KR101525296B1

KR101525296B1 - 라미부딘 옥살레이트 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR101525296B1
Application number: KR1020127025959A
Authority: KR
Inventors: 얀롱 리우; 페이 리우; 시쿠 장
Original assignee: 치아타이 티안큉 파마수티컬 그룹 주식회사
Priority date: 2010-02-25
Filing date: 2010-12-23
Publication date: 2015-06-02
Also published as: JP2013520449A; US8569322B2; CN102167696B; JP5613780B2; EP2540717B1; KR20130021476A; EP2540717A1; US20130053560A1; EP2540717A4; CN102167696A; WO2011103762A1

Abstract

라미부딘 옥살레이트 (Lamivudine oxalate), 이의 제조 방법 및 이의 결정 형태를 개시하였다. 라미부딘의 제조 방법 역시 개시하였다.

Description

라미부딘 옥살레이트 및 이의 제조방법{LAMIVUDINE OXALATE AND PREPARATION METHOD THEREOF}

본 발명은 신규한 라미부딘 염 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 라미부딘의 염은 시스-라미부딘 옥살레이트이다.

뉴클레오티드, 이의 유사체 및 유도체는 중요한 항바이러스 치료제의 한 종류이다. 수많은 뉴클레오티드는 인간 면역결핍 바이러스(human immunodeficiency virus, HIV), B형 간염 바이러스(hepatitis B virus, HBV) 및 인간 T 세포 림프영양성 바이러스 (human T-cell lymphotropic virus, HTLV)와 같은 레트로바이러스에 대한 우수한 항바이러스 효과를 가지고 있다.

국제 출원 공개 WO91/17159에 대응하는 국제출원 PCT/GB91/00706은 하기 화학식 1로 표시되는 항바이러스성 뉴클레오티드-라미부딘을 개시하고 있다.

[화학식 I]

4-아미노-1-(2R-히드록시메틸-[1,3]옥사티올란-5S-일)-1H-피리미딘-2-온

대부분의 뉴클레오티드 및 이의 유도체는 2이상의 키랄 중심부를 포함하고 있으며, 광학이성질체 형태로 존재한다. 그러나, 이러한 종류의 화합물의 시스-이성질체만이 일반적으로 높은 생물학적 활성을 가지고 있다. 그러므로 산업적 생산에 적합한 뉴클레오티드의 일반적인 입체선택성적 합성은 언제나 연구 주제가 된다.

WO92/20699은 주로 라미부딘의 광학적으로 활성된 시스-뉴클레오티드 유사체 및 유도체의 부분입체 선택성 제조과정을 개시하고 있다. 이 과정은 특정 루이스 산을 사용한 것에 의존한다. 그러나, 이러한 루이스 산은 높은 반응성 및 불안정한 화합물로서 값이 비싸고, 명확한 독성을 갖는다.

WO92/20699에서 제공되는 제조과정은 적합한 이탈기가 선택되고, 치환기 및 이탈기를 가지는 옥사티올란(oxathiolane)이 피리미딘과 반응하여 루이스 산 첨가를 피할 수 있음이 개시된 WO/1995/029174에서 최적화되었다. 또한, WO/1995/029174은 라미부딘을 정제시키기 위한 중간체 염으로서 라미부딘 살리실산염를 개시하고 있다.

본원의 발명자들은 라미부딘 제조의 출발 물질로 직접적으로 사용되는 키랄 중심 (chiral center)을 가진 화합물의 신규한 제조방법을 개발하였다. 상기 제조방법은 쉽게 정제 및 분리할 수 있고, 산업적 적용에 적합이 가능하여, 높은 입체선택성 시스-라미부딘 (stereoselective cis-Lamivudine)을 수득하는 것을 보장할 수 있다.

본원의 발명자들은 WO/1995/029174에 개시된 기술에 대한 연구를 수행하고, 구체적으로는 추가로 라미부딘 살리실산염 (Lamivudine salicylate)을 평가하고, 상기 염이 여전히 다양한 결점이 있음을 발견하였다.

1. 라미부딘 살리실산염은 결정성 (crystallizability)이 좋지 않으며, 점성이 있다. 당해 분야의 기술자는 점성 물질이 쉽게 불순물을 가질 수 있고, 정제가 어렵다는 것을 이해할 수 있다. 라미부딘 살리실산염을 중간체로 사용하면 높은 순도의 라미부딘을 수득하기 위해서는 다단계 (multi-step)의 정제가 필요하다. 그러므로, 산업 비용이 높아지고, 다단계 정제는 생산 시간을 늘리고, 생산 효율을 감소시킨다.

2. 트리에틸아민 (triethylamine)의 실질적인 양을 추가하여 살리실산을 제거한다고 WO/1995/029174에 개시되어 있다. 그러나, 트리에틸아민은 인체에 자극성 및 독성을 갖고 있어어, 라미부딘의 품질 관리 (quality control)에는 엄격한 컨트롤이 필요하다. 품질 표준에 맞는 트리에틸아민 잔여 양을 보장할 수 있는 상대적인 품질 관리 표준 확립 요구가 존재한다. 게다가, 트리에틸아민의 실질적인 양은 산업 생산에서 생산 비용을 조절하는데 단점이다.

높은 입체선택성 및 높은 순도를 가진 라미부딘을 수득하기 위해서 뿐만 아니라, 비용 절약, 산업 생산을 용이하게 하고 생산물의 독성을 감소하기 위해서 본원의 발명자들은 본원 발명의 신규한 제조 방법을 개발하였다.

발명의 요약

본원발명의 하나의 목적은 라미부딘 옥살레이트 (Lamivudine oxalate)를 제공하는 것으로, 라미부딘 옥살레이트는 다음의 구조식을 갖는다:

[화학식 II]

상기 화학식 Ⅱ로 표시되는 화합물은 시스-라미부딘, 즉 라미부딘 L-이성질체 및 옥살산으로 형성되는 염이다.

본 발명의 다른 목적은 라미부틴 옥살레이트의 제조방법을 제공하는 것이다.

하나의 제조방법은 라미부딘을 옥살산과 적당한 용매 중에서 반응시키는 것을 포함하는데, 상기 적당한 용매는 물, 에테르, 테트라하이드로퓨란, 디옥산과 같은 극성 용매, 또는 메탄올 또는 에탄올과 같은 알코올, 또는 이들의 혼합 용매를 포함한다.

다른 제조방법은 하기 단계를 포함한다:

상기 R은 C_1-10 알킬을 포함하는 선택적으로 치환된 직쇄, 가지형 또는 고리형 알킬이고, 상기 치환기들은 알킬, 할로겐, 히드록시, 페닐 및 그 유사체로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게, R은 멘타닐(menthanyl), 또는 페닐-치환된 멘타닐(menthanyl), 보다 바람직하게는 L-멘타닐(menthanyl) 및 L-8-멘타닐(menthanyl)과 같이 거울상이성질체(enanthiomer)의 분리에 유리한 비대칭(chiral) 기이다. 상기 언급한 옥살산은 옥살산 유도체들을 포함한다. 화학식 Ⅲ의 화합물은 옥살산 또는 이의 유도체들과 반응하고 나서, 환원되어 염을 형성하는데, 여기서 환원제는 소듐 보로히드라이드 또는 포타슘 보로히드라이드를 포함한다.

하나의 예는 다음과 같다:

출발 물질로서 화학식 Ⅲ의 화합물을 사용하여 라미부딘 옥살레이트를 합성하는 방법은 화학식 Ⅲ의 화합물을 소듐 보로히드라이드 또는 포타슘 보로히드라이드와 완충 용액 중에서 반응시키고, 불순물 또는 미반응(unreated) 출발 물질을 제거하고, 잔사(residue)를 옥살산 또는 이의 유도체들과 반응하여 라미부딘 옥살레이트를 얻는 단계를 포함한다.

구체적인 반응 단계는 다음과 같다:

(1) 완충 용액을 준비하고, 상기 용액에 적당한 양의 에탄올을 가하고, 균일하게 교반하고, 그 결과로 얻은 용액에 출발 물질로서 화학식 Ⅲ의 화합물을 가하고;

(2) 반응이 완성될 때까지 모니터링 하면서, 단계 (1)에서 얻은 용액에 소듐 보로히드라이드 용액 또는 포타슘 보로히드라이드 용액을 한 방울씩(dropwise) 가하고;

(3) 단계 (2)에서 얻은 용액을 용매 또는 물로 처리하여 불순물 또는 미반응(unreated) 출발 물질을 제거하고;

(4) 단계 (3)에서 얻은 결과물에 옥살산 또는 이의 유도체들을 가하고, 반응시키고, 정제하여 라미부딘 옥살레이트 결정을 얻는다.

보다 구체적으로, 제조 방법은

(1) 완충 용액을 제조하고, 여기에 적당한 양의 에탄올을 추가하고, 출발 물질로서 CME를 그 결과로 생긴 용액에 첨가하며, 균등하게 교반하는 단계;

(2) 반응이 종결될 때까지 모니터링하며, 수소화 붕소 나트륨(sodium borohydride) 용액을 단계 1에서 수득한 용액에 1시간 동안 적가(dropwise)하는 단계;

(3) 두 층으로 분리하기 위하여 단계 (2)에서 수득한 용액을 정치하고(standing), 적당한 양의 에탄올로 아래쪽 수층(water layer)을 세척하고, 유기 용체층을 모두 합하고, 온도를 28 내지 32℃로 유지하면서 산으로 pH를 6 내지 6.5로 조정하고, 다시 염기로 pH를 8.0 내지 8.3으로 조정하고, 에탄올을 제거하고, 실온으로 온도를 낮추고, 적당량의 물을 첨가하여 녹이고, 유기 용제로 세척하고, 유기용제층을 합한 다음, 물로 추출하고, 모든 수층(water layer)을 합하고, 변색시키기 위하여 활성 탄소를 첨가하고, 교반하고, 여과하고, 물로 여과케이크를 세척하는 단계;

(4) 모든 수층을 합친 다음, 옥살산을 첨가하고, 교반하고, 원심분리하고, 적은 양의 물로 여과케이크를 세척하고 메탄올로 다시 이를 세척한 다음, 라미부딘 옥살레이트 크리스탈을 수득하기 위하여 40℃ 내지 45℃의 온도에서 진공 하에 산물을 건조시키는 단계를 포함한다.

단계 1의 완충 용액은 환원제, 수소화 붕소 나트륨 또는 수소화 붕소 칼륨의 사용에 필수적이다. 예를 들어, 적절한 완충 용액은 디포타슘 히드로겐 포스페이트(dipotassium hydrogen phosphate)의 수용액과 같은, 인산 완충액 또는 이붕산염 완충액이며, 상기 디포타슘 히드로겐 포스페이트의 농도는 20 내지 50%, 바람직하게는 25 내지 45%이며, 가장 바람직하게는 31%이다. 단계 1에서 적절한 온도는 18℃ 내지 20℃의 범위 내이다.

단계 1에서 에탄올의 적절한 양은 출발물질의 양에 대해 4배 내지 7배이며, 바람직하게는 5배 내지 6배이다.

단계 2에서 수소화 붕소 나트륨(또는 수소화 붕소 칼륨) 용액의 농도는 5mol/L이며, 바람직하게는 하기와 같이 제조될 수 있다:

첫째로, 수산화 나트륨(또는 수산화 칼륨) 수용액의 0.4% 수산화 나트륨(또는 수산화 칼륨) 수용액을 제조하고(formulating), 그 다음 5mol/L의 수소화 붕소 나트륨(또는 수소화 붕소 칼륨) 용액을 제조하기 위하여 수소화 붕소 나트륨(또는 수소화 붕소 칼륨)을 수산화 나트륨(또는 수산화 칼륨) 용액에 녹인다.

단계 2에서 표현 "반응이 종결될 때까지 모니터링"은 반응 후 출발 물질로서 식 Ⅲ 또는 Ⅲ'의 화합물의 양이 첨가 양(addition amount)의 0.5% 미만임을 의미한다.

단계 3의 pH 조정하기 위한 산으로서 염산(hydrochloric acid), 황산(sulphuric acid), 인산(phosphoric acid), 질산(nitric acid) 및 기타 같은 종류의 것이 가능하며, 바람직하게는 6mol/L의 염산과 같은 염산이다. pH 조정을 위한 염기로서는 수산화 나트륨, 수산화 칼륨 및 기타 같은 종류의 것이 가능하다.

본 발명의 라미부딘 옥살레이트는 씨스(cis)-라미부딘(라미부딘 L-이성질체, Lamivudine L-isomer) 및 옥살산으로부터 형성된 염을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 출발물질로서 식 Ⅲ'의 화합물, 즉, 화학명 (2R, 5S)-5-(4-아미노-2-옥소-피리이딘-1-일)-[1,3]옥사티올란-2-카르복실산, 2S-이소프로필-5R-메틸-1R-씨클로헥실 에스터이다. 출발물질로서 식 Ⅲ의 상기 화합물 및 CME는 상업적으로 구매하거나, WO/1995/029174에 개시된 방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명의 다른 양태는 출발 물질로서 라미부딘 옥살레이트를 사용함으로써 라미부딘을 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명자는 라미부딘 옥살레이트가 극성 용매로부터 쉽게 분리할 수 있고 따라서 관습적인 방법을 통해 자유 염기의 형태인 라미부딘으로 쉽게 변환시킬 수 있음을 알아냈다. 관습적인 방법은 적절한 염기의 사용을 포함하며, 상기 염기는 트리에틸아민과 같은 3차 아민일 수 있다.

구체적으로, 라미부딘 옥살레이트가 에탄올에 첨가되고, 테리에틸아민이 40℃ 내지 45℃의 온도에서 0.5시간 동안 여기에 첨가되고, 같은 온도에서 4시간 동안 교반된다. 상기 혼합물은 실온에서 원심분리되고, 생산물은 라미부딘 크리스탈을 수득하기 위하여 40℃ 내지 45℃의 온도에서 진공 하에 건조된다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 화학식 Ⅲ의 화합물을 시작 물질로 하여, 화학식 Ⅲ의 화합물을 소듐 보로히드라이드(sodium borohydride) 또는 포타슘 보로히드라이드(potassium borohydride)와 반응시킨 후, 라미부딘 옥살레이트를 얻기 위해 생산물을 옥살산(oxalic acid) 또는 이의 유도체들과 반응시키고, 라미부딘을 얻기 위하여 라미부딘 옥살레이트를 염기와 반응시키는 것을 포함하는 라미부딘(Lamivudine)을 생산하는 방법을 제공한다.

상기 식에서:

R은 C_1-10 알킬을 포함하는 선택적으로 치환된 선형(straight), 가지형(branched) 또는 고리형(cyclic) 알킬기이며, 상기 치환기는 알킬기, 할로겐기, 히드록시기, 페닐기 등으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 바람직하게는, R은 메타닐기(methanyl), 페닐-치환 메타닐기일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 L-메타닐기 및 L-8-메타닐기일 수 있다.

구체적으로, 화학식 Ⅲ의 화합물은 환원되어 옥살산 또는 이의 유도체와의 염으로 형성되고, 염기는 화학식 Ⅲ의 화합물을 화학식 Ⅱ의 화합물로 전환하는 단계에서 사용되는 시약이 소듐 보로히드라이드 또는 포타슘 보로히드라이드를 포함하며, 화학식Ⅰ을 얻을 수 있는 것이라면 뭐든지 사용될 수 있다.

본 발명은 결정형 라미부딘 옥살레이트(crystalline lamivudine oxalate)를 제공하며, 라미부딘 옥살레이트 결정(lamivudine oxalate crystal)을 제공한다.

결정형 라미부딘 옥살레이트는 회절 각도 2θ에서 전형적으로 21.04, 22.44, 23.46, 23.78, 및 25.26에서, 추가적으로는 13.94, 14.86, 21.04, 21.30, 22.44, 23.46, 23.78, 25.26, 및 33.36에서, 추가적으로는 13.94, 14.86, 16.88, 17.66, 20.34, 21.04, 21.30, 22.44, 23.46, 23.78, 25.26, 28.30, 및 33.36에서 나타났다. Cu-Kα 방사선을 이용한 X-선 분말 회절 스펙트럼 피크(X-ray powder diffraction spectrum peak)가 나타났다. 추가적으로, 전형적인 결정형 라미부딘 옥살레이트의 회절 각도 2θ에서 XRD 스펙트럼 피크가 13.94, 14.86, 16.88, 17.66, 18.74, 19.12, 19.66, 20.34, 21.04, 21.30, 22.44, 22.96, 23.46, 23.78, 25.26, 26.78, 28.30, 28.68, 28.96, 30.08, 30.40, 31.92, 32.24, 32.84, 33.36, 34.64, 35.00, 및 35.80에서 나타났다.

도 1은 본 발명의 구체적인 일 실시예에서 개시된 라미부딘 옥살레이트 결정의 X-선 분말 회절 스펙트럼 피크(X-ray powder diffraction spectrum peak)를 보여주고 있다.

상기 본 발명의 라미부딘 옥살레이트 결정은 무수물, 무용매물, 또는 거의 없거나 측정되지 않는 물 또는 용매를 포함할 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 결정은 약 1% 이하의 물 또는 용매를 포함하며, 전형적으로는 0.5% 이하의 물 또는 용매를 포함한다. 본 발명의 결정은 20% 이하의 비결정형을 포함할 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 라미부딘 옥살레이트 결정은 10% 이하, 전형적으로는 1% 이하, 일반적으로는 0.1% 이하의 비결정형을 포함하고 있다.

본 발명의 라미부딘 옥살레이트 결정은 201.9 ℃ 근처에서 DSC로 측정된 흡열 전이피크를 나타내고, 199 ℃ 근처에서 시작 전이를 시작한다. 일 예로 DSC에 의한 열상 패턴(thermogram pattern)은 도 2에 도시되고 있는데, 여기서 흡열 전이온도의 시작 온도는 199.23℃이고, 액화 온도는 201.3-202.7℃ 범위이다.

라미부딘 옥살레이트는 약학적으로 허용가능한 염이며, 이는 WO9117159에 개시된 바와 같이 항바이러스제로 사용될 수 있으며, 약학적 조성물로 제형화될 수 있다.

본 발명에서 제조된 라미부딘 옥살레이트는 고순도의 라미부딘을 제조하기 위한 매우 훌륭한 중간체이다. 그에 비해, 살리실산 등과 같은 다른 라미부딘 유기산염은 점성며, 불순물이 더 포함되어 있고, 건조가 어려워 다음 단계의 고순도의 라미부딘을 생산하는데 어려움을 초래한다. 그러나, 라미부딘 옥살레이트는 우수한 결정이며, 제조 중에 상기와 같은 현상을 나타내지 않을 것이다. 라미부딘 옥살레이트로부터 만들어지는 라미부딘은 정제과정 없이 99.5% 이상의 순도를 가지며, 이는 추후 고순도의 cis-라미부딘을 정제하는데 매우 유리하다.

본 발명에 따른 라미부딘 옥살레이트는 1개의 옥살산 분자와 2개의 라미부딘 분자로 이루어진 염일 수 있다. 본 발명의 라미부딘 옥살레이트는 라미부딘을 제조하기 위한 옥살산 제거에 사용되는 트리에틸아민의 양을 라미부딘의 다른 유기산 염과 비교하여 현저히 감소시킬 수 있다. 트리에틸아민은 유독성 및 가연성 화학물질이며, 강한 암모니아 냄새를 가지고 대기 중에서 약간 발연한다. 트리에틸아민의 증기 또는 액체는 인간의 피부 및 점막(mucous membrane)을 자극할 수 있고, 주로 흡입(inhalation), 섭취(ingestion) 피부 등을 통해 인체로 흡수된다. 우연히 인체에 의해 흡입된 후 트리에틸아민 증기는 강하게 기도를 자극하고 폐부종(pneumonedema) 및 심지어는 사망까지 유발할 수 있다. 안구 및 피부와 접촉하였을 때, 트리에틸아민은 화학적 화상을 야기할 수 있다. 따라서, 트리에틸아민의 감소는 산업적 생산비용을 감소시키고, 보다 중요하게는 유독성 물질의 사용을 감소시키고, 생산과정의 안전성(security)을 증가시키며, 최종 생산물에 포함된 잔류 화학물질을 감소시킬 수 있다.

본 발명자들은 동몰량 제공 비의 경우에서 라미부딘 옥살레이트 및 라미부딘 살리실레이트 간의 유기산을 제거하기 위해 사용된 트리에틸아민의 양의 비교에 집중한다.

1. 라미부딘 옥살레이트로부터 라미부딘을 제조하는 방법은 하기와 같다:

1000 ml의 에탄올을 120 g의 라미부딘 옥살레이트(본 발명의 방법에 의해 제조된)에 가하였다. 여기에 60 ml의 트리에틸아민을 40 내지 45℃의 온도에서 0.5 시간 동안 가하고 같은 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온에서 원심분리하고 40 내지 45℃의 온도에서 진공으로 건조시켜 라미부딘 결정을 얻었다.

상기 방법으로 제조된 라미부딘 결정을 액상 크로마토그래피로 측정하였다. 기기 및 크로마토그래피 조건은 하기와 같다.

기기: WATERS E2695 4중 펌프(quaternary pump); 검출기: WATERS 2489 UV 흡수 검출기(absorption detector); 워크스테이션: Empower 2 소프트웨어; 크로마토그래피 컬럼: Thermo corporation의 BDS HYPERSILC18(250 4.6mm) 이동상: 메탄올-0.025 mol/L 암모늄 아세테이트 용액(pH는 아세트산을 이용하여 3.9로 조절된다)(5:95); 유속: 1.0 ml/min; 검출 파장: 277 nm; 컬럼 온도: 30 ℃. 표준화 방법에 의해 계산된 라미부딘의 순도는 98%를 초과, 일반적으로 99.6%를 초과한다.

2. 라미부딘 살리실레이트로부터 라미부딘을 제조하는 과정은 중국특허 제ZN95193466호에서 실시예 1의 파트 (d)에 개시되었다.

상기 특허명세서는 66.7 g의 라미부딘 살리실레이트로부터 라미부딘을 제조하기 위하여 26 ml의 트리에틸아민을 요구하는 것으로 개시하고 있으며, 이때 약 1 mole:150 ml의 몰 부피 비로 전환된다.

비교 결과를 표 1에 나타내었다.

[표 1]

라미부딘 옥살레이트와 라미부딘 살리실레이트 사이의 트리에틸아민의 사용량의 비교

중간체로서 라미부딘 옥살레이트로부터 1 mol 라미부딘의 제조에 트리에틸아민의 사용량이 15 ml만큼 감소함을 표 1에 나타내었다. 트리에틸아민의 이러한 감소된 양은 산업 생산에 있어서 유의미한 것일 수 있다. 한편으로 이러한 장점은 유독성 화학물질의 사용으로 인한 다양한 위험을 감소시키며 다른 한편으로 이는 산업 생산에 있어서 원료 물질의 비용을 감소시킨다.

도 1은 라미부딘 옥살레이트 결정의 XRD(X-ray diffraction) 패턴을 나타낸 것이다.
도 2는 라미부딘 옥살레이트 결정의 DSC(differential scanning calorimetry) 패턴을 나타낸 것이다.

이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 더 자세히 설명하고자 한다. 그러나, 하기 실시예에 의하여 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.

실시예 1

디포타슘포스페이트(디포타슘 하이드로젠 포스페이트) 191.8 g을 426 ml의 물에 첨가하고 완전히 용해될 때까지 18℃의 온도를 유지하며 교반하였다. 혼합물을 1 L 에탄올에 첨가하고 10분 동안 교반한 후 라미부딘 제조용 출발물질 CME 140 g을 18~20℃에서 첨가하였다. 그 후 수소화붕소나트륨 용액(다음과 같이 제조: 0.4% 수산화나트륨 수용액을 제조하고 수소화붕소나트륨 28 g을 150 ml의 수산화나트륨 용액에 용해하여 제조)을 상기 혼합물에 1시간 동안 한 방울씩 첨가하고 반응이 완전할 때까지 모니터하였다.

상기 반응물은 두 층으로 분리하고 낮은 물 층은 160 ml의 에탄올로 세척하였다. 모든 유기상이 결합한 후, 결과물의 pH를 6 mol/L의 염산을 사용하여 28~32℃ 온도에서 6~6.5로 적정하였다. 그 후, 혼합물의 pH를 수산화나트륨 수용액(1.12 kg 수산화나트륨/14 L 물)을 사용하여 8.0~8.3으로 적정하였다. 에탄올은 증류하고 잔여물을 상온까지 냉각하였다. 상기 잔여물은 280 ml 물에 용해하고 240 ml 톨루엔으로 두번 세척하였다. 톨루엔층이 결합한 후, 얻어진 화합물을 70 ml의 물로 추출하였다. 모든 물층이 결합한 후, 6 g의 활성탄소를 첨가하고 결과물을 30분 동안 상온에서 교반하였다. 그 후 혼합물을 여과하고 여과 케이크(fiter cake)를 180 ml의 물로 세척하였다. 모든 물층이 결합한 후, 25 g의 옥살산을 첨가하고, 교반한 후, 원심분리하고 여과 케이크를 소량의 물로 세척하고 68 ml의 차가운 메탄올로 세척하였다. 생성물은 40~45℃ 온도에 진공 조건하에서 건조하고 라미부딘 옥살레이트을 수득하였다.

(1) NMR 분석

장치: Bruker AV400 핵자기공명분광기(NMR); 용매: D₂O(중수); ¹H NMR(D₂O) δ_H:3.18 (dd, 1H); 3.49 (dd, 1H); 3.79 (dd, 1H); 3.94 (dd, 1H); 5.25 (t, 1H); 6.03 (d, 1H); 6.24 (dd, 1H); 8.12 (d, 1H).

(2) X-ray diffraction 분석

장치: RigakuD/Max-RC X-ray diffractometer; 시험 조건: 40kv 100mA; DS=SS=1°RS=0.3mm; 표적: Cu; 범위: 3.00-40.00; 스캔속도: 10.00 Deg/min;

(3) 라미부딘 옥살레이트 결정의 DSC의 경우, 흡열 전이 온도의 시작온도는 199.23℃; 피크 수치는 201.87℃; 그리고 가열속도는 10.00 ℃/min이다. 녹는점: 201.3-202.7℃. 장치: waters2414.

실시예 2

120 g의 라미부딘 옥살레이트(본 발명의 방법에 따라 제조된)을 1000 ml 에탄올에 첨가하였다. 60 ml의 트리에틸아민을 0.5 시간 동안 40~45℃에서 첨가하고 동일한 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 그리고 상온에서 원심분리하였다. 생성물은 40~45℃ 온도에 진공 조건하에서 건조하여 라미부딘 결정을 얻었다.

120 g의 라미부딘 옥살레이트(본 발명의 방법에 따라 제조됨)을 1000 ml의 에탄올에 첨가하였다. 60 ml의 트리에틸아민을 0.5 시간 동안 40~45℃에서 첨가하고 동일한 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 그리고 상온에서 원심분리하였다. 생성물은 40~45℃의 온도에서 진공 조건하에 건조하여 라미부딘 결정을 얻었다.

상기의 생성물 65 g에 1 L의 에탄올을 첨가하였다. 그리고 고체가 완전히 용해될 때까지 30분 동안 가열하고 환류하였다. 4 g의 활성탄소를 첨가하고 추가 30분 동안 지속적으로 환류하고 바로 여과하였다. 반응물을 3-4시간 동안 상온까지 냉각하고 동일한 온도에서 6시간 동안 교반하고, 여과하였다. 그리고 여과 케이크 소량의 에탄올로 세척하였다. 생성물은 40~45℃의 온도에서 진공 조건하에 건조하여 고순도의 라미부딘을 얻었다. 순도는 99.6%이었다.

Claims

하기 구조식으로 표시되는 라미부딘 옥살레이트:
회절 각도 2θ = 21.04, 22.44, 23.46, 23.78 및 25.26에서 피크를 나타내는 X선 분말 회절 스펙트럼 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는 결정형 라미부딘 옥살레이트.
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제2항에 있어서, 회절 각도 2θ = 13.94, 14.86, 21.04, 21.30, 22.44, 23.46, 23.78, 25.26 및 33.36에서 피크를 나타내는 X선 분말 회절 스펙트럼 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는 결정형 라미부딘 옥살레이트.
제2항에 있어서, 201.9 ℃ 근처에서 DSC로 측정된 흡열 전이 피크를 나타내고 199 ℃ 근처에서 시작 전이 온도를 나타내는 것을 특징으로 하는 결정형 라미부딘 옥살레이트.
하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제1항의 라미부딘 옥살레이트를 제조하는 방법:

상기 식에서 R은 선택적으로 치환된 직쇄, 분지쇄 또는 고리형 C_1-10 알킬이고, 상기 치환기는 C_1-10 알킬, 할로겐, 히드록시 및 페닐로 이루어진 군으로부터 선택된다.
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하기 단계를 포함하는 라미부딘을 제조하는 방법으로서:

상기 식에서 R은 선택적으로 치환된 직쇄, 분지쇄 또는 고리형 C_1-10 알킬이고, 상기 치환기는 C_1-10 알킬, 할로겐, 히드록시 및 페닐로 이루어진 군으로부터 선택되며,
구체적으로, 상기 화학식 III의 화합물을 환원시키고, 옥살산과의 염을 형성시키고, 상응하는 염기를 유리하여 상기 화학식 I의 화합물을 얻는 단계를 포함하는, 라미부딘을 제조하는 방법.
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제1항의 라미부딘 옥살레이트를 활성 성분으로 포함하는, 항바이러스용 약학 조성물.
제6항에 있어서, R은 멘탄닐 또는 페닐-치환된 멘탄닐인 것을 특징으로 하는, 라미부딘 옥살레이트를 제조하는 방법.
제6항에 있어서, R은 L-멘탄닐 또는 L-8-페닐멘탄닐인 것을 특징으로 하는, 라미부딘 옥살레이트를 제조하는 방법.
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제8항에 있어서, R은 멘탄닐 또는 페닐-치환된 멘탄닐인 것을 특징으로 하는, 라미부딘을 제조하는 방법.
제8항에 있어서, R은 L-멘탄닐 또는 L-8-페닐멘탄닐인 것을 특징으로 하는, 라미부딘을 제조하는 방법.