KR20210091158A - 감소된 용량의 불활성화된 폴리오바이러스를 포함하는 조합 백신 조성물 및 그의 제조 방법 - Google Patents

감소된 용량의 불활성화된 폴리오바이러스를 포함하는 조합 백신 조성물 및 그의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

본 개시내용은 항원/면역원의 조합을 포함하는 완전 액상 면역원성 조성물에 관한 것이다. 면역원성 조성물은 수많은 질환에 대한 보호를 부여하기 위해 최적의 양의 항원/면역원을 포함한다. 조성물은 개선된 면역원성 및 안정성을 나타낸다. 백신 조성물의 제조 방법이 또한 개시되어 있다.

Description

감소된 용량의 불활성화된 폴리오바이러스를 포함하는 조합 백신 조성물 및 그의 제조 방법
본 개시내용은 생명공학 분야에 관한 것이며, 보다 구체적으로 항원/면역원 및 보존제 군을 포함하는 다중-용량 조합 백신 조성물의 제조 방법에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 조합 백신 생산 분야에서 개선된 방법론에 관한 것이다.
다수의 질환에 대한 면역원성을 제공할 수 있는 조합 백신은 항상 1가 백신보다 유리하며, 이는 제공되는 샷 횟수를 감소시키고, 다중 근육내 주사와 연관된 합병증을 감소시키고, 투여 및 생산 비용을 감소시키고, 재고 비용을 감소시키고, 예방접종 지연 또는 누락의 위험을 감소시키고, 별도의 예방접종 횟수를 감소시켜 환자 순응도를 개선시키기 때문이다. 더욱이, 조합 백신의 완전 액상 제제는 재구성을 필요로 하는 것에 비해 뚜렷한 장점을 갖는다. 평균 제조 시간은 비-완전 액상 백신에 비해 완전 액상 백신의 경우 거의 절반인 것으로 밝혀졌다. 거의 모든 의료 종사 관계자들 (97.6%)은 일상적인 진료에서 완전 액상 백신의 사용을 선호한다고 언급하였다. (참조: Soubeyrand B, et al.; Assessment of preparation time with fully-liquid versus non-fully liquid paediatric hexavalent vaccines. A time and motion study; Vaccine 2015; 33:3976-82).
현재 공지되고 이용가능한 조합 백신은 원샷에 수많은 질환에 대해 취약한 인간 집단에서 원하는 수준의 안전성, 효능 및 면역원성을 달성하기 위해 적절한 면역원성 형태의 적절한 항원의 적절한 제형을 함유하지 않을 수 있다. 몇 가지 추가 항원만으로 만들 수 있는 상이한 백신 조합의 수는 상당하다. 1 내지 4개의 다른 항원 성분 (예를 들어 HIB (동결-건조된 또는 액체), HBV, IPV, HAV)을 DTwP 또는 DTaP에 첨가함으로써, 생성될 수 있는 가능한 상이한 백신 조합은 44가지이다. 상이한 제조업체로부터의 개별 성분을 고려하면, 그 수가 수천개로 증가될 것이다. 안전성, 안정성, 호환성 및 효능을 입증하기 위해 모든 개별 새로운 조합된 백신 (공급원에 따른 성분 차이 고려)을 별도로 개발해야 하기 때문에, 이들 모든 백신의 개발은 어려운 과제가 된다.
조합 백신의 항원:
디프테리아 및 파상풍 항원
디프테리아 및 파상풍은 각각 코리네박테리움 디프테리아에(Corynebacterium diphtheriae) 및 클로스트리디움 테타니(Clostridium tetani)에 의해 유발되는 급성 감염이다. 두 경우 모두에, 임상 질환의 원인이 되는 것은 이들 박테리아의 강력한 외독소이다. 이들 박테리아에 대한 보호를 제공하는 백신은 더 이상 독성이 없지만 여전히 항원성인 화학적으로 변형된 독소인 톡소이드를 형성하도록 화학적으로 변형된 독소를 함유한다. 디프테리아 및 파상풍 독소는 소 추출물을 함유하는 배지에서 코리네박테리움 디프테리아에 및 클로스트리디움 테타니를 성장시킴으로써 생산된다. 독소는 열, UV, 포르말린 /포름알데히드, 글루타르알데히드, 아세틸에틸렌이민 등을 포함하는, 톡소이드 [디프테리아 톡소이드 (D) 및 파상풍 톡소이드 (T)]를 제조하기 위한 하기 처리를 사용하여 불활성화된다. 소 해면상 뇌병증 (BSE), 전염성 해면상 뇌병증 (TSE), 크로이츠펠트 - 야콥병 (CJD 및 변이 CJD 질환)에 관한 우려는 백신을 통해 확산되는 소 추출물을 함유하는 성장 배지에 사용되는 동물 성분으로부터 발생할 수 있다. (참조: WHO Guidelines on Transmissible Spongiform Encephalopathies in relation to Biological and Pharmaceutical Products; 2003 & EMEA/CPMP/BWP/819/01; 24 April 2001).
퍼투시스 항원
1940년대에 화학적으로- 및 열-불활성화된 보르데텔라 퍼투시스(Bordetella pertussis) 유기체로 구성된 전세포 백신의 도입은 비. 퍼투시스로 인해 유발되는 백일해의 발생률의 극적 감소의 원인이 되었다.
전세포 DTP 백신은 일반적으로 여러 국소 유해 사건 (예를 들어, 주사 부위에서 홍반, 종창 및 통증), 발열, 및 다른 경증 전신 사건 (예를 들어, 졸림, 초조함 및 식욕부진)과 연관된다 (참조: Cody CL, Baraff LJ, Cherry JD, Marcy SM, Manclarck CR; The nature and rate of adverse reactions associated with DTP and DT immunization in infants and children. Paediatrics 1981; 68:650-60) & (참조: Long SS, DeForest A, Pennridge Pediatric Associates, et al. Longitudinal study of adverse reactions following Diphtheria-tetanus-pertussis vaccine in infancy. Paediatrics 1990; 85:294-302).
전세포 DTP 백신을 받은 소아 사이에서 더 중증인 전신 사건 (예를 들어, 경련 {발열 유무} 및 저긴장성 저반응성 에피소드)이 덜 빈번하게 발생한다 (1 사례 대 1,750회 용량 투여의 비율) (참조: Cody CL, Baraff LJ, Cherry JD, Marcy SM, Manclarck CR; The nature and rate of adverse reactions associated with DTP and DT immunization in infants and children. Paediatrics 1981; 68:650-60). 급성 뇌병증은 훨씬 더 드물게 발생한다 (0-10.5 사례 대 1백만회 용량 투여의 비율). 전문가들은 전세포 퍼투시스 백신이 일부 드문 사례에서 지속적 뇌 손상을 유발한다는데 동의한다 (참조: Institute of Medicine; DPT vaccine and chronic nervous system dysfunction, a new analysis; Washington D.C., National Academy Press, 1994).
전세포 퍼투시스 예방접종, 반응원성 및 심각한 부작용 사이의 관계를 언급한 여러 보고서는 백신 수용의 감퇴 및 그에 따른 재개된 전염병을 유발하였다 (Miller, D.L., Ross, E.M., Alderslade, R., Bellman, M.H., and Brawson, N.S.B. (1981). Pertussis immunization and serious acute neurological illness in children: Brit Med. J. 282: 1595-1599).
전세포 퍼투시스 (wP) 관련 유해 반응은 전 세계적으로 지속적인 사용을 방해하므로, 산업화된 세계에서 wP 기반 조합 백신이 무세포 퍼투시스 기반 조합 백신에 의해 점진적으로 대체되었다.
좀더 최근에, 한정된 성분 백일해 백신이 개발되었다. 모든 액상 6가 무세포 퍼투시스 기반 백신 (DTaP IPV PRP-T-HBsAg)은 이전에 보고되었다 (EP1028750).
인판릭스(Infanrix)® 헥사 (GSK)는 현재 소크(Salk) IPV를 함유하는 유일한 전 세계적으로 판매되는 6가 소아용 조합 백신이다. 이 제품 (DTaP3 -IPV-HBV//Hib)은 사용 전에 백신의 나머지로 재구성될 별도의 바이알에 동결건조된 Hib 항원 PRP-T 접합체와 함께 공동 포장된 5가 제품의 사전충전형 주사기로 판매된다.
두 번째 6가 백신인 헥시온(Hexyon)® (또한 헥사시마(Hexacima)® 및 헥사심(Hexaxim)®이라고 함)은 사노피 파스퇴르의 완전 액상 6가이지만; 이는 또한 aP이다. 이 백신은 유럽 및 전 세계의 사금융 시장에 대해 표적화될 가능성이 있다.
DT, 무세포 퍼투시스, 사빈(Sabin) IPV (유형 I: 40 DU, 유형 2: 8 DU, 유형 3: 32 DU), 단일 균주 불활성화 로타바이러스 (G9 균주, 즉 116E 균주), TT에 대한 접합체 헤모필루스 인플루엔자 유형 b PRP 접합체 및 재조합 B형 간염 백신으로 이루어진 7가 조합 백신은 바라트 바이오테크 인터내셔널(Bharat Biotech International)에 의해 개발되고 있다.
그러나 특히 개발 도상국 환경에서 무세포 퍼투시스 (aP) 백신의 장기적 유효성에 대한 우려가 대두되었다. 최근 보고서는 청소년기에는 백일해에 대한 면역이 약해지고, 이것이 완전히 예방접종되기 전에 생후 6개월 미만의 유아에서 사례 증가의 원인이 된다고 제안한다. 백신 효능은 유아기에 aP로 면역화된 8세 내지 12세에서 24%로 추정되었다. 호주에서의 관찰 연구는 또한 유아기에 aP 백신을 제공받은 청소년에서는 wP 백신을 제공받은 청소년보다 더 높은 사례 비율을 보여주었다 (3.3의 상대 위험, 95% 신뢰 구간 2.4-4.5).
비용 관점에서, aP 항원은 제조상의 차이 및 로열티 비용으로 인해 역사적으로 wP 항원의 비용을 10 내지 30배 초과하였으며, 따라서 개발 도상국에 경제적 부담이 되었다. 결과적으로, wP-기반 6가 백신의 비용은 자원 부족 국가의 공공 부문에서 사용하기에 더 적합할 것이다.
따라서, 개발 도상국을 대상으로 하는 6가 백신에서 전세포 퍼투시스 (wP)의 사용은 특히 개발 도상국 환경에서 aP 백신의 장기적 유효성에 대한 비용 및 새로운 우려 때문에 중요하게 되었다.
최상의 전세포 퍼투시스 (wP) 백신과 비교하여, aP 백신은 대량 면역화 프로그램에서 그다지 효과적이지 않다 (Vickers et al. 2006; Cherry 2012).
고도로 면역화된 집단의 발병에 대한 최근 연구는 aP 백신의 보호 지속기간이 너무 짧아서 (Klein et al. 2012; Misegades et al. 2012), 나이가 많은 소아 및 청소년에서 면역력의 감소 및 이 연령 군에서 상응하는 사례 증가를 유발함을 보여주었다 (Skowronski et al. 2002; Klein et al. 2012). 이는 십대에 보호를 잘 제공하는 wP 백신과는 대조적이다 (Klein et al. 2012). 이들 단점의 결과로, 1990년대에 aP 백신으로 전환된 국가에서, 이제 백일해에 대해 잘 보호되지 않을 뿐만 아니라 부스터에 덜 반응할 수도 있는 세대의 소아를 가지며, 이는 소아가 프라이밍된 백신이 나중에 부스터 예방접종에 대한 면역 반응을 결정할 수 있기 때문이다 (Podda et al. 1995; Mascart et al. 2007; Sheridan et al. 2012; Liko, Robison and Cieslak 2013; Smits et al. 2013).
wP의 반응원성에 기여하는 가장 중요한 인자 중 하나는 박테리아 외막으로부터의 내독소인 지질-올리고사카라이드 (LOS)의 존재이다.
wP 백신에서 독소의 불활성화는 다양한 방법에 의해 수행될 수 있지만, 최종 제품에서 활성 열 불안정한 독소가 검출가능하지 않아야 한다. 많은 제조업체에 의해 실시되는 wP 독소의 불활성화를 위한 전세포 퍼투시스 (wP) 벌크 공정은 열 처리/포르말린을 사용한다. 여러 보고서는 wP의 불활성화를 위한 티메로살의 사용을 언급한다. 그러나, 티메로살의 사용은 IPV의 항원성의 상실을 유발하므로 (Vaccine 1994 Volume 12 No. 9 851 -856. Deleterious effect of thimerosal on the potency of inactivated poliovirus vaccine), 따라서 IPV를 함유하는 조합 백신의 경우, 시간 경과에 따라 그의 효력을 유지하거나 공급원 퍼투시스 벌크 불활성화를 변경하기 위해 티메로살-함유 wP와는 별도의 바이알에 제공될 필요가 있을 수 있다. 일부 항원, 즉 활성 PT는 또한 면역 반응 개질제로서 역할을 할 수 있으며, 상이한 백신 간에 다양한 항원에 대한 면역 반응의 유의한 차이가 관찰되었다 (WHO, 1993).
LOS의 화학적 추출은 사용된 시험관내 또는 생체내 시험에 따라 내독소 함량의 유의한 감소 (20%) 및 내독소 관련 독성의 현저한 감퇴 (최대 97%)를 초래하였다. LOS 추출은 제품의 무결성에 영향을 미치지 않았으며, 더 중요하게는, DTP의 효력 및/또는 안정성에 영향을 미치지 않았다. 더욱이, 항체 및 T-세포 반응의 차이가 거의 관찰되지 않았다. (참조: Waldely Oliveira Dias et al.; An improved whole cell pertussis vaccine with reduced content of endotoxin; Human Vaccines & Immunotherapeutics 9:2, 339-348; February 2012)
B형 간염 항원
간염 바이러스의 다양한 균주가 있다. B형 간염은 인간의 간을 감염시키는 B형 간염 바이러스 (HepB)에 의해 유발되는 질환이며, 간염이라고 불리는 염증을 유발한다. 상기 질환에 대한 백신은 바이러스 외피 단백질 중 하나인 B형 간염 표면 항원 (HBsAg)을 함유한다. 대량 면역화에 사용되어 온 백신, 예를 들어 머크의 제품 리콤비박스 HB® 및 콤박스®, 글락소 스미스클라인 바이올로지칼스의 엔지릭스-B® 및 페디아릭스®가 현재 이용가능하다. B형 간염 성분을 갖는 조합 백신은 HepB 단일-항원 백신과 비교하여 더 높은 완성도 및 순응도 결과 모두와 연관되었다. (참조: Kurosky. et al.; Effect of Combination Vaccines on Hepatitis B Vaccine Compliance in Children in the United States; The Pediatric Infectious Disease Journal. 36(7):e189-e196, JUL 2017). 여러 참고문헌은 B형 간염 표면 항원이 다른 항원과 조합하여 인산알루미늄에 흡착된 것을 언급한다. B형 간염 성분의 낮은 면역원성으로 인해 시장에서 철수된 헥사백® 조합 백신. 따라서, 적절하거나 향상된 면역원성을 갖는 B형 간염 항원을 포함하는 조합 백신 조성물에 대한 필요성이 존재한다.
헤모필루스 인플루엔자 (Hib) 항원
헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)는 상기도 세균총의 정상적인 부분인 그람-음성 코코바실루스이다. 헤모필루스 인플루엔자 유형 b (Hib b)는 어린 소아에서 수막염 침습성 혈액 매개 감염의 주요 원인이며, 생후 첫 2년에 수막염의 주요 원인이다. 헤모필루스 인플루엔자에 대한 면역화는 1987년 캐나다에서 폴리사카라이드 백신 [폴리리보스 리비톨 포스페이트 (PRP)]으로 시작되었다. Hib의 폴리리보실리비톨 포스페이트 (PRP) 캡슐은 유기체에 대한 주요 균력 인자이다. PRP에 대한 항체는 혈청 살균 활성에 대한 일차 기여자이며, 항체 수준의 증가는 침습성 질환의 위험 감소와 연관된다. PRP는 T-세포 독립적 항원이므로, a) 18-개월 미만의 유아 및 소아에서 불량한 항체 반응의 유도, b) T-세포 의존적 항원에서 보이는 것보다 가변적이고 정량적으로 더 작은 항체 반응, c) 더 높은 비율의 면역글로불린 M (IgM)의 생산, 및 d) 부스터 반응을 유도할 수 없음을 특징으로 한다.
PRP 성분만을 기반으로 하는 초기 백신은 유아에서 비효과적인 것으로 입증되었다. PRP 접합체 백신에 대한 추가 노력이 진행되었으며, 여기서 PRP는 운반 단백질이라고 불리는 단백질, 예컨대 네이세리아 메닝기티디스(Neisseria meningitidis)의 외막 단백질, 디프테리아 톡소이드, 파상풍 톡소이드 및 CRM 197에 접합된다. 조합 백신 중 Hib-접합체 성분의 포함은 감소된 Hib 면역원성과 연관되었다. 또한, Hib-접합체는 수성 배지에서 불안정하고, 이러한 형태로 장기간 저장 동안 생존할 수 없다. 따라서, 헤모필루스 인플루엔자 b (Hib)의 PRP 폴리사카라이드는 흔히 건조된 고체로 제형화되며, 이는 다른 항원의 액상 제형으로 전달시 재구성된다. 예를 들어 인판릭스® 헥사 (WO99/48525).
회색질척수염 항원
다양한 종류의 백신이 이용가능하다:
· 1961년에 알버트 사빈 박사가 개발한 생 약독화 (약화) 경구 폴리오 백신 (OPV). 사빈 균주를 포함하는 OPV는 경구로 제공된다.
· 1955년에 조너스 소크 박사가 개발한 불활성화 (사멸) 폴리오 백신 (IPV). 소크 균주를 포함하는 IPV는 주사로서 제공된다.
· 최근에, 포르말린으로 사빈 균주 폴리오 바이러스를 불활성화시킴으로써 제조된 사빈 불활성화 폴리오 바이러스가 주사용으로 개발되었으며 또한 상품으로 이용가능하다.
생 약독화 (OPV) 및 불활성화 (IPV) 폴리오 백신은 모두 전 세계적으로 폴리오 질환을 제어하는데 효과적이었다. 폴리오 백신은 소크 또는 사빈 균주를 포함할 수 있다.
1955년에, 조너스 소크 박사는 야생형 폴리오 바이러스의 불활성화에 성공하여, 주사형 제형으로 가능하게 하였으며, 이를 소크 균주로 명명하였으며, 이는 회색질척수염 질환에 대한 백신에서 사용되는 마호니(Mahoney) 유형 1, MET 유형 2 및 소켓(Saukett) 유형 3을 포함한다. 사빈 균주는 사빈 1 및 사빈 2 균주를 포함한다.
현재 허용가능한 표준 용량의 폴리오 백신(들)은 40 D 항원 단위의 불활성화 폴리오바이러스 유형 1 (마호니), 8 D 항원 단위의 불활성화 폴리오바이러스 유형 2 (MEF-I) 및 32 D 항원 단위의 불활성화 폴리오바이러스 유형 3 (소켓)을 함유한다 (예를 들어 인판릭스-헥사® (WO99/48525)).
IPV는 현재 비-보조제 독립형 제형으로서, 또는 DT-IPV (디프테리아 및 파상풍 톡소이드 포함) 및 6가-IPV 백신 (추가로 백일해, B형 간염, 헤모필루스 인플루엔자 b 및 보조제 포함)을 포함한 다양한 조합으로 이용가능하다 (예를 들어, 인판릭스® 헥사 (WO99/48525)).
그러나, OPV와 비교할 때, IPV에 대한 전체 생산 비용은 상당히 더 높다. 이는 주로 하기에 대한 요구사항 때문이다: (i) 용량 당 더 많은 바이러스; (ii) 추가 다운스트림 프로세싱 (즉, 농축, 정제 및 불활성화), 및 관련 QC-시험, (iii) 다운스트림에서 항원 손실 또는 불량한 회수, 및 iv) 봉쇄. 지금까지, 재정적 문제는 저소득 및 중간 소득 국가에서 IPV 혁신 및 구현에 있어 주요 결점이었다.
폴리오바이러스 박멸 후 IPV에 대한 미래의 글로벌 수요는 현재 수준인 8천만 용량에서 연간 4억5천만 용량으로 증가할 수 있다. 결과적으로, IPV 공급을 "확장"하기 위한 접근법이 필요할 것이다.
본 출원인은 놀랍게도 감소된 용량의 IPV가 표준 용량의 IPV 항원과 비교할 때 폴리오에 대한 비열등성/동등한 보호를 나타낸다는 것을 발견하였다. 더 낮은 용량의 IPV 항원을 사용하여 감염에 대한 보호를 제공하는 감소된 용량의 효능있는 백신 제형은 기존 백신의 공급이 글로벌 요구를 충족시키기에 불충분하거나 기존 백신의 제조 비용으로 인해 백신이 개발 도상국에 알맞은 가격으로 판매되는 것을 방해하는 상황에서 바람직하다. 또한, 더 낮은 용량의 IPV에 대한 노출은 기존의 판매되는 제형에 비해 더 안전할 수 있다. IPV를 더 알맞은 가격으로 이용가능하게 하는 다양한 전략이 평가될 필요가 있다. 결과적으로 감소된 용량 IPV를 포함하는 조합 백신은 더 저렴하고 투여하기 쉽게 만들 수 있다.
유행성 인플루엔자 백신의 경우, 보조제의 사용은 백신의 용량 감소, 유용성 증가 및 비용 감소를 가능하게 한다. 따라서, IPV의 보조제 백신 제형은 비용을 감소시키고 또한 전 세계적으로 이용가능한 IPV 용량의 수를 증가시킬 것이라고 추측되었다.
또한, 알루미늄 염은 안전한 것으로 간주되어, 이미 IPV를 함유하는 조합 백신에 사용되고 있으며, 개발 장애물이 가장 낮고, 제조 비용이 저렴하다. 그러나, 알루미늄 보조제는 유의한 용량-감소를 허용하는 것으로 공지되어 있지 않다.
또한, 6가 백신에 존재하는 전세포 퍼투시스 항원은 강한 면역-자극제인 것으로 입증되었다. 인산알루미늄 보조제 및 전세포 퍼투시스 백신 모두의 면역-자극 효과로 인해, 감소된 용량의 IPV로 양호한 면역 반응을 얻는 것으로 추정된다.
기타 항원
조합 백신에 포함될 수 있는 기타 항원은 헤모필루스 인플루엔자 (a, c, d, e, f 혈청형 및 비-캡슐화 균주), 간염 (A, C, D, E, F 및 G 균주), 네이세리아 메닝기티디스 A, B, C, W, X, Y, 인플루엔자, 폐렴구균, 연쇄구균, 탄저병, 뎅기열, 말라리아, 홍역, 볼거리, 풍진, BCG, 일본 뇌염, 로타바이러스, 천연두, 황열, 장티푸스, 대상포진, 수두 바이러스 등이다.
조합 백신에 사용되는 항원의 범위 및 유형은 사용될 표적 집단 연령에 따라, 예컨대 유아, 토들러, 소아, 청소년 및 성인에 따라 달라진다. 보르데텔라 퍼투시스, 클로스트리디움 테타니, 코리네박테리움 디프테리아에 및 임의로 불활성화 폴리오바이러스 (IPV)로부터의 감염, 및/또는 B형 간염 바이러스 및/또는 헤모필루스 인플루엔자 유형 B 감염을 예방할 수 있는 가장 초기 공지된 조합 백신은 공지되어 있다 (예를 들어 WO 93/24148, WO97/00697, WO2000/030678, WO2008/028956, US 6013264 & WO2005089794 참조).
그러나, 잘 문서화된 항원 경쟁 현상은 복잡하고 다가 백신의 개발을 방해하였다. 이러한 현상은 다중 항원을 함께 투여하는 것이 종종 별도로 투여될 때 이들 항원에 대한 면역 반응에 비해 특정 항원에 대한 감소된 반응을 초래한다는 관찰을 의미한다.
한편, 다중-용량 백신은 유해한 미생물에 의한 오염을 회피하기 위해 보존제를 포함해야 한다. 저개발국으로 수출되는 백신 제품의 경우, 백신이 사용되는 국가의 환경, 유통 방법 등을 고려하여 보존제를 함유하는 다중-용량 백신이 바람직하다. 사용된 보존제의 예로는 염화벤제토늄 (페메롤), 티오메르살, 페놀, 포름알데히드 및 2-페녹시에탄올 (2-PE)이 있으며 관련 기술분야에 공지되어 있다. 백신에 적합한 보존제는 환경적으로 안전하고, 박테리아 뿐만 아니라 효모 및 다른 진균에 대해 효과적이고, 백신의 면역원성 효과에 부정적인 영향이 없어야 한다.
티오메르살은 보존제로서 많은 백신에서 광범위하게 사용된 에틸 수은의 유도체이다. 티메로살은 백신 제품의 저장 또는 사용 동안 오염 미생물의 성장을 방지하고 멸균 상태를 유지하는 것으로 공지되어 있으며, WHO 사전심사 (PQ)를 획득한 많은 조합 백신이 보존제로서 티메로살을 함유한다. 그러나, 주로 주사 부위의 발적 및 종창을 포함한 지연형 국소 과민 반응의 형태로 티오메르살에 대한 특정 알레르기 반응 (인구의 약 16%)에 관한 보고가 있다.
또한, 불활성화 폴리오 백신은 통상적으로 티오메르살 대신에 2-PE를 보존제로서 사용하는데, 이는 불활성화 폴리오 백신에서 보존제로서 티오메르살을 사용하는 것이 냉장고에 저장하더라도 1주일 이내에 백신 효력을 50% 이상 감소시키는 것으로 공지되어 있기 때문이다. (Vaccine 1994 Volume 12 No.9 851 - 856. Deleterious effect of thimerosal on the potency of inactivated poliovirus vaccine).
조합 백신 (D, T, wP, Hib, HBsAg 및 IPV 포함)은 또한 5 mg/mL 농도의 2-PE를 사용한다 (WO2010046934, WO2008020322, 및 WO2012093406).
그러나, 2-PE는 2-8℃에서 DPT 기반 조합 백신에서 효모 및 진균에 대해 티메로살보다 더 약한 항미생물 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 필요한 기준을 충족시키기 위해 2-PE의 양을 증가시킴으로써 조합 백신의 보존제 효능을 개선시키는 것이 옵션 중 하나이다. 그러나, 2PE 농도를 증가시키는 것은 조합 백신을 받는 대상체인 어린 소아에게 안전 문제를 유발할 수 있으며, 이에 의해 이러한 백신(들)의 승인에 대한 규제 장애물이 발생할 수 있다.
따라서, 2-PE를 안전 및 규제 기준을 충족하는 적어도 하나의 다른 보존제와 조합함으로써 조합 백신의 보존제 효능을 개선시키는 것이 유리할 것이다. 사용될 수 있는 2-PE 이외의 보존제의 예로는 염화벤제토늄 (페메롤), 파라벤 에스테르, 페놀, 포름알데히드가 있으며 관련 기술분야에 공지되어 있다.
메틸 및 프로필 파라벤, 벤질 알콜은 USP, BP 및 EP에 따른 항미생물 시험을 통과한 것으로 밝혀졌다. 또한 이들 보존제는 무독성이지만 효과적이다. 파라벤의 독성은 신체가 이들 약물을 자체 제거하는 것이 쉽고 빠르기 때문에 상대적으로 낮다. 복강내 마우스에서 메틸 파라벤의 LD50은 1 g/kg이다. 메틸 및 프로필 파라벤의 혼합물은 상업용 백신에서 사용된 적이 없는 것으로 밝혀졌다.
본 출원인은 2-페녹시에탄올 및 파라벤 에스테르 (예를 들어 메틸-, 프로필- 파라벤)의 혼합물의 보존제 효능이 2-페녹시에탄올 단독과 비교하여 상대적으로 더 효과적이라는 것을 발견하였다.
또한, 본 출원인은 조합 백신 조성물에서 항원의 올바른 형태의 면역원성, 반응원성, 안정성 및 유지가 하기를 포함하는 조성물의 제형화 방식에 따라 달라진다는 것을 발견하였다:
a) 개별 항원의 제조 방법
b) 항원의 첨가 순서
c) 특정 항원에 대한 특정 양의 특정 보조제의 사용,
d) 보조제에 대한 항원의 개별 흡착 또는 조합된 흡착, 여기서 조합된 흡착은 작동 용이성의 형태에서 장점을 가지며, 단점은 제1 사전 흡착된 항원이 후속 항원의 첨가 동안 부분적으로 또는 완전히 탈착될 수 있다는 것을 포함한다. 마지막 단계에서 첨가되는 항원은 이전 항원이 흡착 용량을 포화시킬 수 있으므로 완전히 흡착되지 않을 수 있다. 약하게 흡착된 항원은 저장시 탈착될 수 있다.
e) 보조제에 대한 항원의 흡착 정도
f) 최소 명반 농도의 사용
g) 보존제의 최적 농도 및 유형의 사용
h) 진탕, 온도 및 pH를 포함하는 다양한 파라미터의 사용.
목적
본원의 적어도 하나의 실시양태가 만족하는 본 개시내용의 목적 중 일부는 하기와 같다:
본 개시내용의 목적은 종래 기술의 하나 이상의 문제를 호전시키거나 적어도 유용한 대안을 제공하는 것이다.
본 개시내용의 또 다른 목적은 디프테리아, 파상풍, 백일해, 폴리오, 헤모필루스 인플루엔자 및 B형 간염에 의해 유발되는 감염의 방지 및 예방에 적합한 완전 액상 조합 백신을 제공하거나, 그의 임상 징후의 발병 또는 진행을 예방, 호전 또는 지연시키는 것이다.
본 개시내용의 또 다른 목적은 표준 용량의 IPV 항원과 비교할 때 폴리오에 대한 비열등성/동등한 보호를 나타내는 다양한 감소된 용량의 불활성화 폴리오 바이러스 (IPV) 항원을 함유하는 완전 액상 조합 백신을 제공하는 것이다.
본 개시내용의 또 다른 목적은 다중-용량 조합 백신의 보존제 효능을 개선시키기 위해 적어도 하나의 파라벤, 즉 메틸 또는 프로필 파라벤 보존제 및 2-페녹시에탄올 (2-PE)을 함유하는 완전 액상 조합 백신을 제공하는 것이다.
본 개시내용의 또 다른 목적은 이러한 조합 백신의 조성물/제형을 제조하는 개선된 방법을 제공하는 것이며, 여기서 백신은 개선된 면역원성, 감소된 반응원성, 개선된 안정성을 나타내고 상기 면역원성 성분 각각에 대한 혈청보호 기준을 추가로 충족시킨다.
본 개시내용의 다른 목적 및 장점은 본 개시내용의 범위를 제한하려는 의도가 아닌 하기 설명으로부터 더 명백해질 것이다.
발명의 요약
다중-용량 조합 백신의 보존제 효능이 개선된, 다른 항원/면역원 및 보존제로서 사용되는 적어도 하나의 파라벤 에스테르, 즉 메틸 또는 프로필 파라벤 및 2-페녹시에탄올 (2-PE)과 조합하여 감소된 용량의 불활성화 폴리오 바이러스 (IPV) 항원을 포함하는 조합 백신 조성물 및 그의 제조 방법.
본 개시내용은 하기를 포함하는 조합 백신 조성물에 관한 것이다 -
a) 반합성 배지를 사용하여 생산되고 후속적으로 해독되고 인산알루미늄 보조제에 개별적으로 흡착되어 이에 의해 면역원성이 향상된, 고도로 정제된 디프테리아 톡소이드 (D) & 파상풍 톡소이드 (T)
b) 열 및 화학적 불활성화의 조합, 감소된 반응원성 및 증가된 효력을 초래하는 특정 비율의 특정 보르데텔라 퍼투시스 균주를 사용하여 제조된 불활성화 전세포 비. 퍼투시스 (wP) 성분
c) 운반 단백질 (CP)에 접합된 헤모필루스 인플루엔자 유형 b (Hib) 캡슐형 폴리사카라이드 항원 (PRP)
d) 개선된 포름알데히드 불활성화 방법을 이용하고 임의로 인산알루미늄 보조제에 흡착함으로써 제조된 표준 용량과 비교하여 유사한 효능을 나타내는 감소된 용량의 소크 또는 사빈 (불활성화 폴리오 바이러스) IPV.
e) 인산알루미늄 보조제에 개별적으로 흡착되어 이에 의해 면역원성이 향상된 B형 간염 (HepB) 표면 항원
f) 최소 명반 함량으로 인한 감소된 반응원성 보장
g) 보존제로서 2-페녹시에탄올 (2-PE) 이외의 적어도 하나의 파라벤 에스테르, 즉 메틸 또는 프로필 파라벤.
상세한 설명
본 개시내용은 다양한 실시양태를 허용할 수 있지만, 본 개시내용이 본 개시내용의 원리의 예시로 간주될 수 있고 본 개시내용의 범위를 이 설명에서 예시되고 개시된 것으로 제한하려는 의도가 아니라는 것을 이해하면서 특정 실시양태가 하기 상세한 논의에 나타낸다. 본 개시내용의 범위를 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 철저하고 완전하게 전달하기 위해 실시양태가 제공된다. 본 개시내용의 실시양태의 완전한 이해를 제공하기 위해 특정 성분 및 방법과 관련하여 수많은 세부사항이 기재되어 있다. 실시양태에서 제공된 세부사항이 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다는 것은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 일부 실시양태에서, 널리 공지된 조성물, 널리 공지된 공정 및 널리 공지된 기술은 상세하게 설명되지 않는다.
본 개시내용에서 사용되는 용어는 단지 특정 실시양태를 설명하기 위한 것이며, 이러한 용어는 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 간주되지 않아야 한다. 본 개시내용에서 사용된 바와 같이, "하나"의 형태는 문맥상 명백히 달리 암시하지 않는 한 복수 형태도 포함하도록 의도될 수 있다.
제1, 제2, 제3 등의 용어는 상기 언급된 용어가 하나의 요소, 성분, 영역, 층 또는 섹션을 또 다른 성분, 영역, 층 또는 섹션과 구별하기 위해서만 사용될 수 있으므로 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 제1, 제2, 제3 등의 용어는 본원에서 사용될 때 본 개시내용에 의해 명확하게 제안되지 않는 한 특정 차례 또는 순서를 암시하지 않는다. 본 개시내용은 면역원성 조성물 및 그의 제조 방법을 제공한다.
용어 "백신"은 용어 "면역원성 조성물"로 임의로 치환가능하며 그 반대의 경우도 마찬가지이다.
"D-항원 단위" (또한 "국제 단위" 또는 IU라고 함): D 항원 형태의 폴리오바이러스는 보호적 중화 항체를 유도한다. 본원에 언급된 D 항원 단위 (예를 들어 본 발명의 백신에서)는 제형화된 백신의 각 인간 용량에 첨가되는 최종 백신의 제형화 이전에 각 비흡착된 벌크 IPV 항원 유형의 측정된 총 D 항원 단위이다 (전형적으로 0.5 mL 최종 부피). D-항원 단위를 측정하는 신뢰가능한 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어 유럽 약전에 의해 공개되었다. 예를 들어, D-항원 단위는 하기 실시예 1 ("ELISA에 의한 D-항원 정량화")에 기재된 바와 같이 ELISA 시험을 사용하여 측정될 수 있다. 유럽 약전은 제조업체 간의 이러한 방법의 표준화를 위해 시험 샘플 (유럽 약전 생물학적 참조 제제 - 유럽 약전 사무국으로부터 이용가능함, 예를 들어 코드 P 216 0000)을 제공한다 (Pharmeuropa Special Issue, Bio 96-2). 그러므로, D-항원 단위 값은 관련 기술분야에서 잘 이해된다.
본원에서 용어 "용량"은 전형적으로 본 발명의 백신의 1회 투여이며, 이는 전형적으로 1회 주사이다. 전형적인 인간 용량은 0.5 mL이다. 물론, 백신 투여 스케쥴에 따라 다양한 용량이 투여될 수 있다.
본원에서 용어 "IPV" 또는 이들 성분을 포함하는 면역원성 조성물은 불활성화 폴리오 바이러스 유형 1 (예를 들어 바람직하게 사용된 바와 같은 마호니), 유형 2 (예를 들어 MEF-1), 또는 유형 3 (예를 들어 소켓), 또는 이들 유형 중 두 가지 또는 세 가지 모두의 사빈 혈청형 1, 2, 3 조합을 의미한다. 본 발명의 목적을 위한 전체 (또는 표준) 용량 (각각 소크 기반 IPV 유형 1, 2 및 3의 40-8-32 D 항원 단위) IPV 면역원성 조성물의 예는 폴리오백® (세럼 인스티튜트 오브 인디아 프라이빗 리미티드(Serum Institute of India Pvt. Ltd.))일 수 있다. 그러므로, 소크 기반 IPV의 표준 용량과 비교하여 1, 2, 3배 용량 감소 (감소됨)가 본 발명의 면역원성 조성물에 존재한다고 본원에서 언급된 경우, 이는 각각 IPV 유형 1, 2 및/또는 3의 40, 8 및/또는 32 D-항원 단위의 용량의 감소의 X%에 해당하는 D-항원 단위 (각 벌크 IPV 항원 유형에서 측정된 바와 같이)가 상기 백신의 각 용량 이내에서 제형화된다는 것을 의미한다.
본 명세서 전반에 걸쳐 용어 "사카라이드"는 폴리사카라이드 또는 올리고사카라이드를 나타낼 수 있고 둘 모두를 포함한다. 캡슐형 사카라이드 항원은 전장 폴리사카라이드일 수 있거나, 이는 박테리아 '크기-사카라이드' 및 '올리고사카라이드'으로 연장될 수 있지만 (이는 자연적으로 반복 단위 수가 적거나 관리가능성을 위해 크기가 감소된 폴리사카라이드임), 여전히 숙주에서 보호 면역 반응을 유도할 수 있다.
본 개시내용의 제1 실시양태에 따라, 조합 백신 조성물은 디프테리아 톡소이드 (D), 파상풍 톡소이드 (T), 전세포 비. 퍼투시스 (wP), 헤모필루스 인플루엔자 유형 b (Hib) PRP-CP 접합체, B형 간염 (HepB), 감소된 용량의 불활성화 폴리오 바이러스 (IPV)로부터 선택되나 이에 제한되지는 않는 항원/면역원 군을 포함하고, 2-페녹시에탄올 및 적어도 하나의 파라벤 에스테르 보존제의 조합을 추가로 포함한다.
본 개시내용의 제2 실시양태에 따라, 조합 백신 조성물은 각각 헤모필루스 인플루엔자 (a, c, d, e, f 혈청형 및 비-캡슐화 균주), 간염 (A, C, D, E, F 및 G 균주), 네이세리아 메닝기티디스 A, B, C, Y, W-135 또는 X, 인플루엔자, 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 살모넬라 티피(Salmonella typhi) 항원(들), 무세포 퍼투시스 항원, 변형된 아데닐레이트 시클라제, 말라리아 항원 (RTS,S), 폐렴구균, 연쇄구균, 탄저병, 뎅기열, 말라리아, 홍역, 볼거리, 풍진, BCG, 인간 유두종 바이러스, 일본 뇌염, 뎅기열, 지카, 에볼라, 치쿤구니야, 로타바이러스, 천연두, 황열, 플라비바이러스, 대상포진, 수두 바이러스 항원으로 이루어진 군으로부터 선택되나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 항원을 추가로 포함할 수 있다.
본 개시내용의 제3 실시양태에 따라, 조합 백신 조성물에 사용되는 IPV 균주는 유형 1, 유형 2 및 유형 3의 군으로부터 선택된 불활성화 사빈 균주 또는 마호니 유형 1, MEF 유형 2 및 소켓 유형 3의 군으로부터 선택된 불활성화 소크 균주를 포함한다.
제3 실시양태의 측면 중 하나에서, 폴리오 바이러스는 하기 방법에 의해 성장될 수 있다:
· CCL81-VERO (원숭이 신장) 세포주는 폴리오 바이러스, 즉 사빈 및 소크 균주의 성장을 위한 숙주 세포로서 사용되었다.
· 숙주 세포를 폴리오 바이러스의 원하는 균주로 감염시키고 72시간 동안 인큐베이션한 후, 바이러스 및 세포 파편을 함유하는 배지를 풀링하고 단일 컨테이너에 수집하였다.
· 여과액을 100KDa 카세트를 사용하여 접선 유동 여과에 적용시키고; 포스페이트 완충제를 사용하여 투석여과하고 음이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다.
· 환자에게 투여하기 전에, 적절한 불활성화 방법을 사용하여 바이러스를 불활성화시켜야 한다.
그러나, 본 발명자들은 놀랍게도 포름알데히드 불활성화 후 D-항원의 높은 손실 백분율이 예상치 않게 폴리오 바이러스 입자의 바람직하지 않은 응집을 유발하는 포스페이트 완충제의 존재로 인한 것일 수 있음을 발견하였다.
따라서, 본 개시내용의 중요한 측면은 하기 단계를 포함하는 개선된 포르말린 불활성화 공정을 포함한다:
a) 정제된 바이러스 풀을 pH 7 내지 7.5를 갖는 (30 내지 50 mM) 범위의 포스페이트 완충제에서 트리스 완충제로의 완충제 교환에 적용하였다.
b) 상기 혼합물에 글리신 (5gm/l)을 함유하는 M-199 배지를 첨가하였다.
c) 0.025% 포름알데히드를 첨가하고 후속적으로 혼합하였다.
d) 혼합물을 후속적으로 자석 교반기에서 바이러스 벌크를 연속적으로 교반하면서 37℃에서 5 내지 13일 동안 인큐베이션하였다.
e) 인큐베이션 후 혼합물을 7일차에 중간 TFF 시스템 (100 KDa, 0.1 ㎡)에 적용하고, 불활성화 후 최종 여과하였다.
f) 후속적으로 여과된 벌크를 2-8℃에서 저장하였다.
g) D-Ag 단위 결정을 위해 D-Ag ELISA를 수행하였다.
본 개시내용의 제4 실시양태에 따라, 조합 백신 조성물에 사용되는 IPV 균주는 유형 1, 유형 2 및 유형 3의 군으로부터 선택된 용량 감소된 불활성화 사빈 균주 또는 마호니 유형 1, MEF 유형 2 및 소켓 유형 3의 군으로부터 선택된 불활성화 소크 균주를 포함한다.
본 개시내용의 제5 실시양태에 따라, IPV (사빈 또는 소크 균주)는 어떠한 보조제에도 개별적으로 흡착되지 않고 후속적으로 최종 조합 백신 조성물에 첨가될 수 있다.
제5 실시양태의 바람직한 측면에 따라, IPV (사빈 또는 소크 균주)는 보조제, 보다 바람직하게는 조합 백신에 존재하는 포스페이트 또는 히드록시드의 알루미늄 염에 흡착될 수 있으며, 여기서 IPV 유형 1에 대한 IPV 항원의 흡착률은 10 - 30% 범위일 수 있고, IPV 유형 2는 60 - 100% 범위일 수 있고, IPV 유형 3은 0 - 25% 범위일 수 있다.
본 개시내용의 제6 실시양태에 따라, IPV (사빈 또는 소크 균주) 성분(들)은 알루미늄 염 (Al3+), 예컨대 수산화알루미늄 (Al(OH)3) 또는 인산알루미늄 (AlPO4), 명반, 인산칼슘, MPLA, 3D-MPL, QS21, CpG-함유 올리고데옥시뉴클레오티드 보조제, 리포솜, 또는 수중유 에멀젼 또는 이들의 조합 (예를 들어 존재하는 경우 다른 성분과의 혼합 전 또는 후)의 군으로부터 선택된 보조제에 개별적으로 흡착될 수 있다. 흡착되는 경우, 하나 이상의 IPV 성분은 수산화알루미늄 (Al(OH)3) 또는 인산알루미늄에 별도로 또는 혼합물로서 함께 흡착될 수 있다.
IPV (사빈 또는 소크 균주) 성분(들)은 하기 절차에 의해 알루미늄 염에 흡착될 수 있다:
· 원하는 부피의 오토클레이브된 Al(PO)4 또는 Al(OH)3을 취하여 50 ml 컨테이너에 0.1 내지 0.8 mg/용량의 최종 명반 (Al3+) 농도를 얻음.
· 조정된 D-Ag 단위로 IPV 벌크를 첨가하고 희석제 (10x M-199+ 0.5% 글리신)로 부피를 채움.
· 최종 제형 pH를 조정하고, pH 6 내지 7.5를 갖는 최종 제형을 수득함.
제6 실시양태의 측면 중 하나에서, 포르말린 불활성화 IPV의 흡착은 혈청형 당 0.1 mg/용량, 0.2mg/용량, 0.3mg/용량, 0.4mg/용량, 0.5mg/용량, 0.6mg/용량, 0.7mg/용량 및 0.8mg/용량, 바람직하게는 0.1 mg/용량 내지 1.25mg/용량으로부터 선택된 농도 및 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7 및 6.8, 바람직하게는 6.5로부터 선택된 pH를 갖는 명반 (Al3+)에서 수행될 수 있다.
제6 실시양태의 또 다른 측면에서, 트리스의 존재하에 포르말린 불활성화 후 D-항원의 회수율은 50%, 60%, 70% 또는 80%일 수 있고, 인산알루미늄 흡착 후 흡착률은 70% 내지 80%, 80% 내지 90% 또는 90% 내지 99% 또는 95% 내지 99%일 수 있다.
본 개시내용의 제7 실시양태에 따라, 디프테리아 독소 (외독소) 및 파상풍 독소 (외독소)를 각각 코리네박테리움 디프테리아 및 클로스트리디움 테타니로부터 수득한 후, 후속적으로 적합한 불활성화 방법을 사용하여 해독하였다. 이렇게 수득된 디프테리아 톡소이드 (D) 및 파상풍 톡소이드 (T)는 겔 여과 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있다. 이렇게 수득된 정제된 DT를 조합 백신의 제형화에 추가로 사용하였다.
제7 실시양태의 측면 중 하나에서, 디프테리아 독소는 하기 조합 중 어느 하나에서 최적 농도로 하기 성분으로 이루어진 반합성 배지에서 코리네박테리움 디프테리아에를 성장시킴으로써 생산된다:
조합 1:
카제인 가수분해물, 말토스 일수화물, 빙초산, 락트산나트륨, 황산마그네슘, β-알라닌, 피멜산, 니코틴산, 황산구리, 황산아연, 염화망간, L-시스틴, 염화칼슘 이수화물, 오르토인산이수소칼륨, 인산수소이칼륨, 황산제1철 및 WFI.
조합 2:
카제인 가수분해물, 말토스 일수화물, 빙초산, 락트산나트륨, 황산마그네슘, β-알라닌, 피멜산, 니코틴산, 염화망간, L-시스틴, 염화칼슘 이수화물, 오르토인산이수소칼륨, 인산수소이칼륨, 황산제1철 및 WFI.
조합 3:
카제인 가수분해물, 말토스 일수화물, 빙초산, 락트산나트륨, β-알라닌, 피멜산, 니코틴산, 황산구리, 황산아연, 염화망간, L-시스틴, 염화칼슘 이수화물, 오르토인산이수소칼륨, 인산수소이칼륨, 및 WFI.
조합 4:
효모 추출물, 말토스 일수화물, 빙초산, 락트산나트륨, 황산마그네슘, β-알라닌, 피멜산, 니코틴산, 황산구리, 황산아연, 염화망간, L-시스틴, 염화칼슘 이수화물, 오르토인산이수소칼륨, 인산수소이칼륨, 황산제1철 및 WFI.
제7 실시양태의 제2 측면에 따라, 파상풍 독소는 하기 조합 중 어느 하나에서 최적 농도로 하기 성분으로 이루어진 반합성 배지에서 클로스트리디움 테타누스를 성장시킴으로써 생산된다:
조합 1:
카제인 소화물, 염화칼슘, 인산수소이칼륨, 무수 덱스트로스, 염화나트륨, 황산마그네슘, 리보플라빈, 티아민 히드로클로라이드, 피리독신 히드로클로라이드, 판토텐산칼슘, 니코틴산, L-시스틴, 염화제2철, 비타민 B12 용액, 비오틴, 진한 HCl, NaOH, 무수 에탄올, 및 WFI
조합 2:
카제인 소화물, 염화칼슘, β-알라닌, 인산수소이칼륨, 무수 덱스트로스, 염화나트륨, 황산마그네슘, 황산제1철, 리보플라빈, 티아민 히드로클로라이드, 피리독신 히드로클로라이드, 판토텐산칼슘, 니코틴산, L-시스틴, 염화제2철, 비타민 B12 용액, 비오틴, 진한 HCl, NaOH, 무수 에탄올, 및 WFI
조합 3:
카제인 소화물, 염화칼슘, 인산수소이칼륨, 무수 덱스트로스, 염화나트륨, 황산아연, 리보플라빈, 티아민 히드로클로라이드, 피리독신 히드로클로라이드, 판토텐산칼슘, 니코틴산, L-시스틴, 염화제2철, 비타민 B12 용액, 비오틴, 진한 HCl, NaOH, 무수 에탄올, 및 WFI
조합 4:
카제인 가수분해물, 염화칼슘, 인산수소이칼륨, 무수 덱스트로스, 염화나트륨, 황산마그네슘, 염화망간, 리보플라빈, 티아민 히드로클로라이드, 피리독신 히드로클로라이드, 판토텐산칼슘, 니코틴산, L-시스틴, 염화제2철, 비타민 B12 용액, 비오틴, 진한 HCl, NaOH, 무수 에탄올, 및 WFI
제7 실시양태의 또 다른 측면에서, 디프테리아 및 파상풍 독소는 열, UV, 포르말린 /포름알데히드, 아세틸에틸렌이민 등을 포함하는 하기 불활성화 방법 중 하나 또는 조합을 사용하여 해독되었다.
본 개시내용의 제8 실시양태에 따라, 조합 백신 조성물에 사용되는 간염 (Hep) 항원은 B형 간염 균주의 표면으로부터 유래된 간염 항원 (HBsAg)을 포함한다.
제9 실시양태의 측면 중 하나에서, HBsAg는 하기 방법 중 하나에 의해 제조될 수 있다:
· HBV 감염 동안 대량의 HBsAg가 간에서 합성되어 혈류로 방출되기 때문에, 만성 B형 간염 보균자의 혈장으로부터 미립자 형태의 항원을 정제함으로써
· 재조합 DNA 방법에 의해 단백질을 발현시킴
본 개시내용의 제9 실시양태에 따라, 디프테리아 톡소이드 (D), 파상풍 톡소이드 (T), B형 간염 표면 항원 (HBsAg)은 알루미늄 염 (Al3+), 예컨대 수산화알루미늄 (Al(OH)3) 또는 인산알루미늄 (AlPO4), 명반, 인산칼슘, MPLA, 3D-MPL, QS21, CpG-함유 올리고데옥시뉴클레오티드 보조제, 리포솜, 또는 수중유 에멀젼 또는 이들의 조합의 군으로부터 선택된 보조제에 개별적으로 흡착된다.
보다 바람직하게는 디프테리아 톡소이드 (D), 파상풍 톡소이드 (T) 및 B형 간염 표면 항원 (HBsAg)은 인산알루미늄에 개별적으로 흡착된다.
제9 실시양태의 측면 중 하나에서, 디프테리아 톡소이드 (D) 항원은 적어도 50%의 흡착률로 인산알루미늄에 흡착된다.
제9 실시양태의 또 다른 측면에서, 파상풍 톡소이드 (T) 항원은 적어도 40%의 흡착률로 인산알루미늄에 흡착된다.
제9 실시양태의 또 다른 측면에서, B형 간염 표면 항원 (HBsAg)은 적어도 70%의 흡착률로 인산알루미늄에 흡착된다.
본 개시내용의 제10 실시양태에 따라, 본 개시내용의 조합 백신에 사용되는 Hib 항원은 헤모필루스 인플루엔자 유형 B (Hib) 균주 760705의 캡슐형 폴리사카라이드로부터 유래된다.
제10 실시양태의 한 측면에 따라, Hib PRP 항원은 CRM197, 디프테리아 톡소이드, 네이세리아 메닝기티디스 외막 복합체, 파상풍 톡소이드의 단편 C, 백일해 톡소이드, 에이치. 인플루엔자의 단백질 D, 이. 콜라이(E. coli) LT, 이. 콜라이 ST, 및 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터의 외독소 A, 외막 복합체 c (OMPC), 포린, 트랜스페린 결합 단백질, 뉴몰리신, 폐렴구균 표면 단백질 A (PspA), 폐렴구균 표면 어드헤신 A (PsaA), 폐렴구균 PhtD, 폐렴구균 표면 단백질 BVH-3 및 BVH-11, 바실루스 안트라시스(Bacillus anthracis)의 보호 항원 (PA) 및 바실루스 안트라시스의 해독된 부종 인자 (EF) 및 치사 인자 (LF), 오브알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 인간 혈청 알부민, 소 혈청 알부민 (BSA) 및 투베르쿨린의 정제된 단백질 유도체 (PPD), 합성 펩티드, 열 충격 단백질, 백일해 단백질, 시토카인, 림포카인, 호르몬, 성장 인자, 다양한 병원체-유래 항원으로부터의 다중 인간 CD4+ T 세포 에피토프를 포함하는 인공 단백질, 예컨대 N 19, 철-흡수 단백질, 씨. 디피실레(C. difficile)로부터의 독소 A 또는 B 및 에스. 아갈락티아에(S. agalactiae) 단백질로 이루어지나 이에 제한되지는 않는 운반 단백질의 군으로부터 선택된 운반 단백질에 접합된다.
보다 바람직하게는 Hib PRP는 CNBr 화학, 환원성 아미노화 화학, 시아닐화 화학 또는 문헌 [Kniskern et al., "Conjugation: design, chemistry, and analysis" in Ellis et al., Development and clinical uses of Haemophilus influenzae type B conjugate vaccines. New York: Marcel Dekker, 1994: 37-69]에 이미 개시된 임의의 다른 화학에 의해 파상풍 톡소이드 (TT)에 접합된다.
제10 실시양태의 제2 측면에 따라, 운반 단백질은 본 개시내용의 조성물에 유리 및 접합된 형태로 존재하며, 비접합된 형태는 바람직하게는 전체로서 조성물에 운반 단백질의 총량의 20% 이하이며, 보다 바람직하게는 5 중량% 미만으로 존재한다.
제10 실시양태의 제3 측면에 따라, Hib 항원은 어떠한 보조제에도 실질적으로 흡착되지 않는다.
제10 실시양태의 제4 측면에 따라, Hib 항원은 어떠한 보조제에도 고의적으로 또는 의도적으로 흡착되지 않을 수 있다.
제10 실시양태의 제5 측면에 따라, 임의의 보조제에 대한 Hib 항원의 흡착률은 20% 미만이다.
본 개시내용의 제11 실시양태에 따라, 본 개시내용의 조합 백신 조성물에 사용되는 전세포 퍼투시스 (wP) 항원 제제는 바람직하게는 특정 비율로 혼합된 보르데텔라 퍼투시스 균주 134, 509, 25525 및 6229로부터 제조되며, 후속적으로 티오메르살이 없는 개선된 불활성화 방법을 사용하여 불활성화되어 감소된 반응원성 및 증가된 효력을 유도하고, wP 항원은 알루미늄 기반 보조제에 흡착될 수 있거나 흡착되지 않을 수 있다.
제11 실시양태의 한 측면에 따라, 본 개시내용의 조합 백신 조성물에 사용되는 전세포 퍼투시스 (wP) 항원 제제는 바람직하게는 1:1:0.25:0.25의 비율로 혼합된 보르데텔라 퍼투시스 균주 134, 509, 25525 및 6229로부터 제조된다.
제11 실시양태의 제2 측면에 따라, 조합 백신 조성물에 사용되는 전세포 퍼투시스 (wP) 항원 제제는 열, UV, 포르말린 /포름알데히드, 아세틸에틸렌이민 등을 포함하는 하기 불활성화 처리 중 하나 이상을 사용하여 불활성화되었다.
보다 바람직하게는 조합 백신 조성물에 사용되는 전세포 퍼투시스 (wP) 항원 제제는 열 및 화학적 처리의 조합을 사용하여 불활성화되었다. 보다 바람직하게는 포름알데히드의 존재하에 56±2℃에서 10 내지 15분 동안 열 불활성화되고, 여기서 wP 벌크는 뭉치지 않고 쉽게 균질화된 상태로 유지되어, 이에 의해 감소된 반응원성을 유도하고 더 긴 지속기간 동안 우수한 wP 효력을 제공한다.
제11 실시양태의 제3 측면에 따라, 조합 백신 조성물에 사용되는 전세포 퍼투시스 (wP) 항원 제제는 알루미늄 기반 보조제, 예컨대 수산화알루미늄, 인산알루미늄 또는 이들의 조합 (예를 들어 존재하는 경우 다른 성분과의 혼합 전 또는 후)에 흡착될 수 있거나 흡착되지 않을 수 있다. 흡착되는 경우, 하나 이상의 wP 균주 (즉, 134, 509, 25525 및 6229)는 개별적으로 또는 혼합물로서 함께 흡착될 수 있다.
본 개시내용의 제12 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 1>
Figure pct00001
본 개시내용의 제13 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 2>
Figure pct00002
본 개시내용의 제14 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 3>
Figure pct00003
본 개시내용의 제15 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 4>
Figure pct00004
본 개시내용의 제16 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 5>
Figure pct00005
본 개시내용의 제17 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 6>
Figure pct00006
본 개시내용의 제18 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 7>
Figure pct00007
본 개시내용의 제19 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 8>
Figure pct00008
본 개시내용의 제20 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 9>
Figure pct00009
본 개시내용의 제21 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 10>
Figure pct00010
본 개시내용의 제22 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 11>
Figure pct00011
본 개시내용의 제23 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 12>
Figure pct00012
본 개시내용의 제24 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 13>
Figure pct00013
본 개시내용의 제25 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 14>
Figure pct00014
본 개시내용의 제26 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 15>
Figure pct00015
본 개시내용의 제27 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 16>
Figure pct00016
본 개시내용의 제28 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 17>
Figure pct00017
본 개시내용의 제29 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 18>
Figure pct00018
본 개시내용의 제30 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 19>
Figure pct00019
본 개시내용의 제31 실시양태에 따라, 다중-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 20>
Figure pct00020
본 개시내용의 제32 실시양태에 따라, 최종 단일-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 21>
Figure pct00021
본 개시내용의 제33 실시양태에 따라, 최종 단일-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 22>
Figure pct00022
본 개시내용의 제34 실시양태에 따라, 최종 단일-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 23>
Figure pct00023
본 개시내용의 제35 실시양태에 따라, 최종 단일-용량 조합 백신 조성물/제형은 하기를 포함한다:
<표 24>
Figure pct00024
NMT - 이하
본 개시내용의 제36 실시양태에 따라, 최종 조합 백신 조성물의 하나 이상의 항원은 어떠한 보조제에도 실질적으로 흡착되지 않을 수 있다.
본 개시내용의 제37 실시양태에 따라, 면역원성 조성물의 pH는 pH 6.0 내지 pH 8.0의 범위; 보다 바람직하게는 pH 6.0 내지 pH 7.5의 범위; 보다 더 바람직하게는 pH 6.2 내지 pH 7.2의 범위; 및 가장 바람직하게는 pH 6.3 내지 pH 6.8의 범위일 수 있다.
본 개시내용의 제38 실시양태에 따라, 면역원성 조성물은 카르보네이트, 포스페이트, 아세테이트, 숙시네이트, 보레이트, 시트레이트, 락테이트, 글루코네이트 및 타르트레이트로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제, 뿐만 아니라 원하는 pH를 달성하도록 선택된 비율로 인산나트륨 및/또는 인산칼륨을 함유하는 포스페이트 완충제를 포함하는 보다 복잡한 유기 완충제를 추가로 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 완충제는 트리스 (히드록시메틸) 아미노메탄, 또는 원하는 pH를 달성하도록 제형화된 "트리스"를 함유한다. 또 다른 예에서, 완충제는 행크스 염을 함유하는 최소 필수 배지일 수 있다. 다른 완충제, 예컨대 HEPES, 피페라진-N,N'-비스 (PIPES), 및 2-에탄술폰산 (MES)이 또한 본 개시내용에 의해 예상된다. 완충제는 본 개시내용의 면역원성 조성물의 안정화를 돕는다. 완충제의 양은 0.1 mM 내지 100 mM의 범위일 수 있으며, 바람직하게는 5 mM, 6 mM, 7 mM, 22 mM, 23 mM, 24 mM, 25 mM, 26 mM, 27 mM, 28 mM, 29 mM 및 30 mM로부터 선택된다.
실시양태의 또 다른 측면에서, 면역원성 조성물은 계면활성제, 중합체 및 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 제약상 허용되는 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 계면활성제의 예는 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80 등을 포함할 수 있다. 중합체의 예는 덱스트란, 카르복시메틸 셀룰로스, 히알루론산, 시클로덱스트린 등을 포함할 수 있다. 염의 예는 NaCl, KCl, KH2HPO4, Na2HPO4.2H2O, CaCl2, MgCl2 등을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 염은 NaCl일 수 있다. 전형적으로 염의 양은 100 mM 내지 200 mM의 범위일 수 있다.
아미노산, 예컨대 히스티딘, 글리신, 아르기닌 및 리신이 면역원성 조성물을 안정화시키기 위해 첨가될 수 있다.
본 개시내용의 제39 실시양태에 따라, 면역원성 조성물은 알루미늄 염 (Al3+), 예컨대 수산화알루미늄 (Al(OH)3) 또는 인산알루미늄 (AlPO4), 명반, 인산칼슘, MPLA, 3D-MPL, QS21, CpG-함유 올리고데옥시뉴클레오티드 보조제, 리포솜, 또는 수중유 에멀젼의 군으로부터 선택된 하나 이상의 보조제를 추가로 포함할 수 있다.
보다 바람직하게는 조성물은 보조제로서 인산알루미늄 (AlPO4)을 포함한다.
보다 바람직하게는 조성물은 보조제로서 수산화알루미늄 (AlOH3)을 포함한다.
제39 실시양태의 측면 중 하나에서, 최종 제형의 항원은 원위치 인산알루미늄 겔 또는 기성품 인산알루미늄 겔 또는 이들의 조합에 흡착될 수 있다.
제39 실시양태의 바람직한 측면 중 하나에서, 본 개시내용의 조성물은 보조제를 2.5 mg/0.5 ml 이하의 양으로, 및 구체적으로 1.5 mg/0.5 ml 내지 0.1 mg/0.5 ml의 양으로 함유할 수 있다.
본 개시내용의 제40 실시양태에 따라, 면역원성 조성물은 유성 및 수성 에멀젼, MF-59, 리포솜, 지질 폴리사카라이드, 사포닌, 지질 A, 지질 A 유도체, 모노포스포릴 지질 A, 3-탈아실화된 모노포스포릴 지질 A, AS01, AS03, 올리고뉴클레오티드, 적어도 하나의 비메틸화된 CpG 및/또는 리포솜을 포함하는 올리고뉴클레오티드, 프로인트 보조제, 프로인트 완전 보조제, 프로인트 불완전 보조제, 중합체, 공중합체, 예컨대 블록 공중합체를 포함하는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체, 중합체 p 1005, CRL-8300 보조제, 무라밀 디펩티드, TLR-4 효능제, 플라젤린, 그람 음성 박테리아로부터 유래된 플라젤린, TLR-5 효능제, TLR-5 수용체에 결합할 수 있는 플라젤린의 단편, 알파-C-갈락토실세라마이드, 키토산, 인터루킨-2, QS-21, ISCOMS, 스쿠알렌 혼합물 (SAF-1), Quil A, 콜레라 독소 B 서브유닛, 폴리포스파젠 및 유도체, 미코박테리움 세포벽 제제, 마이콜산 유도체, 비이온성 블록 공중합체 계면활성제, OMV, fHbp, 스테롤 및 지질과의 사포닌 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역자극 성분을 추가로 포함할 수 있다.
본 개시내용의 제41 실시양태에 따라, 면역원성 조성물은 염화벤제토늄 (페메롤), 페놀, m-크레졸, 티오메르살, 포름알데히드, 염화벤잘코늄, 벤질 알콜, 클로로부탄올, p-클로르-m-크레졸, 또는 벤질 알콜 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 백신 조성물은 단일 면역화를 위한 보존제를 포함할 수 있거나, 다중 면역화를 위한 보존제를 포함할 수 있다 (즉, '다중 용량' 키트). 보존제의 포함은 다중 용량 배열에서 바람직하다. 다중 용량 조성물에 보존제를 포함하는 것에 대한 대안으로서 (또는 추가로), 조성물은 물질의 제거를 위한 무균 어댑터를 갖는 컨테이너에 함유될 수 있다. 전형적으로 보존제의 양은 0.1 mg 내지 50 mg의 범위일 수 있다.
본 개시내용의 제42 실시양태에 따라, 면역원성 조성물은 원하는 투여 경로 및 제제에 따라 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 겔화 또는 점도 향상 첨가제, 향미제, 색소 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 개시내용의 제43 실시양태에 따라, 면역원성 조성물은 완전 액상일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 적합한 형태의 액상 제제는 원하는 pH로 완충된 용액, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 등장성 수용액, 점성 조성물 및 엘릭시르를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 면역원성 조성물은 로션, 겔, 스프레이, 연고 또는 다른 적합한 기술을 포함하는 경피 제제 형태일 수 있다. 비강 또는 호흡기 (점막) 투여가 바람직한 경우 (예를 들어, 에어로졸 흡입 또는 취입), 조성물은 스퀴즈 스프레이 디스펜서, 펌프 디스펜서 또는 에어로졸 디스펜서에 의해 분배되는 형태일 수 있다. 에어로졸은 일반적으로 탄화수소에 의한 압력 하에 있다. 펌프 디스펜서는 바람직하게는 계량된 용량 또는 특정 입자 크기를 갖는 용량을 분배할 수 있다. 용액, 현탁액 및 겔 형태인 경우, 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 활성 성분(들)에 더하여 다량의 물 (바람직하게는 정제수)을 함유한다.
본 개시내용의 제44 실시양태에 따라, 상기 조합 백신은 2-8℃에서 12 내지 36개월 동안; 25℃에서 2 내지 6개월 동안; 37℃에서 1주 내지 4주 동안 안정할 수 있다.
본 개시내용의 제45 실시양태에 따라, 면역원성 조성물은 안약 또는 비강 또는 직장 또는 협측 또는 질, 구강 또는 위내 또는 점막 또는 설하, 폐포 또는 치은 또는 후각 또는 호흡기 점막 투여 또는 임의의 다른 면역화 경로에 의한 이식 또는 투여로부터 비경구 또는 피하 또는 피내, 근육내 또는 복강내 또는 정맥내 투여 또는 주사가능한 투여 또는 지속 방출을 통해 인간 대상체에게 면역학적 유효량의 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 디프테리아, 파상풍, 백일해, B형 간염 바이러스, 헤모필루스 인플루엔자 유형 b, 폴리오 바이러스 감염을 포함하는 건강 상태의 발병을 감소시키거나 예방하는 방법에 사용하기 위해 제형화될 수 있다.
본 개시내용의 제46 실시양태에 따라, 면역원성 조성물은 단일 용량 바이알 또는 다중 용량 바이알 (2 용량 또는 5 용량 또는 10 용량 바이알) 또는 다중 용량 키트 또는 사전충전형 주사기로서 제형화될 수 있으며, 여기서 상기 면역원성 조성물은 단일 용량 스케쥴, 또는 바람직하게는 다중 용량 스케쥴로 제공될 수 있으며, 여기서 일차 예방접종 과정에 이어, 필요한 경우 1-3년 후 후속 시간 간격으로 1-3개의 별도의 용량이 제공된다. 투여량 요법은 또한 보호 면역을 부여하는데 필요한 부스터 용량의 필요성에 따라 적어도 부분적으로 결정될 것이다.
보다 바람직하게는 면역원성 조성물은 제1 용량, 및 1-3년 후 후속 시간 간격으로 제2 용량으로 이루어진 2개의 용량 요법에 따라 인간 대상체 또는 2세 이하의 소아에게 투여하기 위해 제형화될 수 있다.
보다 바람직하게는 면역원성 조성물은 다른 약물 또는 임의의 다른 백신과 공동으로 투여될 수 있다.
본 개시내용의 제47 실시양태에 따라, 출원인은 i) 개별 항원의 제조 공정, ii) 항원 첨가 순서, iii) 특정 항원에 대한 특정 양의 특정 보조제의 사용, iv) 보조제에 대한 항원의 개별 흡착 또는 조합된 흡착, v) 보조제에 대한 항원의 흡착 정도, vi) 최소 명반 농도의 사용, vii) 보존제의 최적 농도 및 유형의 사용, 및 viii) 진탕, 온도 및 pH를 포함하는 다양한 파라미터의 사용을 고려하여 하기 개시된 공정에 의해 백신을 제조할 때 개선된 면역원성 및 감소된 반응원성을 갖는 다중-용량 완전 액상 조합 백신을 수득할 수 있음을 발견하였다.
SIIPL 조합 백신에 사용되는 균주의 생물학적 공급원:
디프테리아 톡소이드:
균주 코리네박테리움 디프테리아에 PW8 CN2000은 1973년에 동결건조된 형태로 인도 국가통제청 중앙연구소(National Control Authority Central Research Institute (C.R.I.); 인도 히마찰 프라데시 카사울리)에 의해 웰컴 연구소(the Wellcome Research Laboratory; 영국 런던)에서 수득하였다. C.R.I.(인도 카사울리)에서 균주를 소생시키고 마스터 시드 로트- 씨. 디프테리아에 CN2000 A1 하에서 추가로 동결건조하였다.
파상풍 톡소이드:
균주 클로스트리디움 테타니 하바드 균주 No.49205는 동결건조된 형태로 인도 국가통제청 C.R.I(인도 카사울리)에 의해 리즈크스 인스티튜트 보르 드 볼크스게존드하이드(Rijks Institute Voor de Volksgezondheid; 네덜란드)에서 수득하였다.
백일해:
SIIPL에서의 백일해 백신 벌크 제조는 보르데텔라 퍼투시스의 4가지 균주, 즉 균주 134, 509, 6229 및 25525의 사용을 포함한다. 균주 134 및 509의 마스터 시드는 원래 인도 국가통제청 중앙연구소(인도 히마찰 프라데시 카사울리)를 통해 수득된 것으로서, 리즈크스 연구소(네덜란드)로부터 유래된다. 균주 6229 및 25525의 마스터 시드는 원래 리스터 연구소(Lister Institute; 영국)로부터 유래된다.
B형 간염:
라인 바이오텍(Rhein Biotech, 독일)은 HBsAg 표면 항원 유전자를 함유하는 재조합 한세눌라폴리모르파 균주를 구축하였다. 라인 바이오텍은 또한 마스터 셀 뱅크(Master Cell Bank)(MCB 한세눌라폴리모르파 K3/8-1 균주 ADW, 12/94)를 만들었고, 이 은행에서 모든 특징화 시험을 수행하였다.
헤모필루스 인플루엔자 유형 b:
세포 기질의 생성을 위한 공급원 유기체는 헤모필루스 인플루엔자 유형 b, 균주 760705이다. 상기 균주는 원래 1976년 11월에 2년 2개월된 남아 (1974년 8월 14일 출생)로부터 단리되었다. 상기 균주의 3회 계대배양이 수행되고, 암스테르담 대학의 학술 의료 센터 (AMC)에서 -70℃에서 저장되었다. 이 균주는 SIIPL과 네덜란드 백신 연구소(Netherlands Vaccines Institute, NVI; 네덜란드) 간의 협력의 일환으로 SIIPL로 이전되었다.
IPV:
소크 폴리오바이러스의 균주 및 공급원은 하기와 같다.
폴리오바이러스 유형 1:
균주: 마호니
공급원: 빌트호벤 바이올로지칼스(Bilthoven Biologicals, 네덜란드)
폴리오바이러스 유형 2:
균주: MEF1
공급원: 빌트호벤 바이올로지칼스(네덜란드)
폴리오바이러스 유형 3:
균주: 소켓
공급원: 빌트호벤 바이올로지칼스(네덜란드)
본 명세서 전반에 걸쳐, 용어 "포함하다", 또는 "포함하다" 또는 "포함하는"과 같은 변형은 언급된 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군의 포함을 암시하는 것으로 이해될 것이지만, 임의의 다른 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군의 배제를 암시하는 것은 아니다.
표현 "적어도" 또는 "적어도 하나"의 사용은 하나 이상의 요소 또는 성분 또는 양의 사용을 제안하는데, 이러한 사용이 하나 이상의 원하는 목적 또는 결과를 달성하기 위한 본 발명의 실시양태일 수 있기 때문이다. 본 발명의 특정 실시양태가 설명되어 있지만, 이들 실시양태는 단지 예로서 제시되어 있을 뿐이며, 본 발명의 범위를 제한하려는 의도는 아니다. 본 발명의 범위 내에서의 본 발명의 제형의 변경 또는 변형은 본원의 본 개시내용의 검토 시에 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 발생할 수 있다. 이러한 변경 또는 변형은 본 발명의 취지 내에 포함된다.
다양한 물리적 파라미터, 치수 및 양에 대해 주어진 수치 값은 단지 근사 값일 뿐이며, 상반되게 명세서에서 언급되지 않는 한, 물리적 파라미터, 치수 및 양에 할당된 수치 값보다 더 높은 값은 본 발명의 범위 내에 속할 것으로 예상된다.
바람직한 실시양태의 특정 특징에 대해 많은 역점을 두었지만, 본 개시내용의 원리에서 벗어나지 않으면서 많은 부가적인 특징이 부가될 수 있고, 바람직한 실시양태에서 많은 변경이 이루어질 수 있다는 것이 이해될 것이다. 본 개시내용의 바람직한 실시양태에서의 이들 및 다른 변경은 본원의 개시내용으로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이며, 이에 의해 전술한 내용들은 단지 본 개시내용의 예시로 해석되어야 하고 제한으로서 해석되지 않아야 함이 명백하게 이해되어야 한다.
장점
본원에 상기 기재된 본 개시내용은 D, T, wP, HBsAg, Hib PRP-TT 접합체 및 IPV를 포함하는 조합 백신 조성물 및 그의 제조 방법의 실현을 포함하나 이에 제한되지는 않는 여러 기술적 진보 및 장점을 갖는다. 다른 조합 백신 조성물과 비교하여, 본 개시내용은 하기 장점을 제공한다:
1. 완전 액상 조합 백신
2. 표준 용량 (40-8-32 DU)과 비교하여 유사한 효능을 나타내는 표준 용량과 비교하여 IPV 항원의 감소된 용량
3. D, T, wP, HepB, Hib, IPV 항원의 개선된 면역원성
4. 12개월의 기간에 걸쳐 시험된, 2-8℃ 및 실온에서의 개선된 안정성
5. 전염성 해면상 뇌병증 (TSE) 또는 소 해면상 뇌병증 (BSE)이 없는 반합성 배지를 사용하여 생산된 고도로 정제된 디프테리아 톡소이드 (D) 및 파상풍 톡소이드 (T).
6. 전세포 비. 퍼투시스 (wP) 항원은 1:1:0.25:0.25 비율로 보르데텔라 퍼투시스 균주 134, 509, 25525 및 6229를 포함하여, 이에 의해 비. 퍼투시스에 대한 효력 및 면역원성이 개선된다.
7. 열 및 포름알데히드 불활성화의 조합을 사용한 전세포 비. 퍼투시스 (wP) 성분의 불활성화의 개선된 방법. 상기 방법은 티오메르살이 없고, 불활성화 전세포 퍼투시스 항원은 뭉치지 않고 균질하게 남아서, 이에 의해 감소된 반응원성을 유도하고 더 긴 지속기간 동안 우수한 효력을 제공한다.
8. 총 헤모필루스 인플루엔자 유형 b PRP-TT 접합체 벌크에서의 낮은 유리 PRP (7% 미만)
9. 임의의 보조제에 대한 Hib 항원의 흡착률은 20% 미만이다.
10. 인산알루미늄 보조제에 개별적으로 흡착되어 이에 의해 효력 및 면역원성이 개선된, 디프테리아 톡소이드 항원 (D), 파상풍 톡소이드 (T) 항원 및 B형 간염 (HepB) 표면 항원의 개선된 흡착 프로파일.
11. 최소 총 명반 함량 (Al3+)으로 인한 감소된 반응원성 보장.
12. 보존제로서 2-페녹시에탄올 (2-PE) 및 적어도 하나의 파라벤 에스테르 (메틸파라벤 또는 프로필파라벤)의 최적화된 농도로 다중-용량 완전 액상 조합 백신의 항미생물 능력을 효과적으로 유지함.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 바람직한 실시양태를 입증하기 위해 포함된다. 하기 실시예에 개시된 조성물 및 기술은 본 발명의 실시에서 잘 기능하는 것으로 본 발명자에 의해 발견된 기술을 나타내며, 그러므로 그의 실시를 위한 바람직한 방식을 구성하는 것으로 간주될 수 있음을 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이해해야 한다. 그러나, 관련 기술분야의 통상의 기술자는, 본 개시내용에 비추어 개시된 특정 실시양태에서 많은 변경이 이루어질 수 있고, 본 발명의 취지 및 범위를 벗어나지 않으면서 유사하거나 비슷한 결과를 여전히 얻을 수 있음을 인식해야 한다.
실시예 1: 본 개시내용에 따른 백신 조성물의 다양한 조합
<표 25>
IPV (소크 균주 유형 1(마호니) 또는 유형 2 (MEF) 또는 유형 3(소켓))를 포함하는 조합 백신
Figure pct00025
Figure pct00026
<표 25 (계속)>
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
추가로 수산화나트륨 / 탄산나트륨을 사용하여 상기 개시된 바와 같은 조성물의 pH를 약 6.0 내지 7.0으로 조정하고, 생리식염수 (0.9%)를 첨가하여 부피를 채웠다. 백신은 제조 공정 동안 사용되는 미량의 글루타르알데히드, 포름알데히드, 네오마이신, 스트렙토마이신 및 폴리믹신 B를 함유할 수 있다.
<표 26>
IPV (사빈 균주: 유형 1, 유형 2 & 유형 3)를 포함하는 조합 백신
Figure pct00030
Figure pct00031
<표 26 (계속)>
Figure pct00032
Figure pct00033
추가로 수산화나트륨 / 탄산나트륨을 사용하여 상기 개시된 바와 같은 조성물의 pH를 약 6.0 내지 7.0으로 조정하고, 생리식염수 (0.9%)를 첨가하여 부피를 채웠다. 백신은 제조 공정 동안 사용되는 미량의 글루타르알데히드, 포름알데히드, 네오마이신, 스트렙토마이신 및 폴리믹신 B를 함유할 수 있다.
실시예 2: 헤모필루스 인플루엔자 유형 b 접합체 벌크의 제조 공정
제조 단계의 개괄적인 도면은 도 1 순서도에 제시된다. 공정의 각 53개 단계는 하기 간략히 설명되어 있다:
단계 1: 접종 단계 I 진탕 플라스크 (S1):
0.22 μm 여과된 시드 배지를 함유하는 접종 단계 진탕 플라스크를 접종하기 위해 작업 시드 로트(Working Seed Lot) 바이알을 사용하였다. 25 mL 작업 부피를 갖는 일회용 PETG 125 mL 플라스크를 사용하였다. 이 단계를 제어되는 진탕 (200 ± 50 rpm) 및 온도 (36 ± 2℃)를 갖는 인큐베이터 진탕기에서 수행하였다. 적절한 박테리아 성장이 달성된 후 (OD590 ≥ 1.0), 배양물을 단계 2에 설명된 다음 접종 단계 (S2 단계)로 이동시켰다. 배양 순도 (그람 음성 코코바실리)를 보장하기 위해, 인-프로세스(in-process) 대조군으로서 그람 염색을 수행하였다.
단계 2: 접종 단계 II 진탕 플라스크 (S2):
S2 접종 단계는 800 mL 작업 부피를 갖는 2 L 페른바흐(fernbach) 플라스크 (S2A 및 S2B)로 이루어진다. OD590이 허용 기준 내에 있을 때까지 S2A 플라스크를 OD590 측정을 위해 사용하고, S2B 플라스크를 S3 단계의 접종을 위해 사용하였다. 플라스크 둘 모두를, S1 접종 단계와 동일한 필터-멸균화된 배지로 배칭하였다. 단계 II 진탕 플라스크 모두를 접종하기 위해 S1 단계 플라스크를 사용하였다. 이 단계를 제어되는 진탕 (200 ± 50 rpm) 및 온도 (36 ± 2℃)를 갖는 인큐베이터 진탕기에서 수행하였다. 적절한 박테리아 성장이 달성된 후 (OD590 ≥ 1.0), 배양물을 단계 3에 설명된 다음 접종 단계 (S3 단계)로 이동시켰다. 배양 순도 (그람 음성 코코바실리)를 보장하기 위해, 인-프로세스 대조군으로서 그람 염색을 수행하였다.
단계 3: 접종 단계 III 발효기:
S3 접종 단계는 35 L 작업 부피를 갖는 120 L 발효기로 이루어진다. 발효기를 이전 접종 단계와 동일한 배지로 배칭하였다. 접종 발효기를 접종하기 위해 S2 단계 플라스크를 사용하였다. 성장을 접종 발효기 내에서 온도 (36 ± 2℃), DO (10% 설정점), 진탕 (300-600 rpm), 에어레이션 (1 -5 LPM) 및 배압 (0.2 bar)에서 수행하였다. 적절한 박테리아 성장이 달성된 후 (OD590 ≥ 1.0), 배양물을 단계 4에 설명된 다음 생산 단계 (S4 단계)로 이동시켰다. 배양 순도 (그람 음성 코코바실리)를 보장하기 위해, 인-프로세스 대조군으로서 그람 염색을 수행하였다.
단계 4: 1200 L 규모 생산 발효:
1200 L 생산 발효기는 800 L의 작업 부피를 갖는다. 이를 기본 배지 성분으로 배칭하고, 원위치에서 증기 멸균화하였다. 후속적으로, 0.22 μm 필터를 통해 통과시킨 후, 다양한 배지 보충제를 첨가하였다. 단계 3으로부터 수득된 S3 단계 배양물로 발효기를 접종하였다. 제어된 용존 산소 (20% - 설정점), 온도 (36 ± 2℃), pH (7.1-7.4), 진탕 (40-400 rpm), 에어레이션 (50 - 300 LPM) 및 배압 (0.2 bar) 하에서 발효를 수행하였다. 발효 과정 동안 2개의 별개의 영양소 스파이크를 첨가하였다. OD590 (OD590 ≥ 3.5)을 측정함으로써 성장을 모니터링하고, 정체기에 도달한 후 발효는 완료된 것으로 간주하였다. 성장 및 정체기 동안, 폴리사카라이드 생성물이 분비되고, 배양물 브로스에 축적된다. 배양 순도 (그람 음성 코코바실리)를 보장하기 위해, 인-프로세스 대조군으로서 그람 염색을 수행하였다.
단계 5: 포르말린 처리:
이 단계에서 화학 작용제 (포르말린)를 사용하여 바이오버든(bioburden) 감소를 달성하였다. 0.1% 포르말린을 첨가하고, 발효된 브로스를 NLT 2시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 포르말린 처리 후, 용기를 <15℃로 급속하게 냉각시켰다. 바이오버든 감소를 달성하기 위해 포르말린 첨가를 승인하였다. 이는 인큐베이션 기간 후 배양 플레이트에 의해 확인되었다. 단계 6에 기재된 바와 같은 수확을 위해 바이오버든 감소된 브로스를 준비하였다.
단계 6: 연속 원심분리 수확:
일차 수확 단계로서 연속 원심분리를 사용하였다. 이 단계는 불활성화된 바이오매스로부터 폴리사카라이드 함유 조질의 브로스를 분리하기 위해 수행하였다. OD590 감소에 의해 측정된 바와 같이, 바이오매스의 >90%를 제거할 목적으로 연속 원심분리기를 사용하였다. 원심분리기를 대략 15000 g에서 200-500 L/h의 액체 유속으로 작동하였다. 원심분리된 상청액을 단계 7에 기재된 바와 같이 추가로 가공하였다.
단계 7: 50LP 심층 여과:
원심분리된 상청액을 50LP 심층 필터를 통해 통과시켜 거친 물질, 예컨대 세포 파편을 제거하였다. 이 단계는 생성물이 여과액을 통해 통과하게 하고, 단계 8에 기재된 바와 같은 추가 심층 필터와 인-라인(in-line)에 있다.
단계 8: 90LP 심층 여과:
50LP 심층 필터로부터의 여과액을 90LP 심층 필터 (공칭 0.22 μm 등급)를 통해 추가로 통과시켜, 이전 심층 필터에 의해 걸러지지 않았을 수 있는 임의의 불용성 물질을 추가로 제거하였다. 이 단계는, 여과액에서 본질적으로 세포-파편이 제거되고, 0.22 μm 필터를 통해 견고하게 통과할 수 있음을 보장한다. 후속 여과 단계는 단계 9에서 설명된다.
단계 9 및 10: 0.22 μm 여과:
90LP 심층 필터로부터의 여과액을 0.22 μm 필터를 통해 추가로 통과시키고, 여과액을 보유 탱크에 수집하였다.
단계 11 및 12: 100kD 농축 및 투석여과:
이 단계는 배지 성분 및 저분자량 불순물을 제거하기 위해 수행하였다. 또한, 작업 부피를 감소시키기 위해 농축을 수행하였다. Hib 폴리사카라이드 (PRP)의 분자량이 ≥ 500 kD이기 때문에, 100 kD 분자량 컷오프를 선택하였다. 브로스를 대략 10배로 농축하고, 후속적으로 0.01 M PBS 완충제 (pH 7.2)를 사용하여 NLT 5 부피에 대해 투석여과하였다. 보유액 내의 생성된 생성물은 "조질의 PRP"라고 하고, 단계 13에 기재된 바와 같이 추가로 가공하였다. 농축된 브로스를 0.22 μm 필터를 통해 트랜스퍼 포트를 통해 DSP 구역으로 옮겨서, 박테리아가 DSP 구역으로 전달되지 않음을 보장하였다.
단계 13: CTAB 침전:
CTAB (세틸-트리메틸 암모늄 브로마이드)는 폴리사카라이드의 침전에 사용되는 양이온성 세제이다. CTAB는 친수성 영역 뿐만 아니라 소수성 부분으로 이루어지고, 단백질, 핵산 및 폴리사카라이드를 침전시킨다. 단계 12로부터 수득된 조질의 PRP를 1% CTAB 농도로 침전시키고, > 2시간 동안 인큐베이션하였다. CTAB 펠렛 수확은 단계 14에서 설명된다.
단계 14, 15 및 16: CTAB 펠렛 원심분리, 수집 및 저장:
SEZ-3, FF에서, CTAB 펠렛을 15000 rpm에서 연속 원심분리기를 사용하여 원심분리하였다. CTAB 펠렛을 수확하고, 칭량하고, 분취하고, 추가 가공을 위해 ≤ -20℃에서 저장하였다. 이는 제1 인-프로세스 보유 단계이다.
단계 17 및 18: CTAB 페이스트 해동 및 용해:
동결된 CTAB 페이스트를 실온으로 해동시켰다. 해동된 펠렛을 5.85% NaCl 용액에 용해시켰다. 용해를 교반된 탱크에서 수행하고, 폴리사카라이드 생성물을 수성상에 가용화시켰다. 탱크는 침전된 단백질 및 핵산으로부터의 일부 용해되지 않은 물질을 함유한다. 이 현탁액을 단계 19에 기재된 바와 같이 추가로 가공하였다.
단계 19: 원심분리:
단계 18로부터 수득된 물질을 2-8℃에서 5000-6500 rpm에서 20-30분 동안 원심분리하여 용해되지 않은 물질을 제거하였다. 원심분리된 상청액을 수집하고, 단계 20에 기재된 바와 같이 추가로 가공하였다.
단계 20: 72% 에탄올 침전:
72% 에탄올을 사용하여 PRP를 침전시켰다. 96% 에탄올을 사용하여, 단계 19에서 수득된 상청액에 대해 72% 에탄올의 최종 농도를 생성하였다. 이 침전을 2-8℃에서 밤새 수행하였다. 생성된 침전물을 단계 21에 기재된 바와 같이 수확하였다.
단계 21 및 22: 원심분리 및 펠렛 용해:
2-8℃에서 5000-6500 rpm에서 20-30분 동안 원심분리에 의해 72% 에탄올 침전물을 수집하였다. 생성된 펠렛을, 시각적 투명성이 얻어질 때까지 W.F.I.에 용해시켰다. 가용화된 펠렛의 후속 가공은 단계 23에서 설명된다.
단계 23: DOC 및 32% 에탄올 침전:
단계 22로부터 수득된 물질에 6% 아세트산나트륨 및 1% 나트륨 데옥시콜레이트 (DOC)를 첨가하였다. 96% 에탄올을 사용하여 32% 에탄올의 최종 농도를 생성하였다. DOC 및 32% 알콜은 모두 단백질 불순물의 침전을 유도하면서, 폴리사카라이드가 액상 형태로 존재하게 한다. 이 침전을 2-8℃에서 밤새 (NLT 8시간) 수행하였다.
단계 24: 원심분리:
단계 23으로부터 수득된 물질을 2-8℃에서 5000-6500 rpm에서 20-30분 동안 원심분리하여 침전물을 제거하였다. 원심분리된 상청액을 수집하고, 단계 25에 기재된 바와 같이 추가로 가공하였다.
단계 25: 심층 및 탄소 여과:
단계 24에서 수득된 상청액 용액은 가용성 PRP를 함유하며, 심층 여과, 그 다음에 탄소 여과에 적용하여 핵산 및 착색 물질을 제거하였다. 260 nm에서 간헐적으로 흡광도 (A260)를 측정함으로써 핵산 제거를 모니터링하였다. 표적 A260에 도달된 후, 용액을 0.22 μm 필터를 통해 여과하고, 이 여과된 용액을 단계 26에 기재된 바와 같이 추가로 가공하였다.
단계 26: 64% 에탄올 침전:
단계 25에서 수득된 여과된 물질을 64% 에탄올의 최종 농도에서 96% 에탄올로 추가로 침전시켰다. 이 침전을 2-8℃에서 밤새 수행하였다. 생성된 침전물을 원심분리에 의해 수확하고, 단계 27에 기재된 바와 같이 추가로 가공하였다.
단계 27: 펠렛 수집 및 용해:
상청액을 경사분리하고 폐기하여 펠렛을 수집하였다. 펠렛을 실온에서 W.F.I.에 용해시켰다.
단계 28: 300 kD 농축 및 투석여과:
용해된 펠렛 용액을 300 kD NMWCO 막을 사용하여 농축시켰다. 이것을 W.F.I.를 사용하여 (NLT) 8X 이상으로 추가로 투석여과하였다. 생성된 보유액을 단계 29에 기재된 바와 같이 추가로 가공하였다.
단계 29 및 30: 0.22 μm 여과 및 정제된 PRP 저장:
300 kD UF 보유액을 정화 단계로서 0.22 μm 필터를 통해 통과시켜 바이오버든을 최소화하였다. 생성된 정제된 PRP를 분취하고, 단계 31에 기재된 바와 같이 추가로 사용될 때까지 ≤ -20℃에서 저장하였다. 정제된 PRP의 샘플을 Q.C. 분석을 위해 내보냈다.
단계 31: 해동 및 풀링:
접합체 배치 크기에 기초하여, 단계 30으로부터 수득된 적절한 양의 천연 폴리사카라이드를 해동하였다. 풀링된 물질을 PRP 함량에 대해 검정하고, 이는 단계 32에 기재된 바와 같이 추가 가공을 위해 필요하였다.
단계 32: 100 kD 농축:
풀링된 정제된 폴리사카라이드는 추가 가공을 위해 최소 농도 (8-12 mg/mL)가 되도록 요구된다. 풀 폴리사카라이드 농도가 표적 미만인 경우, 풀링된 폴리사카라이드 용액을 100 kD UF NMWCO 막을 사용하여 농축시켰다. 후속 단계 (단계 33)를 위해 최소 농도에 도달된 것을 보장하기 위해 농축 후 샘플을 채취하였다.
단계 33: 알칼리성 해중합:
단계 32로부터 수득된 농축된 폴리사카라이드 (74g/110g과 동등함)를 카르보네이트-바이카르보네이트 완충제를 사용하여 순한 알칼리성 조건 하에서 해중합하였다. 표적 폴리사카라이드 크기에 도달된 후, 해중합된 폴리사카라이드를 단계 34에 기재된 바와 같이 활성화시켰다.
단계 34: 폴리사카라이드 활성화:
단계 33에서 수득된 해중합된 폴리사카라이드를, 시아노겐 브로마이드를 사용하여 활성화시켰다. 이 활성화를 질소 환경 하에서 수행하였다. 시아노겐 브로마이드는 고도로 독성인 화학물질이며, 이러한 화학물질을 취급할 때는 적절히 주의하였다.
단계 35: 링커 부착:
신선하게 제조된 아디프산 디히드라지드 (ADH) 용액을, 6-10분 내에 단계 34로부터 수득된 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응을 NTT 16시간 동안 2-10℃에서 수행하였다. ADH 링커의 역할은 접합 반응에 필요한 폴리사카라이드에 아민기를 제공하는 것이다.
단계 36: 농축 및 투석여과:
단계 35로부터 수득된 반응 혼합물을 농축시키고, 10 kD NMWCO UF 막을 사용하여 포스페이트 완충제 염수 (PBS)로 부피별로 투석여과하여 유리 ADH를 제거하였다. ADH의 제거를 HPLC에서 모니터링하고, 유리 ADH 수준이 5% 미만에 도달할 때까지 투석여과를 계속하였다. 생성된 보유액을 NLT 5X MES-NaCl 완충제로 추가로 투석여과하였다. 이를 추가로 농축시켜, NLT 20 mg/mL의 농도를 달성하였다. 이 농축된 가공된 PRP를 단계 37에 기재된 바와 같이 추가로 사용될 때까지 2 - 8℃에서 유지하였다.
단계 37 및 38: 0.22 μm 여과 및 가공된 PRP 저장:
단계 36으로부터의 보유액을 0.22 μm 필터를 통해 통과시키고, 이는 정화 단계로서 작용한다. 이는 또한 등급 C 구역에서 수행되는 공정 동안 바이오버든 수준이 제어됨을 보장한다. 여과된 활성화된 폴리사카라이드를 수집하고, 샘플링하고, 분취하고, 추가 가공시까지 2-8℃에서 저장하였다. PRP 분자 크기 (kD), PRP 함량, 및 PRP 활성화 정도를 포함하는 분석을 위해 가공된 폴리사카라이드 풀로부터 샘플을 채취하였다. 가공된 PRP의 추가 가공은 단계 40에서 설명된다.
단계 39: TT 10 kD 농축 및 투석여과:
접합 반응은 2개의 성분, 즉 가공된 폴리사카라이드 및 운반 단백질 (TT)을 필요로 한다. 운반 단백질을 농축시키고, 10 kD UF NMWCO 막을 사용하여 MES-NaCl 완충제로 투석여과하였다. 그 후, 이 투석여과된 운반 단백질을 동일한 막을 사용하여 NLT 20 mg/mL로 추가로 농축시켰다.
단계 40: 접합:
접합 반응은 2개의 성분, 즉 가공된 폴리사카라이드 및 운반 단백질 (TT)을 필요로 한다. 활성화된 폴리사카라이드 성분을 단계 38로부터 수득하였다. 운반 단백질을 단계 39로부터 수득하였다. 2개의 성분을 교반 하에 EDC의 존재하에 PRP:TT = 1:1 (w/w)의 비율의 적절한 양으로 혼합하였다. 접합 반응을 HPLC에서 모니터링하고, 단백질의 ≥ 85% 전환 (접합체로의 유리 단백질 전환에 기초하여)에 도달될 때까지 계속하였다.
단계 41: 켄칭:
접합 반응을 전환에 대한 그의 허용 기준까지 진행한 후 (단계 40), 반응을 켄칭에 의해 종결시켰다. 포스페이트 EDTA 완충제를 사용하여 접합 반응을 켄칭하였다. 이 접합 반응물을 단계 42에 기재된 바와 같이 후속적으로 가공하였다.
단계 42: 30 SP 및 0.22 μm 여과:
단계 41로부터 수득된 접합체를 30 SP 필터를 통해 여과한 후, 0.22 μm 여과를 수행하였다. 이는 임의의 큰 응집물의 제거를 보장한다. 여과된 접합체를 단계 43에 기재된 바와 같이 가공하였다.
단계 43: 300 kD 한외여과 및 투석여과:
단계 42로부터 수득된 접합 반응 혼합물을, 300 kD UF NMWCO 막을 사용하여 0.05% 염수로 투석여과하였다. 투석여과를 수행하여 접합 시약 및 미반응 TT를 제거하였다. 생성된 보유액을 단계 44에 기재된 바와 같이 추가로 가공하였다.
단계 44 및 45: 0.22 μm 여과 및 조질의 접합체 저장:
단계 43으로부터의 보유액을 0.22 μm 필터를 통해 통과시키고, 이는 정화 단계로서 작용한다. 이는 또한 등급 C 구역에서 수행되는 공정 동안 바이오버든 수준이 제어됨을 보장한다. 여과된 조질의 접합체를 수집하고, 샘플링하고, 추가 가공시까지 2-8℃에서 저장하였다. 조질의 접합체의 추가 가공은 단계 46에서 설명된다.
단계 46: 조질의 접합체 희석:
단계 45로부터의 조질의 접합체를 필요한 경우 W.F.I.로 4±1 mg/mL의 표적 농도로 희석하고, 단계 47에 기재된 침전 단계에 의해 추가로 가공하였다.
단계 47: 황산암모늄 침전:
희석된 접합체 반응 혼합물을 황산암모늄 (50% w/v 스톡 용액)을 사용하여 추가로 가공하여 유리 PRP를 제거하였다. 침전 단계를 교반 하에 15℃ 미만의 온도에서 수행하였다. 침전 단계는 침전물에 접합체를 밀어 넣고 상청액에 유리 PRP를 남긴다. 황산암모늄의 첨가 후, 생성된 현탁액을 NLT 12시간 동안 교반하지 않으면서 15℃ 미만에서 저장하였다.
단계 48: 펠렛 수집 및 용해:
단계 47로부터 수득된 현탁액을 약 7000 g에서 2-8℃에서 40±10분 동안 원심분리하였다. 상청액을 경사분리에 의해 폐기하고, 수득된 펠렛을 트리스-염수에 용해시켰다.
단계 49: 300 kD 투석여과:
단계 48로부터의 생성된 용액을 30 SP 심층 필터를 통해 여과하고, 300 kD NMWCO 막을 사용하여 20 mM 트리스-염수로 투석여과하였다.
단계 50: GPC 크로마토그래피 정제:
단계 49로부터의 생성된 용액을, 크기 배제 크로마토그래피를 위한 토요펄(Toyopearl) HW-65F 히드록실화된 메타크릴산 중합체 비드 겔을 함유하는 대략 70 L GPC 컬럼 위에 로딩하였다. 가공된 접합체 (황산암모늄 이후)에 대해 GPC 크로마토그래피를 사용하여, 생성된 물질에서의 유리 PRP 수준을 감소시켰다. 컬럼을 20 mM 트리스 0.9% NaCl로 용출하고, 분획을 A280을 기반으로 수집하였다. 유리 PRP, 비율 및 분자 크기에 대한 허용 기준에 기초하여 적절한 분획을 풀링하고, 상기 풀을 단계 51에 기재된 바와 같이 추가로 가공하였다.
단계 51: 300 kD 투석여과:
단계 50으로부터의 생성된 풀링된 접합체 용출액을 300 kD UF NMWCO 막을 사용하여 20 mM 트리스로 투석여과하였다. 보유액 내 PRP 함량이 대략 1 mg/mL가 되도록, 이 보유액 부피를 표적화하였다.
단계 52 및 53: 0.22 μm 여과:
단계 51로부터 수득된 벌크 접합체를 등급 A 환경 하에 0.22 μm 필터를 통해 여과하여 멸균성을 보장하였다. 0.22 μm 필터를 무결성 시험하였다. 여과된 벌크 접합체로부터의 샘플을 완전한 분석을 위해 Q.C.로 내보냈다. 여과된 접합체를 "멸균 Hib 벌크 접합체"로서 표지하고, 2-8℃에서 저장하였다. 벌크 접합체는 최대 3개월까지 2-8℃에서 저장하고, 그 후 사용되지 않는 경우, 최대 1년까지의 총 지속기간 동안 -70℃에서 저장할 수 있다.
수득된 Hib PRP-TT 접합체 항원의 품질 특징은 하기와 같았다:
PRP 함량 (μg/0.5ml): 8.1
비율 (PRP:TT): 0.5
유리 PRP (%): 4.8%
PMW (kD): 983
평균 MW (kD): 752
실시예 3: 불활성화된 wP 항원의 제조 방법
전세포 퍼투시스 (wP) 항원의 불활성화 방법:
포름알데히드의 존재하에 56℃에서 10분 동안, 포름알데히드의 존재하에 56℃에서 15분 동안, 히민(hymine)의 존재하에 56℃에서 10분 동안, 히민의 존재하에 56℃에서 15분 동안의 불활성화 및 56℃에서 30분 동안의 유일한 가열을 포함하는 다양한 실험을 수행한 후 불활성화 방법 최적화를 수행하였다. 이들 방법에서 효력에 대한 어떠한 유의한 차이도 관찰되지 않았다. 이들 방법 중에서, 포름알데히드의 존재하에 56℃에서 10분 동안이 선택되었는데, 이는 이 방법을 사용하여 생산된 퍼투시스 세포 덩어리가 상기 언급된 다른 방법과 비교하여 더 균질하기 때문이다.
불활성화된 wP 항원의 제조 방법은 하기 단계를 포함한다:
a) 보르데텔라 퍼투시스 균주 134를 포름알데히드의 존재하에 56℃에서 10 - 15분 동안 불활성화시키는 단계
b). 보르데텔라 퍼투시스 균주 509를 포름알데히드의 존재하에 56℃에서 10 - 15분 동안 불활성화시키는 단계
c). 보르데텔라 퍼투시스 균주 25525 및 6229를 포름알데히드의 존재하에 56℃에서 10 - 15분 동안 불활성화시키는 단계
c). 보르데텔라 퍼투시스 균주 6229를 포름알데히드의 존재하에 56℃에서 10 - 15분 동안 불활성화시키는 단계
d). 후속적으로 불활성화된 보르데텔라 퍼투시스 균주 134, 509, 25525 및 6229를 1:1:0.25:0.25의 비율로 혼합하는 단계
e). 임의로 알루미늄 기반 보조제에 흡착시키는 단계.
방법은 티오메르살이 없고, 불활성화 전세포 퍼투시스 항원은 뭉치지 않고 균질하게 남아서 이에 의해 감소된 반응원성을 유도하고 더 긴 지속기간 동안 우수한 효력을 제공한다.
실시예 4: 불활성화 폴리오 바이러스 (IPV)의 제조 방법
1. 폴리오 바이러스를 하기 방법에 의해 성장시킬 수 있다:
a) CCL81-VERO (원숭이 신장) 세포주를 폴리오 바이러스, 즉 사빈 및 소크 균주의 성장을 위한 숙주 세포로서 사용하였다.
b) 숙주 세포를 폴리오 바이러스의 원하는 균주로 감염시키고 72시간 동안 인큐베이션한 후, 바이러스 및 세포 파편을 함유하는 배지를 풀링하고 단일 컨테이너에 수집하였다.
c) 여과액을 100KDa 카세트를 사용하여 접선 유동 여과에 적용시키고; 포스페이트 완충제를 사용하여 투석여과하고 음이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다.
d) 환자에게 투여하기 전에, 적절한 불활성화 방법을 사용하여 바이러스를 불활성화시켜야 한다.
2. 하기 단계를 포함하는 포르말린 불활성화:
a) 정제된 바이러스 풀을 pH 7 내지 7.5를 갖는 (30 내지 50 mM) 범위의 포스페이트 완충제에서 트리스 완충제로의 완충제 교환에 적용하였다.
b) 상기 혼합물에 글리신 (5gm/l)을 함유하는 M-199 배지를 첨가하였다.
c) 0.025% 포름알데히드를 첨가하고 후속적으로 혼합하였다.
d) 혼합물을 후속적으로 자석 교반기에서 바이러스 벌크를 연속적으로 교반하면서 37℃에서 5 내지 13일 동안 인큐베이션하였다.
e) 인큐베이션 후 혼합물을 7일차에 중간 TFF 시스템 (100 KDa, 0.1 ㎡)에 적용하고, 불활성화 후 최종 여과하였다.
f) 후속적으로 여과된 벌크를 2-8℃에서 저장하였다.
g) D-Ag 단위 결정을 위해 D-Ag ELISA를 수행하였다.
h) IPV 유형 1, 유형 2 및 유형 3의 1가 풀 벌크를 후속적으로 혼합하여, 3가 또는 2가 IPV (소크 또는 사빈 혈청형)를 형성하였다.
i) 최종 제형 pH를 조정하고, pH 6 내지 6.8을 갖는 최종 제형을 수득하였다.
j) IPV 항원 (사빈 또는 소크 균주)을 조합 백신에 존재하는 보조제 (포스페이트의 알루미늄 염)에 흡착된 최종 조합 백신 조성물에 후속적으로 첨가하였으며, 여기서 IPV 유형 1에 대한 IPV 항원의 흡착률은 10 - 30% 범위이고, IPV 유형 2는 60 - 100% 범위이고, IPV 유형 3은 0 - 25% 범위임이 밝혀졌다.
3. 알루미늄 염에 개별적으로 흡착되는 경우 IPV (사빈 & 소크 균주)의 제형화 절차:
a) 원하는 부피의 오토클레이브된 AlPO4를 취하여 50 ml 컨테이너에 0.1 내지 0.8 mg/용량의 최종 명반 (Al3+) 농도를 얻음,
b) 조정된 D-Ag 단위로 IPV 벌크를 첨가하고 희석제 (10x M-199+ 0.5% 글리신)로 부피를 채움,
c) 최종 제형 pH를 조정하고, pH 6 내지 6.8의 pH를 갖는 최종 제형을 수득함.
4) 3가 또는 2가 IPV (소크 또는 사빈 혈청형)로 제형화된 명반 흡착된 1가 풀
결과:
인산알루미늄 (AlPO4) 염에 대한 IPV 유형 1, 2 & 3 (사빈 & 소크)의 흡착률은 적어도 90%인 것으로 밝혀졌다.
출원인은 폴리오 바이러스 항원에 대해 2배 용량 감소를 달성할 수 있었다 (반면, 폴리오 바이러스 항원의 표준 용량은 유형 1-40 DU, 유형 2- 8DU, 유형 3- 32DU임).
<표 27>
명반 포스페이트에 대한 사빈 IPV의 흡착 연구
Figure pct00034
실시예 5: 조합 백신의 제조 방법
본 실시예는 D, T, wP, HBsAg, Hib PRP-TT 접합체, IPV 및 보존제를 포함하는 조합 백신 조성물의 제조 방법을 간략하게 제공한다:
성분 I - 명반 흡착된 디프테리아 톡소이드
성분 II - 명반 흡착된 파상풍 톡소이드
성분 III - wP 항원 (실시예 3에 개시된 바와 같음)
성분 IV - 명반 흡착된 B형 간염 표면 항원
성분 V - Hib PRP 접합체 (실시예 2에 개시된 바와 같음)
성분 VI - IPV 항원 (실시예 4에 개시된 바와 같음)
1. 명반 흡착된 디프테리아 톡소이드를 포함하는 성분 I의 제조:
a). 인산알루미늄을 컨테이너 / 용기에 옮김
b). 디프테리아 톡소이드의 첨가
c). 아세트산 / 수산화나트륨을 사용하여 pH를 4.5 내지 5.5로 조정함
d). 안정화를 위해 기다림
e). 수산화나트륨/ 탄산나트륨을 사용하여 pH를 5.5 내지 6.5로 조정함
f). 안정화를 위해 기다림
2. 명반 흡착된 파상풍 톡소이드를 포함하는 성분 II의 제조:
a). 인산알루미늄을 컨테이너 / 용기에 옮김
b). 파상풍 톡소이드의 첨가
c). 아세트산 / 수산화나트륨을 사용하여 pH를 4.5 내지 5.5로 조정함
d). 안정화를 위해 기다림
e). 수산화나트륨 / 탄산나트륨을 사용하여 pH를 5.5 내지 6.5로 조정함
f). 안정화를 위해 기다림
3. 명반 흡착된 B형 간염 표면 항원을 포함하는 성분 IV의 제조:
a). 인산알루미늄을 컨테이너 / 용기에 옮김
b). B형 간염 표면 항원의 첨가
c). 아세트산 / 수산화나트륨을 사용하여 pH를 4.5 내지 5.5로 조정함
d). 안정화를 위해 기다림
e). 수산화나트륨 / 탄산나트륨을 사용하여 pH를 5.5 내지 6.5로 조정함
f). 안정화를 위해 기다림
4. D, T, wP, HBsAg, Hib PRP-TT 접합체, IPV 및 보존제를 포함하는 조합 백신 조성물의 제조 방법
1. 블렌딩 용기 / 컨테이너에 생리식염수의 첨가;
2. 성분 I의 첨가
3. 성분 I에 성분 II를 혼합하고 RT에서 30-45분 동안 진탕함.
4. 상기 혼합물에 성분 III을 첨가한 후, RT에서 30-60분 동안 진탕함.
5. 성분 IV를 단계 4에서 수득된 혼합물에 첨가한 후, RT에서 30-60분 동안 진탕함.
6. 성분 V를 단계 5에서 수득된 혼합물에 첨가한 후, 6 - 16℃에서 30-60분 동안 진탕함.
7. 성분 VI을 단계 6에서 수득된 혼합물에 첨가한 후, 6 - 16℃에서 진탕함.
8. 6 - 16℃에서 단계 7에서 수득된 혼합물에 하기 개시된 보존제 조합 중 하나를 첨가함.
a) 0.5 ml 당 약 1 mg 내지 0.5 ml 당 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 또는
b) 0.5 ml 당 약 1 mg 내지 0.5 ml 당 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올 및 0.5 ml 당 0.1 - 1.5 mg (w/v)의 농도로 사용되는 메틸파라벤; 또는
c) 0.5 ml 당 약 1 mg 내지 0.5 ml 당 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올 및 0.5 ml 당 0.05 - 0.2 mg (w/v)의 농도로 사용되는 프로필파라벤; 또는
d) 0.5 ml 당 약 1 mg 내지 0.5 ml 당 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올, 0.5 ml 당 0.1 - 1.5 mg (w/v)의 농도로 사용되는 메틸파라벤 및 0.5 ml 당 0.05 - 0.2 mg (w/v)의 농도로 사용되는 프로필파라벤.
9. pH를 확인하고, 필요한 경우 수산화나트륨 / 탄산나트륨을 사용하여 pH 6.0 내지 7.5로 조정함
10. 단계 9에서 수득된 염수 (0.9%)로 부피를 채우고, 3시간 동안 진탕함.
실시예 6: 항원의 흡착, 효력 및 안정성 프로파일
<표 28>
이 표는 12개월의 기간에 걸쳐 2-8℃에서 SIIPL 조합 백신에서 개별 항원의 흡착률, 개별 항원의 효력 및 안정성 프로파일에 대한 개요를 제공한다.
Figure pct00035
Figure pct00036
NA - 이용가능하지 않음
<표 29>
12개월의 기간에 걸쳐 25±2℃에서 조합 백신에서 개별 항원의 흡착률, 개별 항원의 효력 및 안정성 프로파일에 대한 개요
Figure pct00037
Figure pct00038
NA - 이용가능하지 않음
<표 30>
감소된 & 표준 용량 IPV를 갖는 조합 백신의 생체내 효능
Figure pct00039
관찰:
· IPV의 절반 용량 농도로 제조된 6가 백신 배치는 유망한 시험 결과를 보여주었다.
· IPV의 절반 농도로 제조된 6가 백신의 IPV 생체내 효능은 전체 용량 IPV를 갖는 현재 이용가능한 백신 (SIIPL에 의해 제조된 시판중인 폴리오백)과 유사한 것으로 밝혀졌다.
실시예 7: 항미생물 능력 시험
본 발명자들은, D, T, wP, Hib, HBsAg 및 IPV 백신을 함유하는 다중-용량 조합 백신을 개발하면서, 관련 기술분야에서 보존제로서 통상적으로 사용되는 2-페녹시에탄올 (2-PE)을 2.5 mg/0.5 ml 용량의 농도로 먼저 첨가함으로써 항미생물 능력에 대한 시험을 수행하였다. 그러나, 2-PE는 DPT 기반 조합 백신에서 효모 및 진균에 대해 티오메르살보다 더 약한 항미생물 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
필요한 기준을 충족하기 위해 2-PE (보존제)의 양의 증가는 백신을 받는 대상체인 어린 소아에서 안전성 문제를 발생시킬 수 있으며, 최종 제품의 안정성에도 영향을 미칠 수 있다. 또한, 백신에 함유될 보존제(들)의 양은 백신의 안전성과 관련하여 미국 약전, 유럽 약전, WHO 약전 또는 이들의 조합에 정의된 요구사항을 충족해야 한다.
이와 관련하여, 본 발명자들은 안전성 및 항미생물 능력 모두의 기준을 충족하는 다중-용량 조합 백신에서 파라벤과 같은 다른 보존제와 2-PE를 조합함으로써 항미생물 능력에 대한 요구사항을 만족시킬 수 있는 신규 조성물을 개발하기 위한 노력으로 실험을 수행하였다. 본 개시내용에서, 백신 제품에 대해 WHO가 요청한 유럽 약전 카테고리 B (EP-B) 기준에 따라 항미생물 능력 시험을 수행하였다.
<표 31>
조합 백신으로 시험된 보존제의 상이한 조합 및 농도의 세부사항
Figure pct00040
항미생물 능력의 스크리닝:
실시예 1에 개시된 바와 같은 6가 조합 백신 제제에, 4종의 상이한 종류의 박테리아 - 스타필로코쿠스 아우레우스 (ATCC NO.- 6538), 슈도모나스 아에루기노사 (ATCC NO.- 9027), 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) (ATCC NO.- 8739) 및 스타필로코쿠스 아르레타에(Staphylococcus arlettae) (환경 분리주 EMI); 1종의 효모 -칸디다 알비칸스(Candida albicans) (ATCC NO.- 10231), 및 1종의 진균 - 아스페르길루스 브라실리엔시스(Aspergillus brasiliensis) (ATCC NO.- 16404)를 포함하는 총 6종의 미생물을 각각 0시에 백신 제제에 105 내지 106 CFU/mL의 양으로 접종하였다. 그 후, 박테리아 진균, 효모 샘플을 0시, 24시, 7일차, 14일차 및 28일차에 수집하고, 고체 배지에서 배양하고, 3일차와 5일차 사이에 콜로니의 수를 계수하고, 콜로니의 log 감소를 계산하였다. 결과는 하기 표 38에 나타낸다.
<표 32>
항미생물 능력 시험 결과
Figure pct00041
NA - 이용가능하지 않음; 0.5% 2PE - 2.5 mg/0.5 ml 용량; 0.4% 2PE - 2 mg/0.5 ml 용량; 0.18% MP - 0.9 mg/0.5 ml 용량; 0.02% PP - 0.1 mg/0.5 ml 용량; CFU- 콜로니 형성 단위
관찰:
· 상이한 조합으로 제조된 모든 6가 백신은 유럽 약전 카테고리 B에 따른 보존제 효능에 부합하는 것으로 관찰되었다. 그러나, 상이한 조합이 사용되었을 때 유효성이 달라지는 것으로 나타났다.
· 2PE, MP 및 PP를 함유하는 6가 백신의 보존제 효능은 다른 보존제 조합, 즉 2PE 단독, 2PE와 PP, 2PE와 MP 및 PP와 MP와 비교하여 매우 효과적인 것으로 밝혀졌다.
· 또한, PP & MP와 0.5% 2PE를 함유하는 6가 백신의 보존제 효능은 0.4% 2PE를 제외한 동일한 조합과 비교하여 더 효과적인 것으로 밝혀졌다.
실시예 8: SIIPL의 감소된 용량 조합 백신 대 이지 식스(Easy Six) (파나케이아(Panacea))
<표 33>
이 표는 SIIPL의 감소된 용량 조합 백신 및 이지 식스 (파나케이아) 간의 개별 항원의 흡착률, 효력, 유리 PRP 함량의 비교를 제공한다:
Figure pct00042
Figure pct00043

Claims (61)

  1. (i) 디프테리아 톡소이드 (D);
    (ii) 파상풍 톡소이드 (T);
    (iii) 불활성화 전세포 퍼투시스 (wP) 또는 무세포 퍼투시스 (aP);
    (iv) B형 간염 바이러스 표면 항원 (HBsAg);
    (v) 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae) 유형 b 항원 (Hib);
    (vi) 불활성화 폴리오 바이러스 항원 (IPV) (여기서, 0.5 ml 당 1 - 50 DU 양의 IPV 유형 1 및 0.5 ml 당 1 - 50 DU 양의 IPV 유형 3); 및
    (vii) 2-페녹시에탄올 및 적어도 하나의 다른 보존제의 조합
    을 포함하는 완전 액상 다중-용량 면역원성 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 조성물 중 불활성화 전세포 퍼투시스가 1:1:0.25:0.25 비율의 보르데텔라 퍼투시스(Bordetella pertussis) 균주 134, 509, 25525 및 6229인 면역원성 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 무세포 퍼투시스 항원이 변형된 아데닐레이트 시클라제, 백일해 톡소이드 (PT), 필라멘트상 혈구응집소 (FHA), 퍼탁틴 (P69 또는 PRN) 또는 섬모 단백질 (FIM 1, 2 및 3)로부터 선택된 하나 이상의 항원을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  4. 제1항에 있어서, Hib 항원이 시아닐화 접합 화학 또는 환원성 아미노화 접합 화학을 사용하여 운반 단백질에 접합된 Hib 폴리리보실리비톨 포스페이트 (PRP) 폴리사카라이드이고, 여기서 상기 시아닐화 시약이 시아노겐 브로마이드, 1-시아노-4-디메틸아미노피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP), 1-시아노-4-피롤리디노피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CPPT), 1-시아노이미다졸 (즉, 1-CI), 1-시아노벤조트리아졸 (1-CBT) 또는 2-시아노피리다진-3(2H)온 (2-CPO)으로부터 선택되고; 운반 단백질이 파상풍 톡소이드, CRM197, 디프테리아 톡소이드, 네이세리아 메닝기티디스(Neisseria meningitidis) 외막 복합체, 파상풍 톡소이드의 단편 C, 백일해 톡소이드, 에이치. 인플루엔자의 단백질 D, 이. 콜라이(E. coli) LT, 이. 콜라이 ST, 및 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터의 외독소 A, 외막 복합체 c (OMPC), 포린, 트랜스페린 결합 단백질, 뉴몰리신, 폐렴구균 표면 단백질 A (PspA), 폐렴구균 표면 어드헤신 A (PsaA), 폐렴구균 PhtD, 폐렴구균 표면 단백질 BVH-3 및 BVH-11, 바실루스 안트라시스(Bacillus anthracis)의 보호 항원 (PA) 및 바실루스 안트라시스의 해독된 부종 인자 (EF) 및 치사 인자 (LF), 오브알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 인간 혈청 알부민, 소 혈청 알부민 (BSA), 투베르쿨린의 정제된 단백질 유도체 (PPD), 합성 펩티드, 열 충격 단백질, 백일해 단백질, 시토카인, 림포카인, 호르몬, 성장 인자, 다양한 병원체-유래 항원으로부터의 다중 인간 CD4+ T 세포 에피토프를 포함하는 인공 단백질, 예컨대 N 19, 철-흡수 단백질, 씨. 디피실레(C. difficile)로부터의 독소 A 또는 B 및 링커가 있거나 없는 에스. 아갈락티아에(S. agalactiae) 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 면역원성 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 0.5 ml 당 1 - 20 DU 양의 IPV 유형 2를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  6. 제1항 또는 제5항에 있어서, IPV 유형 1이 마호니(Mahoney) 균주 또는 사빈(Sabin) 균주이고/거나; IPV 유형 2가 MEF-1 균주 또는 사빈 균주이고/거나; IPV 유형 3이 소켓(Saukett) 균주 또는 사빈 균주인 면역원성 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 다른 보존제가 염화벤제토늄 (페메롤), 페놀, m-크레졸, 포름알데히드, 염화벤잘코늄, 벤질 알콜, 클로로부탄올, p-클로르-m-크레졸, 벤질 알콜, 및 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤 및 부틸파라벤의 군으로부터 선택된 파라벤 에스테르의 군으로부터 선택된 것인 면역원성 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 0.5 ml 당 1 - 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.5 ml 당 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤 및 0.5 ml 당 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤을 포함하는 면역원성 조성물.
  9. 제1항에 있어서, D, T, wP, HBsAg, Hib 및 IPV가 보조제에 흡착되지 않은 것인 면역원성 조성물.
  10. 제1항에 있어서, D, T 및 HBsAg가 알루미늄 염 (Al3+), 예컨대 수산화알루미늄 (Al(OH)3) 또는 인산알루미늄 (AlPO4), 명반, 인산칼슘, MPLA, 3D-MPL, QS21, CpG-함유 올리고데옥시뉴클레오티드 보조제, 리포솜 또는 수중유 에멀젼의 군으로부터 선택된 보조제에 개별적으로 흡착된 것인 면역원성 조성물.
  11. 제10항에 있어서, D, T, HBsAg가 인산알루미늄 (AlPO4) 보조제에 개별적으로 흡착된 것인 면역원성 조성물.
  12. 제10항에 있어서, D 항원이 적어도 50%의 흡착률로 알루미늄 염에 흡착된 것인 면역원성 조성물.
  13. 제10항에 있어서, T 항원이 적어도 40%의 흡착률로 알루미늄 염에 흡착된 것인 면역원성 조성물.
  14. 제10항에 있어서, HBsAg 항원이 적어도 50%의 흡착률로 알루미늄 염에 흡착된 것인 면역원성 조성물.
  15. 제1항, 제5항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, IPV 항원이 IPV 유형 1은 10 - 100% 범위, IPV 유형 2는 60 - 100% 범위 및 IPV 유형 3은 10 - 100% 범위의 의 흡착률로 히드록시드 (Al(OH)3) 또는 포스페이트 (AlPO4)의 알루미늄 염에 흡착된 것인 면역원성 조성물.
  16. 제1항에 있어서, 임의의 보조제에 대한 Hib 항원의 흡착률이 20% 미만인 면역원성 조성물.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 중 총 알루미늄 함량 (Al3+)이 0.5 ml 당 0.1 내지 0.6 mg의 양인 면역원성 조성물.
  18. 제1항에 있어서, 염화나트륨 또는 포스페이트 완충제 염수로부터 선택된 완충제를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 완충제로서 0.5% 내지 1.5%의 농도로 염화나트륨을 포함하는 면역원성 조성물.
  20. 제1항에 있어서, 제약상 허용되는 수송체, 부형제, 결합제, 담체, 등장화제, 유화제 또는 보습제를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  21. 제20항에 있어서, 당, 폴리올, 계면활성제, 중합체, 염, 아미노산 또는 pH 개질제의 군으로부터 선택된 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 면역원성 조성물.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 용량 면역원성 조성물에 보존제가 없는 것인 면역원성 조성물.
  23. 제1항에 있어서, 헤모필루스 인플루엔자 (a, c, d, e, f 혈청형 및 비-캡슐화 균주), 간염 (A, C, D, E, F 및 G 균주), 로타바이러스, 네이세리아 메닝기티디스 A 항원(들), 네이세리아 메닝기티디스 C 항원(들), 네이세리아 메닝기티디스 W-135 항원(들), 네이세리아 메닝기티디스 Y 항원(들), 네이세리아 메닝기티디스 X 항원(들), 스트렙토코쿠스 뉴모니아에(Streptococcus Pneumoniae) 항원(들), 네이세리아 메닝기티디스 B 항원(들), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 항원(들), 탄저병, BCG, 인간 유두종 바이러스, 살모넬라 티피(Salmonella typhi) 항원(들), 비-장티푸스성 살모넬라 항원, 변형된 아데닐레이트 시클라제, 말라리아 항원 (RTS,S), 홍역, 볼거리, 풍진, 플라비바이러스 항원, 뎅기열, 지카, 에볼라, 치쿤구니야, 일본 뇌염 및 설사 항원의 군으로부터 선택된 하나 이상의 항원을 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 내지 10 Lf 양의 T 항원; 약 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 50 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 50 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  25. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 50 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1 - 20 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 50 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 약 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  26. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 50 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 50 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  27. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 50 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1 - 20 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 50 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  28. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 50 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 50 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  29. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 50 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1 - 20 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 50 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  30. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 내지 10 Lf 양의 T 항원; 약 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 25 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 20 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  31. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 25 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1 - 10 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 20 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 약 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  32. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 25 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 20 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  33. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 25 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1 - 10 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 20 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  34. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 25 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 20 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  35. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 25 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1 - 10 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 20 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 8 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 8 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 8 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤;
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 8 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 8 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 8 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 8 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 8 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 8 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 4 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 4 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 4 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤;
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 4 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 4 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 4 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 4 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 4 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 20 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 4 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 16 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1.5 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1.5 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1.5 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤.
  50. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤;
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1.5 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1.5 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 40 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 8 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 32 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5 ml의 조성물이 하기 중 하나를 포함하는 것인 면역원성 조성물:
    10 Lf 양의 D 항원; 2 Lf 양의 T 항원; 12 IOU 양의 wP 항원; 8 μg 양의 HBsAg; 8 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1.5 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    20 Lf 양의 D 항원; 4 Lf 양의 T 항원; 14 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 10 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1.5 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    25 Lf 양의 D 항원; 10 Lf 양의 T 항원; 16 IOU 양의 wP 항원; 15 μg 양의 HBsAg; 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 7.5 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1.5 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 6 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.55 mg 이하의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 2.5 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올; 0.9 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 0.1 mg (w/v) 양의 프로필파라벤.
  54. a). 블렌딩 용기 / 컨테이너에 생리식염수를 첨가하는 단계;
    b). 디프테리아 톡소이드를 포함하는 성분 - I을 첨가하는 단계;
    c). 파상풍 톡소이드를 포함하는 성분 - II를 첨가하는 단계;
    d). 불활성화 전세포 퍼투시스 항원 또는 무세포 퍼투시스 (aP)를 포함하는 성분 - III을 첨가하는 단계;
    e). B형 간염 표면 항원을 포함하는 성분 - IV를 첨가하는 단계;
    f). Hib 항원을 포함하는 성분 - V를 첨가하는 단계;
    g). IPV 항원 (여기서, 0.5 ml 당 1 - 50 DU 양의 IPV 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주); 및 0.5 ml 당 1 - 50 DU 양의 IPV 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주))을 포함하는 성분 - VI를 첨가하는 단계;
    h). 하기로부터 선택된 보존제 조합을 첨가하는 단계:
    0.5 ml 당 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올 및 0.5 ml 당 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤; 또는
    0.5 ml 당 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올 및 0.5 ml 당 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤; 또는
    0.5 ml 당 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올, 0.5 ml 당 0.1 - 1.5 mg (w/v) 양의 메틸파라벤 및 0.5 ml 당 0.05 - 0.2 mg (w/v) 양의 프로필파라벤;
    i). 수산화나트륨 / 탄산나트륨을 사용하여 pH를 6.0 내지 7.0으로 조정하는 단계; 및
    j). 부피를 채우기 위해 생리식염수를 첨가하는 단계를 포함하는,
    (i) 디프테리아 톡소이드 (D);
    (ii) 파상풍 톡소이드 (T);
    (iii) 불활성화 전세포 퍼투시스 (wP) 또는 무세포 퍼투시스 (aP);
    (iv) B형 간염 바이러스 표면 항원 (HBsAg);
    (v) 헤모필루스 인플루엔자 유형 b 항원 (Hib);
    (vi) 불활성화 폴리오 바이러스 항원 (IPV) 및
    (vii) 2-페녹시에탄올 및 적어도 하나의 파라벤 에스테르의 조합
    을 포함하는 완전 액상 다중-용량 면역원성 조성물의 제조 방법.
  55. 제54항에 있어서, 성분 - VI이 0.5 ml 당 1 - 20 DU 양의 IPV 항원 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주)를 추가로 포함하는 것인 방법.
  56. 제54항에 있어서, 성분 I의 제조가 하기 단계를 포함하는 것인 방법:
    a). 인산알루미늄을 컨테이너 / 용기에 옮기는 단계;
    b). 디프테리아 톡소이드를 첨가하는 단계;
    c). 아세트산 / 수산화나트륨을 사용하여 pH를 4.5 내지 5.5로 조정하는 단계;
    d). 안정화시키는 단계;
    e). 수산화나트륨 / 탄산나트륨을 사용하여 pH를 5.5 내지 6.5로 조정하는 단계; 및
    f). 히스티딘 완충제로 안정화시키는 단계.
  57. 제54항에 있어서, 성분 II의 제조가 하기 단계를 포함하는 것인 방법:
    a). 인산알루미늄을 컨테이너 / 용기에 옮기는 단계;
    b). 파상풍 톡소이드를 첨가하는 단계;
    c). 아세트산 / 수산화나트륨을 사용하여 pH를 4.5 내지 5.5로 조정하는 단계;
    d). 안정화시키는 단계;
    e). 수산화나트륨 / 탄산나트륨을 사용하여 pH를 5.5 내지 6.5로 조정하는 단계; 및
    f). 히스티딘 완충제로 안정화시키는 단계.
  58. 제54항에 있어서, 성분 III의 제조가 하기 단계를 포함하며:
    a) 보르데텔라 퍼투시스 균주 134를 포름알데히드의 존재하에 56℃에서 10 - 15분 동안 불활성화시키는 단계;
    b). 보르데텔라 퍼투시스 균주 509를 포름알데히드의 존재하에 56℃에서 10 - 15분 동안 불활성화시키는 단계;
    c). 보르데텔라 퍼투시스 균주 25525 및 6229를 포름알데히드의 존재하에 56℃에서 10 - 15분 동안 불활성화시키는 단계;
    c). 보르데텔라 퍼투시스 균주 6229를 포름알데히드의 존재하에 56℃에서 10 - 15분 동안 불활성화시키는 단계;
    d). 후속적으로 불활성화된 보르데텔라 퍼투시스 균주 134, 509, 25525 및 6229를 1:1:0.25:0.25의 비율로 혼합하는 단계; 및
    e). 임의로 알루미늄 기반 보조제에 흡착시키는 단계;
    여기서 방법은 티오메르살이 없고, 불활성화 전세포 퍼투시스 항원은 뭉치지 않고 균질하게 남아서 이에 의해 감소된 반응원성을 유도하고 더 긴 지속기간 동안 우수한 효력을 제공하는 것인 방법.
  59. 제54항에 있어서, 성분 IV의 제조가 하기 단계를 포함하는 것인 방법:
    a). 인산알루미늄을 컨테이너 / 용기에 옮기는 단계;
    b). B형 간염 표면 항원을 첨가하는 단계;
    c). 아세트산 / 수산화나트륨을 사용하여 pH를 4.5 내지 5.5로 조정하는 단계;
    d). 안정화시키는 단계;
    e). 수산화나트륨 / 탄산나트륨을 사용하여 pH를 5.8 내지 6.8로 조정하는 단계; 및
    f). 안정화시키는 단계.
  60. 제54항에 있어서, 성분 - V의 제조가 하기 단계를 포함하며:
    a). 헤모필루스 인플루엔자 유형 b를 발효시키는 단계;
    b). 0.1% 포름알데히드의 존재하에 37℃에서 2시간 동안 불활성화시키는 단계;
    c). Hib 폴리리보실리비톨 포스페이트 (PRP) 폴리사카라이드를 정제하는 단계;
    d). 아디프산 디히드라지드 (ADH) 링커의 존재하에 시아노겐 브로마이드 시아닐화 접합 화학을 사용하여 단계 c의 정제된 생성물을 파상풍 톡소이드 (TT)에 접합시키는 단계;
    e). 단계 d의 접합체를 정제하는 단계; 및
    f). 정제된 접합체를 바람직하게는 0.22 μm 필터를 통해 여과하는 단계;
    여기서 유리 PRP 백분율은 총 정제된 Hib 벌크 접합체의 5% 이하인 방법.
  61. 완전 액상 다중-용량 면역원성 조성물이며, 여기서 0.5 ml의 조성물은 10 내지 25 Lf 양의 D 항원; 2 내지 10 Lf 양의 T 항원; 12 내지 16 IOU 양의 wP 항원; 7 내지 15 μg 양의 HBsAg; 7 내지 13 μg 양의 Hib 항원; IPV 항원, 각각 1 - 25 DU 양의 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1 - 10 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 20 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주); 0.1 내지 0.6 mg 양의 총 알루미늄 함량 (Al3+); 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올을 포함하고;
    여기서 조성물은 하기 방법에 의해 제조되는 것인, 완전 액상 다중-용량 면역원성 조성물:
    a). 블렌딩 용기 / 컨테이너에 생리식염수를 첨가하는 단계;
    b). 디프테리아 톡소이드를 포함하는 성분 - I을 첨가하는 단계;
    c). 파상풍 톡소이드를 포함하는 성분 - II를 첨가하는 단계;
    d). 불활성화 전세포 퍼투시스 항원 또는 무세포 퍼투시스 (aP)를 포함하는 성분 - III을 첨가하는 단계;
    e). B형 간염 표면 항원을 포함하는 성분 - IV를 첨가하는 단계;
    f). Hib 항원을 포함하는 성분 - V를 첨가하는 단계;
    g). IPV 항원 (여기서, 1 - 25 DU 양의 IPV 유형 1 (마호니 균주 또는 사빈 균주), 1 - 10 DU 양의 유형 2 (MEF-1 균주 또는 사빈 균주) 및 1 - 20 DU 양의 유형 3 (소켓 균주 또는 사빈 균주))을 포함하는 성분 - VI를 첨가하는 단계;
    h). 0.5 ml 당 1 내지 6 mg (v/v) 양의 2-페녹시에탄올을 첨가하는 단계;
    i). 수산화나트륨 / 탄산나트륨을 사용하여 pH를 6.0 내지 7.0으로 조정하는 단계; 및
    j). 부피를 채우기 위해 생리식염수를 첨가하는 단계.
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