KR101512495B1

KR101512495B1 - 혈구 감소 관련 질환 예방 및 치료용 약물을 제조하기 위한 악티게닌의 용도

Info

Publication number: KR101512495B1
Application number: KR1020137011283A
Authority: KR
Inventors: 쯔콴 자오
Original assignee: 루난 파마슈티컬 그룹 코퍼레이션
Priority date: 2010-10-08
Filing date: 2011-10-08
Publication date: 2015-04-15
Also published as: KR20130093125A; AU2011313667A1; AU2011313667B2; EP2626071A1; WO2012045282A1; JP2013542205A; EP2626071A4; US20130190394A1; CN102440986B; CN102440986A; EP2626071B1; HK1188122A1; CN103209693B; JP5744213B2; CN103209693A

Abstract

본 발명은 혈구 감소를 예방 및 치료하는 약물을 제조하기 위한 악티게닌(arctigenin)의 용도, 및 악티게닌을 함유하는 제제, 특히, 악티게닌을 함유하는 마이크로 에멀전(micro emulsion)을 제공하였다. 실험을 통해 입증된 바와 같이, 악티게닌은 화학요법 후의 백혈구 수량, 특히, 중성 과립구 수량을 현저하게 증가시키는 작용을 한다.

Description

혈구 감소 관련 질환 예방 및 치료용 약물을 제조하기 위한 악티게닌의 용도{APPLICATIONS OF ARCTIGENIN IN FORMULATING MEDICINES FOR PREVENTING OR TREATING DISEASES RELATED TO RED BLOOD CELL REDUCTION}

본 발명은 악티게닌(Arctigenin)의 의약적 용도에 관한 것으로서, 특히 혈구 감소 관련 질환을 예방 혹은 치료하는 약물을 제조하기 위한 악티게닌의 용도에 관한 것인 바, 이는 화합물의 치료 활성 분야에 속한다.

정상혈액은 대량의 세포를 포함하되, 산소를 지닌 적혈구와 감염을 방지하는 백혈구를 포함한다. 백혈구는 호중성 과립구, 호산성 과립구 및 호염기성 과립구를 포함한다. 백혈구는 골수 조혈에 의해 생성된다. 정상 혈액은 혈소판을 더 포함한다. 혈소판은 혈액 응고를 유발하는 미세한 세포 조각이다. 인체 내의 혈구는 조혈계에 의해 생성된다. 인체의 조혈계는 소량의 골수 조혈모세포 및 부동한 발육 시기의 상이한 계열의 조혈구로 구성되어 각종 물리화학 및 체내대사에 의해 생성되는 유해 요소, 예를 들어, 생물체 피로, 방사선 혹은 일부 화학요법약물에 노출되는 것에 매우 민감하여 혈구 감소로 인한 빈혈, 골수 억제 등 질환을 초래한다. 이밖에, 또한 원발성 혈구 감소, 예를 들어, 원발성 혈소판 감소성 자반증 등을 초래한다.

암환자는 상당히 오랫동안 방사선 치료와 화학요법을 위주로 하는 치료를 받아야 한다. 방사선 치료와 화학요법은 방사선과 세포독성제를 이용하여 암을 치료하는 요법이다. 그러나, 방사선 치료와 대부분 화학요법은 모두 비특이성적인 것이기에 정상적이고 급속히 분렬되는 세포에 유독하다. 다량의 방사선은 정상적이고 급속히 분렬되는 세포에 대해서도 유독하다. 때문에 화학요법과 방사선 치료를 받는 환자에 있어서 항상 각종 부작용이 따른다. 기타 정상조직도 불리한 영향을 받게 될 것이나, 골수는 화학요법 혹은 방사선 치료와 같은 이러한 증식특이성 치료에 특별히 민감하다. 골수 억제 즉 골수 중의 혈액세포가 감소되는 것이 그 부작용중의 일종인 바, 그 증상은 골수 증식 기능저하, 혈구 수치 저하, 말초혈 백혈구 저하, 호중성 과립구 감소 및/또는 혈소판 감소, 심지어 재생불량성 빈혈로서, 환자의 생활의 질, 심지어는 생명까지 위협한다.

임상적으로, 방사선 치료, 화학요법을 받는 환자는 매우 쉽게 손상을 받아 상이한 정도의 골수 억제가 수반되는데 그 증상은 말초혈 백혈구 수량 저하, 호중성 과립구 수량 저하 및/또는 혈소판 감소로 나타난다. 인체 말초혈 호중성 과립구는 백혈구 총수의 약 50% 내지 70%를 차지하고, 이의 증가와 감소는 백혈구 총수의 변화에 직접적인 영향을 미치는 바, 즉, 호중성 과립구가 증가됨에 따라 백혈구도 증가되고, 호중성 과립구가 감소됨에 따라 백혈구 총수도 감소된다. 수량적인 측면에서의 양자의 관련성은 의미상에서의 일치성으로 표현되는 바, 즉 호중성 과립구의 증가와 감소는 의미상에서 백혈구 총수의 증가와 감소와 기본적으로 일치한 것이다. 골수 억제상태에 있는 환자는 쉽게 감염될 수 있다. 호중성 백혈구와 혈소판 결핍은 항암치료 후 발병률과 사망률의 주된 원인이고 또한 항암치료에 따른 높은 비용을 초래한다.

그러나, 현재 방사선 치료와 화학요법은 여전히 종양치료에서 가장 통상적으로 사용하는 수단이다. 방사선 치료와 화학요법 후 유발하는 골수 조혈 억제 등 합병증은 이미 환자의 생활의 질에 영향을 주는 주된 원인으로 되었다. 일부 뚜렷한 치료 효과가 있는 종양치료 보조화학약물은 그 약물 자체가 사용한 뒤 비교적 많은 불량 반응을 일으키므로 환자의 고통을 가중시킨다. 수많은 의료진은 효율적이면서도 부작용이 적은 약물을 찾아내어 방사선 치료, 화학요법에 의한 손상을 방지하도록 노력해왔다.

현재, 임상에서는 골수 억제에 각종 성장인자를 공급하여 조혈구 증식을 증가시키고 있다. 근년래, 백혈구 증생 촉진약(rhGM-GSF), 과립구 세포군 촉진인자(rhG-CSF) 등 시중에 판매되고 있는 유전자 재조합의 조혈성장인자는 백혈구를 증가하는데 현저한 효과가 있지만 가격이 높아 대다수 환자들이 접수하기 힘들고, 또한 rhGM-GSF, riiG-CSF는 화학요법과 함께 사용될 수 없을 뿐만 아니라 예방을 목적으로 사용될 수도 없고 백혈구가 감소될 때에만 사용가능하며, 그렇지 않을 경우 독성부작용이 생기게 된다.

이밖에, 조혈 성장인자를 이용하는 유전자 요법, 예를 들어, IL-6, IL-3 등과 같은 유전자 요법은 아직 동물 실험 단계에 있으며. 자아 골수 이식은 대조제량 화학요법시 배합 사용되지만 반복적으로 응용하기 어렵다.

따라서, 안전하고 효율적이며 저렴한 방법을 찾아 혈구 감소, 특히, 화학요법과 방사선 치료에 의한 혈구 감소를 예방 및 치료하고, 화학요법과 방사선 치료 후의 백혈구 수량을 증가시키는 것은, 종양의 화학요법과 방사선 치료 효과를 제고시키고, 암환자 생존기를 연장하며 생활의 질을 개선함에 있어서 매우 중요한 의미가 있다.

우엉(Arctium lappa; 라틴어학명 Arctium lappal)은 국화과 우엉속 식물이다. 악틴(arctiin)과 악티게닌 (arctigenin)은 모두 우엉의 건조 성숙 과실인 우방자(Arctium lappa Linne)로부터 유래된 것이고, 악틴 활성은 미약하여 반드시 악티게닌으로 대사전환되어야만 인체에 흡수될 수 있다. 악티게닌은 인체에 직접 흡수되는 유효성분인 바, 그 구조는 하기와 같다.

현재, 일부 문헌에 악티게닌이 하기와 같은 약리적활성을 갖고 있다고 보도된 바가 있다.

1) 항염 및 면역 조절 작용;

2) 항바이러스 작용, 여기서 바이러스에는 HIV-1와 독감 바이러스가 포함됨;

3) 종양세포 사멸을 유도하는 작용;

4) 신장병, 당뇨병, 당뇨병 합병증 치료 작용;

5) 열충격반응 억제 작용;

6) 신경보호작용;

7) 혈관 확장 작용;

8) 혈소판 활성인자 길항 작용;

9) 항노인성 치매 작용;

10) K⁺ 수축 억제 작용 등.

예를들어, 문헌[Cho J Y, et al., Immunomodulatory effect of arctigenin, a lignan compound on tumor necrosis factor-α and nitric oxide production, and lymphocyte proliferation[J]. J Pharm Pharmcol. 1999; 51(1 1): 1267-1273]에서는 항염 및 면역조절작용을 갖는 악티게닌에 대해 공개하였다. 고양 등은(필자: 고양 등; 악티게닌의 체외 항독감바이러스활성. 한약, 2002, (8):724-726)에서는 항바이러스 작용을 갖는 악티게닌에 대해 공개하였다. 문헌[Kim S H, et al., Hepatoprotective dibenzylbutyrolactone lignans of Torreya nucifera against CC14-induced toxicity in primary cultured rat hepatocytes[J]. Biol Pharm Bull. 2003; 26(8): 1202-1205]에서는 종양세포사멸 유도작용을 갖는 악티게닌에 대해 공개하였다. 상기 문헌들은 인용으로서 전부 본 명세서에 삽입되었다.

이밖에, 일부 문헌에는 악티게닌의 추출분리공법에 대해 공개하였는 바, 예를 들어 문헌[Zeng Y, et al. Lack of significant modifying effect of arctiin on prostate carcinogenesis in probasin/SV40 T antigen transgenic rats[J]. Cancer Lett. 2005; 222(2): 145-151]에서는 달팽이효소로 악틴을 가수분해시켜 악티게닌을 제조하는 방법에 대해 공개하였다. 또한, "중약화학성분분리추출수첩"(P77, 양운 등이 편집, 중국 중의약출판사)에도 악티게닌의 제조방법이 보도된 바가 있고 HPLC를 거친 검출순도는 90% 이상이었다. 중국 발명특허 출원 CN101 134031A는 악티게닌의 두 가지 제조방법 및 그 정제, 연질 캡슐, 환약과 주사액의 제조방법에 대해 공개하였다. 상기 문헌은 인용으로서 모두 본 명세서에 삽입되었다.

현재, 혈구 감소, 특히, 방사선 혹은 화학품에 따른 골수 억제를 예방 혹은 치료하는 활성을 갖는 악티게닌에 대해 공개된 바가 없다.

본 발명의 목적은 기존의 혈구 감소 관련 질환, 특히, 골수 억제를 예방 혹은 치료하는 약물에 따른 흠결을 해소하고자, 혈구 감소, 특히, 방사선 혹은 화학품에 의해 유래된 골수 억제를 예방 및/또는 치료하는 약물을 제공하기 위한 것이다.

본 발명자는 장기간 악티게닌의 항암활성을 연구하고자 노력하여 다양한 연구성과를 취득하였다. 근래, 본 발명자는 더욱 진일보로 되는 심도 깊은 연구과정에서 악티게닌이 면역력을 증강시키고 조혈기능을 촉진하는 방면에서 예상하지 못한 활성이 있다는 것을 의외로 발견하였다.

상기 발견에 따르면, 본 발명의 목적은 실현가능하다. 구체적으로, 본 발명은 하기와 같은 기술방안을 포함한다.

본 발명의 일측면에 따르면, 혈구 감소 관련 질환을 예방 혹은 치료하는 약물을 제조하기 위한 악티게닌의 용도에 대해 제공하였다.

상기 "악티게닌"은 상기 구조를 갖는 화합물인 바, 추출, 생물제조 혹은 화학제조에 의해 제조될 수 있으며, 악티게닌, 이의 약학적으로 허용가능한 염 혹은 수화물이 포함된다. 본 발명의 상기 악티게닌은 악티게닌의 순도(HPLC 검출 순도)가 90% 이상, 95% 초과 혹은 98% 이상인 생물제품 혹은 화학제품이다.

본 발명의 출원일자 이전의 종래 기술에 의해 공개된 악티게닌의 제조방법은 모두 본 발명의 상기 악티게닌의 제조공법으로 이용될 수 있다. 예를들어, Zeng Y 등(상기 내용 참조)에 의해 공개된 방법 혹은 중국 발명 특허출원 CN101134031A에서 공개된 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 악티게닌의 추출 방법은 하기와 같은 단계를 포함할 수 있다.

단계 (1), 우방자 조분말을 취하고 적당량의 산을 첨가하여 pH를 산성으로 조절하여 가수분해한다.

단계 (2), 가수분해 용액을 버리고, 물로 중성이 될 때까지 우방자 수용액을 세척하고 건조시켜 산물 A를 얻는다.

단계 (3), 단계 (2)에서 얻은 산물 A를 용해시킨다.

단계 (4), 단계 (3)에서 얻은 용해액을 냉침전시켜 침전물을 제거한다(예를 들어 원심분리기를 이용).

단계 (5), 상기 청정액에서 산물 B를 얻는다.

단계 (6), 산물 B를 추출하여 순도 60% 내지 70%인 악티게닌 조추출물을 얻는다.

단계 (7), 악티게닌 조추출물을 정제(예를 들어 제조액상에서의 정제)하여 순도 99.3% 이상인 고순도 악티게닌을 얻는다.

상기 혈구 감소는 각종 원인으로 인해 유발되는 바, 예를 들면 원발성, 선천성, 혹은 방사선 혹은 화학품에 인해 유발된 혈구 감소이다. 여기에는 각종 혈구 감소가 포함되는데, 예를 들어 적혈구 감소, 혈소판 감소, 혹은 각종 백혈구 감소 등이 있다. 상기 혈구 감소와 관련된 질환은 혈구 감소로 인해 유발되거나 초래되거나 발생된 질환인데, 예를 들어, 혈소판 감소증, 골수 억제, 빈혈 및 혈구 감소와 관련된 기타 원발성 혹은 속발성 혈액병이 포함되나 이에 한하지 않는다.

본 발명에서 상기 "혈소판 감소증"은 혈소판에 생기는 결함을 특징으로 하는 질환이고, 방사선 치료 혹은 화학요법, 예를 들어, 항암약에 의해 유발되는 혈소판 감소증과 선천성혈소판 감소증이 포함되며, 예를 들어, 원발성 혈소판 감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenic purpura: ITP) 등이 포함된다. 현재, 항암약에 의해 유발되는 혈소판 상실은 화학요법 중의 속도제어단계이다. 엄중한 혈소판 감소증 환자에 있어서, 반드시 혈소판 수치가 임계값(threshold)보다 높아질 때까지 치료를 줄이거나 중지해야 한다. ?ITP 환자는 화학요법으로 인한 혈소판 감소증 환자와 같은 임상증상을 보이는 바, 또한 그외의 출혈 위험, 심지어는 생명까지 위협할 수 있는 대출혈 등 증상이 포함된다.

본 발명에서, 상기 "골수 억제"는 백혈구, 적혈구, 중성 과립구 혹은 혈소판을 포함하는 혈구가 단독으로 감소되거나 동시에 감소되는 상황을 의미하되, 그 증상은 혈구 감소 혹은 혈소판 감소이다. 건강한 골수는 매일 대량의 적혈구, 백혈구와 혈소판을 생성한다. 골수 억제에 의해, 골수로부터 생성되는 이러한 세포감소가 초래된다. 골수 억제는 백혈구 감소를 특징으로 한다. 이러한 백혈구 감소는 어느 한 치료에 의해 유발되는 것으로서 특히, 화학요법과 방사선 치료와 같은 암치료에 의해 유발된다. 바람직하게는, 본 발명에서, 상기 골수 억제의 증상은 말초혈 백혈구 수량 저하 혹은 혈소판 저하, 골수증식성 질환 혹은 재생불량성 빈혈이다. 일 실시양태에서, 상기 말초혈 백혈구 저하는 말초혈 중성 과립구 저하이다.

본 발명에서, 상기 "빈혈"은 혈구비용적(specific volume) 측정에 따른 혈액 중의 적혈구 수량, 헤모글로빈 수량 혹은 적혈구 용적률이 정상값보다 낮을 때 발생하는 상황이다. 발병원인에 따라 빈혈을 분류할 수 있되, 예를 들어, 재생불량성 빈혈, 용혈성 빈혈, 철결핍성 빈혈 및 겸상적혈구 빈혈 등으로 분류할 수 있으나 이에 한하지 않는다. 여기서, 재생불량성 빈혈의 특징은 적혈구 재생결핍과 치료에 대한 저항인 것이다. 이러한 환자에 있어서, 골수모양세포, 적혈구계 통과 혈소판에 형성된 모세포군이 현저하게 줄어들어 각종 혈구 감소를 초래한다.

상기 질환의 기초적 병리학증상과 임상증상은 일치한 바, 모두 혈구 감소인 것을 알 수 있다. 따라서, 면역력증강, 조혈기능을 촉진하는 방면에서의 본 발명의 악티게닌 활성에 기반하여, 본 발명에서는 혈구 감소 관련 질환을 예방 혹은 치료하는 약물을 제조하기 위한 악티게닌의 용도를 제공하였다.

상기 혈구 감소는 혈소판 감소와 백혈구 감소인 것이 바람직하고, 특히, 중성 과립구 감소이다. 상기 질환에 있어서, 본 발명은 악티게닌을 골수 억제를 예방 혹은 치료하는데 사용하는 것이 바람직하고, 방사선 혹은 화학품으로 인한 골수 억제를 예방 혹은 치료하는데 사용되는 것이 더욱 바람직하다.

따라서, 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용에서, 본 발명은 방사선 혹은 화학품으로 인한 골수 억제를 예방 혹은 치료하는 약물에 있어서의 악티게닌의 용도를 제공하였다.

상기 "방사선"은 방사선 치료과정에서 접하게 되는 방사선, 혹은 작업, 환경 등 기타원인으로 인해 접하기 되는 방사선일 수 있다. 상기 용도에서의 상기 방사선은 방사선 치료과정에서 접하게 되는 방사선, 예를 들어, 암치료 과정에서 받게되는 방사선 치료과정 중의 방사선인 것이 바람직하다.

상기 "화학품"은 혈구 감소를 초래하는 임의의 약물 혹은 화학시약일 수 있다. 일 실시양태에서, 상기 용도에서의 상기 화학품은 암치료용 화학요법약물이다. 상기 화학요법약물은 알킬화제계 약물, 항대사제계 약물, 항생제계 약물, 식물계 약물과 호르몬계 약물 등을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 여기서, 알킬화제계 약물은 질소 머스터드(Nitrogen mustards), 시클로포스파미드(cyclophosphamide), 티오테파(Thiotepa), 로무스틴(Lomustine), 미레란(Myleran), 다카바진(Dacarbazine), 프로카바진(Procarbazine) 등을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 상기 항대사제계 약물은 플루오로우라실(Fluorouracil)(5-FU), 테가푸르(Tegafur)(FT-207), 테가디푸르(Tegadifur, FD-1), 합성테가푸르(Compound Tegafur)(UFT), 후트론(Furtulon)(5-DFUR), 메토트렉세이트(Methotrexate)(MTX), 아미노프테린(Aminopterin), 사이토신 아라비노사이드(cytosine arabinoside)(Ara-c), 사이클로시티딘(Cyclocytidine), 사이클로시티딘 하이드로크로리드(Cyclocytidine hydrochloride), 하이드록시카바마이드(Hydroxycarbamide)(HU), 이노신 다이알데하이드(inosine dialdehyde), 아데노신 다이알데하이드(adenosine dialdehyde), 과나졸(guanazole), 6-머캅토퓨린(6-Mercaptopurine)(6-MP)을 포함하지만, 이들로 한정되지 않고; 상기 항생제계 약물은 페니실린(penicillin)계 항생제, 세팔로스포린(cephalosporins)계 항생제, 아미노글라이코사이드(Aminoglycosides)계 항생제, 매크로라이드계 항생제(macrolides antibiotics), 술파닐아미드(sulfonamide)계 항생제, 퀴놀론(quinolone)계 항생제, 푸란(furane)계 항생제를 포함하지만 이들로 한정되지 않으며; 상기 식물계 약물은 식물에서 유래된 약물인 바, 종래의 중약합성계 약물 및 현대 추출분리수단으로 식물에서 얻어낸 유효부분 혹은 중약 단체 약물을 포함하고, 상기 호르몬계 약물은 글루코코르티코이드(Glucocorticoid), 부신피질 스테로이드(adrenal corticosteroid), 노르에피네프린(Norepinephrine), 황체호르몬제(progestogen), 에스트로겐(estrogen), 안드로겐(androgen) 등을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.

바람직하게는, 상기 암치료용 화학요법약물은 도세탁셀(Docetaxel), 이매티닙 메실산염(imatinib mesylate) 혹은 그들의 조합이지만 이들에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 제2측면에 따르면, 혈구 감소와 관련된 질환을 예방 혹은 치료하기 위한 방법에 대해 공개하였고, 상기 방법은 상기 예방 혹은 치료가 필요한 시험대상에 유효량의 악티게닌을 사용하는 단계를 포함한다.

상기 "시험대상"은 포유동물일 수 있되, 예를 들어, 사람이다.

상기 "유효량"은 치료 유효량과 예방 유효량을 포함한다. "치료 유효량"은 투여와 필요한 시기에 바라는 치료 결과를 얻을 수 있는, 예를 들어, 희망하는 골수 억제 치료결과를 얻는 양을 의미한다. 여기서 상기 악티게닌의 치료 유효량은 투여경로, 치료상황의 성질, 환자의 연령, 성별, 체중과 건강상태 및 방사선 치료 혹은 화학요법 등 요소가 상이함에 따라 다르다고 이해해야 될 것이며, 최종적으로는 치료에 참여하는 임상의사에 의해 결정된다. 투여 방안을 조절하여 최적의 치료반응을 제공할 수 있다. 치료 유효량은 유리한 치료 작용이 임의의 독성 혹은 유해작용을 초과할 때의 양일 수도 있다. "예방 유효량"은 투여와 필요한 시기에 바라는 예방효과를 얻을 수 있는, 예를 들어, 골수조혈기능을 예방하고 보호하거나 조혈구를 유지하는 양을 의미한다. 예방성 투여는 통상적으로 질환이 발생하기 전 혹은 질환의 조기 단계에 사용되므로, 예방 유효량은 치료 유효량보다 낮을 수 있다.

혈구 감소를 예방 혹은 치료하기 위한 악티게닌의 유효량, 바람직하게는 골수 억제를 예방 혹은 치료하기 위한 악티게닌의 유효량, 특히, 방사선 혹은 화학품으로 인한 골수 억제를 예방 혹은 치료하기 위한 악티게닌의 유효량의 범위는 0.1 내지 1000㎎/㎏/d이고, 바람직하게는 1 내지 100㎎/㎏/d이며, 더욱 바람직하게는 5 내지 50㎎/㎏/d이고, 예를 들어, 10㎎/㎏/d이다.

이밖에, 본 발명에 따르면, 악티게닌은 유일한 활성성분으로서 혈구 감소 관련 질환을 예방 및/또는 치료하는데 사용될 수 있고, 바람직하게는 골수 억제를 예방 혹은 치료하는데 사용될 수 있으며, 특히, 방사선 혹은 화학품으로 인한 골수 억제를 예방 혹은 치료하는데 사용될 수 있고, 기타 약물과 병용되어 상기 예방 및/또는 치료를 진행할 수도 있다.

악티게닌과 함께 투여되는 기타약물은 백혈구 감소를 치료하는 기타 한가지 혹은 여러가지 약물(예, 비타민 B4, 류코젠, 바틸롤, 보조효소 A), 혹은 혈소판 함량을 제고하는 기타 한 가지 혹은 여러가지 약물(예, 인터류킨-II, 프리드니손과 같은 저조제량 글루코코르티코이드)일 수 있어 혈구 감소, 특히, 골수 억제를 예방 혹은 치료한다.

일 실시양태에 따르면, 본 발명의 의약용도에서 기타 약물을 함께 사용할 경우, 두가지 약물의 중량비는 환자의 병태와 증상에 따라 적당하게 조절가능하고, 기타약물과 악티게닌의 중량비의 범위는 바람직하게는 (0.005-100): 1이고, 더욱 바람직하게는 (0.005-50): 1이며, 보다 더 바람직하게는 (0.01-100): 1이고, 예를 들어, (0.05-25): 1이다.

기타 약물과 함께 사용할 수 있지만, 악티게닌은 유일한 활성성분으로서 방사선 혹은 화학품으로 인한 골수 억제를 예방 혹은 치료하는 것이 바람직하다.

악티게닌과 임의로 선택한 기타약물의 투여경로에는 위장경로와 비위장경로가 포함되고, 비위장경로에는 피하, 피내, 동맥, 정맥, 근육, 관절, 척수강내, 뇌내, 흉강, 복강내 주사 혹은 점적주사거나, 코, 볼, 설하(sublingual), 기관, 뇨도, 직장 혹은 병소 국부투여 등이 있다.

악티게닌을 사용하여 방사선 혹은 화학품으로 인한 골수 억제를 예방 혹은 치료할 경우, 악티게닌을 방사선 치료 혹은 화학요법 이전, 방사선 치료 혹은 화학요법 중이거나 이후에 사용할 수 있다. 악티게닌을 기타 약물과 병합하여 투여할 경우, 악티게닌과 기타약물을 동시에 투여할 수도 있고 순차적으로 투여할 수도 있다.

본 발명의 제3측면에 따르면, 혈구 감소 관련 질환을 예방 혹은 치료하는 제제에 대해 공개하였는 바, 이는 악티게닌과 약학적으로 허용가능한 약용보조제를 포함한다. 바람직하게, 상기 제제는 골수 억제, 특히, 방사선 혹은 화학품으로 인한 골수 억제를 예방 혹은 치료하기 위한 것이다.

본 발명에서 사용되는 "약학적으로 허용가능한 약용보조제"는 악티게닌의 생리작용을 간섭하지 않고, 인류를 포함하는 시험대상에 대해 독성이 없는 모든 물질을 의미한다.

본 발명의 제제에 사용되는 약용보조제는 해당 기술 분야의 당업자가 알고 있는 통상적인 보조제이다. 적합한 약용보조제는 이미 "약용보조제대전"(제123페이지, 사천과학기술출판사, 1993년 출판, 나명생과 고천혜 편집)에 상세히 기재된 바가 있다. 예를 들어, 마이크로 에멀전 제제를 제조하는데 통상적으로 사용되는 약용보조제는 대두유, 폴리옥시에틸렌-23-라우릴 에터, 1,2-프로판다이올, 수소화 코코글라이세라이드, 라우로일폴리에틸렌글라이콜-32-글라이세라이드, 폴리에틸렌글라이콜 3350, 홍화유, 면실유, 폴리글라이세릴-10 모노스테아레이트를 포함하지만 이들로 한정되지 않으며, 환약제제를 제조하는데 통상적으로 사용되는 약용보조제는 폴리에틸렌글라이콜 6000, 폴리에틸렌글라이콜 1000을 포함하나 이에 한하지 않고, 캡슐 제제를 제조하는데 통상적으로 사용되는 약용보조제는 유당과 옥수수 전분을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 연질 캡슐제제를 제조하는데 통상적으로 사용되는 약용 담체는 중간사슬 지방산 글라이세라이드, 폴리옥시에틸렌 피마자유, 1,2-프로판다이올 등을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.

해당 분야의 당업자는 실제 수요에 따라 적합한 약용 보조제를 사용할 수 있고, 해당분야의 공지된 방법(중국 발명특허출원 CN101134031A 참조)에 의해 본 발명의 제제를 배합할 수 있다. 상기 제제는 고체, 액체, 오일, 유제, 겔, 에어로솔, 흡입제, 스프레이제, 캡슐, 환약, 파스 및 좌약 등을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.

바람직한 실시형태에 따르면, 본 발명의 제제의 제형은 위장투여 혹은 비위장투여에 적합한 제형인 바, 바람직하게는 정제, 유제, 마이크로 에멀전 제제, 캡슐제, 환약 혹은 연질 캡슐이고, 더욱 바람직하게는 마이크로 에멀전 제제이며, 상기 마이크로 에멀전 제제의 평균입경은 15 내지 80㎚인 것이 바람직하다.

본 발명의 악티게닌은 혈구 감소와 관련된 질환, 특히, 방사선 혹은 화학품으로 인한 골수 억제를 예방 또는 치료하는 방면에서 하기와 같은 유익한 효과를 구비하지만 이것으로 제한되는 것은 아니다.

1) 암을 치료하는 동시에 백혈구 감소를 예방하고 심지어 중성 과립구의 수량을 제고함으로서, 종양의 화학요법효과를 제고시키고 암환자 생존기를 연장시키며 생활의 질을 개선할 수 있다. 악티게닌이 종양 마우스의 화학요법으로 인한 골수 억제에 대한 영향 실험에서, 악티게닌은 골수 억제를 완화시키는 예상하지 못한 효과를 가지고 있다는 것을 발견하였다. 구체적으로, 모델조에 비해, 악티게닌조의 백혈구 총수와 중성 과립구수는 모두 증가되였고 또한 매우 유의적 차이(<0.01) 혹은 유의적 차이(P<0.05)를 보였고, 아울러, 악티게닌조는 도세탁셀조와 이매티닙 메실산염조에 비해, 백혈구 총수와 중성 과립구수가 모두 대폭적으로 증가되었고 매우 유의적인 차이(P < 0.01)를 보였다.

2) 기타 약물화학요법과 동시에 사용될 수 있고 예방을 목적으로 사용될 수도 있으며, 백혈구 감소증상이 니타났을 때에만 사용되는 것이 아니라서 일정한 정도에서 부작용을 감소시켰다. 실험결과로 볼 때, 악티게닌을 항암약으로서 도세탁셀 혹은 이매티닙 메실산염과 병용되어 항종양을 실현할 때 악티게닌은 종양성장억제작용을 하는 동시에 도세탁셀 혹은 이매티닙 메실산염으로 인한 골수 억제를 완화시켰다. 이로부터 알 수 있는 바와 같이, 악티게닌은 기타 약물화학요법과 함께 사용할 수 있고 예방을 목적으로 사용될 수도 있으며 백혈구 감소증상이 니타났을 때에만 사용되는 것이 아니고 항종양률을 확보하는 동시에 골수조혈을 촉진시켜 백혈구 수량을 증가하고 중성 과립구 수량을 증가시켜, 일정한 정도에서 부작용을 감소시켰다. 표 1의 실험결과에서, 악티게닌 단독 투여조 혹은 병용 투여조의 마우스는 투여 기간에 체중이 모델조에 비해 유의적 차이가 없었고, 동물의 식이량과 생활상태에도 또한 명확한 차이가 없었다. 이는 악티게닌이 항종양약과 골수 억제 완화약으로서 뚜렷한 독성 부작용이 없다는 것을 설명한다.

3) 방사선 치료과정에서 나타나는 골수 억제에도 현저한 예방 혹은 치료작용이 있다. 4Gy 조사량으로 ⁶⁰Co를 조사한 종양 마우스의 백혈구와 혈소판에 대한 악티게닌의 영향실험(표 3)으로부터, 악티게닌은 방사선 치료에서 나타나는 골수 억제를 완화시키는 예상치 못한 효과를 가지고 있음을 알수 있다. 구체적으로, 모델조에 비해, 악티게닌조의 백혈구 총수와 혈소판 총수는 모두 증가되었고, 매우 유의적 차이(P < 0.01) 혹은 유의적 차이(P <0.05)가 있고 우방자 추출물조에 비해 유의적 차이(P < 0.05)를 보였다.

이하, 발명의 실시를 위한 구체적인 내용을 통해 본 발명에 대해 진일보로 설명하고자 한다. 본 발명은 하기 실시예로 제한되는 것은 아니다.

실시예 1: 악티게닌의 제조

(1) 우방자 1㎏을 취하여 적당량의 염산 혹은 황산을 첨가한 후 용액의 pH를 약 1.5 좌우로 제어하고, 65℃의 온도에서 6시간 가수분해시켰다.

(2) 산성 가수분해용액을 버리고, 정제수로 중성이 될 때까지 우방자 수용액을 세척한 다음, 오븐에서 80℃로 건조시켜 산물 A를 얻었다.

(3) 적당량의 에탄올로 산물 A를 용해시키고 가열환류시켜 에탄올 추출액을 얻었다.

(4) 상기 얻은 에탄올 추출액을 4℃에서 하룻밤 냉침전시키고, 튜브식 원심분리기를 사용하여 2000r/min의 회전속도로 원심분리하여 침전물을 제거하고 원심분리 후의 청정액을 수집하였다.

(5) 얻어진 청정액을 건조시켜 산물 B를 얻었다.

(6) 산물 B를 분말형태로 분쇄하고 디클로로메탄을 첨가하여 2.5시간 추출하고, 디클로로메탄 추출액을 감압 증류하여 악티게닌 순도가 65%인 악티게닌 조추출물을 얻었다.

(7) 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography: HPLC)를 통해 악티게닌 조추출물을 정제하였다.

얻은 악티게닌 조추출물을 아세토나이트릴-수용액(아세토나이트릴:물= 2:3, v/v)으로 용해시켜 여과한 후, 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하였다. 고성능 액체 크로마토그래피에 사용되는 충진제는 입경 10um인 옥타데실 실릴(Octadecylsilyl) 미립구(미국 세파, 녕파해서항륭실험기기유한회사에서 구매)이고, 유동상은 아세토나이트릴-물(아세토나이트릴:물 = 2:3, v/v)로 구성되었으며, 260㎖/min 내지 330㎖/min의 유속, 50 내지 100㎖의 시료 주입량으로 등용매 용리(isocratic elution)를 진행하고, 검출파장이 280㎚인 자외선 검출기로 온라인 검출을 하여, 악티게닌의 제조성분을 집중적으로 수집하여 악티게닌 용액을 얻었다. 악티게닌 용액을 감압 증류시켜 그중의 아세토나이트릴과 물을 제거하여 고순도의 악티게닌을 얻었다. HPLC로 악티게닌의 순도를 검출한 결과, 순도가 99.5%에 달했다.

실시예 2: 악티게닌 마이크로 에멀전 제제

악티게닌: 10g

대두유: 35g

폴리옥시에틸렌-23-라우릴에터(Polyoxyethylene-23-lauryl ether): 60g

1,2-프로판다이올(1,2-Propanediol): 30g

제조공법: 처방량의 대두유, 폴리옥시에틸렌-23-라우릴 에터, 1,2-프로판다이올을 취하여 혼합한 후 균일하게 교반한 다음, 악티게닌을 첨가하여 용해시키거나 또는 초음파 처리를 통해 용해를 가속화하여 청정액 즉 악티게닌 마이크로 에멀전 제제를 얻었다. 레이저 입경 측정기로 상기 에멀전 제제의 입경을 측정한 결과, 평균입경은 15㎚였다.

실시예 3: 악티게닌 마이크로 에멀전 제제

악티게닌: 0.lg

수소화 코코글라이세라이드(Hydrogenated Cocoglyceride): 5g

라우로일폴리에틸렌글라이콜-32-글라이세라이드(lauroyl Polyethylene glycol-32-glyceride): 20g

1,2-프로판다이올: 5g

폴리에틸렌글라이콜 3350: 20g

제조공법: 처방량의 수소화 코코글라이세라이드, 라우로일 폴리에틸렌글라이콜-32-글라이세라이드, 1,2-프로판다이올, 폴리에틸렌글라이콜 3350을 취하여 혼합한 후 균일하게 교반한 다음, 악티게닌을 첨가하여 용해시키거나 또는 초음파처리를 통해 용해를 가속화하여 청정액 즉 악티게닌 마이크로 에멀전 제제를 얻었다. 레이저 입경 측정기로 상기 에멀전 제제의 입경을 측정한 결과, 평균입경은 40㎚였다.

실시예 4: 악티게닌마이크로 에멀전 제제

악티게닌: 10g

홍화유: 35g

폴리옥시에틸렌-23-라우릴 에터: 60g

1,2-프로판다이올: 30g

제조공법: 처방량의 홍화유, 폴리옥시에틸렌-23-라우릴 에터, 1,2-프로판다이올을 취하여 혼합한 후 균일하게 교반한 다음, 악티게닌을 첨가하여 용해시키거나 또는 초음파처리를 통해 용해를 가속화하여 청정액 즉 악티게닌 마이크로 에멀전 제제를 얻었다. 레이저 입경 측정기로 상기 에멀전 제제의 입경을 측정한 결과, 평균입경은 36㎚였다.

실시예 5: 악티게닌마이크로 에멀전 제제

악티게닌: 10g

면실유: 30g

글라이세릴-10 모노스테아레이트(glyceryl-10 Monostearate) 55g

1,2-프로판다이올: 25g

제조공법: 처방량의 면실유, 글라이세릴-10 모노스테아레이트, 1,2-프로판다이올을 취하여 혼합한 후 균일하게 교반한 다음, 악티게닌을 첨가하여 용해시키거나 또는 초음파처리를 통해 용해를 가속화하여 청정액 즉 악티게닌 마이크로 에멀전 제제를 얻었다. 레이저 입경 측정기로 상기 에멀전 제제의 입경을 측정한 결과, 평균입경은 80㎚였다.

실시예6: 악티게닌마이크로 에멀전 제제

악티게닌: 2g

대두유: 30g

글라이세릴-10 모노스테아레이트: 55g

1,2-프로판다이올: 25g

제조공법: 처방량의 대두유, 글라이세릴-10 모노스테아레이트, 1,2-프로판다이올을 취하여 혼합한 후 균일하게 교반한 다음, 악티게닌을 첨가하여 용해시키거나 또는 초음파처리를 통해 용해를 가속화하여 청정액 즉 악티게닌 마이크로 에멀전 제제를 얻었다. 레이저 입경 측정기로 상기 에멀전 제제의 입경을 측정한 결과, 평균입경은 47㎚였다.

실시예 7: 악티게닌마이크로 에멀전 제제

악티게닌: 1g

대두유: 30g

글라이세릴-10 모노스테아레이트: 55g

1,2-프로판다이올: 25g

제조공법: 처방량의 대두유, 글라이세릴-10 모노스테아레이트, 1,2-프로판다이올을 취하여 혼합한 후 균일하게 교반한 다음, 악티게닌을 첨가하여 용해시키거나 또는 초음파처리를 통해 용해를 가속화하여 청정액 즉 악티게닌 마이크로 에멀전 제제를 얻었다. 레이저 입경 측정기로 상기 에멀전 제제의 입경을 측정한 결과, 평균입경은 58㎚이다.

실시예 8: 악티게닌 환약제제

악티게닌: 5.0g

폴리에틸렌글라이콜-6000: 14.5g

폴리에틸렌글라이콜-1000: 5.0g

1000알 제조

제조공법: 100메시를 초과하는 처방량의 악티게닌을 취하여, 수조에서 이미 가열용융된 처방량의 폴리에틸렌글라이콜6000, 폴리에틸렌글라이콜1000을 함유하는 혼합물에 첨가하여 균일하게 충분히 교반한 다음, 점적병에 투입하고, 95±2℃의 조건 하에서 점적하였다. 4㎖ 내지 6㎖의 다이메틸 실리콘오일(dimethyl silicone oil)이 담긴 유리 응축 칼럼(column) 내에 점적시키고 성형한 다음 꺼내어 흡수지로 흡착된 디메틸 실리콘오일을 제거하여 악티게닌 환약제제를 제조했다.

실시예 9: 악티게닌 장용 연질 캡슐제제

내용물 처방:

캡슐 외피 처방:

장용 코팅액 처방:

제조공법: 처방량의 중간사슬 지방산 글라이세라이드, 폴리옥시에틸렌 피마자유, 1,2-프로판다이올, 무수 에틸 알코올을 취하여 혼합한 후 균일하게 교반한 다음, 악티게닌을 첨가하여 용해시키거나 또는 초음파처리를 통해 용해를 가속화하여 청정 농축액 즉 악티게닌 마이크로 에멀전 농축물을 얻었다. 1:10 내지 20의 중량비로 상기 얻은 마이크로 에멀전 농축물에 물을 첨가하여 맑은 용액이 될 때까지 희석시켜 연질 캡슐 마이크로 에멀전 내용물을 얻었다. 처방량의 젤라틴, 글리세린, 정제수를 취하여 균일하게 혼합한 후 캡슐 외피로 압착 제조하고, 또 처방량의 유드라짓 L30D-55, 트라이에틸시트레이트, 탈크분말, 정제수를 취하여 균일하게 혼합하여 장용 코팅액을 제조했다. 고무로 악티게닌을 함유한 연질 캡슐마이크로 에멀전 내용물을 감싸 연질 캡슐을 제조하고, 연질 캡슐에 장용 코팅액을 도포하여 장용 연질 캡슐을 제조했다.

실시예 10: 악티게닌 캡슐제제

제조공법: 악티게닌 100g, 유당 120g과 옥수수 전분 130g을 혼합기에서 10분 내지 15분간 혼합하고 스테아르산 마그네슘 5g을 첨가하여 1분 내지 3분간 혼합한 다음 1000알 캡슐 껍질에 넣었다.

실시예 11: 악티게닌이 종양 마우스의 화학요법으로 유발된 골수 억제에 대한 영향

1. 재료

1.1 실험동물: 곤명 마우스(중국약품생물제품검정소

에서 구매, 실험동물허가증번호: SCXK II -00-0010), 암수 반반, 7주령, 18 내지 22g, 실험온도(20±1)℃, 습도 40% 내지 70%, 자유 식수로 정상 사육을 진행했다.

1.2 실험시약:

2. 방법:

마우스 복수종양 s180 세포를 37℃, 5% C0₂ 하에서 1640 배양액 중에서 통상적인 배양을 진행하며, 대수성장기에 생리식염수로 밀도가 3.0×l0⁷개/㎖인 단세포 현탁액으로 제조될 때까지 평균 2일에 한번씩 계대배양하고, 무균조건 하에서 마우스 복강 내에 주사하여 접종했다. 7일후 마우스 복강이 선명하게 붓는 것을 볼 수 있다. 이때, 마우스를 경추 파열법에 의해 희생시키고, 75% 에탄올이 담긴 비커에 넣어 2분 내지 3분간 담그었다. 소독 후의 마우스를 청정실험대에 넣고, 복부를 노출시켜 무균주사기로 복수를 취하여 무균시약병에 넣어 보관했다. 트리판블루(Trypan Blue)로 상기 복수를 계산하고, 생리식염수로 희석하여 세포수를 2.0×10⁷개/㎖로 조절한 다음, 마우스 오른쪽 겨드랑이에 접종하되 한마리 당 0.2㎖의 세포를 접종했다.

접종 후의 마우스를 매조에 10마리씩, 암수 반반으로 이하 6조로 임의로 나눴다.

제1조는 모델조: 0.9% 생리식염수 복강주사;

제2조는 도세탁셀조: 75㎎/㎡/d 도세탁셀;

제3조는 이매티닙 메실산염조: 222.2㎎/㎡/d 이매티닙 메실산염;

제4조는 악티게닌조: 10㎎/㎏/d 악티게닌;

제5조는 도세탁셀 + 악티게닌조: 75㎎/㎡/d 도세탁셀 + 10㎎/㎏/d 악티게닌;

제6조는 이매티닙 메실산염 + 악티게닌조: 222.2㎎/㎡/d 이매티닙 메실산염 + 10㎎/㎏/d 악티게닌.

도세탁셀과 이매티닙 메실산염은 미정맥주사로 투여되고, 투여용적은 각각 20㎖/㎏이다. 악티게닌은 복강주사로 투여되고 투여용적은 10㎖/㎏이다. 각 조는 매일 한번씩, 도합 10일 동안 투여한다. 실험과정에서, 동물의 식이상황, 생존상황 및 거동활동을 매일 관찰하고 매일 체중을 측정하며, 실험이 끝난 뒤 마취시켜 해부하고, 복부주정맥을 통해 피를 채집하고 일반 혈액검사를 하여 백혈구 총수, 혈소판 총수 및 중성 과립구 총수를 고찰했다.

3. 실험 결과:

표 1 악티게닌이 종양 마우스 체중에 대한 영향

표 1의 실험결과에서, 악티게닌 단독투여조 혹은 병합투여조의 마우스는 투여기간 체중이 모델조와 유의적 차이가 없다는 것을 알 수 있다. 동물의 식이량과 생활상태에도 명확한 차이가 없었다. 이는 악티게닌이 항종양제와 골수 억제 완화제로서 현저한 독성부작용이 없다는 것을 설명한다.

표 2. 악티게닌이 종양 마우스의 백혈구 중의 중성 과립구에 대한 영향

모델조와 비교하여 ^#P<0.05, ^## P <0.01 ;

도세탁셀조와 비교하여 ^*P <0.05, ^**P <0.01;

이매티닙 메실산염조와 비교하여 ^$P <0.05, ^$$P <0.01.

본 실시예의 악티게닌이 종양 마우스의 화학요법으로 유발된 골수 억제에 대한 영향실험(표 2)을 통해 알 수 있는 바와 같이, 도세탁셀조 혹은 이매티닙 메실산염조 중의 마우스의 중성 과립구 수량은 모델조보다 뚜렷이 감소되었으나 악티게닌은 예상하지 못한 골수 억제를 완화시키는 효과가 있었다. 구체적으로, 모델조에 비해, 악티게닌조의 백혈구 총수와 중성 과립구수는 모두 증가되었고, 매우 유의적인 차이(P<0.01) 혹은 유의적 차이(P<0.05)를 보였다. 아울러, 도세탁셀조와 이매티닙 메실산염조에 비해, 악티게닌조 마우스의 백혈구 총수와 중성 과립구수는 모두 대폭적으로 증가되었고 매우 유의적인 차이(P < 0.01)를 보였다.

실험결과를 통해 알 수 있는 바와 같이, 악티게닌이 항암약으로서 도세탁셀 혹은 이매티닙 메실산염과 함께 병용되어 항종양을 진행할 때, 악티게닌은 종양 성장억제 작용을 발휘하는 동시에 도세탁셀 혹은 이매티닙 메실산염에 의해 유발된 골수 억제를 완화시켰다. 이로부터 알 수 있는 바와 같이, 악티게닌은 기타 약물화학요법에 동시에 사용될 수도 있고, 예방을 목적으로 사용될 수도 있으며, 백혈구 감소증상이 나타났을 때에만 사용되는 것이 아니고 항종양률을 확보하는 동시에 골수조혈을 촉진시켜 백혈구 수량을 증가시키며, 중성 과립구 수량을 증가시켜, 일정한 정도에서 부작용을 감소시켰다. 악티게닌의 이러한 골수 억제 완화 효과는 악티게닌이 골수 중의 조혈모세포의 증생과 재생을 촉진함과 관련돤다.

실시예 12: 악티게닌이 ⁶⁰ Co 방사 마우스의 혈구수에 대한 영향

1. 재료

1.1 실험동물: 곤명 마우스(중국약품생물제품검정소에서 구매, 실험동물허가증번호: SCXK II-00-0010), 암수 반반, 7주령, 18 내지 22g, 실험온도(20±1)℃, 습도 40% 내지 70%, 자유식수로 정상사육을 진행했다.

1.2 실험 시약:

2. 방법:

정상조(마우스 10마리)를 제외하고, 기타 각 조의 마우스에 대해 4Gy 조사량으로 ⁶⁰Co 방사를 진행했다. 이때 일차적인 전신조사를 진행하며, 흡수선량은 4Gy이고, 흡수선량률은 0.88Gy/min이다. 방사 후의 제3일, 제7일, 제10일에, 각각 안와정맥에서 채혈하여 전혈구수를 검출했다. 전혈구를 연속 두번 측정하는 과정에서, 백혈구 수량이 3.0×10⁹/ℓ보다 적거나 혹은 혈소판 수량이 500×10⁹/ℓ보다 적은 마우스를 제외하고 나머지 마우스를 실험용 마우스로 사용했다.

조사 뒤, 실험요구에 부합되는 마우스를 이하 모델조, 우방자 추출물조와 악티게닌조로 매조 10마리씩 암수 반반으로 분류했다. 또한 하기와 같은 방식으로 각 조를 처리하거나 약물을 투여했다.

제1조는 정상조: 0.9% 생리식염수 복강주사, 투여용적 10㎖/㎏;

제2조는 모델조: 0.9% 생리식염수 복강주사, 투여용적 10㎖/㎏;

제3조는 우방자 추출물조: 3.5㎖/㎏/d 우방자 수 추출액 복강주사;

제4조는 악티게닌조: 10㎎/㎏/d 악티게닌 복강주사, 투여용적 10㎖/㎏;

상기 우방자 추출물의 제조방법은 하기와 같다.

(1) 우방자를 냄비에 넣고 깨끗한 물을 첨가하여 침지시켰다. (2) 30분(min) 침지시켜 우방자의 유효성분이 쉽게 달여지도록 했다. (3) 충분히 비등할 때까지 1 내지 3분 동안 급속가열한 다음, 계속하여 20 내지 0분 가열하여 농축시키고, 소독 거즈(gauze)로 여과하여 비커에 넣었다. (4) 약물을 1차 달인 후, 1차 약물과 다시 달인 약물을 균일하게 혼합함으로써 약효를 균형시켰다. 1㎏ 우방자로부터 200㎖ 수 추출액으로 제조했다.

각 조에 매일 한번씩 도합 10일 투여했다. 실험 과정에서, 동물의 식이상황, 생존 상황 및 거동 활동을 매일 관찰하고 매일 체중을 측정하며, 실험이 끝난 뒤 마취시켜 해부하고, 복부주정맥을 통해 피를 채집하고 일반 혈액 검사를 하여 백혈구 총수 및 혈소판 총수를 고찰했다.

3. 실험 결과:

표 3 악티게닌이 4Gy조사 ⁶⁰Co 마우스의 백혈구와 혈소판에 대한 영향

모델조와 비교하여 ^#P <0.05, ^##P <0.01;

우방자 추출물조와 비교하여 ^$P <0.05.

본 실시예의 악티게닌이 ⁶⁰Co로 4Gy 조사한 마우스의 백혈구와 혈소판에 대한 영향(표 3)으로부터, 악티게닌이 방사선 치료에 따른 골수 억제를 완화시키는 예상하지 못한 효과를 가지고 있음을 알수 있다. 구체적으로, 모델조에 비해, 악티게닌조의 백혈구 총수와 혈소판 총수는 모두 증가되었고, 매우 유의적인 차이(P<0.01) 혹은 유의적 차이(P<0.05)를 보였다. 또한 우방자 추출물조에 비해, 유의적 차이(P <0.05)가 있다.

실시예 13: 악티게닌이 NOD마우스의 백혈구와 혈소판에 대한 영향

비비만성 당뇨병(non-obese diabetic: NOD) 마우스는 매우 큰 마우스 품종인 바, NOD/Scid 마우스, NOD/Ltj 마우스 등이 포함된다. 풍의 등(풍의

, 소지견

, 서세재

등, 제혈 거대핵세포의 체외증폭[J]. 중국의학원 과학원 학보, 2005(2): 199-204)은 혈소판 형성인자(Thrombopoietin: TPO), 인터류킨(interleukin)-II(IL-II)과 헤파린(Heparin)용 제혈 CD34+ 세포를 연합하여 거대핵세포를 정향증폭시켰다. 증폭 7일째인 거대핵세포(농도: 5×10⁶)를 방사선으로 전처리된 NOD/SCID 마우스에 정맥주사하여 혈소판 및 백혈구의 회복을 현저하게 가속화할 수 있을 뿐만 아니라 마우스의 생존율을 제고시킬 수 있다. 본 실험에서 사용된 NOD/Ltj 마우스는 면역계 이상 마우스인 바, 그 혈소판과 백혈구는 일반 마우스에 비해 현저하게 낮다.

1. 재료

1.1 실험동물: NOD/Ltj 마우스(북경유통리화실험동물기술유한회사

)에서 구매, 실험동물허가증 SCXK(북경) 2006-0009); 암컷; 5주령; 16 내지 20g, 52마리.

1.2 실험시약:

인터류킨, 북경 교신주바이오기술유한회사

에서 구매

넴뷰탈(Nembutal)(펜토바비탈 나트륨), 상해광풍화학시약유한회사

에서 구매

악티게닌, 실시예 1의 공법으로 제조, 순도 99.3%.

2. 조 분류와 표기:

적응성 사양을 1주일 거친 후, 5주령의 건강한 NOD 마우스를 4개 조로 임의로 분류했다.

I조는 모델 대조조이고 도합 13마리.

II조는 양성대조군이고 도합 13마리이며, 매일 위내 투여로 인터류킨 10.0 ㎎/㎏을 투여한다.

III조는 악티게닌 저조제량조(Low-dose Arctigenin Group)이고 도합 13마리이며, 매일 위내 투여로 악티게닌 30 ㎎/㎏을 투여한다.

IV조는 악티게닌 고조제량조(High-dose Arctigenin Group)이고 도합 13마리이며, 매일 위내 투여로 악티게닌 60 ㎎/㎏을 투여한다.

각 투여조에 매일 한번씩 연속 15일 투여했다. 투여정지 후 동물를 마취시키고(3% 넴뷰탈, 복강주사, 0.1 내지 0.15㎖/마리), 복부주정맥에서 1㎖ 채혈하여 항응고관에 넣고 일반 혈액 검사를 진행했다.

표 4: 악티게닌이 NOD 마우스의 백혈구와 혈소판에 대한 영향

모델조와 비교하여, ^#p<0.05, ^##p<0.01;

인터류킨조와 비교하면, ^$p<0.05, ^$$p<0.01.

표 4에 표시된 바와 같이, 악티게닌 고조제량조와 악티게닌 저조제량조의 백혈구 수량과 혈소판 수량은 모두 모델조보다 현저하게 많아 뚜렷한 치료작용을 나타내었다. 혈소판 감소를 저해하는 양성대조약 인터류킨조와 비교할 때, 백혈구 수량을 증가하는 방면에서 뚜렷한 우세를 보일 뿐만 아니라(p<0.05), 혈소판의 수량을 현저하게 증가할 수도 있고, 생물체의 면역능력을 제고할 수 있는 바, 특히, 악티게닌 고조제량조의 백혈구와 혈소판을 증가하는 능력은 기타 각 조에 비해 매우 뚜렷한 우세가 있다.

본 발명은 악티게닌의 심도깊은 개발 이용을 위하여 새로운 수단을 발굴하였고 화학요법 혹은 방사선 치료의 독성부작용을 해소하기 위해 이상적인 천연약물을 제공하여 우수한 경제적 효익과 사회적 효익을 창출할 수 있다.

이상 명세서에 제시된 모든 출판물은 인용으로서 본 명세서에 삽입된다. 발명의 실시를 위한 최선의 형태를 참조하여 본 발명을 서술하였지만, 발명은 상기 발명의 실시를 위한 구체적인 형태로 한정되지 않는다. 실제상으로, 본 발명을 실시하기 위한 상기 형태에 대한 각종 수정은 생물화학과 생물공정 혹은 해당 분야의 당업자에 있어서 자명한 것이므로 본 발명의 특허청구범위의 범주에 속할 것이다.

Claims

악티게닌을 포함하는, 방사선 혹은 화학품에 의해 유발된 골수 억제의 예방 또는 치료용 제제.
제1항에 있어서, 상기 화학품은 암을 치료하기 위한 화학요법의 약물인 것을 특징으로 하는 제제.
제2항에 있어서, 상기 화학요법 약물은 도세탁셀 및 이매티닙 메실산염으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 제제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 골수 억제는 말초혈 백혈구 저하, 혈소판 저하, 골수증식성 질환 또는 재생불량성 빈혈인 것을 특징으로 하는 제제.
제4항에 있어서, 상기 말초혈 백혈구 저하는 말초혈 중성 과립구 저하인 것을 특징으로 하는 제제.
제1항에 있어서, 악티게닌이 유일한 활성성분으로 사용되는 것을 특징으로 하는 제제.
악티게닌 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 방사선 또는 화학품에 의해 유발된 골수 억제의 예방 또는 치료용 제제로서, 상기 제제는 15 내지 80㎚의 평균 입경을 가지는 마이크로에멀전 제제인 제제.
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