KR101555639B1 - 알로에레신 ａ를 알로에신으로 변환시키는 방법 - Google Patents

알로에레신 ａ를 알로에신으로 변환시키는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하기 반응에 의해 알로에레신 A를 알로에신으로 가수분해로 변환시키는 방법을 제공한다: 알로에 식물의 수액으로부터 추출에 이용가능한 알로에신의 양이 따라서 증가되며, 알로에신의 추출 및 정제 또한 용이해지고 저렴해진다. 알로에신은 알로에레신보다 상업적으로 더욱 가치가 있기 때문에, 상기 방법은 또한 알로에 식물의 수액 또는 알로에 비터의 상업적 가치를 증가시킨다. 또한, 상기 방법은 선택적으로 p-쿠마르산으로부터 알로에신을 분리하는 단계를 포함한다. 상기 방법에 사용되는 전형적인 가수분해 단계는, 산 가수분해, 염기 가수분해 및 효소에 의한 가수분해이다. 산 가수분해의 경우, 산은 모든 적절한 유기산 또는 무기산, 예컨대 염산, 황산, 질산 또는 인산이다. 효소에 의한 가수분해의 경우, 가수분해 효소는 전형적으로 에스터라제, 리파제 또는 프로테아제이다.

Description

알로에레신 Ａ를 알로에신으로 변환시키는 방법{METHOD FOR CONVERTING ALOERESIN A TO ALOESIN}
본 발명은 알로에레신 A를 알로에신으로 변환시키는 방법에 관한 것이다.
알로에는 다육식물(succulent plant)로서, 300여종 이상이 알려져 있으며, 그 대부분은 아프리카 자생종이다. 알로에 산물은 수세기동안 전통적인 의약제로서 사용되고 있으며, 특히 화상, 통증부 및 그외 상처에 대한 치료를 위한 피부 제품으로 사용되고 있다. 근래 치료학적으로 주목받고 있는 부분은, 항염증 활성, 항종양 활성, 항산 활성, 항당뇨병 활성, 타이로시나제 저해 활성 및 항산화 활성이다. 또한, 알로에 산물은 특히 천연 제품에 대한 유행 증가와 더불어 화장품 및 건강 식품 산업에 광범위하게 사용되고 있다.
약학, 치료, 피부 또는 화장품에 있어 이용되는 주된 아프리카 알로에 종은 알로에 페록스(Aloe ferox)로, 남아프리카에 한정되어 있는 종이다. 그외 알로에 종들도 유사한 목적으로 사용되고 있다. 알로에 베라(Aloe vera)는 피부 케어 제품, 샴푸 및 건강 음료로 미국에서 널리 사용되고 있다. 그러나, 알로에 페록스는 알로에 베라에 비해 여러가지 우수한 특성을 가지고 있는 것으로 밝혀졌다. 예로, 알로에 페록스는 알로에 베라에 비해 칼슘 및 총 아미노산 함유량이 많다. 재배한 알로에 페록스의 자른 잎은 가까이에서 자라는 알로에 베라 식물에 비해 무게 대비 약 20배 정도 쓴 수액을 생산한다. 알로에 페록스의 잎은 더 두껍고 커서, 잎 하나 당 쓴 수액의 총 산출량이 훨씬 많다. 또한, 알로에 페록스로부터 회수되는 겔의 양 또한 알로에 베라로부터 수득되는 것에 비해 항상 부피적으로 크다.
알로에의 특정 성분을 분리하기 위한 수많은 방법들이 있다(예, 미국 특허 4,735,935 및 4,656,029). 가장 일반적인 알로에 제품은 알로에의 잎에서 제조되는 수액으로부터 수득되며, 그것의 쓴 맛으로 인해 알로에 비터라고 일컫는다. 수액은 채집된 후, 당업자들에게 공지된 전통적인 방법에 의해 건조되어, 알로에 비터 또는 카페 알로에로 알려져 있는 진한 갈색의 고형 물질로 제조된다.
상업적인 알로에 비터는 4가지의 주 성분, 즉 알로인 A, 알로인 B, 알로에신 및 알로에레신 A를 포함하고 있다.
알로에 페록스 잎 삼출물의 전체 조성은 특히 형태 다양성 및 상기 종의 광범위한 자연 분포 영역을 고려할때 그 구성이 매우 일정하다. 알로에 페록스에서, 알로에레신 A, 알로에신 및 알로인(둘다 에피머 A 및 B)는 총 건조 중량 70% 내지 97%를 차지하며, 각각의 비율은 약 4:3:2이다.
알로인 A 및 B(또는 바르발로인)은 선택 추출에 의해 정상적으로 알로에 비터로부터 분리되며, 주로 통변제로서 사용된다. 또한, 알로에신은 알로에 비터에서 분리되며, 피부 미백제(skin lightening) 및 선스크린제로서 사용된다(미국 특허 4,656,029). 알로에레신 A는 주로 폐기처분된다. 따라서, 알로에레신 A는 알로에 수액에 가장 다량 존재함에도 불구하고 상업적인 가치는 거의 또는 전혀 없 다. 따라서, 알로에레신 A를 상업적인 가치가 보다 높은 화합물로 변환시키는 것이 유용할 것이다.
하기 명세서에서, 알로에 수액에 대한 모든 사항은 알로에 비터 또는 알로에 비터의 추출물에도 해당되는 것으로 의도된다.
발명의 개요
본 발명의 제1 예는, 알로에레신 A의 적어도 일부분을 알로에신 및 p-쿠마르산(coumaric acid)으로 가수분해하는 단계를 포함하는 알로에레신 A를 알로에신으로 변환시키는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 p-쿠마르산으로부터 알로에신을 분리하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.
알로에레신 A를 알로에신으로 가수분해하는 단계는 산 가수분해를 이용하여 수행할 수 있다.
대안적으로, 알로에레신 A를 알로에신으로 가수분해하는 단계는 가수분해 효소를 이용하여 수행할 수 있다.
산 가수분해의 경우, 산은 유기 또는 무기 산일 수 있다. 특히, 산은 염산, 황산, 질산 및 인산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 산일 수 있다.
효소적 가수분해의 경우, 가수분해 효소는 에스테라제, 리파제 또는 프로테아제일 수 있다.
특히, 가수분해 효소는 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae)의 프로테아제, Diversa사의 ESL 001-02™, Nordisk사의 NOVO 388™ 및 the Altus Chiroscreen Kit™사의 뮤코르 미하이(Mucor miehei)의 리파제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 보다 구체적으로는, 효소는 Amano사의 Protease M™ 또는 Quest International사의 Bioprotease P cone™일 수 있으며, 둘다 아스퍼질러스 오리제 유래 프로테아제이다.
대안적으로, 효소는 전술한 효소들중 임의 하나의 DNA 또는 아미노산 서열, 또는 그것의 일부 서열과 적어도 실질적으로 상응하는 DNA 또는 아미노산 서열에 의해 코딩되는 효소일 수 있다.
효소의 DNA 또는 아미노산 서열은 전술한 효소의 DNA 또는 아미노산 서열과 적어도 70%의 상동성을 가질 수 있다.
효소는 고형 또는 액체 형태일 수 있다.
바람직하기로는, 알로에레신 A는 알로에신 및 p-쿠마르산으로 부산물, 특히 폴리머의 생성없이 변환된다.
알로에레신 A는 알로에 식물의 모든 종, 특히 알로에 페록스나 알로에 베라 종으로부터, 보다 구체적으로는 알로에 페록스 종으로부터 수득될 수 있다.
알로에레신 A는 알로에 식물의 잎에서 생산되는 수액으로부터 수득될 수 있다. 수액은 액체 또는 고형 형태일 수 있다.
알로에레신 A는 부분적으로 정제된 형태일 수 있다.
산을 이용하는 가수분해 단계는, 약 0.5 N 내지 약 10 N의 산 농도에서 수행될 수 있으며, 약 2 N 내지 약 5 N 산 농도에서 최적으로 수행된다.
가수분해 단계는 약 20 내지 약 121 ℃에서 수행될 수 있으며, 산을 이용하는 경우에는 전형적으로 약 90 ℃에서 수행된다. 가수분해 효소를 이용하는 경우에는, 가수분해 단계는 ESL001- 02™를 이용하는 경우를 제외하고는 전형적으로 약 37 ℃에서 수행되며, ESL001- 02™를 이용하는 경우의 가수분해 단계는 약 50 ℃ 내지 약 90 ℃에서, 보다 구체적으로는 약 70 ℃에서 수행된다.
반응 매질에 완충액이 사용될 수 있다. 완충액은 소듐 포스페이트, 카보네이트 또는 보레이트 완충액 또는 물이거나, pH 약 4 내지 약 8에서 pKa를 가지는 기타 모든 완충액일 수 있다. 완충액 농도는 0.01 M 내지 1 M일 수 있으며, 바람직하기로는 0.1 M이다.
에탄올 또는 아세톤 같은 유기 용매를 약 10 내지 50%의 농도로, 바람직하기로는 약 30% 첨가할 수 있다.
본 발명의 제2 예는,
알로에 식물내 적어도 일부분의 알로에레신 A를 알로에신 및 p-쿠마르산으로 가수분해시키는 단계; 및
수액으로부터 자연적으로 형성되는 알로에신과 알로에레신 A로부터 변환된 알로에신을 추출하는 단계를 포함하는, 알로에 식물의 수액으로부터 알로에신을 추출하는 방법을 제공한다.
상기 알로에 식물은 알로에 페록스 종일 수 있다. 수액은 액체 또는 고형 형태일 수 있다.
알로에레신 A는 실질적으로 전술한 바와 같은 방법에 따라 가수분해될 수 있다.
본 발명의 제3 예는, 실질적으로 전술한 바와 같이 알로에레신 A를 알로에신 및 p-쿠마르산으로 가수분해함으로써 형성되는 알로에신을 제공한다.
알로에레신 A는 알로에 식물의 수액, 보다 구체적으로는 알로에 페록스 종의 수액으로부터 유래될 수 있다.
알로에신은 전술한 방법에 따라 알로에레신 A에서 변환시킨 알로에신과 자연적으로 형성되는 알레오신의 조합일 수 있다.
발명의 상세한 설명
알로에레신 A를 알로에신으로 가수분해에 의해 변환시키는 과정은 본원에 언급되어 있다.
알로에신 A는 p-쿠마르산의 알로에시닐 에스테르이며, 출원인은 알로에레신 A를 알로에신(C-glycoside-5-methylchromone)으로 효율적이고도 경제적으로 가수분해 가능하므로, 따라서 알로에 식물의 수액 추출물로부터 이용가능한 알로에신의 양을 증가시킬 수 있다는 것을 발견하였다. 알로에신은 알로에레신 A 에 비해 상업적인 가치가 높으므로, 이러한 과정은 알로에 식물의 수액 또는 알로에 비터의 상업적인 가치를 증가시킨다. 알로에레신 A를 알로에신으로 변환시키는 반응은 하기에 나타낸다:
Figure 112007074645063-pct00001
알로에레신 A의 알로에신으로의 변환은 또한, 알로에신의 선택적인 제거 뿐만 아니라 알로에 비터의 부산물들 알로인 A과 B의 제거를 용이하게 한다. 알로에레신 A의 부재하에 알로에신을 추출 및 정제하는 것이 알로에레신 A의 존재하에서 보다 훨씬 덜 어렵고 저렴한데, 그 주된 2가지 이유는 다음과 같다:
(a) 변환 후, 추출될 수 있는 알로에신이 더 많이 있으며; 및
(b) 변환 후, 단지 2가지 성분(알로에신및 알로인)만 알로에 비터에서 분리하면 되고, 이들은 매우 상이한 물리적인 특징을 가지고 있어 알로에신의 선택 추출이 훨씬 용이하게 된다.
또한, 상기 과정은 p-쿠마르산으로부터 알로에신을 분리하는 단계를 포함할 수 있다. 적합한 분리 단계는 당업자들에게 자명할 것이며, 전형적인 분리 과정은 용매 추출, 크로마토그래피 및 결정화를 포함하지만, 본원에 상세히 언급되진 않을 것이다.
상기 과정에 사용될 수 있는 가수분해 단계의 예는 산 가수분해, 염기 가수분해 및 효소 가수분해이다.
산 가수분해의 경우, 산은 모든 유기 또는 무기 산, 예컨대 염산, 황산, 질산, 인산 등일 수 있다.
효소 가수분해의 경우, 가수분해 효소는 에스테라제, 리파제 또는 프로테아제, 예컨대 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae)의 프로테아제, Diversa사의 ESL 001-02™, Nordisk사의 NOVO 388™(특히 조제물중의 프로테아제 오염원) 및 the Altus Chiroscreen Kit™사의 뮤코르 미하이(Mucor miehei)의 리파제일 수 있다. 보다 구체적으로, 효소는 Amano사의 Protease M™ 또는 Quest International사의 Bioprotease P cone™일 수 있으며, 둘다 아스퍼질러스 오리제 유래 프로테아제이다. 대안적으로, 효소는 전술한 효소들중 임의 하나의 DNA 또는 아미노산 서열, 또는 그것의 일부 서열과 적어도 실질적으로 상응하는 DNA 또는 아미노산 서열에 의해 코딩되는 효소일 수 있다. 효소는 고형 또는 액체 형태일 수 있다.
알로에레신 A는 알로에신 및 p-쿠마르산으로 부산물, 예컨대 폴리머의 생성없이 변환된다.
알로에 식물의 모든 종은 알로에 식물의 잎에서 생산되는 수액으로부터 수득가능한 알로에레신 A의 소스로서 적합하다. 수액은 액체 또는 고체 형태일 수 있으며, 알로에레신 A는 정제된 형태, 부분적으로 정제된 형태일 수 있으며, 또는 수액내에서 미정제된 형태이거나 알로에 식물의 다른 부위내 미정제된 형태일 수 있다.
산을 이용하는 가수분해 단계는, 통상적으로 약 0.5 N 내지 약 10 N의 산 농도에서 수행되며, 약 2 N 내지 약 5 N 산 농도에서 최적으로 수행된다. 약 10 내지 50% 농도, 바람직하기로는 약 30%의, 에탄올 또는 아세톤과 같은 유기 용매를 반응 공정에 선택적으로 첨가할 수 있다.
가수분해 단계는 약 20 내지 약 121 ℃에서 수행될 수 있으며, 산을 이용하는 경우에는 전형적으로 약 90 ℃에서 수행된다. 가수분해 효소를 이용하는 경우에는, 가수분해 단계는 ESL001- 02™를 이용하는 경우를 제외하고는 전형적으로 약 37 ℃에서 수행되며, ESL001- 02™를 이용하는 경우의 가수분해 단계는 약 50 ℃ 내지 약 90 ℃에서, 보다 구체적으로는 약 70 ℃에서 수행된다.
반응 매질에 완충액이 사용될 수 있다. 완충액은 소듐 포스페이트, 카보네이트 또는 보레이트 완충액 또는 물이거나, pH 약 4 내지 약 8에서 pKa를 가지는 기타 모든 완충액일 수 있다. 완충액 농도는 0.01 M 내지 1 M일 수 있으며, 바람직하기로는 0.1 M이다.
전술한 가수분해 과정에 의해 수득되는 알로에신은 국소 피부 조성물로 이용될 수 있다. 알로인은 인간 및 수의학 분야의 시장에서 다양한 조성물로 사용될 수 있다.
실시예에서, 염산 및 황산을 이용하여 알로에레신 A를 알로에신으로 가수분해시키는 산의 능력을 입증하였고, 아스퍼질러스 오리제의 프로테아제를 사용하여 알로에레신 A의 알로에신으로의 효소적 가수분해를 입증하였다.
정량 HPLC 방법은 알로에레신 A, 알로에신 및 p-쿠마르산의 양을 본원의 가수분해 과정의 최적화 동안에 모니터닝하기 위한 분석 툴로서 개발되었다. 구체적인 테스트 및 결과는 하기 실시예에 제시된다.
실시예 1: HCl 및 아세톤을 사용한, 산에 의한 가수분해
알로에레신 A(15%)를 함유하는 알로에 수액을 1.3N 또는 5N HCl을 사용하여, 아세톤의 존재 또는 부재 하에 90 ℃에서 소정 시간 동안 가수분해하였다. 상기 아세톤을 사용하여, 상기 알로에 수액에 대한 기질의 용해도를 증가시켰다. 상기 반응물의 분취물(20 ㎕)을 소정의 시간 간격으로 취한 다음, 30% 아세톤을 함유하는 100 mM 포스페이트 완충액(pH 7.2)에 첨가하였다. 정해진 방법에 따라, HPLC에 의해 각각의 샘플을 분석하였다.
분석 결과로부터, 가수분해 속도는 산의 강도에 따라 좌우되며, 5N HCl을 사용하는 경우, 40% 내지 80% 범위의 전환률이 얻어진다는 것을 확인되었다. 10% 아세톤이 존재하는 경우에는, 가수분해성이 약간 향상되었다. 알로에레신 A의 소멸 속도는 산의 강도가 높은 값인 경우에 크게 나타났다. 또한, 분석 결과로부터, 90∼95% 알로에레신 A는 3N 내지 5N의 HCl을 사용하는 경우, 2시간 이내에 소멸되었다는 것을 알 수 있다.
실시예 2: HCl 또는 H 2 SO 4 와 에탄올을 사용한, 산에 의한 가수분해
아세톤의 대용물로서 에탄올을 사용하였다. 1N HCl 또는 H2SO4를 사용하여, 알로에레신 A를 포함하는 알로에 추출물을 90 ℃에서 50%(v/v) 에탄올의 존재 하에, 주어진 시간 동안 가수분해하였다. 알로에 추출물의 양을 10%(v/v)부터 50%(v/v)까지 변화시켰다. 각 반응물의 분취물(1 ml)을 표시된 시간 간격으로 취한 다음, 0.5 ml의 차가운 아세톤에 첨가하였다. 정해진 방법에 따라, HPLC에 의해 각각의 샘플을 분석하였다.
가수분해용 산으로서 H2SO4를 사용하고, 알로에 수액의 농도가 30%인 경우, 알로에레신 A와 알로에신 간의 몰 수지 폐합점(mole balance closure)은 4시간 반응 후 80% 부근의 농도 지점이었다 (상기 시간 동안 더 높은 농도에서도 가능함). 상기 산으로서 H2SO4를 사용하는 경우, 몰 수지 폐합점은 약 10%보다 높은 농도 지점이었지만, HCl과 비교하여, 보다 이른 시점에서 몰 수지상의 손실이 관찰되었다.
실시예 3: 아스퍼질러스 오리제 프로테이즈( Aspergillus oryzae protease)를 사용한, 효소에 의한 가수분해
알로에 추출물 또는 순수한 알로에레신 A에서 알로에레신 A의 알로에신으로의 효소에 의한 가수분해를 사전에 최적화하기 위해, 다양한 조건에서 테스트하였다. 아스퍼질러스 오리제 프로테이즈를 가수분해 효소의 일례로서 선택하였으며, 2개의 아스퍼질러스 오리제 프로테이즈, 즉, Protease M™(Amano에서 제조) 및 Bioprotease P conc™(Quest International에서 제조)에 대해서 테스트하였다.
Protease M™에 대한 설명:
종: Asp. oryzae (비-GMO)
희석액: 감자 덱스트린(비-GMO)
희석액의 농도: 약 15%
Bioprotease P cone™에 대한 설명:
최소 400,000 HUT 프로테이즈 u/gm
- 총 생균수 ＜50,000/gm
- 효모 & 곰팡이 ＜200 /gm
- E. coil: 25 gms에서 부재
- 살모넬라: 25 gms에서 부재
- FCC & JECFA에서 규정한 바와 같이 기타 모든 국제적인 설명서에 부합됨 (중금속, 납, 비소 등).
하기 파라미터를 소규모 스케일로 조사하였다:
효소 농도: 1 내지 50 ml 효소
알로에 추출물: 3 ml 당 15 ㎕ 내지 200 ㎕
완충액 형태: 소듐 포스페이트, 보레이트 또는 카보네이트
완충액 농도: 0.001M 내지 1M
pH: 4 내지 7
Tween 농도: 0, 1 및 10% v/v
아세톤 농도: 0 내지 50%
기질로서 알로에 수액을 사용하는 경우, 통상적으로, 알로에신의 농도가 50% 이상 증가하는 것으로 관찰되었다.
실시예 4: 아스퍼질러스 오리제 프로테이즈를 사용한, 효소에 의한 가수분해
효소로서 Amano Protease M™ 또는 Quest Bioprotease P cone™를 사용하여, 1 ml 반응물 당 3 mg의 순수(91%) 알로에레신 A 에 대해서 반응을 수행하였다. 조사된 파라미터는 다음과 같다:
효소 농도: 2 및 20 mg
완충액 농도: 0.01 M 소듐 포스페이트
pH: 5.5
진동 교반기 중에서 진동시키면서, 37 ℃에서 20시간 동안 반응을 수행하였다. 알로에레신 A로부터 알로에신으로의 완전한 전환이 달성되었다.
모든 반응에 있어서, 전체 반응물 3 ml를 분석하였다. 물:메탄올: THF(20:40:40)을 사용하여, 상기 샘플의 부피가 25 ml가 되도록 한 다음, HPLC에 의해 분석하였다.
상기 아스퍼질러스 오리제 프로테이즈는 37℃에서 가장 적절히 작용한다는 것으로 확인되었다. 전술한 파라미터를 사용하여, 알로에레신 A로부터 알로에신 및 p-쿠마르산으로의 효소에 의한 전환은 최적화되었으며, 알로에레신 A가 알로에신 및 p-쿠마르산으로 완전히 전환되는 조건을 확인하였다. 4시간 후, 알로에신 함량이 100% 증가하였으며, 알로에레신 A의 함량은 100% 감소하였다. 그러므로, 순수한 알로에레신 A를 기질로서 사용하는 경우, 몰 수지의 폐합은 100%가 되는, 상기 전환 반응은 완전한 반응이었다.
실시예 5: 대규모의 알로에신 제조
반응은 재켓트한(jacketed) 교환 탱크, 글라스-라인 반응조에서 수행하였다. 알로에 수액은 질소하에 동량의 2 M HCl 용액을 이용하여 가수분해시켰다. 반응조를 90 ℃로 승온시켜, 약 5.5시간동안 온도를 유지시켰다. 수득되는 알로에레신의 변환은 ca. 94%이었으며, 알로에신에 대한 평균 선택성은 ca. 30%였다.
반응 종료시에, 자켓(jacket)을 통해 냉각수를 통과시켜 반응조내 내용물을 70 ℃로 냉각시켰다. 시스템은 45% 가성 용액(ca. 산에 0.75 당량)을 이용하여 pH ca. 4.5로 중화시켰다.
이후, 반응조는 28 ℃로 냉각시키고, 교반을 중지시켯다. 반응 혼합물은 2 상으로 분리되게 두었다. 수상(가수분해물이라 함)은 하부에, 고체를 포함하는 상층이 상단(상층이라 함)에 설정되었다. 가수분해물은 홀딩 탱크로 배출시켰다.
상층은 교반하면서 물을 첨가하기 전에 질소를 통기시켰다. 반응조내 내용물은 동량의 물로 세정하였다. 반응조를 30분간 25 ℃에서 회전시켰고, 30분간 정치시켰다.
혼합물의 분리는 25 ℃에서 수행하였으며, 상층은 상단에서 유지되었다. 수상은 홀딩 탱크로 배출시켰다. 물 세정물을 이전에 배출시켜둔 가수분해물과 합하였다. 반응 스트림 이후에 회수되는 총 알로에신은 ca. 84%였다.
남아있는 고형물은 10% 가성 용액에 용해시켜, 반응조에서 제거하였다. 세정 용액을 배출시키고, 쓰레기로 취급하였다.
본 발명은 본원에 언급된 명확한 상세한 내용으로 한정되는 의도는 아니다. 예를 들면, 본 출원인은 가수분해 반응에 다른 가수분해제, 예컨대 테스트한 산 또는 효소와 화학적으로 또는 생화학적으로 등가인 산 및 효소를 사용할 수 있을 것으로 본다.

Claims (37)

  1. 알로에 비터(aloe bitter)내의 알로에레신(aloeresin) A를 알로에신 및 p-쿠마르산(coumaric acid)으로 가수분해하는 단계; 및
    알로에 비터로부터 자연적으로 형성되는 알로에신과 알로에레신 A로부터 변환된 알로에신을 선택적으로 추출하는 단계;
    를 포함하는, 알로에 식물의 알로에 비터로부터 알로에신을 추출하는 방법
  2. 제 1항에 있어서, 상기 알로에 식물은 알로에 페록스(Aloe ferox) 종인 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 알로에레신 A는 산 가수분해에 의해 알로에신으로 가수분해되는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 알로에레신 A는 효소에 의한 가수분해로 알로에신으로 가수분해되는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 3항에 있어서, 상기 산 가수분해에 유기산이 사용되는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 3항에 있어서, 상기 산 가수분해에 무기산이 사용되는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 산은 염산, 황산, 질산 및 인산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 4항에 있어서, 상기 효소에 의한 가수분해를 수행하기 위해 사용되는 효소는 에스터라제, 리파제 및 프로테아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 4항에 있어서, 상기 효소는 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae)의 프로테아제, ESL 001-02™, NOVO 388™ 및 뮤코르 미하이(Mucor miehei)의 리파제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 9항에 있어서, 상기 아스퍼질러스 오리제의 프로테아제 효소는 Protease M™ 또는 Bioprotease P cone™인 것을 특징으로 하는 방법.
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  13. 제 3항에 있어서, 0.5 N 내지 10 N의 산 농도에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 3항에 있어서, 2 N 내지 5 N의 산 농도에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 완충액이 사용되는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 3항에 있어서, 상기 가수분해 단계에 유기 용매가 첨가되는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 16항에 있어서, 상기 유기 용매는 에탄올 또는 아세톤인 것을 특징으로 하는 방법.
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