CN113670843A - 一种草麻黄根单宁提取工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种草麻黄根单宁提取工艺，包括以下步骤：（1）单宁含量测定条件优化：确定最佳测定条件；（2）绘制标准曲线：绘制儿茶素标准曲线，用于单宁含量的测定；（3）单因素实验：确定各影响因素最优值；（4）正交实验：确定最佳工艺参数；（5）草麻黄根单宁提取工艺。本发明改进了单宁含量测定方法，对草麻黄根单宁含量测定提供操作简单、快捷的方法。对草麻黄根单宁乙醇浸提提供了主要影响因素的工艺最佳参数，能有效的提取出草麻黄根单宁，减少生产过程中的浪费，并且大幅度提高了单宁含量。
Description
技术领域
本发明涉及单宁提取方法技术领域，具体为一种草麻黄根单宁提取工艺。
背景技术
草麻黄根是草麻黄的干燥根及根茎，有固表止汗之功效，在《中国药典》中记录性甘味平，功能主治为止汗，用于自汗，盗汗。草麻黄根中含有缩合单宁（又称原花青素），单宁生物活性强、利用价值高，可用于医药、保健品、化妆品、抗菌材料等多个领域，单宁除具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、止血、防血管扩张等作用，其应用领域涉及畜牧业、农业、食品等多个领域，这也是我国国民经济中不可或缺的产品，具有重要的应用价值，因单宁有着活泼的化学性质，其潜在的用途十分广阔，而我国单宁资源丰富，品种繁多，有赖于今后的研究和开发。
目前，缺少易操作、方便、快捷、经济的草麻黄根中单宁含量测定方法及提取方法。
因此，需要探索一种操作方便、适合工业化生产、成本低、水溶性好的草麻黄根单宁含量测定方法及提取方法物提取工艺。
发明内容
本发明的目的在于提供一种草麻黄根单宁提取工艺，具备能够高效、方便、快捷、经济的测定草麻黄根单宁含量，极具应用前景的优点，解决了无法筛选出草麻黄根单宁提取工艺的最佳参数，操作繁琐的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种草麻黄根单宁提取工艺，包括以下步骤：
（1）单宁含量测定条件优化：确定最佳测定条件，分别确定检测波长、香草醛-甲醇溶液浓度、盐酸-甲醇溶液浓度、显色时间，4种影响因素的最优值；
（2）绘制标准曲线：以儿茶素的质量浓度mg/mL为纵坐标和吸光值A为横坐标绘制标准曲线，用于单宁含量的测定。
（3）单因素实验：确定5种影响因素最优值，对不同有机溶剂、乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间，5种影响因素进行单因素实验，以单宁含量为指标，确定各影响因素的最优值；
（4）正交实验：以乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间，4种影响因素的最优值为依据各选出3个水平，通过4因素3水平为条件进行正交实验，确定最佳提取工艺参数；
（5）草麻黄根单宁提取工艺：取草麻黄根粉碎，过16目筛，取一定量草麻黄根粉以乙醇浓度为50%、料液比为1：45（g：mL）、提取温度为70℃和提取时间为120min工艺参数提取单宁。
一种草麻黄根单宁提取工艺，所述（1）反应条件优化具体步骤如下：
①香草醛-盐酸显色反应：准确吸取1mL儿茶素标准液，置于试管中，加入2mL 2%香草醛-甲醇溶液，再加入2mL 40%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，以试剂空白为参比，在选定波长处测定其吸光值。
②检测波长确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，按①试验方法显色后，在波长400～550nm区间，测定各波长处吸光值，绘制吸光度—波长曲线。
③香草醛-甲醇溶液浓度的确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，分别加入到30个试管中，分别加入2mL 1%～20%香草醛-甲醇溶液，分别再加2mL 40%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，在波长为500nm处测定吸光值，绘制吸光度—香草醛溶液浓度曲线。
④盐酸-甲醇溶液浓度的确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，分别加入到12个试管中，分别加入2mL 10%香草醛-甲醇溶液，分别再加2mL 10%～100%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，在波长为500nm处测定吸光值，绘制吸光度—盐酸溶液浓度曲线。
⑤显色时间的确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，置于试管中，加入2mL 10%香草醛-甲醇溶液，再加2mL 100%盐酸-甲醇溶液混匀，显色5min～60min后，在波长为500nm处测定吸光值，绘制吸光度—显色时间曲线。
一种草麻黄根单宁提取工艺，所述（2）中儿茶素为标准品绘制标准曲线具体步骤如下：
①儿茶素标准溶液制备：准确称取2.95mg儿茶素标准品溶于甲醇定容至10mL得0.295mg/mL儿茶素溶液，倍比稀释成0.148mg/mL、0.074mg/mL、0.037mg/mL、0.018mg/mL浓度的儿茶素溶液；
②儿茶素反应体系：取1mL标准溶液，加2mL 10%香草醛-甲醇溶液，再加2mL 100%盐酸，避光静置15min，测定吸光值；
③线性方程：根据测定结果绘制出儿茶素标准曲线，线性方程为y=0.0245×x-0.0045，R2=0.9993，式中，纵坐标为儿茶素的质量浓度（y），横坐标为吸光值（x）。
优选的，所述（2）中单宁含量（mg/g）=（C×V×N）/W，式中，C为草麻黄根样品中单宁质量浓度（mg/mL），V为提取液体积（mL），N为稀释倍数，W为称取的草麻黄根粗粉质量（g）。
一种草麻黄根单宁提取工艺，所述（3）中草麻黄根单宁提取工艺步骤如下：
①草麻黄根粗粉制备：取草麻黄根，干燥并粉碎成粗粉，过16目筛，得草麻黄根粉阴凉处存放备用；
②不同有机溶剂提取：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加10mL水、60%甲醇、60%乙醇、60%丙酮混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
③不同乙醇浓度提取：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加10mL 20%～100%乙醇混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
④不同料液比提取：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加5mL～25mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
⑤不同提取温度：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加20mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于25～70℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
⑥不同提取时间：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加20mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于70℃恒温水浴30min～240min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1、本发明改进了单宁含量测定方法，对草麻黄根单宁含量测定提供操作简单、快捷的方法；
2、本发明对草麻黄根单宁乙醇提供了主要影响因素的工艺最佳参数，能有效的提取出草麻黄根单宁，减少生产过程中的浪费，并且大幅度提高了单宁含量。
附图说明
图1是本发明的吸光度—波长曲线；
图2是本发明的吸光度—香草醛溶液浓度曲线；
图3是本发明的吸光度—盐酸溶液浓度曲线；
图4是本发明的吸光度—显色时间曲线；
图5是本发明的儿茶素标准曲线图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-5，一种草麻黄根单宁提取工艺，包括以下步骤：
（1）单宁含量测定条件优化：确定最佳测定条件，分别确定检测波长、香草醛-甲醇溶液浓度、盐酸-甲醇溶液浓度、显色时间，4种影响因素的最优值；
（2）绘制标准曲线：以儿茶素的质量浓度mg/mL为纵坐标和吸光值A为横坐标绘制标准曲线，用于单宁含量的测定。
（3）单因素实验：确定5种影响因素最优值，对不同有机溶剂、乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间，5种影响因素进行单因素实验，以单宁含量为指标，确定各影响因素的最优值；
（4）正交实验：以乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间，4种影响因素的最优值为依据各选出3个水平，通过4因素3水平为条件进行正交实验，确定最佳提取工艺参数；
（5）草麻黄根单宁提取工艺：取草麻黄根粉碎，过16目筛，取一定量草麻黄根粉以乙醇浓度为50%、料液比为1：45（g：mL）、提取温度为70℃和提取时间为120min工艺参数提取单宁。
一种草麻黄根单宁提取工艺，（1）反应条件优化具体步骤如下：
①香草醛-盐酸显色反应：准确吸取1mL儿茶素标准液，置于试管中，加入2mL 2%香草醛-甲醇溶液，再加入2mL 40%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，以试剂空白为参比，在选定波长处测定其吸光值。
②检测波长确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，按①试验方法显色后，在波长400～550nm区间，测定各波长处吸光值，绘制吸光度—波长曲线。
③香草醛-甲醇溶液浓度的确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，分别加入到30个试管中，分别加入2mL 1%～20%香草醛-甲醇溶液，分别再加2mL 40%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，在波长为500nm处测定吸光值，绘制吸光度—香草醛溶液浓度曲线。
④盐酸-甲醇浓度的确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，分别加入到12个试管中，分别加入2mL 10%香草醛-甲醇溶液，分别再加2mL 10%～100%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，在波长为500nm处测定吸光值，绘制吸光度—盐酸溶液浓度曲线。
⑤显色时间的确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，置于试管中，加入2mL 10%香草醛-甲醇溶液，再加2mL 100%盐酸-甲醇溶液混匀，显色5min～60min后，在波长为500nm处测定吸光值，绘制吸光度—显色时间曲线。
一种草麻黄根单宁提取工艺，（2）中儿茶素为标准品绘制标准曲线具体步骤如下：
①儿茶素标准溶液制备：准确称取2.95mg儿茶素标准品溶于甲醇定容至10mL得0.295mg/mL儿茶素溶液，倍比稀释成0.148mg/mL、0.074mg/mL、0.037mg/mL、0.018mg/mL浓度的儿茶素溶液；
②儿茶素反应体系：取1mL标准溶液，加2mL 10%香草醛-甲醇溶液，再加2mL 100%盐酸，避光静置15min，测定吸光值；
③线性方程：根据测定结果绘制出儿茶素标准曲线，线性方程为y=0.0245×x-0.0045，R2=0.9993，式中，纵坐标为儿茶素的质量浓度（y），横坐标为吸光值（x）。
一种草麻黄根单宁提取工艺，（3）中草麻黄根单宁提取工艺步骤如下：
①草麻黄根粗粉制备：取草麻黄根，干燥并粉碎成粗粉，过16目筛，得草麻黄根粉阴凉处存放备用；
②不同有机溶剂提取：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加10mL水、60%甲醇、60%乙醇、60%丙酮混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
③不同乙醇浓度提取：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加10mL 20%～100%乙醇混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
④不同料液比提取：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加5mL～25mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
⑤不同提取温度：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加20mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于25～70℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
⑥不同提取时间：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加20mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于70℃恒温水浴30min～240min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量。
实施例1
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：测定条件优化
称取一定量的儿茶素标准品溶于甲醇得待测液，待测液取1mL置于试管，加入2mL2%香草醛-甲醇溶液，再加入2mL 40%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，波长在400nm、450nm、460nm、470nm、480nm、490nm、500nm、510nm、520nm、530nm、540nm、550nm区间测定吸光值。
实施例2
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：测定条件优化
待测液取1mL置于试管，加入2mL 1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、20%不同浓度香草醛-甲醇溶液，再加入2mL 40%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，波长在500nm处测定吸光值。
实施例3
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：测定条件优化
待测液取1mL置于试管，加入2mL 10%不同浓度香草醛-甲醇溶液，再加入2mL 10%、20%、30%、40%、50%、100%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，波长在500nm处测定吸光值。
实施例4
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：测定条件优化
待测液取1mL置于试管，加入2mL 10%不同浓度香草醛-甲醇溶液，再加入2mL 100%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min后，波长在500nm处测定吸光值。
实施例5
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：儿茶素为标准品绘制标准曲线
（1）准确称取2.95mg儿茶素标准品溶于甲醇定容至10mL得0.295mg/mL儿茶素溶液；倍比稀释成0.148mg/mL、0.074mg/mL、0.037mg/mL、0.018mg/mL浓度的儿茶素溶液；
（2）取1mL标准溶液，加2mL 10%香草醛-甲醇溶液，再加2mL 100%盐酸，避光静置15min，测定吸光值；
（3）根据测定结果绘制出儿茶素标准曲线，线性方程为y=0.0245×x-0.0045，R2=0.9993；式中，y为质量浓度，x为吸光值。
实施例6
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：草麻黄根单宁提取工艺
（1）取草麻黄根，干燥并粉碎成粗粉，过16目筛，得草麻黄根粉阴凉处存放备用；
（2）准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加10mL水、60%甲醇、60%乙醇、60%丙酮混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量。
实施例7
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：草麻黄根单宁提取工艺
（1）内容于实施例6中（1）一致；
（2）准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加10mL 20%、40%、60%、80%、100%乙醇混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量。
实施例8
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：草麻黄根单宁提取工艺
（1）内容于实施例6中（1）一致；
（2）准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加5mL、10mL、15mL、20mL、25mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量。
实施例9
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：草麻黄根单宁提取工艺
（1）内容于实施例6中（1）一致；
（2）准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加20mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于25℃、40℃、50℃、60℃、70℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量。
实施例10
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：草麻黄根单宁提取工艺
（1）内容于实施例6中（1）一致；
（2）准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加20mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于70℃恒温水浴30min、60min、120min、180min、240min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量。
实施例11
一种草麻黄根单宁提取工艺，包括如下步骤：草麻黄根单宁提取工艺，正交实验
（1）内容于实施例6中（1）一致；
（2）准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加17.5mL 50%乙醇混匀每个做三个平行，置于70℃恒温水浴30min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量。
正交实验因素与水平
对比例1
一种草麻黄根单宁提取工艺，具体步骤与实施例11基本相同，区别在于：体积为20mL，提取温度为80℃，提取时间为75min。
对比例2
一种草麻黄根单宁提取工艺，具体步骤与实施例11基本相同，区别在于：体积为22.5mL，提取温度为90℃，提取时间为120min。
对比例3
一种草麻黄根单宁提取工艺，具体步骤与实施例11基本相同，区别在于：乙醇浓度为60%，提取温度为80℃，提取时间为120min。
对比例4
一种草麻黄根单宁提取工艺，具体步骤与实施例11基本相同，区别在于：乙醇浓度为60%，体积为20mL，提取温度为90℃。
对比例5
一种草麻黄根单宁提取工艺，具体步骤与实施例11基本相同，区别在于：乙醇浓度为60%，体积为22.5mL，提取时间为75min。
对比例6
一种草麻黄根单宁提取工艺，具体步骤与实施例11基本相同，区别在于：乙醇浓度为70%，提取温度为90℃，提取时间为75min。
对比例7
一种草麻黄根单宁提取工艺，具体步骤与实施例11基本相同，区别在于：乙醇浓度为70%，体积为20mL，提取时间为120min。
对比例8
一种草麻黄根单宁提取工艺，具体步骤与实施例11基本相同，区别在于：乙醇浓度为70%，体积为22.5mL，提取温度为80℃。
表1实施例6单宁含量
由表1可知，实施例6中原料用量、加入体积、提取温度和提取时间同等条件下溶剂为丙酮时单宁含量最高为23.00mg/g，本发明考虑绿色、安全、经济等因素最终选择乙醇为最佳提取有机溶剂。
表2实施例7单宁含量
由表2可知，实施例7中原料用量、加入体积、提取温度和提取时间同等条件下乙醇浓度为60%时单宁含量最高为21.25mg/g，由此确定乙醇浓度最优值范围为50%、60%、70%。
表3实施例8单宁含量
由表3可知，实施例8中原料用量、乙醇浓度、提取温度和提取时间同等条件下乙醇加入体积为20mL时单宁含量最高为32.83mg/g，由此确定料液比最优值范围为1：35（g：mL）、1：40（g：mL）、1：45（g：mL）。
表4实施例9单宁含量
由表4可知，实施例9中原料用量、料液比、乙醇浓度和提取时间同等条件下提取温度为70℃时单宁含量最高为40.13mg/g，由此确定料液比最优值范围为70℃、80℃、90℃。
表5实施例10单宁含量
由表5可知，实施例10中原料用量、料液比、乙醇浓度和提取温度同等条件下提取时间为30min、120min时单宁含量最高为40.06mg/g、40.44 mg/g，由此确定料液比最优值范围为30min、75min、120min。
表6正交实验结果
由表6可知，实施例11中乙醇浓度为50%、料液比为1：45（g：mL）、提取温度为70℃和提取时间为120min时草麻黄根单宁含量最高为63.70mg/g，由表6可知，正交试验结果分析中可以得到，料液比、乙醇浓度、提取温度和提取时间四个因素对提取草麻黄根单宁的主次顺序为：草麻黄根单宁提取量影响顺序为：C＞D＞B＞A（提取温度＞提取时间＞料液比＞乙醇浓度），即提取温度对提取量的影响最大，最佳提取工艺为C1、D3、B3、A1，
综上：该草麻黄根单宁提取工艺，解决了无法筛选出草麻黄根单宁提取工艺的最佳参数，操作繁琐的问题。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (5)
1.一种草麻黄根单宁提取工艺，其特征在于包括以下步骤：
（1）单宁含量测定条件优化：确定最佳测定条件，分别确定检测波长、香草醛-甲醇溶液浓度、盐酸-甲醇溶液浓度、显色时间，4种影响因素的最优值；
（2）绘制标准曲线：以儿茶素的质量浓度mg/mL为纵坐标和吸光值A为横坐标绘制标准曲线，用于单宁含量的测定；
（3）单因素实验：确定5种影响因素最优值，对不同有机溶剂、乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间，5种影响因素进行单因素实验，以单宁含量为指标，确定各影响因素的最优值；
（4）正交实验：以乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间，4种影响因素的最优值为依据各选出3个水平，通过4因素3水平为条件进行正交实验，确定最佳提取工艺参数；
（5）草麻黄根单宁提取工艺：取草麻黄根粉碎，过16目筛，取一定量草麻黄根粉以乙醇浓度为50%、料液比为1：45（g：mL）、提取温度为70℃和提取时间为120min工艺参数提取单宁。
2.根据权利要求1所述的一种草麻黄根单宁提取工艺，其特征在于：所述（1）反应条件优化具体步骤如下：
①香草醛-盐酸显色反应：准确吸取1mL儿茶素标准液，置于试管中，加入2mL 2%香草醛-甲醇溶液，再加入2mL 40%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，以试剂空白为参比，在选定波长处测定其吸光值；
②检测波长确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，按①试验方法显色后，在波长400～550nm区间，测定各波长处吸光值，绘制吸光度—波长曲线；
③香草醛-甲醇溶液浓度的确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，分别加入到30个试管中，分别加入2mL 1%～20%香草醛-甲醇溶液，分别再加2mL 40%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，在波长为500nm处测定吸光值，绘制吸光度—香草醛溶液浓度曲线；
④盐酸-甲醇溶液浓度的确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，分别加入到12个试管中，分别加入2mL 10%香草醛-甲醇溶液，分别再加2mL 10%～100%盐酸-甲醇溶液混匀，避光静置15min后，在波长为500nm处测定吸光值，绘制吸光度—盐酸溶液浓度曲线；
⑤显色时间的确定：准确吸取1mL儿茶素标准液，置于试管中，加入2mL 10%香草醛-甲醇溶液，再加2mL 100%盐酸-甲醇溶液混匀，显色5min～60min后，在波长为500nm处测定吸光值，绘制吸光度—显色时间曲线。
3.根据权利要求1所述的一种草麻黄根单宁提取工艺，其特征在于：所述（2）中儿茶素为标准品绘制标准曲线具体步骤如下：
①儿茶素标准溶液制备：准确称取2.95mg儿茶素标准品溶于甲醇定容至10mL得0.295mg/mL儿茶素溶液，倍比稀释成0.148mg/mL、0.074mg/mL、0.037mg/mL、0.018mg/mL浓度的儿茶素溶液；
②儿茶素反应体系：取1mL标准溶液，加2mL 10%香草醛-甲醇溶液，再加2mL 100%盐酸，避光静置15min，测定吸光值；
③线性方程：根据测定结果绘制出儿茶素标准曲线，线性方程为y=0.0245×x-0.0045，R2=0.9993，式中，纵坐标为儿茶素的质量浓度（y），横坐标为吸光值（x）。
4.根据权利要求1所述的一种草麻黄根单宁提取工艺，其特征在于：所述（3）中单宁含量（mg/g）=（C×V×N）/W，式中，C为草麻黄根样品中单宁质量浓度（mg/mL），V为提取液体积（mL），N为稀释倍数，W为称取的草麻黄根粗粉质量（g）。
5.根据权利要求1所述的一种草麻黄根单宁提取工艺，其特征在于：所述（3）中草麻黄根单宁提取工艺步骤如下：
①草麻黄根粗粉制备：取草麻黄根，干燥并粉碎成粗粉，过16目筛，得草麻黄根粉阴凉处存放备用；
②不同有机溶剂提取：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加10mL水、60%甲醇、60%乙醇、60%丙酮混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
③不同乙醇浓度提取：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加10mL 20%～100%乙醇混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
④不同料液比提取：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加5mL～25mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于50℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
⑤不同提取温度：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加20mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于25～70℃恒温水浴60min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量；
⑥不同提取时间：准确称取0.5g草麻黄根粉，分别加20mL 60%乙醇混匀每个做三个平行，置于70℃恒温水浴30min～240min，离心，弃掉滤渣，滤液取200μL加800μL乙醇，如权利要求3中②的方法测定其吸光值，如权利要求4的方法计算单宁含量。
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