RU2087156C1

RU2087156C1 - Вакцина против пневмококковой инфекции

Info

Publication number: RU2087156C1
Application number: RU95110526A
Authority: RU
Inventors: Леонид Николаевич Падюков
Original assignee: Леонид Николаевич Падюков
Priority date: 1995-06-22
Filing date: 1995-06-22
Publication date: 1997-08-20

Abstract

Использование: биотехнология, вакцина против пневмококковой инфекции, профилактика пневмококковой инфекции. Сущность изобретения: вакцина против пневмококковой инфекции содержит протективные антигены пневмококка и консервант. Причем в качестве протективных антигенов использованы белковые компоненты пневмококка с молекулярной массой 50, 60, 74, 80 и 94 кДа. Вакцина обладает выраженным протективным действием, основанным на использовании Т-зависимых белковых антигенов, более эффективных в сравнении с полисахаридными антигенами, и позволяет добиться длительного защитного действия против любого из известных серотипов пневмококка.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к вакцинным препаратам, вводимым людям и животным, используемым для профилактики пневмококковой инфекции.

Известна вакцина против пневмококковой инфекции, состоящая из капсульных полисахаридов различных серотипов пневмококка, наиболее часто встречающихся в патологии. В состав 14-валентной вакцины Pneumovax входят препараты капсульных полисахаридов следующих серотипов: 1, 2, 3, 4, 6A, 7F, 8, 9N, 12F, 14, 18C, 19F, 23F, 25. Вакцина представляет собой раствор, содержащий по 50 мкг каждого из полисахаридов в физиологическом растворе с 0,5% фенола в качестве консерванта (Pneumococcal pneumonia and polysaccharide vaccines Publ. by Merck Sharp Dohme Inc. 1978).

Однако вакцина Pneumovax создает иммунитет только приблизительно к 78% циркулирующих патогенных штаммов пневмококка.

Наиболее близкой по своим свойствам является вакцина Pneumovax 23, которая содержит капсульные полисахариды 23 серотипов пневмококка и охватывает до 90% циркулирующих патогенных штаммов пневмококка. Готовая форма вакцины представляет собой 0,5 мл физиологического раствора, содержащего по 25 мкг каждого из следующих полисахаридов: 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F, 33F. В вакцине также содержится консервант фенол [1]
Но указанная выше вакцина основана на классических полисахаридных антигенах, характеризующихся слабой иммуногенностью, отсутствием эффекта у детей в возрасте до двух лет, а также по своему составу не типична для некоторых географических зон. В частности, для азиатских регионов характерна иная структура серотипового состава пневмококков, из-за чего в этих регионах Pneumovax 23 охватывает только 90% патогенных штаммов.

Кроме того, процесс приготовления и контроля указанной вакцины чрезвычайно сложен и длителен, так как требует выделения каждого из 23 капсульных полисахаридов в чистом виде и дальнейшего их смешивания в готовую форму.

В основу изобретения положена задача создания такой вакцины, которая позволяет охватить все известные (а также и неизвестные на сегодняшний день) серотипы пневмококка, использовать значительно меньшее число антигенов пневмококка, что значительно упрощают процедуру приготовления вакцины.

Сущность изобретения заключается в том, что вакцина против пневмококковой инфекции содержит протективные антигены пневмококка и консервант, причем в качестве протективных антигенов использованы белковые компоненты пневмококка с молекулярной массой 50, 66, 74, 80 и 94 кДа.

Пример 1. Для получения 500 мг вакцинного препарата берут бактериальную массу пневмококка (Streptococcus pneumoniae, штамм 11/57) в количестве 30 г (сырой вес), выращенную на полусинтетической питательной среде до конца экспоненциальной фазы. Бактериальные клетки осаждают центрифугирированием при 8000 g в течение 20 мин на холоду. Бактериальные клетки ресуспендируют в растворе детергента, солюбизирующего белковые структуры клеток. Экстракцию белков проводят на магнитной мешалке при температуре 5 10^oC в течение 10 ч. Затем нерастворимую фракцию бактериальных клеток удаляют центрифугированием, а надосадок диализуют против проточной водопроводной, а затем дистиллированной воды. Полученный раствор подвергают гельфильтрации на носителе типа Сефароза 6В, дробными фракциями, оценивая оптическую плотность на выходе из колонки. Фракции, соответствующие продуктами с м. м. от 100 до 30 кДа объединяют, вновь диализуют, а затем подвергают лиофильной сушке. Полученный препарат контролируют на присутствие компонентов с м. м. 50, 66, 74, 80 и 94 кДа с помощью SDS-электрофреза в полиакриламидном геле в редуцирующих условиях.

Пример 2. Для оценки иммуногенности приготовленной вакцины против пневмококковой инфекции используют лабораторных мышей линии СВА весом 10 12 г. Вакцину вводят подкожно в количестве 5 мкг/мышь в стерильном физрастворе. Для заражения животных готовят культуру вирулентных штаммов пневмококка различных серотипов. Объем инокулята определяют исходя из LD50 вводимого штамма (10 LD50). Культуру вводят внутрибрюшинно и наблюдают за животными в течение 14 дней. Предварительное введение вакцины приводит к 100% выживанию животных в сравнении с контролем (100% гибель).

Таким образом, предлагаемая вакцина обладает ярко выраженным протективным действием, основанным на использовании Т-зависимых белковых антигенов, более эффективных в сравнении с полисахаридными Т-независимыми антигенами и позволяющих добиться длительного защитного действия против любого из известных серотипов пневмококка.

Использование меньшего количества антигенных компонентов позволяет существенно упростить и удешевить методику приготовления вакцинного препарата.

Claims

Вакцина против пневмококковой информации, содержащая протективные антигены пневмококка и консервант, отличающаяся тем, что в качестве протективных антигенов содержит белковые компоненты пневмококка с мол.м. 50, 66, 74, 80 и 94 кД.