여, 화합물 106(87.3 ㎎, 79.9%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 647(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.36(m, 44H), 1.50-1.59(m, 4H), 1.98-2.09(m, 10H), 2.31(s, 3H), 2.36(dd, J=9.2, 5.3Hz, 2H), 2.64(dd, J=9.2, 7.0Hz, 2H), 3.30-3.45(m, 8H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 107
트랜스-1-메틸-3,4-비스(((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 107)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 102에서 얻어진 화합물 102(123 ㎎, 0.196 mmol)를 이용하여, 화합물 107(109 ㎎, 86.7%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 643(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.26-1.40(m, 32H), 1.50-1.60(m, 4H), 2.05(q, J=6.6Hz, 10H), 2.31(s, 3H), 2.36(dd, J=9.2, 5.5Hz, 2H), 2.64(dd, J=9.2, 7.0Hz, 2H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 3.30-3.45(m, 8H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 108
트랜스-3,4-비스(((11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐옥시)메틸)-1메틸피롤리딘(화합물 108)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 103에서 얻어진 화합물 103(165 ㎎, 0.241 mmol)을 이용하여, 화합물 108(145 ㎎, 85.9%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 699(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.40(m, 40H), 1.50-1.60(m, 4H), 2.05(q, J=6.2Hz, 10H), 2.31(s, 3H), 2.36(dd, J=9.2, 5.8Hz, 2H), 2.64(dd, J=9.2, 7.3Hz, 2H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 3.31-3.45(m, 8H), 5.29-5.43(m, 8H).
실시예 109
트랜스-1-메틸-3,4-비스(((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)메틸)피롤리딘(화합물 109)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 104에서 얻어진 화합물 104(50 ㎎, 0.076 mmol)를 이용하여, 화합물 109(47 ㎎, 92%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 675(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.26-1.35(m, 40H), 1.56-1.65(m, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.15-2.24(m, 2H), 2.27-2.37(m, 9H), 2.67(dd, J=9.3, 7.1Hz, 2H), 3.99-4.12(m, 4H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 110
트랜스-1-메틸-3,4-비스(((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노일옥시)메틸)피롤리딘(화합물 110)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 105에서 얻어진 화합물 105(80 ㎎, 0.12 mmol)를 이용하여, 화합물 110(66 ㎎, 81%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 671(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.25-1.40(m, 28H), 1.57-1.66(m, 4H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.13-2.24(m, 2H), 2.27-2.37(m, 9H), 2.66(dd, J=9.2, 7.3Hz, 2H), 2.77(t, J=5.7Hz, 4H), 3.99-4.12(m, 4H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 111
트랜스-1,1-디메틸-3,4-비스(((Z)-옥타데카-9-에닐옥시)메틸)피롤리디늄클로라이드(화합물 111)
실시예 22와 동일한 방법으로, 실시예 101에서 얻어진 화합물 101(90.0 ㎎, 0.142 mmol)을 이용하여, 화합물 111(85.9 ㎎, 86.6%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 661 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.37(m, 44H), 1.50-1.58(m, 4H), 2.01(q, J=5.9Hz, 8H), 2.82-2.87(m, 2H), 3.43(t, J=6.6Hz, 4H), 3.48(s, 6H), 3.49-3.56(m, 4H), 3.75(dd, J=11.6, 8.2Hz, 2H), 4.10(dd, J=11.6, 8.1Hz, 2H), 5.29-5.41(m, 4H).
실시예 112
트랜스-1,1-디메틸-3,4-비스(((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐옥시)메틸)피롤리디늄클로라이드(화합물 112)
실시예 22와 동일한 방법으로, 실시예 102에서 얻어진 화합물 102(100 ㎎, 0.159 mmol)를 이용하여, 화합물 112(107 ㎎, 96.9%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 657 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.29-1.40(m, 32H), 1.50-1.58(m, 4H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 2.80-2.87(m, 2H), 3.43(t, J=6.6Hz, 4H), 3.48(s, 6H), 3.49-3.56(m, 4H), 3.74(dd, J=11.6, 8.1Hz, 2H), 4.09(dd, J=11.6, 8.1Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 113
트랜스-1,1-디메틸-3,4-비스(((Z)-옥타데카-9-에노일옥시)메틸)피롤리디늄클로라이드(화합물 113)
실시예 22와 동일한 방법으로, 실시예 104에서 얻어진 화합물 104(77.0 ㎎, 0.117 mmol)를 이용하여, 화합물 113(69.5 ㎎, 82.0%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 689 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 40H), 1.56-1.65(m, 4H), 2.01(q, J=5.5Hz, 8H), 2.33(t, J=7.5Hz, 4H), 2.93(br s, 2H), 3.57(s, 6H), 3.86(dd, J=11.9, 8.6Hz, 2H), 4.19-4.27(m, 6H), 5.29-5.40(m, 4H).
실시예 114
트랜스-1,1-디메틸-3,4-비스(((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노일옥시)메틸)피롤리디늄클로라이드(화합물 114)
실시예 22와 동일한 방법으로, 실시예 105에서 얻어진 화합물 105(105 ㎎, 0.160 mmol)를 이용하여, 화합물 114(74.3 ㎎, 64.4%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 685 M+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=7.0Hz, 6H), 1.26-1.40(m, 28H), 1.57-1.65(m, 4H), 2.05(q, J=6.7Hz, 8H), 2.33(t, J=7.7Hz, 4H), 2.77(t, J=5.9Hz, 4H), 2.93(br s, 2H), 3.56(s, 6H), 3.86(dd, J=12.1, 8.4Hz, 2H), 4.19-4.27(m, 6H), 5.28-5.43(m, 8H).
실시예 115
트랜스-1-((S)-2,6-디아미노헥사노일)-3,4-비스(((11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐옥시)메틸)피롤리딘(화합물 115)
실시예 61과 동일한 방법으로, 실시예 103에서 얻어진 화합물 103(100 ㎎, 0.146 mmol), (S)-2,6-비스(tert-부톡시카르보닐아미노)헥산산(와타나베카가쿠고교사 제조, 80 ㎎, 0.219 mmol)을 이용하여, 화합물 115(72.6 ㎎, 61.2%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 813(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=7.0Hz, 6H), 1.27-1.59(m, 50H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.17-2.26(m, 1H), 2.35-2.43(m, 1H), 2.70(t, J=5.7Hz, 2H), 2.77(t, J=6.0Hz, 4H), 3.21-3.55(m, 11H), 3.58-3.80(m, 2H), 5.29-5.43(m, 8H).
실시예 116
3-(디메틸아미노)프로필 비스(2-((Z)-1-옥소옥타데카-9-에닐옥시)에틸)카르바메이트(화합물 116)
실시예 73에서 얻어진 화합물 73(160 ㎎, 0.252 mmol)을 클로로포름(2.5 ㎖)에 용해시키고, “저널 오브 아메리칸 케미컬 소사이어티(J. Am. Chem. Soc.)”, 1981년, 제103권, p. 4194-4199에 기재한 방법으로 합성한 3-(디메틸아미노)프로필4-니트로페닐 카르보네이트 염산염(115 ㎎, 0.379 mmol) 및 트리에틸아민(0.141 ㎖, 1.01 mmol)을 첨가하고, 마이크로파 반응 장치를 이용하여 110℃에서 30분간 가열 교반하였다. 반응액에 3-(디메틸아미노)프로필 4-니트로페닐 카르보네이트 염산염(38.4 ㎎, 0.126 mmol)을 첨가하고, 마이크로파 반응 장치를 이용하여 110℃에서 30분간 가열 교반하였다. 반응액을 클로로포름으로 희석하고, 1 mol/ℓ 수산화나트륨 수용액으로 3회 세정하며, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(클로로포름/메탄올=100/0∼95/5)로 정제함으로써 화합물 116(42.6 ㎎, 22.1%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 764(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.24-1.37(m, 40H), 1.54-1.65(m, 4H), 1.78-1.89(m, 2H), 1.97-2.05(m, 8H), 2.23(s, 6H), 2.25-2.38(m, 6H), 3.48-3.58(m, 2H), 3.62(q, J=5.2Hz, 2H), 4.11-4.30(m, 6H), 5.28-5.41(m, 4H).
실시예 117
3-(디메틸아미노)프로필 비스(2-((9Z,12Z)-1-옥소옥타데카-9,12-디에닐옥시)에틸)카르바메이트(화합물 17)
실시예 116과 동일한 방법으로, 실시예 74에서 얻어진 화합물 74(159 ㎎, 0.252 mmol)를 이용하여, 화합물 117(60.3 ㎎, 31.5%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 760(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.9Hz, 6H), 1.26-1.38(m, 28H), 1.58-1.69(m, 4H), 1.78-1.89(m, 2H), 2.00-2.09(m, 8H), 2.23(s, 6H), 2.26-2.38(m, 6H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 3.48-3.57(m, 2H), 3.62(q, J=5.3Hz, 2H), 4.12-4.30(m, 6H), 5.28-5.44(m, 8H).
화합물 118 내지 화합물 136은 실시예 1 내지 실시예 117과 동일한 방법으로 얻을 수 있거나, 또는 국제 공개 제2009/086558호 팜플렛과 동일한 방법으로 얻을 수 있다.
참고예 30
(3R,4R)-1-메틸피롤리딘-3,4-디일 디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노에이트)(화합물 A-3)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 2에서 얻어진 화합물 2(1.20 g, 1.90 mmol)를 이용하여, 화합물 A-3(1.17 g, 95.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 643(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=7.0Hz, 6H), 1.31-1.41(m, 28H), 1.56-1.66(m, 4H), 2.05(q, J=6.6Hz, 8H), 2.29-2.35(m, 7H), 2.48(dd, J=10.3, 4.2Hz, 2H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 3.04(dd, J=10.3, 5.8Hz, 2H), 5.11(dd, J=5.8, 4.2Hz, 2H), 5.28-5.43(m, 8H).
참고예 31
(3R,4R)-1-메틸피롤리딘-3,4-디일 디((Z)-옥타데카-9-에노에이트)(화합물 A-4)
실시예 10과 동일한 방법으로, 실시예 9에서 얻어진 화합물 9(500 ㎎, 0.791 mmol)를 이용하여, 화합물 A-4(481 ㎎, 94.0%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 647(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.6Hz, 6H), 1.27-1.35(m, 40H), 1.56-1.66(m, 4H), 2.01(q, J=6.2Hz, 8H), 2.32(t, J=7.7Hz, 4H), 2.35(s, 3H), 2.48(dd, J=10.5, 4.0Hz, 2H), 3.04(dd, J=10.5, 5.7Hz, 2H), 5.10(dd, J=5.7, 4.0Hz, 2H), 5.29-5.40(m, 4H).
참고예 32
N-메틸-N,N-비스(2-((9Z,12Z)-1-옥소옥타데카-9,12-디에닐옥시)에틸)아민(화합물 A-5)
참고예 2와 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 119 ㎎, 1.00 mmol) 및 리놀산(알드리치사 제조, 617 ㎎, 2.20 mmol)을 이용하여, 화합물 A-5(348 ㎎, 54.0%)를 얻었다.
ESI-MS m/z: 645(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89(t, J=6.8Hz, 6H), 1.27-1.38(m, 28H), 1.56-1.66(m, 4H), 2.00-2.09(m, 8H), 2.31(t, J=7.6Hz, 4H), 2.35(s, 3H), 2.70(t, J=5.9Hz, 4H), 2.77(t, J=5.8Hz, 4H), 4.16(t, J=5.9Hz, 4H), 5.28-5.42(m, 8H).
참고예 33
N-메틸-N,N-비스(2-((Z)-1-옥소옥타데카-9-에닐옥시)에틸)아민(화합물 A-6)
참고예 2와 동일한 방법으로, N-메틸디에탄올아민(도쿄카세이고교사 제조, 119 ㎎, 1.00 mmol) 및 올레산(도쿄카세이고교사 제조, 621 ㎎, 2.20 mmol)을 이용하여, 화합물 A-6(333 ㎎, 51.4%)을 얻었다.
ESI-MS m/z: 649(M+H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J=6.8Hz, 6H), 1.25-1.36(m, 40H), 1.56-1.67(m, 4H), 1.97-2.04(m, 8H), 2.30(t, J=7.6Hz, 4H), 2.35(s, 3H), 2.70(t, J=5.9Hz, 4H), 4.16(t, J=5.9Hz, 4H), 5.28-5.39(m, 4H).
다음에, 본 발명의 조성물에 대해서, 실시예 및 시험예에 의해 구체적으로 설명한다. 단, 본 발명은 이들 실시예 및 시험예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 118
실시예 1 내지 실시예 117에서 얻어진 화합물을 이용하여, 이하와 같이 제제를 제조하였다. 이용한 핵산은, 센스쇄[5'-GmUCAmUCACACmUGAAmUACCAAmU-3'(m이 붙여진 염기에 결합하는 당은 2'-O-메틸로 치환되어 있는 리보오스임)]와, 안티센스쇄[5'-AUUGGUAUUCAGUGUGAUGACAC-3'(5' 말단을 인산화하고 있음)]의 염기서열로 이루어진 아포리포단백질 B(Apolipoprotein-B, 이하 apo-b로 나타냄) 유전자의 발현을 억제하는 항APO-B siRNA로서, 센스쇄 및 안티센스쇄 각각을 니뽄이지티사 또는 홋카이도 시스템 사이언스사에서 입수하여 어닐링시킴으로써 조제하였다(이하 apo-b siRNA라 함).
실시예 1 내지 실시예 117의 각각에서 얻어진 화합물 1 내지 117/1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-(메톡시(폴리에틸렌글리콜)-2000)(PEG-DMPE, N-(카르보닐메톡시폴리에틸렌글리콜 2000)-1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민=나트륨염, 니치유사 제조)/디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 니치유사 제조)/콜레스테롤[아반티 폴라 리피드(Avanti Polar Lipids)사 제조]=8.947/1.059/5.708/13.697 mmol/ℓ가 되도록, 각 시료를 칭량하여 90 vol% 에탄올에 용해시키고, 지질막의 구성 성분의 용액을 조제하였다. 한편, apo-b siRNA/증류수(24 ㎎/㎖)를 Tris-EDTA 완충액[200 mM Tris-HCl, 20 mM EDTA, 인비트로젠(Invitrogen) 제조] 및 20 mM 시트르산 완충액(pH 5.0)으로 희석하고, 1.5 ㎎/㎖의 apo-b siRNA 수용액(2 mM Tris-EDTA 완충액, pH 5.0)을 조제하였다.
얻어진 지질 용액을 37℃로 가온한 후, 100 ㎕를 제제 조제용 용기에 옮기고, 얻어진 apo-b siRNA 수용액 100 ㎕를 교반 하에서 첨가하였다. 얻어진 지질 핵산 혼합 현탁액 200 ㎕에, 20 mM 시트르산 완충액(300 mM NaCl 함유, pH 6.0) 200 ㎕를 교반 하에서 첨가하고, 둘베코 인산 버퍼[DPBS, 인비트로젠(Invitrogen) 제조] 662 ㎕를 더 적하하여 siRNA 농도를 10 μM로 하여, 제제(화합물 1 내지 화합물 117 및 핵산을 함유하는 조성물)를 얻었다.
입자경 측정 장치[맬번(Zetasizer Nano ZS)사 제조]로 제제 중의 리포좀의 평균 입자경을 측정하였다. 결과를 표 18에 나타낸다.
Figure 112012097261899-pct00031
비교예 1
화합물 1을, DOTAP(화합물 A-1, Avanti Polar Lipids 제조)로 한 것 이외에는 실시예 118과 동일하게 하여 제제를 얻었다. 이 제제 중의 리포좀의 평균 입자경은 104.0 ㎚였다.
비교예 2
화합물 1을, DLinDMA(화합물 A-2)로 한 것 이외에는 실시예 118과 동일하게 하여 제제를 얻었다. 또한, 화합물 A-2는 국제 공개 제2005/121348호 팜플렛에 기재된 방법에 따라 합성하였다.
이 제제 중의 리포좀의 평균 입자경은 131.6 ㎚였다.
비교예 3
참고예 30의 화합물 A-3을 이용하여, 실시예 118과 동일하게 하여 제제를 얻었다. 이 제제 중의 리포좀의 평균 입자경은 141.0 ㎚였다.
비교예 4
참고예 31의 화합물 A-4를 이용하여, 실시예 118과 동일하게 하여 제제를 얻었다. 이 제제 중의 리포좀의 평균 입자경은 131.1 ㎚였다.
비교예 5
참고예 32의 화합물 A-5를 이용하여, 실시예 118과 동일하게 하여 제제를 얻었다. 이 제제 중의 리포좀의 평균 입자경은 136.4 ㎚였다.
비교예 6
참고예 33의 화합물 A-6을 이용하여, 실시예 118과 동일하게 하여 제제를 얻었다. 이 제제 중의 리포좀의 평균 입자경은 139.5 ㎚였다.
비교예 7
참고예 3의 화합물 VI-3을 이용하여, 실시예 118과 동일하게 하여 제제를 얻었다. 이 제제 중의 리포좀의 평균 입자경은 167.8 ㎚였다.
비교예 8
참고예 4의 화합물 VI-4를 이용하여, 실시예 118과 동일하게 하여 제제를 얻었다. 이 제제 중의 리포좀의 평균 입자경은 157.8 ㎚였다.
비교예에서 이용한 화합물 A-1∼6 및 화합물 VI-3∼4의 구조식을 표 19에 나타낸다.
Figure 112012097261899-pct00032
시험예 1
실시예 118에서 얻어진 각 제제(화합물 1∼ 내지 화합물 115 및 핵산을 함유하는 조성물) 및 비교예 1 내지 비교예 8에서 얻어진 각 제제를, 각각 이하의 방법에 의해 인간 간암 유래 세포주 HepG2 세포(HB-8065)에 도입하였다.
핵산의 최종 농도가 3-100 nM이 되도록 옵티멤(Opti-MEM, 깁코(GIBCO)사, 31985)으로 희석한 각 제제를, 96웰의 배양 플레이트에, 20 ㎕씩 분주한 후, 1.25% 소 태아 혈청[FBS, SAFC 바이오사이언스(SAFC Biosciences)사, 12203C]을 포함하는 MEM에 현탁시킨 HepG2 세포를, 세포수 6250/80 ㎕/웰이 되도록 파종하고, 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양함으로써, 각 제제를 HepG2 세포 내에 도입하였다. 또한 음성 대조 군으로서 전혀 처리하지 않은 세포를 파종하였다.
각 제제를 도입한 세포를 37℃의 5% CO2 인큐베이터 내에서 24시간 동안 배양하고, 빙냉시킨 인산 완충화 생리 식염수(PBS, GIBCO사, 14190)로 세정하고, Cells-to-Ct Kit[어플라이드 바이오사이언스(ABI)사, AM1728]를 사용하여, 제품에 첨부된 설명서에 기재된 방법에 따라, 전체 RNA의 회수와, 얻어진 전체 RNA를 주형으로 하는 역전사 반응에 의한 cDNA의 제작을 행하였다.
얻어진 cDNA를 주형으로 하고, 유니버설 프로브 라이브러리(Universal Probe Library, 로슈 어플라이드 사이언스(Roche Applied Science)사, 04683633001)를 프로브로 하여 ABI7900HT Fast(ABI사 제조)를 사용하고, 첨부된 사용 설명서에 기재된 방법에 따라 PCR 반응시킴으로써, apo-b 유전자 및 구성적 발현 유전자인 글리세르알데히드3-인산 탈수소 효소(D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, 이하 gapdh라 나타냄) 유전자를 PCR 반응시켜 mRNA 증폭량을 각각 측정하고, gapdh의 mRNA 증폭량을 내부 대조로 하여 apo-b의 mRNA의 준정량치를 산출하였다. 또한, 음성 대조 군에 있어서의, apo-b의 mRNA량 및 gapdh의 mRNA 증폭량을 마찬가지로 각각 측정하고, gapdh의 mRNA 증폭량을 내부 대조로 하여 apo-b의 mRNA의 준정량치를 산출하였다.
산출된 apo-b의 mRNA의 준정량치를, 음성 대조에 있어서의 apo-b의 mRNA의 준정량치를 1로 하여 구한 apo-b의 mRNA의 발현율의 결과를, 실시예 118에 대해서는 도 1 내지 도 12에, 비교예 1 내지 비교예 8에 대해서는 도 13에 나타낸다. 또한, 종축은 음성 대조를 1로 한 경우의 표적 유전자의 mRNA의 발현율을 나타내고, 횡축은 핵산 농도(nM), 사용한 양이온성 지질의 화합물 번호 및 실시예 번호를 나타낸다.
도 1 내지 도 12로부터 밝혀진 바와 같이, 실시예 118에서 얻어진 제제(apo-b 유전자의 발현을 억제하는 항APO-B siRNA와, 화합물 1 내지 화합물 115의 각각을 함유하는 조성물)를, 인간 간암 유래 세포주 HepG2 세포 내에 도입한 후의 apo-b 유전자의 mRNA의 발현율은 억제되어 있다. 한편, 도 13으로부터 밝혀진 바와 같이, 비교예 3 내지 비교예 8에서 얻어진 제제(apo-b 유전자의 발현을 억제하는 항APO-B siRNA와, 화합물 A-3∼6, VI-3 및 VI-4의 각각을 함유하는 조성물)는, 인간 간암 유래 세포주 HepG2 세포 내에 도입한 후의 apo-b 유전자의 mRNA의 발현율은 억제되어 있지 않다.
따라서, 본 발명의 조성물은, 핵산을 세포 내에 도입할 수 있어, 본 발명의 양이온성 지질은, 세포 내에 도입하는 것을 용이하게 하는 신규 양이온성 지질인 것이 밝혀졌다.
본 발명의 신규 양이온성 지질 및 핵산을 함유하는 조성물을, 포유류 등에 투여함으로써, 상기 핵산을 예컨대, 세포 내에 용이하게 도입할 수 있다.
서열목록 프리 텍스트
서열번호 1-siRNA 센스쇄
서열번호 2-siRNA 안티센스쇄
서열번호 2-5'-인산화아데노신(5'-phosphorylated Adenosine)
SEQUENCE LISTING <110> Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. <120> Cationic Lipid <130> 1000P12143 <150> JP2010-104159 <151> 2010-04-28 <150> JP2010-209937 <151> 2010-09-17 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA sense <220> <221> modified_base <222> (2)..(2) <223> um <220> <221> modified_base <222> (5)..(5) <223> um <220> <221> modified_base <222> (11)..(11) <223> um <220> <221> modified_base <222> (15)..(15) <223> um <220> <221> modified_base <222> (21)..(21) <223> um <400> 1 gucaucacac ugaauaccaa u 21 <210> 2 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA antisense <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 5'-phosphorylated Adenosine <400> 2 auugguauuc agugugauga cac 23

Claims (27)

  1. 화학식 (I)로 표시되는 양이온성 지질:
    Figure 112017033364157-pct00033

    상기 식에서, R1 및 R2는 동일하거나 또는 상이하고, 탄소수 12∼24의 직쇄형 혹은 분지쇄형의 알킬, 알케닐 또는 알키닐이며,
    X1 및 X2는 함께 단결합을 형성하고,
    X3 및 Y는 존재하지 않고,
    a 및 b는 0이며, L3은 단결합이고, R3은 탄소수 1∼6의 알킬, 탄소수 3∼6의 알케닐, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이고, L1 및 L2는 -O-이거나,
    a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이며, 또한 a와 b가 모두 0이 아니고, L3은 단결합이며, R3은 탄소수 1∼6의 알킬, 탄소수 3∼6의 알케닐, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이거나,
    a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이며, L3은 단결합이고, R3은 수소 원자이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이거나, 또는
    a 및 b는 동일하거나 또는 상이하게 0∼3이며, L3은 -CO- 또는 -CO-O-이고, R3은 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 모르폴린-2-일, 모르폴린-3-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이고, 상기 치환기 중 1개 이상은 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 피롤리디닐, 피페리딜 또는 모르폴리닐이며, L1 및 L2는 동일하거나 또는 상이하고, -O-, -CO-O- 또는 -O-CO-이다.
  2. 제1항에 있어서, L1 및 L2가 -O- 또는 -O-CO-이고, R1 및 R2가 도데실, 테트라데실, 헥사데실, 옥타데실, 이코실, 도코실, 테트라코실, (Z)-테트라데카-9-에닐, (Z)-헥사데카-9-에닐, (Z)-옥타데카-6-에닐, (Z)-옥타데카-9-에닐, (E)-옥타데카-9-에닐, (Z)-옥타데카-11-에닐, (9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에닐, (9Z,12Z,15Z)-옥타데카-9,12,15-트리에닐, (Z)-이코사-11-에닐, (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐, 3,7,11-트리메틸도데카-2,6,10-트리에닐 또는 3,7,11,15-테트라메틸헥사데카-2-에닐인 양이온성 지질.
  3. 제1항에 있어서, L1 및 L2가 -CO-O-이고, R1 및 R2가 트리데실, 펜타데실, 헵타데실, 노나데실, 헤니코실, 트리코실, (Z)-트리데카-8-에닐, (Z)-펜타데카-8-에닐, (Z)-헵타데카-5-에닐, (Z)-헵타데카-8-에닐, (E)-헵타데카-8-에닐, (Z)-헵타데카-10-에닐, (8Z,11Z)-헵타데카-8,11-디에닐, (8Z,11Z,14Z)-옥타데카-8,11,14-트리에닐, (Z)-노나데카-10-에닐, (10Z,13Z)-노나데카-10,13-디에닐, (11Z,14Z)-이코사-11,14-디에닐, 2,6,10-트리메틸운데카-1,5,9-트리에닐 또는 2,6,10,14-테트라메틸펜타데카-1-에닐인 양이온성 지질.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, a 및 b가 모두 0 또는 1인 양이온성 지질.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, L3이 단결합이고, R3이 수소 원자, 메틸, 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이고, L1 및 L2가 -O-인 양이온성 지질.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, L3이 -CO- 또는 -CO-O-이고, R3이 피롤리딘-3-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 히드록시, 알콕시, 카르바모일, 모노알킬카르바모일, 디알킬카르바모일, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐이고, 상기 치환기 중 1개 이상은 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬암모니오, 피롤리디닐, 피페리딜 혹은 모르폴리닐이며, L1 및 L2가 동일한 -CO-O- 또는 -O-CO-인 양이온성 지질.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 수소 원자, 메틸 또는 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 히드록시 혹은 카르바모일로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐인 양이온성 지질.
  8. 제6항에 있어서, R3이 동일하거나 또는 상이하게 1∼3개의 아미노, 히드록시 혹은 카르바모일로 치환된 탄소수 1∼6의 알킬 혹은 탄소수 3∼6의 알케닐인 양이온성 지질.
  9. 제1항에 기재된 양이온성 지질 및 핵산을 함유하는 핵산의 세포 내 도입용 조성물.
  10. 제1항에 기재된 양이온성 지질과 핵산과의 복합 입자, 또는 이 양이온성 지질에 중성 지질, 고분자 또는 둘다를 조합한 것과 핵산과의 복합 입자를 함유하는 핵산의 세포 내 도입용 조성물.
  11. 제1항에 기재된 양이온성 지질과 핵산과의 복합 입자, 또는 이 양이온성 지질에 중성 지질, 고분자 또는 둘다를 조합한 것과 핵산과의 복합 입자 및 이 복합 입자를 봉입하는 지질막으로 구성된 지질 미립자를 함유하는 핵산의 세포 내 도입용 조성물.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 RNA 간섭(RNAi)을 이용한 표적 유전자의 발현 억제 작용을 갖는 핵산인, 핵산의 세포 내 도입용 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 표적 유전자가 종양 또는 염증에 관련된 유전자인 핵산의 세포 내 도입용 조성물.
  14. 제1항에 기재된 양이온성 지질 및 핵산을 포함하는 암 또는 염증 질환의 치료제.
  15. 제14항에 있어서, 투여하는 방법이 정맥내 투여인 암 또는 염증 질환의 치료제.
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
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  21. 삭제
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