KR101735996B1

KR101735996B1 - 레스베라트릴 트리글리콜레이트를 포함하는 피부미백용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101735996B1
Application number: KR1020160010173A
Authority: KR
Inventors: 부용출; 박원철
Original assignee: 경북대학교 산학협력단
Priority date: 2016-01-27
Filing date: 2016-01-27
Publication date: 2017-05-16
Also published as: US10662140B2; US20170210694A1

Abstract

본 발명은 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate)를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 레스베라트릴 트리글리콜레이트 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물, 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품, 레스베라트릴 트리글리콜레이트 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 약학 조성물, 상기 피부 미백용 약학 조성물을 포함하는 피부 외용제, 및 피부 미백효과를 갖는 레스베라트릴 트리글리콜레이트 화합물에 관한 것이다. 본 발명의 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate)는 멜라닌 생성을 억제하고, 멜라닌 생성관련 유전자의 발현을 억제하므로, 피부 미백용 화장료 및 약학 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

레스베라트릴 트리글리콜레이트를 포함하는 피부미백용 화장료 조성물{Whitening cosmetic composition to the skin containing resveratryl triglycolate}

본 발명은 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate)를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 레스베라트릴 트리글리콜레이트 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물, 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품, 레스베라트릴 트리글리콜레이트 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 약학 조성물, 상기 피부 미백용 약학 조성물을 포함하는 피부 외용제, 및 피부 미백효과를 갖는 레스베라트릴 트리글리콜레이트 화합물에 관한 것이다.

사람의 피부색은 피부 내 멜라닌(melanin)의 농도와 분포에 따라 유전적으로 결정되나, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다.

피부의 색을 결정하는 멜라닌 생성에 대한 화학적 작용은 현재까지 여러 논문 등을 통해 많이 보고되고 있는데, 멜라닌 생성세포인 멜라노사이트 (melanocyte)가 멜라노좀(melanosome)이라는 세포내 소기관 내에서 자외선으로부터 세포를 보호하는 기능을 가지는 멜라닌을 합성한 후, 상기 멜라닌은 멜라노사이트에서 각질형성세포(keratinocyte)로 이동하는 것으로 알려져 있으며, 이렇게 각질형성세포로 이동된 멜라닌이 피부색을 결정하는 것으로 보고되고 있다.

상기 멜라닌 생합성 과정에서 필요한 전구물질은 티로신(tyrosine)이라는 아미노산으로, 이 티로신은 디히드록시페닐알라닌(dihydroxyphenylalanine, DOPA)으로 전환되고, 그 후 도파퀴논(dopaquinone)이라는 물질 등을 거쳐 최종적으로 멜라닌으로 전환된다고 알려져 있다. 이러한 멜라닌 생합성과 관련하여, 티로신-관련 단백질 1(tyrosine-related protein 1) 또는 도파크롬 타우토메라제(dopachrome tautomerase, TRP-2) 등은 멜라닌 생합성에 영향을 끼친다고 알려져 있으며, 이들을 조절할 수 있는 주요 전사 인자인, 작은 안구증 연관 전사인자(Microphthalmia-associated transcription factor, MITF) 또한 멜라닌 생합성 조절에 역할을 한다고 알려져 있다. 그 중에서도 특히, 멜라닌 생합성에 대하여 중추적인 역할을 하는 효소로 티로시나제(tyrosinase, TYR)가 있는데, 상기 TYR는 티로신에서 DOPA로, DOPA에서 도파퀴논으로의 산화 반응에 필요하며, 이 효소의 활성이 저해되면 멜라닌 합성이 저해된다고 알려져 있다.

상기 TYR 활성을 저해하는 물질로서, 내인성으로 존재하는 저분자량 물질들 중 활성 설프히드릴기(sulfhydryl group)을 함유하는 물질인 설프히드릴 에이전트(sulfhydryl agent)가 있으며, 그 속에는 시스테인(cysteine) 또는 환원형 글루타치온(reduced glutathione, GSH)이 속해 있다.

한편, 상기 세포 내에 존재하는 설프히드릴 에이전트는 TYR 활성을 억제할 뿐만 아니라, TYR에 의해 생성된 도파퀴논이 이후에 대사되는 과정에 대해서도 중요한 영향을 미친다. 멜라닌 생성과정 중간 산물인 도파퀴논은 시스테인 또는 환원형 글루타치온(GSH)과 결합함으로써 시스테이닐도파(cysteinyldopa) 또는 글루타치오닐도파(glutathionyldopa)로 전환될 수 있는데, 이들 대사산물은 궁극적으로 페오멜라닌(pheomelanin)으로 전환된다. 페오멜라닌은 일반적인 멜라닌인 유멜라닌(eumelanin)이 검은색 또는 갈색을 띠는 것과 달리, 노란색 또는 빨간색을 띠며 유멜라닌에 비해 상대적으로 페오멜라닌 합성이 많아지게 되면, 전반적으로 색소의 강도는 낮아지면서 노란색이나 빨간색을 띠게 된다. 유멜라닌과 페오멜라닌의 상대적 비율은 인종에 따른 피부색의 차이를 유발하는 중요 인자이다. 또한, 자외선에 의한 색소 침착 과정에서도 자외선에 의해 발생한 활성산소대사산물(reactive oxygen species, ROS)이 세포내 설프히드릴 에이전트를 고갈시키고, 이로 인해 페오멜라닌 생성이 저해되면서 유멜라닌으로의 전환이 촉진되는 것이 주요한 기전으로 작용한다고 알려진 바 있다.

레스베라트롤은 사람 상피 멜라노사이트(human epidermal melanocytes)에서 작은 안구증 연관 전사인자(Microphthalmia-associated transcription factor, MITF)와 TYR 프로모터 활성을 감소시킴으로써, 멜라닌 합성을 억제하는 것으로 알려져 있다(Lin CB. et.al., J invest Dermatol 2002;119:1330-40). 따라서, 레스베라트롤은 촉매 활성, 유전자 발현 및 TYR 효소의 번역 후 성숙(posttranslational maturation)을 포함하는 다양한(multiple) 메커니즘을 통해, 세포 내 멜라닌 합성을 감소시킬 수 있다. 레스베라트롤이 갖는 이와 같은 효과로 인해, 레스베라트롤의 유용성을 증가시키기 위한 다양한 화학적 변환이 시도되어 왔다.

화장품 산업에서 유효성분의 안정성, 안전성 및 효과가 중요시 되는데, 레스베라트롤은 쉽게 산화되어 장기 보존이 요구되는 화장료 제제로서 사용하기에는 어려운 점이 많다. 최근, 본 발명자들은 레스베라트롤을 화학적으로 변환시킨 레스베라트릴 트리아세테이트(resveratryl triacetate, RTA)을 제조하여, 배양된 멜라노사이트와 재구성된 피부조직 모델을 이용하여 상기 RTA가 레스베라트롤에 비해, 산화에 대해 보다 안정성이고, 독성이 덜하며, 멜라닌 생성을 억제하는 효과를 가짐을 보고한 바 있다(Park J.et.al.,Arch Dermatol Res 2014; 306: 475-87). 그러나, 아직까지는 레스베라트롤을 포함한 다양한 유효성분의 안정성, 독성, 및 효과 등의 문제로 화장료 또는 약학조성물의 제제화가 어렵고, 이에 대한 확실한 보완책이 강구되지 못하고 있는 실정이다.

이러한 배경하에서, 본 발명자들은 피부 미백 효과를 갖는 유효성분을 탐색하기 위해 예의 노력한 결과, 레스베라트롤을 화학적으로 변환시킨 레스베라트릴 트리글리콜레이트가 멜라닌 생성을 억제하고, TYR, TYRP1 및 DCT의 발현을 감소시키고, MITF를 감소시킴으로써 우수한 미백효과를 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 레스베라트릴 트리글리콜레이트 (resveratryl triglycolate)를 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

[화학식 1]

본 발명의 다른 목적은 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate) 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 피부 미백용 약학 조성물을 포함하는 피부 외용제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 피부 미백효과를 갖는 레스베라트릴 트리글리콜레이트 화합물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 양태는 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate) 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명에서, 상기 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate)를 포함하는 화장료 조성물은 멜라닌 생성을 억제하여 피부 미백 효과를 증진시킬 수 있다.

본 발명에서 용어, "레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate)"는 레스베라트롤과 테트라하이드로피란(Tetrahydropyran, THP)-프로텍티드(protected) 글리콜산(glycolic acid, GA)을 에스테르화(esterification)하여 제조한 화합물을 의미한다.

본 발명의 일 실시예에서, 레스베라트롤과 THP-프로텍티드(protected) GA의 에스테르화(esterification)는 탈수 시약(dehydration agent)으로서 EDC (1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide), 및 촉매제로서 DMAP(4-dimethylaminopyridine)를 사용하여, (E)-5-(4-(2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)acetoxy)styryl)-1,3-phenylene bis(2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)acetate)를 생산하였다. 상기 생성된 산물을 디옥산(dioxane)에 녹이고, 2N-HCl-에테르(ether)와 혼합하여 흰색 고체의 레스베라트릴 트리글리콜레이트를 제조하였다. 모든 단계를 ¹H 및 ¹³C NMR spectroscopy 및 mass spectrometry로 확인하였으며, 레스베라트릴 트리글리콜레이트는 무정형의 파우더를 나타냄을 확인하였다.

본 발명의 조성물의 유효성분으로서 상기 레스베라트릴 트리글리콜레이트 또는 이의 화장품학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 염으로는 화장품학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들어 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 동일한 몰량의 화합물 및 산 수용액 또는 알콜(예, 글리콜 모노메틸 에테르)을 가열하고, 이어서 상기 혼합물을 증발시켜 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다. 이때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산(fumaric acid), 만데르산, 프로피온산 (propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산(lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 히드로아이오딕산 등을 사용할 수 있으며, 이들에 제한되지 않는다.

또한, 염기를 사용하여 화장품학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은, 예를 들어 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해시키고, 비용해 화합물 염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 또한, 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.

본 발명에서 용어, "미백"은 피부가 자외선에 지속적으로 노출되어 멜라닌 세포가 증가하고 그로 인해 피부에 멜라닌 색소가 과도하게 침착되는 것을 방지하거나, 기존에 침착된 멜라닌 색소를 엷게 하는 기능을 일컫는다. 이에 따라, 과도한 멜라닌 색소의 침착으로 생기는 기미나 주근깨의 생성을 억제할 수 있다.

본 발명에 따른 피부미백용 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 또는 스프레이 등의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 피부미백용 화장료 조성물은 물, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 킬레이트제, 살균제, 산화방지제, 방부제, 색소 및 향료로 이루어지는 군으로부터 1종 이상 선택되는 첨가제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분을 전체 조성물에 대하여 0.001 내지 5 중량%, 구체적으로는 0.01 내지 5 중량%로 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장료용 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 효과 즉, 피부 미백효과를 저해하지 않는 범위에서 통상의 화장료에 사용되는 공지의 성분, 예를 들어 보습제, 분말성분, 자외선 흡수제, 산화방지제, 미용성분, 당지질, 식물추출액, 방부제, 향료, pH 조정제, 색소, 점도 조정제 또는 겔화제 등을 보조성분으로 포함할 수 있다.

보습제의 비제한적인 예는 프로필렌글리콜, 이소프렌글리콜, 1,2-헵탄디올, 1,3-부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 헥산디올, 폴리에틸렌글리콜글리세린, 글리세린, 디글리세린, 트리글리세린, 폴리글리세린, 네오펜틸글리콜, 소르비톨, 에리스리톨, 펜타에리스리톨, 글루코스, 갈락토스 등의 글리콜류, 프락토스, 수크로스, 말토스, 자일로스, 자일로비오스, 올리고당의 환원물, 단백질, 무코다당, 콜라겐, 엘라스틴, 케라틴 또는 트리에탄올아민 등일 수 있다.

분말성분의 비제한적인 예는 산화티탄, 실리콘처리 산화티탄, 산화아연 및 황산바륨 등의 백색 무기안료, 산화철, 카본블랙, 티탄산화티탄 소결물 및 군청 등의 유색 무기 안료, 탈크, 실리콘처리 탈크, 백운모, 카올린, 탄화규소, 벤토나이트, 스멕타이트, 무수규산, 산화알루미늄, 산화마그네슘, 산화지르코늄, 규조토, 규산칼슘, 규산바륨, 규산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 히드록시아파타이트 및 질화붕소 등의 백색 체질 분체, 이산화티탄 피복 운모, 산화철 운모 티탄, 실리콘처리 운모 티탄, 어린박, 폴리에틸렌계 수지, 불소계 수지, 셀룰로스계 수지 및 실리콘 수지 등의 유기 고분자 수지 분체, 스테아린산 아연 및 N-아실리신 등의 유기 저분자성 분체, 전분, 실크 분말 및 셀룰로스 분말 등의 천연 유기 분체, 적색 201호, 적색 202호, 등색 203호, 등색 204호, 청색 404호 및 황색 401호 등의 유기 안료 분체, 적색 3호, 적색 104호, 적색 106호, 등색 205호, 황색 4호, 황색 5호, 녹색 3호 및 청색 1호 등의 지르코늄, 바륨 또는 알루미늄 레이크 등의 유기 분체 안료, 마이카, 금분 등의 금박 분체 및 미립자 산화 티탄 피복 운모 티탄 등의 복합 분체 등일 수 있다.

자외선 흡수제의 비제한적인 예는 벤조페논 유도체, 파라아미노안식향산 유도체, 메톡시신남산 유도체, 우로카닌산 등일 수 있다.

산화방지제의 비제한적인 예는 BHT, BHA, 비타민 C류, 비타민 E류, 이들의 유도체 및 이들의 염 등일 수 있다.

미용성분의 비제한적인 예는 상기 비타민을 포함한 비타민류, 이들의 유도체 및 이들의 염, 소염제 및 생약 등일 수 있다.

당지질의 비제한적인 예는 스핑고당지질 등일 수 있다.

식물추출액의 비제한적인 예는 알로에베라, 위치하젤, 하마메리스, 오이, 레몬, 라벤더 및 장미 등의 추출물일 수 있다.

방부제의 비제한적인 예는 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산에틸, 파라옥시안식향산부틸, 파라옥시안식향산프로필, 페녹시에탄올 및 에탄올 등일 수 있다.

향료의 비제한적인 예는 캠퍼유, 귤오일, 페퍼민트오일, 쟈스민 앱솔루트, 파인오일, 라임오일, 라벤더오일, 로즈오일 및 머스크오일 등일 수 있다.

pH 조정제의 비제한적인 예는 에데트산, 에데트산나트륨, 염화나트륨, 쿠엔산, 쿠엔산나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨 및 트리에탄올아민 등일 수 있다.

색소의 비제한적인 예는 청색 1호, 청색 204호, 적색 3호 및 황색 201호 등일 수 있다.

점도조정제의 비제한적인 예는 폴리비닐알콜(PVA), 메틸셀룰로스(MC), 에틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 히드록시프로필에틸셀룰로스, 이 외의 셀룰로스 유도체, 폴리비닐피릴리돈(PVP), 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 알긴산 또는 이의 염, 카라기난, 퀸스시드 파우드, 알칼리게네스 산생 다당류, 카르복시비닐폴리머, 아크릴산염, 아크릴산폴리머(쇄상형, 가교형) 및 아크릴산메타크릴산알킬 공중합체 등일 수 있다.

겔화제의 비제한적인 예는 (베헨산/에이코산 이산) 글리세릴 및 (베헨산/에이코산 이산) 폴리글리세릴-10, 지방산 금속염, 히드록시스테아린산, 덱스트린 지방산 에스테르, 이눌린 지방산 에스테르, 설탕 지방산 에스테르, 아실화 셀루비오스, 디벤질리덴소르비톨, 아미노산계 겔화제, 무수규산, 유기변성점토 광물, 연무상 실리카, 알루미나, 가교형 유기폴리실록산, 폴리에틸렌 왁스 또는 파라핀 왁스 등의 탄화수소 왁스, 카나우바 왁스 또는 칸델릴라 왁스 등의 식물성 왁스, 한천 및 젤라틴 등일 수 있다

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용가능한 담체는 제형에 따라 다양하다. 본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일이 있으며, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 다른 양태는 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품을 제공한다.

상기 본 발명에서 용어, "화장품"은 2000년 7월 1일부터 시행되고 있는 화장품법 제2조제1호에 따라 인체를 청결, 미화하여 매력을 더하고 용모를 밝게 변화시키거나 피부, 모발의 건강을 유지 또는 증진하기 위하여 인체에 사용되는 물품으로서 인체에 대한 작용이 경미한 것으로 정의된다.

구체적으로 본 발명에 따른 화장품은 피부 미백효과를 갖는 기능성 화장품일 수 있다. 상기 "기능성 화장품"은 화장품법에 정의된 바 특정효능과 효과가 강조된 화장품으로 피부의 미백에 도움을 주는 제품, 피부의 주름 개선에 도움을 주는 제품, 피부를 곱게 태워주거나 자외선으로부터 피부를 보호하는데 도움을 주는 제품으로 한정된다.

본 발명에 따른 화장품은 인체에 적용시 피부 미백의 효과를 나타내는 것이 확인되었으므로, 기능성 화장품에 속함이 자명하다.

상기 본 발명에 따른 화장품은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 또는 아이섀도로 제형화된 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태는 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물의 유효성분으로서 상기 레스베라트롤 트리글리콜레이트는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 염의 형태 및 제조방법은 화장품학적으로 허용 가능한 염에 대해 기술된 바와 동일하다.

본 발명의 약학 조성물은 상기 유효성분을 전체 조성물에 대하여 0.001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량 %, 보다 바람직하게는 0.1 내지 10 중량%로 포함할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 용어 "약학적으로 허용 가능한"이란 상기 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다. 상기 담체는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제, 기제, 부형제, 윤활제 등 당업계에 공지된 것이라면 제한없이 사용할 수 있다. 또한 본 발명의 약학조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 나아가, 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태의 피부 외용제의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 통초 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태는 상기 피부 미백용 약학 조성물을 포함하는 피부 외용제를 제공한다.

본 발명의 용어 "피부 외용제"는 일반적으로 피부 외용에 사용하는 물질 전반을 포함하는 포괄하는 개념으로, 상기 약학 조성물을 포함하는 제형의 비제한적인 예로는 경고제(PLASTERS), 로션제(LPTIONS), 리니멘트제(LINIMENTS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 캅셀제(CAPSULES), 크림제(CREAMS), 연질, 경질 젤라틴 캅셀, 첩부제, 또는 서방화제제가 있다.

본 발명에 따른 피부 외용제는 상용되는 무기 또는 유기의 담체, 부형제 및 희석제를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 제제화된 비경구 투여제일 수 있다. 상기 비경구 투여를 위한 제재로는 점적제, 연고, 로션, 겔, 크림, 패취, 스프레이, 현탁제 및 유제로 이루어진 군에서 선택되는 경피 투여형 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 외용제에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

각 제형에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기한 본 발명의 조성물 이외의 다른 성분들을 기타 피부 외용제의 제형 또는 사용 목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 이 경우 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승효과가 일어날 수 있다.

또한, 본 발명에 의한 조성물이 약학 조성물로 사용될 경우에, 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제 등의 약학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있다.

유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다.

일반적으로 유효성분의 투여량은 0.001 ㎍/kg/일 내지 대략 2000 ㎍/kg/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 0.5 ㎍/kg/일 내지 2.5 ㎍/kg/일이다. 외용투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.

본 발명의 조성물을 개체의 피부에 도포하는 경우, 피부에서 색소침착을 예방 또는 개선하거나 색소침착으로 인한 증상을 교정 또는 회복시키는 방법을 제공한다. 상기 색소침착으로 인한 증상은 기미, 주근깨, 지루각화증(노인성 흑자, 검버섯) 및 염증이나 자극 후 과색소침착 등을 포함한다.

본 발명에서, 용어 "개체"는 상기한 바와 같이 피부에 색소침착이 발생하였거나 발생할 수 있는 또는 상기 색소침착으로 인한 증상이 발현되었거나 발현될 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미하고, 본 발명의 약학적 조성물을 개체에게 도포함으로써 효과적으로 상기 피부에서 색소침착을 예방 또는 개선하거나 색소침착으로 인한 증상을 교정 또는 회복시킬 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 기존의 피부 미백용 약학 조성물과 병행하여 사용될 수 있다.

본 발명에서, 용어 "도포"는 어떠한 적절한 방법으로 개체의 피부에 본 발명에 따른 조성물을 접촉시키는 모든 방법을 의미하며, 이를 통해 해당 조성물을 피부 내부로 흡수시키는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 또 다른 양태는 하기 화학식 1로 표시되는 피부 미백효과를 갖는 화합물을 제공한다.

[화학식 1]

상기 화학식 1로 표시되는 피부 미백효과를 갖는 화합물은 레스베라트릴 트리글리콜레이트로서 에스테르화(esterification) 반응에 의해 제조될 수 있다.

본 발명에서 용어, "에스테르화(esterification) 반응"은 예컨대, 카르복시산(RCOOH)을 알콜(R'OH)과 산 촉매하에서 가열하면서 반응시켜 에스테르(RCOOR')와 물(H₂O)을 생성하는 반응이다. 상기 산 촉매로는 농축황산, 염산 또는 p-톨루엔황산(p-toluenesulfonic acids) 등이 사용될 수 있으며, 건조 염화수소 기체가 사용되기도 하나 이에 제한되지 않는다. 보통 에스테르화 반응은 느리고 가역적이므로 또 다른 생성물인 물을 지속적으로 제거하면서 반응시켜 역반응을 억제함으로써 수율을 높일 수 있다. 또는 반응물인 알콜이나 카르복시산에 비해 생성물인 에스테르의 끓는 점이 낮은 경우에는 증류에 의해 생성물을 수집하면서 반응을 지속하는 방법을 이용할 수 있다. 상기 에스테르화 반응은 당업계에 공지된 방법을 제한 없이 이용하여 수행할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서 레스베라트릴 트리글리콜레이트는 L-티로신 자극된 HEMs의 멜라닌 레벨을 감소시킴을 확인하였다. 또한, L-티로신 자극된 HEMs의 TYR(Tyrosinase), TYRP1(tyrosinase-related protein 1) 및 DCT(L-3,4-dihydroxyphenylalanie chrome tautomerase)의 mRNA 레벨 및 단백질 발현을 억제하고, L-티로신 단독 처리에 의해 증가된 MITF(microphthalmia-associated transcription factor)의 mRNA 레벨과 단백질 발현량을 감소시킴을 확인하였다.

본 발명의 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate)는 멜라닌 생성을 억제하고, 멜라닌 생성관련 유전자의 발현을 억제하므로, 피부 미백용 화장료 및 약학 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate, RTG), 글리콜산(glycolic acid, GA) 및 레스베라트릴 트리아세테이트(resveratryl triacetate, RTA)의 화학적 구조를 나타낸 도면이다.
도 2는 HEMs에서 세포 생존에 대한 알부틴, 레스베라트롤, 레스베라트릴 트리글리콜레이트, GA 및 RTA의 효과를 나타낸 도면이다. 세포를 상기 5개의 화합물을 지정된 농도로 48시간 처리하였다. 데이터는 컨트롤에 대한 퍼센트로 나타내었다(mean ±SE, n=3).
도 3은 HEMs에서 멜라닌 합성에 대한 알부틴, 레스베라트롤, 레스베라트릴 트리글리콜레이트, GA 및 RTA의 효과를 나타낸 도면이다. 세포 내 또는 세포 외의 멜라닌양의 값을 총 단백질 함량에 대해 표준화하였다. 데이터를 vehicle 컨트롤의 퍼센트로서 나타내었다(mean ± SE, n = 3). # p < 0.05 vs. control. * p < 0.05 vs. L-tyrosine 단독처리.
도 4는 HEMs에서 멜라닌 생산 효소의 mRNA의 발현에 대한 알부틴, 레스베라트롤, 레스베라트릴 트리글리콜레이트, GA 및 RTA의 효과를 나타낸 도면이다. HEMs에 상기 화합물을 지정된 농도로 60분간 전처리한 다음, 4.0 mM의 L-tyrosine을 첨가하여 48시간 동안 자극하였다. 총 세포 내의 mRNA를 qPCR 분석에 적용하였다. 상기 TYR, TYRP1, 및 DCT의 mRNA 발현량을 GAPDH의 mRNA 양(level)으로 표준화하였다. 데이터를 vehicle 컨트롤의 퍼센트로서 나타내었다(mean ± SE, n = 3). # p < 0.05 vs. control. * p < 0.05 vs. L-tyrosine 단독처리.
도 5는 HEMs에서 멜라닌 생산 효소 발현에 대한 알부틴, 레스베라트롤, 레스베라트릴 트리글리콜레이트, GA 및 RTA의 효과를 나타낸 도면이다. HEMs에 상기 화합물을 지정된 농도로 60분간 전처리한 다음, 4.0 mM의 L-tyrosine을 첨가하여 48시간 동안 자극하였다. 총 세포 용해물(whole cell lysate)을 웨스턴 블롯 분석에 적용하였다. TYR, TYRP1 및 DCT의 단백질 발현량을 GAPDH 단백질 발현량으로 표준화하였다. 데이터를 vehicle 컨트롤의 퍼센트로서 나타내었다(mean ± SE, n = 3). # p < 0.05 vs. control. *p < 0.05 vs. L-tyrosine 단독처리.
도 6은 HEMs에서 MITF의 mRNA 및 단백질 발현에 대한 알부틴, 레스베라트롤, 레스베라트릴 트리글리콜레이트, GA 및 RTA의 효과를 나타낸 도면이다. HEMs에 상기 화합물을 지정된 농도로 60분간 전처리한 다음, 4.0 mM의 L-tyrosine을 첨가하여 48시간 동안 자극하였다. 총 세포 용해물(whole cell lysate)을 qRT-PCR 분석에 적용하였다. MITF의 발현량을 GAPDH 발현량으로 표준화하였다. 데이터를 vehicle 컨트롤의 퍼센트로서 나타내었다(mean ± SE, n = 3). # p < 0.05 vs. control. *p < 0.05 vs. L-tyrosine 단독처리.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 레스베라트릴 트리글리콜레이트 ( resveratryl triglycolate , RTG )의 합성

테트라하이드로피란(Tetrahydropyran, THP)-프로텍티드(protected) 글리콜산 (glycolic acid, GA)을 참고문헌(Costin GE, Faseb J 2007, 21:976-94)에 나타낸 절차에 따라 합성하였다. 레스베라트롤과 THP-프로텍티드(protected) GA의 에스테르화(esterification)는 탈수 시약(dehydration agent)으로서 EDC (1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide), 및 촉매제로서 DMAP (4-dimethylaminopyridine)를 사용하여, (E)-5-(4-(2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)acetoxy)styryl)-1,3-phenylene bis(2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)acetate)를 생산하였다. 상기 생성된 산물을 디옥산(dioxane)에 녹이고, 2N-HCl-에테르(ether)와 혼합하여 흰색 고체의 레스베라트릴 트리글리콜레이트를 제조하였다. 모든 단계를 ¹H 및 ¹³C NMR spectroscopy 및 mass spectrometry로 확인하였으며, 레스베라트릴 트리글리콜레이트는 하기와 같은 특성을 갖는 무정형의 파우더를 나타냄을 확인하였다. 이와 같은 특성을 표 1에 나타내었다.

UV (EtOH) λ_max (log ε), 294 (4.24) nm; ESIMS (positive mode) m/z425 [M + Na]⁺, 403 [M + H]⁺, 345 [M - C2H2O2 + H]⁺, 287 [M - C4H4O4 + H]⁺, (negative mode) m/z 401 [M - H]^-, 344 [M - C2H2O2 - H]^-, 285 [M - C4H4O4 - H]^-; 1H-NMR (700 MHz, DMSO-d6) 및 13C-NMR (175 MHz, DMSO-d6)

레스베라트릴 트리글리콜레이트의 화학적 동정을 MS 및 NMR 데이터를 바탕으로 입증하였다. 그 결과, 레스베라트릴 트리글리콜레이트는 분자식 C₂₀H₁₈O₉에 상응하는 포지티브 모드 ESI-MS의 m/z 403에서 [M+H]⁺ 이온 피크를 나타내었다. 상기 ¹H 및 ¹³C-NMR 스펙트라 데이터로부터, ρ-치환된 벤젠 유닛에 할당할 수 있는 오르트-연결된 아로마틱 프로톤(ortho-coupled aromatic protons assignable to a ρ-substituted benzene unit)[δH 7.66 (2H, d, J = 9.1 Hz, H-2', 6') 및 δC 127.5 (C-2', 6'); δH 7.18 (2H, d, J = 9.1 Hz, H-3', 5') 및 δC 121.7 (C-3', 5')], 1,3,5-삼치환된 벤질 모이에티의 3개의 메타-연결된 아로마틱 프로톤(three meta-coupled aromatic protons on a 1,3,5-trisubstituted benzyl moiety)[δH 7.33 (2H, d, J = 1.4 Hz, H-2, 6) 및 δC 116.8 (C-2, 6); δH 6.95 (1H, t, J=1.4 Hz, H-4) and δC 114.4 (C-4)], 트렌스 올레핀 더블벤드의 한 쌍(one pair of trans olefinic double bonds)[δH 7.36 (1H, d, J = 16.1 Hz, H-8) 및 δC 129.3 (C-8); δH 7.25 (1H, d, J = 16.1 Hz, H-7) 및 δC 126.4 (C-7)], 및 GA 모이에티의 3 세트(three sets of GA moieties)[δH 4.33 (4H, d, J = 6.3 Hz, H-2'', 2''') 및 5.64 (2H, d, J = 6.3 Hz, OH-2'', 2'''), δC 171.0 (C-1'', 1''') 및 59.35 (C-2'', 2'''); δH 4.31 (2H, d, J = 6.3 Hz, H- 2'''') 및 5.60 (1H, d, J = 6.3 Hz, OH-2''''), δC 171.2 (C-1'''') 및 59.37 (C-2'''')]

모든 프로톤화된 탄소를 헤테로뉴클레어 단일 양자 결맞음(heteronuclear single quantum coherence, HSQC) 스펙트럼의 분석을 통해 확인하였다. 이러한 결과로부터 상기 화합물이 3개의 GA 그룹(GA group)을 갖는 레스베라트롤 골격을 갖음을 추측할 수 있다. 또한, 이러한 GA 그룹의 위치는 관찰된 heteronuclear multiple bond correlation (HMBC)에 의해 확인되었다. H-3'/5' (δH 7.18) 에서 C-1'''' (δC 171.2), H-4 (δH 6.95) 에서 C-1'' 및 1''' (δC 171.0), 및 H-2/6(δH 7.33) 에서 C1 및 1''' (δC 171.0). 이러한 상관관계는 각각 C-3, 5 및 4'의 3개의 GA 그룹을 나타낸다. 따라서 상기 화합물의 구조는 3,5,4'-triglycolate-trans-stilbene 또는 레스베라트릴 트리글리콜레이트임을 알 수 있다.

실시예 2: 레스베라트릴 트리글리콜레이트의 세포독성 평가

실시예 2-1. 세포 배양

신생아 사람 포피(neonatal human foreskins) 유래의 사람 상피 멜라노사이트(Human epidermal melanocytes, HEM)를 Cascade Biologics(Portland, OR, USA)로부터 구입하였다. HEMs는 사람 멜라노사이트 성장 보충제(human melanocyte growth supplements, Cascade Biologics) 및 항생제가 보충된 배지 254에서 배양하였다.

실시예 2-2. 분석 방법

레스베라트릴 트리글리콜레이트에 대한 세포독성을 평가하기 위해, 실시예 2-1에서 제조한 레스베라트릴 트리글리콜레이트를 사용하였고, 대조군 또는 비교 대조군으로서 알부틴(arbutin), 레스베라트롤, 글리콜산(glycolic acid, GA) 및 레스베라트릴 트리아세테이트(resveratryl triacetate, RTA)를 사용하여(도 1), 트리판 블루 배제법(trypan blue exclusion assay)을 통해 세포 독성을 분석하였다.

먼저, 알부틴, 레스베라트롤, 레스베라트릴 트리글리콜레이트, GA 및 RTA를 3 내지 1000 μM 범위의 농도로 HEMs에 처리한 후, 상기 세포를 트립신 처리에 의해 플레이트로부터 떼어내어, 1200 X g로 30분간 원심분리하였다. 상기 세포를 배양배지에 현탁하고, 0.1% 트리판 블루 용액(Sigma-Aldrich)과 1:1의 비율로 혼합하였다. 상기 염색된 사멸한 세포 수와, 염색되지 않은 살아있는 세포 수를 혈구 계산기(hemocytometer)를 이용하여 3번 카운팅하였다.

실시예 2-3. 세포독성 평가

레스베라트릴 트리글리콜레이트에 대한 세포 독성을 평가한 결과, 도 2에서 나타내는 바와 같이, HEMs에 대해, 레스베라트롤, 레스베라트릴 트리글리콜레이트 및 RTA은 동일한 레벨의 독성을 나타냈으며, 30 μM까지는 거의 독성을 나타내지 않았고, 30 μM 이상에서는 농도가 높아질수록 독성을 나타냄을 알 수 있었다. 알부틴과 GA는 1000 μM까지의 농도에서도 세포독성을 나타내지 않았다,

실시예 3: 레스베라트릴 트리글리콜레이트의 멜라닌 생성 억제 효과

실시예 3-1: 방법

HEMs를 이용한 레스베라트릴 트리글리콜레이트의 멜라닌 생성에 미치는 영향을 검토하기 위해, 우선, 알부틴, 레스베라트롤, 레스베라트릴 트리글리콜레이트, GA 및 RTA를 HEMs에 3 및 10 μM의 농도로 60분간 전처리 한 다음, 4 mM L-티로신으로 48시간 동안 자극하였다. 세포 외 멜라닌 양은 490 nm의 파장에서 조건 배지(conditioned media)의 흡광도를 측정함으로써 평가하였고, 세포 내 멜라닌 양은 60℃에서 60분간 0.1M NaOH를 이용하여 세포로부터 멜라닌을 추출한 후에 평가하였다. 멜라닌 함량의 값을 각 샘플의 단백질 함량에 비교하여 표준화하였다. 단백질 함량은 Bio-Rad DC assay(Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA)를 이용하여 평가하였다.

실시예 3-2: 멜라닌 생성 억제 효과

HEMs 배양액에, 멜라닌 합성을 자극하는 L-티로신 4 mM을 첨가한 후, 레스베라트릴 트리글리콜레이트의 멜라닌 생성 억제 효과를 검토한 결과, 도 3에서 나타내는 바와 같이, HEMs의 세포 외 및 세포 내의 멜라닌 양은 L-티로신 처리에 의해 증가하였고, 이러한 증가는 레스베라트릴 트리글리콜레이트에 의해 감소됨을 알 수 있었다. 또한, 레스베라트롤 및 RTA에 의해서도 감소되었으나, 레스베라트릴 트리글리콜레이트 보다 크지 않았다. 알부틴 및 GA는 10 μM까지의 농도에서는 멜라닌 생성에 크게 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.

실시예 4: 레스베라트릴 트리글리콜레이트의 멜라닌 생성관련 효소의 mRNA 발현 억제 효과

실시예 4-1. qRT - PCR 분석

레스베라트릴 트리글리콜레이트가 L-티로신으로 자극한 HEMs에서의 멜라닌 생성 효소(melanogenic enzyme) 발현에 미치는 영향을 검토하기 위해, 우선, 세포 내의 총 mRNA를 추출하고, TYR, 티로시나아제-관련 단백질 1(Tyrosinase-related protein 1, TYRP1) 및 도파크롬 타우토메라제(Dopachrome tautomerase, DCT)의 mRNA 레벨을 qRT-PCR을 통해 분석하였다.

RNA 추출은 RNeasy kit(Qiagen, Valencia, CA, USA)를 이용하여 추출하였으며, High Capacity cDNA Archive Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)를 이용하여 역전사함으로써 1μg의 mRNA를 제조하였다. PCR은 SYBR® Green PCR Master Mix(Applied Biosystems), 60 ng의 cDNA 및 2 pmol의 유전자 특이적 프라이머 세트(Macrogen, Seoul)를 포함하는 반응혼합액(20 μL)에서 StepOnePlus™ Real-Time PCR 시스템(Applied Biosystems)을 이용하여 수행하였다. 상기 프라이머는 표 2에 나타내고 있으며, 티로시나아제(tyrosinase, GeneBank accession number; NM000372.3) 를 검출하기 위한, 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머, 티로시나아제 관련 단백질 1(tyrosinase-related protein 1, TYRP1, GeneBank accession number; NM000550.1) 를 검출하기 위한, 서열번호 3 및 서열번호 4의 프라이머, 도파크롬 타우토메라제(DOPA chrome tautomerase, DCT, GeneBank accession number; NM001922.3)를 검출하기 위한, 서열번호 5 및 서열번호 6의 프라이머를 사용하였다. 반응은 하기와 같은 방법으로 수행하였다. 50℃에서 2분의 초기 인큐베이션 단계, 95℃에서 10분의 DNA 중합효소 활성 단계, 95℃에서 15초의 변성 단계 및 어닐링 단계의 40 사이클, 및 60℃에서 1분의 신장 단계.

유전자	프라이머	서열	서열번호
tyrosinase	forward primer	5'-GATGAGTACATGGGAGGTCAGC-3'	1
tyrosinase	reverse primer	5'-GTACTCCTCCAATCGGCTACAG-3'	2
tyrosinase-related protein 1 (TYRP1)	forward primer	5'-GCTCCAGACAACCTGGGATA-3'	3
tyrosinase-related protein 1 (TYRP1)	reverse primer	5'-TCAGTGAGGAGAGGCTGGTT-3'	4
DOPA chrome tautomerase (DCT)	forward primer	5'-AGATTGCCTGTCTCTCCAGAAG-3'	5
DOPA chrome tautomerase (DCT)	reverse primer	5'-CTTGAGAATCCAGAGTCCCATC-3'	6

실시예 4-2. 멜라닌 생성관련 효소의 mRNA 발현 억제 효과

레스베라트릴 트리글리콜레이트가 멜라닌 생성 효소(melanogenic enzyme)의 mRNA 발현에 미치는 영향을 분석한 결과, 도 4에서 나타내는 바와 같이, 멜라닌 생성 효소인 티로시나아제, TYRP1 및 DCT의 mRNA 레벨은 L-티로신 처리에 의해 큰 폭으로 증가하였고, 이러한 증가는 레스베라트릴 트리글리콜레이트에 의해 크게 감소되었다. 또한, 레스베라트롤 및 RTA에 의해서도 감소되었으나, 그 값은 레스베라트릴 트리글리콜레이트 보다 작았다. 또한, 알부틴 및 GA는 10 μM까지의 농도에서는 멜라닌 생성 효소의 mRNA 발현에 영향을 미치지 않았다.

실시예 5: 레스베라트릴 트리글리콜레이트의 멜라닌 생성관련 효소의 단백질 발현에 미치는 영향

실시예 5-1. 웨스턴 블롯 분석

레스베라트릴 트리글리콜레이트가 멜라닌 생성 효소의 단백질 발현에 미치는 영향을 검토하기 위해, HEM 세포 용해물의 웨스턴 블로팅(Western blotting)을 수행하였다. 먼저, 세포를 1 mM 페닐메틸술포닐 플루오린화물(phenylmethylsulfonyl fluoride) 및 프로테아제 인히비터 칵테일(protease inhibitor cocktail, Roche, Mannheim, Germany)이 보충된 용해 완충액(lysis buffer, 10 mM Tris-Cl pH 7.2, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% 도데실황산나트륨(sodium dodecyl sulfate, SDS), 1% Triton X-100, 1% 디옥시콜레이트 (deoxycholate))에 용해시켰다. 용해물을 Laemmli 샘플버퍼(sample buffer)와 혼합한 후, 단백질을 95℃에서 5분간 가열하여 변성시켰다. 단백질을 10% 폴리아크릴아미드(polyacrylamide)가 포함된 겔에서 SDS-폴리아크릴아마이드 겔(polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)로 분리하였다. 전기영동에 의해 분리한 후, 단백질을 폴리비닐리덴 디플루오라이드 멤브레인(polyvinylidene difluoride membrane, Amersham Pharmacia, Little Chalfont, UK)으로 트렌스퍼하였다. 상기 멤브레인을 1차 항체를 포함하는 용액에서 4 ℃에서 밤새 인큐베이션하고, 계속해서 horseradish peroxidase(Cell Signaling, Danvers, MA, USA)가 결합된 2차 항체를 포함하는 용액에서 1시간 실온에서 인큐베이션하였다. 티로시나아제(tyrosinase), TYRP1, DCT, MITF 및 GAPDH의 1차 항체는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)로부터 구입하였다. 면역 반응성 밴드를 picoEPD Western Reagent kit (ELPIS-Biotech, Daejeon, Korea)를 이용하여 검출하였으며, 농도 분석을 NIH 이미지 프로그램을 이용하여 수행하였다.

실시예 5-2. 멜라닌 생성관련 효소의 단백질 발현 억제 효과

레스베라트릴 트리글리콜레이트의 멜라닌 생성관련 단백질 발현에 미치는 영향을 분석한 결과, 도 5에서 나타내는 바와 같이, 티로시나아제, TYRP1 및 DCT의 단백질 발현량은 L-티로신 처리에 의해 증가하였으나, 이러한 증가된 단백질 발현량은 레스베라트릴 트리글리콜레이트, RTA 및 레스베라트롤의 처리에 의해 감소되었다. 레스베라트릴 트리글리콜레이트가 가장 큰 감소 효과를 나타내었고, 레스베라트롤과 RTA도 티로시나아제, TYRP1 및 DCT의 단백질 발현을 저하시켰으나, 그 값은 레스베라트릴 트리글리콜레이트 보다 작았다. 또한, 알부틴 및 GA는 티로시나아제, TYRP1 및 DCT의 단백질 발현에 영향을 미치지 않았다.

또한, 레스베라트릴 트리글리콜레이트가 이러한 멜라닌 생성 효소를 조절하는 기전을 검토하기 위해, 작은 안구증 연관 전사인자(Microphthalmia-associated transcription factor, MITF)의 mRNA 또는 단백질 발현량이 레스베라트릴 트리글리콜레이트에 의해 영향을 받는지를 검토하였다. 그 결과, 도 6에서 나타내는 바와 같이, L-티로신 처리에 의해 MITF의 mRNA 및 단백질 발현량은 모두 증가하였으며, 이러한 증가는 레스베라트릴 트리글리콜레이트 처리에 의해 크게 감소하였고, 레스베라트롤 및 RTA에 의해서도 감소하였으나, 그 값은 레스베라트릴 트리글리콜레이트 보다 작았다. 알부틴 및 GA는 10 μM까지의 농도에서는 MITF의 발현에 영향을 미치지 않았다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

<110> Kyunpook National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Whitening cosmetic composition to the skin containing resveratryl triglycolate <130> KPA151217-KR <160> 6 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> tyrosinase-F primer <400> 1 gatgagtaca tgggaggtca gc 22 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> tyrosinase-R primer <400> 2 gtactcctcc aatcggctac ag 22 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TYRP1-F primer <400> 3 gctccagaca acctgggata 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TYRP1-R primer <400> 4 tcagtgagga gaggctggtt 20 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DCT-F primer <400> 5 agattgcctg tctctccaga ag 22 <210> 6 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DCT-R primer <400> 6 cttgagaatc cagagtccca tc 22

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate) 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
[화학식 1]
제1항에 있어서,
상기 유효성분은 0.01 내지 5중량%로 포함하는, 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 레스베라트릴 트리글리콜레이트(resveratryl triglycolate)는 멜라닌 생성을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함하는 것인, 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 물, 계면활성제, 보습제, 킬레이트제, 살균제, 산화방지제, 방부제, 색소 및 향료로 이루어지는 군으로부터 1종 이상 선택되는 첨가제를 더 포함하는 것인, 화장료 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 기재된 화장료 조성물을 포함하는 화장품.
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레스베라트릴 트리글리콜레이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 피부 외용제.
하기 화학식 1로 표시되는 피부 미백 효과를 갖는 화합물.
[화학식 1]
제11항에 있어서,
상기 화합물은 에스테르화(esterification) 반응에 의해 제조되는 것인 화합물.