KR101392715B1 - 의이인탕을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 비만 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물에 관한 것으로, 의이인 3~6 중량부와, 마황 1.2~3 중량부, 당귀 1.2~3 중량부, 백출 1.2~3 중량부, 계지 1~2 중량부, 작약 1~2 중량부, 감초 0.5~1 중량부를 혼합 추출한 의이인탕을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만을 예방, 개선 또는 치료하기 위하여, 체중을 감량시키는 효능, 지방전구세포의 분화를 억제하는 효능, 혈중 렙틴의 함량을 감소시키는 효능, 혈중 HDL 콜레스테롤은 증가시키고 LDL 콜레스테롤은 감소시키는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만으로 인하여 유도되는 만성적 염증 상태 및 장기들의 지방축적 등을 복합적으로 예방, 개선 또는 치료하기 위하여, 염증을 억제하는 효능, 혈당을 강하하는 효능, 간 조직 내의 지질 함량을 감소시키는 효능, 장기들의 중량을 감소시키는 효능, 간독성 및 신장 독성이 없는 효능 등을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만을 예방, 개선 또는 치료하기 위하여, 체중을 감량시키는 효능, 지방전구세포의 분화를 억제하는 효능, 혈중 렙틴의 함량을 감소시키는 효능, 혈중 HDL 콜레스테롤은 증가시키고 LDL 콜레스테롤은 감소시키는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만으로 인하여 유도되는 만성적 염증 상태 및 장기들의 지방축적 등을 복합적으로 예방, 개선 또는 치료하기 위하여, 염증을 억제하는 효능, 혈당을 강하하는 효능, 간 조직 내의 지질 함량을 감소시키는 효능, 장기들의 중량을 감소시키는 효능, 간독성 및 신장 독성이 없는 효능 등을 보유하고 있다.
Description
본 발명은 비만 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물에 관한 것으로, 의이인 3~6 중량부와, 마황 1.2~3 중량부, 당귀 1.2~3 중량부, 백출 1.2~3 중량부, 계지 1~2 중량부, 작약 1~2 중량부, 감초 0.5~1 중량부를 혼합 추출한 의이인탕을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만을 예방, 개선 또는 치료하기 위하여, 체중을 감량시키는 효능, 지방전구세포의 분화를 억제하는 효능, 혈중 렙틴의 함량을 감소시키는 효능, 혈중 HDL 콜레스테롤은 증가시키고 LDL 콜레스테롤은 감소시키는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만으로 인하여 유도되는 만성적 염증 상태 및 장기들의 지방축적 등을 복합적으로 예방, 개선 또는 치료하기 위하여, 염증을 억제하는 효능, 혈당을 강하하는 효능, 간 조직 내의 지질 함량을 감소시키는 효능, 장기들의 중량을 감소시키는 효능, 간독성 및 신장 독성이 없는 효능 등을 보유하고 있다.
비만은 섭취한 열량이 소비한 열량보다 높아 소모되지 않은 열량이 몸에 과도하게 축적된 상태를 지칭한다. 수치상의 개념으로는 BMI(body mass index, 체질량지수) 측정시 25 이상일 경우를 비만으로 정의한다. BMI 측정법은 체중(kg)을 키의 제곱(㎡)으로 나눈 값을 통해 체지방의 양을 추정하는 비만측정법이다.
비만의 원인은 유전적 요인, 생활습관적 요인 등으로 나눌 수 있다. 유전적 요인으로는 FTO 등의 비만 유전자를 보유한 경우를 들 수 있다. 비만 유전자는 현재까지 20여 종이 밝혀져 있으며, 그 중 FTO가 대표적인 비만 유전자이다. FTO는 시상하부의 포만감을 조절하는 중추에 관여하여, 포만감을 느낄 수 있는 호르몬의 분비를 억제하는 것으로 알려져 있다.
생활습관적 요인에는 운동 부족, 불균형한 식습관 등을 들 수 있다. 운동이 부족하면 체내의 지방이 연소되지 않고 축적된다. 또한 탄수화물 및 지방을 과다섭취하고 비타민 및 섬유질을 적게 섭취하는 등 영양소의 균형이 잡히지 않으면 운동 부족 시와 동일하게, 체내의 지방이 연소되지 않고 축적된다.
한편 비만, 당뇨병, 이상지혈증 및 고혈압 등을 하나의 질환 군으로 묶어서 대사증후군(metabolic syndrome)으로 부르고 있는데, 이러한 질환들이 독립적이면서도 강력한 위험인자로 작용하여 심혈관 질환을 발생시키고 있기 때문이다.
그 중에서 비만은 전 세계적으로 많은 사람이 고통받고 있는 질병으로서 다른 질환들을 유발하여 복합적인 질병으로 발전하기 때문에 중요하게 취급되고 있는 상황이다.
한편 비만의 치료에는 약물 요법 등이 있다. 약물 요법은 비만치료제를 비만 환자에게 투여하는 치료법으로, 비만치료제에 대하여 간략히 살펴보겠다.
비만치료제의 종류에는 식욕억제제, 대사항진제, 흡수억제제, 열생성 촉진제 등이 있다. 식욕억제제는 포만감항진제라고도 하며, 시상하부의 포만감 중추에 작용하여 음식을 소량 섭취하여도 다량 섭취한 것과 유사한 효과를 낸다. 펜디메트라진, 펜터민 등이 있다.
대사항진제는 체내의 에너지 소비를 증가시켜 기초대사량을 증가시킨다.
흡수 억제제는 위장관 지방분해 효소의 작용을 억제하여 지방흡수를 저해한다. 열생성 촉진제는 식욕억제제의 효과를 극대화해줄 수 있어 식욕억제제와 함께 보조적으로 처방된다.
그러나 각 약물들에는 모두 부작용이 있다. 하단의 [표 1]은 각 약물의 부작용을 표기한 것이다.
비만 치료제 종류 | 부작용 |
식욕억제제(포만감 항진제) | 두통, 불면 등 |
대사항진제 | 손발 저림 등 |
흡수억제제 | 지방변, 잦은 방귀 등 |
열생성촉진제 | 손떨림 등 |
따라서 본 출원인은 천연 유래의 물질을 활용하여 부작용을 동반하지 않고, 체중을 감량하고, 지방전구세포의 분화를 억제하며, 혈중 콜레스테롤 및 렙틴의 함량을 조절함으로써 비만을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 조성물을 안출하였다.
또한 본 출원인은 비만으로 인하여 약한 정도의 만성적 염증 상태 및 장기들의 지방축적 등이 유도되는 점을 감안하여, 염증을 억제하는 효능, 혈당을 강하하는 효능, 간 조직 내의 지질 함량을 감소시키는 효능, 장기들의 지방 축적 함량을 감소시키는 효능, 간독성 및 신장 독성이 없는 효능을 아울러 보유하고 있는, 비만을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 조성물을 안출하였다.
본 발명은 천연물 소재로 의이인, 마황, 당귀, 백출, 계지, 작약, 감초를 사용하고 있는바, 이하에서 이들 소재를 기존에 활용했던 의이인탕과 각 소재의 특징에 대해 살펴본다.
의이인탕은 중국 명나라 명의지장(明醫指掌) 문헌을 근거로 보면 의이인 10g, 마황, 당귀, 백출 각 4.0g, 계지, 백작약 각 3.0g, 감초 2.0g을 사용하고 있다. 일반적으로 사지의 관절과 근육의 동통, 종장, 열감, 저림 또는 마비에 사용되는 탕약으로서 의이인탕이 비만의 효능이 있다는 것에는 알려진바가 없다.
이에 따라 본 출원인은 한풍제약에서 제조한 의이인탕 엑스과립제를 이용하여 의이인탕이 비만에 효능이 있다는 것을 입증하고자 한다.
의이인은 화본과에 속하는 율무(Coicis semen)의 씨앗이다.
율무는 한해살이풀로 높이는 11.5m이며, 속이 딱딱하며 곧게 자라고 가지가 갈라진다. 잎은 어긋나고 바소꼴이며 너비 약 2.5cm로서 밑부분은 잎집으로 된다. 꽃은 7~9월에 개화하고 잎겨드랑이에서 나온 꽃이삭 끝에 길이 3cm 정도의 수꽃이삭이 달린다. 밑부분에 타원형의 잎집에 싸여 있는 암꽃이삭이 있다. 포는 딱딱하고 타원 모양이며 길이 약 1.2cm로서 검은빛을 띤 갈색으로 익는다. 씨방이 성숙하면 잎집은 딱딱해지고 검은 갈색으로 된다. 열매는 견과로서 10월에 익는다. 번식은 종자로 한다.
씨앗을 달여 차를 우려내어 먹거나, 약재로 쓴다. 이뇨작용, 진통작용, 진경작용, 강장작용이 있으므로 부종, 신경통, 류머티즘, 방광결석 등에 약재로 쓴다.
마황(Ephedrae Herba)은 마황과에 속하며, 중국의 동북부, 몽고에 분포한다. 높이는 30~70 cm이며, 뿌리줄기는 황적색으로 두꺼운 목질이다. 줄기는 가늘고 길며 마디가 많은데 마디에는 퇴화한 비늘 같은 잎이 한 쌍씩 마주 달린다.
꽃은 7~8월에 개화하며 자웅이주이고 줄기 끝에서 난형의 단성화서가 포(苞)에 싸여서 달린다. 수꽃은 수술이 2개이고 꽃밥은 황색이며, 암꽃은 두 개의 꽃이 포엽(苞葉)에 싸여 있고 노출된 배젖이 있다. 암꽃화서는 자라서 육질이 되고, 열매는 장과로서 분홍색이 돌며 속에 흑갈색의 씨가 두 개 들어 있다.
줄기는 약재로 쓰이며, 발한, 해열, 진해거담, 이뇨 등의 작용이 있으며, 천식 등의 치료에 이용된다.
당귀(Angelicae sinensis)는 미나리과에 속하며 한국의 경상북도, 강원도, 일본, 중국에 분포한다. 깊은 산의 습기있는 풀숲에서 자란다. 줄기는 암녹색이나 자주색이며, 100~150 cm에 이른다.
꽃은 자주색으로, 8~9월에 개화하며 줄기 끝에 작은 꽃이 많이 모여서 하나의 꽃을 이룬다. 잎 모양은 긴 타원형 또는 계란형이다. 열매는 납작하고 둥근 모양으로 양쪽에는 날개가 있다.
당귀는 진정, 진통, 항균, 항암, 배변 유도, 비타민 E 보충, 보혈, 혈압 강하, 혈액 순환 촉진의 기능이 있으며 빈혈, 진통, 부인병을 치료하는데에 사용된다.
백출은 국화과에 속하는 삽주(Atractylodis Macrocephalae)의 뿌리줄기이다. 삽주는 중국,한국에 분포하며, 한국에는 전 지역에 서식한다. 높이는 30~100 cm이며 위쪽에서 가지가 갈라진다.
잎은 어긋나기로 나며, 잎자루가 길다. 잎은 계란형에 가까운 타원형이며 빳빳하고, 가장자리에는 톱니가 있다. 꽃은 담자색을 띈 흰색으로 7~10월에 개화한다.
뿌리줄기는 굵으며 약용으로 쓰인다. 백출의 뿌리줄기는 이뇨, 강장, 혈당강하, 강장, 항균, 혈관 확장 등의 효능이 있어 신우염, 간염, 담낭염, 결석 등에 효과가 있다.
계지는 녹나무과에 속하는 육계나무(Cinnamomi ramulus)의 어린가지를 햇볕에 말린 약재이다.
육계나무는 중국 남부, 스리랑카, 인도차이나, 한국의 제주에 분포하며, 높이는 약 8 m이다. 작은가지는 녹색이며 털이 없다. 잎은 어긋나고 달걀 모양의 긴 타원형이며 길이는 약 10 cm이다. 끝은 뾰족하고 가장자리가 밋밋하며 밑부분에 뚜렷한 3개의 맥이 있다.
꽃은 6월에 개화하고 연한 노란빛을 띤 녹색이며 새가지 끝 잎겨드랑이에 산형꽃차례로 달린다. 꽃받침은 통 모양이며 윗부분이 6개로 갈라진다. 수술은 3개씩 4줄로 늘어서고 가장 안쪽 줄은 꽃밥이 없다. 암술은 1개이고 열매는 핵과(核果)이며 검게 익는다. 껍질에 계피알데히드가 들어 있어 향기가 난다.
줄기와 뿌리의 껍질은 맵고 향기가 있으므로 약용하거나 과자의 향료로 사용한다. 계지는 초기 감기에 피부의 땀구멍을 열어 땀을 내며, 어깨와 등의 통증, 사지관절의 동통을 완화시켜 준다. 또한 기혈의 순환을 촉진 시키고 양기부족을 치료한다. 약리작용은 대장균, 고초간균, 황색포도균,폐렴쌍구균, 유행성감기 바이러스 등의 증식을 억제하는 항균 작용, 이뇨작용 등이 있다.
작약(Paeoniae Radix)은 미나리아재비과에 속하는 여러해살이풀로 한국, 일본, 중국, 사할린 섬 등지에 분포하며, 깊은 산에서 자란다. 높이 40~50cm이다. 뿌리는 굵고 육질이며 밑부분이 비늘 같은 잎으로 싸여 있다. 잎은 3~4개가 어긋나고 3개씩 2번 갈라진다. 작은잎은 긴 타원형이거나 달걀을 거꾸로 세워놓은 모양이고 가장자리가 밋밋하며 털이 없다.
꽃은 6월에 흰색으로 개화하고 지름 4~5cm이며 원줄기 끝에 1개씩 달린다. 꽃받침조각은 달걀 모양이며 3개, 꽃잎은 달걀을 거꾸로 세워놓은 모양이고 5~7개이다. 수술은 여러 개이며 3~4개의 씨방이 있다. 열매는 골돌과로서 벌어지면 안쪽이 붉고 덜 자란 붉은 종자와 성숙한 검은 종자가 나타난다. 뿌리는 진통, 진경, 부인병에 사용한다.
감초(Glycyrrhizae Radix)는 콩과에 속하는 여러해살이풀로 중국 동북부, 시베리아, 몽골 등지에 분포하며, 뿌리는 적갈색으로 땅속 깊이 들어가고 줄기는 모가 지며 1m 정도 곧게 자란다. 또한 흰털이 밀생하여 회백색으로 보이며 선점(腺點)이 흩어져 있다.
잎은 어긋나고 홀수깃꼴겹잎이다. 작은잎은 7~17개씩 나고 달걀 모양이며 끝이 뾰족하다. 작은잎의 길이는 25cm, 너비 l3cm로 양면에 흰털과 선점이 있으며 톱니는 없다. 꽃은 7~8월에 보라색으로 개화하며, 길이는 1.4~2.5cm이다. 총상꽃차례로 잎겨드랑이에 달린다. 꼬투리는 선처럼 가늘고 긴 모양으로 활처럼 굽으며 신장형의 종자가 6~8개씩 들어 있다.
뿌리는 단맛이 나서 감미료로 사용하며, 약재로도 널리 사용된다. 모든 약의 독성을 조화시켜서 약효가 잘 나타나게 하며 장부의 한열과 사기를 다스리고 모든 혈맥의 소통을 잘 시키며 근육과 뼈를 튼튼히 한다. 소화성 궤양, 간염, 두드러기, 피부염, 습진 등에 효과가 있으며, 해독작용, 진해거담작용, 근육 이완작용, 이뇨작용, 항염작용이 있다.
한편 비만의 예방 및 개선과 관련된 선행 기술을 살펴보면, 대한민국 공개특허공보 제10-2002-0037218호에는 약재 증류수를 이용한 다이어트 음료수 제조방법에 관하여 기재되어 있다.
개략적으로 살펴보면, 활석, 감초, 백출, 치자, 형개, 석고, 길경, 황금, 당귀, 천궁, 적작약, 연교, 박하, 마황, 방풍, 대황, 망초, 의이인, 숙지황을 물에 4시간 전탕하여 추출한 원액을 200℃ 3기압 하에서 증류한 후 냉각기로 액화시켜 증류수로 제조하거나, 더욱 바람직하게는 복합 약재인 사군자탕, 육미지황탕, 십전대보탕, 연령고본단, 향사육군자탕, 향사평위산, 사물탕, 생맥산, 탁리소독음, 방풍통성산, 쌍화탕을 물에 4시간 전탕하여 추출한 원액을 200℃ 3기압 하에서 증류한 후 냉각기로 액화시켜 증류수로 제조하는 방법에 관하여 기재되어 있다.
본 발명은, 천연 유래의 물질을 활용하여 부작용을 동반하지 않고, 체중을 감량시키는 효능, 지방전구세포의 분화를 억제하는 효능, 혈중 렙틴의 함량을 감소시키는 효능, 혈중 HDL 콜레스테롤은 증가시키고 LDL 콜레스테롤은 감소시키는 효능을 보유함으로써, 비만을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은, 비만으로 인하여 유도되는 만성적 염증 상태 및 장기들의 지방축적 등을 감소시키기 위하여, 염증을 억제하는 효능, 혈당을 강하하는 효능, 간 조직 내의 지질 함량을 감소시키는 효능, 장기들의 지방 축적 함량을 감소시키는 효능, 간독성 및 신장 독성이 없는 효능을 보유하고 있는 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은, 의이인 3~6 중량부와, 마황 1.2~3 중량부, 당귀 1.2~3 중량부, 백출 1.2~3 중량부, 계지 1~2 중량부, 작약 1~2 중량부, 감초 0.5~1 중량부를, 혼합 추출하거나 각각 추출하여 혼합한 의이인탕을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물을 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.
본 발명에서, 추출 용매는 물, 50% 에탄올 또는 100% 에탄올인 것을 특징으로 하는 조성물을 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.
본 발명에서, 상기 의이인탕은, 체중을 감량시키는 효능, 지방전구세포의 분화를 억제하는 효능, 혈중 렙틴의 함량을 감소시키는 효능, 혈중 HDL 콜레스테롤은 증가시키고 LDL 콜레스테롤은 감소시키는 효능을 보유하도록 함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.
본 발명에서, 상기 의이인탕은, 염증을 억제하는 효능, 혈당을 강하하는 효능, 간 조직 내의 지질 함량을 감소시키는 효능, 간독성 및 신장 독성이 없는 효능, 간, 신장 및 부고환의 중량을 감소시키는 효능을 보유하도록 함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.
본 발명에서, 상기 의이인탕은 랫의 섬유아세포 기준으로 10 ~ 100 μg/ml 인 것을 특징으로 하는 조성물을 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.
본 발명에서, 상기 위이인 복합물은 랫 기준으로 1일 1회 400 ~ 600 mg 경구 투여하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.
본 발명은, 상기 조성물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 개선을 위한 식품 조성물 또는 의약외품 조성물을 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 천연 유래의 물질을 활용하여 부작용 및 세포독성이 없는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 3T3-L1 지방전구세포의 분화를 저해하는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 체중을 감량하는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 혈중 콜레스테롤 함량을 조절하는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 혈청 내 렙틴을 감소시키는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 DPPH 라디컬을 소거하는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 콜라게네이즈를 저해하는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 염증을 억제하는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 혈당을 강하하는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 간 조직 내의 지질 함량을 감소시키는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 장기 지방 축적 함량을 감소시키는 효능을 보유하고 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위하여 간 독성 및 신장 독성이 없는 효능을 보유하고 있다.
본 발명은, 한풍제약에서 제조한 의이인탕 엑스과립제를 실험에 이용하여 의이인탕이 비만을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다는 효능을 입증한 특징이 있다.
도 1은 의이인탕(물 추출물), 의이인탕(50% 에탄올 추출물), 의이인탕(100% 에탄올 추출물)의 세포독성 실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 의이인탕(물 추출물), 의이인탕(50% 에탄올 추출물), 의이인탕(100% 에탄올 추출물)의 세포독성 실험 결과를 나타낸 사진이다.
도 3은 3T3-L1 지방전구세포 분화 전, 3T3-L1 지방전구세포 분화 후, 3T3-L1 지방전구세포에 의이인탕을 투여한 후의 지방전구세포 양상을 나타낸 사진이다.
도 4는 정상 식이군, 고지방 식이군, 의이인탕 투여군에서의 혈중 인슐린 농도 변화를 나타낸 그래프이다.
도 5는 정상 식이군, 고지방 식이군, 의이인탕 투여군에서의 혈청 내 렙틴 농도 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2는 의이인탕(물 추출물), 의이인탕(50% 에탄올 추출물), 의이인탕(100% 에탄올 추출물)의 세포독성 실험 결과를 나타낸 사진이다.
도 3은 3T3-L1 지방전구세포 분화 전, 3T3-L1 지방전구세포 분화 후, 3T3-L1 지방전구세포에 의이인탕을 투여한 후의 지방전구세포 양상을 나타낸 사진이다.
도 4는 정상 식이군, 고지방 식이군, 의이인탕 투여군에서의 혈중 인슐린 농도 변화를 나타낸 그래프이다.
도 5는 정상 식이군, 고지방 식이군, 의이인탕 투여군에서의 혈청 내 렙틴 농도 변화를 나타낸 그래프이다.
본 명세서 및 청구 범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
따라서 본 명세서에 기재된 실시예, 참조예 및 도면에 기술된 사항은 본 발명의 가장 바람직한 일 예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
실시예
1. 의이인탕을 유효성분으로 하는 조성물
1-1. 의이인탕의 제조
의이인 3~6 중량부를 기준으로 하여, 마황 1.2~3 중량부, 당귀 1.2~3 중량부, 백출 1.2~3 중량부, 계지 1~2 중량부, 작약 1~2 중량부, 감초 0.5~1 중량부를 혼합 추출하여 의이인탕을 제조하였다.
바람직하게, 의이인은 3.33 g, 마황, 당귀, 백출은 각 1.33 g, 계지, 작약은 각 1.0 g, 감초는 0.67 g을 이용하였다.
설계조건에 따라, 의이인탕의 제조는 다양한 방법으로 실행될 수 있는데, 각 소재를 혼합 추출하거나 각 소재의 추출물을 혼합하여 제조할 수도 있다.
또한 추출법으로는, 열수 또는 유기용매를 이용하여 추출하거나, 발효추출, 초임계유체 추출, 여과침출, 수증기증류, 마이크로웨이브 추출, 온침 등의 방법으로 추출할 수도 있다.
1-2. 의이인탕을 유효성분으로 함유하는 조성물
의이인탕을 유효성분으로 함유하는 조성물은 약학적 조성물 및 식품 조성물로 이용될 수 있다.
약학적 조성물로 이용되기 위하여는 약제학적 분야에서의 공지의 방법에 의해 제조될 수 있으며, 그 자체 또는 약학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 등과 혼합하여 분말, 과립, 정제, 캡슐제 또는 주사제 등의 제형으로 제조되어 사용될 수 있다. 또한 이들은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다.
약학적 조성물의 유효 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 물활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질환의 중증 정도 등에 따라 적절히 선택될 수 있다.
약학적 조성물을 이용하여 환, 과립, 음료, 타블렛, 캅셀 등의 제형을 제조할 수 있으며, 이 경우에 각 제형을 제조하기 위하여 첨가제가 추가될 수 있음은 물론이다.
식품 조성물로 이용하는 경우에는, 식품학적으로 허용되는 첨가제를 이용하여 건강기능식품으로 제조하여 제공한다.
건강기능식품의 경우, 기능성 음료, 건강보조식품, 차, 과자류 등과 같이 다양한 형태로 제공될 수 있다.
의약외품 조성물로 이용하는 경우에는, 각 의약외품의 용도에 맞게 본 발명에 따른 조성물을 적용하여 제공할 수 있다.
참조예
1. 추출 수율 및 성분 분석
1-1. 실험 시료의 준비
먼저 본 참조예 이외에 하기의 실험예들의 실험 시료도 하기와 같이 준비하여 사용하였음을 미리 밝혀둔다.
의이인탕에 포함되는 의이인, 마황, 당귀, 백출, 계지, 작약, 감초를 준비하였다. 의이인, 당귀, 백작약, 감초는 진우제약, 백출은 경북제약, 계지는 미륭생약(주), 마황은 서륭상사에서 구입하여 실험에 사용하였다.
또한 의이인탕 시료를 준비하기 위하여 한풍제약의 제품을 구입하였는데, 한풍제약의 제품은 의이인은 3.33 g, 마황, 당귀, 백출은 각 1.33 g, 계지, 작약은 각 1.0 g, 감초는 0.67 g를 혼합 추출하여 엑스 과립제로 제조한 것이다.
증류수(D.W.), 50% 에탄올, 100% 에탄올을 용매로 사용하여, 각 소재와 의이인탕을 150 g씩 각각의 용매 1.0 L에 넣고 1.5시간 동안 순환냉각방식으로 가열한 후 종이필터(Watman No.2)로 여과하였다. 여과한 추출액을 회전진공증발기(Rotary vacumm evaporator, N-1000, Eyela Co., Japan)로 진공감압농축하여 건조시켰다.
건조된 추출물을 1 mg/ml 농도로 용해하여 실험에 사용하였다. 그 중 추출물 50 ml를 회전진공증발기로 60 ℃에서 감압 농축 건조하여 건조중량을 측정, 수율을 계산하였다.
1-2. 성분 분석 방법
1) 단백질 정량 분석
단백질 정량 분석 방법으로는 Lowry의 방법을 이용하였다.
시료 20 ㎕에 200 ㎕의 lowrys solution I (1% CuSO4 5H2O : 2% K Na-tarteate : 2% Na2CO3 in NaOH = 1 : 1 : 98) 혼합 후 10분간 반응시켰다.
20 ㎕의 lowrys solution II (2N Folin-ciocalteu's phenol reagent : 물 = 1 : 1) 넣고 실온에서 30분간 반응시켜 595 nm에서 흡광도를 측정하였다. BSA 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하였다.
2) 환원당 정량 분석
환원당 정량 분석 방법으로는 DNS(3,5-dinitrosalicylicacid)와 Rochelle염으로 발색하여 흡광도를 측정하는 방법인 DNS 방법을 사용하였다.
시료 100 ㎕에 DNS 시약을 200 ㎕ 가하고 잘 혼합한 후 15분간 끓였다.
반응을 종지하기 위하여 15분간 냉각시켰다. 546 nm에서 흡광도를 측정하였다. 글루코스(Glucose) 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하였다.
3) 총 당 정량 분석
당 정량 분석 방법으로는 페놀-설퍼릭 산(phenol-sulfuric acid)법을 사용하였다.
시료 100 ㎕, 5% phenol 100 ㎕, H2SO4 500 ㎕를 혼합 후 실온에서 30분간 반응시켜 480 nm에서 흡광도를 측정하였다. 글루코스 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하였다.
1-3. 추출 수율 결과
하단의 [표 2]는 의이인탕을 구성하는 소재들의 추출 수율을 나타낸 것이다.
용제 | 소재명 | 수율(%, w/w) |
물 |
감초 | 13.376 |
당귀 | 31.978 | |
백작약 | 10.714 | |
백출 | 33.124 | |
의이인 | 3.768 | |
계지 | 1.862 | |
마황 | 12.220 | |
의이인탕 | 13.102 | |
50% 에탄올 |
감초 | 10.470 |
당귀 | 26.690 | |
백작약 | 6.166 | |
백출 | 17.872 | |
의이인 | 0.858 | |
계지 | 2.066 | |
마황 | 10.620 | |
의이인탕 | 9.560 | |
100% 에탄올 |
감초 | 5.792 |
당귀 | 9.780 | |
백작약 | 2.088 | |
백출 | 4.666 | |
의이인 | 1.626 | |
계지 | 1.482 | |
마황 | 4.636 | |
의이인탕 | 5.384 |
추출 결과, 의이인탕 물 추출물은 13.12%, 50% 에탄올 추출물은 9.560%, 100% 에탄올 추출물은 5.384%로 에탄올의 농도가 높아질 수록 회수율은 떨어지는 것으로 확인되었다. 이 것은 물 추출물의 경우 전분당이 많이 추출되어 회수된 결과로 볼 수 있다.
1-4. 성분 분석 결과
하단의 [표 3]은 의이인탕을 구성하는 소재들의 성분 분석 결과를 나타낸 것이다.
용제 | 소재명 | 단백질(%, w/w) | 환원당(%, w/w) | 총 당량(%, w/w) |
물 |
감초 | 4.71±0.058 | 0.54±0.0178 | 2.74±0.091 |
당귀 | 1.19±0.023 | 0.25±0.011 | 0.83±0.034 | |
백작약 | 1.39±0.039 | 1.39±0.052 | 6.43±0.213 | |
백출 | 0.80±0.024 | 2.36±0.084 | 1.29±0.041 | |
의이인 | 0.64±0.026 | 1.86±0.035 | 6.42±0.231 | |
계지 | 18.15±0.325 | 4.24±0.138 | 3.87±0.131 | |
마황 | 5.66±0.168 | 1.37±0.062 | 1.18±0.042 | |
의이인탕 | 2.11±0.073 | 0.79±0.032 | 8.35±0.341 | |
50% 에탄올 |
감초 | 5.89±0.179 | 1.04±0.012 | 6.37±0.245 |
당귀 | 2.12±0.056 | 0.37±0.049 | 1.32±0.041 | |
백작약 | 4.93±0.168 | 1.57±0.081 | 9.29±0.331 | |
백출 | 1.14±0.038 | 2.53±0.302 | 1.64±0.052 | |
의이인 | 1.17±0.098 | 10.02±0.167 | 12.00±0.432 | |
계지 | 19.60±0.687 | 4.84±0.062 | 8.18±0.333 | |
마황 | 5.65±0.199 | 1.69±0.032 | 5.02±0.214 | |
의이인탕 | 1.95±0.895 | 0.87±0.057 | 6.52±0.195 | |
100% 에탄올 |
감초 | 9.32±0.387 | 1.55±0.031 | 5.52±0.132 |
당귀 | 10.13±0.475 | 0.72±0.056 | 5.09±0.116 | |
백작약 | 12.45±0.443 | 3.02±0.031 | 6.61±0.203 | |
백출 | 1.59±0.344 | 1.71±0.113 | 6.94±0.371 | |
의이인 | 2.03±0.098 | 3.81±0.513 | 4.43±0.213 | |
계지 | 12.69±0.542 | 4.99±0.114 | 5.06±0.172 | |
마황 | 17.99±0.687 | 2.33±0.071 | 4.25±0.103 | |
의이인탕 | 5.05±0.213 | 1.23±0.043 | 4.94±0.191 |
의이인탕을 구성하고 있는 각 소재와 의이인탕 시료에 대한 구성성분을 분석하였다.
그 결과 의이인탕 물 추출물은 단백질 2.11%, 환원당 0.79%, 총 당 8.35%로 확인되었으며, 50% 에탄올 추출물은 단백질 1.95%, 환원당 0.87%, 총 당 6.52%, 100% 에탄올 추출물은 단백질 5.05%, 환원당 1.23%, 총 당 4.94%로 분석되었다. 물 추출물의 회수율이 에탄올 추출물에 비해 높은 것은 총 당의 함량이 높기 때문인 것으로 확인되었다.
실험예
1. 의이인탕의
DPPH
라디칼
소거 활성 효능
1-1. 실험 과정
항산화 활성을 측정하기 위해 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)의 라디칼 소거 활성을 측정하였다. 전자공여능 (EDA: electron donating ability) 측정법으로 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다. 그 방법은 다음과 같다.
시료용액 10 ㎕에 0.1mM DPPH 용액을 190 ㎕를 가하고 잘 혼합 후 37 ℃에서 30분간 반응시킨 후 얼음물을 주입하여 반응을 종료시켰다.
ELISA Reader (Biotek, USA)를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 BHA를 사용하였다.
1-2. 통계 분석
실험에 사용된 통계분석시스테믄 SAS사(USA)의 SAS Clinical Data Integration Solution을 사용하여 분석하였으며 분석결과는 mean±SE로 나타내었으며 각 군의 결과값은 one-way ANOVA로 사전검증한 후 Duncan's multiple range test에 의해 사후 검정하였다. p<0.05 이하인 경우 유의한 차이가 있는 것으로 판정하였다. 이하 실험예들의 통계분석은 본 통계분석 방법을 이용하였음을 밝혀둔다.
1-3. 실험 결과
하단의 [표 4]는 의이인탕을 구성하는 소재들의 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타낸 결과이다.
용제 | 소재명 | DPPH 라디칼 소거 활성(%) |
물 |
감초 | -3±1.21 |
당귀 | -4±2.12 | |
백작약 | 37±0.53 | |
백출 | -2±1.32 | |
의이인 | -12±2.37 | |
계지 | 61±1.36 | |
마황 | 50±1.35 | |
의이인탕 | 4±0.39 | |
50% 에탄올 |
감초 | 12±0.23 |
당귀 | 8±0.64 | |
백작약 | 43±1.98 | |
백출 | -1±0.11 | |
의이인 | 12±0.91 | |
계지 | 72±1.58 | |
마황 | 72±1.13 | |
의이인탕 | 40±1.78 | |
100% 에탄올 |
감초 | 75±2.01 |
당귀 | 44±1.31 | |
백작약 | 79±2.98 | |
백출 | 15±0.64 | |
의이인 | 12±0.12 | |
계지 | 56±0.74 | |
마황 | 80±1.12 | |
의이인탕 | 38±0.81 | |
BHA | 85±1.71 |
전자공여능은 지질과산화 반응의 연쇄반응에 관여하는 산화성 자유 라디칼(free radical)에 전자를 제공하여 연쇄반응을 정지, 산화를 억제시킨다. 이에 DPPH법을 사용하여 항산화물질의 전자공여능으로 인해 방향족 화합물 및 방향족 아민류에 환원되어 생긴 자색이 탈색되는 정도를 나타내어 항산화 활성 능력을 측정하였다.
그 결과 물 추출물의 경우 백작약 37%, 계지 61%, 마황 50%, 의이인탕이 4%의 DPPH 라디칼 소거 활성이 확인되었으며, 50% 에탄올 추출물의 경우 백작약 43%, 계지 72%, 마황 72%, 의이인탕 40%, 100% 에탄올의 경우 감초 75%, 당귀 44%, 백작약 79%, 계지 56%, 마황 80%, 의이인탕이 38%의 활성이 확인 되었다.
실험예
2. 의이인탕의
콜라게네이즈
저해 활성 측정
2-1. 실험 과정
콜라게네이즈(collagenase) 저해 활성 측정은 닌히드린(ninhydrin) 방법을 변형하여 사용하였다. 그 방법은 다음과 같다.
50mM Tris-HCl 버퍼(buffer) 50 ㎕에 콜라게네이즈 type A(Sigma Co., USA)를 buffer에 1 mg/ml를 넣고 녹인 용액 10 ㎕ 과 시료액 10 ㎕ 을 혼합 후 37 ℃에서 10분간 방치하였다.
10분간 방치한 버퍼에 젤라틴(gelatin) 6 mg을 녹인 용액 500 ㎕를 가하여 37 ℃에서 30분간 반응시켰다.
30분간 반응시킨 버퍼의 효소반응을 종지시키기 위해 10% TCA(trichloroacetic acid) 500 ㎕를 첨가한 후 10분간 방치하였다.
10분간 방치한 반응액을 50 ㎕ 취하여 닌히드린 용액 500 ㎕ 첨가 후 10분간 끓이고 얼음에서 5분간 냉각시킨다.
5분간 냉각시킨 반응액 내에서 가수분해 되지 않은 단백질을 침전시키기 위해 50% 1-프로판올(propanol) 1000 ㎕를 가하여 얼음에서 15분간 방치 후 원심분리하였다. 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.
2-2. 실험 결과
하단의 [표 5]는 의이인탕을 구성하는 소재들의 조성과 용매를 달리하여 콜라게네이즈 저해 활성을 나타낸 결과이다.
콜라게네이즈 저해 활성(%) | |
의이인탕 물 추출물 | 17±2.36 |
의이인탕 50% 에탄올 추출물 | 4±1.35 |
의이인탕 100% 에탄올 추출물 | 13±0.71 |
마황 물 추출물 | -3±0.90 |
계지 물 추출물 | 11±1.18 |
백작약 물 추출물 | 2±2.36 |
감초 100% 에탄올 추출물 | 5±0.20 |
콜라게네이즈 효소는 진피층에 존재하는 콜라겐을 분해하는 효소로서 피부노화에 영향을 주는 것으로 알려져 있다. 의이인탕이 피부노화를 예방하는 효과가 있는지 검증하기 위하여 본 실험을 실시하였다.
콜라게네이즈 저해 활성 측정 결과, 의이인탕 물 추출물은 17%, 의이인탕 50% 에탄올 추출물은 4%, 의이인탕 100% 에탄올 추출물은 13%의 콜라게네이즈 저해 활성이 있는 것으로 확인되었다. 단일 약재인 백작약 물 추출물은 11%, 계지 물 추출물 2%, 감초 100% 에탄올 추출물은 5%의 저해활성을 가지는 것으로 확인되었으며, 마황 물 추출물과 의이인탕 물 추출물은 콜라게네이즈 저해활성이 없는 것으로 확인되었다.
실험예
3. 의이인탕의 항염증 활성 측정
3-1. 실험 과정
COX-2(Cyclooxygenase-2)의 저해 활성을 측정하면 항염증 활성 또한 측정할 수 있다. 실험방법은 다음과 같다:
96 웰 플레이트(well plate)의 2 well에 10 ㎕ heme, 10 ㎕ 어세이 버퍼(assay buffer, 100mM Tris-HCl, pH 8.0) 그리고 10 ㎕ 솔벤트(solvent, inhibitor를 녹였던 용매)를 첨가하였다.
백그라운드 웰(background well)에는 2 well에 10 ㎕ heme, 10 ㎕ 어세이 버퍼, 10 ㎕의 솔벤트를 첨가하였고, 100% 이니셜 액티비티(initial activity) 측정을 위해 2 well 에 10 ㎕ heme, 10 ㎕ 효소(COX-2) 그리고 10 ㎕의 solvent를 첨가하였다.
각 소재들의 COX 저해 활성 측정을 위해 2 well에 10 ㎕ heme, 10 ㎕ 효소 (COX-2) 그리고 10 ㎕의 시료를 첨가하였다.
양성 대조군으로는 인도메사신(indomethacin)을 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide)에 녹여 처리하였고, 시료는 100mM Tris-HCl (pH 8.0)에 녹여 농도별로 처리하였으며, 모든 well에 200 ㎕의 assay buffer를 첨가하여 실온에서 반응시켰다.
루미노미터(Luminometer)(SpectraMax L Co., Molecular devices, USA)에 부착되어 있는 2개의 디스펜서(dispenser)를 이용하여 하나의 디스펜서로 모든 well에 10 ㎕의 케미루미네센트 서브스트레이트(chemiluminescent substrate)를 첨가하고, 즉시 다른 하나의 디스펜서를 이용하여 50 ㎕의 아라키돈산을 첨가한 후 RLU(Relative Luminescent Units)를 루미노미터로 측정하였다. 스탠다드 인히비터(standard inhibitor)는 인도노메사신(indoomethacin)을 사용하였다.
3-2. 실험 결과
본 발명에서는 효소반응을 통한 저해활성을 분석하는 방법인 케미루미네센트COX 인히비터리 스크리닝 어세이(chemiluminecent COX inhibitory screening assay)를 통하여 항염증 활성에 대한 효과를 측정하였다. 이 방법의 경우 최근에 개발된 방법으로 빠르게 항염증 활성을 동시분석이 가능한 방법으로 알려져 있으며, 항염증과 관련된 많은 논문에서 이 방법을 사용하고 있다.
COX (Cyclooxiganase) 효소는 물리적 자극에 의해 염증이 발생할 경우 COX-1 효소가 발현하고, 염증 자극에 의해서는 COX-2 효소가 발현하는데 이것은 세포에 상처가 나게 되면 아라키돈산(Arachidonic acid)이 COX 효소에 의해 산화되어 프로스타글란딘(prostaglandin)으로 전환되면서 염증이 발생하게 된다. COX 실험의 목적은 바로 이러한 효소의 발현을 억제하는 정도가 얼마인가에 따라 항염증활성의 활성이 결정된다.
하단의 [표 6]은 의이인탕을 구성하는 소재들의 조성과 용매를 달리하여 추출한 추출물의 COX-2 저해 활성을 나타낸 결과이다.
COX-2 저해 활성(%) | |
의이인탕 물 추출물 | 81±1.71 |
의이인탕 50% 에탄올 추출물 | 93±4.01 |
의이인탕 100% 에탄올 추출물 | 98±6.71 |
마황 물 추출물 | 82±3.16 |
계지 물 추출물 | 100±2.28 |
백작약 물 추출물 | 66±2.20 |
감초 100% 에탄올 추출물 | 101±3.60 |
COX-2 활성 측정결과 의이인탕 물 추출물의 경우 43%의 COX-2 저해 활성을 확인하였으며, 의이인탕 물 추출물은 81%, 의이인탕 50% 에탄올 추출물은 93%, 의이인탕 100% 에탄올 추출물은 98%, 마황 물 추출물은 82%, 백작약 물 추출물은 66%의 저해 활성이 확인 되었다. 특히 계지 물 추출물과 감초 100% 에탄올 추출물은 100%로 확인되었다.
따라서 의이인탕은 항염증 활성이 우수한 것으로 확인되었으며, 최근 들어 염증과 비만, 당뇨질환의 경우 같은 기전 내에서 서로 영향을 주고 있는 것으로 보고되고 있어, 항비만 효과에 영향을 미치는 것으로 추정된다.
실험예
4. 의이인탕의 세포독성(
cytotoxicity
) 측정
4-1. 실험 준비
MTT[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] 시약은 Sigma- Aldrich 사로부터 구입하여 사용하였고, 실험에 사용된 세포는 미국 ATCC에서 NIH/3T3 마우스 섬유아세포(1×104)와 마우스의 Raw 264.7 대식세포(5×104)를 구입하여 사용하였다.
4-2. 실험 과정
세포독성의 지표가 되는 세포생존율은 MTT assay로 측정하였다.
각 세포는 96 well plate에서 24시간 배양하였으며, 약침액은 농도별로 희석하여 세포주에 처리하였고, 2시간 후 LPS(Lipopolysaccharide)를 처리한 후 0.5 mg/ml의 MTT 시약을 이용하여 0.1mg MTT/(200 ㎕) well에 넣고 2시간 동안 배양하였다.
각 실험군 당 의이인탕은 3개씩 처리하였으며, 배양 후 상등액을 제거하고 200 ㎕의 PBS로 세척한 후, 100 ㎕의 DMSO를 가하여 MTT의 환원에 의해 생성된 포르마잔(formazan)을 용해시킨, ELISA microplate reader(Model: MQX200R, BioTek, USA)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.
세포생존률은 대조군 세포에 대한 백분율로 표시하였다. 하기의 [수학식 1]은 세포생존률을 구하는 공식이다.
4-3. 실험 결과
도 1은 의이인탕 물 추출물, 의이인탕 50% 에탄올 추출물, 의이인탕 100% 에탄올 추출물의 세포독성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 1의 왼쪽 상단은 의이인탕 물 추출물, 오른쪽 상단은 의이인탕 50% 에탄올 추출물, 왼쪽 하단은 의이인탕 100% 에탄올 추출물의 세포독성을 측정한 결과를 나타냈다.
도 2는 의이인탕 물 추출물, 의이인 50% 에탄올 추출물, 의이인탕 100% 에탄올 추출물의 세포독성 실험 결과를 나타낸 사진이다.
세포독성의 지표가 되는 세포생존율은 MTT assay로 측정하였으며, 사용된 세포는 마우스의 NIH/3T3 섬유아세포(fibroblast)를 사용하였다.
의이인탕 시료는 세 종류로 의이인탕 물 추출물과, 50% 에탄올 추출물, 100% 에탄올 추출물을 사용하였으며, 시료는 각각 10, 25, 50, 100 μg/ml 씩 농도별로 처리하였다.
그 결과 의이인탕 물 추출물과, 50% 에탄올 추출물의 경우 세포생존율이 80% 이상으로 독성이 없는 것으로 확인이 되었으며, 100% 에탄올 추출물의 경우 25 μg/ml의 이상 농도에서 세포독성이 확인 되었다.
실험예
5. 의이인탕의 3
T3
-
L1
지방전구세포
분화 저해 활성
5-1. 실험 준비
마우스의 3T3-L1 지방전구세포(NIH/3T3 섬유아세포)가 성숙된 지방세포로 50~70% 컨플루언시(confluency) 이상 분화될 때까지 10~15일간 배양한다.
5-2. 실험 과정
1) 지방세포분화 측정
세포의 형태를 관찰하여 세포 모양이 둥글어지고 세포질 내부가 지방으로 채워진 정도를 광학현미경으로 관찰하였다.
2) 지방세포 수 측정
세포배양판에 붙어있는 세포를 수습하여 현미경을 이용하여 헤마사이토미터로 세포수를 측정하였다.
3) 오일 레드 O(Oil Red O) 염색
생체 외 실험으로 전구지방세포(pre-adipocyte)인 3T3-L1 세포가 지방세포의 대사과정을 연구하는데 널리 이용되고 있다.
3T3-L1 세포를 배양액을 이용하여 5%로 이산화탄소가 공급되는 배양기에서 온도는 37 ℃로 배양하였다. 배양액은 10% FBS(fetal bovine serum, 페이틀 보빈 세럼)과 항생제(antibiotics)가 포함된 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's media)을 사용하였다.
2~3일 간격으로 배양세포 표면을 인산완충염 용액 PBS(phosphate buffered saline)으로 세척한 후 0.5% 트립신(trypsin)을 넣고 처리하여 세포를 탈착시켜 계대 배양하였다.
세포를 개별 실험에 사용할 때는 분화유도물질인 인슐린 5 ㎍/㎖, DEX(dexamethasone, 덱사메타손) 0.25uM, MIX(1-methyl-3-methylxanthine, 1-메틸-3-메틸잔틴) 0.5 mM 이 함유된 분화유도 배양액으로 교환하여 1-3일간 배양하여 지방세포로 분화를 유도하였다.
배양 3일 후 인슐린만 함유하는 배지로 2~3일간 배양한 후 인슐린을 제거한 배양액으로 바꾸고, 중성지방으로 유입되는 포도당 측정 실험이나 포도당 산화 실험시에는 10~12일 째에 저농도 (5 mM) 포도당을 함유한 배양액으로 배양하였다.
의이인탕의 농도를 일반적인 세포실험에서 세포에 손상을 주지 않는 농도인 100g/ml로 설정하여 분화유도 전 및 분화유도 후의 3T3-L1 세포에 처리하였다.
5-3. 실험 결과
도 3은 3T3-L1 지방전구세포 분화 전, 3T3-L1 지방전구세포 분화 후, 3T3-L1 지방전구세포에 의이인탕을 투여한 후의 지방전구세포 양상을 나타낸 사진이다.
실험 결과, 의이인탕을 처리하지 않은 3T3-L1 세포와 의이인탕을 처리한 3T3-L1 세포를 비교했을시 의이인탕을 처리한 3T3-L1 세포의 지방 축적율이 현저히 감소함을 확인할 수 있었다.
실험예
6. 의이인탕의 체중 감량 효능
6-1. 실험 준비
4주령의 C57BL/6J 계의 수컷 랫을 중앙실험동물(Korea)에서 공급받아 온도 22±1, 습도 50±5%에서 밤낮을 12시간씩 조절하고 물과 식이를 공급하였다.
정상군에 공급된 식이는 중앙동물실험으로부터 구입한 펠렛 타입(pellet type)의 로덴트 다이어트(pellet type rodent Diet) 10% Kcal 지방 사료(D12450B, Research Diets Co.,)를 공급하였으며, 고지방사료의 경우 역시 펠렛 타입의 로덴트 다이어트 45% Kcal 지방 사료(D12451, Research Diets Co.,)를 사용하였다.
정상 식이군의 경우, 4주령의 랫을 1주간 적응시킨 후 비만 유도를 위해 45% kcal 지방 사료를 공급하여 4주간 비만을 유도하였으며, 비만 유도 후 6주간 실험하였다. 실험군은 정상 식이군(ND군), 고지방 식이군(NFD군), 의이인탕 투여군(NFD+C군)으로 나누어 실험을 진행하였다.
의이인탕 투여군의 실험은 고지방 식이군에 의이인탕 500 mg을 물 0.2 ml에 용해시켜 존대로 1일 1회 매일 같은 시간 경구 투여하여 진행되었다. 실험동물은 부산대학교 인스티튜셔널 애니멀 애틱스 커미티(Institutional Animal Ethics Committee) 규정에 따랐고, 각 군의 분류는 난괴법에 따라 분류하였다.
하단의 [표 7]은 정상 식이군과 고지방 식이군의 식이 성분의 조성을 비교한 결과이다.
|
10% kcal 지방 사료 | 45% kcal 지방 사료 | |||
gm% | kcal% | gm% | kcal% | ||
단백질 | 19.2 | 20.0 | 24 | 20 | |
탄수화물 | 67.3 | 70 | 41 | 35 | |
지방 | 4.3 | 10 | 24 | 45 | |
총 량 | 100 | 100 | |||
kcal/gm | 3.85 | 4.73 | |||
영양 | gm | kcal | gm | kcal | |
카제인(casein) 80mesh | 200 | 800 | 200 | 800 | |
L-시스테인(cysteine) | 3 | 123 | 3 | 12 | |
옥수수 전분 | 315 | 1,200 | 72.8 | 291 | |
말토덱스트린(maltodextrin) 10 | 35 | 140 | 100 | 400 | |
자당 | 350 | 1,400 | 172.8 | 691 | |
셀룰로스(cellulose),BW200 | 50 | 0 | 50 | 0 | |
콩기름 | 25 | 225 | 25 | 225 | |
라드(lard) | 20 | 180 | 177.5 | 1.598 | |
미네랄 믹스(mineral mix) S10026 | 10 | 0 | 10 | 0 | |
다이칼슘 인산(dicalcium phosphate) | 13 | 0 | 13 | 0 | |
다이칼슘 탄산염(dicalcium carbonate) | 5.5 | 0 | 5.5 | 0 | |
다이칼슘 시트로산염(potassium citrate) 1H20 | 16.5 | 0 | 16.5 | 0 | |
비타민 믹스(vitamin mix) V10001 | 10 | 40 | 10 | 40 | |
콜린 주석산염(choline bitartrate) | 2 | 0 | 2 | 0 | |
FD&C 옐로 다이 (Yellow Dye) #40 | 0.05 | 0 | 0 | 0 | |
FD&C 레드 다이 (Red Dye) #40 | 0 | 0 | 0.05 | 0 | |
FD&C 블루 다이 (Blue Dye) #1 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
총 량 | 1,055.05 | 4,057 | 858.15 | 4,057 |
6-2. 실험 과정
C57BL/6J mice의 체중을 매일 측정하여 체중의 변화를 기록하였으며, 매일 오후 4시에 공급하는 식이량과 잔여 식이량을 조사하여 섭취량을 확인하였다.
6-3. 실험 결과
하단의 [표 8]은 식이를 각각 달리 하여 섭취한 각 군들의 체중 변화를 나타낸 결과이다.
군 | 섭취 전 시작 체중(g) | 섭취 후 최종 체중(g) | 증가 체중(g/week) | 식이 섭취량(g/day) |
정상 식이군 |
17.56±1.68 | 23.84±1.08 | 6.28±1.38 | 2.51±0.26 |
고지방 식이군 | 15.74±1.32 | 33.74±2.13 | 18.00±1.73 | 2.64±0.77 |
의이인탕 투여군 | 18.64±0.93 | 30.60±2.15 | 11.96±1.54 | 2.42±0.49 |
측정 결과, 체중의 증가를 보면 정상 식이군이 6.28±1.38 g/week 의 증가를 보이는데 반해 고지방 식이군의 체중 증가는 18.00±1.73 g/week으로 약 3배의 체중 증가를 확인할 수 있다. 의이인탕 투여군의 체중도 11.96±1.54 g/week의 증가량을 나타내면서 고지방만 섭취한 군보다 의이인탕을 함께 섭취한 군에서 체중 증가 억제효과가 있는 것을 확인할 수 있다. 세 군의 식이 섭취량은 큰 차이가 없었다.
실험예
7. 의이인탕의 혈중 콜레스테롤 조절 효능
7-1. 실험 준비
C57BL/6J 마우스에 10주간 정상 식이군과 고지방 식이군 그리고 고지방 식이군에 의이인탕을 투여한 후, 조레틸 2.0과 에탄올을 3:1 비율로 섞어 마리당 0.3 ml씩 마우스의 복강에 주사하였다.
마취상태에서 마우스의 배를 개복한 후 채혈하고, 복부 지방을 적출하였다. 혈액 시료는 해부 직후 간문맥에서 채혈하였고, 채혈한 시료의 절반은 헤파린(Heparin) 튜브에 보관하였다. 잔여 시료는 진공튜브에 넣어 10,000 rpm에서 15분간 원심분리하여 상층액을 사용하였다.
헤파린으로 처리된 의이인탕은 혈장 의이인탕로 사용하였고, 처리되지 않은 응고된 부분을 제거한 것을 혈청 의이인탕로 회수하였다.
7-2. 실험 과정
채취한 혈액으로 혈중 지질 농도를 분석하였다. 혈장 내 총 콜레스테롤 농도와 중성지질 농도, HDL-콜레스테롤 농도, LDL-콜레스테롤 농도를 측정하여 혈장 지질 농도를 분석하였다.
7-3. 실험 결과
하단의 [표 9]는 각 군별 혈청 내 콜레스테롤 및 중성 지방의 함량을 나타낸 결과이다.
군 | 정상 식이군 | 고지방 식이군 | 의이인탕 투여군 |
혈청 | |||
총 콜레스테롤 | 132.41±39.82 | 252.61±34.99 | 132.27±27.20 |
HDL 콜레스테롤 | 64.76±13.23 | 28.40±6.44 | 78.74±8.81 |
HDL 콜레스테롤/총 콜레스테롤의 비율 | 0.30±0 .002 |
0.11±0.004 | 0.60±0.002 |
LDL 콜레스테롤 | 48.06±22.14 | 182.78±22.28 | 32.32±16.39 |
중성 지방 | 97.93±22.28 | 207.14±31.39 | 106.06±10.01 |
여기에서, 총 콜레스테롤의 정상 범위는 130~250 mg/이며, 중성 지방의 정상 범위는 남자의 경우 50~155 mg/dl, 여자의 경우 40~115 mg/dl이다. 또한 HDL 콜레스테롤의 정상 범위는 남자의 경우 30~65 mg/dl, 여자의 경우 35~80 mg/dl이다.
혈청 내에 존재하는 혈중 지질 농도를 분석한 결과 총 콜레스테롤 양은 정상 식이군 132.41±39.82, 고지방 식이군 252.61±34.99, 의이인탕 투여군 132.27±27.20으로 분석되었으며, 총 HDL (high density lipoprotein, 고밀도 지질단백질)양은 정상 식이군 64.76±13.23, 고지방 식이군 28.40±6.44, 의이인탕 투여군 78.74±8.81으로 분석되었다.
총 LDL(low density lipoprotein, 저밀도 지질단백질) 양은 정상 식이군 48.06±22.14, 고지방 식이군 182.78±22.28, 의이인탕 투여군 106.06±10.01로 분석되었으며, 총 중성 지방(Triglyceride, 트리글리세라이드) 양은 정상 식이군 97.93±22.28, 고지방 식이군 207.14±31.39, 의이인탕 투여군 106.06±10.01로 분석되었다.
분석결과를 근거로 볼 때, 총 콜레스테롤 양은 정상 식이군, 의이인탕 투여군에서 정상치를 보였으며 고지방 식이군의 경우 정상치보다 높은 양을 확인 할 수 있다. 이는 총 중성 지방 양과 총 LDL 양이 많기 때문인 것으로 보인다.
또한 총 LDL 콜레스테롤 양은 고지방 식이군에서 가장 적은 양이 확인되었다. 이는 고탄수화물 식이, 고지방 식이를 할 경우 나타나는 것으로, 비만을 유도한 고지방 식이군의 경우 정상 식이군에 비해 낮은 수치가 나오는 것으로 해석된다. 따라서 의이인탕을 투여하였을 경우, 혈중 콜레스테롤의 함량을 적절하게 조절함으로써 비만을 억제하는 효능이 되는 것을 알 수 있다.
실험예
8. 의이인탕의 혈당 강하 효능
8-1. 실험 과정
혈당의 측정은 1주일 간격으로 12시간 절식시킨 후 간이 혈당계로 측정하였다.
채혈은 12시간 공복 후에 마우스의 꼬리정맥으로부터 하였으며, 혈장의 인슐린 농도 측정은 헤파린이 처리된 튜브에 혈액 수집 후 원심분리하여 혈장을 분리하였다.
인슐린 농도는 ELISA(enzyme-linked immunospecific assay) 법을 따라 랫/마우스 인슐린 ELISA 키트(rat/mouse insulin ELISA kit)를 사용하여 인슐린 농도를 측정하였다.
8-2. 실험 결과
도 4는 정상 식이군, 고지방 식이군, 의이인탕 투여군에서의 혈중 인슐린 농도 변화를 나타낸 그래프이다.
혈중 인슐린 농도는 고지방 식이군에서 가장 높게 나타났다. 이는 고지방 식이군에서 비만으로 인한 당뇨가 나타나기 시작했다고 분석할 수 있으며, 또한 고농도의 당을 분해하기 위해 인슐린이 과다분비 되었다고 해석할 수 있다.
의이인탕 투여군의 경우 고지방 식이군과 비교해볼 때 혈당 강하작용이 높은 것으로 볼 수 있으며, 정상 식이군과의 비교에서도 정상치 수준의 혈중 인슐린 농도를 보이는 것으로 보아 의이인탕이 혈당 조절에도 영향을 미친다는 것을 알 수 있다.
실험예
9. 의이인탕의 간 조직 지질 함량 억제 효능
9-1. 실험 준비
C57BL/6J 마우스에 10주간 정상 식이군과 고지방 식이군 그리고 고지방 식이군에 의이인탕을 투여한 후, 조레틸 2.0과 에탄올을 3:1 비율로 섞어 마리당 0.3 ml씩 마우스의 복강에 주사하였다.
마취상태에서 마우스의 배를 개복한 후 채혈하고, 간과 신장을 적출하였다. 혈액 시료는 해부 직후 간문맥에서 채혈하였고, 채혈한 시료의 절반은 헤파린(Heparin) 튜브에 넣었으며, 잔여 시료는 진공튜브에 넣어 10,000 rpm에서 15분간 원심분리하여 상층액을 사용하였다. 헤파린으로 처리된 의이인탕은 혈장 의이인탕로 사용하였고, 처리되지 않은 응고된 부분을 제거한 것을 혈청 의이인탕로 회수하였다.
9-2. 실험 과정
간 조직의 지질 함량은 간 지방 조직내 중성 지방과 총 콜레스테롤 함량을 측정하였으며, 지방 조직 중 LPL 활성을 측정하여 확인하였다.
실험을 위해 적출한 간은 0.25M의 자당(sucrose) 용액에 주입하고 호모게나이저(Homogenizer)에 균질화한 후 2,500 rpm에서 10분간 원심분리하였다. 회수한 상층액은 다시 10,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 그 상층액을 실험에 사용하였다.
혈장 총 콜레스테롤 농도 측정은 Allain의 효소법을 응용한 총 콜레스테롤 측정용 시액(아산제약 kit)으로 정량하였으며, 혈장 중성 지질 함량 측정은 McGowan 등의 효소법을 이용하여 발색법 원리에 따라 중성 지질 측정용 시액(아산제약 kit)으로 측정하였다.
혈장 HDL 콜레스테롤 농도 측정은 측정용 시액으로 측정하였으며, 혈장 내 LDL 콜레스테롤 농도는 Friedewald의 계산식으로 구하였다.
9-3. 실험 결과
하단의 [표 10]는 각 군별 간 내 콜레스테롤 및 중성 지방의 함량을 나타낸 결과이다.
군 | 정상 식이군 | 고지방 식이군 | 의이인탕 투여군 |
간 | |||
총 콜레스테롤 | 128.92±65.06 | 230.87±74.03 | 126.98±12.55 |
HDL 콜레스테롤 | 80.53±2.79 | 20.69±4.31 | 58.06±1.38 |
HDL 콜레스테롤/총 콜레스테롤의 비율 |
0.62±0.003 | 0.09±0.001 | 0.46±0.004 |
LDL 콜레스테롤 | 26.80±11.59 | 157.13±52.15 | 32.66±11.17 |
중성 지방 | 107.93±21.53 | 265.25±87.81 | 181.29±76.09 |
간 내 존재하는 혈중 지질 농도를 분석한 결과 총 콜레스테롤 양은 정상 식이군 128.92±65.06, 고지방 식이군 230.87±74.03, 의이인탕 투여군 126.98±12.55로 분석되었으며, 총 HDL 콜레스테롤 양은 정상 식이군 80.53±2.79, 고지방 식이군 20.69±4.31, 의이인탕 투여군 58.06±1.38으로 분석되었다. 의이인탕을 투여시 총 HDL 콜레스테롤 양이 증가했음을 알 수 있다.
총 LDL 콜레스테롤 양은 정상 식이군 26.80±11.59, 고지방 식이군 157.13±52.15, 의이인탕 투여군 32.66±11.17으로 분석되었으며, 총 중성 지방 양은 정상 식이군 107.93±21.53, 고지방 식이군 265.25±87.81, 의이인탕 투여군 181.29±76.09로 분석되었다. 의이인탕을 투여시 총 LDL 콜레스테롤 양이 감소했음을 알 수 있다.
실험예
10. 의이인탕의 혈청 내
렙틴
감소 효능
10-1. 실험 과정
렙틴(leptin)은 지방조직에서 분비하는 체지방을 일정하게 유지하기 위한 호르몬이다. 렙틴이 뇌에 이르게 되면 체지방률 저하, 먹이섭취량 저하, 혈당량 저하 등을 야기하고, 대사효율이나 활동량이 증가하여 체중이 서서히 줄어든다. 렙틴 유전자 또는 렙틴 수용체 유전자에 결함이 있는 마우스는 극도의 비만 상태가 되고, 이어서 당뇨병이 발증한다.
렙틴은 뇌 이외에도 각종 말초 조직에 작용하여 생식이나 면역기능 조절, 당 지질 대사의 조절작용 등 다양한 호르몬 작용을 발휘한다. 따라서 혈중 렙틴의 농도를 체내의 지방 축적 정도를 확인하는 지표로서 활용하였다.
혈액에서 원심분리기로 분리하여 -76 ℃에 보관되어 있던 혈청을 이용하여 렙틴 농도를 측정하였다. 상품화된 키트(Mediagnost, Aspenhaustrasse, Reutlingen, Germany)를 사용하여 방사면역 측정법(Radioimmuno assay, RIA)으로 측정하였으며, 이 측정법의 민감도는 0.1 ng/ml로 하였다.
10-2. 실험 결과
도 5는 정상 식이군, 고지방 식이군, 의이인탕 투여군에서의 혈청 내 렙틴 농도 변화를 나타낸 그래프이다.
실험 결과 정상 식이군의 렙틴 농도는 1.44±0.25, 고지방 식이군은 7.19±0.73, 의이인탕 투여군은 3.14±1.56 ng/ml로 분석되었다. 따라서 의이인탕을 투여할 경우 체내 지방 축적 억제에 효과가 있는 것으로 확인되었다.
실험예
11. 의이인탕의 장기 중량 감소 효능
11-1. 실험 준비
C57BL/6J 마우스에 10주간 정상 식이군과 고지방 식이군 그리고 고지방 식이군에 의이인탕을 투여한 후, 조레틸 2.0과 에탄올을 3:1 비율로 섞어 마리당 0.3 ml씩 마우스의 복강에 주사하였다.
마취상태에서 마우스의 배를 개복한 후 채혈하고, 간, 신장, 부고환을 적출하였다. 혈액 시료는 해부 직후 간문맥에서 채혈하였고, 채혈한 시료의 절반은 헤파린(Heparin) 튜브에 넣었으며, 잔여 시료는 진공튜브에 넣어 10,000 rpm에서 15분간 원심분리하여 상층액을 사용하였다. 헤파린으로 처리된 의이인탕은 혈장 의이인탕로 사용하였고, 처리되지 않은 응고된 부분을 제거한 것을 혈청 의이인탕로 회수하였다.
11-2. 실험 과정
간, 신장, 부고환을 적출하여 4℃의 생리식염수로 씻어내고, 수분을 여과지로 제거한 후, 중량을 측정하였다.
11-2. 실험 결과
하단의 [표 11]은 각 군별 장기 중량을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
군 | 간 | 신장 | 부고환 |
정상 식이군 | 1.06± 0.12 | 0.20 ±0.02 | 0.58± 0.09 |
고지방 식이군 | 1.36± 0.12 | 0.23 ±0.01 | 2.14 ±0.95 |
의이인탕 투여군 | 1.16 ±0.08 | 0.21± 0.01 | 1.06 ±0.27 |
간의 중량은 정상 식이군에서 체중 100g 당 1.06±0.12g, 고지방 식이군은 1.36±0.12g 의이인탕 투여군은 1.16±0.08g의 중량이 측정되었다. 고지방 식이군의 간 중량이 증가한 것은 체중과 체지방이 증가하면서 간의 지방 축적량이 증가하게 되고, 그로 인해 간의 중량이 증가하는 것으로 사료된다. 의이인탕 투여군의 경우 의이인탕을 투여함으로서 고지방 식이군과 비교해볼 때 지방간 억제 활성이 증가하였음을 확인할 수 있었다.
신장의 중량은 정상 식이군에서 체중 100g당 0.20±0.02, 고지방 식이군은 0.23±0.01g 의이인탕 투여군은 0.21±0.01g의 중량이 측정되었다. 각 군별로 큰 차이는 없었지만 그 중 고지방 식이를 한 고지방 식이군의 신장이 가장 무거운 것으로 확인되었다.
부고환의 중량은 정상 식이군에서 체중 100g당 0.58±0.09, 고지방 식이군은 2.14±0.95g, 의이인탕 투여군은 1.06±0.27g의 중량이 측정되었다. 고지방 식이군에서 2.14±0.95 g으로 가장 무거웠고, 정상 식이군이 0.58±0.09g의 양으로 세 군 중 가장 가벼웠다. 의이인탕 투여군의 경우 고지방 식이군에 비해 지방 축적 억제 활성이 증가하였음을 확인할 수 있었다.
실험예
12. 의이인탕의 간 독성 및 신장 독성 측정
12-1. 실험 과정
의이인탕 투여시의 체내 안전성을 확인하기 위하여 간 독성 및 신장 독성을 측정하였다.
간 독성의 측정은 AST, ALT, γ-GTP 농도를 -Reitman-Frankel의 효소법을 응용한 GOT, GTP 측정용 시액(아산제약 kit)을 사용 분석하였으며, 신장 독성 측정은 BUN농도를 Urease-Indophenol 법을 사용하여 분석하였다.
12-3. 실험 결과
하단의 [표 12]는 각 군별 간 독성 및 신장 독성을 나타낸 결과이다.
군 | 정상 식이군 | 고지방 식이군 | 의이인탕 투여군 |
혈청 | |||
AST(karmen unit) | 4.10±0.96 | 6.99±0.95 | 4.35±0.96 |
ALT(karmen unit) | 3.24±0.53 | 3.49±0.35 | 1.87±0.46 |
γ-GTP(mU/ml) | 38.10±11.45 | 66.82±8.75 | 22.51±6.44 |
BUN(mg/dl) | 7.12±1.74 | 21.38±2.94 | 8.13±2.94 |
간 | |||
AST(karmen unit) | 7.60±0.63 | 8.11±0.52 | 7.54±0.45 |
ALT(karmen unit) | 3.01±0.39 | 10.07±0.61 | 7.93±0.70 |
γ-GTP(mU/ml) | 39.51±9.01 | 83.90±15.16 | 46.01±11.24 |
BUN-E(mg/dl) | 18.96±4.6 | 27.51±4.67 | 18.23±3.74 |
여기에서, ALT의 정상 범위는 0~30 karmen이며, AST의 정상 범위는 0~40 karmen이다. 또한 γ-GTP의 정상 범위는 0~61.7 mU/ml이며, BUN의 정상 범위는 7.5~20.0mg/dl이다.
AST, ALT는 간이 손상되면 활성화되는 효소로 그 양을 측정하면 간의 손상 정도를 수치로 표현할 수 있다. 이 값이 높을 수록 간의 손상도가 높음을 알 수 있다.
혈청을 분석한 결과 ALT, AST, γ-GTP는 정상 식이군의 경우 4.10±0.96, 3.24±0.53, 38.10±11.45, 고지방 식이군은 6.99±0.95, 3.49±0.35, 66.82±8.75, 의이인탕 투여군에서는 4.35±0.96, 1.87±0.46, 22.51±6.44의 분석결과를 확인하였다.
간에서, ALT, AST, γ-GTP는 정상 식이군의 경우 7.60±0.63, 3.01±0.39, 39.51±9.01, 고지방 식이군은 8.11±0.52, 10.07±0.61, 83.90±15.16, 의이인탕 투여군에서는 7.54±0.45, 7.93±0.70, 46.01±11.24 결과를 확인하였다. 따라서 의이인탕의 경우 혈청과 간의 분석 결과 정상 식이군과 거의 동일한 수준을 나타내어, 고지방 식이군에서 손상된 간에 의이인탕을 투여할시 간 손상이 회복되는 것으로 확인되었다.
BUN은 혈중 요소의 농도를 측정하는 것으로 신기능의 지표가 된다. 분석결과 혈청에서 BUN농도는 정상 식이군의 경우 7.12±1.74, 고지방 식이군은 21.38±2.94, 의이인탕 투여군은 8.13±2.94로 확인되었으며, 간에서 BUN농도 분석결과 정상 식이군의 경우 18.96±4.6, 고지방 식이군은 27.51±4.67, 의이인탕 투여군은 18.23±3.74로 확인되었다.
따라서 BUN 분석 결과 의이인탕 투여군의 경우 BUN농도는 정상 식이군과 거의 동일한 농도로 확인되었다. 고지방 식이군에 의이인탕을 투여함으로서 서 손상된 신장 기능이 회복되는 것을 알 수 있다.
Claims (8)
- 의이인 3~6 중량부와, 마황 1.2~3 중량부, 당귀 1.2~3 중량부, 백출 1.2~3 중량부, 계지 1~2 중량부, 작약 1~2 중량부, 감초 0.5~1 중량부를, 혼합 추출하거나 각각 추출하여 혼합한 의이인탕을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 추출 용매는 물, 50 중량% 에탄올 또는 100 중량% 에탄올인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 의이인탕은, 체중을 감량시키는 효능, 지방전구세포의 분화를 억제하는 효능, 혈중 렙틴의 함량을 감소시키는 효능, 혈중 HDL 콜레스테롤은 증가시키고 LDL 콜레스테롤은 감소시키는 효능을 보유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 의이인탕은, 염증을 억제하는 효능, 혈당을 강하하는 효능, 간 조직 내의 지질 함량을 감소시키는 효능, 간독성 및 신장 독성이 없는 효능, 간, 신장 및 부고환의 중량을 감소시키는 효능을 보유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 의이인탕은 랫의 섬유아세포 기준으로 10 ~ 100 μg/ml 인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 의이인 복합물은 랫 기준으로 1일 1회 400 ~ 600 mg 경구 투여하는 것을 특징으로 하는 조성물.
- 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 기재된 조성물을 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 개선을 위한 식품 조성물.
- 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 기재된 조성물을 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 개선을 위한 의약외품 조성물.
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KR1020130021797A KR101392715B1 (ko) | 2013-02-28 | 2013-02-28 | 의이인탕을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물 |
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KR1020130021797A KR101392715B1 (ko) | 2013-02-28 | 2013-02-28 | 의이인탕을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물 |
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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KR101888475B1 (ko) * | 2018-02-23 | 2018-08-14 | 주식회사 위드내추럴 | 한약재를 이용한 체중감량용 조성물 |
KR101888471B1 (ko) * | 2018-02-23 | 2018-08-14 | 주식회사 위드내추럴 | 한약재를 이용한 체중감량용 조성물 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20060002087A (ko) * | 2004-07-01 | 2006-01-09 | 김지현 | 비만억제 및 치료용 홍삼 총 사포닌과 의이인의 혼합물 |
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2013
- 2013-02-28 KR KR1020130021797A patent/KR101392715B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (1)
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Title |
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KR101888475B1 (ko) * | 2018-02-23 | 2018-08-14 | 주식회사 위드내추럴 | 한약재를 이용한 체중감량용 조성물 |
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