KR101628939B1 - 생물전환공법의 식물유래 유효성분을 함유하는 아토피 및 건성피부 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

생물전환공법의 식물유래 유효성분을 함유하는 아토피 및 건성피부 개선용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 생물전환기법(Bioconversion)을 이용하여 식물추출물을 제조하고 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제조하는 기술에 관한 것이다. 구체적으로는 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹의 혼합물을 버섯균사체와 함께 배양하여 발효추출물을 제조하고 이를 유효성분으로 함유하여 아토피 및 건성 피부에 효과적인 화장료 조성물의 제조법에 관한 것이다. 특히, 유아동 피부에 필요한 보습, 유수분 밸런스, 피부 보호 및 진정, 피부면역력 증가에 효과를 나타내고 건성 또는 민감성 피부의 항산화, 염증완화, 피부세포 보호, 피지분비 조절 등에도 효과가 있다.

Description

생물전환공법의 식물유래 유효성분을 함유하는 아토피 및 건성피부 개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition for improving atopic dermatitis and dry skin containing the botanical extracts prepared by bioconversion}
본 발명은 생물전환기법(Bioconversion)을 이용하여 식물추출물을 제조하고 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제조하는 기술에 관한 것으로, 구체적으로는 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹의 혼합물을 버섯균사체와 함께 배양하여 발효추출물을 제조하고 이를 유효성분으로 함유하여 아토피 및 건성 피부에 효과적인 화장료 조성물을 제조하는 기술에 관한 것이다.
피부는 크게 표피, 진피, 피하조직의 3개 층으로 구성되어 있는데, 이는 체내의 수분이 증발하는 것을 막는 동시에 외부 자극 및 물질로부터 피부를 보호하는 장벽으로 기능한다.
일반적으로 성인의 피부는 pH 4.7~5.8의 약산성으로, 이는 산성보호막을 형성하여 외부 자극 및 유해한 물질로부터 피부를 보호하는 기능을 한다. 아기 피부는 산성 보호막이 완전히 형성되지 않았기 때문에 pH 5.5~6.5를 나타낸다. 따라서 외부 자극 및 자외선 등에 더욱 민감하게 반응한다. 또한, 성인보다 피부가 얇고 땀과 피지의 분비가 활성화되지 않아 건조한 경향이 있다. 따라서 영유아 피부는 자극을 피하고, 건조함과 피부 장벽이 올바른 기능을 하도록 관리해주어야 한다. 대기환경 오염과 관련한 알레르기성 물질 증가, 현대인의 식습관 및 생활환경 등이 피부에까지 영향을 미치고 있다. 아토피나 알레르기 등의 피부질환을 논하지 않더라도 최근 현대인의 피부는 대체로 거칠고 건조한 특징을 띠고 있다. 이에 본 발명자들은 영유아 및 건성피부가 피부의 자가 면연력을 증가시키고, 유수분 밸런스를 유지할 수 있도록 자정작용 및 수분과 영양 저장력이 뛰어난 식물 원료를 연구하였다.
버섯 균사체는 자실체(버섯)에 영양분을 공급하며 강한 활성성분을 갖고 있기 때문에 많은 유효성분을 함유하고 있어 버섯 균사체를 이용한 제품이 많이 개발되어 오고 있다.
본 발명자들은 피부 개선 활성을 가지는 다양한 천연물들에 대하여 연구하던 중, 버섯 균사체를 이용하여 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합물을 발효시켜 제조된 추출물이 아토피 및 건성 피부에 우수한 효과를 나타내어 화장료로 유용하게 사용될 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
대한민국공개특허 제10-2003-0030488(2003.04.18.) 대한민국공개특허 제10-2014-0000546(2014.01.03.)
본 발명은 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합물을 버섯균사체로 발효시켜 제조되는 혼합발효추출물을 유효성분으로 함유하여 항산화, 피부 보습, 염증 완화, 피지 분비 조절 및 피부세포 보호효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 혼합발효추출물을 제조하는 방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합물을 버섯균사체로 발효시켜 제조되는 혼합발효추출물을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
상기 버섯균사체는 상황버섯, 치마버섯, 느타리버섯, 표고버섯, 영지버섯 및 동충하초로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이며, 더욱 바람직하게는 표고버섯 균사체이다.
상기 혼합발효추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 부틸렌글리콜, 글리세린, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매에 의한 추출물이다.
상기 화장료 조성물은 항산화, 피부 보습, 염증 완화, 피지 분비 조절 및 피부세포 보호효과를 나타낸다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, (A)상황버섯, 치마버섯, 느타리버섯, 표고버섯, 영지버섯 및 동충하초로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 버섯 균사체를 PDA(Potato Dextrose Agar) 평판배지에서 25~35℃, 바람직하게는 27~30℃의 온도에서 5~10일간 배양하여 버섯균사체를 제조하는 단계; (B)상기 버섯균사체와 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹의 혼합물을 27~30℃의 온도에서 3~5일간 함께 배양하는 단계; (C)풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 배양물을 회수하여 추출하는 단계; 및 (D)상기 추출물을 여과하는 단계를 포함하는 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물의 제조방법이 제공된다.
바람직하게는 상기 (C)단계에서의 추출은 상기 회수된 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 발효물에 5~10배 중량의 1,3-부틸렌글리콜과 정제수 3:7(w/w) 비율의 혼합 용매를 가하고, 3~5일간 침적하여 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100~120℃로 8~10시간 끓여서 추출하는 것이다.
본 발명에 따른 버섯균사체 발효 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물은 항산화, 피부 보습, 염증 완화, 피부세포 보호, 피지 분비 조절 및 피부 자극완화 효과가 우수하여, 상기 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료는 아토피 및 건성 피부에 효과적인 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명은 버섯균사체를 이용하여 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물을 제조하고, 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제조하는 기술에 관한 것이다.
버섯은 고등균류의 일종인 담자균류에 속하며 그 생물학적 위치는 곰팡이류에 속한다. 버섯은 포자가 발아하여 균사체(Mycelium)를 이루고 자실체(fruit body)로 성장하여 버섯의 모습을 갖추며, 자실체는 다시 포자를 형성하는 생장과정을 되풀이한다. 버섯균사체는 자실체(버섯)에 영양분을 공급하여 자실체를 성장시키는 에너지를 간직하고 있는 만큼 강한 활성성분을 갖고 있기 때문에 많은 유효성분을 함유하고 있고 이로 인해 그 효과도 뛰어나다. 균사체에는 자실체보다 각종 영양소가 약 4배정도 더 함유되어 있고 단백질, 아미노산, 비타민, 무기질, 효소 등 영양이 풍부하고 균사체는 우수한 흡수력과 번식력을 갖고 있으며 그로 인해 버섯 식용부분 보다 훨씬 많은 에너지를 보유하고 있다. 따라서 버섯의 에너지의 핵심은 균사체에 있다고 볼 수 있다.
사과는 낙엽과수의 왕으로 다량의 비타민, 미네랄 및 아미노산을 함유하고 있으며 피부 노화 방지, 피부 미백 효과 및 피부 보습 효과를 갖는다.
연근은 뮤신 및 펙틴 등의 성분들을 함유하고 있어 건조한 피부를 보호하는 얇은 막을 형성하게 해주어 탄력 있고 부드러운 피부로 유지시키는데 도움을 주는 것으로 알려져 있다. 연근은 수분과 양분을 잎과 꽃에 전달해주는 통로 역할을 하는 동시에, 수분과 영양분을 저장하는 뿌리의 기능을 한다. 특히, 연근에 있는 실처럼 끈끈한 점액인 '뮤신'은 세포의 주성분인 단백질의 소화를 촉진시켜주는데, 이는 피부에 적용했을 때 수분채널 단백질(아쿠아포린)을 활성화 시키는 효과를 기대할 수 있다.
녹나무는 제주도에선 상처를 입거나 병으로 인해 목숨의 경각에 다다른 환자들에게 침상에 녹나무 잎과 가지를 깔아주어 방에 불을 지펴 뜨거운 열기와 증발이 된 약효 성분을 환자에게 도포하여 염증을 소독한다고 알려져 있다. 또한 강서초약에서는 화상으로 수포가 생긴 경우 녹나무 잎과 녹나무 껍질을 각 적당량을 햇볕에 말리고 태워서 재로 만들어 달걀 흰자위로 개어서 바른다고 한다. 겨울에도 잎이 떨어지지 않는 녹나무는 제주도만이 가진 우리나라의 보물이라고 할 수 있다.
호호바 나무는 미남서부나 멕시코 등지의 환경이 열악한 지역에 자생하며 수명은 100년 정도이며 높이 3m까지 자라는 상록관목이다. 호호바 씨는 단백질, 미네랄 등의 성분을 포함하고 있어 피지 분비 조절 및 피부 모공속의 노폐물을 게 제거해주는 효과를 갖는다. 또한 호호바 씨를 추출 혹은 압착하여 만든 호호바씨의 오일은 사람 피부의 피지와 흡사한 화학적 구조를 가지고 있어 피부 건조증 및 각종 피부 질환에 도움을 주는 것으로 알려져 있다.
식탁위의 불로초라 불리는 브로콜리는 활성산소를 억제하는 효능이 탁월하고 해독작용의 효과도 지니고 있다. 새싹은 풍부한 영양소와 왕성한 생명력을 지니고 있으며 싹을 틔우기 전 성장에 필요한 영양소와 생명유지에 필요한 물질들을 활성화시켰다가 싹이 트는 순간 새싹 안에 응축시키고 있다. 이러한 효능을 갖는 브로콜리 싹은 항균, 항산화, 항염 및 면역력 강화 효과를 갖고 있어 외부유해 물질로부터 피부를 보호할 수 있다.
본 발명은 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합물을 버섯균사체로 발효시켜 제조되는 혼합발효추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 혼합발효추출물을 제조하기 위해서는 먼저 버섯균사체를 배양한다. 본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 버섯균사체를 배양하기 위해 Potato Dextrose Agar 배지에서 25~35℃, 바람직하게는 27~30℃의 온도에서 5~10일간 배양한다. 얻어진 상기 버섯 균사체를 접종용 칼로 잘라 Potato Dextrose Broth 배지에 접종하여 진탕 배양한다. 배양 4일 후 Waring blender를 사용하여 균체를 1초씩 5회 처리하고 10 mL를 다시 Potato Dextrose Broth(100 mL)에 접종한다.
풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합물에 준비된 상기 버섯균사체를 접종하여 27~30℃의 온도에서 3~5일간 배양하여 발효시킨다. 이어서 상기 배양물을 회수하여 5~10배 중량의 용매로 추출한다. 이때 용매로는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 부틸렌글리콜, 글리세린, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매를 사용하며, 본 발명의 바람직한 일 구체예에 따르면 3-부틸렌글리콜과 정제수를 3:7(w/w) 비율로 혼합한 혼합 용매를 가하고, 3~5일간 침적하여 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100~120℃로 8~10시간 끓여서 추출한다. 이어서 상기 추출물을 여과하여 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물을 제조한다.
이때, 상기 버섯균사체로는 상황버섯, 치마버섯, 느타리버섯, 표고버섯, 영지버섯 및 동충하초로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 버섯 균사체를 사용하며, 바람직하게는 영지버섯, 표고버섯 또는 치마버섯 균사체를, 더욱 바람직하게는 표고버섯 균사체를 사용하여 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합물을 발효시킨다.
상기 버섯균사체를 이용하여 제조된 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물을 제조하고 그 활성을 평가한 결과, 그 상승작용에 의하여 우수한 항산화 효과(시험예 1), 보습관련인자 발현증가 효과(시험예 2), 염증 매개인자 발현 억제효과(시험예 3), 피부 세포보호 효과(시험예 4), 피지 분비 조절 효과(시험예 5) 및 피부 자극완화 효과(시험예 6)를 나타내었다.
이때 유효성분으로서의 상기 혼합발효추출물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10중량% 함유된다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 그 예로는 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 콘디셔너, 헤어 젤, 화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스 등을 들 수 있다.
[실시예]
이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.
제조예 1~3: 버섯 균사체 제조
먼저, 영지버섯, 표고버섯 및 치마버섯을 균주로 하여 Potato Dextrose Agar(PDA, DIFCO, USA) 평판배지에 계대 배양하여 사용하였다. 영지버섯, 표고버섯 및 치마버섯 균사체를 PDA 배지에서 30℃ 정도의 온도에서 10일간 배양하였다. 얻어진 상기 버섯 균사체를 접종용 칼로 잘라 Potato Dextrose Broth 배지에 접종하여 진탕 배양한다. 배양 4일 후 Waring blender를 사용하여 각각의 균체를 1초씩 5회 처리하고 10mL를 다시 Potato Dextrose Broth(100 mL)에 접종하여 버섯 균사체를 준비한다.
실시예 1: 버섯균사체 발효 혼합추출물 제조
상기 배양된 표고버섯 균사체를 이용하여 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리싹 혼합발효추출물을 제조하였다. 하기 표 1의 비율로 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹을 혼합하여 혼합물을 제조하였다. 상기 혼합물을 표고버섯 균사체와 혼합 한 뒤, 27~30℃의 온도에서 5일간 배양하여 발효시켰다. 발효물을 회수하여 10배 중량의 1,3-부틸렌글리콜과 정제수 3:7 (w/w) 비율의 혼합 용매에 혼합하고, 3일간 침적하여 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출하였다. 여과지(Qualitive Filter Papers NO.2)를 이용하여 여과한 후 여액 상태로 수득하였다.
비교예 1~4: 버섯균사체 발효 추출물 제조
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 하기 표 1에 기재된 비율에 따라 버섯 균사체 발효 추출물을 제조하였다. 비교예 1로는 보습 효능을 갖는 것으로 알려진 천연물인 풋사과, 연근 혼합물을, 비교예 2로는 항염 효능을 갖는 것으로 알려진 녹나무 잎을, 비교예 3으로는 피지 분비 조절 효능을 갖는 것으로 알려진 호호바 씨를, 비교예 4로는 피부 보호 효능을 갖는 것으로 알려진 브로콜리 싹을 사용하여 발효추출물을 제조하였다.
순번 천연물 실시예 1 비교예 1 비교예 2 비교예 3 비교예 4
1 풋사과 30g 30g - - -
2 연근 30g 30g - - -
3 녹나무 잎 30g - 30g - -
4 호호바 씨 30g - - 30g -
5 브로콜리 싹 30g - - - 30g
실시예 2: 버섯균사체 발효 추출물을 함유하는 로션의 제조
상기 실시예에서 제조된 버섯 균사체 혼합발효추출물을 함유하는 로션을 하기의 표 2의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.
(중량%) 대조예 비교예 5 비교예 6 비교예 7 비교예 8 실시예 2
비교예 1 - 0.5 - - - -
비교예 2 - - 0.5 - - -
비교예 3 - - - 0.5 - -
비교예 4 - - - - 0.5 -
실시예 1 - - - - - 0.5
밀납 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
폴리솔베이트 60 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
솔비탄 세스퀴올레이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
유동 파라핀 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
소르비탄 스테아레이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
친유형 모노스테아린산 글리세린 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
스테아린산 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
글리세릴스테아레이트/
피이지-400 스테아레이트		 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
프로필렌글리콜 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
카르복시폴리머 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
트리에탄올아민 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100
시험예 1: NBT법을 이용한 항산화 효과 측정 실험
실시예 1 에서 수득한 풋사과, 연근, 녹나무잎, 호호바씨 및 브로콜리싹 혼합발효추출물의 항산화 효과를 확인하기 위해 실험실 조건에서 다른 항산화제 즉, BHT를 비교샘플로 하여, NBT법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다. 항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가하였다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성된 활성산소를 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응시켜 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정하였으며, 구체적인 활성산소 소거율 측정방법은 다음과 같다.
바이알(5ml vial)에 0.05M Na2CO3 2.4ml, 3mM 크산틴 용액 0.1ml, 3mM EDTA 용액 0.1ml, BSA 용액 0.1ml 및 0.72mM NBT 용액 0.1ml를 가하고, 여기에 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 0.1(wt/v)% 농도로 제조한 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다. 그 후 크산틴 옥시다제 용액 0.1ml을 가하여 빨리 교반하고 25℃ 에서 20분간의 배양을 개시한다. 그 후 6Mm CuCl2 용액 0.1ml을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다. 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다. 효과의 결과는 하기 식에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕× 100
St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도
시료명 처리농도(w/v%) 항산화효과(%)
실시예 1 0.1 93
비교예 1 0.1 88
비교예 2 0.1 81
비교예 3 0.1 86
비교예 4 0.1 86
BHT(butylated hydroxyanisole, DUKSAN KOREA) 0.1 90
상기 표 3에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 항산화 효과를 확인할 수 있었다. 특히 버섯균사체를 이용하여 발효시킨 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물은 우수한 항산화 효과를 나타냈을 뿐만 아니라, BHT 보다 우수한 항산화 효과를 나타내었다.
시험예 2: 보습 관련인자 발현증가효과 확인
섬유아세포(CCD-986Sk)를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 Hyaluronan Synthase-3(HAS-3)의 발현 증가율을 확인하였다. HAS-3 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다. 대조군으로는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다.
HAS-3 발현율(%)=(시료 HAS-3 발현양/대조군 HAS-3 발현양)×100
시료명 처리농도(w/v%) 보습 효과(%)
실시예 1 0.1 91.2
비교예 1 0.1 88.2
비교예 2 0.1 84.9
비교예 3 0.1 85.2
비교예 4 0.1 85.1
Hyaluronic Acid(히아루론산) 0.05 85.8
상기 표 4에서 확인되는 바와 같이 0.1(w/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 보습 효과를 확인할 수 있었다. 특히 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합물을 버섯균사체로 발효시켜 제조되는 실시예 1의 추출물은 우수한 보습 효과를 나타냈을 뿐만 아니라, 히아루론산 보다 우수한 보습 효과를 나타내었다.
시험예 3: 염증 매개 인자 발현 감소효과 확인
RAW264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 12시간 동안 기아상태를 유지시킨 후, LPS 10 ng/mL과 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 TNF-α의 발현 억제율을 확인하였다. TNF-α 발현억제율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다. 대조군으로는 덱사메타손(Dexamethason)을 사용하였다.
TNF-α 발현억제율(%)=100-[(시료 TNF-α 발현양/대조군 TNF-α 발현양)×100]
시료명 처리농도(w/v%) TNF-α 발현 억제율(%)
실시예 1 0.1 70.8
비교예 1 0.1 65.8
비교예 2 0.1 66.7
비교예 3 0.1 63.5
비교예 4 0.1 64.5
덱사메타손(Dexamethason) 0.05 66.5
상기 표 5에서 확인되는 바와 같이 0.1(w/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 염증 완화 효과를 확인할 수 있었다. 특히 버섯 균사체를 이용하여 발효시킨 실시예 1의 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물은 가장 우수한 염증 완화 효과를 나타냈을 뿐만 아니라, 덱사메타손 보다 우수한 염증 완화 효과를 나타내었다.
시험예 4: 피지 분비 완화 효과 확인
각질형성세포(HaCaT)를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 5α-Reductase Type Ⅰ 의 발현 억제율을 확인하였다. 5α-Reductase Type Ⅰ 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다. 대조군으로는 덱사메타손 (Dexamethason)을 사용하였다.
5α-Reductase Type Ⅰ 발현억제율(%)=100-[(시료 5α-Reductase Type Ⅰ 발현양/대조군 5α-Reductase Type Ⅰ 발현양)×100]
시료명 처리농도(w/v%) 5α-Reductase Type Ⅰ
발현 억제율(%)
실시예 1 0.1 60.1
비교예 1 0.1 63.7
비교예 2 0.1 68.5
비교예 3 0.1 62.5
비교예 4 0.1 68.9
덱사메타손 (Dexamethason) 0.05 60.0
상기 표 6에서 확인되는 바와 같이 0.1(w/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 염증 완화 효과를 확인할 수 있었다. 특히 실시예 1의 혼합발효추출물은 가장 우수한 피지 분비 조절 효과를 나타내었다.
시험예 5 : 피부세포 보호 효과 확인
사람 유래 섬유아세포 1×105 cells/well 의 농도로 96 well plate에 배양하고 10% FBS를 함유하는 IMDM 배지 0.2㎖를 공급한 후 18시간 동안 CO2 배양기에서 배양하였다. 여기에 DMSO에 녹인 시료용액을 처리 한 다음 2 MED의 자외선 양을 10분간 조사한 후 24시간 동안 배양하였다. 이후, 세포의 생존력을 알아보기 위하여 MTT assay를 수행하였다. MTT assay는 배양한 세포에 MTT 용액 0.1㎖을 가한 후 4시간 동안 배양한 다음 배지는 제거하고 DMSO 0.5㎖를 넣어 형성된 포마잔을 ELISA를 사용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 덱사메타손을 사용하였다.
시료명 처리농도(w/v%) 세포 생존율(%)
실시예 1 0.1 82.5
비교예 1 0.1 72.5
비교예 2 0.1 76.2
비교예 3 0.1 78.8
비교예 4 0.1 78.9
덱사메타손(Dexamethason) 0.05 80.2
상기 표 7에서 확인되는 바와 같이 0.1(w/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 자외선으로부터 세포 보호 효과를 확인할 수 있었다. 특히 버섯 균사체 발효 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물은 우수한 세포 보호 효과를 나타냈을 뿐만 아니라, 덱사메타손 보다 우수한 세포 보호 효과를 나타내었다.
시험예 6: 피부 자극 완화 효과 확인
현재 피부 알레르기 증상이 없는 20 내지 30대 남녀 10명을 대상으로 하완의 안쪽 부위에 테입 스트리핑 법(Tape Stripping Method)을 통한 피부자극을 유발한 후, 본 발명에 따른 버섯균사체 발효 추출물을 함유하는 화장료와 함유되지 않는 화장료를 도포하여 유발된 자극이 진정되는 정도를 상대평가 하였다. 먼저 하완의 안쪽 부위 두 곳에 일반 스카치 테잎으로 30회 테이핑을 하여 피부 홍반을 유발하였다. 홍반 유발된 후, 본 발명에 따른 버섯균사체 발효 추출물을 함유한 화장료를 도포하였으며, 본 발명에 따른 추출물을 함유하지 않은 화장료를 도포하였다. 도포 후 3시간 후 피부자극 정도를 평가하였다.
<피부자극정도(홍반) 평가>
0 (무반응) 1 (매우 경미한 홍반흔적) 2 (희미한 또는 가벼운 홍반)
3 (경계가 뚜렷하나 약한 홍반) 4 (뚜렷한 홍반) 5 (심한 홍반)
시료명 피부 자극 정도
좌 우
실시예 2 0 0
비교예 5 2 1
비교예 6 2 1
비교예 7 1 1
비교예 8 1 1
대조예 2 2
상기 표 8에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예의 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물을 유효성분으로 함유하는 로션 조성물은 상기 혼합발효추출물을 함유하지 않은 대조예 및 비교예 5 내지 8에 비해 피부자극완화 효과가 우수하였다.

Claims (9)

  1. 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합물을 표고버섯균사체로 발효시켜 제조되는 혼합발효추출물을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유하는 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 상기 혼합발효추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 부틸렌글리콜, 글리세린, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매에 의한 추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항산화 효과를 가지는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부염증개선 및 피지 분비 조절 효과를 가지는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 삭제
  8. (A)표고버섯의 버섯 균사체를 PDA(Potato Dextrose Agar) 평판배지에서 25~35℃의 온도에서 5~10일간 배양하여 버섯균사체를 제조하는 단계;
    (B)상기 버섯균사체와 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹의 혼합물을 27~30℃의 온도에서 3~5일간 함께 배양하는 단계;
    (C)풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 배양물을 회수하여 추출하는 단계; 및
    (D)상기 추출물을 여과하는 단계를 포함하는 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물의 제조방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 (C)단계에서의 추출은 상기 회수된 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 발효물에 5~10배 중량의 1,3-부틸렌글리콜과 정제수 3:7(w/w) 비율의 혼합 용매를 가하고, 3~5일간 침적하여 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100~120℃로 8~10시간 끓여서 추출하는 것임을 특징으로 하는 풋사과, 연근, 녹나무 잎, 호호바 씨 및 브로콜리 싹 혼합발효추출물의 제조방법.















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