KR101609032B1 - 스트렙토코커스 뉴모니아 백신 제제 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 담체 단백질에 접합된, 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumoniae) 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 다수의 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하고 하나 이상의 방부제, 바람직하게는 2-페녹시에탄올(2-PE)을 추가로 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 방부제 함유 면역원성 조성물은 하나 이상의 미생물에 대한 내성을 부여하고 선택된 면역원성 조성물 중의 상이한 항원성 결정인자들의 장기간 안정성에 대한 유리한 성질을 갖는 다회 투여량(multi-dose) 백신 제제를 생성하는 데에 유용하다. 백신 제제에서 하나 이상의 방부제의 효과를 측정하기 위한 관련 조성물 및 방법도 제공된다.

Description

스트렙토코커스 뉴모니아 백신 제제{STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE VACCINE FORMULATIONS}
본 발명은 담체 단백질에 접합된, 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumoniae) 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 다수의 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하고 하나 이상의 방부제, 바람직하게는 2-페녹시에탄올(2-PE)을 추가로 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 방부제 함유 면역원성 조성물은 하나 이상의 미생물에 대한 저항성을 부여하고 선택된 면역원성 조성물 중의 상이한 항원성 결정인자들의 장기간 안정성에 대한 유리한 성질을 갖는 다회 투여량(multi-dose) 백신 제제를 생성하는 데에 유용하다. 백신 제제에서 하나 이상의 방부제의 효과를 측정하기 위한 관련 조성물 및 방법도 제공된다.
세균 스트렙토코커스 뉴모니아(폐렴구균으로도 공지되어 있음)에 의해 야기되는 폐렴구균 질환은 전세계에 걸쳐 보다 중요한 세균 병원체들 중 하나이다. 상기 질환 부담은 백신이 사용될 수 없는 개발도상국의 5세 미만의 소아에서 높다. 폐렴구균 질환은 복합 질환 군이고 소아 및 성인 둘다에 영향을 미치는 세균혈증/패혈증, 수막염, 폐렴 및 중이염과 같은 침윤성 감염을 포함한다. 프레브나르(Prevnar) 13("프레베나르 13"으로도 공지되어 있고 본원에서 "프레브(베)나르 13"으로 지칭됨)은 CRM197(코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterim diphtheriae)의 돌연변이체 균주로부터의 교차 반응성 물질)에 개별적으로 접합된, 13종의 폐렴구균 혈청형(1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F)으로부터의 폴리사카라이드들로 구성된 제제이다. 프레브(베)나르 13은 임의의 폐렴구균 접합체 백신의 가장 넓은 혈청형 범위를 제공하기 위한 유아 및 영아의 능동 면역화를 위해 권장된다. 특히, 프레브(베)나르 13 중의 혈청형 19A는 전세계의 많은 지역에서 널리 퍼져 있고 종종 항생제 내성과 관련되어 있다. 예를 들면, 국제 특허출원 공개 제WO2006/110381호, 제WO2008/079653호, 제WO2008/079732호 및 제WO2008/143709호 및 여기서 인용된 참고문헌들을 참조한다.
티메로살(티오머살 또는 머티올레이트로도 공지되어 있음)은 1930년대 초반 이후로 많은 다회 투여량 주사 제제들 및 국소 용액들에 첨가되어, 노출 동안 및 다수의 대상체에게 투여되는 때 잠재적인 오염으로부터 이들을 보호하는 에틸수은 함유 방부제이다. 티오머살은 미국 및 전세계의 나머지 지역에서 법정 면역화 및 다른 약학 제품의 일부로서 계속 투여된다. 이 방부제는 백신의 항원 구조 및 성질과 최소한으로 상호작용하면서 현장에서 제품의 다회 사용 동안 잠재적인 오염 세균을 제거하는 데에 효과적인 방부제인 것으로 주장되고 있다. 잠재적인 안전성 문제, 및 유아 및 청소년에서 뇌 발달에 대한 에틸수은의 불리한 효과에 대한 상승하는 논쟁으로 인해 일부 관청은 보다 낮은 또는 무시할 만한 안전성 위험을 갖는 대안적 방부제가 확인될 것을 권장하기 시작하였다. 1999년, 미국 의회에 의해 요구된 미국 식품의약청 보고는 몇몇 유아가 일부 국가의 지침에 따라 허용가능한 것으로 인정된 수준보다 더 많은 수은을 백신으로부터 제공받는다는 것을 밝혔다. 미국 소아과 학회(AAP) 및 미국 공중위생법(USPHS)은 백신 중의 티메로살에 대한 공동 성명을 발행한 후 안전성에 영향을 미치지 않으면서 높은 수준의 백신접종이 전세계적으로 계속 실시되도록 보장하기 위한 노력을 유지하면서 가능한 한 신속히 백신으로부터 티메로살을 제거하는 것을 권장하는 중간 보고서를 임상의들에게 배포하였다.
방부제를 백신에 첨가할 필요성은 단회 투여량 백신 제제만을 제조하여 사용함으로써 감소될 수 있거나 회피될 수 있다. 그러나, 단회 투여량 방부제 무함유 제제의 사용은 백신접종의 전체 비용을 상승시키고 개발도상국에서 면역화 프로그램의 효과를 위태롭게 한다. 또한, 다회 투여량 바이알로부터 방부제를 모두 제거하는 것은 특히 제한된 저온 저장 및 최적 미만의 건강 관리 표준을 갖는 국가에서 바람직한 방안으로서 간주되지 않는다(문헌[Drain et al., Bull World Health Organ 81(10): 726-731 (2003)]). 1928년, 오염된 디프테리아 백신으로 접종된 21명의 소아들 중 12명의 소아들이 다중 연쇄구균 농양 및 독소혈증으로 사망하였다(문헌[Wilson, The Hazards of Immunization, Athlone Press, London. pp. 75-78 (1967)]). 따라서, 다회 투여량 바이알이 덜 비싼 백신의 제조에 가장 적합한 것으로 보이지만, 다회 사용 동안 또는 하나 이상의 비멸균 사건(event) 후에 우발적으로 백신 내로 도입되는 미생물로부터 대상체를 보호하기 위해 하나 이상의 방부제를 사용하여 다회 투여량 백신을 제제화하는 것이 바람직하다. 그러나, 세균 및 다른 미생물 오염에 대해 저항하는 방부제의 효과는 특정 방부제가 면역원성에 미치는 영향뿐만 아니라 선택된 면역원성 조성물 중의 각각의 상이한 항원성 결정인자의 장기간 안정성에 미치는 영향과도 균형을 이루어야 한다. 방부제와 프레브(베)나르 13 제제의 상용가능성은 이전에 다루어지지 않았다. 프레브(베)나르 13에 존재하는 폐렴구균 항원 혈청형의 항원성 결정인자를 보호하고/하거나 안정화시키는 하나 이상의 방부제를 포함하는 최적화된 제제를 갖는 것이 바람직할 것이다.
제1 양태에서, 본 발명은 스트렙토코커스 뉴모니아 혈청형으로부터의 다수의 캡슐형 폴리사카라이드 및 2-페녹시에탄올(2-PE)을 포함하는 다가 면역원성 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터 선택된 하나 이상의 스트렙토코커스 뉴모니아 혈청형으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터 선택된 7종 이상의 스트렙토코커스 뉴모니아 혈청형으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 스트렙토코커스 뉴모니아 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F 각각으로부터 유래된다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 7 ㎎/㎖ 내지 15 ㎎/㎖, 약 10 ㎎/㎖, 7 ㎎/㎖ 이상, 10 ㎎/㎖ 이상, 또는 15 ㎎/㎖ 이상의 농도로 2-PE를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 하나 이상의 항원보강제(adjuvant), 완충제, 냉동보호제, 염, 2가 양이온, 비이온성 세제 및 자유 라디칼 산화의 억제제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원보강제는 인산알루미늄이다.
본 발명의 바람직한 다가 면역원성 조성물은 CRM197에 개별적으로 접합된, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 폐렴구균 캡슐형 폴리사카라이드의 제제이고, 이때 상기 다가 면역원성 조성물은 약 4.4 ㎍/㎖(단, 6B의 경우 약 8.8 ㎍/㎖)의 각각의 폴리사카라이드; 약 58 ㎍/㎖의 CRM197 담체 단백질; 약 0.25 ㎎/㎖의 인산알루미늄 형태의 원소 알루미늄; 약 0.85%의 염화나트륨; 약 0.02%의 폴리소르베이트 80; 약 5 mM의 석신산나트륨 완충제(5.8의 pH); 및 약 10 ㎎/㎖의 2-페녹시에탄올을 포함하도록 멸균 액체로 제제화된다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물의 항원성은 2℃ 내지 8℃, 20℃ 내지 25℃ 또는 37℃에서 1년, 1.5년, 2년 또는 2.5년 이상 동안 안정하다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물을 하나 이상의 미생물로 접종한 후, 상기 미생물의 농도는 시간에 따라 감소된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 세균 균주를 사용한 접종 후, 상기 조성물은 24시간에서 초기 미생물 총수로부터 1.0 log 이상의 감소, 7일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 3.0 log 이상의 감소, 및 28일 후 앞서 측정된 값으로부터 0.5 log 이하의 증가를 제공한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 세균 균주를 사용한 접종 후, 상기 조성물은 접종 후 6시간에서 초기 계산된 총수로부터 2.0 log 이상의 감소, 24시간에서 앞서 측정된 값으로부터 3.0 log 이상의 감소, 및 28일째 날에서 회복 없음을 제공한다. 미생물 균주는 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli) 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로부터 선택된 하나 이상의 균주를 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 다회 접종된다. 일부 실시양태에서, 제2 접종은 초기 접종 후 6시간에서 일어나고, 제3 접종은 초기 접종 후 24시간에서 일어나고, 제4 접종은 초기 접종 후 7일째 날에 일어나고, 제5 접종은 초기 접종 후 14일째 날에 일어난다.
제2 양태에서, 본 발명은 본 발명의 다가 면역원성 조성물을 함유하는 바이알도 제공한다. 바이알은 단회 투여량 또는 1회 초과 투여량의 면역원성 조성물을 함유할 수 있다. 또한, 본 발명은 본 발명의 다가 면역원성 조성물을 포함하는 예비충전된 백신 전달 장치를 제공한다. 일부 실시양태에서, 예비충전된 백신 전달 장치는 주사기이거나 주사기를 포함한다. 본 발명의 백신 전달 장치는 이중 또는 다중 챔버 주사기 또는 바이알, 또는 이들의 조합물을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 예비충전된 백신 전달 장치는 근육내 또는 피하 주사를 위해 제제화된 다가 면역원성 조성물을 포함한다.
제3 양태에서, 본 발명은 본 발명의 다가 면역원성 조성물을 제조하기 위한 키트도 제공하는데, 이때 상기 키트는 (i) 동결건조된 형태의 상기 조성물 중의 다수의 캡슐형 폴리사카라이드, 및 (ii) 수성 조성물을 제공하기 위해 성분 (i)을 재구성하기 위한 수성 물질을 포함한다.
제4 양태에서, 본 발명은 바이알 내에 4회 투여량의 백신을 포함하는 다회 투여량 백신을 제공하고, 이때 각각의 투여량은 4 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖, 바람직하게는 10 ㎎/㎖의 2-페녹시에탄올을 포함하고, 이때 투여량은 0.5 ㎖의 백신이다.
제5 양태에서, 본 발명은 백신 조성물의 면역원성 성분 및 비면역원성 성분의 일부 또는 전부의 존재 하에서 하나 이상의 선택된 방부제를 포함하는 백신 제제의 효능을 측정하는 방법도 제공하는데, 이때 시험은 적어도 하기 2 단계를 포함한다: 시험 조성물을 선택된 미생물 집단으로 접종하는 단계, 및 특정 환경 조건(예를 들면, 온도) 하에서 시간에 따른 접종된 미생물의 log 감소를 시험 방부제를 결여하는 대조군 조성물에서의 log 감소와 비교하는 단계.
도 1 - 다양한 제제들 중의 백신 방부제로서 티메로살의 효과.
도 2 - 다양한 농도에서 다양한 제제들 중의 백신 방부제로서 2-페녹시에탄올(2-PE)의 효과 및 안정성.
도 3 - 미생물의 단회 챌린지 후 20℃ 내지 25℃에서 방부제를 갖지 않은 프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 미생물 콜로니 총수 감소의 시간 경과(t=0시간, 6시간, 24시간, 7일, 14일 및 28일에서 챌린지 시점과 비교된 평균 log10 변화로서 표현됨).
도 4 - 미생물의 단회 챌린지 후 20℃ 내지 25℃에서 0.01% 티메로살을 갖는 프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 미생물 콜로니 총수 감소의 시간 경과(t=0시간, 6시간, 24시간, 7일, 14일 및 28일에서 챌린지 시점과 비교된 평균 log10 변화로서 표현됨).
도 5 - 미생물의 단회 챌린지 후 20℃ 내지 25℃에서 0.02% 티메로살을 갖는 프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 미생물 콜로니 총수 감소의 시간 경과(t=0시간, 6시간, 24시간, 7일, 14일 및 28일에서 챌린지 시점과 비교된 평균 log10 변화로서 표현됨).
도 6 - 미생물의 단회 챌린지 후 20℃ 내지 25℃에서 0.02% 티메로살을 갖는 식염수 중의 미생물 콜로니 총수 감소의 시간 경과(t=0시간, 6시간, 24시간, 7일, 14일 및 28일에서 챌린지 시점과 비교된 평균 log10 변화로서 표현됨).
도 7 - 미생물의 단회 챌린지 후 20℃ 내지 25℃에서 5 ㎎/0.5 ㎖의 2-페녹시에탄올을 갖는 프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 미생물 콜로니 총수 감소의 시간 경과(t=0시간, 6시간, 24시간, 7일, 14일 및 28일에서 챌린지 시점과 비교된 평균 log10 변화로서 표현됨).
도 8 - t=0시간, 6시간, 24시간, 7일 및 14일에서 미생물의 다회 챌린지 후 (A) 22℃ 내지 24℃ 또는 (B) 2℃ 내지 8℃에서 방부제를 갖지 않은 프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 미생물 콜로니 총수 감소의 시간 경과(t=0시간, 6시간, 24시간, 7일, 14일 및 28일에서 챌린지 시점과 비교된 평균 log10 변화로서 표현됨).
도 9 - t=0시간, 6시간, 24시간, 7일 및 14일에서 미생물의 다회 챌린지 후 (A) 22℃ 내지 24℃ 또는 (B) 2℃ 내지 8℃에서 0.01% 티메로살을 갖는 프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 미생물 콜로니 총수 감소의 시간 경과(t=0시간, 6시간, 24시간, 7일, 14일 및 28일에서 챌린지 시점과 비교된 평균 log10 변화로서 표현됨).
도 10 - t=0시간, 6시간, 24시간, 7일 및 14일에서 미생물의 다회 챌린지 후 (A) 22℃ 내지 24℃ 또는 (B) 2℃ 내지 8℃에서 0.02% 티메로살을 갖는 프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 미생물 콜로니 총수 감소의 시간 경과(t=0시간, 6시간, 24시간, 7일, 14일 및 28일에서 챌린지 시점과 비교된 평균 log10 변화로서 표현됨).
도 11 - t=0시간, 6시간, 24시간, 7일 및 14일에서 미생물의 다회 챌린지 후 (A) 22℃ 내지 24℃ 또는 (B) 2℃ 내지 8℃에서 0.02% 티메로살을 갖는 식염수 중의 미생물 콜로니 총수 감소의 시간 경과(t=0시간, 6시간, 24시간, 7일, 14일 및 28일에서 챌린지 시점과 비교된 평균 log10 변화로서 표현됨).
도 12 - 다양한 챌린지 연구에서 스타필로코커스 아우레우스 감퇴의 비선형 회귀 분석.
도 13 - 미생물의 단회 또는 다회 챌린지에 대한 백신 방부제로서의 2-PE와 티메로살의 비교: EP 5.1.3 기준 B의 통과 또는 실패.
도 14 - 5 ㎎의 2-PE로 제제화된 프레브(베)나르 13 중에 포함된, 각각의 혈청형으로부터의 스트렙토코커스 뉴모니아 폴리사카라이드 제제의 항원성의 장기간 안정성.
도 15 - 프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 2-PE의 장기간 안정성.
본원에서 사용된 바와 같이, 백분율 농도는 중량 대 부피(w/v) 또는 중량 대 중량(w/w)이다.
달리 특정되어 있지 않은 한, "투여량"은 0.5 ㎖의 백신 투여량을 의미한다.
용어 "다회 투여량"은 상이한 투여 단계에서 시간에 따라 하나의 대상체 또는 하나 초과의 대상체에게 투여될 수 있는 1회 초과 투여량의 백신을 포함하는 조성물을 의미한다.
본 발명은 스트렙토코커스 뉴모니아(폐렴구균으로도 공지되어 있음) 혈청형으로부터의 다수의 캡슐형 폴리사카라이드 및 방부제를 포함하는 다가 면역원성 조성물을 제공한다. 이 조성물은 백신으로도 지칭될 수 있고 폐렴구균에 대한 면역 반응을 유도하고 대상체, 예를 들면, 인간 대상체, 바람직하게는 인간 소아 또는 유아를 감염으로부터 보호하는 데에 사용될 수 있다.
다수의 임의의 스트렙토코커스 뉴모니아 캡슐형 폴리사카라이드가 본 발명의 조성물에 적합하다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 다가 면역원성 조성물은 스트렙토코커스 뉴모니아의 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터 제조된 캡슐형 폴리사카라이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 스트렙토코커스 뉴모니아의 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F 및 하나 이상의 추가 혈청형으로부터 제조된다. 일부 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 스트렙토코커스 뉴모니아의 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터 선택된 4종 이상, 5종 이상, 6종 이상, 7종 이상, 8종 이상 또는 9종 이상의 혈청형으로부터 제조된다. 일부 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 스트렙토코커스 뉴모니아의 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터 제조된다. 본 발명의 캡슐형 폴리사카라이드는 공지된 기법의 이용을 통해 스트렙토코커스 뉴모니아의 혈청형으로부터 제조된다. 예를 들면, 국제 특허출원 공개 제WO2006/110381호, 제WO2008/079653호, 제WO2008/079732호 및 제WO2008/143709호(이들 각각은 본원에 참고로 도입됨)를 참조한다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 캡슐형 폴리사카라이드는 담체 단백질에 접합된다. 이들 폐렴구균 접합체는 별도로 제조될 수 있다. 예를 들면, 한 실시양태에서, 각각의 폐렴구균 폴리사카라이드 혈청형을 대두 기제 배지에서 성장시킨다. 그 후, 개별 폴리사카라이드를 원심분리, 침전, 한외여과 및 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제한다. 사카라이드가 선택된 담체 단백질과 반응하여 폐렴구균 접합체를 형성할 수 있도록 상기 정제된 폴리사카라이드를 화학적으로 활성화시킨다.
일단 활성화되면, 각각의 캡슐형 폴리사카라이드를 담체 단백질에 별도로 접합시켜 당접합체를 형성한다. 일부 실시양태에서, 각각의 상이한 캡슐형 폴리사카라이드를 동일한 담체 단백질에 접합시킨다. 이러한 실시양태에서, 접합은 예를 들면, 환원 아민화에 의해 달성될 수 있다.
폴리사카라이드의 화학적 활성화 및 담체 단백질에의 후속 접합은 통상적인 수단에 의해 달성된다. 예를 들면, 본원에 참고로 도입되는 미국 특허 제4,673,574호 및 제4,902,506호를 참조한다.
담체 단백질은 바람직하게는 무독성 및 비반응성을 나타내고 충분한 양 및 순도로 수득될 수 있는 단백질이다. 담체 단백질은 표준 접합 절차로 처리될 수 있어야 한다. 본 발명의 일부 실시양태에서, CRM197은 담체 단백질로서 사용된다.
CRM197(화이자(Pfizer), 미국 노쓰캐롤라이나주 샌포드 소재)은 카사미노산(casamino acid) 및 효모 추출물 기제 배지에서 성장된 코리네박테리움 디프테리아 균주 C7(CRM197)의 배양물로부터 단리된 디프테리아 독소의 무독성 변이체(즉, 변성독소(toxoid))이다. CRM197은 한외여과, 황산암모늄 침전 및 이온 교환 크로마토그래피를 통해 정제된다. 다르게는, CRM197은 예를 들면, 본원에 참고로 도입되는 미국 특허 제5,614,382호에 따라 재조합적으로 제조된다. 다른 디프테리아 변성독소도 담체 단백질로서의 사용에 적합하다.
다른 적합한 담체 단백질은 불활성화된 세균 독소, 예컨대, 파상풍 변성독소, 백일해 변성독소, 콜레라 변성독소(예컨대, 국제 특허출원 공개 제WO2004/083251호에 기재된 바와 같음), 에스케리치아 콜라이 LT, 에스케리치아 콜라이 ST, 및 슈도모나스 애루기노사로부터의 외독소 A를 포함한다. 세균 외막 단백질, 예컨대, 외막 복합체 c(OMPC), 포린(porins), 트랜스페린 결합 단백질, 뉴모라이신, 폐렴구균 표면 단백질 A(PspA), 폐렴구균 어드헤신(adhesin) 단백질(PsaA), 군 A 또는 군 B 연쇄구균으로부터의 C5a 펩티다제 또는 해모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenzae) 단백질 D도 사용될 수 있다. 다른 단백질, 예컨대, 오브알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH), 소 혈청 알부민(BSA), 또는 튜버큘린(tuberculin)의 정제된 단백질 유도체(PPD)도 담체 단백질로서 사용될 수 있다.
캡슐형 폴리사카라이드를 담체 단백질에 접합시킨 후, 다양한 기법으로 폴리사카라이드-단백질 접합체를 정제한다(즉, 폴리사카라이드-단백질 접합체의 양에 대하여 풍부하게 한다). 이들 기법은 농축/정용여과 방법, 침전/용출, 컬럼 크로마토그래피 및 심층 여과를 포함한다.
하기에 보다 상세히 논의되어 있는 바와 같이, 본 발명의 면역원성 조성물은 다가 폐렴구균 캡슐형 폴리사카라이드-단백질 접합체의 하나 이상의 항원성 결정인자의 장기간 안정성에 대하여 유리한 성질을 갖는 다회 투여량 백신 제제의 제조에 유용하고 유리하게는 투여 전에 하나 이상의 미생물에 대한 저항성을 이를 필요로 하는 대상체에게 부여함으로써 오염으로부터 상기 조성물을 보호하는 하나 이상의 방부제를 포함한다.
본 발명의 방부제 함유 면역원성 조성물의 추가 제제화는 당업계에서 인식되어 있는 방법의 이용을 통해 달성될 수 있다. 예를 들면, 13종의 개별 폐렴구균 접합체를 생리학적으로 허용가능한 비히클로 제제화하여 상기 조성물을 제조할 수 있다. 이러한 비히클의 예로는 하기에 보다 상세히 기재된 바와 같이 물, 완충된 식염수, 폴리올(예를 들면, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 덱스트로스 용액이 있으나 이들로 한정되지 않는다.
본 발명의 면역원성 조성물은 다수의 폐렴구균 캡슐형 폴리사카라이드-단백질 접합체 이외에 하나 이상의 방부제를 포함한다. FDA는 몇몇 경우만을 제외하고 다회 투여량(다중-투여량) 바이알 내의 생물학적 제품이 방부제를 함유할 것을 요구한다. 방부제를 함유하는 백신 제품은 염화벤즈에토늄을 함유하는 백신(탄저병(anthrax)), 2-페녹시에탄올을 함유하는 백신(DTaP, HepA, 라임(Lyme), 소아마비(Polio)(비경구)), 페놀을 함유하는 백신(폐렴(Pneumo), 장티푸스(Typhoid)(비경구), 백시니아(Vaccinia)) 및 티메로살을 함유하는 백신(DTaP, DT, Td, HepB, Hib, 인플루엔자, JE, 수막염, 폐렴, 광견병)을 포함한다. 주사 약물에서 사용되도록 승인받은 방부제는 예를 들면, 클로로부탄올, m-크레졸, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 2-페녹시에탄올, 염화벤즈에토늄, 염화벤즈알코늄, 벤조산, 벤질 알코올, 페놀, 티메로살 및 질산페닐수은을 포함한다.
프레브(베)나르 13 면역원성 조성물의 향상된 효과 및 안정성을 위해 방부제를 포함하는 잠재적으로 적합한 다양한 제제들을 시험함으로써, 본 발명은 본원에서 약 2.5 ㎎/투여량 내지 10 ㎎/투여량(0.5% 내지 2%)의 농도로 2-페녹시에탄올(2-PE)을 포함하는 이러한 폐렴구균 면역원성 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 2-PE의 농도는 약 3.5 ㎎/투여량 내지 7.5 ㎎/투여량(0.7% 내지 1.5%)이다. 일부 실시양태에서, 2-PE의 농도는 약 5 ㎎/투여량(1%)이다. 일부 실시양태에서, 2-PE의 농도는 3.5 ㎎/투여량(0.7%) 이상, 4.0 ㎎/투여량(0.8%) 이상, 4.5 ㎎/투여량(0.9%) 이상, 5.0 ㎎/투여량(1%) 이상, 5.5 ㎎/투여량(1.1%) 이상, 6.0 ㎎/투여량(1.2%) 이상, 6.5 ㎎/투여량(1.3%) 이상, 7.0 ㎎/투여량 이상, 7.5 ㎎/투여량(1.5%) 이상, 8.0 ㎎/투여량(1.6%) 이상, 9.0 ㎎/투여량(1.8%) 이상 또는 10 ㎎/투여량(2%) 이상이다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 폐렴구균 면역원성 조성물은 티메로살 및 포르말린을 포함하나 이들로 한정되지 않는 하나 이상의 추가 방부제를 함유한다.
일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 하나 이상의 항원보강제를 포함할 수 있다. 본원에 정의된 바와 같이, "항원보강제"는 본 발명의 면역원성 조성물의 면역원성을 향상시키는 작용을 하는 물질이다. 따라서, 항원보강제는 종종 면역 반응을 부스팅시키기 위해 제공되고 당업자에게 잘 공지되어 있다. 상기 조성물의 효과를 향상시키기에 적합한 항원보강제는 하기 (1) 내지 (7)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다:
(1) 알루미늄 염(명반), 예컨대, 수산화알루미늄, 인산알루미늄, 황산알루미늄 등;
(2) (다른 특이적 면역자극제, 예컨대, 뮤라밀 펩티드(이하에 정의됨) 또는 세균 세포벽 성분을 갖거나 갖지 않은) 수중유 에멀젼 제제, 예를 들면,
(a) 미세유동화기, 예컨대, 모델 110Y 미세유동화기(마이크로플루이딕스(Microfluidics), 미국 매사추세츠주 뉴톤 소재)의 이용을 통해 마이크론 미만의 입자로 제제화된, 5% 스쿠알렌, 0.5% 트윈(Tween) 80 및 0.5% 스판(Span) 85를 함유하는(선택적으로 다양한 양의 MTP-PE(하기 참조, 그러나 요구되는 것은 아님)를 함유하는) MF59(국제 특허출원 공개 제WO90/14837호),
(b) 1㎛ 미만의 에멀젼 내로 미세유동화되었거나 보다 큰 입자 크기 에멀젼을 발생시키도록 와동된, 10% 스쿠알렌, 0.4% 트윈 80, 5% 플루로닉(pluronic) 차단된 중합체 L121 및 thr-MDP(하기 참조)를 함유하는 SAF,
(c) 2% 스쿠알렌, 0.2% 트윈 80, 및 미국 특허 제4,912,094호(코릭사(Corixa))에 기재된 3-O-탈아실화된 모노인지질 A(MPL), 트레할로스 다이마이콜레이트(TDM) 및 세포벽 골격(CWS)으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 세균 세포벽 성분, 바람직하게는 MPL + CWS(데톡스(Detox))를 함유하는 리비(Ribi) 항원보강제 시스템(RAS)(코릭사, 미국 몬타나주 해밀톤 소재), 및
(d) 폴리소르베이트 80(트윈 80);
(3) 사용될 수 있는 사포닌 항원보강제, 예컨대, 퀼(Quil) A 또는 스티뮬론(STIMULON) QS-21(안티제닉스(Antigenics), 미국 매사추세츠주 프라밍햄 소재)(미국 특허 제5,057,540호) 또는 이들로부터 발생된 입자, 예컨대, ISCOM(면역자극 복합체);
(4) 세균 리포폴리사카라이드, 합성 지질 A 유사체, 예컨대, 코릭사로부터 입수가능하고 미국 특허 제6,113,918호에 기재되어 있는 아미노알킬 글루코스아민 포스페이트 화합물(AGP), 또는 이의 유도체 또는 유사체(이러한 AGP 중 하나는 수성 제형 또는 안정한 에멀젼으로서 제제화되는, 529(이전에는 RC529로서 공지되어 있었음)로도 공지되어 있는 2-[(R)-3-테트라데카노일옥시테트라데카노일아미노]에틸 2-데옥시-4-O-포스포노-3-O-[(R)-3-테트라데카노일옥시테트라데카노일]-2-[(R)-3-테트라데카노일옥시테트라데카노일아미노]-b-D-글루코피라노사이드임), 합성 폴리뉴클레오타이드, 예컨대, CpG 모티프를 함유하는 올리고뉴클레오타이드(미국 특허 제6,207,646호);
(5) 사이토카인, 예컨대, 인터류킨(예를 들면, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 등), 인터페론(예를 들면, 감마 인터페론), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF), 종양 괴사 인자(TNF), 보조자극 분자 B7-1 및 B7-2 등;
(6) 세균 ADP-라이보실화 독소의 해독된 변이체, 예컨대, 공개된 국제 특허출원 공개 제WO00/18434호(국제 특허출원 공개 제WO02/098368호 및 제WO02/098369호도 참조)에 따라 아미노산 위치 29의 글루탐산이 또 다른 아미노산, 바람직하게는 히스티딘으로 치환되어 있는 야생형 또는 돌연변이체 형태의 콜레라 독소(CT), 백일해 독소(PT), 또는 에스케리치아 콜라이 열 불안정성 독소(LT), 특히 LT-K63, LT-R72, CT-S109, PT-K9/G129(예를 들면, 국제 특허출원 공개 제WO93/13302호 및 제WO92/19265호 참조); 및
(7) 조성물의 효과를 향상시키는 면역자극제로서 작용하는 다른 물질, 예컨대, 칼슘 염, 철, 아연, 아실화된 티로신 현탁액, 아실화된 당, 유도체화된 당/사카라이드, 폴리포스파젠, 생분해성 미세구(microsphere), 모노인지질 A(MPL), (예를 들면, 감소된 독성을 갖는) 지질 A 유도체, 3-O-탈아실화된 MPL, 퀼 A, 사포닌, QS21, 토콜(tocol), 프로인트 불완전 항원보강제(디프코 레이보레이토리스(Difco Laboratories), 미국 미시간주 디트로이트 소재), 머크 항원보강제 65(머크 앤드 컴파니 인코포레이티드(Merck and Company, Inc.), 미국 뉴저지주 라웨이 소재), AS-2(스미쓰-클라인 비참(Smith-Kline Beecham), 미국 펜실바니아주 필라델피아 소재), (바람직하게는 비메틸화된) CpG 올리고뉴클레오티드, 생접착제(bioadhesive) 및 점막접착제, 미세입자, 리포좀, 폴리옥시에틸렌 에테르 제제, 폴리옥시에틸렌 에스터 제제, 및 뮤라밀 펩티드 또는 이미다조퀴놀론 화합물. 뮤라밀 펩티드는 N-아세틸-뮤라밀-L-쓰레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-아세틸-노르뮤라밀-L-알라닌-2-(1',2'-다이팔미토일-sn-글리세로-3-하이드록시포스포릴옥시)-에틸아민(MTP-PE) 등을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
일부 실시양태에서, 항원보강제 조성물은 TH2형 사이토카인보다 더 높은 정도로 TH1형 사이토카인(예를 들면, IFN-γ, TNFα, IL-2 및 IL-12)을 유도하는 데에 있어서 유리하여, 투여된 항원에 대한 세포 매개 면역 반응의 유도에 유리할 수 있는 조성물이다. 주로 TH1 반응을 촉진하는 구체적인 항원보강제 시스템은 지질 A 유도체, 예컨대, 모노인지질 A(MPL) 또는 이의 유도체, 예를 들면, 3-O-탈아실화된 MPL(3D-MPL), MPL 및/또는 3D-MPL과 알루미늄 염 및/또는 사포닌 유도체의 조합물(예를 들면, 국제 특허출원 공개 제WO94/00153호에 개시된 바와 같이 3D-MPL과 조합된 QS21, 또는 국제 특허출원 공개 제WO96/33739호에 개시된 바와 같은 QS21과 콜레스테롤의 조합물), 트라이터페노이드(triterpenoid), 및 수중유 에멀젼, 예컨대, 토코페롤을 포함하는 수중유 에멀젼(국제 특허출원 공개 제WO95/17210호에 개시됨)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
항원보강제는 선택적으로 본 발명의 방부된 백신 제제의 하나 이상의 면역원성 성분에 의해 흡착될 수 있거나 상기 면역원성 성분과 조합될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "흡착된 항원"은 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 초과의 항원이 항원보강제에 흡착되어 있는 혼합물을 의미한다. 일부 실시양태에서, 항원보강제는 흡착된 인산알루미늄(Al+) 또는 하이드록시인산알루미늄이다. 전형적으로, 총 알루미늄 함량은 모두 수산화알루미늄 또는 모두 인산알루미늄일 수 있는, 0.5 ㎖ 투여량 당 200 ㎍ 내지 1000 ㎍, 300 ㎍ 내지 900 ㎍, 400 ㎍ 내지 800 ㎍, 500 ㎍ 내지 700 ㎍ 또는 약 630 ㎍ Al+이다. 다르게는, Al+ 함량은 인산알루미늄:수산화알루미늄의 다양한 비, 예를 들면, 1:8 내지 8:1, 1:4 내지 4:1, 3:8 내지 8:3, 1:2 내지 2:1, 또는 1:1로 혼합된 수산화알루미늄과 인산알루미늄의 혼합물로부터의 Al+ 함량일 수 있다. 대부분의 알루미늄이 혼합되어 조합 백신을 형성하기 전에 예비흡착된 항원에 의해 제공되지만, 몇몇 알루미늄은 본 발명의 조합 백신의 제제화 동안, 예를 들면, 본원에 기재된 pH 조절 단계 전에 자유 형태로 첨가될 수 있다. 전형적으로, 0.5 ㎖ 투여량 당 자유 알루미늄 함량은 0 ㎍ 내지 300 ㎍, 50 ㎍ 내지 250 ㎍, 75 ㎍ 내지 200 ㎍, 100 ㎍ 내지 150 ㎍ 또는 약 120 ㎍의 Al3 +일 수 있다. 자유 Al3 +는 모두 Al(OH)3 또는 모두 AlPO4, 또는 다양한 비로 혼합된 Al(OH)3과 AlPO4의 혼합물일 수 있다.
백신 항원성 조성물은 혼합 전에 알루미늄 염 상에 개별적으로 예비흡착될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항원의 혼합물은 추가 항원보강제와의 혼합 전에 예비흡착될 수 있다. 다르게는, 본 발명의 백신의 일부 성분은 제제화될 수 있으나 항원보강제 상에 의도적으로 흡착될 수 없다.
본 발명의 제제는 완충제, 염, 2가 양이온, 비이온성 세제, 냉동보호제, 예컨대, 당, 및 항산화제, 예컨대, 자유 라디칼 포집제(scavenger) 또는 킬레이팅제 중 하나 이상, 또는 이들의 임의의 다중 조합물을 추가로 포함할 수 있다. 임의의 한 성분, 예컨대, 킬레이팅제의 선택은 또 다른 성분(예를 들면, 포집제)이 바람직할지 아니면 바람직하지 않을지를 결정할 수 있다. 투여를 위해 제제화된 최종 조성물은 멸균 및/또는 발열원 무함유 상태이어야 한다. 당업자는 이들 성분들 및 다른 성분들의 어떤 조합물이 다양한 인자, 예컨대, 요구되는 구체적인 저장 및 투여 조건에 따라 본 발명의 방부제 함유 백신 조성물에 포함되기에 가장 적합할지를 실험적으로 결정할 수 있다.
일부 실시양태에서, 비경구 투여에 적합한 본 발명의 제제는 트라이스(트라이메타민), 포스페이트, 아세테이트, 보레이트, 시트레이트, 글리신, 히스티딘 및 석시네이트(그러나, 이들로 한정되지 않음)로부터 선택된 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 완충제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제제는 약 6.0 내지 약 9.0, 바람직하게는 약 6.4 내지 약 7.4의 pH 범위 내에서 완충된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 면역원성 조성물 또는 제제의 pH를 조절하는 것이 바람직할 수 있다. 본 발명의 제제의 pH는 당업계의 표준 기법의 이용을 통해 조절될 수 있다. 상기 제제의 pH는 3.0 내지 8.0으로 조절될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 제제의 pH는 3.0 내지 6.0, 4.0 내지 6.0 또는 5.0 내지 8.0일 수 있거나 이들 범위로 조절될 수 있다. 다른 실시양태에서, 상기 제제의 pH는 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.5, 약 5.8, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0, 약 7.5 또는 약 8.0일 수 있거나 이들 값으로 조절될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 pH는 4.5 내지 7.5, 4.5 내지 6.5, 5.0 내지 5.4, 5.4 내지 5.5, 5.5 내지 5.6, 5.6 내지 5.7, 5.7 내지 5.8, 5.8 내지 5.9, 5.9 내지 6.0, 6.0 내지 6.1, 6.1 내지 6.2, 6.2 내지 6.3, 6.3 내지 6.5, 6.5 내지 7.0, 7.0 내지 7.5 또는 7.5 내지 8.0의 범위 내에 있을 수 있거나 이들 범위로 조절될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제제의 pH는 약 5.8이다.
일부 실시양태에서, 비경구 투여에 적합한 본 발명의 제제는 약 0.1 mM 내지 약 10 mM의 농도(약 5 mM 이하가 바람직함)로 하나 이상의 2가 양이온(MgCl2, CaCl2 및 MnCl2를 포함하나 이들로 한정되지 않음)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 비경구 투여에 적합한 본 발명의 제제는 비경구 투여시 대상체에게 생리학적으로 허용가능한 이온 강도로 존재하고 최종 제제에서 선택된 이온 강도 또는 삼투압농도(osmolarity)를 생성하는 최종 농도로 포함되는 하나 이상의 염(염화나트륨, 염화칼륨, 황산나트륨 및 황산칼륨을 포함하나 이들로 한정되지 않음)을 포함한다. 상기 제제의 최종 이온 강도 또는 삼투압농도는 다수의 성분(예를 들면, 완충 화합물 및 다른 비완충 염으로부터의 이온)에 의해 결정될 것이다. 바람직한 염인 NaCl은 약 250 mM 이하로 존재하고, 이때 염 농도는 상기 제제의 최종 총 삼투압농도가 비경구 투여(예를 들면, 근육내 또는 피하 주사)에 적합하고 다양한 온도 범위에 걸쳐 백신 제제의 면역원성 성분의 장기간 안정성을 촉진하도록 다른 성분(예를 들면, 당)을 보충하기 위해 선택된다. 염 무함유 제제는 원하는 최종 삼투압농도 수준을 유지하기 위해 하나 이상의 선택된 냉동보호제의 증가된 범위를 견딜 것이다.
일부 실시양태에서, 비경구 투여에 적합한 본 발명의 제제는 다이사카라이드(예를 들면, 락토스, 말토스, 수크로스 또는 트레할로스) 및 폴리하이드록시 탄화수소(예를 들면, 둘시톨(dulcitol), 글리세롤, 만니톨 및 소르비톨)(그러나, 이들로 한정되지 않음)로부터 선택된 하나 이상의 냉동보호제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 제제의 삼투압농도는 약 200 mOs/ℓ 내지 약 800 mOs/ℓ의 범위, 바람직하게는 약 250 mOs/ℓ 내지 약 500 mOs/ℓ 또는 약 300 mOs/ℓ 내지 약 400 mOs/ℓ의 범위 내에 있다. 염 무함유 제제는 예를 들면, 약 5% 내지 약 25%의 수크로스, 바람직하게는 약 7% 내지 약 15% 또는 약 10% 내지 약 12%의 수크로스를 함유할 수 있다. 다르게는, 염 무함유 제제는 예를 들면, 약 3% 내지 약 12%의 소르비톨, 바람직하게는 약 4% 내지 7% 또는 약 5% 내지 약 6%의 소르비톨을 함유할 수 있다. 염, 예컨대, 염화나트륨이 첨가되는 경우, 수크로스 또는 소르비톨의 유효 범위는 상대적으로 감소한다. 이들 및 다른 이러한 삼투압농도 및 삼투압농도 고려사항은 당업계의 기술 내에 있다.
일부 실시양태에서, 비경구 투여에 적합한 본 발명의 제제는 하나 이상의 자유 라디칼 산화 억제제 및/또는 킬레이팅제를 포함한다. 다양한 자유 라디칼 포집제 및 킬레이팅제는 당업계에서 공지되어 있고 본원에 기재된 제제 및 사용 방법에 적용된다. 예로는 EDTA, EDTA/에탄올 조합물, 트라이에탄올아민, 만니톨, 히스티딘, 글리세롤, 시트르산나트륨, 이노시톨 헥사포스페이트, 트라이폴리포스페이트, 아스코르브산/아스코르베이트, 석신산/석시네이트, 말산/말레에이트, 데스페랄(desferal), EDDHA 및 DTPA, 및 이들 중 둘 이상의 다양한 조합물이 있으나 이들로 한정되지 않는다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 비환원 자유 라디칼 포집제가 상기 제제의 장기간 안정성을 효과적으로 향상시키는 농도로 첨가될 수 있다. 하나 이상의 자유 라디칼 산화 억제제/킬레이팅제는 다양한 조합물, 예컨대, 포집제와 2가 양이온의 조합물로 첨가될 수도 있다. 킬레이팅제의 선택은 포집제의 첨가가 필요한지 아니면 필요하지 않은지를 결정할 것이다.
일부 실시양태에서, 비경구 투여에 적합한 본 발명의 제제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스터, 폴리소르베이트 80(트윈 80), 폴리소르베이트 60(트윈 60), 폴리소르베이트 40(트윈 40) 및 폴리소르베이트 20(트윈 20), 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르(Brij 58 및 Brij 35를 포함하나 이들로 한정되지 않음), 및 기타 비이온성 계면활성제, 예컨대, 트라이톤 X-100, 트라이톤 X-114, NP40, 스판 85 및 플루로닉 계열의 비이온성 계면활성제(예컨대, 플루로닉 121)를 포함하나 이들로 한정되지 않는 하나 이상의 비이온성 계면활성제를 포함하고, 이때 바람직한 성분은 약 0.001% 내지 약 2%(약 0.25% 이하가 바람직함) 농도의 폴리소르베이트 80 또는 약 0.001% 내지 1%(약 0.5% 이하가 바람직함) 농도의 폴리소르베이트 40이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 제제는 비경구 투여에 적합한 하나 이상의 추가 안정화제, 예를 들면, 하나 이상의 티올(-SH) 기를 포함하는 환원제(예를 들면, 시스테인, N-아세틸 시스테인, 환원된 글루타티온, 티오글리콜산나트륨, 티오설페이트, 모노티오글리세롤 또는 이들의 혼합물)를 포함한다. 다르게는 또는 선택적으로, 저장 용기로부터 산소를 제거하거나 (예를 들면, 앰버 유리 용기를 이용하여) 광으로부터 제제를 보호함으로써 본 발명의 방부제 함유 백신 제제를 더 안정화시킬 수 있다.
본 발명의 방부제 함유 백신 제제는 그 자체로 면역 반응을 유도하지 않는 임의의 부형제를 포함하는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 적합한 부형제는 거대분자, 예컨대, 단백질, 사카라이드, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체 아미노산, 아미노산 공중합체, 수크로스(문헌[Paoletti et al, 2001, Vaccine, 19:2118]), 트레할로스, 락토스 및 지질 응집체(예컨대, 오일 소적 또는 리포좀)를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 이러한 담체는 당업자에게 잘 공지되어 있다. 약학적으로 허용가능한 부형제는 예를 들면, 문헌[Gennaro, 2000, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, ISBN:0683306472]에 논의되어 있다.
본 발명의 조성물은 동결건조된 또는 수성 제형, 즉 용액 또는 현탁액일 수 있다. 액체 제제는 유리하게는 그의 팩키징된 제형으로부터 직접적으로 투여될 수 있으므로 본 발명의 동결건조된 조성물에 대해 요구되는 수성 매질 중에서의 재구성을 필요로 하지 않으면서 주사되기에 이상적이다.
본 발명의 구체적인 실시양태에서, 백신은 CRM197에 개별적으로 접합된, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터 선택된 하나 이상의 폐렴구균 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 다가 면역원성 조성물이다. 상기 백신은 1 ㎍ 내지 5 ㎍, 바람직하게는 약 4.4 ㎍/㎖(그러나, 6B의 경우 바람직하게는 약 8.8 ㎍/㎖)의 각각의 폴리사카라이드; 20 ㎍/㎖ 내지 100 ㎍/㎖, 바람직하게는 약 58 ㎍/㎖의 CRM197 담체 단백질, 0.02 ㎎/㎖ 내지 2 ㎎/㎖, 바람직하게는 0.25 ㎎/㎖의 인산알루미늄 형태의 원소 알루미늄; 0.5% 내지 1.25%, 바람직하게는 약 0.85%의 염화나트륨; 0.002% 내지 0.2%, 바람직하게는 약 0.02%의 폴리소르베이트 80; 1 mM 내지 10 mM, 바람직하게는 약 5 mM의 석신산나트륨 완충제(4 내지 7의 pH, 바람직하게는 5.8의 pH); 및 4 ㎎/㎖ 내지 20 ㎎/㎖, 바람직하게는 약 10 ㎎/㎖의 2-페녹시에탄올을 포함하도록 제제화된다.
본 발명의 일부 바람직한 실시양태에서, 백신은 CRM197에 개별적으로 접합된, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 폐렴구균 캡슐형 폴리사카라이드를 포함하는 다가 면역원성 조성물이다. 상기 백신은 약 4.4 ㎍/㎖(단, 6B의 경우 약 8.8 ㎍/㎖)의 각각의 사카라이드; 약 58 ㎍/㎖의 CRM197 담체 단백질; 약 0.25 ㎎/㎖의 인산알루미늄 형태의 원소 알루미늄; 약 0.85%의 염화나트륨; 약 0.02%의 폴리소르베이트 80; 약 5 mM의 석신산나트륨 완충제(5.8의 pH); 및 약 10 ㎎/㎖의 2-페녹시에탄올을 포함하도록 제제화된다.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 대다수의 물질들의 양은 중량/투여량, 중량/부피 또는 (중량/부피 또는 중량/중량으로서의) % 농도로서 표현될 수 있다. 이들 값들 중 모두가 한 값으로부터 또 다른 값으로 전환될 수 있다. 중량/투여량 단위로의 전환 및 중량/투여량 단위로부터의 전환의 경우, 투여량의 부피는 특정된다. 예를 들면, 0.5 ㎖의 투여량이 주어진 경우, 5.0 ㎎/투여량의 2-PE는 10 ㎎/㎖ 또는 1.0%(g/100 ㎖)의 농도에 해당한다.
백신 제제는 폴리사카라이드:2-PE의 비로서 표현될 수도 있다. 예를 들면, 4.4 ㎍/㎖(단, 6B의 경우 8.8 ㎍/㎖)의 각각의 사카라이드 및 10 ㎎/㎖의 2-PE를 포함하는 바람직한 제제의 0.5 ㎖ 투여량은 30.8 ㎍의 폴리사카라이드(2.2 ㎍ x 12종의 혈청형 + 혈청형 6B의 경우 4.4 ㎍) 및 5000 ㎍의 2-PE를 가질 것이다. 따라서, 폴리사카라이드:2-PE의 중량비는 30.8:5000이다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 백신의 폴리사카라이드:2-PE 중량비는 5:5000 내지 100:5000이다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 상기 폴리사카라이드:2-PE 중량비는 약 30.8:5000이다.
백신 제제의 전달
포유동물 대상체, 예컨대, 인간 대상체, 바람직하게는 소아 또는 유아에서 폐렴구균에 대한 면역 반응을 유도하여 감염으로부터 보호하기 위해 하나 이상의 방부제를 포함하는 개시된 약학 조성물 및 제제를 사용하는 방법도 제공된다. 본 발명의 백신 제제는 전신 또는 점막 경로를 통해 백신을 투여함으로써 폐렴구균 감염에 대해 민감한 인간 대상체를 보호하는 데에 사용될 수 있다. 이들 투여는 예를 들면, 구강/소화관, 호흡관 또는 비뇨생식관으로의 비경구 투여 또는 점막 투여를 포함할 수 있다.
본 발명의 백신 제제를 대상체에게 직접 전달하는 것은 비경구 투여(근육내, 복강내, 피내, 피하 또는 정맥내 투여, 또는 조직의 간질 공간 내로의 투여); 또는 직장, 경구, 질, 국소, 경피, 비강내, 눈, 귀, 폐 또는 다른 점막 투여에 의해 달성될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 비경구 투여는 예를 들면, 대상체의 넓적다리 또는 상부 팔에 근육내 주사함으로써 달성된다. 주사는 바늘(예를 들면, 피하 바늘)을 통해 달성될 수 있으나, 다르게는 바늘 부재 주사가 이용될 수 있다. 전형적인 근육내 투여량은 0.5 ㎖이다. 본 발명의 조성물은 다양한 제형, 예를 들면, 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사용으로 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 예를 들면, 흡입기 내의 폐 투여용 산제 또는 분무제로서 제조될 수 있다. 다른 실시양태에서, 상기 조성물은 좌약제 또는 페사리(pessary)로서 제조될 수 있거나 코, 귀 또는 눈 투여용 제제, 예컨대, 분무제, 소적제, 겔 또는 산제로서 제조될 수 있다.
한 실시양태에서, 비강내 투여는 (폐렴구균의 비인두 운반이 보다 효과적으로 예방되어 그의 가장 초기 단계에서 감염을 약화시킬 수 있기 때문에) 폐렴 또는 중이염의 예방을 위해 이용될 수 있다.
각각의 백신 투여량 중의 접합체의 양은 유의한 불리한 효과를 나타내지 않으면서 면역보호 반응을 유도하는 양으로서 선택된다. 이러한 양은 폐렴구균 혈청형에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로 각각의 투여량은 0.1 ㎍ 내지 100 ㎍, 구체적으로 0.1 ㎍ 내지 10 ㎍, 보다 구체적으로 1 ㎍ 내지 5 ㎍의 폴리사카라이드를 포함할 것이다.
특정 백신을 위한 성분의 최적 양은 대상체에서의 적절한 면역 반응을 관찰하는 것을 수반하는 표준 연구에 의해 확인될 수 있다. 초기 백신접종 후, 대상체는 적절한 기간을 두고 1회 또는 수회의 부스터 면역화를 제공받을 수 있다.
스트렙토코커스 뉴모니아에 의해 야기된 침윤 질환에 대한 유아 및 영아를 위한 상용적인 스케쥴은 프레브(베)나르 13 백신에 포함되는 혈청형으로 인해 2개월, 4개월, 6개월 및 12개월 내지 15개월의 연령이다. 본 발명의 조성물은 연령이 더 높은 소아, 청소년, 십대 및 성인에 사용하기에도 적합하고, 이때 숙련된 전문가에 의해 결정되는 바와 같이 동일한 또는 상이한 상용적인 스케쥴이 적용될 수 있다.
팩키징 및 투약 제형
본 발명의 백신은 단위 투여량 또는 다회 투여량(예를 들면, 2회 투여량, 4회 투여량 또는 그 이상의 투여량) 제형으로 팩키징될 수 있다. 다회 투여량 제형의 경우, 바이알은 전형적으로(그러나, 반드시는 아님) 예비충전된 주사기보다 바람직하다. 적합한 다회 투여량 포맷은 용기 당 2회 내지 10회 투여량(투여량 당 0.1 ㎖ 내지 2 ㎖)을 포함하나 이로 한정되지 않는다. 일부 실시양태에서, 투여량은 0.5 ㎖의 투여량이다. 예를 들면, 본원에 참고로 도입되는 국제 특허출원 공개 제WO2007/127668호를 참조한다. 조성물은 바이알 또는 다른 적합한 저장 용기 내에 제공될 수 있거나 바늘을 구비할 수 있거나 구비하지 않을 수 있는 예비충전된 전달 장치, 예를 들면, 단일 또는 다수의 성분 주사기 내에 제공될 수 있다. 다회 투여량의 예비충전된 주사기도 예상되지만, 주사기는 전형적으로(그러나, 반드시는 아님) 단회 투여량의 본 발명의 방부제 함유 백신 조성물을 함유한다. 마찬가지로, 바이알은 단회 투여량을 포함할 수 있으나 다르게는 다회 투여량을 포함할 수 있다.
유효 투여량 부피는 상용적으로 확립될 수 있으나, 주사용 조성물의 전형적인 투여량은 0.5 ㎖의 부피를 갖는다. 일부 실시양태에서, 투여량은 인간 대상체에게 투여되도록 제제화된다. 일부 실시양태에서, 투여량은 성인, 십대, 청소년, 영아 또는 유아(즉, 1세 이하) 인간 대상체에게 투여되도록 제제화되고, 바람직한 실시양태에서 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 액체 백신은 동결건조된 제형으로 제공되는 다른 백신의 재구성에도 적합하다. 백신이 이러한 즉석 재구성을 위해 사용되어야 하는 경우, 본 발명은 2개 이상의 바이알, 2개 이상의 충전 준비된 주사기, 또는 하나 이상의 이들 각각을 갖는 키트를 제공하고, 이때 상기 주사기의 내용물은 주사 전에 상기 바이알의 내용물을 재구성하도록 사용되거나 상기 바이알의 내용물은 주사 전에 상기 주사기의 내용물을 재구성하도록 사용된다.
다르게는, 본 발명의 백신 조성물은 예를 들면, 당업계에서 잘 공지되어 있는 다수의 동결건조 방법들 중 하나의 이용을 통해 동결건조되고 재구성됨으로써, 입자의 제조에 이용된 방법과 정확히 동일한 방법의 변경을 통해 선택될 수 있고 조절될 수 있는 입자 특성, 예컨대, 평균 직경 크기를 갖는 규칙적인 모양(예를 들면, 구형)의 건조 입자, 예컨대, 미세펠렛 또는 미세구를 형성할 수 있다. 상기 백신 조성물은 선택적으로 별도의 규칙적인 모양(예를 들면, 구형)의 건조 입자, 예컨대, 미세펠렛 또는 미세구와 함께 제조될 수 있거나 이 입자 내에 함유될 수 있는 항원보강제를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 실시양태에서, 본 발명은 선택적으로 본 발명의 하나 이상의 방부제를 추가로 포함하는 안정화된 건조 백신 조성물을 포함하는 제1 성분, 및 제1 성분의 재구성을 위한 멸균 수용액을 포함하는 제2 성분을 포함하는 백신 키트를 추가로 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 수용액은 하나 이상의 방부제를 포함하고, 선택적으로 하나 이상의 항원보강제를 포함할 수 있다(예를 들면, 본원에 참고로 도입되는 국제 특허출원 공개 제WO2009/109550호 참조).
또 다른 실시양태에서, 다회 투여량 포맷의 용기는 일반 실험실 유리용기, 플라스크, 비이커, 눈금이 새겨진 실린더, 발효기, 생물반응기, 튜빙, 파이프, 백, 병, 바이알, 바이알 밀폐기(예를 들면, 고무 마개, 캡 상의 나사), 앰플, 주사기, 이중 또는 다중 챔버 주사기, 주사기 마개, 주사기 플런저(plunger), 고무 밀폐기, 플라스틱 밀폐기, 유리 밀폐기, 카트리지 및 일회용 펜 등으로 구성되나 이들로 한정되지 않는 하나 이상의 군으로부터 선택된다. 본 발명의 용기는 제작 재료에 의해 한정되지 않고 유리, 금속(예를 들면, 강철, 스테인레스 강철, 알루미늄 등) 및 중합체(예를 들면, 열가소성 물질, 탄성중합체, 열가소성 물질-탄성중합체)와 같은 재료를 포함한다. 구체적인 실시양태에서, 상기 포맷의 용기는 부틸 마개를 갖는 5 ㎖ 쇼트(Schott) 1형 유리 바이알이다. 당업자는 전술된 포맷이 결코 제한적인 열거가 아니고 단지 본 발명을 위해 이용될 수 있는 다양한 포맷에 대한 당업자를 위한 지침으로서 이용되는 것임을 인식할 것이다. 본 발명에서의 사용을 위해 고려되는 추가 포맷은 실험실 장비 판매회사 및 제조사, 예컨대, 유나이티드 스테이츠 플라스틱 코포레이션(United States Plastic Corp.)(미국 오하이오주 리마 소재), VWR 등으로부터 공개된 카탈로그에서 발견될 수 있다.
백신 조성물에서 방부제 효과를 평가하는 방법
본 발명은 백신 조성물의 면역원성 성분 및 비면역원성 성분의 일부 또는 전부의 존재 하에서 하나 이상의 선택된 방부제를 포함하는 백신 제제의 효능을 측정하는 신규 방법을 추가로 제공한다. 방부제 효과에 대한 WHO 프로토콜은 USP 시험 및 EP 시험을 이용하고 일부 시험을 수행할 때 개봉 바이알 정책(Open Vial Policy) 조건을 포함한다. 전형적인 방부제 효과 시험은 시험 조성물을 선택된 미생물 집단으로 1회 접종하고 특정 환경 조건(예를 들면, 온도) 하에서 시간에 따른 접종된 미생물의 log 감소를 시험 방부제를 결여하는 대조군 조성물에서의 접종된 미생물의 log 감소와 비교하는 단회 챌린지 시험이다. 예를 들면, 하기 실시예 2 및 3을 참조한다. 그러나, 다회 오염시, 예를 들면, 동일한 바이알을 다회 접종함으로써 야기된 바이알 및 마개의 다회 오염에 대한 방부제 효과를 확인하기 위한 추가 시험이 요구되지 않았다.
따라서, 본 발명은 면역원성 조성물 중의 하나 이상의 방부제의 효과를 평가하기 위한 다회 챌린지 시험을 제공하는데, 이때 상기 시험은 적어도 하기 2 단계를 포함한다: 시험 조성물을 선택된 미생물 집단으로 접종하는 단계, 및 특정 환경 조건(예를 들면, 온도) 하에서 시간에 따른 접종된 미생물의 감소를 시험 방부제를 결여하는 대조군 조성물에서의 감소와 비교하는 단계. 하기 실시예 4 및 5를 참조한다.
방부제 효과
본 발명의 방부제 함유 백신 제제는 예를 들면, 비경구 투여에 적합한 다회 투여량 백신 바이알 또는 용기 내에 충전되기에 적합하고, 방부제를 결여하는 동일한 제제에 비해 감소된 또는 무시할 만한 활성 손실을 나타내면서 2℃ 내지 8℃, 실온 또는 37℃에서 연장된 기간 동안 안정한 상태로 남아 있다.
상기 제제 중의 방부제의 양은 미국(U.S.) 약전, 유럽 약전 또는 세계보건기구(WHO) 약전, 또는 이들의 조합에 의해 정의된 바와 같은 백신 안전성에 대한 요건을 충족시키는 양이 되도록 선택된다.
미국 약전 및 유럽 약전(각각 USP 및 EP)에 따른 방부제 수준을 달성하기 위해, 백신 제제는 0시간에서 약 105 CFU/㎖ 내지 106 CFU/㎖(CFU = 콜로니 형성 단위)의 하기 1 내지 4로 1회 접종된다:
1. 스타필로코커스 아우레우스(세균; ATCC 번호 6538; "SA");
2. 슈도모나스 애루기노사(세균; ATCC 번호 9027; "PA");
3. 칸디다 알비칸스(Candida albicans)(효모; ATCC 번호 10231; "CA"); 및
4. 아스퍼길러스 니게르(Aspergillus niger)(진균; ATCC 번호 16404; "AN")
다회 투여량 제시의 반복된 이용 동안에 실제로 일어날 수 있는 오염의 최악의 합당한 경우를 대표하기 위해, WHO는 세균 균주, 슈도모나스 애루기노사("PA), 스타필로코커스 아우레우스("SA"), 에스케리치아 콜라이("EC") 및 바실러스 서브틸리스("BA")를 사용한 다회 오염 사건에의 의도적인 노출을 이용하는 안전성 시험을 요구한다. 제제를 초기 챌린지 후 0시간, 6시간, 24시간, 7일 및 14일에 5 x 103 CFU/㎖의 각각의 유기체와 섞고 실제로 가능한 저장 조건과 유사한 2℃ 내지 8℃ 또는 22℃ 내지 24℃에서 저장한다.
USP 29 NF 24 부록 2(USP)는 세균 미생물의 접종 후, 7일째 날에서 초기(즉, 접종 시점) 계산된 총수로부터 1.0 log 이상의 감소가 있고, 14일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 3.0 log 이상의 감소가 있고, 24일째 날에서 앞서 측정된 값에 비해 증가가 없을 것을 요구한다. 표 1을 참조한다. 효모 및 진균의 경우, USP 요건은 7일째 날, 14일째 날 및 28일째 날에서 접종 시점으로부터의 증가가 없어야 한다는 것이다.
EP 요건은 더 엄격하다. 비경구 제제 및 안구 제제에 대한 EP 제5 개정판 5.6(5.1.3) 요건은 카테고리 A 및 카테고리 B를 갖는다. 카테고리 A(EP-A)는 세균의 경우 접종 후 6시간에서 초기 계산된 총수로부터 2.0 log 이상의 감소, 24시간에서 앞서 측정된 값으로부터 3.0 log 이상의 감소 및 28일째 날에서 회복 없음을 요구한다. 카테고리 B(EP-B)는 세균의 경우 24시간에서 초기 계산된 총수로부터 1.0 log 이상의 감소, 7일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 3.0 log 이상의 감소, 및 28일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 0.5 로그 이하의 증가(즉, 증가 없음)를 요구한다. 표 1을 참조한다. 효모 및 진균의 경우, 카테고리 A는 7일째 날에서 초기 계산된 총수로부터 2.0 log 이상의 감소, 및 28일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 증가 없음을 요구하고; 카테고리 B는 14일째 날에서 초기 계산된 총수로부터 1.0 log 이상의 감소, 및 28일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 증가 없음을 요구한다.
미국 약전, 유럽 약전 및 일본 약전 사이의 방부제 효과 시험에 대한 허용 기준
유기체
방법
log CFU /㎖ 감소
6시간 24시간 7일째 날 14일째 날 28일째 날

세균

EP-A* 2 3 - - NR***
EP-B - 1 3 - NI**
USP - - 1 3 NI
JP - - - 3 NI

효모 및 진균

EP-A - - 2 - NI
EP-B - - - 1 NI
USP - - NI NI NI
JP - - - NI NI
* A 기준은 달성될 권장된 효과를 표시한다. A 기준이 달성될 수 없는 정당한 이유가 있는 경우, B 기준이 충족되어야 한다.
** NI: 증가 없음: 이것은 앞서 측정된 값보다 0.5 log10 단위 이하로 더 높은 값으로서 정의된다.
*** NR: 회복 없음
본 발명의 일부 실시양태에서, 본 발명의 방부제는 면역원성 제제 중의 미생물의 농도를 감소시키는 데에 효과적이다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 하나 이상의 방부제를 포함하는 백신 제제는 하나 이상의 미생물을 사용한 접종 후 상기 하나 이상의 방부제를 갖지 않은 백신 제제와 비해 상기 미생물의 농도를 감소시킨다. 본 발명의 구체적인 실시양태에서, 상기 제제는 24시간에서 초기 미생물 총수로부터 1.0 log 이상의 감소, 7일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 3.0 log 이상의 감소 및 28일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 0.5 log 이하의 증가를 제공한다. 본 발명의 또 다른 구체적인 실시양태에서, 상기 제제는 접종 후 6시간에서 초기 계산된 총수로부터 2.0 log 이상의 감소, 24시간에서 앞서 측정된 값으로부터 3.0 log 이상의 감소, 및 28일째 날에서 초기 미생물 총수에 비해 회복 없음을 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, 상기 제제는 비경구 제제 및 안구 제제에 대한 유럽 약전(EP) 요건, 특히 EP 제5 개정판 5.6(5.1.3)의 카테고리 A(EP-A) 및/또는 카테고리 B(EP-B) 요건을 충족시킨다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, 상기 제제는 비경구 제제에 대한 미국 약전(USP) 29 NF 24 부록 2 요건을 충족시킨다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 본 발명의 하나 이상의 방부제는 미생물로 챌린지되었을 때 상기 하나 이상의 방부제를 결여하는 제제에 비해 제제 중의 미생물의 농도를 감소시키는 데에 효과적이다. 상기 미생물은 하기 미생물들 중 하나 이상일 수 있으나 이들로 한정되지 않는다: 슈도모나스 애루기노사, 스타필로코커스 아우레우스, 에스케리치아 콜라이, 바실러스 서브틸리스, 칸디다 알비칸스, 아스퍼길러스 니게르 등.
본 발명의 일부 실시양태에서, 미생물은 다양한 간격을 두고 백신 내로 1회 이상 도입될 수 있거나 접종될 수 있다. 접종은 의도적인 실험 접종과 관련하여 일어날 수 있거나 다회 투여량 백신 제제의 용기로 들어가는 오염된 피하 바늘과 관련하여 일어날 수 있다. 접종들 사이의 간격은 1분 내지 1개월일 수 있다. 구체적인 실시양태에서, 다회 접종은 초기 접종 후에 일어나거나, 초기 접종 후 6시간에서 일어나거나, 초기 접종 후 24시간에서 일어나거나, 초기 접종 후 7일째 날에서 일어나거나 초기 접종 후 14일째 날에서 일어난다.
백신 및 방부제 안정성에 대한 파라미터
본 발명의 일부 실시양태에서, 백신 제제 중의 하나 이상의 항원성 결정인자(즉, 스트렙토코커스 뉴모니아 혈청형으로부터의 폴리사카라이드 제제)의 항원성은 일정 온도에서 일정 저장 시간 동안 안정하다. 상기 항원성은 당업계에서 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. 예를 들면, 총 항원성은 실시예 3에 기재된 바와 같이 유형 특이적 항혈청의 사용을 통해 측정될 수 있다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 백신 제제 중의 하나 이상의 항원성 결정인자의 항원성은 4주 이상, 6주 이상, 8주 이상, 10주 이상, 12주 이상, 18주 이상, 24주 이상, 48주 이상, 1년 이상, 1.25년 이상, 1.5년 이상, 1.75년 이상, 2년 이상, 2.25년 이상 또는 2.5년 이상 동안 안정하다. 바람직하게는, 백신 제제 중의 다수의 항원성 결정인자, 예를 들면, 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 항원성 결정인자의 항원성은 4주 이상, 6주 이상, 8주 이상, 10주 이상, 12주 이상, 18주 이상, 24주 이상, 48주 이상, 1년 이상, 1.25년 이상, 1.5년 이상, 1.75년 이상, 2년 이상, 2.25년 이상 또는 2.5년 이상 동안 안정하다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 백신 제제 중의 하나 이상의 항원성 결정인자의 항원성은 약 -25℃ 내지 약 37℃, -20℃ 내지 -10℃, 2℃ 내지 8℃, 약 실온, 22℃ 내지 28℃, 또는 약 37℃에서 저장되었을 때 안정하다. 본 발명의 구체적인 실시양태에서, 백신 제제 중의 하나 이상의 항원성 결정인자의 항원성은 2℃ 내지 8℃의 온도에서 2.5년 이상 동안 저장된 후 안정하다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 본 발명의 방부제의 농도는 전술된 저장 온도에서 전술된 기간 동안 백신의 저장 후 안정하다. 본 발명의 구체적인 실시양태에서, 백신 제제 중의 방부제의 농도는 2℃ 내지 8℃에서 2.5년 이상 동안 백신의 저장 후 안정하다. 방부제의 농도는 당업계에서 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. 예를 들면, 티메로살은 실시예 3에 기재된 바와 같이 냉각 증기 원자 흡수 분광측정(CVAAS)의 이용을 통해 측정될 수 있다. 2-EP 농도는 실시예 3에 기재된 바와 같이 역상 HPLC 분석에 의해 측정될 수 있다. 역상 HPLC 분석은 하기 방식으로 수행될 수 있다: 샘플을 와동하고 식염수 중의 5 mM 석시네이트 완충제로 1:10으로 희석하고, 원심분리하고, 다시 식염수 중의 5 mM 석시네이트 완충제로 1:10으로 희석한다(시험 샘플의 최종 희석은 1:100임). 그 다음, 아질런트 이클립스(Agilent Eclipse) XDB-C18 HPLC 컬럼, 및 물과 트라이플루오로아세트산 함유 아세토니트릴의 선형 구배를 이용하여 샘플을 분석한다. 그 다음, 방부제의 정량을 표준 곡선과 비교한다. 문헌[Sharma et al., Biologicals 36(1): 61-63 (2008)] 또한 참조한다.
상기 개시내용은 일반적으로 본 발명을 기술한다. 보다 완전한 이해는 하기 구체적인 실시예를 참조함으로써 수득될 수 있다. 이들 실시예는 예증의 목적으로만 기재되어 있고 본 발명의 범위를 한정하기 위한 것이 아니다.
실시예
실시예 1 - 예비 방부제 스크리닝 분석
다회 투여량 프레브(베)나르 13 백신의 제제 개발은 프레브(베)나르 13 제제 중의 방부제(페놀(0.25%), 2-페녹시에탄올(5 ㎎/㎖), m-크레졸(0.3%), 메틸파라벤 및 프로필파라벤(각각 0.18% 및 0.12%)을 포함함)의 예비 스크리닝으로 시작된다.
방부제 효과를 시험하기 위해, 백신의 분취액을 하기 유기체들로 접종하였다:
1. 스타필로코커스 아우레우스(세균; ATCC 번호 6538);
2. 슈도모나스 애루기노사(세균; ATCC 번호 9027);
3. 칸디다 알비칸스(효모; ATCC 번호 10231); 및
4. 아스퍼길러스 니게르(진균; ATCC 번호 16404).
표시된 농도로 티메로살 또는 2-PE를 갖거나 갖지 않은 각각의 백신 제제, 또는 0.02%로 티메로살을 함유하는 식염수 30 밀리리터(㎖)를 각각의 시험 유기체의 현탁액으로 3회 반복하여 접종함으로써 0시간에서 약 105 CFU/㎖ 내지 106 CFU/㎖(CFU = 콜로니 형성 단위)의 접종물 밀도를 달성하였다. 각각의 접종물의 부피는 각각의 의도적인 챌린지 동안 제품의 부피의 1%를 초과하지 않았다. 샘플을 혼합하여 챌린지된 유기체의 고른 분포를 보장하였다. (방부제를 갖거나 갖지 않은) 또 다른 30 ㎖의 동일한 3개 백신을 음성 대조군으로서 사용하였고 배양 배지 단독과 섞어 샘플 또는 배지에 존재할 내재적 오염을 평가하였다. 일련의 3개 백신 각각, 양성 대조군 및 음성 대조군을 20℃ 내지 25℃에서 따로 항온처리하였다. 0시간에서, 및 접종 후 6시간, 14시간, 7일, 14일 및 28일의 간격을 두고 상기 챌린지된 샘플 및 대조군(또는 이들의 적절한 연속 10배 희석물)의 분취액(1 ㎖)을 사용하여 평판 계수(plate count)로 미생물 수를 이중으로 세었다.
USP 29 NF 24 부록 2(USP)는 세균 미생물의 접종 후 7일째 날에서 초기(즉, 접종 시점에서) 계산된 총수로부터 1.0 log 이상의 감소가 있고, 14일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 3.0 log 이상의 감소가 있고, 28일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 증가가 없을 것을 요구한다. 표 1을 참조한다. 효모 및 진균의 경우, USP 요건은 접종 시점으로부터 7일째 날, 14일째 날 및 28일째 날까지 증가가 없어야 한다는 것이다.
EP 요건은 보다 더 엄격하다. 비경구 제제 및 안구 제제에 대한 EP 제5 개정판 5.6(5.1.3) 요건은 카테고리 A 및 카테고리 B를 갖는다. 카테고리 A(EP-A)는 세균의 경우 접종 후 6시간에서 초기 계산된 총수로부터 2.0 log 이상의 감소, 24시간에서 앞서 측정된 값으로부터 3.0 log 이상의 감소, 및 28일째 날에서 회복 없음을 요구한다. 카테고리 B(EP-B)는 세균의 경우 24시간에서 초기 계산된 총수로부터 1.0 log 이상의 감소, 7일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 3.0 log 이상의 감소, 및 28일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 0.5 log 이하의 증가(즉, 증가 없음)를 요구한다. 표 1을 참조한다. 효모 및 진균의 경우, 카테고리 A는 7일째 날에서 2.0 log 이상의 감소, 및 28일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 증가 없음을 요구하고; 카테고리 B는 14일째 날에서 1.0 log 이상의 감소, 및 28일째 날에서 앞서 측정된 값으로부터 증가 없음을 요구한다.
세균의 경우 300 CFU 미만을 함유하거나 효모 또는 진균의 경우 100 CFU 미만을 함유하는 플레이트를 미생물 수 측정 동안 사용하였다. 단회 챌린지 연구의 경우, 삼중 플레이트 및 이중 플레이트 상에서(시점 당 6개의 값) 모든 생존하는 미생물 및 이들의 희석된 샘플에서 모든 생존하는 미생물의 산술 평균 총수를 측정하였고 CFU/㎖로서 표준화하였다. 결과는 (0시간에 비해) 평균 log10 CFU/㎖ 감소로서 표현된다. 이 경우, 생존하는 미생물의 총수를 기준으로서 0시간에서 평가하고 6시간, 24시간, 7일, 14일 및 28일의 접종 시간과 비교한다.
시험된 방부제는 프레브(베)나르 13 결합된 항원성의 감소를 보여준 파라벤(메틸파라벤 및 프로필파라벤)을 제외하고 프레브(베)나르 13 안정성에 대한 분명한 영향을 전혀 보이지 않았다. 추가로, 페놀, m-크레졸, 메틸파라벤 및 프로필파라벤은 변형된 로우리(Lowry) 단백질 분석(백신의 단백질 농도는 상업적으로 이용가능한 변형된 로우리 단백질 분석에 의해 측정됨)을 방해하였다.
방부제 효과 시험(PET)은 시험된 모든 방부제들이 USP 요건을 충족시키지만 EP 기준(EP-A 또는 EP-B)을 충족시키지는 못한다는 것을 보여주었다. 표 2를 참조한다. 2-PE는 보다 높은 투여량에서 안전한 것으로 공지되어 있는 유일한 후보 방부제였다. 따라서, 보다 높은 투여량의 2-PE를 사용하는 경우 방부제 효과에 대한 추가 시험을 수행하였다.
미생물의 단회 챌린지 후 USP 및 EP* 백신 안전성 요건을 충족시킴에 있어서 잠재적인 방부제의 효과
0.5 ㎖ 투여량
방부제 		챌린지 유기체
세균 효모 진균
스타필로코커스 아우레우스 에스케리치아 콜라이 슈도모나스 애루기노사 칸디다 알비칸스 아스퍼길러스 니게르
2-페녹시에탄올 5.0 ㎎/㎖
USP 충족 충족 충족 충족 충족
EP 실패 실패 실패 실패 실패
0.3% m-크레졸
USP 충족 충족 충족 충족 충족
EP 실패 실패 실패 충족 충족
0.18% 메틸파라벤 및 0.02% 프로필파라벤
USP 충족 충족 충족 충족 충족
EP 실패 실패 실패 충족 충족
0.25% 페놀
USP 충족 충족 충족 충족 충족
EP 실패 실패 실패 충족 충족
*EP-B
실시예 2 - 단회 챌린지 방법에 의한 방부제 효과 시험: 2- PE 및 티메로살
티메로살은 미국에서 허가받은 주요 백신들에서 통상적으로 0.01% 농도로 사용된다. 상기 실시예 1에 기재된 방법과 동일한 단회 챌린지 방법을 이용하여 방부제로서의 티메로살의 효과를 시험하였다. 티메로살을 0.01%(0.5 ㎖ 투여량 당 25 ㎍의 수은에 해당함)로 함유하는 프레브(베)나르 13 백신 제제는 EP의 방부제 항균 효과 방법에 의해 확립된 유럽 허용 기준 EP-A 또는 EP-B를 충족시키지 못하였다. 그러나, 상기 제제는 미국 또는 일본 약전에 의해 확립된 허용 한계를 통과하였는데, 이것은 이들 개요 방법에 의해 확립된 허용 한계가 EP에서 확립된 허용 한계보다 덜 엄격하기 때문이다. 도 1을 참조한다.
미국에서 허가받은 백신들 중 일부에서 권장된 티메로살 농도의 2배에 해당하는 0.02%(투여량 당 50 ㎍의 수은을 함유함)의 티메로살, 또는 미국에서 허가받은 백신들 중 일부에서 권장된 티메로살 농도의 4배에 해당하는 0.04%(투여량 당 100 ㎍의 수은을 함유함)의 티메로살은 (미생물의 단회 챌린지를 이용하였을 때) EP 허용 기준 B를 충족시켰지만, 보다 더 엄격한 A 허용 기준을 충족시키지 못하였다. 도 1을 참조한다.
2-PE는 티메로살보다 방부제로서 더 효과적이었다. 2.5 ㎎/투여량에서 2-PE는 EP 허용 기준 A 및 B 둘다를 충족시키지 못하였지만, 3.5 ㎎/투여량 내지 5.5 ㎎/투여량의 농도에서 2-PE는 EP 허용 기준 B를 충족시켰다. 6.0 ㎎/투여량 초과의 농도에서 2-PE는 EP-A 및 EP-B 항균 효과 허용 기준 둘다를 충족시켰다(도 2).
실시예 3 - 2- PE 및 티메로살을 사용한 단회 챌린지 방법: 오염물질 수준의 변화
프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 방부제의 부재는 20℃ 내지 25℃에서 28일 동안의 챌린지 기간에 걸쳐 슈도모나스 애루기노사의 성장을 늦추었고 칸디다 알비칸스 및 아스퍼길러스 니게르의 수준을 변화시키지 못하였고 스타필로코커스 아우레우스의 콜로니 형성 단위의 감소를 늦추었다(도 3).
0.01%(투여량 당 25 ㎍의 수은을 함유하는) 티메로살의 존재는 모든 4종의 접종된 미생물의 오염 수준을 감소시켰다. 그러나, 스타필로코커스 아우레우스 및 칸디다 알비칸스의 억제는 슈도모나스 애루기노사 및 아스퍼길러스 니게르의 억제보다 더 약하였다(도 4). 프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 티메로살의 항균 효과 속도에 대한 투여량 반응 관계는 특히 칸디다 알비칸스에 대해 관찰되었고, 이때 오염 수준의 감소는 0.02% 티메로살을 사용하였을 때 더 현저하였다(도 5). 0.02% 티메로살 함유 식염수 제제 중의 프레브(베)나르 13의 부재는 스타필로코커스 아우레우스 및 칸디다 알비칸스에 대한 티메로살의 성장 억제 효과를 다소 개선시켰다(도 6).
2-PE는 티메로살보다 방부제로서 더 효과적이었다. 예를 들면, 티메로살에 의한 스타필로코커스 아우레우스의 느린 감소와 대조적으로, 5.0 ㎎/투여량의 2-PE의 항균 효과는 접종 후 24시간에서 스타필로코커스 아우레우스를 기준값으로 감소시켰다(도 7). 2-PE가 아스퍼길러스 니게르에 대한 방부제로서 티메로살보다 덜 효과적이었고(도 7), 아스퍼길러스 니게르 오염의 감소 속도가 티메로살에 비해 보다 더 느렸지만(도 4 및 5), 다른 균주들에 대한 2-PE의 더 우수한 효과는 2-PE가 3.5 ㎎/투여량 및 5.0 ㎎/투여량의 농도에서 방부제 허용 기준 EP-B를 충족시킬 수 있게 하였지만(도 2), 0.01% 티메로살은 그러하지 못하였다(도 1).
3.5 ㎎/투여량 및 5.0 ㎎/투여량에서 2-PE의 방부 효과는 제제가 37℃에서 1개월 동안 또는 2℃ 내지 8℃에서 2.5년 동안 저장되었을 때 지속적으로 남아있었다(도 2). 상기 제제 중의 2-PE의 농도는 유사하게 안정하였다(도 15). 프레브(베)나르 13 제제에 존재하는 13종의 혈청형들 각각의 면역학적 활성(총 항원성)도 이들 저장 조건 하에서 안정하였다(도 14).
총 항원성은 각각의 혈청형에 대해 백신에 존재하는 결합된 폴리사카라이드 및 비결합된 폴리사카라이드 둘다로부터 유래되었다. 유형 특이적 항원성은 유형 특이적 항혈청의 사용을 통해 측정되었다. 분석 전, 인산알루미늄으로 제제화된 13가 백신을 먼저 가용화시켰다. 그 다음, 용액을 중화시켜 알칼리성 유도 분해를 피하였다. 상기 분석은 탁도측정기(Nephelometer)를 이용하여 항체-항원 복합체 형성으로부터 유래된 광 산란 강도의 변화 속도를 측정하였다. 시험 샘플의 항원성을 샘플의 분석 직전 또는 직후에 측정된 표준 곡선을 이용하는 선형 회귀로 측정하였다.
프레브(베)나르 13 백신 및 식염수 제제의 티메로살 함량을 확인하기 위해, 몇몇 제제들에서 수은의 농도를 냉각 증기 원자 흡수 분광측정(CVAAS) 방법으로 측정하였다. 측정된 수은 농도는 그의 예측된 값에 매우 가까웠는데, 이것은 이들 제제들 중의 티메로살 농도가 예상대로 과소평가될 수 없다는 것임을 암시한다. 측정된 2-PE 농도도 그의 예측된 값에 매우 가까웠고 2℃ 내지 8℃ 또는 37℃에서 프레브(베)나르 13 제제를 저장하였을 때 시간에 따라 변하지 않았다. 2-PE 농도를 역상 HPLC 분석으로 측정하였다. 샘플을 와동하였고 식염수 중의 5 mM 석시네이트 완충제로 1:10으로 희석하였고, 원심분리하였고, 다시 식염수 중의 5 mM 석시네이트 완충제로 1:10으로 희석하였다. 시험 샘플의 최종 희석은 1:100이었다. 상기 분석은 아질런트 이클립스 XDB-C18 HPLC 컬럼, 및 물과 트라이플루오로아세트산 함유 아세토니트릴의 선형 구배를 이용하였다. 13vPnC 다회 투여량 백신 샘플 중의 2-PE를 2-PE 표준 곡선에 대하여 정량하였다. 문헌[Sharma et al., Biologicals 36(1): 61-63 (2008)] 또한 참조한다.
실시예 4 - 다회 챌린지 방법에 의한 방부제 효과 시험: 티메로살
최대 4주 동안 다회 면역화 기간에서 백신의 WHO 다회 투여량 개방 바이알 정책의 적절성을 평가하기 위해, WHO에 의해 제공된 실험 디자인을 실시하였다. 본 연구에서, 미국에서 허가받은 백신의 대다수에서 존재하는 농도(0.01%) 및 보다 높은 농도(0.02%)에서 티메로살의 효과를 평가하였다. 다회 투여량 제시의 반복된 사용 동안 실제로 일어날 수 있는 오염의 최악의 합당한 가능한 경우를 대표하고 WHO 요건을 시험하기 위해, 0.01% 또는 0.02% 티메로살 또는 5.0 ㎎/투여량의 2-PE를 갖는 프레브(베)나르 13 백신 제제를, WHO에 의해 권장된 세균 균주인 슈도모나스 애루기노사, 스타필로코커스 아우레우스, 에스케리치아 콜라이 및 바실러스 서브틸리스를 사용한 다회 오염 사건에 의도적으로 노출시켰다. 초기 챌린지 후 0시간, 6시간, 24시간, 7일째 날 및 14일째 날에 제제를 5 x 103 CFU/㎖의 각각의 유기체와 섞고 실제로 가능한 저장 조건과 유사한 2℃ 내지 8℃ 또는 22℃ 내지 24℃에서 저장하였다. 상기 제제 중의 티메로살의 항균 효과에 대한 프레브(베)나르 13의 잠재적 영향을 평가하기 위해 0.02% 티메로살을 함유하는 식염수 제제도 대조군으로서 사용하였다.
방부제의 부재 하에서 프레브(베)나르 13 백신 제제를 의도적으로 다회 오염시켰을 때, 슈도모나스 애루기노사 및 에스케리치아 콜라이 유기체의 수준은 특히 22℃ 내지 24℃에서 저장되었을 때 연구 과정에 걸쳐 증가하였다(도 8의 A 및 B). 22℃ 내지 24℃에서 저장된 제제 중의 스타필로코커스 아우레우스의 수준은 단회 챌린지 연구 동안 관찰된 수준과 유사하게 서서히 감소하였다(도 8의 A를 도 3과 비교함). 바실러스 서브틸리스의 생존력은 훨씬 더 현저하게 감소하였다(도 8의 A 및 B). 이들 결과는 바실러스 서브틸리스가 WHO에 의한 권장에도 불구하고 방부제 효과 시험에서 이러한 챌린지 연구를 위한 모델로서 사용될 이 제제 중의 강력한 유기체가 아니라는 것을 암시한다.
프레브(베)나르 13 백신 제제에서, 0.01% 티메로살의 항균 효과는 바실러스 서브틸리스에 대해 가장 높았고 그 다음으로 슈도모나스 애루기노사에 대해 높았다. 그러나, 스타필로코커스 아우레우스 및 에스케리치아 콜라이의 감소는 특히 상기 제제가 2℃ 내지 8℃에서 저장되었을 때 느렸다(도 9의 A 및 B).
도 12에 요약되어 있는 스타필로코커스 아우레우스의 생존력 감퇴의 비선형 회귀 분석에서 나타낸 바와 같이, 스타필로코커스 아우레우스의 감퇴 속도는 상기 제제가 22℃ 내지 24℃에서 저장되었을 때(1일 당 -1.39 log10 감퇴, 6.2일 이내에 50% 감퇴)보다 2℃ 내지 8℃에서 저장되었을 때(1일 당 -5.98 log10 감퇴, 30.28일 이내에 50% 감소) 실질적으로 더 느렸다(도 12). 이들 결과는 다회 투여량 전달 동안 현장에서 오염되고 추가로 냉장 온도에서 저장되는 프레브(베)나르 13 백신 제제 중의 0.01% 티메로살이 세균 오염을 감소시키는 데에 효과적이지 않을 것임을 보여준다.
티메로살의 효과는 농도 의존적 및 온도 의존적이었다(도 9 및 10). 티메로살은 0.02%의 보다 높은 농도에서 보다 효과적인 방부제이었다. 또한, 티메로살은 22℃ 내지 24℃의 보다 높은 저장 온도에서 보다 효과적인 방부제이었다. 그러나, 상기 논의되어 있는 바와 같이, 0.02% 농도 및 22℃ 내지 24℃ 저장을 이용한 경우조차도, 티메로살은 EP 기준이 다회 챌린지 연구 동안 적용되었을 때 EP-A 또는 EP-B의 EP 요건을 충족시키지 못하였다(도 1).
백신 자체가 티메로살의 방부 작용에 영향을 미치는지를 연구하기 위해, 다회 챌린지를 이용한 경우 0.02% 티메로살의 효과를 식염수 제제와 프레브(베)나르 13 백신 제제 사이에 비교하였다. 0.02% 티메로살의 존재 하에서, 스타필로코커스 아우레우스 및 에스케리치아 콜라이 둘다의 감퇴 속도는 백신 제제에서보다 식염수 제제에서 더 현저하였는데(도 11을 도 10 및 12와 비교함), 이것은 백신의 존재가 어느 정도까지 방부제로서의 티메로살의 효과를 억제하였다는 것을 입증한다. 그럼에도 불구하고, 백신을 함유하지 않은 식염수 대조군 제제에서조차도 0.02% 티메로살은 다회 챌린지되었을 때 EP-A 또는 EP-B의 허용 기준을 여전히 충족시키지 못하였다(도 1).
실시예 5 - 다회 챌린지 방법에 의한 방부제 효과 시험: 2- PE
특히 2℃ 내지 8℃에서 다회 접종되거나 저장되었을 때 방부제로서의 티메로살의 효과의 결여와 대조적으로, 방부제로서 5 ㎎/투여량의 2-PE를 함유하는 프레브(베)나르 13 백신 제제는 챌린지 방법(즉, 단회 또는 다회) 또는 저장 온도와 관계없이 스타필로코커스 아우레우스의 생존력을 보다 강하게 불활성화시켰다(도 12).
사실상, 저장 온도와 관계없이 다회 챌린지 방법 및 시험된 모든 유기체들(슈도모나스 애루기노사, 스타필로코커스 아우레우스, 에스케리치아 콜라이 및 바실러스 서브틸리스)을 이용하였을 경우, 5 ㎎/투여량의 2-PE는 0.01% 티메로살보다 방부제로서 더 우수하였다. 다양한 챌린지 연구에서 스타필로코커스 아우레우스 감퇴의 비선형 회귀 분석에서, 2-PE를 함유하는 백신 제제는 50% 감퇴 및 감퇴의 평균 기울기(log10 감퇴/일) 둘다에 있어서 티메로살을 함유하는 백신 제제보다 더 빠른 미생물 오염물질 감퇴 속도를 가졌다. 도 12를 참조한다. 추가로, 5 ㎎/투여량의 2-PE는 다회 챌린지 하에서 EP-B 기준을 충족시켰지만, 티메로살은 동일한 조건 하에서 상기 기준을 충족시킬 수 없었다(도 13).
티메로살은 분배 동안 도입될 수 있는 잠재적 오염으로부터 다회 투여량 제제 중의 프레브(베)나르 13을 보호하는 데에 있어서 효과적인 방부제가 아니다. 이것은 오염이 다회 투여량 제제를 대상체에게 투여하는 동안 다회 도입될 때 훨씬 더 분명하다. 티메로살은 일반적인 숙련자가 열악한 위생 조건 하에서 다회 투여량 바이알로부터 백신을 빼내었을 때 잠재적인 오염 유기체를 제거하는 데 있어서 지체되는 즉석 효과를 나타내면서 특히 스타필로코커스 아우레우스 및 에스케리치아 콜라이에 대한 느린 불활성화 속도를 갖는다. 그러나, 3.5 ㎎/투여량 내지 5 ㎎/투여량의 2-PE는 티메로살에 비해 훨씬 더 높은 항균 효과 속도를 나타내면서 안정하므로 대상체를 투여하는 동안의 우발적인 오염으로부터 제품을 보호할 것이다.
실시예 6 - 비인간 영장류에서 방부제로서 2-페녹시에탄올을 사용하거나 사용하지 않은 프레베나르 13의 면역화에 의해 유도된 면역 반응
면역 반응을 유도하는 프레베나르 13 및 2-페녹시에탄올 함유 프레베나르 13의 능력을 사이노몰거스 마카크(cynomolgus macaque)에서 평가한다. 총 20마리의 사이노몰거스 마카크에 대해 10마리의 마카크로 구성된 2개의 면역화 군을 표 3에 상세히 기재된 바와 같이 본 연구를 위해 사용한다.
군 마카크/군 백신 최종 부피 전달
1 10 13vPnC 0.5 ㎖ 근육내
2 10 13vPnC + 5 ㎎ 2PE 0.5 ㎖ 근육내
예비스크리닝된 동물들을 그들의 체중 및 기준 역가를 기준으로 군으로 무작위로 나눈다.
방부제로서 0 ㎎ 또는 5 ㎎의 2-페녹시에탄올을 함유하는 임상 투여량의 13vPnC를 마카크에게 투여한다. 상기 백신을 각각의 원숭이의 사두근 근육 내의 단일 부위에서 근육내로 투여한다. 전달된 최종 부피는 0.5 ㎖이다.
모든 마카크들이 3회 투여량을 제공받고 2주, 4주 및 8주에서 백신접종된다.
채혈 일정: 백신에 대한 면역 반응의 유도를 모니터링하기 위해 0주, 6주, 8주, 10주, 12주 및 16주에서 말초 혈액을 샘플링한다.
연구 동안 수집된 혈청에 대한 하기 분석을 수행함으로써 백신접종에 의해 유도된 면역 반응을 모니터링한다:
Figure 112013000524436-pct00001
시험관내 결합 및 기능성 항체:
Figure 112013000524436-pct00002
ELISA에 의한 혈청형 특이적 IgG(예를 들면, 문헌[Fernsten P, et al., Hum Vaccin. 2011 Jan 1;7:75-84] 참조)
Figure 112013000524436-pct00003
혈청형 특이적 옵소닌식균작용 분석(OPA)(예를 들면, 문헌[Fernsten P, et al., Hum Vaccin. 2011 Jan 1;7:75-84] 참조)
Figure 112013000524436-pct00004
새끼 래트 챌린지 모델에서 생체내 보호(예를 들면, 문헌[Fernsten P, et al., Hum Vaccin. 2011 Jan 1;7:75-84] 참조)
Figure 112013000524436-pct00005
풀링된 마카크 혈청은 혈청형 특이적 보호에 대해 평가된다.

Claims (29)

  1. CRM197에 개별적으로 접합된, 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumoniae) 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 폐렴구균 캡슐형 폴리사카라이드로 이루어진 다당류-단백질 접합체를 포함하고, 7 ㎎/㎖ 내지 15 ㎎/㎖의 농도로 2-페녹시에탄올(2-PE)을 추가로 포함하는 다가 면역원성 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    10 ㎎/㎖의 농도로 2-PE를 포함하는 다가 면역원성 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    투여량 당 3.5 내지 5.5 mg의 농도로 2-PE를 포함하고, 상기 투여량이 0.5 ㎖인 다가 면역원성 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    투여량 당 4.0 mg의 농도로 2-PE를 포함하고, 상기 투여량이 0.5 ㎖인 다가 면역원성 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    인산알루미늄인 항원보강제(adjuvant)를 추가로 포함하는, 다가 면역원성 조성물.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역원성 조성물의 항원성이 1년 이상 동안 안정한, 다가 면역원성 조성물.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 미생물로 접종(inoculation) 후, 상기 미생물의 농도가 시간에 따라 감소되는, 다가 면역원성 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    미생물 균주가 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 에쉐리치아 콜라이(Escherichia coli) 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로부터 선택된 하나 이상의 균주인, 다가 면역원성 조성물.
  9. 제7항에 있어서,
    다회 접종(inoculation)되는 다가 면역원성 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    초기 접종 6시간 후에 제2 접종되고, 초기 접종 24시간 후에 제3 접종되고, 초기 접종 7일 후에 제4 접종되고, 초기 접종 14일 후에 제5 접종되는, 다가 면역원성 조성물.
  11. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    완충제, 냉동보호제, 염, 2가 양이온, 비이온성 세제 및 자유 라디칼 산화 억제제 중 하나 이상을 추가로 포함하는 다가 면역원성 조성물.
  12. CRM197에 개별적으로 접합된, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 폐렴구균 캡슐형 폴리사카라이드의 다가 면역원성 조성물 제제로서, 이때 상기 다가 면역원성 조성물이 4.4 ㎍/㎖의 각각의 폴리사카라이드(단, 6B의 경우 8.8 ㎍/㎖); 58 ㎍/㎖의 CRM197 담체 단백질; 인산알루미늄 형태로서 0.25 ㎎/㎖의 원소 알루미늄; 0.85%의 염화나트륨; 0.02%의 폴리소르베이트 80; 5 mM의 석신산나트륨 완충제(pH 5.8); 및 10 ㎎/㎖의 2-페녹시에탄올을 포함하도록 멸균 액체로 제제화되어 있는, 다가 면역원성 조성물 제제.
  13. 제1항 내지 제4항 및 제12항 중 어느 한 항의 다가 면역원성 조성물을 함유하는 바이알.
  14. 제13항에 있어서,
    1회 초과 투여량의 면역원성 조성물을 함유하는 바이알.
  15. 제1항 내지 제4항 및 제12항 중 어느 한 항의 다가 면역원성 조성물을 포함하는 예비충전된 백신 전달 장치.
  16. 제15항에 있어서,
    주사기이거나 주사기를 포함하는 예비충전된 백신 전달 장치.
  17. 제1항 내지 제4항 및 제12항 중 어느 한 항의 다가 면역원성 조성물을 제조하기 위한 키트로서, (i) 동결건조된 형태의 제1항 내지 제4항 및 제12항 중 어느 한 항의 다가 면역원성 조성물, 및 (ii) 수성 조성물을 제공하기 위해 성분 (i)을 재구성하기 위한 수성 물질을 포함하는 키트.
  18. 2회 투여량 이상의 제1항 내지 제4항 및 제12항 중 어느 한 항의 다가 면역원성 조성물을 투여량 당 0.1 ㎖ 내지 2 ㎖로 포함하는 용기.
  19. 제18항에 있어서,
    투여량이 0.5 ㎖인, 용기.
  20. 제18항에 있어서,
    2회 내지 10회 투여량을 포함하는 용기.
  21. 제18항에 있어서,
    4회 투여량을 포함하는 용기.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018048141A1 (ko) * 2016-09-06 2018-03-15 주식회사 엘지화학 다가 협막 다당류-운반 단백질을 포함하는 조성물 및 이의 용도
WO2018169303A1 (ko) * 2017-03-15 2018-09-20 주식회사 엘지화학 다가 폐렴구균 백신 조성물

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107080838A (zh) * 2010-06-04 2017-08-22 惠氏有限责任公司 疫苗制剂
EP2771296B1 (en) 2011-10-25 2017-09-27 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
KR20150020164A (ko) 2012-05-15 2015-02-25 수브하시 브이. 카프레 보강제 제형 및 방법
KR102057217B1 (ko) * 2012-06-20 2020-01-22 에스케이바이오사이언스 주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
KR20140075196A (ko) * 2012-12-11 2014-06-19 에스케이케미칼주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
US9849066B2 (en) 2013-04-24 2017-12-26 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9717648B2 (en) 2013-04-24 2017-08-01 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9707153B2 (en) * 2013-04-24 2017-07-18 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9717649B2 (en) 2013-04-24 2017-08-01 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9603775B2 (en) 2013-04-24 2017-03-28 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9707155B2 (en) 2013-04-24 2017-07-18 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9839579B2 (en) 2013-04-24 2017-12-12 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9713572B2 (en) 2013-04-24 2017-07-25 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9700486B2 (en) 2013-04-24 2017-07-11 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9700485B2 (en) 2013-04-24 2017-07-11 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9707154B2 (en) 2013-04-24 2017-07-18 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
WO2014186754A2 (en) * 2013-05-16 2014-11-20 Board Of Regents The University Of Texas System Dry solid aluminum adjuvant-containing vaccines and related methods thereof
US11160855B2 (en) * 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
CN103893751B (zh) * 2014-03-26 2016-04-20 天津康希诺生物技术有限公司 一种肺炎球菌多糖蛋白缀合疫苗及其制备方法
AU2016254693B2 (en) * 2015-04-28 2020-07-09 Biological E Limited Method for separation of protein and other impurities from microbial capsular polysaccharides
WO2016200787A2 (en) 2015-06-09 2016-12-15 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Compositions and treatments for haemophilus influenzae
US10709758B2 (en) 2015-09-03 2020-07-14 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Peptide inhibitors of clostridium difficile toxin B (TcdB) toxin
CN105233296B (zh) * 2015-11-24 2018-08-17 江苏省农业科学院 用于鸭病毒性肝炎活疫苗的耐热冻干保护剂及其制备方法和应用
EP3442587B1 (en) 2016-04-14 2021-08-18 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Multi-dose compositions containing an antimicrobial polyamide or octenidine preservative
EP3562838A2 (en) 2016-12-28 2019-11-06 Henriques Normark, Birgitta Microparticles from streptococcus pneumoniae as vaccine antigens
CN106822884B (zh) * 2016-12-28 2021-04-30 北京民海生物科技有限公司 一种多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法
EP3562503A2 (en) 2016-12-30 2019-11-06 Sutrovax, Inc. Polypeptide-antigen conjugates with non-natural amino acids
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
KR20190108583A (ko) 2017-01-31 2019-09-24 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 다당류-단백질 접합체 제조 방법
KR102650073B1 (ko) * 2017-01-31 2024-03-20 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 스트렙토코커스 뉴모니아 혈청형 19f 유래의 협막 다당류 단백질 접합체의 제조 방법
MX2019009867A (es) 2017-02-24 2019-10-02 Merck Sharp & Dohme Inmunogenicidad mejorada de conjugados de polisacarido-proteina de streptococcus pneumoniae.
JP7132954B2 (ja) 2017-06-10 2022-09-07 インベントプライズ リミテッド ライアビリティ カンパニー 改善された免疫原性及び結合活性を提供する２価又は多価コンジュゲート多糖を含む多価コンジュゲートワクチン
US10729763B2 (en) 2017-06-10 2020-08-04 Inventprise, Llc Mixtures of polysaccharide-protein pegylated compounds
BR112020004502A8 (pt) 2017-09-07 2022-11-01 Merck Sharp & Dohme Polissacarídeos pneumocócicos e uso dos mesmos em conjugados imunogênicos polissacarídeo-proteína carreadora
US11491216B2 (en) 2017-09-07 2022-11-08 Merck Sharp & Dohme Llc Pneumococcal polysaccharides and their use in immunogenic polysaccharide-carrier protein conjugates
CN116898959A (zh) 2017-09-07 2023-10-20 默沙东有限责任公司 肺炎球菌多糖及其在免疫原性多糖-载体蛋白缀合物中的用途
WO2019139692A2 (en) 2017-12-06 2019-07-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Compositions comprising streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
CA3083953A1 (en) 2017-12-11 2019-06-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Dry adjuvanted immune stimulating compositions and use thereof for mucosal administration
CA3089007A1 (en) 2018-02-05 2019-08-08 Sanofi Pasteur Inc. Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
EP3556728A1 (en) * 2018-04-16 2019-10-23 Croda Denmark A/S Organically modified mineral micro-particles, methods of preparing the same and uses thereof
AU2019256218A1 (en) 2018-04-18 2020-12-03 Sk Bioscience Co., Ltd. Streptococcus pneumoniae capsular polysaccharides and immunogenic conjugate thereof
KR20210002641A (ko) 2018-04-30 2021-01-08 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 디메틸술폭시드 중의 동결건조된 돌연변이체 디프테리아 독소의 균질 용액을 제공하는 방법
US20210252125A1 (en) 2018-04-30 2021-08-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for producing streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide carrier protein conjugates
CN112469435A (zh) * 2018-07-21 2021-03-09 生物E有限公司 包括防腐剂系统的疫苗制剂
MX2021007496A (es) 2018-12-19 2021-08-05 Merck Sharp & Dohme Llc Composiciones que comprenden conjugados de polisacarido de streptococcus pneumoniae con proteina y sus metodos de uso.
CA3191005A1 (en) 2020-08-10 2022-02-17 Inventprise, Inc. Multivalent pneumococcal glycoconjugate vaccines containing emerging serotype 24f
CN113293115B (zh) * 2021-07-08 2022-08-26 成都生物制品研究所有限责任公司 肺炎链球菌无动物源冻干保护剂
WO2023218322A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Pfizer Inc. Process for producing of vaccine formulations with preservatives
WO2024102751A2 (en) * 2022-11-07 2024-05-16 Southwest Research Institute Lyophilized and stabilized live attenuated formulated vaccine against tularemia

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US4902506A (en) 1983-07-05 1990-02-20 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
SE8405493D0 (sv) 1984-11-01 1984-11-01 Bror Morein Immunogent komplex samt sett for framstellning derav och anvendning derav som immunstimulerande medel
US5078996A (en) 1985-08-16 1992-01-07 Immunex Corporation Activation of macrophage tumoricidal activity by granulocyte-macrophage colony stimulating factor
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
FR2630115B1 (fr) 1988-04-14 1994-10-28 Merieux Inst Procede de stabilisation des solutions d'albumine humaine et solution obtenue
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
JPH0832638B2 (ja) 1989-05-25 1996-03-29 カイロン コーポレイション サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤
ATE129906T1 (de) 1990-07-19 1995-11-15 Nardino Righi Sicherheitsspritze zum einmaligen gebrauch.
IL101715A (en) 1991-05-02 2005-06-19 Amgen Inc Recombinant dna-derived cholera toxin subunit analogs
US5769047A (en) 1991-12-23 1998-06-23 Zoche; Michael Engine with oil separator
IT1253009B (it) 1991-12-31 1995-07-10 Sclavo Ricerca S R L Mutanti immunogenici detossificati della tossina colerica e della tossina lt, loro preparazione ed uso per la preparazione di vaccini
UA40597C2 (uk) 1992-06-25 2001-08-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Вакцинна композиція,спосіб лікування ссавців, що страждають або сприйнятливі до інфекції, спосіб лікування ссавців, що страждають на рак, спосіб одержання вакцинної композиції, композиція ад'ювантів
ES2231770T3 (es) 1993-03-05 2005-05-16 Wyeth Holdings Corporation Nuevos plasmidos para la produccion de proteina crm y toxina difterica.
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
JP3696267B2 (ja) 1994-02-28 2005-09-14 天野エンザイム株式会社 生理活性蛋白質の安定化方法
US5571515A (en) 1994-04-18 1996-11-05 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Compositions and methods for use of IL-12 as an adjuvant
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
RU2087156C1 (ru) * 1995-06-22 1997-08-20 Леонид Николаевич Падюков Вакцина против пневмококковой инфекции
US6355255B1 (en) 1998-12-07 2002-03-12 Regents Of The University Of Minnesota Streptococcal C5a peptidase vaccine
US5846547A (en) 1996-01-22 1998-12-08 Regents Of The University Of Minnesota Streptococcal C5a peptidase vaccine
RU2098109C1 (ru) 1996-09-26 1997-12-10 Александр Григорьевич Чучалин Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием
JP4078406B2 (ja) 1997-01-22 2008-04-23 有限会社コーキ・エンジニアリング 注射器のシリンダの製造方法
US6113918A (en) 1997-05-08 2000-09-05 Ribi Immunochem Research, Inc. Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
US6224880B1 (en) 1997-09-24 2001-05-01 Merck & Co., Inc. Immunization against Streptococcus pneumoniae using conjugated and unconjugated pneumoccocal polysaccharide vaccines
CA2264970A1 (en) 1998-03-10 1999-09-10 American Cyanamid Company Antigenic conjugates of conserved lipolysaccharides of gram negative bacteria
MXPA01003228A (es) 1998-09-30 2003-06-24 American Cyanamid Co Holotoxina de colera mutante como un coadyuvante.
GB9909077D0 (en) * 1999-04-20 1999-06-16 Smithkline Beecham Biolog Novel compositions
BRPI0009163B8 (pt) * 1999-03-19 2021-05-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa composição imunogênica e vacina que a compreende
EP1233784B1 (en) 1999-12-02 2008-07-09 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Compositions and methods for stabilizing biological molecules upon lyophilization
DE10012370A1 (de) 2000-03-14 2001-09-27 Chiron Behring Gmbh & Co Adjuvans für Vakzinen
IL152959A0 (en) 2000-06-08 2003-06-24 Intercell Biomedizinische Forschungs & Entwicklungs Gmbh Immunostimulatory oligodeoxynucleotides
GB0108364D0 (en) 2001-04-03 2001-05-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
EG24742A (en) * 2000-06-29 2010-07-14 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition.
KR100385711B1 (ko) 2000-07-05 2003-05-27 녹십자백신 주식회사 디프테리아, 파상풍 톡소이드와 백일해균 및ｂ형간염표면항원을 포함한 4가 혼합백신 및 그 제조방법
AT410635B (de) 2000-10-18 2003-06-25 Cistem Biotechnologies Gmbh Vakzin-zusammensetzung
EP1404368B1 (en) 2001-06-07 2009-12-09 Wyeth Holdings Corporation Mutant forms of cholera holotoxin as an adjuvant
EP1404279A4 (en) 2001-06-07 2007-08-08 Wyeth Corp MUTANT FORMS OF CHOLERA HOLOTOXIN AS ADJUVANT
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
EP1441589B1 (en) 2001-11-08 2012-05-09 Abbott Biotherapeutics Corp. Stable liquid pharmaceutical formulation of igg antibodies
US20070148729A1 (en) 2003-01-15 2007-06-28 Farley John E Methods for increasing neisseria protein expression and compositions thereof
EP1587537B1 (en) 2003-01-30 2012-04-11 Novartis AG Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups
RU2358763C2 (ru) 2003-02-10 2009-06-20 Элан Фармасьютикалз, Инк. Композиции иммуноглобулина и способ их получения
WO2004083251A2 (en) 2003-03-17 2004-09-30 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
WO2004094596A2 (en) 2003-04-16 2004-11-04 Wyeth Holdings Corporation Novel immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
UY28391A1 (es) 2003-06-25 2004-12-31 Elan Pharm Inc Metodos y composiciones para tratar artritis reumatoide
UA67144A (en) 2003-07-29 2004-06-15 Inst Exprm & Clinical Veterina Method for production of inactivated vaccine against salmonellosis and escherichiosis of animals
DE10348550A1 (de) 2003-10-20 2005-06-16 Hexal Biotech Forschungsgmbh Stabile wässrige G-CSF-haltige Zusammensetzungen
RU37462U1 (ru) 2004-01-16 2004-04-27 Бычкова Ольга Владимировна Пробирка
TW200638943A (en) 2005-01-28 2006-11-16 Wyeth Corp Stabilized liquid polypeptide formulations
EP2425854A1 (en) 2005-04-08 2012-03-07 Wyeth LLC Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US7709001B2 (en) * 2005-04-08 2010-05-04 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US7955605B2 (en) 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US20070184072A1 (en) 2005-04-08 2007-08-09 Wyeth Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
RU2457858C2 (ru) * 2005-09-01 2012-08-10 Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс Гмбх Унд Ко Кг Множественная вакцинация, включающая менингококки серогруппы с
KR100659373B1 (ko) * 2006-02-09 2006-12-19 서울옵토디바이스주식회사 패터닝된 발광다이오드용 기판 및 그것을 채택하는 발광다이오드
KR101711903B1 (ko) * 2006-03-17 2017-03-03 더 거버먼트 오브 더 유나이티드 스테이츠 오브 아메리카 에즈 레프리젠티드 바이 더 세크러테리 오브 더 디파트먼트 오브 헬스 앤드 휴먼 서비시즈 복합 다가 면역원성 콘쥬게이트의 제조 방법
TW200806315A (en) * 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
US20070253985A1 (en) 2006-04-26 2007-11-01 Wyeth Novel processes for coating container means which inhibit precipitation of polysaccharide-protein conjugate formulations
US8808707B1 (en) * 2006-05-08 2014-08-19 Wyeth Llc Pneumococcal dosing regimen
MX2010008799A (es) 2008-03-05 2010-09-07 Sanofi Pasteur Proceso para estabilizar una composicion de vacuna que contiene adyuvante.
DE102009056871A1 (de) * 2009-12-03 2011-06-22 Novartis AG, 4056 Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben
EP2620423B2 (en) * 2010-05-12 2019-07-31 Novartis AG Improved methods for preparing squalene
CN107080838A (zh) * 2010-06-04 2017-08-22 惠氏有限责任公司 疫苗制剂
RU2013131795A (ru) * 2010-12-10 2015-01-20 Мерк Шарп Энд Домэ Корп. Новые композиции, которые уменьшают вызываемую встряхиванием агрегацию иммуногенных композиций
PL3150222T3 (pl) * 2010-12-22 2020-05-18 Wyeth Llc Stabilne immunogenne kompozycje antygenów staphylococcus aureus
AU2012235817B2 (en) * 2011-04-01 2016-03-10 Wyeth Llc Antibody-drug conjugates
KR20150020164A (ko) * 2012-05-15 2015-02-25 수브하시 브이. 카프레 보강제 제형 및 방법

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018048141A1 (ko) * 2016-09-06 2018-03-15 주식회사 엘지화학 다가 협막 다당류-운반 단백질을 포함하는 조성물 및 이의 용도
WO2018169303A1 (ko) * 2017-03-15 2018-09-20 주식회사 엘지화학 다가 폐렴구균 백신 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
AU2011262346A1 (en) 2012-12-06
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PT3170508T (pt) 2020-01-16
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KR20130041064A (ko) 2013-04-24
CN102933229A (zh) 2013-02-13
AU2011262346B2 (en) 2014-12-11
EP2575870A2 (en) 2013-04-10
EP3170508A1 (en) 2017-05-24
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PL2575870T3 (pl) 2017-05-31
JP2011256168A (ja) 2011-12-22
JP2015143252A (ja) 2015-08-06
CA2799747A1 (en) 2011-12-08
RU2607024C2 (ru) 2017-01-10
CN107080838A (zh) 2017-08-22
RU2012151376A (ru) 2014-07-20
CA2799747C (en) 2016-10-18
PT2575870T (pt) 2017-02-10
BR112012030950A2 (pt) 2016-11-01
SI3170508T1 (sl) 2020-01-31
HUE048398T2 (hu) 2020-07-28
IL223206A0 (en) 2013-02-03
ES2764674T3 (es) 2020-06-04

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