KR20150020164A

KR20150020164A - 보강제 제형 및 방법

Info

Publication number: KR20150020164A
Application number: KR20147031113A
Authority: KR
Inventors: 수브하시 브이. 카프레
Original assignee: 수브하시 브이. 카프레
Priority date: 2012-05-15
Filing date: 2013-05-13
Publication date: 2015-02-25
Also published as: WO2013171661A2; WO2013171661A3; US9700615B2; KR20200053644A; US20150056250A1

Abstract

본 발명은 바람직한 면역 반응에 특이적인 항원성 물질과 폐렴구균 표면 어드헤신 A 단백질 (PsaA)의 서열로부터 유래된 서열의 펩타이드로 구성된 보강제를 포함하는, 감염에 대한 백신으로서 환자에게 항원성 물질을 투여하는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 펩타이드는 서열번호 1 또는 2의 연속적인 아미노산 또는 에피토프 영역을 포함하는 PsaA 하나 이상의 서열로부터 유래된 서열을 포함한다. 또한, 본 발명은 본 발명의 보강제를 포함하는 백신 조성물 및 본 발명의 보강제 조성물에 관한 것이다.

Description

보강제 제형 및 방법 {ADJUVANT FORMULATIONS AND METHODS}

관련 출원에 대한 언급

본 출원은 2012년 5월 15일자 동일 표제의 미국 가출원 번호 61/647,390에 대해 우선권을 주장하며, 그 전체 내용이 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.

서열목록

본 출원은 EFS-Web을 통해 ASCII 포멧으로 제출된 서열목록을 포함하며, 그 전체 내용이 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. ASCII 복사본은 2013년 5월 8일자로 생성되었으며, 파일명 3036.003.PCT_SL.txt이고, 파일 크기는 3,640 bytes이다.

본 발명은 백신 제조에 있어 보강제로서의 펩타이드, 및 백신 제형에 대한 면역 반응을 높이기 위한 펩타이드의 사용 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은, 높은 수준의 효능을 유지하면서, 항원성 물질의 투여량은 낮추고 및/또는 면역 반응은 강화시킨 백신의 제조 방법에 관한 것이다.

백신은 인구 집단에서 감염성 질환의 전파 방지를 돕기 위해 과거 216년 동안 사용되어 왔다. 에드워드 제너가 1796년에, 우두 물질이 천연두에 대한 인간 면역성을 생성한다는 것을 발견한 이래로, 지식과 기술이 발전됨에 따라 백신 이 매우 다양한 감염성 물질들에 대해 흔한 일이 되었다. 과거 50년에 걸쳐, 백신 접종은 선진국과 저개발 국가에서 마찬가지로 삶을 변화시켜, 천연두의 근절과, 홍역, 장티푸스 및 소아마비와 같은 과거의 보편적인 질환을 상당히 감소시키는데 기여하여 왔다.

백신 접종에서의 진보는 질환으로 인한 무수히 많은 사망건 수를 방지하였고, 적어도 1960대 이래로 선진국들에서는 백신 접종이 널리 사용가능하게 되었지만, 파상풍, 백일해, 홍역, 결핵, 디프테리아 및 소아마비에 대한 백신 접종을 제공받지 못해, 매년 120만명의 사람들이 불가피하게 사망하는 것으로 추정된다. B형 헤모필러스 인플루엔자 (Haemophilus influenzae) (Hib) 및 B형 간염바이러스에 대한 백신을 충분히 활용함으로써, 매년 추가적으로 2백만명 이상의 사망을 예방할 수 있었다.

기존 백신의 사용에 있어 전술한 차이점은 기존의 다수 백산들이 개발도상국에서는 입수가능하지 않다는 사실에 기인한 것일 수 있다. 이염, 뇌수막염, 폐렴 및 패혈증을 예방하는 Hib 백신이 보편화된 후 10년 넘게, 매 투여 당 면역화 비용을 지불할 수 없는 정부 및 보건 기반 시설로 인해, 75%의 최극빈 국가들에서는 어린이들 중 10% 미만만 면역화 패키지의 일부로서 이를 정기적으로 제공받고 있다.

1980년에서 2009년 사이에, 전세계의 인구는 2배 이상으로 늘어났다. 하지만, 그 기간 동안, 디프테리아 건수는 99%까지 감소되었고, 소아마비는 97%까지, 홍역과 백일해는 각각 95%까지 떨어졌다. 이러한 급격한 감소는 가용 백신의 광범위한 시장 유입과 동시에 이루어졌다. 선진국과 저개발국 전역에서 백신 및 면역화에 대한 구매력과 접근성이 증가함으로써, 그 후 20년 이내에 이들 질환들이 효과적으로 근절될 수 있었다.

회색질척수염 (poliomyelitis) (소아마비, poli)의 경우, 신경계를 공격하여 영구적인 마비를 야기하는, 고감염성의 불치성 바이러스 질환으로서, 백신 접종을 통한 예방이 개체에 대한 유일한 보호책이다. 현재 이용가능한 소아마비 백신은 2가지 타입이 있다. 경구 소아마비 백신 (OPV)과 주사를 통해 전달되는 불활화 소아마비 백신 (IPV)이 있다. 경구 소아마비 백신은 질환 전파를 방지하는 유용한 도구이고 매우 저렴 (1회 투여 당 $0.12 - $0.20)하기는 하지만, OPV는 2가지 주된 문제점을 가지고 있다: OPV의 약독화 바이러스는 개체군에 소아마비 감염을 야기할 수 있는 백신 유래 소아마비 바이러스 (VDVP라 함)로 돌연변이될 수 있으며, 그외 드문 경우이기는 하지만 백신으로 인한 마비성 소아마비를 일으킬 수 있다. 한편으로는, 현재 이용가능한 불활화 소아마비 백신이 더 안전하고 효과가 우수하지만, 1회 투여 당 비용이 거의 $ 3에 달하여, 많은 저개발 국가에서는 너무 비싸 구입할 여유가 없다.

소아마비 유행이 근절된 후에도 다년간, 아마도 수십년간 백신 접종이 필요할 것이며, 모든 개체군들이 IPV로 전환될 때까지 VDPV가 계속 발생될 것이므로, 저개발 국가가 백신을 광범위하게 사용할 형편이 될 수 있도록, IPV의 가격 저하가 반드시 필요하다. 이에, 신체의 면역 반응을 높이기 위한 보강제의 사용 및/또는 투여 당 항원성 물질의 필요량이 적어도 되는 니들-프리 전달 기전을 비롯한, 몇가지 전략들이 제안되고 있다.

신체는 매일 박테리아, 바이러스 또는 그외 감염성 물질들로부터 공격을 받는다. 개체가 질병을 야기하는 물질에 감염되게 되면, 신체에 내장된 면역 시스템이 외래 물질을 방어하고자 시도한다. 신체가 자체적으로 방어에 성공하게 되면, 이 감염성 물질에 대해 면역성이 형성된다. 신체의 선천적인 방어가 공격을 진압하는데 실패하게 되면, 감염이 이루어진다. 면역성이 형성되는 자연적인 프로세스에서, 신체에서 생산되는 B 세포는 특정 감염 물질에 작용하는 항체라고 하는 물질을 생산하여, 수개월, 수년 또는 심지어 수십년이 지난 이후에도 다시 동일한 감염성 물질에 노출되었을 때 보호를 위해 요청될 수 있는 이러한 경험의 "log"를 구축한다. 그 후 인간이 특정 감염성 물질을 만나면, 순환하는 항체들이 신속하게 감염원을 인지하여, 질병의 신호가 발현되기 전에 신체로부터 감염원을 제거한다. 무려 10,000개에 이르는 여러가지 항원 또는 외래 감염성 물질을 인지할 수 있는 항체가 혈류에서 순환되는 것으로 추정된다.

백신은 항원성 반응이 발생되는 것과 유사한 방식으로 작용한다. 하지만, 이러한 보호 면역성을 발현시키기 위해, 먼저 자연 감염으로 질병을 일으키는 위험성 대신에, 백신은 신체를 일반적으로 감염이 발생될 수 있는 상태에 노출시키지 않고도 유사한 보호 면역을 구축한다.

박테리아성 질환과 바이러스성 질환에 대한 백신 개발은 지난 세기 동안 의학 분야에서 달성된 주요한 업적 중 하나이다. 다수 질환들에 대한 효과적인 백신의 개발이 이루어지고 있지만, 다른 다수의 질환들에 대해 안전하고 효과적인 백신의 개발 필요성이 남아있다.

백신 제조에는 몇가지 기본적인 전략들이 사용된다. 한가지 전략은 바이러스가 체내에서의 생산이 매우 빈약하도록 바이러스를 약화 또는 약독화함으로써 바이러스성 질환을 예방하는 것이다. 홍역, 유행성 이하선염, 풍진 (독일 홍역 (German measles)) 및 수두 (chickenpox, 수두) 백신들이 이런 방식으로 제조된다. 반면, 천연 바이러스는 통상적으로 스스로를 수천번 재생산함으로써 질환을 야기하나, 약화된 백신 바이러스는 대략 20번 정도 스스로를 재생산한다. 이러한 낮은 복제율은 일반적으로 질환을 유발하기에는 충분하지 못하다. 살아있는 약독화된 감염성 물질을 백신으로 조제하는 것이 종종 면역 반응성 개선을 제공하기는 하지만, 이런 방법은 백신 자체가 감염의 요인이 되며, 약독화된 유기체가 증폭하여 향후 감염을 위한 저장체로서 제공될 것이므로, 위험성이 높다. 살아있는 "약화된" 또는 약독화된 바이러스의 1회 또는 2회 투여로도 평생 면역성을 제공해줄 순 있지만, 이런 백신은 면역 시스템이 약화된 사람에게는 제공될 수 없다.

바이러스 백신을 제조하는 다른 방법은 야생형 바이러스를 불활성화하는 것이다. 이 방법을 통해, 화학제를 사용하여 바이러스를 완전히 불활성화하거나 사멸시킨다. 바이러스의 사멸은, 바이러스가 체내에서 복제될 수 없게 만들어, 질환을 유발하지 못하게 한다. 소아마비, A형 간염, 인플루엔자 및 광견병 백신들이 이런 방식으로 만들어진다. 불활성화 또는 사멸 박테리아 또는 바이러스 물질을 항원성 반응을 유도하기 위해 사용되는 백신으로서 사용하는 것은, 일반적으로 안전하기는 하지만, 이 물질의 항원성 특징이 변형된 경우에는 늘 효과적이진 않을 것이다. 불활성 바이러스는 면역 시스템이 약화된 사람에게도 제공될 수 있지만, 면역성을 획득하기 위해 여러번 투여되어야 할 것이다.

또한, 백신은 바이러스 또는 박테리아의 일부를 이용하여 제조할 수도 있다. 이러한 전략에서는, 바이러스의 일부를 취하여 백신으로서 사용한다. 신체는 바이러스의 일부에 대한 최초 노출을 토대로 전체 바이러스를 인지할 수 있다. 예를 들어, B형 간염 백신은 B형 간염 바이러스의 표면 상에 존재하는 펩타이드로 구성된다.

따라서, 백신 제조시 불활화와 약독화 기법들 중에 선택함에 있어, 일반적으로 효능 향상과 더 높은 수준의 안전성 사이에서 선택하여야 한다. 감염성 물질이 불활성화에 내성을 나타내어, 면역 반응을 유도하여 후속적인 면역성을 제공하는데 유용한 항원 특성을 파괴할 염려가 있는 매우 가혹한 불활성화 조건이 요구되는 경우에는, 선택하기가 특히 어렵다.

사멸 또는 약화된 감염성 물질 외에도, 백신은 통상적으로 멸균수 또는 식염수를 포함한다. 일부 백신은 박테리아 증식을 방지하기 위한 보존제나 항생제가 첨가되어 제조된다. 또한, 백신은 보관하는 동안 백신의 효능 유지를 돕기 위해 안정화제가 첨가되어 제조될 수 있다. 그외 성분들로는, 백신에 대한 항체 생산 자극에 일조함으로써 백신을 더 효과적으로 만드는 보강제를 포함할 수 있다.

오늘날 백신 제조 방법은 샘플에 글루타르알데하이드 또는 포름알데하이드를 처리하여 세포 또는 감염성 입자를 고정 또는 가교하는 단계를 포함한다. 이러한 처리는 일반적으로 감염성 입자들의 천연 형태에 변이를 수반한다. 이 방법의 단점은, 감염성 입자들의 펩타이드 막이 이 과정을 통해 손상되며, 따라서 면역 시스템에 의해 인지되지 않을 수 있다는 것이다.

다수의 현재 백신 후보체들은, 과거 개발된 전 세포 불활화 백신 또는 약독화 생 백신 보다는 선천적으로 항원성이 낮은, 보호된 항원을 기재로 한다. 이들 보호된 항원을 이용하여 백신을 제형화하는 기불활성화는 적합한 질환 상태에 대해 면역성을 부여하기 위한 충분한 면역 반응을 생체내에서 보장해준다. 이를 달성할 수 있는 한가지 방법은 새로운 보강제의 발견과 개발이다.

백신 접종의 목적은, 감염으로부터 장기간 보호할 수 있는, 투여된 항원에 대해 강력한 면역 반응을 형성하는 것이다. 이런 면역 반응은 백신에 특정 물질을 첨가함으로써 강화할 수 있다. 이들 물질은, 보조 또는 돕는다는 의미인 라틴어 보조 (adjuvare)에서 유래된 보강제로 지칭된다. 보강제는 다양한 목적으로 사용될 수 있다. 이것은 고도로 정제된 항원 또는 재조합 항원의 항원성을 강화하도록 작용할 수 있거나, 이것은 보호 면역에 필요한 항원의 수 또는 면역화 횟수를 줄일 수 있거나, 이것은 신생아, 노년층 또는 그외 면역 부전 개체에서 백신의 효능을 향상시킬 수 있거나, 또는 이것은 점막에 의한 항원 흡수를 위한 항원 전달 시스템으로서 작용할 수 있다. 보강제의 화학적 특성, 이의 작용 기전 및 부작용은 매우 가변적이다. 이들 부작용의 일부는 여러가지 면역계 기전들에 대한 부적절한 자극에 기인한 것으로 볼 수 있지만, 그 외 포괄적인 부적절한 약리학적 반응들을 반영하는 것일 수 있다. 보강제는 많은 타입들이 존재한다. 인간에게 가장 흔하게 사용되는 보강제는 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 포스페이트 및 칼슘 포스페이트이다. 또한, 오일 에멀젼, 박테리아 유래 산물 (또는 이의 합성 유도체), 내독소, 지방산, 파라핀 오일, 식물성 오일, 콜레스테롤 및 지방족 아민을 기재로 하는 보강제들도 다수 존재한다.

알루미늄 염, 통상적으로 알루미늄 포스페이트 또는 알루미늄 하이드록사이드는 인간 백신에 가장 광범위하게 사용되는 보강제이다. 공교롭게도, 알루미늄 염은 드물게는 세포성 면역 반응을 유도하는, 일반적으로 상대적으로 약한 보강제이다. 알루미늄 염의 작용 기전은 알려져 있지 않지만, 연구들을 통해, 접종 부위에서 항원 디포트 (depot)를 형성하게 하고 이후 항원이 서서히 방출되게 하는 방식으로 작동하는 것으로 제시되고 있다. 또한, 알루미늄 겔에 용해성 항원을 고정시키는 것 역시 항원이 면역 시스템과 상호작용하는 기간을 늘일 수 있다. 다른 가능한 작용 기전은 보체, 호산구 및 대식세포의 활성화 또는 특정한 미립체 크기를 가진 항원 제시 세포에 의한 항원의 흡수율 증가를 포함한다.

알루미늄 염은 상대적으로 부작용 발생율이 낮은 반면, 피하 또는 진피내 주사 경로가 사용되는 경우 근육내 주사와는 대조적으로 육아종이 흔히 발생한다. 알루미늄 보강제의 다른 한계는 IgE 생산, 신경독성 및 알레르기 유발성 증가이다. 정상적인 상황에서는 신장계를 통해 소량의 알루미늄이 배출되지만, 신장 기능이 저하된 상황에서는 알루미늄이 체내에 축적되어 고도로 위험해질 수 있다. 알루미늄 염 외에도, 지르코늄, 철 및 칼슘 염도 항원을 흡착하는데 사용되고 있다. 특히, 칼슘 염은 디프테리아-파상풍-백일해 백신에 사용되고 있다.

보강제 에멀젼은 불완전 프로인드 보강제 (FIA), Montanide™, Adjuvant 65 및 Lipovant™ 등의 수중유제 또는 유중수제 에멀젼을 포함한다. 이들 보강제는, 주사 부위에 디포트를 형성하도록 작용하여, 탑재된 항원성 물질이 방출되도록 하여 항체를 생산하는 혈장 세포를 자극할 수 있다. 그러나, 이들 보강제들은 광범위한 인간 예방 백신 용도로 사용하기에는 독성이 강한 것으로 여겨져, 일반적으로 부작용에 대한 관용성이 더 높은 암과 같은 중증 및/또는 말기 상황을 위해 유보된다.

보강제의 강력한 면역-자극성으로 인해, 박테리아 유래 보강제는 보강제의 잠재적인 주 소스이다. 그람 음성 박테리아의 리포폴리사카라이드 또는 세포벽의 펩티도글리칸은, 그 자체로는 항원성이 높지 않음에도 불구하고, 공동-투여된 항원성 물질에 대한 면역 반응을 강화한다. 이러한 면역-자극성은 숙주 면역계의 위험 신호를 활성화하는 toll-유사 수용체의 활성화를 통해 작동한다. 공교롭게도, 사멸 또는 전체 살아있는 미생물은 인간 예방 백신에 널리 사용하기에는 독성이 매우 강하다.

기존 백신과 관련한 문제들은 유해한 부작용, 고 비용, 화합물 및/또는 이의 면역원성의 불안정성, 원치않은 질환 상태의 발병 및 전염가능한 잠재적인 감염성 물질의 전파와 관련된 위험성을 적어도 포함한다. 따라서, 항원 물질의 오염 위험성이 감소되고, 신뢰가능한 수준의 안정성과 면역원성을 가지며, 현재 이용되는 것과 동일하거나 등가의 효능을 가지면서도 항원성 물질의 전체적인 용량 감소가 구현되는, 전세계적으로 사용하기 위한 백신의 제조 방법에 대한 필요성이 분명하게 존재한다. 특히, 세포성 면역을 자극하기 위한 안전하고 독성이 없는 보강제가 요구되고 있다.

본 발명은, 백신에 대한 신체의 면역 반응을 증가시키기 위한 물질을 병합함으로써, 비용이 절감되고, 항원성 물질의 양이 감량된 백신의 효능을 높이는 새로운 방법을 제공함으로써, 현행 백신 생산과 관련된 문제들을 해결한다.

본 발명의 일 구현예는, 소정의 투여량의 항원성 물질; 및 PsaA 서열에서, 12개 이상의 연속적인 아미노산들을 포함하는 서열을 함유한 펩타이드를 포유류에게 투여하는 단계를 포함하는, 병원체 감염으로부터 보호하고자 하는 포유류에서 예방 면역 반응을 형성하는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 투여 당 항원성 물질의 양은, 상기 포유류에서 예방 면역 반응을 형성하는데 요구되는 단독 항원성 물질의 양에 대해 그 절반, 1/4 또는 그 미만으로 포함한다. 바람직하게는, 펩타이드의 양은 항원 유닛 당 약 0.1 - 10.0 ㎍, 더 바람직하게는 항원 유닛 당 약 0.5 - 5.0 ㎍, 더 바람직하게는 항원 유닛 당 약 1.0 - 2.0 ㎍이다. 바람직하게는, 상기 서열은 서열번호 1, 2 및/또는 3의 서열을 적어도 포함하거나, 서열번호 1, 2 및/또는 3의 서열에서 18개 이상의 연속적인 아미노산들, 및/또는 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 및/또는 치환이 존재하는 서열번호 1, 2 및/또는 3의 서열을 포함한다. 또한, 바람직하게는, 상기 항원성 물질 및 상기 펩타이드는, 상기 포유류에게 투여하기 전에, 함께 투입하여, 혼합물을 만든다. 바람직하게는, 혼합물은 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제, 및/또는 약제학적으로 허용가능한 보존제, 예를 들어, 2-페녹시에탄올, 및/또는 약제학적으로 허용가능한 불활성화제, 예를 들어, 포름알데하이드, 글루타르알데하이드, 베타 프로피오락톤 또는 이들의 조합을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 병원체는 콜레라, 백일해, 페스트, 장티푸스, 뇌수막염, 폐렴구균성 폐렴, B형 헤모필러스 인플루엔자, 나병, 임질, 수막염균, 패혈증, 슈도모나스 에어루지노사 (Pseudomonas aeruginosa), 디프테리아, 보툴리누스 중독, 파상풍, 회색질척수염 (poliomyelitis), 홍역, 풍진, 황열, 유행성 이하선염, B형 간염, C형 간염, 인플루엔자, 아데노바이러스, 탄저병, 인간 파필로마 바이러스, 광견병, 로타바이러스, 수두, 대상포진, 또는 이들의 조합의 병인성 물질이다.

본 발명의 다른 구현예는, 포유류에게, 소정의 투여량의 항원성 물질과, PsaA 서열의 하나 이상의 에피토프, 서열번호 1, 2 및/또는 3, 이의 에피토프, 변이체 및 유도체, 및/또는 하나 이상의 보존적인 아미노산 결손, 부가 또는 치환이 존재하는 전술한 임의의 것의 서열을 함유한 펩타이드를, 투여하는 단계를 포함하는, 병원체에 의한 감염으로부터 보호하고자 하는 환자에서 면역 반응을 일으키는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 펩타이드의 존재는 단독 항원성 물질의 백신과 비교하여 예방 면역 반응을 발생시키는데 필요한 항원성 물질의 양을 절반 이상까지 줄여준다. 또한, 바람직하게는, 보강제는 서열번호 1, 2 또는 3의 서열에서 전체 서열 또는 8개, 12개 또는 16개 이상의 연속적인 아미노산, 이의 에피토프를 포함하며, 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 및/또는 아미노산 치환을 포함한다. 바람직하게는, 상기 항원성 물질의 양은 개개 투여 당 약 0.1 - 약 0.5의 항원 유닛, 또는 보강제 무함유 백신의 항원성 물질의 약 1/10 내지 약 1/2에 해당되는 양으로 포함한다. 바람직하게는, 펩타이드의 양은 개개 투여 당 0.5 - 10.0 ㎍을 포함하며, 펩타이드는 서열번호 1 또는 2의 서열을 포함한다. 바람직하게는, 상기 항원성 물질은, 포유류에게 투여시, 소아마비, 홍역, 유행성 이하선염, 풍진 또는 수두에 대한 면역 반응을 일으킨다.

본 발명의 다른 구현예는, 항원성 물질, 및 PsaA 단백질, 및/또는 이의 유도체 및 변이체; 서열번호 1, 2 또는 3; PsaA 단백질 또는 서열번호 1, 2 또는 3의 서열에서, 2, 3, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18개 또는 그 이상의 연속적인 아미노산들; 전술한 임의의 것의 에피토프, 및/또는 이들의 하나 이상의 보존적인 부가, 결손 및/또는 치환을 포함하는 보강제를 포함하며, 바람직하게는 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 더 포함하는, 백신 또는 보강제 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 다른 구현예는, PsaA 단백질 및 이의 유도체 및 변이체; 서열번호 1, 2 또는 3; 서열번호 1, 2 또는 3의 서열에서 4, 5, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22개 또는 그 이상의 연속적인 아미노산들; 전술한 임의의 것의 에피토프; 및/또는 이들의 하나 이상의 보존적인 부가, 결손 및/또는 치환을 코딩하는, 핵산 서열 및 벡터에 관한 것이며, 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함한다.

본 발명의 다른 구현예들과 이점들은 일부 후술되는 상세한 설명에 기술되며, 부분적으로는 이러한 상세한 설명으로부터 명확해지거나 또는 본 발명의 실시로부터 습득할 수 있다.

백신의 생산은 바이러스 감염을 예방하고 치료하기 위한 가장 중요한 경로이다. 매우 많은 수의 항바이러스제들이 이용가능하지만, 과학 분야에서는 여전히 각 바이러스 물질과 싸우는 항바이러스제들을 발굴하여야 한다. 항체 투여는 특정 질환 상태와 싸울 수 있지만, 활성 면역화를 통한 예방이 바이러스 감염을 다루는 가장 효과적이고 안전한 방식으로 계속되어 오고 있다. 체내 도입된 항원성 물질에 대한 면역 반응을 높이기 위해 제2 물질을 첨가하는 것은, 약독화된 생 백신과는 반대로, 사멸된 것을 사용하는 경우 감염으로부터 장기간의 보호를 제공하는데 결정적이다. 보강제 활성은 특정 백신에 반응하지 않는 개체에서 면역 반응을 전개함으로써 현저한 면역 매개 보호 증가로 나타난다.

폐렴구균성 표면 어드헤신 A 단백질로부터 유래된 펩타이드를 백신 제형에 첨가하면, 예방성 중화 항체 역가를 형성하는데 더 적은 용량의 항원성 물질이 필요하도록, 생체내 면역 반응을 증가시킨다는 것을, 놀랍게도 발견하게 되었다. 폐렴구균성 표면 어드헤신 A (PasA)는 스트렙토코커스 뉴모니아의 모든 공지된 혈청형들에서 검출되는 표면에 노출된 공통 37 킬로달톤의 다-기능성 지단백질이다. 스크렙토코커스 뉴모니아의 여러가지 혈청형들은 PsaA의 보존적인 변이체들과 유도체를 포함하고 있다. 이들 지단백질은 망간을 막 통과하여 이송시키는 ABC 타입의 수송 단백질 복합체에 속한다. PsaA는 숙주 세포에 부착하는데 중요한 역할을 하는 부착 분자이며, 또한 병독성이다. PsaA는 면역원성이며, 노출된 동물에서 PsaA에 대한 항체 반응을 증가시킨다. 본 발명은, PsaA 유래 펩타이드를 유효량으로 백신 접종이 필요한 포유류에 항원성 물질과 더불어 투여하는 단계를 포함하는, 백신에 대한 포유류의 면역 반응을 강화하는 방법을 제공한다. 즉, 본 발명은 투여량 감소제를 이용하여 현재 이용가능한 효과와 동일하거나 높은 백신을 저렴하게 제조하는 방법을 제공한다. 면역 반응을 일으키는데 필요한 항원성 물질의 총량이, 선진국 및 저개발 국가 모두에서 백신의 최종 투여 비용을 충당할 수 있도록 감량된다. 제조되는 백신은 안전하고 효과적이지만, 질환 상태, 유해한 부작용 또는 전파되는 전염성 증상의 발병 위험성이 없다.

보강제가 무첨가된 백신 투여 당 필요한 항원성 물질의 양, 즉, 환자에서 예방 면역 반응을 형성하는데 필요한 양 (본원에서 단독 항원 물질의 약제학적으로 허용가능한 양으로도 지칭됨)은, 본 발명의 보강제가 포함되는 경우 놀랄만한 수준으로 감량된다. 바람직하게는, 백신 + 본 발명의 보강제의 투여 당 항원성 물질의 양은, 본 발명의 보강제 없이 항원성 물질만을 투여하는 경우에 필요한 양의 약 1/10 또는 그 미만이며, 더 바람직하게는 약 1/4 이하, 더 바람직하게는 약 1/3 이하, 더 바람직하게는 약 1/2, 더 바람직하게는 약 2/3 이하, 또는 더 바람직하게는 3/4 이하이다. 투여 당 펩타이드 필요량은 약 0.5 - 50 ㎍, 더 바람직하게는 약 1.0 - 20.0 ㎍, 더 바람직하게는 약 2.0 - 10.0 ㎍이다. 바람직하게는, 백신의 항원성 물질과 본 발명의 보강제 물질은 환자에게 투여하기 전에 혼합된다. 본 조성물은 한가지 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 보존제 및/또는 불활성화제를 포함할 수 있다. 바람직한 담체로는, 예를 들어, 염, 완충제, 지방산, 디터전트, 계면활성제, 소포제, 탄수화물, 및/또는 글리세롤 중 하나 이상을 포함한다. 바람직한 한가지 보존제는 2-페녹시에탄올이며, 바람직한 불활성화제로는, 예를 들어, 글루타르알데하이드, 포름아미드, 포름알데하이드, 베타프로피오락톤 및 이들의 조합을 포함한다.

본 발명의 방법은 백신에 존재하는 항원성 물질에 대한 일차 면역 반응을 포유류에서 강화하는데 효과적이며, 따라서 백신의 항원성 물질에 노출된 포유류에서 항체의 유효 수준을 강화하여, 일차 면역 반응을 강화하며, 여기서 PsaA 유래 펩타이드를 투여하지 않는 경우에는 포유류에 의한 면역 반응이 질환을 예방할만큼 충분히 강력하지 않을 것다. 이러한 발견 결과는, 더 많은 투약분을 동량의 항원성 물질로 만들 수 있다는 것이다. 즉, 이는 백신의 단위 용량 제조 비용을 감소시킨다. 또한, 본 발명의 백신은, 항원성 물질 단독 투여 후 수득되는 역가와 비교하여, 수득되는 더 높은 역가에 의해 적어도 입증되는 바와 같이, 더 강한 항체 반응을 일으킨다.

바람직한 항원성 물질로는, 예를 들어, 박테리아 백신, 독소이드 백신 및 바이러스 백신의 개발, 바람직하게는 면역화를 위한, 면역원성인 항원성 물질, 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 바람직한 백신으로는, 예를 들어, 콜레라, 백일해, 페스트, 장티푸스, 뇌수막염, 폐렴구균성 폐렴, B형 헤모필러스 인플루엔자, 나병, 임질, 수막염균, 패혈증, 슈도모나스 에어루지노사, 디프테리아, 보툴리누스 중독, 파상풍, 회색질척수염, 홍역, 풍진, 황열, 유행성 이하선염, B형 간염, C형 간염, 인플루엔자, 아데노바이러스, 탄저병, 인간 파필로마 바이러스, 광견병, 로타바이러스, 수두, 대상포진, 백신 접종이 가능한 다른 질환 상태 및 이들의 조합에 대한 감염을 치료하기 위한 백신을 포함한다.

바람직하게는, 백신은 PsaA 유래 서열을 포함하는 보강제와 조합하여 투여되는 항원성 물질로부터 개발된다. 본 발명은 PsaA 단백질 (서열번호 3)에 대한 보강제를 포함하며, 또한 예를 들어 P.C. Ng and Steven Henikoff (Genome Res. 11: 863-874 (2001))에 의해 예측된 바와 같이 PsaA 에피토프 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 또는 무해한 아미노산 치환을 포함한다. 본 발명의 펩타이드 보강제의 서열은 PsaA의 연속적인 아미노산들 복수개, 및/또는 어드헤신 A의 에피토프 또는 항원성 영역을 표시하는 서열 중 하나 이상으로부터 유래된다. 더 바람직하게는, 이러한 서열들은 서열번호 1의 서열 전체 또는 일부이거나, 또는 이로부터 유래된다. 바람직하게는, 상기 복수개는 어드헤신 A 또는 서열번호 1, 2 또는 3의 서열에서 6개 이상의 연속적인 아미노산, 더 바람직하게는 어드헤신 A 또는 서열번호 1, 2 또는 3의 서열에서 8개 이상의 연속적인 아미노산들, 더 바람직하게는 10개 이상의 연속적인 아미노산들, 더 바람직하게는 12개 이상의 연속적인 아미노산들, 더 바람직하게는 14개 이상의 연속적인 아미노산들, 더 바람직하게는 16개 이상의 연속적인 아미노산, 더 바람직하게는 18개 이상의 연속적인 아미노산들, 더 바람직하게는 20개 이상의 연속적인 아미노산들, 더 바람직하게는 22개 이상의 연속적인 아미노산들, 더 바람직하게는 24개 이상의 연속적인 아미노산들, 더 바람직하게는 26개 이상의 연속적인 아미노산들, 더 바람직하게는 어드헤신 A 또는 서열번호 1, 2 또는 3의 전체 서열을 포함한다. 서열번호 1의 펩타이드는 비인두 세포에 의한 스트렙토코커스 뉴모니아의 내재화를 저해하기 위해 처음에 개발되었다 (US2008/0305123; WO2006/127020). 이들 펩타이드는 다양한 세포주들을 활성화하며, 시험관내에서 숙주 세포의 옵소노파고사이토시스 (opsonophagocytosis) 역량을 증가시키는 것으로 입증되었다 (WO2010/014888). 본 발명의 펩타이드는 바람직하게는 스트렙토코커스 뉴모니아의 PsaA 펩타이드에서 기능성 에피토프만을 포함한다. 본 발명의 펩타이드는 표준형 및 수정형 9-플루오레닐메톡시카르보닐 프로토콜을 이용하여 합성할 수 있다. 그런 후, 동결건조된 펩타이드를 다이에틸피로카보네이트 물에 현탁하고, 3분간 용해시키기 위해 초음파 처리한 다음 이후 사용을 위해 보관할 수 있다.

다수의 백신 제형들은 부형제, 담체, 바이러스 불활성제, 보존제, 항미생물 화합물, 멸균수, 안정화제, pH 조절제, 해독제, 윤활제, 소포제 및 계면활성제를 사용하는 것이 유익하다. 이러한 것으로는, 암모늄 설페이트, 알포테리신 (alphotericin) B, 아스코르브산, 박토펩톤, 베타-프로피오락톤, 벤즈에토늄 클로라이드, 소 알부민, 소 혈청, 클로르테트라사이클린, 에틸렌다이아민-테트라아세트산 소듐 (EDTA), 페투인 (fetuin), 포름알데하이드, 젤라틴, 젠타미신 (gentamicin), 글리신, 클리세린 (clycerin), 인간 혈청 알부민, 염산, 과산화수소, 카나마이신, 락토스, 마그네슘 스테아레이트, 모노소듐 글루타메이트, 네오마이신, 오발부민, 페놀, 페놀 레드, 2-페녹시에탄올, 포스페이트 완충제 (다이소듐, 모노소듐, 포타슘, 소듐 다이하이드로겐 포스페이트), 폴리다이메틸실로존, 폴리에틸렌 글리콜 p-이소시틸-페닐 에테르, 폴리믹신 (polymyxin) B, 폴리옥시에틸렌 9-10 노닐 페놀, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 포타슘 글루타메이트, 규조, 소듐 아세테이트, 소듐 바이설페이트, 소듐 보레이트, 소듐 클로라이드, 소듐 하이드록사이드, 소르비톨, 스트렙토마이신, 슈크로스, 티메로살, 투르(tur)(n)부틸포스페이트를 포함한다. 당해 기술 분야의 당업자에게 잘 알려진 그외 약제학적으로 허용가능한 담체가 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 구현예는, 항원성 물질; 및/또는 PsaA 전체 또는 일부로부터 유래된 서열, PsaA의 에피토프, 또는 PsaA 또는 서열번호 1, 2 또는 3의 전체 서열 또는 일부의 서열에 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 또는 치환을 가진 PsaA를 함유한 펩타이드를 포함하는, 보강제를 포함하는 조성물, 및 본 발명의 보강제 펩타이드 단독 조성물을 포함한다. 조성물은 수성 또는 비-수성일 수 있으며, 식염수, 물, 지방산, 탄수화물 또는 오일 중에 유지되며, 주위 온도에서 유지, 냉장 유지 또는 냉동 유지될 수 있다. 본 발명의 조성물은 고체로서 유지될 수 있으며, 바람직하게는 예를 들어 동결건조된 분말과 같은 건조물로서 유지될 수 있다. 바람직하게는, 건조 조성물은 이송 및 보관을 위해 포장되며, 패키지에는 재수화와 환자에게 투여하기 위한 설명서가 동봉된다.

본 발명의 다른 구현예는 PsaA 또는 서열번호 1, 2 또는 3의 전체 또는 일부로부터 유래된 서열; 이의 유도체 및 혈청형 변이체; 이의 에피토프; 또는 임의의 전술한 것의 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 또는 치환을 함유한 펩타이드를 코딩하는, 핵산 서열 및 벡터에 관한 것이다.

하기 실시예들은 본 발명의 구현예들을 예시하지만, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 조명되어서는 안된다.

실시예

실시예 1 표준 IPV 투여량의 ½을 이용한, 불활성화 소아마비 백신 제형의 28회 투약분의 제조.

40 D-항원 유닛의 1형 회색질척수염 바이러스, 마호니 균주 (Mahoney strain), 8 D-항원 유닛의 2형 회색질척수염 바이러스, MED-I 균주 및 D-항원 유닛의 3형 회색질척수염 바이러스, Saukett 균주를 함유한, 불활성화 소아마비 백신 바이얼을 개봉하고, 별도의 살균 컨테이너 (Falcon)에 모았다. 항원 유닛은 특정 항혈청 존재시 하나의 보체 유닛에 결합하는 항원의 최소량이다. D-항원 유닛은 회색질척수염을 예방하기 위해 전형적으로 사용되는 백신의 효능 단위이다. 7 mL IPV를 별개의 살균 컨테이너에 넣었다. WFI 10 mL에 펩타이드 10 mg을 용해하여 PsaA 스톡 (1 mg/mL) 유래 펩타이드를 준비하였다. 2-페녹시에탄올 (5 mg/mL)과 포름알데하이드 (25 mcg/mL)를 PBS 완충제에 용해하였다. 펩타이드와, 2-페녹시에탄올 및 포름알데하이드 용액을 함께 혼합한 다음, 0.2 ㎛ 멸균 필터를 통해 여과하였다. IPV 7 mL과, 펩타이드, 포름알데하이드 및 2-페녹시에탄올 함유 용액 7 mL을 함께 모았다. 제조된 총 부피는 14 mL이며, 이는 불활성화 소아마비 백신 7 mL와 펩타이드, 2-페녹시에탄올 및 포름알데하이드 혼합물 7 mL로 구성된다. 이 부피는 소아마비 백신 1회분 0.5 mL 씩 28개를 만든다.

실시예 2 표준 IPV 투여량의 ¼을 이용한, 불활성화 소아마비 백신 제형의 28회 투약분의 제조.

40 D-항원 유닛의 1형 회색질척수염 바이러스, 마호니 균주 (Mahoney strain), 8 D-항원 유닛의 2형 회색질척수염 바이러스, MED-I 균주 및 32 D-항원 유닛의 3형 회색질척수염 바이러스, Saukett 균주를 함유한, 불활성화 소아마비 백신 바이얼을 개봉하고, 별도의 살균 컨테이너 (Falcon)에 모았다. 3.5 mL IPV를 별개의 살균 컨테이너에 넣었다. WFI 10 mL에 펩타이드 10 mg을 용해하여 PsaA 스톡 (1 mg/mL) 유래 펩타이드를 준비하였다. 2-페녹시에탄올 (5 mg/mL)과 포름알데하이드 (25 mcg/mL)를 PBS 완충제에 용해하였다. 펩타이드와, 2-페녹시에탄올 및 포름알데하이드 용액을 함께 혼합한 다음, 0.2 ㎛ 멸균 필터를 통해 여과하였다. IPV 3.5 mL과, 펩타이드, 포름알데하이드 및 2-페녹시에탄올 함유 용액 10.5 mL을 함께 모았다. 제조된 총 부피는 14 mL이며, 이는 불활성화 소아마비 백신 7 mL와 펩타이드, 2-페녹시에탄올 및 포름알데하이드 혼합물 7 mL로 구성된다. 이 부피는 소아마비 백신 1회분 0.5 mL 씩 28개를 만든다.

실시예 3 표준 IPV 투여량의 ⅛을 이용한, 불활성화 소아마비 백신 제형의 28회 투약분의 제조.

40 D-항원 유닛의 1형 회색질척수염 바이러스, 마호니 균주 (Mahoney strain), 8 D-항원 유닛의 2형 회색질척수염 바이러스, MED-I 균주 및 32 D-항원 유닛의 3형 회색질척수염 바이러스, Saukett 균주를 함유한, 불활성화 소아마비 백신 바이얼을 개봉하고, 별도의 살균 컨테이너 (Falcon)에 모았다. 1.75 mL IPV를 별개의 살균 컨테이너에 넣었다. WFI 10 mL에 펩타이드 10 mg을 용해하여 PsaA 스톡 (1 mg/mL) 유래 펩타이드를 준비하였다. 2-페녹시에탄올 (5 mg/mL)과 포름알데하이드 (25 mcg/mL)를 PBS 완충제에 용해하였다. 펩타이드와, 2-페녹시에탄올 및 포름알데하이드 용액을 함께 혼합한 다음, 0.2 ㎛ 멸균 필터를 통해 여과하였다. IPV 1.75 mL과, 펩타이드, 포름알데하이드 및 2-페녹시에탄올 함유 용액 13.25 mL을 함께 모았다. 제조된 총 부피는 14 mL이며, 이는 불활성화 소아마비 백신 7 mL와 펩타이드, 2-페녹시에탄올 및 포름알데하이드 혼합물 7 mL로 구성된다. 이 부피는 소아마비 백신 1회분 0.5 mL 씩 28개를 만든다.

이들 실시예들은, 지속되는 면역성을 부여할 수 있는 최소량인 것으로 생각되는 항원성 물질의 분획만을 이용하여 유효한 백신을 설계할 수 있다는 것을 보여준다. 이러한 새로운 백신 제형은 적합한 백신을 제조하는 투약분 당 단가를 유익하게 상당히 낮춘다.

서열 정보

서열 번호 1 LFVESSVRRP MKTVSQDTNI PIYAQIF (27 aa's)

서열 번호 2 LFVESSVDDR PMKTVSQDTN IPIYAQIF (28 aa's)

서열 번호 3:

MKKLGTLLVL FLSAIILVAC ASGKKDTTSG QKLKVVATNS IIADITKNIA GDKIDLHSIV PIGQDPHEYE PLPEDVKKTS EADLIFYNGI NLETGGNAWF TKLVENAKKT ENKDYFAVSD GVDVIYLEGQ NEKGKEDPHA WLNLENGIIF AKNIAKQLSA KDPNNKEFYE KNLKEYTDKL DKLDKESKDK FNKIPAEKKL IVTSEGAFKY FSKAYGVPSA YIWEINTEEE GTPEQIKTLV EKLRQTKVPS LFVESSVDDR PMKTVSQDTN IPIYAQIFTD SIAEQGKEGD SYYSMMKYNL DKIAEGLAK

(스트렙토코커스 뉴모니아의 PsaA의 309개 아미노산 서열)

본 발명의 다른 구현예들과 용도들은 당해 기술 분야의 당업자라면 본원에 기술된 본 발명에 대한 상세한 설명과 실무 고려시 명확해질 것이다. 모든 간행물들, 미국 및 외국 특허들과 특허 출원을 비롯하여, 본원에 언급된 모든 참조문헌들은 원용에 의해 구체적으로 또는 그 전체가 본 명세서에 포함된다. 용어 포함하는은, 어디에 사용되던간에, 구성되는과 필수적으로 구성되는이라는 용어를 포함하는 것으로 의도된다. 아울러, 포함하는, 비롯하여 및 함유하는과 같은 용어들은 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 상세한 설명과 실시예들은 단순히 예로 간주되며, 본 발명의 진정한 사상과 범위는 아래 청구항에 의해 정해지는 것으로 의도된다.

SEQUENCE LISTING PCT/IB2013/53890 <110> KAPRE, SUBHASH V. <120> ADJUVANT FORMULATIONS AND METHODS <130> 3036.003.PCT <140> <141> <150> 61/647,390 <151> 2012-05-15 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Leu Phe Val Glu Ser Ser Val Arg Arg Pro Met Lys Thr Val Ser Gln 1 5 10 15 Asp Thr Asn Ile Pro Ile Tyr Ala Gln Ile Phe 20 25 <210> 2 <211> 28 <212> PRT <213> Streptococcus pneumoniae <400> 2 Leu Phe Val Glu Ser Ser Val Asp Asp Arg Pro Met Lys Thr Val Ser 1 5 10 15 Gln Asp Thr Asn Ile Pro Ile Tyr Ala Gln Ile Phe 20 25 <210> 3 <211> 309 <212> PRT <213> Streptococcus pneumoniae <400> 3 Met Lys Lys Leu Gly Thr Leu Leu Val Leu Phe Leu Ser Ala Ile Ile 1 5 10 15 Leu Val Ala Cys Ala Ser Gly Lys Lys Asp Thr Thr Ser Gly Gln Lys 20 25 30 Leu Lys Val Val Ala Thr Asn Ser Ile Ile Ala Asp Ile Thr Lys Asn 35 40 45 Ile Ala Gly Asp Lys Ile Asp Leu His Ser Ile Val Pro Ile Gly Gln 50 55 60 Asp Pro His Glu Tyr Glu Pro Leu Pro Glu Asp Val Lys Lys Thr Ser 65 70 75 80 Glu Ala Asp Leu Ile Phe Tyr Asn Gly Ile Asn Leu Glu Thr Gly Gly 85 90 95 Asn Ala Trp Phe Thr Lys Leu Val Glu Asn Ala Lys Lys Thr Glu Asn 100 105 110 Lys Asp Tyr Phe Ala Val Ser Asp Gly Val Asp Val Ile Tyr Leu Glu 115 120 125 Gly Gln Asn Glu Lys Gly Lys Glu Asp Pro His Ala Trp Leu Asn Leu 130 135 140 Glu Asn Gly Ile Ile Phe Ala Lys Asn Ile Ala Lys Gln Leu Ser Ala 145 150 155 160 Lys Asp Pro Asn Asn Lys Glu Phe Tyr Glu Lys Asn Leu Lys Glu Tyr 165 170 175 Thr Asp Lys Leu Asp Lys Leu Asp Lys Glu Ser Lys Asp Lys Phe Asn 180 185 190 Lys Ile Pro Ala Glu Lys Lys Leu Ile Val Thr Ser Glu Gly Ala Phe 195 200 205 Lys Tyr Phe Ser Lys Ala Tyr Gly Val Pro Ser Ala Tyr Ile Trp Glu 210 215 220 Ile Asn Thr Glu Glu Glu Gly Thr Pro Glu Gln Ile Lys Thr Leu Val 225 230 235 240 Glu Lys Leu Arg Gln Thr Lys Val Pro Ser Leu Phe Val Glu Ser Ser 245 250 255 Val Asp Asp Arg Pro Met Lys Thr Val Ser Gln Asp Thr Asn Ile Pro 260 265 270 Ile Tyr Ala Gln Ile Phe Thr Asp Ser Ile Ala Glu Gln Gly Lys Glu 275 280 285 Gly Asp Ser Tyr Tyr Ser Met Met Lys Tyr Asn Leu Asp Lys Ile Ala 290 295 300 Glu Gly Leu Ala Lys 305

Claims

포유류에서 병원체 감염을 예방하는 예방 면역 반응을 형성하는 방법으로서,
상기 포유류에게, PsaA 서열에서 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 또는 치환이 존재 또는 비-존재하는 12개 이상의 연속적인 아미노산들을 포함하는 서열을 함유한 펩타이드와 소정의 투여량의 항원성 물질을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 1회 투여 당 상기 항원성 물질의 양이 상기 포유류에서 상기 예방 면역 반응을 형성하는데 필요한 단독 항원성 물질의 양의 1/4 이하인 것을 특징으로 하는 방법.
제2항에 있어서, 상기 항원성 물질의 양이 상기 포유류에서 상기 예방 면역 반응을 형성하는데 필요한 단독 항원성 물질의 양의 1/2 이하인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 펩타이드의 양이 항원 유닛 당 약 0.1 - 10.0 ㎍인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 펩타이드의 양이 항원 유닛 당 약 0.5 - 5.0 ㎍인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 펩타이드의 양이 항원 유닛 당 약 1.0 - 2.0 ㎍인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 서열이 PsaA 서열에서 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 또는 치환이 존재 또는 비-존재하는 18개 이상의 연속적인 아미노산들을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 서열이 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 또는 치환이 존재 또는 비-존재하는 서열번호 1 또는 서열변호 2의 서열을 적어도 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 항원성 물질과 상기 펩타이드는 상기 포유류에게 투여하기 전에 함께 혼합되어 혼합물을 형성하는 것을 특징으로 하는 방법.
제9항에 있어서, 상기 혼합물은 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제9항에 있어서, 상기 혼합물은 약제학적으로 허용가능한 보존제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제11항에 있어서, 상기 약제학적으로 허용가능한 보존제가 2-페녹시에탄올인 것을 특징으로 하는 방법.
제9항에 있어서, 상기 혼합물이 약제학적으로 허용가능한 불활성화제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제13항에 있어서, 상기 약제학적으로 허용가능한 불활성화제가 포름알데하이드, 글루타르알데하이드, 베타 프로피오락톤 또는 이들의 조합인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 병원체는 콜레라, 백일해, 페스트, 장티푸스, 뇌막염, 폐렴구균성 폐렴, B형 헤모필러스 인플루엔자 감염, 나병, 임질, 수막염, 패혈증, 슈도모나스 감염, 디프테리아, 보툴리누스 중독, 파상풍, 회색질척수염, 홍역, 풍진, 황열, 유행성 이하선염, B 형 또는 C 형 간염의 감염, 인플루엔자, 아데노바이러스 감염, 탄저병, 인간 유두종 바이러스 감염, 광견병, 로타바이러스 감염, 수두 바이러스 감염, 대상 포진 또는 이들의 조합의 병인성 물질인 것을 특징으로 하는 방법.
환자에서 병원체에 의한 감염을 예방하는 면역 반응을 형성하는 방법으로서,
포유류에게, 소정의 투여량의 항원성 물질과, PsaA 서열에서 하나 이상의 보존적인 아미노산 결손, 부가 또는 치환이 존재 또는 비-존재하는 하나 이상의 에피토프를 포함하는 서열을 함유한 펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제16항에 있어서,
상기 펩타이드는 보강제로서 작용하며, 예방 면역 반응의 형성이 필요한 항원성 물질의 양을, 단독 항원성 물질로만 구성된 백신과 비교해, 적어도 절반까지 감량해주는 것을 특징으로 하는 방법.
서열번호 1 또는 서열번호 2의 서열에서, 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 또는 치환이 존재 또는 비-존재하는, 8개 이상의 연속적인 아미노산들을 포함하는 보강제.
서열번호 1 또는 서열번호 2의 서열에서, 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 또는 치환이 존재 또는 비-존재하는, 16개 이상의 연속적인 아미노산들을 포함하는 보강제.
소정량의 항원성 물질, 및
PsaA 서열에서, 하나 이상의 보존적인 결손, 부가 또는 치환이 존재 또는 비-존재하는, 12개 이상의 연속적인 아미노산들을 포함하는 펩타이드를 포함하는, 소정량의 보강제
를 포함하는 백신.
제20항에 있어서, 상기 항원성 물질의 양이 개개 투여 당 약 0.1 - 약 0.5의 항원성 유닛을 포함하는 것을 특징으로 하는 백신.
제20항에 있어서, 상기 항원성 물질의 양이 보강제 무함유 백신의 항원성 물질의 양의 약 1/10 내지 약 1/2인 것을 특징으로 하는 백신.
제20항에 있어서, 상기 펩타이드의 양이 개개 투여 당 0.5 - 10.0 ㎍인 것을 특징으로 하는 백신.
제20항에 있어서, 상기 펩타이드가 서열번호 1 또는 서열번호 2의 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 백신.
제20항에 있어서, 상기 항원성 물질은, 포유류에 투여시, 소아마비, 홍역, 유행성 이하선염, 풍진 또는 수두에 대한 예방 면역 반응을 형성하는 것을 특징으로 하는 백신.
제20항에 있어서, 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 백신.