CN105343140A - 一种麻黄根总有效部位及其制备方法和抗癌应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种麻黄根总有效部位及其制备方法和抗癌应用，属于制药技术领域。提取：用浓度为0～95％的乙醇作溶剂，将麻黄根加入重量3～5倍的该溶剂中进行回流提取，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩至无醇味为止。分离：将浓缩液加温水稀释，转移置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取2次，分取乙酸乙酯液，回收溶剂至小体积，转移置不锈钢盘中，继续浓缩至稠膏状，减压干燥，得粗提物。纯化：用浓度为30～70％的乙醇作溶剂，将粗提物加入重量5～10倍的该溶剂中搅拌10～30分钟，滤过，滤液水浴浓缩至稠膏，减压干燥，制成麻黄根总有效部位。有益效果是填补了制备麻黄根有效部位的空白并扩展了其在医药领域的应用范围，从而提高了该类制剂在国际市场的竞争力。

Description

一种麻黄根总有效部位及其制备方法和抗癌应用

技术领域

本发明属于制药技术领域，涉及麻黄根总有效部位及其制备方法、以其为原料制得的新药及其在抗癌药物中的用途。

背景技术

麻黄根为麻黄科植物草麻黄(EphedrasinicaStapf)或中麻黄(EphedraintermediaSchrenketC.A.Mey.)的干燥根和根茎，具有固表止汗的功效，常用于治疗自汗、盗汗。

国内外研究结果表明，麻黄根中主要含有生物碱类、黄酮类、酯类、糖苷类、有机酸类等化学成分,且具有降压、止汗、降低心率、抗炎等广泛的生理活性。

目前，从麻黄根中分离得到的黄酮类化合物主要有麻黄宁A、B、C、D、E(MahuanninA、B、C、D、E)、麻黄酚(EphedranninA)、麻黄根素A、B(EphedranninA、B)、芹菜素(Apigenin)、山柰酚(Kaempferol)、槲皮素(Quercetin)、二氢槲皮素(Dihydroquercetin)、3’,4’,5,7-四羟基二氢黄酮(3’,4’,5,7-tetrahydroxyflavanone)、儿茶素[(+)-catechin]、表儿茶素[(-)-epi-catechin]、阿夫儿茶精(Afzelechin)、表阿夫儿茶精[(-)-epi-afzelechin]。图1是麻黄根中黄酮类化合物的结构式。

目前关于麻黄根中有效成分的研究多集中在单体化合物方面，而对其总有效部位及其制备方法的研究尚属空白，关于其体内抗肿瘤试验更是无人尝试。本发明将填补上述空白，为麻黄根药材的综合开发利用提供更广阔的思路。

发明内容

本发明的目的是提供一种麻黄根总有效部位及其制备方法，还提供用麻黄根总有效部位以及药学上可接受的载体或赋形剂制备的各种新药，还提供上述麻黄根总有效部位在抗癌药物中的用途。

该麻黄根总有效部位是从植物麻黄根中提取获得的，该总有效部位中总黄酮含量为25％～60％。

本发明提供的麻黄根总有效部位的制备方法包括下列步骤：

(1)提取：用浓度为0～95％的乙醇作溶剂，将麻黄根加入重量3～5倍的该溶剂中进行回流提取，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩至无醇味为止。

(2)分离：将(1)项下的浓缩液加温水稀释，转移置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取2次，分取乙酸乙酯液，回收溶剂至小体积，转移置不锈钢盘中，继续浓缩至稠膏状，减压干燥，得粗提物。

(3)纯化：用浓度为30～70％的乙醇作溶剂，将粗提物加入重量5～10倍的该溶剂中搅拌10～30分钟，滤过，滤液水浴浓缩至稠膏，减压干燥，制成麻黄根总有效部位。

本发明还提供用麻黄根总有效部位以及药学上可接受的载体或赋形剂制备的各种新药。这些新药包括口服给药制剂、舌下片、栓剂、泡腾片、注射剂等。口服给药制剂包括口服固体制剂、口服液体制剂。口服固体制剂可以是片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、锭剂等。这些制剂中，除包括本发明总有效部位外，还可以任选含有药学上可接受的填充剂、助流剂、润滑剂、着色剂、矫味剂等。这些制剂还可以根据需要制备成缓释或控释制剂。口服液体制剂可以是溶液、混悬液、乳化液等。这些制剂中，除包括本发明总有效部位外，还可以任选含有药学上可接受的溶剂、助溶剂、增溶剂、助悬剂、乳化剂、表面活性剂、矫味剂等。

本发明提供的以麻黄根总有效部位为原料制得的新药不仅包括单方制剂，还包括在复方制剂中添加麻黄根总有效部位作为活性成分的药物。

本发明提供的以麻黄根总有效部位为原料制得的新药，其用途涉及预防和抑制肿瘤细胞生长方面。

本发明的有益效果是：填补了制备麻黄根总有效部位的空白并扩展了其在医药领域中的应用范围(抗癌)，从而提高了该类中药制剂在国际市场的竞争力。

说明书附图

图1是本发明背景技术中的结构式。

具体实施方式

下列具体的实施例是对本发明进行更加详细的描述，但不对本发明的范围构成任何限制。

实施例1：麻黄根总有效部位的制备

取麻黄根药材2kg，酌予碎断，以10kg95％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇后浓缩至体积约为800ml，加温水稀释至2000ml，转移置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次2000ml，分取乙酸乙酯液，回收溶剂至约200ml，转移置不锈钢盘中，继续浓缩至稠膏状，减压干燥，得粗提物63g。取粗提物，置烧杯中，加30％乙醇500ml搅拌20分钟，滤过，滤液水浴浓缩至稠膏，减压干燥，制成麻黄根总有效部位24g。所制得的麻黄根总有效部位中总黄酮含量为46％。

实施例2：麻黄根总有效部位的制备

取麻黄根药材2kg，酌予碎断，以8kg70％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇后浓缩至体积约为1000ml，加温水稀释至2000ml，转移置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次2000ml，分取乙酸乙酯液，回收溶剂至约200ml，转移置不锈钢盘中，继续浓缩至稠膏状，减压干燥，得粗提物81g。取粗提物，置烧杯中，加70％乙醇810ml搅拌30分钟，滤过，滤液水浴浓缩至稠膏，减压干燥，制成麻黄根总有效部位48g。所制得的麻黄根总有效部位中总黄酮含量为28％。

实施例3：麻黄根总有效部位的制备

取麻黄根药材2kg，酌予碎断，以6kg50％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇后浓缩至体积约为1000ml，加温水稀释至2000ml，转移置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次2000ml，分取乙酸乙酯液，回收溶剂至约200ml，转移置不锈钢盘中，继续浓缩至稠膏状，减压干燥，得粗提物98g。取粗提物，置烧杯中，加50％乙醇490ml搅拌10分钟，滤过，滤液水浴浓缩至稠膏，减压干燥，制成麻黄根总有效部位34g。所制得的麻黄根总有效部位中总黄酮含量为35％。

实验例4：麻黄根总有效部位对S₁₈₀荷瘤小鼠的抑瘤作用

1.材料

1.1动物昆明种小鼠，体重18～22g，购自长春生物制品研究所有限责任公司，SPF级，生产单位动物质量许可证号：SCXK-(吉)2011-0003。昆明种小鼠，体重18～22g，购自辽宁长生生物技术有限公司，SPF级，生产单位动物质量许可证号：SCXK-(辽)2010-0001。

1.2饲料小鼠颗粒饲料，原料组成:玉米、鱼粉、豆粕、碳酸氢钙、面粉、石粉等组成。生产商：长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。生产许可证：SCXK-(吉)2003-0008。生产日期：20141201。

1.3饮水小鼠饮水使用凯弗隆科技有限公司生产的KFL-400纯水机制备的纯净水。

1.4试验环境小鼠在吉林省中医药科学院实验动物室屏障系统内饲养，实验动物使用许可证号：SYXK(吉)2010-0006。动物室温度：19～23℃，相对湿度45～65％，光照：12小时明，12小时暗。

1.5瘤株小鼠S₁₈₀瘤株购自吉林省肿瘤医院肿瘤防治研究所。

1.6药物麻黄根总有效部位，砖红色粉末，由吉林省中医药科学院新药中心提供，实验时用0.5％羧甲基纤维素钠配制。环磷酰胺为江苏恒瑞医药股份有限公司生产，产品批号13032625。

1.7试剂盒肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、B细胞淋巴因子2(BcL-2)、BcL-2相关X蛋白(BAX)、P21蛋白和P53蛋白酶免试剂盒为美国RD生物科学公司产品，上海源叶生物科技有限公司分装，批号：20150102B。

1.8仪器JA2003B千分之一天平，上海越平科学仪器有限公司产品。JJ200精密电子天平，Y-2000型电子天平，均为常熟双杰测试仪器厂制造。S70-CD-1FD超净工作台和YXQ-SG46-280S不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器，均为上海博讯实业有限公司医疗设备厂产品。

1.9统计方法结果均经t检验处理，用均数±标准差表示。

2.试验方法和结果

2.1预试验

2.1.1方法：取昆明种雌性小鼠(辽宁)，每只小鼠用强力碘和酒精消毒皮肤，于右前肢皮下接种S₁₈₀细胞瘤液0.2ml，24小时后，随机分组。对照组灌胃10ml/kg0.5％羧甲基纤维素钠，阳性药组隔日腹腔注射环磷酰胺20mg/kg，麻黄根总有效部位组灌胃给予麻黄根总有效部位100.0、50.0mg/kg，每日一次，连续8日，末次给药后1小时处死小鼠，称体重，剥瘤块称重，照相，计算抑瘤率。结果见表1。

表1麻黄根总有效部位对S₁₈₀肉瘤的抑制作用(预实验)

2.1.2试验结果

由表1结果可知，麻黄根总有效部位100.0、50.0mg/kg灌胃给药对S₁₈₀小鼠肉瘤的抑制率分别为33.94、8.92％，其中100.0mg/kg组与对照组比较有明显差异(P<0.05)。试验结果表明，麻黄根总有效部位100.0mg/kg组对S₁₈₀小鼠肉瘤的生长有明显的抑制作用。

2.2正式试验

2.2.1方法：取昆明种雌性小鼠(长春)，每只小鼠用强力碘和酒精消毒皮肤，于右前肢皮下接种S₁₈₀细胞瘤液0.2ml(瘤细胞数在2×10⁶～2.2×10⁶范围内)，24小时后，随机分组。对照组灌胃10ml/kg0.5％羧甲基纤维素钠，阳性药组隔日腹腔注射环磷酰胺20mg/kg，麻黄根总有效部位组灌胃给予麻黄根总有效部位400.0、200.0mg/kg，每日一次，连续10日。末次给药后1小时，称体重，眼睛脉采血，离心，取血清，用酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、B细胞淋巴因子2(BcL-2)、BcL-2相关X蛋白(BAX)、P21蛋白和P53蛋白含量；剥瘤块称重，照相，计算抑瘤率。结果见表2～5。

表2麻黄根总有效部位对S₁₈₀肉瘤的抑制作用(正式试验)

表3麻黄根总有效部位对荷S₁₈₀小鼠血清中TNF-α和VEGF的影响

表4麻黄根总有效部位对荷S₁₈₀小鼠血清中BcL-2和BAX的影响

表5麻黄根总有效部位对荷S₁₈₀小鼠血清中P53和P21的影响

2.2.2试验结果

由表2结果可知，麻黄根总有效部位400.0、200.0mg/kg灌胃给药对S₁₈₀小鼠肉瘤的抑制率分别为41.41、38.78％，400.0、200.0mg/kg组与对照组比较有显著差异(P<0.001，P<0.01)。试验结果表明，麻黄根总有效部位400.0、200.0mg/kg组对S₁₈₀小鼠肉瘤的生长有显著的抑制作用。

由表3结果可知，麻黄根总有效部位400.0mg/kg灌胃给药，能明显降低荷S₁₈₀小鼠肉瘤血清中肿瘤坏死因子-α、血管内皮生长因子含量，与对照组比较有明显差异(P<0.05)。

由表4结果可知，麻黄根总有效部位400.0、200.0mg/kg灌胃给药，能显著降低荷S₁₈₀小鼠肉瘤血清中BcL-2相关X蛋白(BAX)、P21蛋白和P53蛋白含量，与对照组比较有显著差异(P<0.01，P<0.001)。

由表5结果可知，麻黄根总有效部位400.0、200.0mg/kg灌胃给药，对荷S₁₈₀小鼠肉瘤血清中B细胞淋巴因子2(BcL-2)含量无明显影响，与对照组比较无明显差异(P>0.05)。

3.试验结论

麻黄根总有效部位灌胃给药，对小鼠S₁₈₀肉瘤的生长有明显的抑制作用，其作用机制与降低TNF-α、VEGP、BAX、P53、P21含量有关。

Claims (3)

1.一种麻黄根总有效部位，其特征在于：该总有效部位是从麻黄科植物草麻黄(Ephedrasinica)中提取获得的，该总有效部位中总黄酮含量为25％～60％。

2.如权利要求1所述的麻黄根总有效部位的制备方法，包括下列步骤：

(1)提取：用浓度为0～95％的乙醇作溶剂，将麻黄根加入重量3～5倍的该溶剂中进行回流提取，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩至无醇味为止。

(2)分离：将(1)项下的浓缩液加温水稀释，转移置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取2次，分取乙酸乙酯液，回收溶剂至小体积，转移置不锈钢盘中，继续浓缩至稠膏状，减压干燥，得粗提物。

(3)纯化：用浓度为30～70％的乙醇作溶剂，将粗提物加入重量5～10倍的该溶剂中搅拌10～30分钟，滤过，滤液水浴浓缩至稠膏，减压干燥，制成麻黄根总有效部位。

3.如权利要求1所述的麻黄根总有效部位在抗癌药物中的应用。