KR101761080B1 - 이삭 피기 전 수확된 귀리 지상 부위들 추출물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 곡물을 제외한 귀리의 지상부위 추출물 및 제조방법 및 용도에 관한 것이다.

Description

이삭 피기 전 수확된 귀리 지상 부위들 추출물{EXTRACT OF AERIAL PARTS OF OATS HARVESTED BEFORE EAR EMERGENCE}
본 발명은 바람직하게는 이삭 피기 전에 수확된 귀리의 지상 부위들 추출물 및 염증성 피부질환 치료 용도에 관한 것이다.
귀리 또는 Avena sativa L. 은 길이가 1 미터 50으로 자라는 일년생 식물이다. 발아될 때, 어린 식물은 잔디와 같이 생장하고 이후 생장 습성에 따라 여러 줄기들이 나온다. 줄기 또는 예주는 중공이며 수 밀리미터 직경을 가지고 마디라고 불리는 완전 격막을 통하여 잎들이 삽입된다. 마디 사이 공간들은 줄기 밑에서는 아주 짧고 점차 길어진다.
*잎들은 어긋나기 2 열생으로 담청록색이며; 전방으로-길게 잘린 마디 중간 상부 공간을 거의 덮고 있는 잎집을 통하여 마디에서 줄기에 삽입된다. 큰 잎 가지는 직각으로 이로부터 떨어져 있다. 이것은 넓고, 길고, 많은 평행 잎맥 (나란히 맥)으로 덮여 있으며; 통상 연모로 덮여있다. 잎집이 떨어져 있는 큰 잎 가지에서, 짧고 잘게 잘린 잎혀라고 불리는 잎집 미세 팽창막이 줄기 및 큰 잎 가지 사이에서 관찰된다.
줄기는 사방으로 퍼져있는 거의 풀린 원추 형상의 큰 원추 꽃차례로 뻗어 있으며, 모든 잔가지는 잔이삭이라고 불리는 벼과식물에서 기본적인 일정 구조체로 뻗어있다. 잔이삭은 매달려 있고 상대적으로 크며 두 개의 꽃들을 가진다. 잔이삭은 모 포엽의 잎겨드랑이에서 나지 않고 삽입 위치에서 약간 떨어져 있고, 두 개의 특정한 반대측 포엽을 가지며, 이를 화영이라 부른다.
귀리 화영은 상대적으로 크며; 2cm 길이이고 잔이삭을 완전히 덮고 있다; 피침형이며, 7-9개의 잎맥이 있고 연모로 덮여있다. 깍지들은 작고; 외영은 뒤틀린 모서리를 가지며 꼭지가 아닌 등에 삽입되며, 1cm 이상 잔이삭을 능가한다.
깍지 바로 위에, 꽃축은 거의 눈에 보이지 않는 꼬투리 및 미세한 실제 꽃을 가지며, 꽃은 3개의 수술 및 3개의 심피가 된다. 수술은, 처음에는 꽃자루가 없고, 이후 개화될 때 이들 망상 구조가 갑자기 길어져, 꽃밥은 돌출되고 잔이삭에서 외부로 매달린다. 꽃밥은 중앙 구역을 통해서만 망상에 삽입되므로 이들은 중앙착생 및 흔들림 꽃밥이라 명명된다. 3개의 심피들은 일실 씨방을 형성하고, 아주 펼쳐지며 솜털 같은 흉한 열편으로 나뉘어진다. 이러한 모든 특징들은 바람으로 수분된다. 유일한 밑씨는 도생성이며 자방강 아래에서 직립된다.
열매는 특정 유형의 수과이며, 외측 파운데이션은 과피에 직접 붙어있다. 이러한 열매는 곡과 라고 부른다. 이는 길고, 경사지며, 연모로 덮인 곡물 (grain)로 녹말질 알부민이 아주 풍부하다. 배아는 아주 발달된 떡잎을 가지며 티젤라 (tigella)를 거의 완전하게 둘러싸며 알부민과 떨어지도록 한다. 전 배아는 한편으로 (on the side) 버려진다 (rejected).
귀리 열매는 침강효과에 따른 완하제 또한 콜레스테롤 혈증 또는 베타-글루칸 함량에 따른 유형 2의 당뇨병에 있어서 경구 경로를 통한 의학적 원재료로 인식된다. 국소 경로를 통하여, 귀리 열매는 주로 음식으로 이용되며, 미국약전 USP 22, 1990에 귀리 콜로이드 추출물이라고 품질이 기재된다. 이러한 콜로이드 추출물은 피부연화 및 완화 특성을 가지며 곡물 분쇄 및 기타 처리로 얻은 분말로 정의되며 따라서 이러한 품질은 귀리 식사에 해당된다. 약전 기록은 점도, 세균 한계, 건조 손실, 입자 크기 및 재, 지질 및 질소 함량 표준을 기재한다.
귀리 열매로부터, 화장에 사용되는 오일 및 단백질도 추출된다. 단백질은 불용성이며 직접 사용되지 못하고 효소 또는 화학적 가수분해 이후에만 사용된다. 가수분해물이 제조되고 여러 분자량을 가지는 귀리 펩티드, 또는 가수분해 정도에 따라 아미노산을 얻을 수 있다. 가수분해된 귀리 단백질의 화장 및 피부 분야에서 특성들이 연구되었다. 특성들은 모발에 대하여 펩티드가 모방 줄기에 막을 형성하며 각피로 침투하고 따라서 컨디셔닝 효과를 제공하여 보호 효과를 제공한다.
시험관 세포 배양 연구에서, 귀리 콜로이드 추출물의 항-염증 활성이 평가되었다. 이러한 추출물은 인간 각질세포주에서 아라키돈산 및 에이코사노이드의 피부대사, 세포질 포스포리파아제 A2 및 시클로옥시지나아제 발현에 대한 억제활성을 보이며, 항-염증성 시토카인 TGFβ1 유도 활성을 보인다. 면역세포들 예를들면 IL2, IL4, IL5, IL13의 시토카인 Th1 및 Th2 역시 동일한 콜로이드 추출물에 의해 조절된다. 마지막으로, 임상 연구에 의하면 귀리 콜로이드 추출물은 2중 맹검 피부 자극 모델 및 12명의 건강 지원자들에서 피부 자극 모델에서 유리한 효과를 보인다.
곡물 외부는 귀리 섬유 식이요법에 사용되는 글루칸을 제공하여 콜레스테롤 수준 및 심장혈관 위험성을 낮춘다.
또한 귀리 글루칸은 식품 보충제로 점성 및 겔화 특성이 있다.
또한 귀리에서 추출된 글루칸은 면역자극 활성을 가진다.
화장분야에서 유가치한 기타 활성으로는 UV 유해에 대한 보호, 세포대사 자극, 콜라겐 합성 자극 및 모발 인장강도 개선을 포함한다.
곡물 이외에, 귀리는 사료식물로 사용된다. 어린 식물을 베어, 그린 사료로 사용된다. 짚은 말, 소 및 양 사료로 사용되나 인간 식품으로 사용되지는 않는다. 전통의학에서, 귀리 짚은 욕용제 제조에 사용되어 루마티즘 통증, 좌골신경통 및 간 질환 완화에 사용된다.
인도에서는, 귀리 탕약이 아편 중독 해소에 사용되었다. 신선한 식물로부터 알코올 추출물은 담배 중독 해소에 유의한 결과를 준다.
귀리 짚 또는 상용 추출물 기반의 욕용제는 루마티즘, 신경통, 만성습진, 신경피부염, 말초혈관 질환에 효능이 있는 것으로 기재된다.
<허브> 귀리는 EMEA 주제 (참조번호 EMEA/HMPC/202966/2007)이며 개화 전 수확된 건조 지상부위들 또는 개화기에 수확한 식물의 신선한 지상부위에서 얻어진 액체 추출물 (1:5, 45% v/v 에탄올)사용을 언급하고 있다.
이들 지상부위들의 전통적 사용은 경증 정신적 스트레스 및 수면 유도 촉진의 경우로 기술된다.
참고문헌에 의하면, 귀리 지상부위들은 다음과 같이 구성된다:
- 플라보노이드:
=> 아피제닌 유형 (비텍신, 이소비텍신 등) 또는 루테오린 (오리엔틴, 이소오리엔틴, 이소스코파린 등)의 C-글리코실-플라본,
=> 트리신 유형의 O-글리코실화 플라본,
=> 플라보노리그난 (살콜린 A 및 B)
- 바이데스모시드성 스테로이드 사포닌: 아베나코시드 A 및 B (아글리콘: 누아티제닌)
- 단백질
- 기타: 페놀성 화합물 (아베난트라미드, 히드록시신남산 등), 스테롤, 세레브로시드 등.
아토피 피부염 (또는 아토피 습진)은 자주 발병하는 피부질환이며, 프랑스에서 신생아 10-15%가 발병하며 지난 수십 년간 증가하고 있다.
아토피 피부염은 아토피의 피부 증상, 즉 만성 염증성 피부염 또는 습진으로 유전적 결정 요인에 따라 발생하며, 아동의 15-30% 및 성인 2-10%에서 발병하고; 산업화 국가에서 일정하게 발병률이 증가하며, 과거 30년간 2 내지 3배 증가하였고 현재 공중보건의 주요 문제로 인식되고 있다. 아토피 피부염은 자주 다른 아토피 질환 예를들면 알레르기성 비염 및 천식과 연관된다. 이러한 질환은 유아기에 가장 빈번하게 발생하며 수년간 반복적으로 발병되는 것에 특징이 있다. 자연완화로 중단되면서 발병된다.
아토피 피부염 환자의 삶의 질은 상당히 혼란스럽다; 치료법은 코르티코스테로이드 및 국소 면역조절제, 2차 작용으로 장기간 사용이 제한되는 전신 제제, 피부연화제를 포함한다. 현재 처방은 발병의 반응-치료이나 발병 및 피부 염증 조절에 집중한 초기 관여가 질환 조절 및 잠재적 천식 및/또는 비염 발병에 유리한 것으로 보이며 (BIEBER, T. 2008, 아토피 피부염, The New England Journal of Medicine, VoI 358 (14) 1483-1494), 아토피 피부염은 소위 아토피 발달의 초기 단계로 인식된다. 대부분의 경우에서, 관련 국부 처방이 치료 보충으로 제공되며 환자들 증상을 완화시킬 수 있다. 코르티코스테로이드 치료를 대체할 다른 치료법의 필요성이 대두된다.
아토피 피부염은 유전적 소인, 환경적 인자 예를들면 알레르기 황원 및 미생물, 피부 장벽 장애, 면역시스템 조절 장애 간 복잡한 상호작용의 결과일 수 있다(SPERGEL, JM. 2008, Immunology and treatment of atopic dermatitis, Am J Clin Dermatol, VoI 9(4) 233-244).
또한 건선은 만성으로 진전되는 피부 염증 질환이며; 인구 2%에 발병된다. 아토피 피부염과 함께, 가장 빈번한 피부의 만성 염증성 질환이다. 염증반응과 관련된 표피세포의 이상 성장에 특징이 있다. 이러한 염증 현상의 중앙 기작은 면역시스템 T 세포, 주로 Th1 유형의 세포 작용과 연관되며 (WILSMANN-THEIS, D.; HAGEMANN, T; JORDAN, J; BIEBER, T; NOVAK, N. 2008, Facing psoriasis and atopic dermatitis: are there more similarities or more differences ?, Eur J Dermatol, VoI 18 (2) 172-180), 이는 염증과정을 개시하고 유지하며 각질세포 과다증식을 자극하고 가속 및 불완전한 분화기를 거친다. 각질세포는 염증신호에 민감하게 하고 전-염증성 조절제를 방출하는 수용체를 발현한다. 건선 염증은 따라서 T 세포들 및 각질세포 상호 자극에 의해 유지된다.
따라서 질환은 장기간 치료되어야 한다.
이러한 염증성 피부질환에 대체적 치료에 대한 필요성 및 강한 요구가 존재한다.
예상치 않게 놀랍게도, 본 발명자들은 치료 및 화장/피부 분야에서 귀리의 지상부위들 추출물에 대한 새로운 부가가치를 보였다. 유리하게도, 상기 추출물은 아토피 피부염 치료에 유용한 면역조절 및 항-염증 특성이 있다. 본 발명에 의한 추출물은 여드름 및 피부노화 치료에도 양호한 효능을 보인다.
따라서 본 발명의 목적은 귀리의 곡물을 제회한 지상부위(들) 추출물이며, 이는 2-15% 플라보노이드 및 0.2-2% 아베나코시드 A 및 B를 포함한다.
귀리의 지상부위들이란 본 발명에서 지상에 있는 귀리 식물의 임의 부분을 의미하며, 곡물은 제외한다.
바람직하게는, 귀리 지상부위들은 잎 및/또는 줄기 및/또는 잔이삭 및/또는 꽃을 포함한다.
획득된 귀리 추출물은 플라보노이드 및 사포닌 함량으로 특징 된다. 이들은 고압액체크로마토그래피에 의해, 각 화합물에 적합한 다른 두 방법들로 분석된다.
이들 두 상이한 분자들 함량은 추출 조건에 따라 달라진다. 주요 플라보노이드는 이소비텍신-2"-O-아라비노피라노시드 및 이소오리엔틴-2"-O-아라비노피라노시드이다. 아베나코시드 A 및 B는 주요 사포닌이다. 이들은 비스데스모시드성 스테로이드 사포닌이다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 추출물은 5-10% 주요 플라보노이드들: 이소비텍신-2"-O-아라비노피라노시드 및 이소오리엔틴-2"-O-아라비노피라노시드를 포함한다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 추출물은 유기용매에서 획득된 추출물이다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 추출물은 1ppm 미만 단백질, 바람직하게는 0.5ppm 미만 및 더욱 바람직하게는 0.3ppm 단백질을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 추출물은 이삭 피기 전 수확된 귀리의 지상부위들 추출물이다.
본 발명에 있어서, <이삭 피기 전 수확된 귀리의 지상 부위들>이란 발아 이후 (발아 이후 약 2주 내지 2달) 줄기신장단계에서 이삭 피기 바로 직전 수확된 귀리의 지상부위들을 의미한다.
본 발명에 있어서, <줄기신장>이란 줄기가 신장하고 이삭 피기 전에 해당되는 개화 전 생장기간을 의미한다.
본 발명의 다른 목적은 곡물을 포함하지 않는 귀리 지상부위(들) 추출물 제조방법을 제공하는 것이며, 이는 다음 단계들로 구성된다:
- 귀리 지상부위(들) 건조 및 분쇄,
- 케톤, 에스테르, C1-C4 알코올, 및 이들 용매의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 유기용매에서 추출, 및
- 원심분리 또는 여과.
바람직하게는, 본 발명에 의한 방법의 유기용매는 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 에틸 아세테이트, C1-C4 알코올 및 이들 용매의 혼합물에서 선택된다.
바람직하게는 지상부위는 신장이 끝나는 그러나 이삭이 피기 전에 2개월 후 수확되며 건조되고 분쇄된다.
추출은 교반되거나 정치 상태에서 수행된다.
추출은 환류 또는 실온에서 수행된다.
바람직하게는, 추출은 식물/용매 비율이 1/7 내지 1/20, 바람직하게는 1/8 내지 1/12 비율에서 수행된다.
바람직하게는, 추출은 30분 내지 48 시간, 더욱 바람직하게는 60 내지 120분 수행된다.
추출은 2 또는 3회 진행될 수 있다.
추출단계에서 찌꺼기는 원심분리 또는 여과하여 추출물로부터 분리되며 용액은 건조 추출물이 획득될 때까지 농축된다.
탈색처리는 농축, 침전 및 여과에 의해 탈지처리와 함께 또는 농축되거나 되지 않은 추출 용액에 활성탄 또는 흡착 수지와 같은 흡착 지지체를 첨가하여 수행될 수 있다.
지지체는 건조단계에서 추출재료에 대하여 1-75% 중량비율로 첨가될 수 있다. 지지체는 당, 예를들면 말토덱스트린, 락토오스, 실리카 또는 임의 기타 화장품에서 허용되는 지지체일 수 있다.
본 발명의 다른 목적은 본 발명의 방법에 의해 획득되는 곡물을 제외한 지상부위 추출물이다.
바람직하게는, 본 추출물은 아세톤 또는 물 20%까지 사용되는 아세톤/물 추출에 의해 얻어진다.
아세톤 또는 물 20%까지 사용되는 아세톤/물 추출에 의해 얻어진 추출물은 플라보노이드 및 사포닌을 포함하며 단백질은 거의 존재하지 않는다. 유럽 약전에 기술되어 있는 단백질 함량 측정법으로는 결과를 얻을 수 없고, 아세톤에서 첨전 후 전기영동에 의한 SDS-Page 젤 상에서의 이동 및 쿠마시 블루 또는 질산은 표시에 의하면 단백질 존재를 보이는 어떠한 밴드도 없다. 동일 전기영동에서 대조군을 이용하여 단백질 검출을 1 ng까지 정량 할 수 있고, 본 추출물은 1 ppm 미만의 단백질 (젤에 넣은 추출물 함량에 대하여)을 가진다. 바람직하게는, 상기 단백질 함량은 0.5 ppm 미만 및 더욱 바람직하게는 0.3 ppm 미만이다.
본 발명의 다른 목적은 본 발명에 의한 추출물 및 하나 이상의 피부학적으로 허용되는 부형제 또는 화장품에 허용되는 부형제를 포함한 피부조성물 또는 화장조성물에 관한 것이다.
본 발명에 의한 조성물은 특히 첨가제 및 제형 조제 예를들면 유화제, 증점제, 고형화제, 수분고착제, 전착제, 안정제, 착색제, 향수 및 보존제를 포함할 수 있다.
본 발명에 의한 화장 또는 피부과학적 조성물은 유용한 피부과학적 양립 부형제를 더욱 포함할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 조성물은 활성성분으로서 귀리의 지상부위(들) 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 0.5 중량% 포함한다.
바람직하게는, 상기 추출물 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.1% 내지 0.5 중량% 이다.
본 발명에 의한 피부학적 또는 화장조성물은 유-중-수 (W/O) 유화액 또는 수-중-유 (O/W), 다중 유화액 예를들면 수-중-유-증-수 (W/O/W) 또는 유-중-수-중-유 (O/W/O) 유화액, 미소-유화액 또는 수-분산액 또는 지-분산액, 젤 또는 연무 형태로 제조될 수 있다.
피부 또는 화장에 있어서 적용될 수 있는 부형제는 국소 용도 예를들면 밀크, 크림, 연고, 오일, 로션, 젤, 발포 젤, 고약, 분무형태 조성물을 얻기 위하여 본 분야 기술자에게 공지된 것들 중 임의 부형제일 수 있다.
본 발명의 다른 목적은 약물 용도의 본 발명에 의한 추출물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 염증성 피부질환 치료 용도의 본 발명에 의한 추출물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 염증성 피부질환인 아토피 피부염, 건선 또는 습진 치료 용도의 본 발명에 의한 추출물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 염증성 피부질환 치료용 약물 제조를 위한 본 발명에 의한 추출물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 염증성 피부질환인 아토피 피부염, 건선 또는 습진 치료용 약물 제조를 위한 본 발명에 의한 추출물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 여드름 또는 피부노화 치료 용도의 본 발명에 의한 추출물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 여드름 또는 피부노화 치료용 화장 및/또는 피부과학적 조성물에서 본 발명에 의한 추출물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 주사(rosacea) 치료 용도의 본 발명에 의한 추출물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 주사 치료용 화장 및/또는 피부조성물에서 본 발명에 의한 추출물의 용도에 관한 것이다.
주사는 안면 피부의 염증성 및 만성 질환이다. 이는 불치의 양성 피부질환이며 코, 뺨, 때로는 턱 및 이마에도 만성적 붉은 반점들이 나타난다.
본 발명의 다른 목적은 민감성 피부 치료 용도의 본 발명에 의한 추출물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 민감성 피부 치료용 화장 및/또는 피부조성물에서 본 발명에 의한 추출물의 용도에 관한 것이다.
민감성 피부란 본 발명에서 높은 민감도를 가지는 피부를 의미한다. 민감성 피부 또는 반응성 피부는 신경 민감성 신호 예를들면 염증, 가려움, 따가움에 의해 특징된다. 피부과 의사들의 임상 평가로부터의 임상 신호들 중에서: 홍반, 부종, 마름/박리, 구진/수포, 여드름 자국들이 나타난다 (L. Misery et al., JEADV 2009, 23, 376). 민감성 피부는 과잉-반응성 피부이며 잘-용인되는 위생제품 및 관리용품을 사용하여야 한다. 민감성 피부를 가지는 사람들은 대부분의 사람들 보다 더욱 빨리 자극에 반응한다.
.
하기 예들은 범위를 제한하지 않고 본 발명을 기술한다.
실시예 1: 본 발명에 의한 이삭 피기 전 수확된 귀리 지상부위들 추출물 제 조
a. 아세톤 추출
400 kg의 이삭 피기 전 수확된 귀리 지상부위들 건조물이 분쇄되고 반응기에 1시간 동안 실온에서 교반되면서 10 부피(volume)의 아세톤/물 혼합물과 함께 처리되었다.
고/액 분리에 따라, 제1 추출액을 얻었다. 찌꺼기가 2회에 10 부피의 아세톤/물 혼합물로 1시간 실온에서 교반되면서 추출되었다. 고/액 분리에 따라 제2 추출액을 얻었고 제1 추출액과 합쳐졌다. 획득된 용액은 물에서 1.33 부피/kg으로 농축되고 여과되었다. 이에 따라 얻어진 추출물은 말토덱스트린 지지체(qsq 25%/생 추출물) 첨가 후 마이크로파로 건조되었다.
따라서, 적정에 따라 6% 플라보노이드 (이소비텍신-2"-O-아라비노피라노시드 및 이소오리엔틴-2"-O-아라비노피라노시드) 및 0.6% 아베나코시드 B로 확인되는 36kg의 옅은 갈색 분말이 얻어졌고 얻어진 추출물의 단백질 함량은 0.3 ppm 미만이었다.
b. 에탄올 추출
분쇄된 건조 식물 100g을 에탄올/물 50:50 혼합물로 1시간 동안 환류하며 추출하고, 고/액 분리 및 50℃ 진공 증발되었다. 26g의 추출물이 갈색 분말로 얻어졌고 적정에 의한 성분은 1.5 내지 3% 플라보노이드 (이소비텍신-2"-O-아라비노피라노시드 및 이소오리엔틴-2"-O-아라비노피라노시드)을 포함하였다.
실시예 2: 실시예 1.a의 이삭 피기 전 수확된 귀리 지상부위들 추출물에 대 한 생물학적 연구
귀리의 지상부위들에 대한 약리 연구는 아토피 피부염의 면역-염증성 성분을 다룬다. 표피장벽이 변경되면 (필라그린 유전자의 돌연변이) 고-분자량의 알레르기 항원 (좀 진드기, 화분, 등) 침투, 가지 세포들에 의한 이들의 포획 및 이들의 T 세포로의 제시가 용이하다; 상호작용에 따라 피부에서 T 세포 반응에 이르고 - 먼저 Th2 는 염증을 유지할 수 있는 전-염증성 시토카인 및 케모카인: 아토피 피부염과 관련된 IL-4, IL-5, IL-13을 생성하고, 상당한 IL-17 및 IL-31 발현을 일으키나 - Th1은 더욱 후발적이다 (INCORVAIA, C ; FRATI, F. ; VERNA N ; D 'ALO, S. ; MOTOLESE, A. ; PUCCI, S. 2008, Allergy and the skin, Clin Exp Immunol, VoI 153 (I) 27-29); (BIEBER, T 2008, 아토피 피부염, The New England Journal of Medecine, VoI 358 (14) 1483-1494). T 림프구 활성에 이어 다른 유형의 세포 주로 각질세포 및 내피세포 활성이 이어지고, 이 결과 염증 조절자들 (시토카인, 프로스타글란딘) 및 케모카인 생성으로 이어져 염증성 세포들이 축적된다.
a. 분획물 제조
활성에 주요한 분자 또는 분자들을 확인하고자 귀리의 지상부위들 추출물은 분획되었다.
이를 위하여, 추출물을 중압실리카칼럼에 넣고 극성을 높인 용매들 예를들면 물에 메탄올 농도를 올리면서 계속하여 용출하였다. 실시예 1.a에 의한 추출물을 실리카 칼럼에서 메탄올/물 25:75 에서 50:50 및 100% 메탄올로 용출하여 플라보노이드-풍부 분획물 (50:50 메탄올/물 분획, 19% 플라보노이드 이소비텍신-2"-O-아라비노피라노시드 및 이소오리엔틴-2-O-아라비노피라노시드, 비텍신-2-아라비노스로 표현) 및 사포닌-풍부 분획물 (100% 메탄올 분획, 15% 아베나코시드 B)으로 분획되었다. 제1 분획물 플라보노이드 이소비텍신-2"-O-아라비노피라노시드 및 이소오리엔틴-2-O-아라비노피라노시드들은 반-분취 HPLC으로 C-18 역 실리카 칼럼을 사용하여 분리되었고, 질량분광기 및 핵자기공명으로 구조가 확인되었다.
아베나코시드 A 및 아베나코시드 B는 사포닌-풍부 분획물로부터 반-분취용 HPLC으로 분리되었고, 질량분광기 및 핵자기공명으로 구조가 확인되었다.
b. 면역조절 활성
면역시스템의 광범위한 조절 단백질을 대표하는 시토카인은 상재 또는 침윤 피부세포에 의해 생성되고 염증 또는 면역 과정에서 활성화된다.
림프구에 의해 생성되는 인터루킨 Il2, Il4, Il5 및 Il13은 두 그룹으로 구분된다: 유형 Th1의 시토카인 Il2 및 Th2 유형의 시토카인 Il4, Il5 및 Il13. 이들 모든 인터루킨은 염증성 병리 예를들면 아토피, 접촉성 습진 또는 건선 과정에서 과다 생성된다.
이들 중, T 세포에 의해 유도되는 인간 인터루킨 2 (IL-2)은 활성 T 림프구 증식을 유지할 수 있고 B 및 NK (자연살해) 세포 분화 및 활성 과정을 유도한다.
시험관에서, 인간 단핵 세포가 자극되고 시토카인이 생성된다. 이러한 실험 원리는, 이중 자극 포르볼 미리스테이트 아세테이트/이오노마이신에 의해 유도되는 IL2, IL4, IL5, IL13 생성에 대한 추출물 영향을 연구하는 것이다.
결과 : 실시예 1.a에 의한 이삭 피기 전 수확된 귀리 지상부위들의 아세톤 추출물은 30 ug/ml 농도에서 인터루킨 2을 발현하는 CD4 림프구 수를 52%, 세포간 IL2을 21%까지 억제한다. 30 ug/ml의 동일한 추출물은 인터루킨 4 생성 림프구를 51%, 인터루킨 5 생성을 31% 및 인터루킨 13을 78%까지 억제한다.
아토핀 피부염 치료를 위한 활성은 아베나코시드 A 및 B을 포함한 추출물의 사포닌에 의해 전달된다.
c. 항-염증성 활성
원리 : 표피에서 대부분인 각질세포는 피부의 염증반응 개시 및 조절에 중요한 역할을 한다. 본 모델로 시험관내 여러 분자들의 아라키돈산 대사에서 유래하는 조절자들 생성 조절 능력을 결정할 수 있다. 프로스타글란딘 PG6KF1α은 프로스타시클린 PGI2의 안정한 대사산물이며 자극된 인간 각질세포에 의해 생성되는 주요 대사산물이다. 이삭 피기 전 수확된 귀리의 지상부위들 아세톤 추출물 및 이의 분획물들이 칼슘 이오노포어 A23187 (아라키돈산의 연속단계 자극)에 의해 각질세포에 의해 유도되는 이러한 프로스타글란딘 생성에 대한 영향을 평가하였다.
결과 : 실시예 1.a에 의한 아세톤 추출물은 상당한 활성을 가지며 (0.1 ug/ml에서 40% 억제), 플라보노이드-풍부 분획물은 10ug/ml에서 최대 49% 억제 활성을 가진다.
이러한 항-염증성 활성은 추출물에 존재하는 플라보노이드, 특히 이소오리엔틴-2"-O-아라비노실 (10ug/ml에서 55% 억제)에 의해 전달된다.
이러한 프로스타시클린 방출 억제 작용 기작은 부분적으로 평가된다: 시클로옥시지나아제 2의 시험관내 직접 억제는 아세톤 추출물 (100ug/ml에서 68% 억제)에서 관찰되고, 포스포리파아제 A2 억제는 관찰되지 않는다.
d. 항-산화 활성
실시예 1.a에 의해 제조된 귀리 지상부위들 추출물의 항-라디칼 활성은 DPPH (2,2'-디페닐-1-피클리히드라질) 실험에 의해 평가된다. 이러한 신속한 쉬운 실험은 안정한 자유 라디칼 DPPH의 포획 능력 측정에 기반한다. 517nm 흡광 자유 라디칼 DPPH*는 양성자 도너와 반응할 때 해당 히드라진이 된다.
R-OH + DPPH* R-O* + DPPH2
IC50은 DPPH 메탄올 용액에서 흡광도가 50% 감소되는 추출물 농도에 해당한다 (C=25ug/ml).
이러한 조건에서, 비타민 E는 IC50이 6-10ug/ml이며, 이삭 피기 전 귀리 지상부위들 아세톤 추출물은 IC50이 70ug/ml이다.
따라서 본 추출물은 항-산화 활성을 가지며 항-노화제제로서의 피부-화장 조성물로 사용될 수 있다.
e. 항-세균 활성
실시예 1.a에 의해 제조된 아세톤 추출물은 여드름 관련 세균, Propionibacterium acnes에 선택적 작용을 보인다 (표 1 참고).
세균 MIC
Staphylococcus aureus ≥3.07%
Staphylococcus epidermidis ≥3.07%
P. acnes 0.096%
Pseudomonas aeruginosa ≥3.07%
Escherichia coli ≥3.07%
Candida albicans ≥3.07%
표 1은 실시예 1.a에 의한 구리 지상부위들의 아세톤 추출물 백분율 (w/w)으로 표현된 상이한 세균들, 그람 양성균, 그람 음성균, 효모 및 곰팡이에 대한 최소 억제 농도이다.
실시예 3: 본 발명에 의한 조성물
아토피 피부를 위한 피부연화 크림
귀리의 지상부위들 추출물 (실시예 l.a) 0.1-0.5%
광유 10-20%
이브닝 프림로즈 오일 2.5%
시클로메티콘 5-8%
글리세릴 스테아레이트 / PEG-100 스테아레이트 5%
글리세린 5%
폴리아크릴아미드 & C 13- 14 이소파라핀 & 라우레스-7 3%
PEG- 12 4%
EDTA 0.2%
트리에탄올아민 0.1%
보존제 qs
물 qsp 100%
아토피 피부를 위한 보습 밀크
귀리의 지상부위들 추출물 (실시예 l.a) 0.1-0.5%
광유3%
바셀린 6-12%
디메티콘 2%
이브닝 프림로즈 오일 2.5%
솔비탄 스테아레이트 / 수크로스 코코에이트 5%
잔탄검0.4%
카보머 0.2%
트리에탄올아민 0.1%
글리세린 3%
EDTA 0.2%
베헨 알코올 1 %
보존제qs
물 qsp 100%

Claims (4)

  1. 2 중량% 내지 15중량%의 플라보노이드 및 0.2 중량% 내지 2 중량%의 아베나코시드 B를 함유하는 이삭 피기 전에 수확되는 귀리의 지상부위(들)의 아세톤 추출물을 포함하는 염증성 피부질환 치료에 사용되는 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 염증성 피부질환은 아토피 피부염, 건선 또는 습진인, 조성물.
  3. 2 중량% 내지 15중량%의 플라보노이드 및 0.2 중량% 내지 2 중량%의 아베나코시드 B를 함유하는 이삭 피기 전에 수확되는 귀리의 지상부위(들)의 아세톤 추출물을 포함하는 여드름 치료 용도에 사용되는 조성물.
  4. 2 중량% 내지 15중량%의 플라보노이드 및 0.2 중량% 내지 2 중량%의 아베나코시드 B를 함유하는 이삭 피기 전에 수확되는 귀리의 지상부위(들)의 아세톤 추출물을 포함하는 피부 산화 처치에 사용되는 조성물.
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