KR101693573B1

KR101693573B1 - 갱년기 증상의 예방 또는 치료 효과가 있는 약제학적 조성물 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR101693573B1
Application number: KR1020150064549A
Authority: KR
Inventors: 황덕상; 장준복; 류봉하; 김남재; 최혁재
Original assignee: 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2015-05-08
Filing date: 2015-05-08
Publication date: 2017-01-06
Also published as: KR20160131656A

Abstract

본 발명은 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 갈근 35 내지 75 중량부, 갈화 3 내지 15 중량부, 사원자 3 내지 15 중량부, 황금 0.1 내지 5 중량부, 황련 0.1 내지 5 중량부, 황백 0.1 내지 5 중량부, 치자 0.1 내지 5 중량부, 지모 0.1 내지 5 중량부 및 백하수오 5 내지 35 중량부를 포함하는 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물, 및 상기 약제학적 조성물의 최적 효과를 나타내기 위한 제조방법에 관한 것으로, 종래 한의학적으로 임상에서 오랫동안 사용되어왔던 한약들에 비해 갱년기 증상에 대한 예방 및 치료효과가 우수하여 폐경기 이후의 여성들에게 건강상의 문제를 유발할 수 있는 각종 질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있다.

Description

갱년기 증상의 예방 또는 치료 효과가 있는 약제학적 조성물 및 그 제조방법{A PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING CLIMACTERIC SYMPTOMS, AND METHOD OF PREPARING THE SAME}

갱년기는 일반적으로 생식 능력을 갖는 시기에서 생식능력이 사라지는 시기로 전환되는 시기를 의미한다. 상기 갱년기는 여성의 갱년기를 언급하는데 주로 쓰이고 있지만, 여성의 갱년기는 폐경기(menopause)만이 아닌 폐경주변기(perimenopause) 전후의 시기를 모두 포함하는 범위로 일반적으로 40~60세의 연령층에 해당한다. 여성 갱년기의 핵심이 되는 폐경으로 인한 변화는 노화에 의한 자연적인 현상으로 불규칙한 월경주기, 안면홍조, 상열감(화끈거리는 증상), 관절통, 심계항진(갑작스러운 두근거림)을 포함하는 심혈관계 질환, 비만, 고지혈증 및 당뇨를 포함한 대사성 질환 발생, 골밀도 감소, 요실금 및 분비물 감소를 포함한 비뇨생식기계의 변화 및 심리적 변화 등이 나타나게 된다.

의학의 발달과 경제성장으로 인한 평균수명의 연장으로 한국 여성의 2012년 평균 기대수명은 84.64세에 이르렀으며, 2003년 80.81세에 비해 약 3.5세 증가했다. 이러한 가운데, 한국여성의 평균 폐경 연령은 48세로 폐경 이후 평균 30여년 이상의 삶을 살게 되어, 갱년기 및 갱년기 이후의 삶이 과거에 길어지게 되었다. 정상적인 노화과정에서 나타나는 갱년기 증상은 우리나라 중년여성의 93%에서 증상의 발생빈도가 50% 이상으로 높게 나타나며 상당한 불편감을 경험하고 있는 것으로 보고되고 있어 증상은 삶의 질과도 관련된 문제로 주목받고 있다(송애리, 2005, “갱년기 여성의 폐경 관리와 관련된 건강요인에 대한 연구”, 여성건강간호학회지, 11(1):12-19). 최(2008) 등에 의해 이루어진 연구에서 갱년기 여성들의 갱년기 증상에 대한 대처는 ‘호르몬치료를 받는다’, ‘전문가 상담을 받는다’등이 나타났고, 예방적 대처는 ‘보약을 먹는다’, ‘비타민을 복용한다’와 같은 반응이 있었으나, 주류는 전문적 대체보다는 일반적인 대증적 대처 방법이나 대안적 대처 방법을 이용하고 있었으며 다른 연구진의 연구에서도 이와 비슷한 전문화된 대처가 부족한 것으로 나타났다

또한, 갱년기 증상의 치료는 일반적으로 에스트로겐 같은 여성호르몬의 직접 투약으로 이루어지는데, 에스트로겐의 체내 농도가 높아질 경우, 유방 세포의 분열 촉진으로 인해 오히려 유방암의 발생빈도가 높아지는 등의 부작용이 있기 때문에 가능한 한 여성호르몬과 효과는 유사하면서도 여성호르몬의 부작용 발생 위험이 적은 호르몬 대체요법(Hormone Replacement Therapy, HRT)의 후보물질을 천연물에서 발견하고자 하는 연구가 많이 이루어지고 있다.

대한민국 등록특허 제10-1486847호는 지황 및 갈근의 복합 추출물을 함유하는 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 조성물을 개시하고 있으나, 종래 약제에 비해 효과에 있어 우수한 점이 없거나 부작용이 존재하는 등 사용에 있어서 한계를 갖고 있다. 이에 소비자들은 부작용이 적으면서도 약효가 뛰어난 천연물 소재의 갱년기 증상 치료제에 더 많은 관심을 가지고 있으며, 이러한 요구에 부응하고자 안전하고 효능이 우수한 천연약제의 개발이 요망되고 있는 실정이다. 최근에는 이러한 약물들의 단점들과 부작용을 극복하고자 여러 성분들이 한꺼번에 들어있는 복합약물들이 출시되고 있으며, 위와 같은 이유들 때문에 오랜 임상경험을 바탕으로 축적되어온 한의학적 원리에 따는 처방을 현대 과학적인 실험을 통해서 보다 세련되게 개발된다면 보다 좋은 효능의 약물이 개발될 것으로 기대되고 있다.

현재 골다공증, 대사성 질환 등 여성의 갱년기 장애로 인해 발생할 수 있는 각종 질환의 치료효과를 위한 한약 기원의 조성물은 여러 차례 개발되었으나 본 개발의 조성물은 한방병원에서 수 천 사례에 이르는 임상에서의 치료 경험을 바탕으로 하여 가장 최적의 조합과 알코올을 포함한 추출방법의 변화에 따른 가장 효과적인 조성물 수득법을 병행하여 실제 임상에서의 치료 효과에 대한 가능성을 높인 조성물로서, 향후 치료제로서의 개발 성공 가능성이 훨씬 높다고 할 수 있다.

이에 본 발명자들은 상술한 이점을 가진 약물의 개발을 위해 예의 노력한 결과, 생약재인 갈근, 갈화, 사원자, 황금, 황련, 황백, 치자, 지모 및 백하수오가 갱년기 증상을 가진 마우스 실험 모델에서 갱년기 관련 지표를 효과적으로 개선할 수 있음을 확인하였다. 또한, 본 발명자들은 상기 갈근, 갈화, 사원자, 황금, 황련, 황백, 치자, 지모 및 백하수오의 배합을 조절하고 추출방법을 달리함으로써, 최적의 효과를 나타낼 수 있는 배합 및 추출방법을 확인함으로써, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

일 측면에 따르면,

갈근 35 내지 75 중량부, 갈화 3 내지 15 중량부, 사원자 3 내지 15 중량부, 황금 0.1 내지 5 중량부, 황련 0.1 내지 5 중량부, 황백 0.1 내지 5 중량부, 치자 0.1 내지 5 중량부, 지모 0.1 내지 5 중량부 및 백하수오 5 내지 35 중량부를 포함하는 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물이 개시된다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 상기 갈근, 갈화 및 사원자는 부탄올 추출물일 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 상기 상기 황금, 황련, 황백, 치자 및 백하수오는 에탄올 추출물 일수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 상기 갱년기 증상은 폐경기 및 인위적 폐경 및 질환에 의한 후유증을 포함하는 원인에 의한 것일 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 상기 갱년기 증상은 안면홍조, 상열감 및 심계항진을 포함하는 심혈관계 증상, 비만, 고지혈증 및 당뇨를 포함하는 대사성 질환, 관절통 및 골밀도 감소를 포함하는 근골격계 증상, 건망증 및 우울감을 포함하는 신경정신계 증상 및 불규칙한 월경주기, 요실금 및 분비물 감소를 포함한 비뇨생식기계 증상을 포함하는 갱년기 증상일 수 있다.

다른 측면에 따르면,

갈근 35 내지 75 중량부, 갈화 3 내지 15 중량부, 사원자 3 내지 15 중량부, 황금 0.1 내지 5 중량부, 황련 0.1 내지 5 중량부, 황백 0.1 내지 5 중량부, 치자 0.1 내지 5 중량부, 지모 0.1 내지 5 중량부 및 백하수오 5 내지 35 중량부를 포함하는 갱년기 증상의 예방 또는 개선용 식품 조성물이 개시된다.

본 발명에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 갈근, 갈화 및 사원자는 부탄올 추출물일 수 있다.

본 발명에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 황금, 황련, 황백, 치자, 지모 및 백하수오는 에탄올 추출물일 수 있다.

본 발명에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 갱년기 증상은 폐경기 및 인위적 폐경, 또는 질환에 의한 후유증을 포함하는 원인에 의한 것일 수 있다.

본 발명에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 식품은 식품첨가제, 기능성식품, 건강기능식품, 건강보조식품 또는 음료를 포함하는 것일 수 있다.

다른 측면에 따르면,

A) 갈근, 갈화 및 사원자 부탄올 추출물의 제조 단계;

B) 황금, 황련, 황백, 치자 및 지모 에탄올 추출물의 제조 단계;

C) 백하수오 에탄올 추출물의 제조 단계; 및

D) 상기 A) 단계 추출물, B) 단계 추출물 및 C) 단계 추출물을 2: 1: 1의 질량비로 혼합하는 단계를 포함하는, 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물의 제조방법이 개시된다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물의 제조 방법에 있어서, 상기 갈근, 갈화 및 사원자 부탄올 추출물의 제조 단계는:

a-1) 갈근, 갈화 및 사원자를 혼합하는 단계;

a-2) 상기 혼합물을 부탄올에 냉침하는 단계;

a-3) 상기 추출물을 여과 및 농축하는 단계; 및

a-4) 상기 농축 추출물을 동결건조하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물의 제조 방법에 있어서, 상기 황금, 황련, 황백, 치자 및 지모 에탄올 추출물의 제조 단계는:

b-1) 황금, 황련, 황백, 치자 및 지모를 혼합하는 단계;

b-2) 상기 혼합물을 에탄올에 환류 추출하는 단계;

b-3) 상기 추출물을 농축하는 단계; 및

b-4) 상기 농축 추출물을 동결건조하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물의 제조 방법에 있어서, 상기 백하수오 에탄올 추출물의 제조 단계는:

c-1) 백하수오를 에탄올에 환류 추출하는 단계;

c-2) 상기 추출물을 농축하는 단계; 및

c-3) 상기 농축 추출물을 동결건조하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 상기 약제학적 조성물의 투여 전에 비해 TG 수치를 약 10% 이상 감소시키는 효과 및 HDL 수치를 약 30% 이상 증가시키는 효과를 가질 수 있다 (실험예 2-4 참고).

본 발명에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 상기 약제학적 조성물의 투여 전에 비해 ALP 수치를 약 10% 이상 증가시키는 효과, 오스테오칼신 수치를 약 15% 이상 감소시키는 효과, 및 에스트라디올 수치를 약 35% 이상 증가시키는 효과를 가질 수 있다 (실험예 2-5 참고).

본 발명에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 상기 약제학적 조성물의 투여 전에 비해 골밀도(BMD) 수치 및 골미네랄 함량(BMC) 수치를 약 10% 이상 증가시키는 효과를 가질 수 있다 (실험예 2-6 참고).

도 1은 실험예 1-2에 따른 세포 증식 측정결과를 나타낸다.
도 2는 실험예 1-3에 따른 ALP 활성 측정 결과를 나타낸다.
도 3은 실험예 1-4에 따른 석회화능 측정 결과를 나타낸다.
도 4는 실험예 2-2에 따른 중량 변화 측정결과를 나타낸다.
도 5는 실험예 2-3에 따른 자궁 무게 측정 측정 결과를 나타낸다.
도 6은 실험예 2-4에 따른 혈중 지질 대사 지표 측정 결과를 나타낸다.
도 7은 실험예 2-5에 따른 혈중 뼈 생성 관련 단백질 및 호르몬 측정 결과를 나타낸다.
도 8은 실험예 2-6에 따른 골밀도 및 골미네랄 함량 측정 결과를 나타낸다.

본 명세서에 달리 정의되어 있지 않은 한, 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당업계에 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 같은 의미를 가진다. 본 명세서에 포함되는 용어를 포함하는 다양한 과학적 사건이 잘 알려져 있고, 당업계에서 이용 가능하다. 비록 본 명세서에 설명된 것과 유사 또는 등가인 임의의 방법 및 물질이 본원의 실행 또는 시험에 사용되는 것으로 발견되나, 몇몇 방법 및 물질이 설명되어 있다. 당업자가 사용하는 맥락에 따라, 다양하게 사용될 수 있기 때문에, 특정 방법, 프로토콜 및 시약으로 본 발명을 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 단수형은 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면 복수의 대상을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 달리 언급되지 않는 한, "또는"은 "및/또는"을 의미한다. 더욱이, 용어 "포함하는" 뿐만 아니라, 다른 형태, 예를 들어, "가지는",“이루어지는” 및 "구성되는"은 제한적이지 않다.

수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.본 명세서에 제공된 제목은 다양한 면 또는 전체적으로 명세서의 참조로서, 하기의 구현예를 제한하는 것으로 이해되어서는 안된다.

본 발명은 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물, 및 그 제조방법을 제공하고자 한다.

본 명세서에서 사용된 용어 “갱년기”는 일반적으로 생식 능력을 갖는 시기에서 생식능력이 사라지는 시기로 전환되는 시기를 의미한다. 상기 갱년기는 여성의 갱년기를 언급하는데 주로 쓰이고 있지만, 여성의 갱년기는 폐경기(menopause)만이 아닌 폐경주변기(perimenopause) 전후의 시기를 모두 포함하는 범위로 일반적으로 40~60세의 연령층에 해당한다. 본 발명에 따른 추출물이 효과를 나타내는 갱년기 증상은 안면홍조, 상열감 및 심계항진을 포함하는 심혈관계 증상, 비만, 고지혈증 및 당뇨를 포함한 대사성 질환, 관절통 및 골밀도 감소를 포함하는 근골격계 증상, 건망증 및 우울감을 포함하는 신경정신계 증상 및 불규칙한 월경주기, 요실금 및 분비물 감소를 포함한 비뇨생식기계 증상을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 일 구현예에서, 상기 갱년기 증상은 폐경기에 의한 것 일 수도 있다. 본 발명의 다른 구현예에서, 상기 갱년기 증상은 인위적 폐경으로 인한 것 일 수도 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 갱년기 증상은 질환에 의한 후유증으로 인한 것 일 수도 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 “치료”는 본 발명에 따른 조성물의 투여로 갱년기 증상을 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다. 본원이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 대한의학협회, 대한한의사협회 등에서 제시된 자료를 참조하여 갱년기 증상 또는 본원의 조성물이 효과가 있는 질환의 정확한 기준을 알고, 개선, 향상 및 치료된 정도를 판단할 수 있을 것이다.

본 명세서에서 사용된 용어 "예방"은 본 발명에 따른 조성물의 투여로 갱년기 증상 또는 이로 인한 다른 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 갱년기 증상에 치료효과가 있는 본 발명에 따른 조성물을 갱년기 증상의 초기 증상, 또는 나타나기 전에 복용할 경우 이러한 질환을 예방할 수 있다는 것은 당업자에게 자명할 것이다.

일 구현예에 따르면,

갈근 35 내지 75 중량부, 갈화 3 내지 15 중량부, 사원자 3 내지 15 중량부, 황금 0.1 내지 5 중량부, 황련 0.1 내지 5 중량부, 황백 0.1 내지 5 중량부, 치자 0.1 내지 5 중량부, 지모 0.1 내지 5 중량부 및 백하수오 5 내지 35 중량부를 포함하는 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물이 개시된다. 바람직하기는, 상기 약제학적 조성물은 갈근 40 내지 65 중량부, 갈화 5 내지 10 중량부, 사원자 5 내지 10 중량부, 황금 0.5 내지 3 중량부, 황련 0.5 내지 3 중량부, 황백 0.5 내지 3 중량부, 치자 0.5 내지 3 중량부, 지모 0.5 내지 3 중량부 및 백하수오 7 내지 30 중량부를 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 “갈근”은 칡(Pueraria thunbergiana Benth.)의 뿌리를 의미한다. 녹곽, 감갈, 분갈, 건갈로도 불리며, 한방에서는 갈근귤피탕, 갈근죽여탕, 갈근탕, 갈근해기탕 등에 재료로 쓰이고, 전분(starch), 다이드자인(daidzein), 다이드진(daidzin) 등의 성분을 포함하고 있다. 갈근에 대해 한방에서는 “性은 平하고 味는 甘·辛하다”고 알려져 있으며, 동의보감에서는 “양기(陽氣)를 끌어 올리고 기육(肌肉)에 진액을 보태어 풀어준다.”, “번조(煩躁; 가슴이 답답하고 팔다리를 요동하면서 편하게 있지 못하는 증상)한 것과 갈증을 제거한다.”, “독기와 고름을 배출시키고 설사를 멎게 하는 효능이 있다.”고 효능을 설명하고 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 “갈화”는 칡(Pueraria thunbergiana Benth.)의 꽃을 의미한다. 한방에서는 갈화산, 갈화해정탕, 갈황환, 인진해정탕, 가미갈화해성탕 등에 재료로 쓰이고, Puerarin-7-O-xyloside, 쿠주사포게놀(Kudzusapogenol) 등의 성분을 포함하고 있다. 갈화에 대해 한방에서는 “性은 平하고 味는 甘하다”고 알려져 있으며, 동의보감에서는 “술을 과하게 마셔 그 후유증으로 생긴 독(毒)을 풀어준다.”고 효능을 설명하고 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 “사원자”는 편경황기(Astragalus complanatus R. Br.)의 씨를 의미한다. 사원질려, 동질려 등으로도 불리며, 한방에서는 우슬환, 환기산, 오자익신양심환, 기위단, 가전양간환 등에 재료로 쓰이고, Quercetin-3-O-beta-D-rutinoside, 하몰(Harmol), 테레스트로사이드(Terrestroside), 트릴라린(Trillarin), 트릴린(Trillin), 아스파르트산(Aspartic acid), 테레스트리아마이드(Terrestriamide) 등의 성분을 포함하고 있다. 갈화에 대해 한방에서는 “性은 無毒하고 溫하며, 味는 甘하다”고 알려져 있으며, 동의보감에서는 “몸을 온전히 지켜서 지금의 상태를 유지하며, 간(肝)의 음액(陰液)을 보태어 눈을 밝게 한다.”고 효능을 설명하고 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "갈근, 갈화 및 사원자 추출물"은 갈근, 갈화 및 사원자를 추출하여 수득한 추출물을 의미한다. 구체적으로, 상기 갈근, 갈화 및 사원자 추출물은 갈근, 갈화 및 사원자를 물, C1-4 알코올 또는 이들의 혼합용매를 이용하고 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출의 방법을 이용하여 추출될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 갈근, 갈화 및 사원자 추출물은 천연, 잡종, 변종식물의 다양한 기관으로부터 추출될 수 있고, 예를 들면, 뿌리, 지상부, 줄기, 잎뿐만 아니라 식물 조직 배양물로부터 추출 가능하다. 본 발명의 일 실시예에서는 갈근, 갈화 및 사원자를 부탄올에 넣고 3일간 냉침한 후, 추출액을 여과 농축하여 사용하였다.

본 명세서에서 사용된 용어 “황금”은 꿀풀과의 다년생초본인 황금(Scutellaria baicalensis Georgi)을 의미한다. 뿌리를 약용으로 사용하며 한방에서는 가감이진탕, 갈근해기탕, 강활창출탕, 금궤당귀산 등에 재료로 쓰이고, 스테아르산(Stearic acid), 네오바이칼레인(Neobaicalein), 인돌(Indole), 벤조산(Benzoic acid) 등의 성분을 포함하고 있다. 황금에 대해 한방에서는 “性은 寒하고 無毒하며, 味는 苦하다”고 알려져 있으며, 동의보감에서는 “태기(胎氣)를 안정시키고, 지혈(止血) 효능이 있으며 열기를 식히고 습기를 말려 화열(火熱)과 열결(熱結)을 풀어 주면서 해독한다.”고 효능이 설명된다.

본 명세서에서 사용된 용어 “황련”은 미나리아재비과의 황련(Coptis japonica Makino)을 의미한다. 천련, 왕련, 지련, 아련, 미련으로도 불리우고, 한방에서는 노근음자, 녹운고, 작약금련갈근탕, 장씨화독단, 주사안신환, 황련법 등에 재료로 쓰이고 있다. 황련에 대해 한방에서는 “性은 寒하고 無毒하며, 味는 苦하다”고 알려져 있으며, 동의보감에서는 “살충(殺蟲)하고, 회충(蛔蟲)을 제거하며, 열기를 식히고 습기를 말리는 효능이 있어 혈분(血分)에 열(熱)이 성(盛)한 것을 치료하며, 심열(心熱)을 제거하여 열로 인해 가슴이 답답하고 불안한 것을 치료하며, 화열(火熱)과 열결(熱結)을 풀어 주면서 해독한다.”고 효능이 설명된다.

본 명세서에서 사용된 용어 “황백”은 황벽나무(Phellodendron amurense Rupr)의 껍질을 의미한다. 벽목, 벽피, 황벽으로도 불리우고 한방에서는 가감백출산, 가감백호탕, 당귀육황탕, 대금화환 등에 재료로 쓰이고, 메틸로나논(Methylnonanone), 키하다닌(Kihadanin), 펠라틴(Phellatin), 노리카리사이드(Noricariside) 등의 성분을 포함하고 있다. 황금에 대해 한방에서는 “性은 寒하고 無毒하며, 味는 苦하다”고 알려져 있으며, 동의보감에서는 “열기를 식히고 습기를 말리는 효능이 있어 신음(腎陰; 신장에 저장된 정기를 포함한 음액)이 휴손(虧損)되어 신화편항(腎火偏亢; 신장의 기운을 기화시키는 신화(腎火)만 왕성한 상태)한 것을 치료하며, 열로 인해 가슴이 답답하고 불안한 것을 치료하고, 화열(火熱)과 열결(熱結)을 풀어 주면서 해독한다.”고 효능이 설명된다.

본 명세서에서 사용된 용어 “치자”는 치자나무(Gardenia jasminoides)의 열매를 의미한다. 목단, 선지, 홍치자로도 불리우고, 한방에서는 가감시령탕, 가감온담탕, 갈근탕, 갈출탕, 보정탕, 보혈탕, 산치자산등에 재료로 쓰이고, 알파-크로신(crocin), 노나코산(nonacosane) 등의 성분을 포함하고 있다. 치자에 대해 한방에서는 “性은 寒하고 無毒 하며, 味는 苦하다”고 알려져 있으며, 동의보감에서는 “이뇨(利尿), 해독(解毒)하는 효능이 있고, 번조(煩躁; 가슴이 답답하고 팔다리를 요동하면서 편하지 있지 못하는 증상)한 것을 제거하며, 혈분(血分)의 열사(熱邪)를 제거하며 열기를 식히고 습기를 말리는 효능이 있다.”고 효능이 설명된다.

본 발명에서 사용된 용어 "황금, 황련, 황백, 및 치자 추출물"은 황금, 황련, 황백, 및 치자를 추출하여 수득한 추출물을 의미한다. 구체적으로, 상기 황금, 황련, 황백, 및 치자 추출물은 황금, 황련, 황백, 및 치자를 물, C1-4 알코올 또는 이들의 혼합용매를 이용하고 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출의 방법을 이용하여 추출될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 황금, 황련, 황백, 및 치자 추출물은 천연, 잡종, 변종식물의 다양한 기관으로부터 추출될 수 있고, 예를 들면, 뿌리, 지상부, 줄기, 잎뿐만 아니라 식물 조직 배양물로부터 추출 가능하다. 본 발명의 일 실시예에서는 황금, 황련, 황백, 및 치자를 에탄올로 2시간씩 2회 환류 추출하고, 추출액을 농축하여 사용하였다.

본 명세서에서 사용된 용어 “백하수오”는 박주가리과의 백하수오(Cynanchum wilfordii)의 덩이뿌리를 의미한다. 백수오, 새박, 은조롱, 큰조롱, 하수오로도 불리우고 한방에서는 각로오수건양단, 팔선반용교, 당귀백하오관중탕, 백하오부자이중탕 등에 재료로 쓰이고, 벤조피논(benzophenone), 윌포사이드(wilfoside), 레시틴(Lecithin) 등의 성분을 포함하고 있다. 백하수오에 대해 한방에서는 “性은 微溫하고 寒하며, 味는 苦甘澁, 苦澁, 苦鹹하다”고 알려져 있으며, 동의보감에서는 “자양(滋養), 강장(强壯) 효능이 있고, 허혈을 치료하고 안과 밖, 경락(經絡) 및 장부(臟腑) 사이에 머물러 있는 나쁜 기운을 제거하는 효과가 있으며, 정기를 빠지지 않게 하고, 신장을 보양하며, 머리와 수염을 검게 하고, 장(腸)을 적셔주며 대변을 통하게 한다.”고 효능이 설명된다.

본 발명에서 사용된 용어 "백하수오 추출물"은 백하수오를 추출하여 수득한 추출물을 의미한다. 구체적으로, 상기 백하수오 추출물은 백하수오를 물, C1-4 알코올 또는 이들의 혼합용매를 이용하고 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출의 방법을 이용하여 추출될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 백하수오 추출물은 천연, 잡종, 변종식물의 다양한 기관으로부터 추출될 수 있고, 예를 들면, 뿌리, 지상부, 줄기, 잎뿐만 아니라 식물 조직 배양물로부터 추출 가능하다. 본 발명의 일 실시예에서는 백하수오를 에탄올로 2시간씩 2회 환류 추출하고, 추출액을 농축하여 사용하였다.

상기 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약제학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 희석제, 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 용해제, 감미제, 착색제, 삼투압 조절제, 산화방지제 등의 부형제를 더 포함할 수 있다. 예를 들면,락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘, 스테아레이트 또는 광물유를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 투여 방법은 제형에 따라 용이하게 선택될 수 있으며, 다양한 경로로 투여될 수 있다. 예를 들면, 산제, 정제, 환제, 과립제, 당의정, 경질 또는 연질의 캡슐제, 액제, 에멀젼, 현탄액, 시럽제, 엘릭서, 외용제, 좌제, 멸균 주사용액 등의 형태로 제형화 되어 전신 또는 국소적으로 경구 또는 비경구 투여될 수 있으며, 특히 경구 투여가 바람직하다. 경구 투여를 위한 고형 제형에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제등이 포함되며, 이러한 고형 제형은 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 슈크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등과 혼합될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제형으로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 포함되며, 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제,보존제 등이 포함할 수 있다.비경구 투여를 위한 제형에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 약제학적조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), MackPublishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 바람직하게 제형화될 수 있다.

상기 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 갱년기 증상의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양할 수 있으나, 갈근, 갈화, 사원자, 황금, 황련, 황백, 치자, 지모 및 백하수오의 유효 투여량은 통상적으로 성인(60kg)의 경우, 약 1 내지 100 g/일, 특히 약 10 내지 50g/일, 더욱 바람직하게는 약 30g/일 수 있다. 상기 투여량은 여러 가지 조건에 따라 변동가능하기 때문에, 상기 투여량에 가감이 있을 수 있다는 사실은 당업자에게 자명하며, 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

상기 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 투여횟수는 원하는 범위 내에서 하루에 1회, 또는 수회로 나누어 투여할 수 있으며, 투여 기간도 특별히 한정되지 않는다. 또한, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 그대로 경구투여 하는 것 이외에, 임의의 음식물에 첨가하여 일상적으로 섭취할 수도 있다.

본 발명에 따른 갈근, 갈화, 사원자, 황금, 황련, 황백, 치자, 지모 및 백하수오를 포함하는 약제학적 조성물은 갱년기 증상에 대하여 우수한 치료 효과를 제공할 뿐만 아니라, 약물에 의한 독성 및 부작용도 없어 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다. 이에 따라, 상기 본 발명에 따른 갈근, 갈화, 사원자, 황금, 황련, 황백, 치자, 지모 및 백하수오는 식품의 주원료, 부원료 및 식품 첨가제로서 사용될 수 있다.

다른 구현예예에 따르면,

갈근 35 내지 75 중량부, 갈화 3 내지 15 중량부, 사원자 3 내지 15 중량부, 황금 0.1 내지 5 중량부, 황련 0.1 내지 5 중량부, 황백 0.1 내지 5 중량부, 치자 0.1 내지 5 중량부, 지모 0.1 내지 5 중량부 및 백하수오 5 내지 35 중량부를 포함하는 갱년기 증상의 예방 또는 개선용 식품 조성물이 개시된다. 바람직하기는, 상기 식품 조성물은 갈근 40 내지 65 중량부, 갈화 5 내지 10 중량부, 사원자 5 내지 10 중량부, 황금 0.5 내지 3 중량부, 황련 0.5 내지 3 중량부, 황백 0.5 내지 3 중량부, 치자 0.5 내지 3 중량부, 지모 0.5 내지 3 중량부 및 백하수오 7 내지 30 중량부를 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 “식품”은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성식품 및 음료를 모두 포함하는 의도이다.

본 명세서에서 사용된 용어 "기능성식품"은 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절 기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 특히 "건강기능식품"을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "건강보조식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 가공한 식품으로서, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나 식품원료에 들어있는 성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품을 말한다.

특히 본 발명에서 기능성식품 또는 건강보조식품은 상기 식품을 섭취하기 전과 비교하여 갱년기 증상 및 이로 인해 유발되는 불편감을 개선하거나, 이의 경감 또는 해소에 도움을 줄 수 있는 효과가 있는 식품을 의미하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 대한한의사협회, 대한의학사회 등에서 제시된 자료를 참조하여 이러한 질환의 정확한 기준을 알고, 개선된 정도를 판단할 수 있을 것이다.

상기 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 식품 조성물은 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 더욱 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 갈근, 갈화, 사원자, 황금, 황련, 황백, 치자, 지모 및 백하수오를 포함하는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예를 들면, 조제유류, 영유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예를 들면, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예를 들면, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예를 들면, 스넥류), 유가공품(예를 들면, 발효유, 치즈 등), 기타가공식품, 김치, 절임식품(예를 들면, 각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예를 들면, 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효 음료류 등), 천연조미료(예를 들면, 라면 스프 등)을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 “음료”는 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함한다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 본 발명에 따른 갈근, 갈화, 사원자, 황금, 황련, 황백, 치자, 지모 및 백하수오를 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기의 천연 탄수화물의 예로는 모노사카라이드, 예를 들면 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들면 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들면 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올을 포함할 수 있다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들면, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(예를 들면, 사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 5 내지 12g일 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 “기능성 음료”는 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절 기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미하며, 바람직하게는 대사 질환 증상, 예를 들면 갱년기 증상 개선을 위한 음료를 의미한다. 상기 기능성 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명에 따른 갈근, 갈화, 사원자, 황금, 황련, 황백, 치자, 지모 및 백하수오를 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예로는 모노사카라이드, 예를 들면 포도당, 과당등의 디사카라이드, 예를들면말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들면 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올을 포함할 수 있다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연향미제(예를 들면, 타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들면,레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성향미제(예를 들면, 사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물100㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 5 내지 12 g일 수 있다.

상기 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지 않지만, 본 발명에 따른 조성물 100 중량부 당 0.001 내지 20 중량부 범위에서 선택될 수 있다.

또 다른 구현예에 따르면,

A) 갈근, 갈화 및 사원자 부탄올 추출물의 제조 단계;

B) 황금, 황련, 황백, 치자 및 지모 에탄올 추출물의 제조 단계; 및

C) 백하수오 에탄올 추출물의 제조 단계를 포함하고,

상기 A) 단계 추출물, B) 단계 추출물 및 C) 단계 추출물은 2: 1: 1의 질량비로 혼합되는 것인, 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물의 제조방법이 개시된다.

상기 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 갈근, 갈화 및 사원자 부탄올 추출물의 제조 단계는:

a-1) 갈근, 갈화 및 사원자를 혼합하는 단계;

a-2) 상기 혼합물을 부탄올에 냉침하는 단계;

a-3) 상기 추출물을 여과 및 농축하는 단계; 및

상기 냉침하는 단계는 갈근, 갈화 및 사원자 추출물 600g당 부탄올 1L 내지 5L를 가해 1 내지 5일간 냉침할 수 있다.

상기 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 황금, 황련, 황백, 치자 및 지모 에탄올 추출물의 제조 단계는:

b-1) 황금, 황련, 황백, 치자 및 지모를 혼합하는 단계

b-2) 상기 혼합물을 에탄올에 환류 추출하는 단계;

b-3) 상기 추출물을 농축하는 단계; 및

상기 환류 추출하는 단계는 황금, 황련, 황백, 치자 및 지모 추출물 45g당 에탄올 500ml 내지 1L를 이용하여 50 내지 95℃의 온도에서 1시간 내지 3시간 동안 1 내지 5회 환류 추출할 수 있다.

상기 농축하는 단계는 감압농축 또는 원심분리를 포함할 수 있다.

상기 동결건조하는 단계는 -20 내지 -50℃에서 급속 동결 후 진공도 0.1 내지 0.5Torr, 온도 40 내지 90℃에서 건조시켜 수행될 수 있다.

상기 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 백하수오 추출물의 제조 단계는:

c-1) 백하수오를 에탄올에 환류 추출하는 단계;

c-2) 상기 추출물을 농축하는 단계; 및

c-3) 상기 농축 추출물을 동결건조 하는 단계를 포함할 수 있다.

상기 환류 추출하는 단계는 백하수오 150g당 에탄올 500ml 내지 1L를 이용하여 50 내지 95℃의 온도에서 1시간 내지 3시간 동안 1 내지 5회 환류 추출할 수 있다.

상기 동결건조 하는 단계는 -20 내지 -50℃에서 급속 동결 후 진공도 0.1 내지 0.5Torr, 온도 40 내지 90℃에서 건조시켜 수행될 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 TG 수치를 갱년기 이전 대비 130% 이내로 유지하는 효과를 가질 수 있다. 상기 용어 “TG”는 트리글리세라이드(TriGlyceride)를 의미한다. TG는 3분자의 지방산과 글리세롤의 에스테르로 트리글리세롤(triacylglycerol) 또는 중성 지방이라고도 한다. 지방 조직의 지방 성분에 주로 저장되며, 혈액중에도 10 내지 150 mg/dl씩 존재한다. TG의 상승은 동맥경화, 심장질환 등을 유발할 수 있으며 정상 수치 범위는 250 mg/dL 미만이다.

본 발명에 따르면, 상기 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 HDL 수치가 갱년기 이전 대비 100% 이상으로 유지되는 상기 용어 “HDL”은 고밀도 지질 단백질(High Density Lipoprotein)을 의미한다. 일반적으로 80 내지 100개의 단백질/입자로 구성되며 간 외부 조직으로부터 간으로의 콜레스테롤을 비롯한 지방 분자의 운반을 돕게 되며, HDL의 증가는 동맥경화증(atherosclerosis) 발생의 감소와 관련성이 있다는 연구결과가 존재한다.

본 발명에 따르면, 상기 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 ALP 수치를 갱년기 이전 대비 85% 이상으로 유지하는 효과를 가질 수 있다. 상기 용어 “ALP” 는 알칼리 인산분해효소(Alkaline phosphatase)를 의미한다. ALP는 간, 뼈, 신장, 장, 임신한 여성의 태반 등 전신의 조직에서 관찰되는 효소로 뼈의 ALP는 뼈 형성에 관여하는 ‘뼈모세포’(조골세포: osteoblast) 에 의해 생산되며, ALP의 증가는 간이 손상을 받았거나 뼈 세포의 활성도가 증가되는 상태임을 의미한다

본 발명에 따르면, 상기 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 에스트라디올 수치를 갱년기 이전 대비 70% 이상으로 유지하는 효과를 가질 수 있다. 상기 용어 “에스트라디올”은 여성 호르몬인 에스트로겐의 형태 중 하나를 의미한다. 에스트라디올(E2)외에 에스트로겐의 형태는 에스트론(E1) 및 에스트리올(E3)이 있으며, 에스트라디올은 난소에서 주로 생산되며, 부신에서도 일부 생산된다. 에스트라디올은 적절한 배란, 난자의 수정, 임신뿐 아니라 뼈 구조와 콜레스테롤 조절에 작용하는 것으로 알려져 있으며, 난소 기능을 평가하는데에도 적용된다.

본 발명에 따르면, 상기 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 골밀도(BMD) 수치 및 골미네랄 함량(BMC) 수치를 갱년기 이전 대비 90% 이상으로 유지하는 효과를 가질 수 있다. 상기 용어 “골밀도”(Bone Mineral Density; BMD)는 뼈 1cm²당 미네랄의 양을 의미한다. 젊은 건강한 성인을 기준으로 척추와 둔부의 골밀도를 측정한 수치로 계산한 T-점수가 -1.0 이상에서는 정상 골밀도라고 기준한다. 상기 T 점수는 환자의 골밀도를 같은 성별과 같은 인종의 건강한 젊은 성인의 평균 최고 골밀도와 비교하는 것을 의미한다.

이하, 발명의 이해를 돕기 위해 다양한 실시예를 제시한다. 하기 실시예는 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 발명의 보호범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예>

실시예 1. Sample 1의 제조

Sample 1은 하기의 방법으로 제조하였다:

- 추출물 a: 갈근, 갈화 및 사원자가 8: 1: 1 중량비로 구성된 한약재 600g에 aqueous butanol 3 L를 가해 3일간 냉침하였다. 이 추출액을 여과하여 농축한 후, 동결 건조하였다 (수율 3.7%).

- 추출물 b: 황련, 황금, 황백, 치자 및 지모가 1: 1: 1: 1: 1 중량비로 구성된 한약재 45g을 80% ethanol 700 mL로 2시간씩 2회 환류 추출하고, 추출액을 농축한 후 동결 건조하였다 (수율 24.4%).

- 추출물 c: 백하수오 150g을 50% ethanol 700 mL로 2시간씩 2회 환류 추출하고, 추출액을 농축한 후 동결 건조하였다 (수율 14.7%).

- 상기 추출물 a, b, c를 2: 1: 2의 중량비로 혼합하여 Sample I을 완성하였다.

실시예 2. Sample II의 제조

상기 추출물 a, b, c를 1: 2: 2의 중량비로 혼합한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 Sample II를 완성하였다.

실시예 3. Sample III의 제조

상기 추출물 a, b, c를 2: 1: 1의 중량비로 혼합한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 Sample III를 완성하였다.

<실험예 >

실험예 1. in vitro 실험

1-1. 세포의 준비

인간 뼈모세포(조골세포, osteoblast)인 MG-63 세포는 한국 세포주 은행에서 분양을 받았으며, DMEM 배지 (Gibco, U.S.A.)에 10% FBS (Gibco, U.S.A.)와 1% 페니실린- 스트렙토마이신 (Gibco, U.S.A.)을 첨가하여 37℃, 5 % CO₂농도의 배양기에서 배양하였다. 분화 유도를 위해 phenol-red free DMEM 배지에 1.5% charcoal- stripped FBS (cFBS), 10 mM-glycerophosphate, 50 ㎍/ml ascorbic acid를 첨가하여 분화유도 배지로 사용하였다.

1-2. 세포증식의 유도 측정

뼈모세포의 세포증식은 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)의 환원 정도를 측정하는 MTT assay 방법을 사용하여 측정하였다. 배양한 MG-63 세포를 96 well plate에 1 x 10⁴cells/well로 시딩(seeding)하여 24시간 배양한 후, 상기 실시예 1 내지 3에서 제조한 Sample I 내지 III 각 0.1, 0.5 및 1.0 ㎍/ml와 에스트라디올(estradiol; E2) 10-10M를 처리하였다. 48시간 배양한 후, 1 mg/ml의 MTT 용액 (sigma, U.S.A.)을 25 ㎕/ml씩 각각의 well에 첨가하고, 37℃, 5% CO₂농도의 incubator에서 4시간 더 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 DMSO (dimethyl sulfoxide)를 50 ㎕/ml씩 첨가하여 생성된 불용성의 formazan 결정을 용해시킨 뒤 ELISA reader로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1을 참고하면, 본 발명에 따른 Sample I 내지 III의 조골세포 증식 효과가 확인되었다. 특히, Sample I은 1㎍/ml 농도에서 대조군 대비 약 125%의 증식 효과 및 난포호르몬인 에스트라디올과 대등하거나 그 이상의 효과를 나타내었다.

1-3. ALP 의 활성 측정

알칼리 인산분해효소(Alkaline phosphatase; ALP)는 간, 뼈, 신장, 장, 임신한 여성의 태반 등 전신의 조직에서 관찰되는 효소로 뼈의 ALP는 뼈 형성에 관여하는 뼈모세포에 의해 생산된다. ALP의 활성을 측정해 뼈모세포의 활성을 측정하였다. 배양한 MG-63 세포는 6 well plate에 1 x 10⁵cells/well로 시딩 하였으며 24시간 배양한 후, 5% cFBS가 포함된 분화유도 배지로 교환하고 상기 실시예 1 내지 3에서 제조한 Sample I 내지 III 각 0.1, 0.5 및 1.0 ㎍/ml와 에스트라디올(estradiol; E2) 10^-10M를 처리하였다. 3일간 배양한 후, PBS로 2회 세척하고, 배양된 세포는 배지를 스크래퍼(scrapper)로 긁어 세포를 모은 후 파쇄(lysis) 하였다. 원심분리하여 상등액을 취하고 ALP kit (abcam, U.S.A.)를 사용하여 ALP 활성을 측정하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2를 참고하면, Sample I은 1㎍/ml 농도에서 대조군 대비 약 120%의 증식 효과 및 난포호르몬인 에스트라디올과 대등하거나 그 이상의 효과를 나타내었다.

1-4. 뼈 석회화 능력 측정

뼈는 고유의 지지기능과 보호기능을 위해 뼈모세포와 세포외기질에 칼슘등이 쌓이는 석회화(calcification)를 통한 무기질화(mineralization)가 일어나게 된다. 석회화 능력을 측정해 뼈모세포의 능력을 측정하였다. 배양한 MG-63 세포는 6 well plate에 1 x 10⁵cells/well로 시딩 하였으며 24시간 배양한 후, 1% cFBS가 포함된 분화유도 배지로 교환하고 실시예 1 내지 3에서 제조한 Sample I 내지 III 각 0.1, 0.5 및 1.0 ㎍/ml와 에스트라디올(estradiol; E2) 10-10M를 처리하였다. 12일간 배양한 후, 배지를 제거하고 증류수로 2회 세척한 뒤, 10% 포르말린으로 실온에서 20분간 고정시켰다. 40 mM alizarine red (AR) 용액으로 10분간 염색한 후 PBS로 2회 세척하고 현미경으로 nodule 형성을 확인하였다. 10% cetylpyridinium chloride (pH 7.0)용액으로 결정을 용해한 후 ELISA reader로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3을 참고하면, Sample I은 1㎍/ml 농도에서 대조군 대비 약 110%의 증식 효과 및 난포호르몬인 에스트라디올과 대등하거나 그 이상의 효과를 나타내었다.

실험예 2. in vivo 실험

2-1. 실험동물의 준비

9주령 된 C57BL/6 female mouse(중앙실험동물, 서울)을 사용하였으며, 온도 22±2℃, 습도 60±10%, 12시간 light-dark cycle의 통제된 사육실에서 식이와 식수는 자유롭게 섭취하도록 하였고, 반입 후 7일 동안 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 적응시킨 실험동물은 8마리씩 5군으로 나누어 본 발명에 따른 Sample I 및 E2의 공급을 12주간 시행하였다. 상기 5개 군은 다음과 같다:

- Sham: 복부를 절개한 후 난소를 적출하지 않고 다시 봉합

- OVX: 복부를 절개한 후 난소를 적출(Ovariectimized)

- 200mg/kg: OVX 후 Sample I을 200mg/kg의 농도로 경구 투여

- 400mg/kg: OVX 후 Sample I을 400mg/kg의 농도로 경구 투여

- E2: OVX 후 17β-Estradiol(E2)을 20ug/kg의 농도로 경구 피하주사

실험동물의 관리와 유지 및 모든 실험은 경희 의료원 실험동물윤리위원회의 승인 하에 실시되었다.

2-2. 식이섭취량 , 식이효율 및 체중의 측정

실험예 2-1에서와 같이 시술한 실험동물은 2주간의 회복기간을 거친 뒤 식이섭취량, 식이효율 및 체중을 측정하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4를 참고하면, 2주차 이후부터 난소 적출을 하지 않은 sham군에 비하여 난소 적출을 시행한 OVX군에서 몸무게가 유의적으로 증가하는 것을 관찰하였고 OVX군에서 최종 몸무게가 10% 증가하였다. 한편, Sample I을 각각 200mg/kg 및 400mg/kg을 투여한 경우, OVX군에 비하여 몸무게가 각각 3.9% 및 4.7% 유의하게 감소하는 결과를 나타내었다.

2-3. 자궁 중량 측정

12주째에 실험동물을 16시간 절식시킨 후 데시케이터(desiccator) 안에 diethyl ether를 적당히 취하여 마취시킨 뒤 멸균주사기를 이용하여 심장 채혈 후 자궁을 적출하여 생리식염수로 혈액을 제거한 후 흡수지로 물기를 제거하고 중량을 측정하였으며, 양측 넙다리뼈(대퇴골)을 적출하여 뼈에 붙어 있던 근육, 지방, 인대 같은 연조직을 제거하였다. 채취한 혈액은 실온에서 30분간 incubation한 뒤, 4℃에서 15분간 원심분리하여 상층액을 조심스럽게 분리한 다음 실험에 사용하였다. 자궁의 중량은 하기의 표 1 및 도 5에 나타내었다.

	Sham	OVX	200mg/kg	400mg/kg	E2
Uterus weight (mg)	72.3±6.9	10.0±1.6	15.0±2.1	16.9±1.2	187.3±9.2

표 1 및 도 5를 참고하면, 난소를 적출하기 않은 경우에 비해 난소 적출을 시행한 OVX의 경우 자궁의 무게가 약 14% 수준으로 감소하였으며, 본 발명에 따른 Sample I을 투여한 경우, OVX군에 비하여 약 50 % 이상의 개선 효과를 나타내었다. 특히, Sample I을 400mg/kg로 투여한 경우 약 69%의 개선 효과를 나타내었다.

2-4. 지질 대사 측정

상기 실험예 2-3에서 채취한 혈액의 TC(Total Cholesterol), TG, HDL에 대하여 assay kit (Asan assay kit, Korea)를 사용하여 혈액자동분석기로 (Prime, BPC biosed, Italy) 측정하였다. 그 결과를 하기의 표 2 및 도 6에 나타내었다.

	Sham	OVX	200mg/kg	400mg/kg	E2
TC (mg/dl)	75.5±3.1	77.7±5.5	80.7±4.0	83.2±4.8	85.2±5.2
TG (mg/dl)	77.0±5.0	111.0±6.6	100.7±7.6	87.4±5.8	70.5±2.2
HDL (mg/dl)	54.8±2.2	43.9±4.2	57.3±2.8	61.3±2.5	57.3±1.8

표 2 및 도 6을 참고하면, 혈중 TC의 농도는 난소의 적출 유무, Sample I 및 E2의 투여 유무에 따른 별다른 차이가 나타나지 않았다. 반면, 혈중 TG의 농도는 난소가 적출된 경우 난소가 적출되지 않은 경우에 비해 약 44% 이상 상승하였으나, 본 발명에 따른 Sample I을 400mg/kg 농도로 투여하는 경우 난소가 적출된 경우에 비해 약 69%의 개선 효과를 나타내었다. 또한, HDL의 농도는 난소를 적출한 경우 약 20% 감소하였으나, 본 발명에 따른 Sample I을 200mg/kg 및 400mg/kg 농도로 투여하는 경우 난소를 적출한 경우에 비해 각각 30.5% 및 39.6% 증가함으로써, E2를 투여하는 경우와 유사하거나 더욱 우수한 효과를 나타내었다.

2-5. 뼈 생성 관련 단백질 및 호르몬 측정

실험예 2-3에서 채취한 혈액의 ALP(Alkaline phosphatase), Osteocalcin, 에스트라디올(Estradiol)은 각기 ALP (Takara, Japnan), osteocalcin (Abcam, IK) , 17β-Estradiol (Acyman, USA) ELISA kit를 사용하여 측정하였으며 그 결과를 하기의 표 3 및 도 7에 나타내었다

	Sham	OVX	200mg/kg	400mg/kg	E2
ALP (U/mL)	12.1±0.5	9.9±0.6	10.8±0.6	11.7±0.5	21.4±1.2
Osteocalcin (ng/ml)	12.6±0.4	15.1±0.6	12.7±0.7	12.7±0.6	10.4±0.7
Estradiol (pg/mL)	13.3±1.3	6.9±1.1	9.6±2.5	11.8±0.5	24.3±3.9

표 3 및 도 7을 참고하면, 뼈의 생성과 관련된 혈중 ALP의 농도는 난소를 적출하는 경우 약 82% 감소하나, 본 발명에 따른 Sample I을 400mg/kg의 양으로 투여함으로써 약 97% 이상의 회복 효과를 나타내었다. 폐경후 뼈의 소실을 예측하는 지표인 혈중 Osteocalcin은 난소를 적출하는 경우 약 20% 증가하였지만, 본 발명에 따른 Sample I을 투여하는 경우 약 100% 수준으로 유의적으로 감소시키는 효과를 나타내었다. 또한, 난소를 적출하는 경우 혈중 에스트라디올이 약 52% 감소하나, 본 발명에 따른 Sample I을 투여하는 경우, 약 70%의 개선 효과를 나타내었다.

2-6. 골밀도 및 골미네랄 측정

실험예 2-3에서 채취한 양측 넙다리뼈(대퇴골)에 대해 방사선 골밀도 측정기 (DEXA X-ray bone densitometer)를 사용하여 측정하여 그 결과를 하기의 표 4 및 도 8에 나타내었다

	Sham	OVX	200mg/kg	400mg/kg	E2
BMD (g/cm²)	0.62±0.008	0.54±0.015	0.57±0.017	0.61±0.019	0.72±0.016
BMC (g)	0.26±0.006	0.23±0.01	0.23±0.004	0.27±0.009	0.30±0.015

표 4 및 도 8을 참고하면, 골밀도와 골미네랄을 측정한 결과 난소를 추출한 경우 골밀도와 골미네랄이 감소하였으나, 본 발명에 따른 Sample I을 투여한 경우 난소 적출 전의 수준으로 골밀도와 골미네랄 수준이 회복되었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

갈근 부탄올 추출물 35 내지 75 중량부, 갈화 부탄올 추출물 3 내지 15 중량부, 사원자 부탄올 추출물 3 내지 15 중량부, 황금 에탄올 추출물 0.1 내지 5 중량부, 황련 에탄올 추출물 0.1 내지 5 중량부, 황백 에탄올 추출물 0.1 내지 5 중량부, 치자 에탄올 추출물 0.1 내지 5 중량부, 지모 에탄올 추출물 0.1 내지 5 중량부 및 백하수오 에탄올 추출물 5 내지 35 중량부로 이루어지는 여성 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
삭제
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제1항에 있어서,
상기 여성 갱년기 증상은 폐경기 및 인위적 폐경, 질환에 의한 후유증을 포함하는 원인에 의한 것인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 여성 갱년기 증상은 안면홍조, 상열감 및 심계항진을 포함하는 심혈관계 증상, 비만, 고지혈증 및 당뇨를 포함한 대사성 질환, 관절통 및 골밀도 감소를 포함하는 근골격계 증상, 건망증 및 우울감을 포함하는 신경정신계 증상 및 불규칙한 월경주기, 요실금 및 분비물 감소를 포함한 비뇨생식기계 증상을 포함하는 갱년기 증상 중 하나 이상인 것인, 약제학적 조성물.
제1항, 제4항 및 제5항 중 어느 한 항에 따른 여성 갱년기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물의 제조 방법으로, 상기 방법은:
A) 갈근, 갈화 및 사원자 부탄올 추출물의 제조 단계;
B) 황금, 황련, 황백, 치자 및 지모 에탄올 추출물의 제조 단계;
C) 백하수오 에탄올 추출물의 제조 단계; 및
D) 상기 A) 단계 추출물, B) 단계 추출물 및 C) 단계 추출물을 2: 1: 1의 질량비로 혼합하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
제6항에 있어서,
상기 갈근, 갈화 및 사원자 부탄올 추출물의 제조 단계는:
a-1) 갈근, 갈화 및 사원자를 혼합하는 단계;
a-2) 상기 혼합물을 부탄올에 냉침하는 단계;
a-3) 상기 추출물을 여과 및 농축하는 단계; 및
a-4) 상기 농축 추출물을 동결건조하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
제6항에 있어서,
상기 황금, 황련, 황백, 치자 및 지모 에탄올 추출물의 제조 단계는:
b-1) 황금, 황련, 황백, 및 치자를 혼합하는 단계;
b-2) 상기 혼합물을 에탄올에 환류 추출하는 단계;
b-3) 상기 추출물을 농축하는 단계; 및
b-4) 상기 농축 추출물을 동결건조하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
제6항에 있어서,
상기 백하수오 에탄올 추출물의 제조 단계는:
c-1) 백하수오를 에탄올에 환류 추출하는 단계;
c-2) 상기 추출물을 농축하는 단계; 및
c-3) 상기 농축 추출물을 동결건조하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
갈근 부탄올 추출물 35 내지 75 중량부, 갈화 부탄올 추출물 3 내지 15 중량부, 사원자 부탄올 추출물 3 내지 15 중량부, 황금 에탄올 추출물 0.1 내지 5 중량부, 황련 에탄올 추출물 0.1 내지 5 중량부, 황백 에탄올 추출물 0.1 내지 5 중량부, 치자 에탄올 추출물 0.1 내지 5 중량부, 지모 에탄올 추출물 0.1 내지 5 중량부 및 백하수오 에탄올 추출물 5 내지 35 중량부로 이루어지는 여성 갱년기 증상의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
삭제
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제10항에 있어서,
상기 여성 갱년기 증상은 폐경기 및 인위적 폐경, 또는 질환에 의한 후유증을 포함하는 원인에 의한 것인, 식품 조성물.
제10항에 있어서,
상기 식품은 식품첨가제, 기능성식품, 건강기능식품, 건강보조식품 또는 음료를 포함하는 것인, 식품 조성물.