KR102414390B1 - 꽃차 추출물을 함유하는 항산화, 미백 및 주름 개선을 위한 조성물 - Google Patents
꽃차 추출물을 함유하는 항산화, 미백 및 주름 개선을 위한 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 꽃차 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 꽃차 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 DPPH 및 ABTS 자유 라디칼 소거활성이 우수하여 항산화 효과가 있으며, 티로시나아제 저해활성 효과 및 DOPA 산화 저해활성을 가짐으로써 미백효과를 가질 뿐만 아니라 엘라스타아제 활성을 저해시킴으로써 주름 개선효과를 가진다. 또한 본 발명의 꽃차 추출물은 세포 독성 및 피부 부작용이 없어 화장료 조성물 및 식품 조성물에 안전하게 사용할 수 있다.
Description
본 발명은 꽃차 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 꽃차 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백 및 주름 개선을 위한 화장료 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부는 각질층을 포함하는 표피와 진피, 그리고 결합조직으로 구성되어 있는데, 그 중 각질층은 표피(epidermis)의 기저세포인 케라티노사이트(keratinocyte)의 분화과정을 통해 형성되는 죽은 세포층으로 구성되어 있고 인체를 외부환경의 영향으로부터 보호해주는 역할을 담당하고 있다. 이러한 피부에서의 노화의 원인에 대해서는 크게 두 가지로 연구되고 있는데, 하나는 "내적 노화"로서 연령의 증가에 따른 피부의 구성단위인 세포의 기능변화에 기인한 것이고, 다른 하나는 "외적 노화"로서 외부 환경 즉 자외선, 공해, 스트레스 등에 의한 것으로 나눌 수 있다.
피부의 세포는 생체 내에서 필요한 에너지 공급을 위해 인간의 생체 내에서 필요한 에너지 공급을 위해 끊임없이 일어나는 생화학 반응에서 발생하는 활성산소종에 의해 산화적 스트레스가 가해지게 되면, 세포 구성 성분들인 지질, 단백질, 탄수화물과 DNA 산화적 손상 및 효소활성을 변화시켜 피부암 등의 각종 질병을 일으키는 원인이 되며, 노화를 촉진시킨다. 아울러 외적 노화의 원인 중에서 가장 큰 부분을 차지하고 있는 것은 자외선에 의한 광노화로서 UV에 지속적인 노출을 통해 피부암 등의 급성 및 만성적인 피부의 상해가 유발된다.
피부 진피층 기질을 이루는 중요한 성분의 하나인 콜라겐의 생합성과 분해는 피부 노화 억제에 핵심이 되고 있는데, 상기 활성산소종은 피부 섬유아세포에서 MMPs(matrix metalloproteinases)의 발현을 촉진하며, 자외선에 의한 콜라게나아제의 합성을 촉진시킴으로써 피부 노화를 유발한다.
또한, 엘라스틴(elastin) 섬유는 콜라겐과 가교 결합을 형성하며 피부 탄력에 관여하고 있는 주름 생성에 중요한 피부 구성성분이다. 엘라스틴 섬유의 결핍과 응집, 엘라스틴 분해 효소인 엘라스타아제(elastase)의 활성도의 현격한 증가는 피부 주름생성 요인 중의 하나로 밝혀지고 있다. 엘라스타아제는 엘라스틴을 분해할 수 있는 유일한 효소로서 이에 대한 저해는 피부 주름 개선을 근본적으로 줄여줄 수 있다고 알려져 있다.
한편, 사람의 피부색은 피부 내부의 멜라닌(melanin) 농도와 분포에 따라 결정되는데, 유전적인 요인 외에도, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 피부 표피층에 있는 멜라노사이트에서 합성되는데, 멜라노사이트 내 소기관인 멜라노좀(melanosome)에서 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나아제(tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA), 도파퀴논(dopaquinone)으로 바뀐 후 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 이와 같은 멜라닌의 합성이 피부 내에서 과도하게 일어나면, 피부 톤을 어둡게 하고, 기미, 주근깨 등을 발생시킨다. 따라서, 피부 내의 티로시나아제 활성을 저해하여 멜라닌 색소의 합성을 저해시키면, 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라 자외선, 호르몬 및 유전적인 원인에 기인하여 발생하는 기미, 주근깨 등의 피부 과색소 침착증을 개선시킬 수 있다.
따라서, 화장품 분야에서는 항산화, 미백 및 주름 개선효과를 가지는 기능성 화장품에 대한 연구 및 개발이 활발하게 진행되고 있으며, 특히 피부에 독성이나 자극을 주지 않기 위하여 천연 물질을 이용한 연구가 계속되고 있다.
이에 본 발명자들은 항산화, 미백효과 및 주름개선 효과를 가지면서 인체 부작용이 적은 새로운 천연물질을 개발하기 위해 계속 연구를 진행한 결과, 산수유꽃, 매화꽃, 찔레꽃과 같은 꽃차 추출물이 세포 독성이 없으면서도 항산화, 미백효과뿐만 아니라 주름 개선효과를 나타낸다는 사실을 발견함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명에서 해결하고자 하는 기술적 과제는 항산화, 미백효과 및 주름개선 효과를 가지면서 인체 안정성이 우수한 물질을 제공하기 위한 것이다.
상기한 기술적 과제를 해결하기 위하여, 본 발명에서는 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 꽃차 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화, 미백 및 주름 개선을 위한 조성물을 제공한다.
바람직하게, 본 발명에서 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 꽃차 추출물을 포함하는 조성물은 화장료 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다.
본 발명의 용어 "추출물(extract)"은 생약을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다.
본 발명의 꽃차 추출물은 당업계에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 실시양태에 따르면, 꽃차 추출물은 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃을 분쇄한 후 추출용매, 예컨대 물, 탄소수 1~3개의 무수 또는 함수 저급 알콜 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 용매를 추출용매로 사용하여 추출할 수 있으며, 상기 추출 용매의 양은 생약 건조 중량의 2 내지 20 중량배, 바람직하게는 5 내지 15 중량배로 할 수 있다.
본 발명에서 사용하는 산수유꽃은 쌍떡잎식물 산형화목 층층나무과의 산수유나무에서 피는 꽃이고, 매화꽃은 매실나무의 꽃으로 매화라고도 불리며, 찔레꽃은 산과 들의 기슭과 계곡에서 흔히 볼 수 있는 낙엽활엽관목으로 꽃은 백색 또는 연홍색을 띈다.
본 발명에서 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃의 사용부위는 잎, 꽃, 뿌리, 종자 모두 사용가능하나, 바람직한 일 양태로, 꽃을 사용하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 조성물에는 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 꽃차 추출물이 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 0.005 내지 50 중량%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 30 중량%, 가장 바람직하게는 0.1 내지 10 중량%로 포함할 수 있다. 이 때 꽃차 추출물의 함량이 0.005 중량% 미만일 경우 본 발명의 목적효과인 항산화, 미백 및 주름 개선효과를 수득할 수 없으며, 50 중량%를 초과할 경우 함량의 증가에 따라 효과가 비례적이지 않아 비효율적일 수 있으며 제형상의 안정성이 확보되지 않는 문제점이 있다.
본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 꽃차 추출물을 함유하는 조성물은 항산화 효과, 미백효과 및 주름 개선효과를 나타내며, 천연 물질로서 세포독성이 거의 없다.
본 발명의 하나의 실시양태에 따르면, 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 꽃차 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 산수유꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화를 위한 화장료 조성물로서, 이 때 산수유꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 산수유꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백을 위한 화장료 조성물로서, 이 때 산수유꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 산수유꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선을 위한 화장료 조성물로서, 이 때 산수유꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 100 내지 200 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 매화꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화를 위한 화장료 조성물로서, 이 때 매화꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 매화꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백을 위한 화장료 조성물로서, 이 때 매화꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 매화꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선을 위한 화장료 조성물로서, 이 때 매화꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 100 내지 200 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 찔레꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화를 위한 화장료 조성물로서, 이 때 찔레꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 찔레꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백을 위한 화장료 조성물로서, 이 때 찔레꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 찔레꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선을 위한 화장료 조성물로서, 이 때 찔레꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 하나의 실시양태에 따른 화장료 조성물에는 유효성분으로서의 꽃차 추출물 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 첨가되는 성분, 예컨대 항산화제, 안정화제, 가용화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 추가로 첨가할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤 또는 마사지 크림의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트 검, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 가용화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 검등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 하나의 실시양태에 따르면, 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 꽃차 추출물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 산수유꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화를 위한 식품 조성물로서, 이 때 산수유꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 산수유꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백을 위한 식품 조성물로서, 이 때 산수유꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 산수유꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선을 위한 식품 조성물로서, 이 때 산수유꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 100 내지 200 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 매화꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화를 위한 식품 조성물로서, 이 때 매화꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 매화꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백을 위한 식품 조성물로서, 이 때 매화꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 매화꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선을 위한 식품 조성물로서, 이 때 매화꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 100 내지 200 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 찔레꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화를 위한 식품 조성물로서, 이 때 찔레꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 찔레꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백을 위한 식품 조성물로서, 이 때 찔레꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
본 발명의 구체적인 하나의 실시양태에 따르면, 찔레꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선을 위한 식품 조성물로서, 이 때 찔레꽃 추출물의 농도는 바람직하게는 50 내지 800 ug/ml, 더욱 바람직하게는 400 내지 500 ug/ml의 범위이다.
또한, 본 발명의 하나의 실시양태에 따른 식품 조성물에는 유효성분으로서 꽃차 추출물뿐만 아니라 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 추가로 포함할 수 있다.
상기 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 꽃차 추출물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
한편, 본 발명의 꽃차 추출물은 천연물질로서 인체에 무해하며, 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 특히 상기한 바와 같은 화장료 및 식품 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.
이와 같이, 본 발명의 꽃차 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 DPPH 및 ABTS 자유 라디칼 소거활성이 우수하여 항산화 효과가 있으며, 티로시나아제 저해활성 효과 및 DOPA 산화 저해활성을 가짐으로써 미백효과를 가질 뿐만 아니라 엘라스타아제 활성을 저해시킴으로써 주름 개선효과를 가진다. 또한 본 발명의 꽃차 추출물은 세포 독성 및 피부 부작용이 없어 화장료 조성물 및 식품 조성물에 안전하게 사용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 DPPH 자유 라디칼 소거활성 측정결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 ABTS 라디칼 소거능을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 티로시나아제 저해활성 측정결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 DOPA 산화 저해 활성억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 엘라스타아제 저해활성 측정결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 ABTS 라디칼 소거능을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 티로시나아제 저해활성 측정결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 DOPA 산화 저해 활성억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 엘라스타아제 저해활성 측정결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
<실시예 1> 꽃차 추출물의 제조
산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃을 입수하여 세척하고 믹서를 이용하여 분쇄하였다. 70% 아세톤을 분쇄된 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃에 각각 5 중량배 양으로 첨가하여 40℃에서 24시간 동안 추출한 다음 여과지로 여과하여 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물을 각각 수득하였다.
<시험예 1> 항산화 효과 측정
(1) DPPH 자유 라디칼 소거활성 측정
전자공여능(EDA; electron donating ability)은 Blois의 방법(1958)에 따라 측정하였다. 각 시료용액 2 ml에 0.2 mM의 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) 1 ml 넣고 교반한 후 30분간 방치한 다음 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여 능은 시료용액의 첨가구와 무 첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다. 양성대조군으로 알부틴(Arbutine)을 사용하였다.
전자공여능 측정에 사용된 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl(DPPH)는 화학적으로 안정화된 free radical을 가지고 있는 물질로 유기용매에 매우 안정하며 515~520nm 부근에서 최대 흡광도를 가지는 보라색 화합물이다. 항산화활성이 있는 물질과 만나면 전자를 내어주면서 radical이 소멸되고 탈색이 되기 때문에 항산화 활성을 육안으로 쉽게 관찰할 수 있는 장점이 있어 다양한 소재로부터 항산화 물질을 검색하는데 많이 이용되고 있다. DPPH로 먼저 산화를 개시한 후 각 시료에 의해서 free radical에 대한 소거 활성 측정 능력을 흡광도로 확인하였다. 환원시키거나 상쇄시키는 능력이 크면 높은 라디칼에 대한 소거 활성을 기대할 수 있으며, 인체 내에서 free radical에 의한 노화를 억제하는 척도로도 이용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 DPPH 자유 라디칼 소거활성 측정결과를 나타낸 그래프이다. 여기에서 보듯이, DPPH 자유 라디칼 소거 효과는 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 모두 500 ug/ml에서 가장 우수한 항산화 효과를 나타내었다. 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물이 자유라디칼을 환원시키거나 상쇄시키는 능력을 수행하여 기능성화장품에 적용하였을 때 자유 라디칼에 의한 노화를 억제하는 역할을 수행할 수 있을 것이라 판단하였다.
(2) ABTS radical cation 소거능 측정
ABTS radical을 이용한 항산화력 측정은 ABTS+ cation decolorization assay 방법(Roberta, et al., 1999)에 의하여 측정하였다. 7 mM 2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)와 2.4 mM potassium persulfate를 혼합하여 실온인 암소에서 24시간 동안 방치하여 ABTS+을 형성시킨 후 ethanol로 희석하여 ABTS+ 100 ul에 시료 100 ul를 가하여 1분 동안 방치한 후 732 nm에서 흡광도를 측정하였다.
DPPH radical의 소거활성과 같이 일반적으로 많이 사용되는 ABTS radical cation 소거능은 2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt(ABTS)와 potassium persulfate와의 반응으로 ABTS+· radical이 생성되면 특유의 색인 청록색을 띄게 되는데, 시료를 첨가함에 따라 연한 녹색으로decolorization되는 것을 측정하는 방법이며, hydrogen-donating antioxidant와 chain breaking antioxidant 모두를 측정할 수 있다.
도 2는 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 ABTS 라디칼 소거능을 나타낸 그래프이다. 여기에서 보듯이, ABTS radical cation 소거능을 측정한 결과 500 ug/ml의 농도에서 모두 100%의 높은 활성을 나타내었다.
<시험예 2> 미백 활성 측정
(1) 티로시나아제(Tyrosinase) 저해활성 측정
멜라닌 생성에 있어서 핵심효소는 tyrosinase이다. 이 효소는 tyrosine으로부터 시작되는 멜라닌 생합성 과정 중 tyrosine에서 DOPA, DOPA에서 DOPA quinine, 그리고 DHI로부터 eumelanin으로의 전환을 촉매하는데 관여한다.
티로시나아제 저해 활성 측정은 dopachrome 방법을 이용하여 측정하였다. 반응구는 0.1 M phosphate buffer (pH 6.5) 110 ul에 11.5 mM L-tyrosine을 녹인 기질액 10 ul 및 시료용액 10 ul 의 혼합액에 mushroom tyrosinase (2,000U/mL) 10 ul 첨가하여 37℃에서 15 분간 반응시켜 490nm에서 측정하였다. 양성대조군으로 알부틴(Arbutine)을 사용하였다.
도 3은 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 티로시나아제 저해활성 측정결과를 나타낸 그래프이다. 여기에서 보듯이, 티로시나아제 저해활성은 500 ug/ml의 농도에서 찔레꽃 추출물이 가장 높았으며, 산수유꽃, 매화꽃 순으로 나타났다.
(2) DOPA 산화 저해활성 측정
DOPA 산화 저해 활성 측정은 Yagi 등의 방법에 따라 측정하였다. 반응구는 1/15M sodium phosphate buffer (pH 6.8) 0.5mL에 10mM L-DOPA을 녹인 기질액 0.2mL및 시료용액 0.1mL의 혼합액에 mushroom tyrosinase (110U/mL) 0.2mL 첨가하여 25℃에서 2분간 반응시켜 반응액 중에 생성된 DOPA chrome을 475nm에서 측정하였다. DOPA 산화 저해 활성 측정은 시료용액의 첨가구와 무 첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다. 양성대조군으로 알부틴(Arbutine)을 사용하였다.
도 4는 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 DOPA 산화 저해 활성억제 효과를 나타낸 그래프이다. 여기에서 보듯이, DOPA 산화 저해활성은 500 ug/ml의 농도에서 찔레꽃 추출물이 가장 높았으며, 매화꽃, 산수유꽃 순으로 나타났다.
<시험예 3> 주름개선 효과 측정
자외선 및 활성산소 등에 의해 유발되어 피부 진피층에 존재하는 matrix-metalloprotein ases (MMPs)는 피부노화, 특히 주름생성과 밀접한 관계가 있다. MMPs를 이루는 주요성분으로는 콜라게나아제(collagenase), 젤라티나아제(gelatinase) 및 엘라스타아제(elastase) 등이 있으며, 자외선과 같은 내ㅇ외적 스트레스로 인하여 탄력성, 윤택성이 감소하고 과다 발현된 엘라스타아제에 의하여 elastin의 그물망 구조가 깨지게 되면 피부가 처지고 주름이 생기므로 피부의 탄력감소 및 주름생성에 있어서 엘라스타아제의 활성 감소는 매우 중요하다.
엘라스타아제 저해활성 측정은 다음과 같이 측정하였다. 시료를 일정 농도가 되도록 조제하여 0.5 ml씩 시험관에 취하고, 50 mM tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 porcine pancreas elastase (2.5 Unit/ml)용액 0.5 ml을 가한 후 50 mM tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 기질 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide (0.5mg/ml)을 첨가하여 20분간 반응시켜 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 405 nm에서 측정하였다. Elastase 저해 활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다. 양성대조군으로 우르솔산(Ursolic acid, UA)을 사용하였다.
도 5는 본 발명의 산수유꽃, 매화꽃 및 찔레꽃 추출물의 엘라스타아제 저해활성 측정결과를 나타낸 그래프이다. 여기에서 보듯이, 엘라스타아제 저해활성은 산수유꽃 추출물은 100 ug/ml의 농도에서 가장 높았으며, 찔레꽃 추출물은 500 ug/ml의 농도에서 가장 높았다.
이와 같이, 본 발명의 꽃차 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 DPPH 및 ABTS 자유 라디칼 소거활성이 우수하여 항산화 효과가 있으며, 티로시나아제 저해활성 효과 및 DOPA 산화 저해활성을 가짐으로써 미백효과를 가질 뿐만 아니라 엘라스타아제 활성을 저해시킴으로써 주름 개선효과를 가진다. 또한 본 발명의 꽃차 추출물은 세포 독성 및 피부 부작용이 없어 화장료 조성물 및 식품 조성물에 안전하게 사용할 수 있다.
Claims (6)
- 산수유꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화, 미백 또는 주름 개선을 위한 화장료 조성물.
- 산수유꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화, 미백 또는 주름 개선을 위한 식품 조성물.
- 제 1 항에 있어서,
상기 산수유꽃 추출물이 조성물 총 중량을 기준으로 하여 0.005 내지 50 중량%의 양으로 포함된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 2 항에 있어서,
상기 산수유꽃 추출물이 조성물 총 중량을 기준으로 하여 0.005 내지 50 중량%의 양으로 포함된 것을 특징으로 하는 식품 조성물. - 찔레꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선을 위한 화장료 조성물.
- 찔레꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선을 위한 식품 조성물.
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