KR101493978B1 - 콩 품종인식을 위한 Indel 마커 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 콩 품종인식을 위한 프라이머 및 이를 이용한 콩 품종의 품종 인식방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 서열번호 1 내지 서열번호 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 및 콩 품종 인식용 키트와 이를 이용한 콩 품종 인식 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 Indel 마커는 PCR 반응으로 증폭하였을 때 다형화 현상이 나타나게 하는 장점을 유지하면서도, 고밀도 유전자지도 제작에는 충분하지 않는 SSR 마커의 단점을 보완할 수 있으며, 나아가 콩 품종의 유전자 정보를 디지털 신호로 전환함으로써 신속하고 객관적으로 콩 품종을 인식할 수 있음은 물론, 충분한 수의 마커를 조합하여 사용함으로써, 여교배 품종 또는 돌연변이 품종과 같이 유전적 유사도가 높은 품종 간에도 인식가능하다.

Description

콩 품종인식을 위한 Indel 마커{Indel marker for discrimination of soybean cultivar}
본 발명은 콩 품종인식을 위한 프라이머 및 이를 이용한 콩 품종의 품종 인식방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 서열번호 1 내지 서열번호 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 및 콩 품종 인식용 키트와 이를 이용한 콩 품종 인식 방법에 관한 것이다.
최근 정보통신산업의 발달로 사람을 대상으로 본인을 확인할 수 있는 생체인식기술개발 연구가 활발히 진행되고 있다. 생체인식기술에는 홍채, 지문, DNA 등 신체적 특징을 이용하는 방법과 서명, 음성, 걸음걸이 등 행동학적 특성을 이용하는 방법 등이 있다. 한편, 작물의 경우에도 지식재산권 등의 강화를 통한 개발된 품종의 권리를 확보하는 절차가 중요해지고 있어 사람의 고유 신분증과 같은 품종 인식기술개발이 절실하게 필요하게 되었다.
이에 따라, 분자 육종시스템에서 유용 형질 탐색, 생물의 종 인식, 품종 분류동정 및 집단 개체군의 유연관계 분석 등의 목적으로 분자마커(molecular marker)가 널리 이용되고 있다. 분자마커를 이용한 콩 육종은 환경변이에 영향을 받지 않고 어린 시기에 형질을 탐색할 수 있기 때문에 대량의 자원을 정확하고 빠르게 분석할 수 있는 장점이 있다.
가장 먼저, 염색체 내 제한효소 인식부위의 변이의 의해 발생하는 염기서열 길이 차이를 이용한 RFLPs(Restriction Fragment Length Polymorphisms) 방법이 개발되었으나 이 방법은 방사선 동위원소를 사용해야 하는 번거로움이 있다. 이후 PCR(Polymerase Chain Reaction)을 이용한 핵산지문법(fingerprinting)으로서, RAPD(randomly amplified polymorphic DNA) 방법 등이 개발되었다. PCR 방법은 10~20여 개의 뉴클레오티드로 구성된 작은 올리고뉴클레오타이드(이하 프라이머)을 생물체의 DNA 또는 RNA와 결합(annealing)시킨 후, 내열성 DNA 중합 효소(Taq DNA Polymerase)를 첨가하여 합성반응이 반복적으로 이루어지게 하는 방법이다. 이것은 다른 방법에 비해 소량의 DNA(1-50ng)만을 요구하며, 간편하고 빠르게 결과를 확인할 수 있다는 장점을 갖고 있다. PCR 방법으로 분석하는 상기 방법 중 RAPD 방법은 비특이적 PCR 산물이 증폭되므로 재현성이 떨어지는 단점이 있고, AFLP(Amplified Fragment Length polymorphism) 방법은 높은 DNA 다형성(polymorphism) 검출로 각광을 받고 있지만 재현성이 떨어지는 밴드의 출현과 분석이 복잡하며, SSR(single sequence repeat) 방법은 DNA 반복 배열인 초위성체(microsatellite) 영역의 염기배열 정보를 근거로 PCR 프라이머를 제작하여 개체 내의 초위성체를 분석하는 방법으로 상기 단순염기서열의 반복수는 품종 간 또는 개체 간에 다르게 때문에 이 부분을 PCR 반응으로 증폭하였을 때 다형화 현상이 나타나게 되며 이를 동물과 식물의 유전 연구에 활발히 이용하고 있으나, 콩에서 기 개발된 SSR 마커의 수가 고밀도 유전자지도 제작에는 충분하지 않는 단점이 있다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 콩의 품종 구별을 위해 효율적으로 이용될 수 있는 분자 마커에 대한 연구를 수행하여, PCR 반응으로 증폭하였을 때 다형화 현상이 나타나게 하는 장점을 유지하며 고밀도 유전자지도 제작에는 충분하지 않다는 SSR 마커의 단점을 보완하면서, 충분한 수의 마커를 확보함으로써 여교배로 육성된 품종까지 인식 가능한 Indel(insertion/deletion) 마커를 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은, 서열번호 1 내지 서열번호 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은, (a) 콩 시료에서 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 상기 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및 (b) 상기 증폭 산물을 검출하는 단계를 포함하는, 콩 품종 인식 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 프라이머 세트를 포함하는, 콩 품종 인식용 키트를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 서열번호 1 내지 서열번호 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물을 제공한다.
구체적으로, 본 발명에 따른 프라이머 세트는, 서열번호 1 및 2로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 3 및 4로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 5 및 6으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 7 및 8로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 9 및 10으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 11 및 12로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 13 및 14로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 15 및 16으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 17 및 18로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 19 및 20으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 21 및 22로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 23 및 24로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 25 및 26으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 27 및 28로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 29 및 30으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 31 및 32로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 33 및 34로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 35 및 36으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 37 및 38로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 39 및 40으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 41 및 42로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 43 및 44로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 45 및 46으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 47 및 48로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 49 및 50으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 51 및 52로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 55 및 56으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 57 및 58로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 59 및 60으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 61 및 62로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 63 및 64로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 65 및 66으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 67 및 68로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 69 및 70으로 구성되는 프라이머 세트; 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및 서열번호 403 및 404로 구성되는 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물이며, 이 중에서 바람직하게는 10개 이상, 보다 바람직하게는 20개 이상, 가장 바람직하게는 27개 이상의 프라이머 세트를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 프라이머 세트는 콩 품종 인식을 위한 Indel 마커를 증폭시키기 위한 프라이머 세트에 해당한다.
본 발명에서 용어, “변이 영역”은 유전자 또는 염색체의 변화가 일어난 곳을 의미하며, 본 발명에서는 DMB(Dense mutation block)로 혼용하기도 한다. 즉, 품종간의 유전자의 차이가 존재하는 영역을 의미할 수 있고, 본 발명에서는 단일염기변이(SNV)가 밀집한 영역을 의미할 수 있다. 보다 구체적으로, 본 발명에서는 표준유전체 유전체 정보와 차이를 보이는 단일염기변이(SNV) 수가 10kb 당 4개 이상일 때 이를 변이 영역이라 규정한다.
본 발명에서 용어, “단일염기변이(Single Nucleotide Variation)”는 "SNP(single nucleotide polymorphism)"라고도 하며, 이는 단일 염기에서의 다형성(polymorphism)을 의미한다. 즉, 어느 집단에 있어 전체 게놈(genomome)에 있는 일부 염기가 염색체마다 다른 경우가 존재하는 것을 말하며, 통상적으로 SNV는 300 내지 1000개의 염기에 하나 정도 존재하는 것으로 알려져 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 용어, “Indel(Insertion/deletion) 마커”는 DNA의 염기배열에서 일부 염기가 중간에 삽입되거나(insertion) 결실된(deletion) 변이를 총칭한다. 상기 Indel 마커는 표준유전체와 실험에 사용된 품종의 유전체 정보를 비교 분석하는 방법을 통해 표준유전체보다 삽입(insertion) 또는 결실(deletion)된 영역을 탐색하고 그 정보를 바탕으로 프라이머를 제작한다. 따라서 그 증폭 결과는 표준유전체와 비교하여 밴드크기가 큰 경우(insertion)와 작은 경우(deletion)의 두 종류 타입을 나타낼 수 있다. 본 발명에서 용어,“마커(marker)”는 유전적으로 불특정 연관된 유전자좌를 동정할 때 참고점으로 사용되는 염기서열을 의미하며, 상기 용어, “유전자좌”는 분자 마커의 유전자 지도상의 위치를 의미한다.
본 발명에서 용어. “표준유전체”는 본 발명의 품종 인식함에 있어 기준이 되는 작물의 품종의 유전체를 의미한다. 바람직하게는 Williams82의 유전체가 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 용어, “프라이머(primer)”는 짧은 자유 3' 말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 핵산 서열로 상보적인 주형(template)와 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고 주형의 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 상기 프라이머의 길이 및 서열은 연장 산물의 합성을 시작하도록 허용해야 하며, 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 요구되는 DNA 또는 RNA 표적의 복합도(complexity)뿐만 아니라, 온도 및 이온 강도와 같은 이용 조건에 의존할 것이다. 구체적 예로, 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 구아닌 및 시토신의 함량(GC contents), GC배열, annealing 온도 및 이온 강도 등 여러 조건을 고려하여 결정해야 한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 중합효소 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오사이드 트리포스페이트(dNTPs)의 존재 하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다.
본 발명에서 프라이머로 이용된 올리고뉴클레오티드는 뉴클레오티드 유사체(analogue), 구체적인 예로써 포스포로티오에이트(phosphorothioate), 알킬포스포로티오에이트 또는 펩티드 핵산(peptide nucleic acid)을 포함할 수 있거나 또는 삽입 물질(intercalating agent) 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 콩 품종 인식용 프라이머 세트는, 표적 서열의 증폭을 위하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 콩 품종 인식을 위한 Indel 마커의 증폭을 위하여 사용될 수 있다. 구체적으로, 하기 표 1에 기재된 세트로 사용될 수 있다.
10개 이상의 프라이머 세트를 조합하여 사용하면 이론상으로 약 1,000개 (210개) 이상의 품종을 인식할 수 있으며, 보다 많은 27개 이상의 프라이머 세트를 조합하여 사용할 경우, 1억 3천만 개(227개) 이상의 품종을 인식할 수 있다. 따라서 본 발명의 일 실시예에서 콩 품종 인식 대상으로 한 147개의 콩 품종(표 2)은 상기 프라이머 세트의 조합으로 충분히 인식가능하다.
바람직하게는 하기 표 4 내지 표 20에 기재된 프라이머 세트의 조합을 사용하여 콩 품종을 인식할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 더욱 바람직하게는, 상기 표 4 내지 표 20에 기재된 프라이머 세트의 조합 이외에 1개 이상의 프라이머 세트를 추가로 포함할 수 있다.
구체적으로 본 발명의 일 실시예에서는 표 2에 기재된 147개의 콩 품종을 모두 별개로 인식할 수 있는 프라이머 세트의 조합을 찾고자 통계분석을 실시하였으며, 그 결과 하기 표 4 내지 표 20에서 나타낸 프라이머 세트의 조합으로 표 2에 기재된 147개의 콩 품종을 모두 인식할 수 있음을 확인하였다.
이와 같이, 본 발명은 충분한 수의 변이영역 특이 Indel 마커를 확보함으로써, 유전적 유사도가 높은 품종을 인식할 수 있어 기존의 분자마커의 인식력의 한계점을 보완할 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 Indel 마커를 사용함으로써 여교배 품종과 반복친 품종이 인식될 수 있다(도 7).
또한 본 발명의 Indel 마커의 증폭 결과는, 인식하고자 하는 콩 품종의 모본 또는 부본에 상응하는 정보를 계보도로 출력하거나(도 6), 염색체 수준에서의 bin map 작성이 용이하므로(도 5), 재조합 정도, 품종 간 유사도, 집단 구조(population structure) 등의 분석에 효과적으로 사용할 수 있는 바, 기존 육성 품종뿐만 아니라, 나아가 새로 육성되는 품종의 재조합 패턴(reshuffling pattern)을 구명하는 것이 가능하다.
No. Name of marker Location Forward primer 서열
번호
Reverse primer 서열
번호
1 SIndel_01_01 1,702,255 CCACAAGCCAAAAGTAAAAC 1 TGAAAGTACCTGTAAGGGGA 2
2 SIndel_01_02 2,948,386 TCCAATGATGTACGTGTGTC 3 TTTGCGTACTTCTTCTTCTTC 4
3 SIndel_01_03 32,576,072 AAGGAACACAAACTCACGAC 5 AACTGCTTCATAGGAGGAGA 6
4 SIndel_01_04 35,683,694 AAAAAGAGACGTACGGTTTA 7 TGCTCCAAAACAAAATTATTA 8
5 SIndel_01_05 39,700,687 TCCTTTAGGATAATTGAGCTG 9 TTCGGTGAAATCTAAAAAGAA 10
6 SIndel_01_18 43,275,579 AATTTCCTCAAACCACAAAA 11 ACCCTTGGGATTTGTTATG 12
7 SIndel_01_06 46,771,415 CCACTAAAAGCAAAATAACGA 13 CCAATTATTTTAGTCAAGTAGGG 14
8 SIndel_01_07 47,971,331 GACAAGTGTGTTTTGTGTGC 15 GACGAAGCAAGTCAAAATTC 16
9 SIndel_01_19 49,364,344 AACTAATTTTTGCACATCCC 17 AATGGAAAATGTTGGCTAGA 18
10 SIndel_01_08 50,224,810 GGTAGGAAGGTTGTTTTATTT 19 TTCCTCACACCCTTAAAAA 20
11 SIndel_01_20 52,944,510 GTATGCTTATGCTTGGACCT 21 AAAGTAAAGCAAGGTGTCCA 22
12 SIndel_01_09 54,087,245 CTTTTACACTGATCATAACTTGAA 23 AAAAACACTTACATTTGGTAAAAA 24
13 SIndel_02_11 308,983 AAAAATTCACTTCAAAATCA 25 AACACCAATTTTGTTTTACGA 26
14 SIndel_02_01 490,029 ACTCTAAATTTGGGTAATTTTT 27 ACAAATTGTGAAACCATCAAC 28
15 SIndel_02_02 2,364,538 ATAATGAATGGGGAACACAC 29 GATGATTATTCAATTCGGGA 30
16 SIndel_02_12 3,444,071 TGAGGTGTAAAAGCTTGGTT 31 AATAGAACAATTCTCGTGCC 32
17 SIndel_02_03 6,599,734 TTTTTCTCTGGTTTTCTATGTT 33 TCCCAGATCTATGAACCTCT 34
18 SIndel_02_04 8,053,281 TGTAAAATGCCCCAAAAA 35 GGTCTATTCATAAACTTGACCTTT 36
19 SIndel_02_13 9,295,181 GGTACAAGAATGAGTGGGTG 37 TGACACATTGACACTCATTAAA 38
20 SIndel_02_14 12,117,568 CCTCGCTTAGCACTTATGTC 39 CGGAAGAAAAATCAAGAAAA 40
21 SIndel_02_05 14,487,869 GCCATGTTAATCCAATTCTC 41 TAGCATGCTGATGAATGAAA 42
22 SIndel_02_06 15,407,086 GAACCGAGCCTTTAGAAAA 43 TACGACTAGGGGTTGAAATG 44
23 SIndel_02_08 43,042,124 CACAACCCATACCACTTTCT 45 ATGAAAGATAACACAACGCA 46
24 SIndel_02_18 45,734,279 ATAACACCACCAGCAAAGTT 47 CTTTCCCTTCAAATAGGGTT 48
25 SIndel_03_11 1,275,226 TTGATTCTATCAAGATAACCGA 49 AATTATTTTATACTATCCGTACATT 50
26 SIndel_03_02 4,561,985 ACATTGGATGTGAAAATGGT 51 TCTAAAAGCCATGAGAGGAA 52
27 SIndel_03_13 6,168,100 AAACATGAATGGTGCTTTTT 53 TAAAGCCCCAAAAGTGAATA 54
28 SIndel_03_14 7,996,730 GGTGTGTGTCATTCTCCAAT 55 GAAAGAGATGAACGAAGGAA 56
29 SIndel_03_16 34,036,345 TCATTTCTCTTTTTGCTTCC 57 ACCGTTTTCGAATTGTCTAA 58
30 SIndel_03_06 35,337,708 TCCCTTTTCAAGACTCTCAA 59 GTGTGAAAACGAAGATGGAT 60
31 SIndel_03_17 36,445,340 TGTTTAATGTTTCAGATTGTCC 61 TGTGAAATTTTATTTTCATGTTAAG 62
32 SIndel_03_08 39,507,043 TTTAGTTTATAAGCATAAGTTGAGA 63 AAAAATATTGACTGAAAAGGT 64
33 SIndel_03_09 42,912,101 CTTCCATGGCTCTGTTAATG 65 TGGGATAAAGGAAACAAAAA 66
34 SIndel_03_19 45,101,996 ACTTGCCAGTTTGGTGTAAG 67 CCACGAGTACTGAGTGCATA 68
35 SIndel_03_10 47,300,806 TGAATTGCATGGTTTTAGTT 69 TTTAAAAACTCTTACAATTATGGAA 70
36 SIndel_03_20 47,630,105 GACTGTATTTGTAAAGTAGGAGTTT 71 GCCTTTTACTTTTCATCCTTC 72
37 SIndel_04_01 434,538 GATCGATAAATGCCTGGATA 73 GTGTATTTGCTTTTGTTCCC 74
38 SIndel_04_11 1,126,964 TTCAAGTTTAGCTTGCTTGC 75 GTACAGCCAAAAGAGAGGTG 76
39 SIndel_04_12 3,513,345 AATTTACGGATGCACTTTTTA 77 GAGAGAAAGAGGATCACGAG 78
40 SIndel_04_02 5,011,432 GCCTGAGATATTATGGCATC 79 CCCTTCCTATCACTGAGAAA 80
41 SIndel_04_03 7,171,619 AACCAATCCAACAGTCATGT 81 GAAATAAAAATGAGCCATGC 82
42 SIndel_04_16 39,224,981 TTCCACCATGAAAGGTTTAG 83 GCTGATGCTACCTTTCAAAC 84
43 SIndel_04_17 41,555,605 TCAACGAGGAAAGATACCAC 85 AAAAAGTATGTTTTCTGTGGCT 86
44 SIndel_04_18 43,043,859 GCTGAGAACTGACACAGACA 87 TGTGTAGATGTCAAGTGAGTGA 88
45 SIndel_04_09 44,362,740 CCACCACTTGTTACAGGTTC 89 AATTGACTAAAATACAAAACACTG 90
46 SIndel_04_20 46,768,023 GTAAGTATGGCGGGTGTATG 91 TTCCAGAGAGCAATACAATG 92
47 SIndel_04_10 48,814,170 GTAGCAATGGCTGATTCAA 93 ATTTTGCCTTTGTCAATCAT 94
48 SIndel_05_01 269,251 TGCTTAGAGTTTGGTTTGGT 95 CCGACACATCTTCTCCTCTA 96
49 SIndel_05_11 1,086,566 GGGGTGTTATTGGTGTTTTA 97 AGTTTTCCCGTTACCATTCT 98
50 SIndel_05_12 2,708,639 CTGATCAGTAAAGAGTGAGTATTA 99 TTGTGTGTTATTGCTCTTCTG 100
51 SIndel_05_13 3,581,245 TAAGCACAAGCCTGTTAAGC 101 AGAACCTCCTGAACCACCT 102
52 SIndel_05_02 7,822,739 AAAAAGATGGTAAAGTTGGAA 103 TTTGGCTTTAATCCCATAAT 104
53 SIndel_05_14 9,098,197 TCCATTCAAATGCTGTAATTT 105 TGTTAAAACAGAAAAGTGTTGC 106
54 SIndel_05_04 26,681,415 CAAATCCAGTTTCTTATATTTTT 107 TTGTGCAAGTGAGTACATTT 108
55 SIndel_05_16 28,206,814 TGGACATATGACATACCTAATTG 109 ACCAAAACACTGTGGTACTATTC 110
56 SIndel_05_07 32,396,758 GCATTACGTTTTCCCACTAC 111 TCATCTTAATGTACAAAACAAAAA 112
57 SIndel_05_17 32,957,735 CCGCTATTATTTTAGGATGAA 113 AGGTGCCTTGTGTGTAAAGA 114
58 SIndel_05_09 37,275,717 TTCAATGACTAAAATTTGGC 115 ACTTGCCACTAAGGACAGAG 116
59 SIndel_05_19 38,761,346 GTGCACAAGTTTTGTGGTTA 117 TGCGAGTTAATGATTTTGTG 118
60 SIndel_06_11 898,099 TGTTTTGTCCAAAGAAAGAAA 119 AAACTTTCGGTGCAAACTTA 120
61 SIndel_06_12 3,368,239 CCAATCATCTCAAAATACCC 121 AATTGTTTCTAATTATTTGCGA 122
62 SIndel_06_03 5,048,307 AATGCATATGAGTACCTCTTCA 123 AGCCTAAATTATCATCTCACA 124
63 SIndel_06_13 5,873,702 CTTGTCAACCACACCAACTA 125 TACAACAGGCATCATTTGAC 126
64 SIndel_06_15 15,598,898 CGTGATACGTGTCAATGAAG 127 CCCAATGAATTGGCTACTTA 128
65 SIndel_06_05 19,570,903 AGCATTAAGAAAGGGTGTCA 129 AGTGTATCGCGACTACTGGT 130
66 SIndel_06_07 35,315,554 AAATTAACGGGTGAATCAGT 131 ATCTATTTCGGGTCCACAA 132
67 SIndel_06_08 41,467,618 CCTCTCGTCCTTTTTCTTCT 133 GAAGGGTTGAATCAGAGTGA 134
68 SIndel_06_19 44,246,923 AAAACAAACAGGGAGAGAAA 135 AAATAAATACTCCATCGGTCC 136
69 SIndel_07_01 223,544 TTGAAACTCAAATCATGGAA 137 TTCGTCATTCTCGTCTTCTT 138
70 SIndel_07_11 623,236 CACAGACCAGCTCTACCTTC 139 AGGAAATTGTTGGCATTGTA 140
71 SIndel_07_03 8,126,904 CATTGCGACCTACATCACTA 141 TCGTAAATGTTTGTGTTTGG 142
72 SIndel_07_14 9,532,035 AAATTACGAGCCTACCTTCA 143 TGACAACAATCCTAATTTTCC 144
73 SIndel_07_04 15,115,508 ATGCTAAAAATTGGATTTGC 145 CAGAAGAAGAAAGAAAGCACA 146
74 SIndel_07_05 16,782,488 CATGATGACATTGTAGGTGC 147 AACTTCAACTTTCCTTCCGT 148
75 SIndel_07_18 39,130,876 CAAATTAATGTTTCGAAAAGC 149 AGAATTAGGTCTGTGGGACC 150
76 SIndel_07_20 42,930,755 CAACATGAAACAAATGATGC 151 ATTCATTATGGCAGTGGAAG 152
77 SIndel_08_01 459,022 AACTTTTGTGCAAACTCTATTT 153 AGATGGTTTTATATGTATTTTAGTG 154
78 SIndel_08_03 2,765,869 ACCAATATCGATCTTTACCAA 155 TCACTCTCTTAGCATATTAATCAAA 156
79 SIndel_08_04 4,848,477 GTCATGTCCTAGTTTCCCTG 157 AAAACTAAAATTTGAGGATGAAA 158
80 SIndel_08_06 10,861,785 AACATCTGGATGGCATTATC 159 TTTGATAGTAGGTAGCACAAGC 160
81 SIndel_08_13 12,476,232 GGGTTAACAAACGTGACAAT 161 GCATGAAGAAAGAACAAAGG 162
82 SIndel_08_14 19,201,447 CCTAAGTTTGAATTTTATATCCTTT 163 GCAATTTGGTAAAAACAACC 164
83 SIndel_08_08 21,945,254 CCAGCTGGAGTATCAACAAT 165 GAAGAAGTTTTGAGTCCCTG 166
84 SIndel_08_18 41,832,952 TTTGGTTTGGATAATTTGGA 167 CACCTTTATAGACATGCATCAG 168
85 SIndel_08_09 42,713,732 CTCCTAATTGAGGTGACAATG 169 AGTATATCATATTCACCAGAGAGA 170
86 SIndel_08_19 43,327,998 ACAGAGAATTGAGGAGACTGA 171 AATCATCAAAACCTAAAAAGTGA 172
87 SIndel_09_11 411,086 GCATCCTAAAATGCGTTTAC 173 TGCATTGTTATGTTCGATCT 174
88 SIndel_09_03 7,857,254 AACCGTTGACACAAATGTTA 175 TTTCTCCGGACACAATTTAT 176
89 SIndel_09_04 12,850,923 AAAAGGTTTTGGGGTTTTAC 177 TTTCATTTCACGCTCAGTCT 178
90 SIndel_09_05 17,473,246 TCCGATCAGTCTCTAACACC 179 GCAAGAAAATTGAATTGGAG 180
91 SIndel_09_16 26,258,676 GGTGAAGTCACCTAGAATGG 181 TTGATGGTGTCAGTCAACTC 182
92 SIndel_09_07 30,892,750 CAAACAAGTATGAGTGGTGC 183 GGAGAATTGTCTAAGGGGAT 184
93 SIndel_09_17 34,908,169 CTACCGTGGGTTCTCTCTAA 185 TGAATCACACATCAATGCTT 186
94 SIndel_09_19 40,693,727 ATGCGATGAAAGAAGTGATT 187 TCAACTTTGTAATACTTTGATGAAT 188
95 SIndel_09_09 42,947,283 ATGGGATTACATGGACAGTT 189 TCATATTTAGGAAAATGAATCCT 190
96 SIndel_09_20 44,250,182 AGGAAGCTTTTAGTTGACACA 191 AGACGAAAAATTTGGTGATAA 192
97 SIndel_09_10 5,982,933 ATCCATAACCACGCTTTTT 193 ACTTGTCGCTGCATAAAGTT 194
98 SIndel_10_12 3,429,325 AATTTGTTCCAACAAGCATC 195 AATTCAAGTGCTCGATCTGT 196
99 SIndel_10_02 6,206,326 ACTGTACGTGGATACGTGTG 197 AGACGTTCATAATATTGCCG 198
100 SIndel_10_04 11,617,203 AAAGAAAAGTTGCAACCAAA 199 GAACATCACGACGTTTATGA 200
101 SIndel_10_13 13,339,511 CTTTTACAATATTGAGGCCA 201 TTTAAATTGAAATTCCCCAA 202
102 SIndel_10_07 38,777,235 TTGTAGTTTCGGATGGATTT 203 CACACGATAAAAATTAAACACG 204
103 SIndel_10_08 41,458,017 TAGGAGAAAGGGAGGGATAC 205 ATTGTTATGACCGGTAGTGC 206
104 SIndel_10_18 44,424,315 AAAAACATCCAGTGGAAAAT 207 TCGAGTTTCCGTAGAATAGC 208
105 SIndel_10_20 47,263,582 ATCCAGAACCAAACAACAAC 209 TGATTTCTTTTCGGATTTGT 210
106 SIndel_10_09 48,550,614 ATTAACTGGATAAAAGAAAGATT 211 CAGATTAGTTGACTTGATTTCATT 212
107 SIndel_11_12 1,318,805 AATATTGATTGAGCTGGACG 213 TACACGTAATCAATCCAACG 214
108 SIndel_11_02 4,293,579 AGCTTGCTTAAATAAAATGAGG 215 AACGTGAAATTAGAATTATGGAA 216
109 SIndel_11_04 8,086,867 TTTGCATGTTTTGTATTTGG 217 AACAAATTAAAGAGAAGGCG 218
110 SIndel_11_15 10,824,785 TAAAGCTTCTCTTGATCGGT 219 TTTTCCCCTTGTTTTTATCTT 220
111 SIndel_11_06 17,401,844 CTCATAAGGGACTAGGTTCG 221 TATCTGATACAGGGGGTTTG 222
112 SIndel_11_07 26,672,788 TGATCGATTAATGATTCAAAA 223 GAACTCCTTAGCTAAACCGC 224
113 SIndel_11_17 33,139,270 TTGTAAGGTTTAGGAATCAATTT 225 TCGTTGAAAGATGAAAACTT 226
114 SIndel_11_09 38,153,075 CCCACACGGTTTTAATATGT 227 GACATTTGATTTCGTTTGTCT 228
115 SIndel_11_20 38,286,254 TTCTTGTTGTGCAATTTACG 229 TGAGACAGAGCACAATTCAA 230
116 SIndel_11_10 39,013,019 TGGATCGTAGAAAAGAAGAAA 231 TTGTCGCTCAATGTCTATCA 232
117 SIndel_12_11 613,111 CCATGTCTCCTACAATGCAA 233 TGCACACAAGAAAAGAATCA 234
118 SIndel_12_02 1,221,217 TCAAGGAAGCTAAGATAAATAAA 235 TTGATGATAAAAAGTGTGAGTTT 236
119 SIndel_12_03 4,124,597 ACTCCCTCTCCCTCTCATT 237 ACTATACCTGGACTCCATCG 238
120 SIndel_12_14 7,999,474 CATCACTGCCTCTTTCTCTC 239 TCCAGACTAATTCCTAATCAAAA 240
121 SIndel_12_15 11,000,343 AAGGTGAAAATGAAAGTGGA 241 CAAATTTTGATTTTAGTTTCCAT 242
122 SIndel_12_18 33,886,457 TTGAAAATAGGGAAACCTGA 243 AACTGATGTTAGACAAGCCC 244
123 SIndel_12_19 34,892,066 CATTGCTGAAATTTCTTGAG 245 AGTTTCAGCTCTTCCAAACA 246
124 SIndel_12_20 38,191,529 AAAAATTAGAAGGGCGAAAC 247 CCTTCCCTTGGACTTCTAAC 248
125 SIndel_13_01 113,762 TGAAAAATTAACCATTTGAGATT 249 AAAACCCCGTCTCCTATAAC 250
126 SIndel_13_11 674,683 GATGGGCTCAGGAGGTG 251 CCTTCCTTCTCCTCTCTTTC 252
127 SIndel_13_14 8,046,003 GGAAAACAAAGTAACACCGA 253 TCACTATCGGCACTCTCTCT 254
128 SIndel_13_18 25,633,692 ACATGACATTTAAGGGATGC 255 TTTCACTCTTTAGGTGCCTT 256
129 SIndel_13_06 28,082,831 CCAACTAAGATTTTGGAGCA 257 TTGTTAATTAGAATTTAATACATCG 258
130 SIndel_13_07 32,608,878 TTAGTAGCATTGTAGCAACCC 259 TGGGGTGCCAATATAATTT 260
131 SIndel_13_08 35,069,247 AAATCACTTTTAATTTCTTAATGGA 261 GCCATGTGCTTCTTAATTCT 262
132 SIndel_13_09 38,116,607 GATCAAATCACTAAAATGTAGTCC 263 TCCAGATAAGAAAACAAAAACA 264
133 SIndel_13_19 39,049,413 TTGATACTGCACATATGCCT 265 GCCAAACCCATTTACAGTAG 266
134 SIndel_14_11 956,099 TCTCTGGAGTTCAAACTCATC 267 TGCCCTAAGACACTAGTTGAA 268
135 SIndel_14_02 1,909,661 GCTCAAACACTTAAAGTCTGC 269 GAAATAAATGGAGCGAAAAA 270
136 SIndel_14_12 2,922,110 CCTTTGGTATAATAAAAATGGAA 271 TCAAATACTCAAAACTCACCTTT 272
137 SIndel_14_03 4,526,891 AAACTTGGATTTAATGCAGAA 273 TGATATGCTATCAAGTTTTACA 274
138 SIndel_14_13 5,462,978 TCTCTCTGCACACTCTTCAA 275 TTCATGTAAGTTGATATCTCTCTCT 276
139 SIndel_14_04 7,146,867 TGTCAACCAATCTTTGTATAACAT 277 TCCTATACACGACGACTTCC 278
140 SIndel_14_15 22,505,689 TCACATACTATAGCATCCCGT 279 CGCTAGAGGTTGAAGATGAT 280
141 SIndel_14_18 45,370,312 AGACCCGCAGTTGTTAAATA 281 TTCATTCAAAAAGGAAAAGG 282
142 SIndel_14_19 47,519,900 TGTCTCTCCGGATTTAAGAA 283 GATTAATTATTATCAAATGTTTAGG 284
143 SIndel_14_20 48,676,383 GAGAATTCGGGATGTTAGATT 285 TCATAATAAAATGGGATGTATGT 286
144 SIndel_14_10 49,696,477 AATAAGGGATGTAATAAAGTAAAAA 287 TCACCAACCACCAAATAAAT 288
145 SIndel_15_01 196,018 TATTTAACGGCGCAAGTAAT 289 GTTTTGCTTTTACTGCGAAT 290
146 SIndel_15_11 1,007,999 CATGCCCCTAATATGTCATT 291 TGAATGTGATAGTAAATTGAAGAC 292
147 SIndel_15_02 1,989,624 AAGGGAATTGATAACAAGAGTT 293 CCTCGCTCTCATTTGTTAAA 294
148 SIndel_15_12 5,031,193 TTTGAGGGTGTTTCTCACTT 295 TCAAAATTCAGTTATGTCCAA 296
149 SIndel_15_14 8,634,943 CAGCCGTAGCTCTAGTCATT 297 AGATGTTTTAAGAATAAGAATGAAA 298
150 SIndel_15_16 17,195,046 CGACCATTTACATAACTCCA 299 ATATTATGTAGGGGGCTGGT 300
151 SIndel_15_06 22,451,433 GGATAAAACGGGAAAAGAAA 301 CACGGTGTGAGAAGATTTTT 302
152 SIndel_15_18 46,635,647 ATGCTGGCATAGCATTAAGT 303 GAATCATTTTAAATTCCTTGAA 304
153 SIndel_15_10 50,384,293 AAACTTAAATACTTTTGTGTCATGT 305 ATTAACCGGTATCCCTTGTC 306
154 SIndel_15_20 50,896,845 GGGAACCATCTTATTGGTCT 307 GGATGGAAAGGCTACTTGTT 308
155 SIndel_16_01 127,475 GAGAGCGCTGAGGATATTTA 309 CCCTTTTTAAAGAGAGGCTA 310
156 SIndel_16_13 3,018,798 GCCTTCCCTAACATATCAAA 311 TTGACCAAATAATACACCAAAA 312
157 SIndel_16_02 3,148,142 TTGGAGCTGATAAACACCTT 313 GTCATTACCCCCAATGTCTA 314
158 SIndel_16_03 5,597,875 TCGGTCATTGGTATTTGATT 315 TGTGTAATTGTGTTATTGAATTAT 316
159 SIndel_16_16 11,055,957 GTCAAGTGCGAGAATGCTA 317 AATCCAATTACAATTTAGTCTTT 318
160 SIndel_16_08 29,171,372 ACGTTGATACTGGGCAATAC 319 GGAGAAGGAATAATTGGATAAA 320
161 SIndel_16_09 30,282,262 ATCACGACGACAGCTAATCT 321 TTTGAAAAGAGAAATTGTTGC 322
162 SIndel_16_10 36,861,612 TTTTTACTTTCTCTTTAACCAAA 323 AATTCAGTTCGTTAAGCAAG 324
163 SIndel_17_01 2,377,580 CTTCACGCGCCAGAGAT 325 CAAATTCTCCGGTGAGACTA 326
164 SIndel_17_02 6,162,864 AAAAGTCCCAACATTCTTTG 327 CGTATTGTTTGTTCAGCAAC 328
165 SIndel_17_04 11,402,807 TCACTTAGTGTCCGAGTTATTCT 329 CGTGTTTGCTTGACAATTT 330
166 SIndel_17_13 15,080,210 TGTCTCGTTAGTTTTGGGTT 331 TTTGAAGGTATAATTGTGATCTCT 332
167 SIndel_17_05 15,720,082 TCCTCCTTTTGAAATGTGTC 333 CAAATCAAATGGAAGAAATACA 334
168 SIndel_17_06 18,781,556 GAGATAATTCTGGACACACA 335 ATAATCTCAACAGTCTATTATTTTT 336
169 SIndel_17_15 30,814,909 TTGCAGGAAATTTCTATTCC 337 ACCAATGTTAAAAGTCCTTCA 338
170 SIndel_17_17 32,517,304 CCATTCAGCAGAAGAATGTT 339 AGGTCATGGGTTAGATTCCT 340
171 SIndel_17_07 33,697,472 GAGTGTGCTTCTAGGCTTTG 341 TTGTAGATGTCACTCCCTAGC 342
172 SIndel_17_08 37,137,248 CACCCACTTAACAATCAACA 343 TTGGTCTCGTATTAAAAATTGA 344
173 SIndel_17_19 37,173,540 CCGTGCTAAACAGATCTCA 345 ATTTGATTTAGGCACTCAGC 346
174 SIndel_17_09 40,011,350 TTCCTTGGGGAAATAGAAGT 347 TTAGTCACTTGTTGATTGCCT 348
175 SIndel_18_01 339,015 GCTAGATGTTTCTCTCTTCTTGA 349 AAAATTTAAGGACCAAGGACT 350
176 SIndel_18_12 2,817,922 AAAAATACTTTTCTCTCTAAAACTG 351 TGCAAATTATAGTTATTTTTGCTAT 352
177 SIndel_18_13 10,499,906 TTAGTTGTGGCAACTCCTTT 353 GAGGATTTGATGTTGCAGTC 354
178 SIndel_18_14 16,122,233 TGTCAGGTGTGTGTAGAATTG 355 AGACATGTACACGACTTCCC 356
179 SIndel_18_04 20,768,762 AGCACAGGATGACTGAAGAT 357 TCAAAAACTGTCAAATGTGC 358
180 SIndel_18_16 39,438,923 TGCATGTGTCTGCATCTTAT 359 ACCATAACCCAAAATGACCT 360
181 SIndel_18_08 48,892,285 TCAGGAATGTGTCTTAACAAAA 361 TGAAATATACTTTTTGGGGTG 362
182 SIndel_18_18 51,687,188 TGCAAGGAAGTTATTTGGAT 363 AATATACATGGCACTTTGGC 364
183 SIndel_18_09 56,970,172 GGTTTAAGTTTTTATGAGTCTTTCT 365 CATGTACATCTTATATGTTGGATT 366
184 SIndel_18_19 58,772,931 CTTAATTGAAACTTTTAAACATCA 367 TTGAATCAGGTCTTCTTACCA 368
185 SIndel_19_01 441,395 TCTTTCACGATTATGCATTG 369 ACGTAATAACACTATCAACTTGT 370
186 SIndel_19_11 3,242,771 GCAACACCCATTTTCATATT 371 CCTTAAACGTCTAGGAACCA 372
187 SIndel_19_05 16,198,426 GAGAAATTTTGATAATGAGGGT 373 TATCATGCATTGAAATTGGA 374
188 SIndel_19_06 29,179,799 AACAAATGAGTTAAACTTTGAGC 375 ACAAAACCCAATCAATCAAT 376
189 SIndel_19_08 34,065,177 AGTCAAAACCTACTGATTTTCAA 377 TCCTTAGATCCATCGAACAC 378
190 SIndel_19_16 35,292,541 AGCAACTGCAAAAATCCTTA 379 TTTTCTGTATCTGTATGTTGTTC 380
191 SIndel_19_17 37,409,060 TGTCTGTGTGTTGAATGGAG 381 ACAACCTGTCAAACAAGTCC 382
192 SIndel_19_18 42,097,069 TGTGACCTGATGTCAAATTA 383 CATTTTGGTCTCTATAGCTTTTT 384
193 SIndel_19_19 46,278,741 TGTAGGTCCATCGAGTAATG 385 TTCACAAAAGAAATACTACACG 386
194 SIndel_19_20 49,208,654 TTGAGGGCTTGACAAAAA 387 CAGGCCATGTTGAGTATAAA 388
195 SIndel_20_06 32,702,140 CCACCAGTGGTTACATCATA 389 ACGTGTGTTTCCTTTGCTAT 390
196 SIndel_20_07 34,305,586 GCTAAGCAATTAGCAACTCAA 391 TTTATAATGCATGCACATTTTT 392
197 SIndel_20_15 37,938,395 CATTCTTCTCTCCTCCAGTG 393 TGAGTTTGAGGATAAGGTCG 394
198 SIndel_20_09 39,540,342 GCTTTGATTTGGTCATGTTT 395 GTTTGTCGCAAAAGGTTAAG 396
199 SIndel_20_18 44,490,466 AAGAGGGCTATTTGTGATTG 397 TGGACCTATTCCCATACTTG 398
200 SIndel_20_19 45,943,729 AGAGAGAGCCGAAGAGATTT 399 TTTCTATCCCAACTTCTGCT 400
201 SIndel_20_10 46,502,423 TAAAGTTTGGGGTCTAGCAA 401 GATGCATTTGGATTTCATTT 402
202 SIndel_20_20 46,502,826 TCGATAACATTGTAATTATAAACAG 403 AAGATGATACAAGAGAACATAACG 404
본 발명에 따른 프라이머 세트에 의해 인식될 수 있는 콩 품종은 하기 표 2에 나타낸 147개 품종일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
No 품종명 No 품종명 No 품종명
1 녹원 51 신팔달콩2호 101 광교
2 다진 52 알찬콩 102 다올
3 단미 53 일미콩 103 덕유
4 단미2호 54 장미콩 104 신팔달콩
5 미랑 55 장수콩 105 팔달콩
6 상원 56 장엽콩 106 화성풋콩
7 석량풋콩 57 장원콩 107 흑청
8 선녹 58 진미콩 108 서리태
9 신록 59 진품콩 109 서목태
10 새올 60 진품콩2호 110 오리알태
11 큰올콩 61 청두1호 111 한아가리
12 화엄풋콩 62 태광콩 112 장단백목
13 갈채 63 호장 113 금강소립
14 검정올콩 64 황금콩 114 충북백
15 검정콩1호 65 광안콩 115 광두
16 검정콩2호 66 남해콩 116 백천
17 검정콩3호 67 녹채 117 새단백콩
18 검정콩4호 68 다기 118 소원2010
19 대흑 69 다원콩 119 일품검정
20 선흑 70 다채 120 한올
21 소황 71 도레미콩 121 소청2호
22 일품검정2호 72 명주나물콩 122 대하
23 진율콩 73 보석 123 대하 1호
24 청자콩 74 부광콩 124 우람
25 청자 2호 75 새별콩 125 황금올
26 흑미 76 서남콩 126 검정 5호
27 금강콩 77 소강콩 127 천상
28 남풍 78 소록콩 128 흑성
29 다장콩 79 소명나물콩 129 조양1호
30 단경콩 80 소백나물콩 130 청엽1호
31 단백콩 81 소원콩 131 참올
32 단원콩 82 소진 132 중모3005
33 대망 83 소호 133 중모3006
34 대망 2호 84 신강 134 중모3007
35 대양 85 신화 135 늘찬
36 대원콩 86 안평 136 원흑
37 대풍 87 원광 137 갈미
38 대황콩 88 원황 138 중모3003
39 두유콩 89 은하콩 139 중모3004
40 만리콩 90 익산나물콩 140 중모3002
41 만수 91 장기 141 소청
42 무한콩 92 조남 142 호반
43 백운콩 93 팔도나물콩 143 Enrei
44 보광콩 94 푸른콩 144 PI96983
45 삼남콩 95 풍산나물콩 145 L29
46 새알콩 96 풍원 146 V94-5152
47 선유 97 한남콩 147 L68
48 소담콩 98 호서 147 품종
49 송학콩 99 검정새올
50 신기 100 청자 3호
본 발명의 일 실시예에서는, 콩 품종의 유전체내 변이영역 탐색을 위해 백운콩, 신팔달콩2호, 신기, 대풍, 황금콩 등 5품종과 표준유전체 품종인 Williams82의 전장유전체를 해독하였고, 상기 해독 유전체 정보를 바탕으로 단일염기변이, 즉 단일염기변이(SNV) 밀집영역 분석을 통해 2,274개의 변이영역(DMB)을 탐색하였으며, 상기 변이영역 특이의 Indel 마커를 디자인한 후, 이 중에서 2가지 밴드타입이 정확히 증폭되는 마커 202개를 선발하였다. 상기 202개의 마커는 콩의 20개의 염색체에 골고루 분포하고 있으며, 변이가 밀집된 영역의 증폭산물을 검출할 수 있으므로 서로 다른 콩 품종의 다양한 차이를 검출하여, 콩 품종을 인식하는 데에 유용한 부위의 마커라고 할 수 있으며, 특히 PIC의 평균값이 0.38로서 그 유용성을 확인할 수 있었다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 (a) 콩 시료에서 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 서열번호 1 내지 서열번호 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및 (b) 상기 증폭 산물을 검출하는 단계를 포함하는, 콩 품종 인식 방법을 제공한다.
상기 (a) 단계는 인식하고자 하는 콩 시료의 게놈 DNA에 대하여 상기 프라이머 세트를 사용하여 표적 서열을 증폭시키는 단계이다.
콩 시료의 게놈 DNA는 콩 시료로부터 직접 추출하여 수득할 수 있으며, 또는 이미 분리된 게놈 DNA를 사용할 수도 있다.
콩의 게놈 DNA를 추출하는 방법은, 당업계에 공지된 통상적인 방법에 의해 수행할 수 있다. 예컨대, CRAB 방법, 페놀/클로로포름 추출법, SDS 추출법 등을 이용하거나 상업적으로 판매되는 DNA 추출 키트를 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 (a) 단계에서 프라이머 세트는 표적 서열을 증폭시킴으로써 상기 표 2에 기재된 147개의 콩 품종을 인식할 수 있는, 서열번호 1 내지 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 프라이머 세트를 의미한다. 여기서 “표적 서열”은 변이 영역에 특이적인 Indel 마커를 의미한다.
상기 콩 품종 인식용 프라이머 세트는 이에 제한되는 것은 아니나, 바람직하게는 10개 이상, 보다 바람직하게는 20개 이상, 가장 바람직하게는 27개 이상의 프라이머 세트 이상이 사용될 수 있으며, 다수의 프라이머 세트가 동시에 사용됨으로써 보다 정확하게 품종을 인식할 수 있다. 더욱 바람직하게는 상기 202개의 프라이머 세트를 모두 조합하여 사용될 수 있다.
또한, 상기 (a) 단계에서 게놈 DNA의 증폭은 중합효소연쇄반응(PCR), 리가아제 연쇄반응(ligase chain reaction), 핵산 서열 기재 증폭(nucleic acid sequence-based amplification), 전사 기재 증폭 시스템(transcription-based amplification system), 가닥 치환 증폭(strand displacement amplification) 또는 Qβ 복제효소(replicase)를 통한 증폭 또는 당업계에 알려진 핵산 분자를 증폭하기 위한 임의의 기타 적당한 방법을 제한없이 사용할 수 있다. 이 중에서, PCR이란 중합효소를 이용하여 표적 핵산에 특이적으로 결합하는 프라이머 세트로부터 표적 핵산을 증폭하는 방법이며, 이러한 PCR 방법은 당업계에 잘 알려져 있고, 상업적으로 이용 가능한 키트를 사용할 수도 있다. 상기 PCR 반응 혼합액은 콩 품종에서 분리된 게놈 DNA와 본 발명에 따른 프라이머 세트, 적당량의 DNA 중합효소, dNTPs, PCR 완충용액 및/또는 물을 포함할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다. 또한 상기 PCR 완충용액은 Tris-HCl, MgCl2, KCl 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 (b) 단계는 상기 증폭 산물을 검출 및/또는 분석하는 단계이다.
바람직하게는, 상기 증폭된 산물의 분석은 DNA 칩, 전기영동, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정 방법으로 수행될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 증폭 산물을 검출하는 방법 중의 하나로서, 모세관 전기영동을 수행할 수 있다. 모세관 전기영동은 예를 들면, ABI Sequencer를 이용할 수 있다. 또한, 겔 전기영동을 수행할 수 있으며, 겔 전기영동은 증폭 산물의 크기에 따라 아가로스 겔 전기영동 또는 아크릴아미드 겔 전기영동을 이용할 수 있다. 또한, 형광 측정 방법은 프라이머의 5'-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출 가능한 형광 표지 물질로 표지되며, 이렇게 표지된 형광은 형광 측정기를 이용하여 측정할 수 있다. 또한, 방사성 측정 방법은 PCR 수행 시 32P 또는 35S 등과 같은 방사성 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하여 증폭 산물을 표지한 후, 방사성 측정기구, 예를 들면, 가이거 계수기(Geiger counter) 또는 액체섬광계수기(liquid scintillation counter)를 이용하여 방사성을 측정할 수 있다. 또한, 은염색 키트(Bioneer, Daejeon, Korea)를 사용하여 가시화될 수 있다.
바람직하게는, 상기 증폭된 산물을 표준 콩 품종의 증폭된 산물과 비교하여 품종을 인식하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명의 Indel 마커는 표준유전체와 실험에 사용된 품종의 유전체 정보를 비교?분석하는 방법을 통해 표준유전체보다 삽입(insertion) 또는 결실(deletion)된 영역을 탐색하고, 그 정보를 바탕으로 프라이머를 제작한 것이다. 따라서 그 증폭 결과는 표준유전체와 비교할 때, 밴드크기가 큰 경우(insertion)와 작은 경우(deletion) 두 종류의 밴드를 나타낸다.
따라서, 본 발명의 Indel 마커를 사용함으로써 인식하고자 하는 콩 품종이 표준유전체 또는 다른 콩 품종과 상이한 고유의 증폭 결과를 나타내므로, 이들 간의 증폭 산물을 비교함으로써 품종을 인식할 수 있다(도 3).
더욱 바람직하게는, 상기 콩 품종을 인식함에 있어, 증폭된 산물을 표준 콩 품종의 증폭된 산물과 비교하여 코드화할 수 있다.
구체적 예로, 증폭된 Indel 마커 정보를 바탕으로 표준유전체, 예컨대 Williams82와 같은 밴드크기를 보이는 결과는 “a”, 다른 결과는 “b”로 나타낼 수 있고, 또는 이와 같은 정보를 다시 “0”과 “1”등의 디지털 신호로 전환하고, “0”은 흰색, “1”은 검정색의 1차원 또는 2차원 형태의 바코드로 표시함으로써, 보다 객관적이고 신속하게 콩 품종을 인식할 수 있다. 상기에서 표준유전체는 특정된 것이 아니라, 원하는 품종으로 설정할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는, 콩의 1번 염색체에 존재하는 Indel 마커의 증폭결과를 상기와 같이 바코드화하여 나타내었으며, 품종마다 모두 고유한 패턴이 그려질 수 있음을 확인하였다(도 3).
또한, 이를 2차원 바코드로 표현할 경우, 각 염색체별 고유 패턴을 한눈에 쉽게 알 수 있어, 각 품종을 인식함에 있어 매우 효과적이다(도 4).
또 하나의 양태로서, 본 발명은 서열번호 1 내지 서열번호 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 프라이머 세트를 포함하는, 콩 품종 인식용 키트를 제공한다.
본 발명에 따른 키트에서, 상기 콩 품종 인식용 프라이머 세트는 표 1에 기재된 서열번호 1 내지 서열번호 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 프라이머 세트일 수 있다. 이 중에서 바람직하게는 10개 이상, 보다 바람직하게는 20개 이상, 가장 바람직하게는 27개 이상의 프라이머 세트를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
바람직하게는 상기 콩 품종 인식용 키트에는 DNA 중합효소, dNTPs 및/또는 반응완충액을 추가로 포함할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다. 여기서 완충액은 PCR 반응에 필요할 수 있고, 이는 당업계에서 통상적으로 공지된 조성을 가지며, 예를 들면 Tris-HCl, MgCl2, KCl 등을 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 콩 품종 인식용 키트는 PCR 산물의 증폭 여부를 확인할 수 있는 전기영동에 필요한 성분들을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 Indel 마커는 PCR 반응으로 증폭하였을 때 다형화 현상이 나타나게 하는 장점을 유지하면서도, 고밀도 유전자지도 제작에는 충분하지 않는 SSR 마커의 단점을 보완할 수 있다.
나아가, 콩 품종의 유전자 정보를 디지털 신호로 전환함으로써 신속하고 객관적으로 콩 품종을 인식할 수 있음은 물론, 충분한 수의 마커를 조합하여 사용함으로써, 여교배 품종 또는 돌연변이 품종과 같이 유전적 유사도가 높은 품종 간에도 인식가능하다.
따라서, 궁극적으로는 국내 콩 품종의 지식재산권 보호 및 국산콩 브랜드화 촉진을 통한 국내 콩 산업의 경쟁력을 제고할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명에 따른 콩 품종인식 코드화 시스템의 단계별 개발 과정을 나타낸 도이다.
도 2는 6개 콩 품종의 1번 염색체 해독을 통해 변이영역(DMB) 특이 Indel 마커 3,061개를 개발하고 이의 PCR 증폭 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 7개 콩 품종의 1번 염색체의 Indel 마커의 증폭결과를 코드화하는 과정을 나타낸 도이다.
도 4는 콩 품종“대풍”의 1차원 코드화 및 2차원 코드화를 표시한 도이다.
도 5는 147개의 콩 품종의 염색체 수준의 bin map을 나타낸 도이다. Williams82와 같은 PCR 결과는 빨간색, 다른 결과는 파란색으로 표시하였다.
도 6은 본 발명의 변이영역 특이 Indel 마커의 증폭결과를 품종육성 계보도의 형태로 표현하여 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 변이영역 특이 Indel 마커의 증폭결과를 통하여 여교배로 육성된 품종과 반복친 품종을 비교한 도이다. Williams82와 같은 영역은 흰색, 다른 영역은 검은색, 도입 유전자좌 영역은 빨간색 및 반복친 품종과 다른 영역은 노란색으로 표시하였다.
이하, 본 발명을 하기 예에서 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 이들에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 콩 품종의 DNA 추출
염색체 해독을 위한 DNA 추출을 위하여 당업계에 알려진 147개의 콩 품종(표 1)을 파종상자에 파종 후 15일된 어린잎으로부터 조직을 채취하여 Saghai Maroof 등(1984)의 방법으로 DNA 추출을 수행하였다. -70℃에서 동결 보존한 콩 잎을 막자사발에 넣어서 즉시 20 ㎖의 액체질소로 냉각하면서 분말 상태로 분쇄하였다. 이 시료에 5 내지 10 ㎖의 CTAB(cetyl trimethyl ammonium bromide)을 가하여 더욱 곱게 분쇄한 후 15 ㎖ 원심분리 튜브에 넣은 뒤 60℃ 수조에 2시간 이상 진탕하였다. 클로로포름/이소아밀 알코올(Chloroform/isoamyl alcohol, 24:1) 용액 10 ㎖을 각각의 샘플에 첨가한 후, 손으로 뒤집어 주면서 섞은 뒤 3200 rpm, 4℃에서 15분 정도 원심분리 하였다. 상층액을 새 튜브에 옮긴 뒤 10 ㎕(10 ㎎/㎖) RNase A를 넣어 두었다. 30분 후에 아이소프로판올을 2/3 정도 넣고 섞어주어 DNA를 침전시켰다. 침전된 펠럿(pellet)을 꺼내어서 70℃ 에탄올, 10 mM NH4OAc 20 ㎖에 첨가하였으며, 그 상태로 밤샘(overnight)시킨 후, DNA pellet을 말려서 10 mM NH4OAc, 0.25 M EDTA를 1㎖ 첨가하였다. 추출한 DNA는 λDNA(100 ng/㎕)와 함께 1% 아가로스 겔에서 확인하였고, 20 ng/㎕로 정량하여 실험에 사용하였다.
이후 염색체 염기서열 해독을 위해 추출된 각 품종 DNA을 대상으로 DNA 라이브러리를 제작하고 일루미나(Illumina)사의 하이식2000(HiSeq2000) 염기서열해독기(sequencer)에서 표준 프로토콜(protocol)에 따라 각 품종의 염기서열을 해독하였다. 그 결과로 생산된 101-bp 또는 104-bp의 단편서열(read)을 생물정보분석에 사용하였다. 생물정보분석을 위한 레프런스 게놈으로는 콩 품종의 경우 Gmax109 soybean reference genome (Schmutz et al., 2010)을 사용하여 BWA algorithm(Li and Durbin, 2009) ver. 0.5.9.으로 분석하였다.
실시예 2: 변이영역 탐색
변이 영역을 탐색하는 방법은 컴퓨터 프로그램 등을 사용하여, 분석하고자 하는 품종의 염기서열 정보를 10kb 단위로 표준유전체와 비교하면서 단일염기변이(SNV, Single nucleotide variation)를 검출하였다. 이 때 표준유전체 유전체 정보와 차이를 보이는 단일염기변이(SNV) 수가 10kb 당 4개 이상일 때, 본 발명에서는 이를 변이 영역(DMB, Dense mutation block)이라 규정하였다.
구체적으로, 바로 옆에 인접한 변이 영역이 90kb 간격 내에 있을 경우, 이를 합쳐서 하나의 변이 영역으로 표시하였다. 또한 변이 영역 이외의 영역은 변이가 없는 공통 영역으로 표시하며, 이웃한 공통 영역이 30kb 간격 내에 있을 때 동일 영역으로 표시하였다. 상기와 같은 내용은 용이한 시각화를 위하여, 염색체 상 표시를 DMB는 회색박스로, 공통 영역은 하얀색으로 표시하였다(도 1).
콩 품종의 유전체내 변이영역 탐색을 위해 백운콩, 신팔달콩 2호, 신기, 대풍, 황금콩 5품종과 표준유전체 품종인 Williams82의 전장유전체를 해독하였다. 상기 해독 유전체 정보를 바탕으로 단일염기변이(SNV) 밀집영역 분석을 통해 변이영역을 탐색한 결과, 20개 염색체를 대상으로 분석하였을 때 모두 2,274개의 변이영역이 탐색되었고, 염색체별로는 3번 염색체에서 가장 많은 161개의 변이영역이 탐색된 반면, 14번 염색체에서는 65개로 가장 적게 탐색되었다(표 3). 그 중 1번 염색체의 경우, 6개 콩 품종 해독을 통해 112개 변이영역이 탐색됨을 확인하였다(도 4).
실시예 3: 변이영역 특이 Indel 마커 선발
변이영역 특이 Indel 마커를 선발하기 위하여, 상기에서 분석된 염기서열을 바탕으로 변이영역에서 5 bp이상의 Indel을 포함한 부분에서 primer3 프로그램을 이용하여 디자인하였고, 증폭산물의 예상크기는 100 내지 150 bp 정도로 하여 제작하였다.
PCR 반응의 혼합액(maxter mix)은 10 ㎕로 수행을 하였으며, 그 안에는 20 ng의 genomic DNA, 0.4 pmole의 각각의 프라이머 및 5 ㎕의 GoTaq Green Master Mix(Promega, Madison, WI, USA)로 구성하였다. PCR 증폭은 Biometra thermocycler(Biometra, Gottingen, Germany)를 사용하여 초기 변성(denaturation)을 95℃에서 5분간 수행하였고, 95℃에서 30초간 변성한 후, 48℃의 온도에서 30초간 어닐링(annealing)하였고, 72℃에서 30초간 증폭(extension) 과정을 총 34사이클을 반복했으며, 72℃에서 10분간 최종적인 증폭하였고, 4℃에서 PCR 증폭반응을 종결시켰다. 증폭된 PCR 산물은 3% 아가로스 겔에 로딩한 뒤 150V에서 60 내지 80분 가량 진행하였으며, 전기영동이 끝난 뒤 EtBr(Ethidium bromide)로 염색한 후 UV를 이용하여 밴드를 확인하였다.
상기 과정에 의하여 변이영역 특이 Indel 마커 선발을 위해 유전체 해독 정보를 바탕으로 최초 73,327개의 마커를 디자인하였다. 상기 정보를 바탕으로 염색체별 각 20개의 Indel 마커 프라이머를 제작하고, 이 중 Indel 마커의 특징인 2가지 밴드타입(type)이 정확히 증폭되는 202개의 마커를 선발하였다(표 3). 그 결과, 염색체별 선발된 마커 수는 최소 8개에서 최대 12개의 분포를 보였으며, 선발된 마커의 다형성 정도를 나타내는 지수인 PIC(Polymorphism Information Content)의 평균값은 0.38을 나타내었다(표 3).
염색체
번호
변이영역의 수 디자인된 Indel 마커의 수 선발된 Indel 마커의 수 분석된 Indel 마커의 수 PIC 값
Gm01 112 3,061 20 12 0.39
Gm02 123 3,466 20 12 0.40
Gm03 161 4,744 20 12 0.42
Gm04 113 3,336 20 11 0.42
Gm05 106 2,939 20 12 0.41
Gm06 121 3,525 20 9 0.41
Gm07 144 3,444 20 8 0.43
Gm08 126 3,047 20 10 0.42
Gm09 124 4,430 20 11 0.36
Gm10 136 2,979 20 9 0.36
Gm11 111 2,126 20 10 0.36
Gm12 119 2,781 20 8 0.38
Gm13 111 4,102 20 9 0.41
Gm14 65 4,217 20 11 0.30
Gm15 84 4,572 20 10 0.39
Gm16 73 4,281 20 8 0.39
Gm17 116 3,161 20 12 0.37
Gm18 100 6,751 20 10 0.36
Gm19 118 3,894 20 10 0.34
Gm20 111 2,471 20 8 0.36
합 계 2,274 73,327 400 202 0.38
실시예 4: 콩 품종 인식 가능한 Indel 마커의 조합 통계분석
콩 품종 인식을 위한 Indel 마커 조합의 통계분석을 위해 국립식량과학원에서 자체 개발한 ‘DNA기반 품종판별 프로그램(프로그램 종류코드 42240)’을 사용하였다. 이 프로그램의 주요 특징 및 기능은 웹(Web)을 통하여 마커 및 DNA분석 정보를 입력하고 관리할 수 있고, 마커별 DNA Value, PIC Value 및 마커 Quality 등을 참조하여 품종을 판별할 수 있는 최소 마커 모형을 선발하는데 있다.
상기 프로그램을 통해서 밝혀낸 프라이머 세트 조합은 하기 표 4 내지 표 20에 기재된 바와 같으며, 하기에서 기재된 프라이머 조합에 제한되는 것은 아니다.
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
9 Sindel_01_19 17/18 122 Sindel_12_18 243/244
19 Sindel_02_13 37/38 132 Sindel_13_09 263/264
27 Sindel_03_13 53/54 128 Sindel_13_18 255/256
34 Sindel_03_19 67/68 139 Sindel_14_04 277/278
36 Sindel_03_20 71/72 140 Sindel_14_15 279/280
48 Sindel_05_01 95/96 148 Sindel_15_12 295/296
73 Sindel_07_04 145/146 158 Sindel_16_03 315/316
75 Sindel_07_18 149/150 167 Sindel_17_05 333/334
78 Sindel_08_03 155/156 180 Sindel_18_16 359/360
90 Sindel_09_05 179/180 190 Sindel_19_16 379/380
101 Sindel_10_13 201/202 191 Sindel_19_17 381/382
109 Sindel_11_04 217/218 196 Sindel_20_07 391/392
114 Sindel_11_09 227/228 198 Sindel_20_09 395/396
117 Sindel_12_11 233/234
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
17 Sindel_02_03 33/34 138 Sindel_14_13 275/276
27 Sindel_03_13 53/54 140 Sindel_14_15 279/280
38 Sindel_04_11 75/76 153 Sindel_15_10 305/306
44 Sindel_04_18 87/88 146 Sindel_15_11 291/292
50 Sindel_05_12 99/100 158 Sindel_16_03 315/316
60 Sindel_06_11 119/120 160 Sindel_16_08 319/320
64 Sindel_06_15 127/128 165 Sindel_17_04 329/330
73 Sindel_07_04 145/146 167 Sindel_17_05 333/334
90 Sindel_09_05 179/180 174 Sindel_17_09 347/348
91 Sindel_09_16 181/182 182 Sindel_18_18 363/364
100 Sindel_10_04 199/200 188 Sindel_19_06 375/376
120 Sindel_12_14 239/240 193 Sindel_19_19 385/386
131 Sindel_13_08 261/262 199 Sindel_20_18 397/398
132 Sindel_13_09 263/264 200 Sindel_20_19 399/400
128 Sindel_13_18 255/256
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
7 Sindel_01_06 13/14 99 Sindel_10_02 197/198
26 Sindel_03_02 51/52 113 Sindel_11_17 225/226
27 Sindel_03_13 53/54 118 Sindel_12_02 235/236
36 Sindel_03_20 71/72 123 Sindel_12_19 245/246
37 Sindel_04_01 73/74 142 Sindel_14_19 283/284
44 Sindel_04_18 87/88 148 Sindel_15_12 295/296
54 Sindel_05_04 107/108 158 Sindel_16_03 315/316
50 Sindel_05_12 99/100 161 Sindel_16_09 321/322
64 Sindel_06_15 127/128 159 Sindel_16_16 317/318
75 Sindel_07_18 149/150 165 Sindel_17_04 329/330
83 Sindel_08_08 165/166 173 Sindel_17_19 345/346
92 Sindel_09_07 183/184 175 Sindel_18_01 349/350
95 Sindel_09_09 189/190 179 Sindel_18_04 357/358
97 Sindel_09_10 193/194 182 Sindel_18_18 363/364
94 Sindel_09_19 187/188 186 Sindel_19_11 371/372
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
11 Sindel_01_20 21/22 127 Sindel_13_14 253/254
14 Sindel_02_01 27/28 139 Sindel_14_04 277/278
32 Sindel_03_08 63/64 136 Sindel_14_12 271/272
27 Sindel_03_13 53/54 143 Sindel_14_20 285/286
36 Sindel_03_20 71/72 151 Sindel_15_06 301/302
43 Sindel_04_17 85/86 153 Sindel_15_10 305/306
54 Sindel_05_04 107/108 150 Sindel_15_16 299/300
57 Sindel_05_17 113/114 158 Sindel_16_03 315/316
65 Sindel_06_05 129/130 159 Sindel_16_16 317/318
80 Sindel_08_06 159/160 167 Sindel_17_05 333/334
83 Sindel_08_08 165/166 168 Sindel_17_06 335/336
94 Sindel_09_19 187/188 173 Sindel_17_19 345/346
96 Sindel_09_20 191/192 181 Sindel_18_08 361/362
99 Sindel_10_02 197/198 182 Sindel_18_18 363/364
106 Sindel_10_09 211/212 189 Sindel_19_08 377/378
118 Sindel_12_02 235/236
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
5 Sindel_01_05 9/10 109 Sindel_11_04 217/218
9 Sindel_01_19 17/18 111 Sindel_11_06 221/222
21 Sindel_02_05 41/42 116 Sindel_11_10 231/232
16 Sindel_02_12 31/32 120 Sindel_12_14 239/240
35 Sindel_03_10 69/70 129 Sindel_13_06 257/258
27 Sindel_03_13 53/54 130 Sindel_13_07 259/260
42 Sindel_04_16 83/84 132 Sindel_13_09 263/264
44 Sindel_04_18 87/88 133 Sindel_13_19 265/266
52 Sindel_05_02 103/104 149 Sindel_15_14 297/298
58 Sindel_05_09 115/116 158 Sindel_16_03 315/316
50 Sindel_05_12 99/100 167 Sindel_17_05 333/334
80 Sindel_08_06 159/160 174 Sindel_17_09 347/348
90 Sindel_09_05 179/180 173 Sindel_17_19 345/346
97 Sindel_09_10 193/194 195 Sindel_20_06 389/390
94 Sindel_09_19 187/188 200 Sindel_20_19 399/400
101 Sindel_10_13 201/202
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
3 Sindel_01_03 5/6 106 Sindel_10_09 211/212
5 Sindel_01_05 9/10 104 Sindel_10_18 207/208
21 Sindel_02_05 41/42 109 Sindel_11_04 217/218
13 Sindel_02_11 25/26 116 Sindel_11_10 231/232
35 Sindel_03_10 69/70 118 Sindel_12_02 235/236
27 Sindel_03_13 53/54 120 Sindel_12_14 239/240
40 Sindel_04_02 79/80 129 Sindel_13_06 257/258
54 Sindel_05_04 107/108 144 Sindel_14_10 287/288
57 Sindel_05_17 113/114 145 Sindel_15_01 289/290
71 Sindel_07_03 141/142 168 Sindel_17_06 335/336
76 Sindel_07_20 151/152 171 Sindel_17_07 341/342
78 Sindel_08_03 155/156 170 Sindel_17_17 339/340
88 Sindel_09_03 175/176 177 Sindel_18_13 353/354
93 Sindel_09_17 185/186 180 Sindel_18_16 359/360
96 Sindel_09_20 191/192 198 Sindel_20_09 395/396
102 Sindel_10_07 203/204 197 Sindel_20_15 393/394
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
1 Sindel_01_01 1/2 113 Sindel_11_17 225/226
5 Sindel_01_05 9/10 117 Sindel_12_11 233/234
13 Sindel_02_11 25/26 125 Sindel_13_01 249/250
27 Sindel_03_13 53/54 131 Sindel_13_08 261/262
31 Sindel_03_17 61/62 134 Sindel_14_11 267/268
36 Sindel_03_20 71/72 142 Sindel_14_19 283/284
37 Sindel_04_01 73/74 151 Sindel_15_06 301/302
43 Sindel_04_17 85/86 152 Sindel_15_18 303/304
66 Sindel_06_07 131/132 162 Sindel_16_10 323/324
69 Sindel_07_01 137/138 156 Sindel_16_13 311/312
80 Sindel_08_06 159/160 168 Sindel_17_06 335/336
90 Sindel_09_05 179/180 174 Sindel_17_09 347/348
92 Sindel_09_07 183/184 169 Sindel_17_15 337/338
97 Sindel_09_10 193/194 175 Sindel_18_01 349/350
108 Sindel_11_02 215/216 177 Sindel_18_13 353/354
116 Sindel_11_10 231/232 198 Sindel_20_09 395/396
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
6 Sindel_01_18 11/12 104 Sindel_10_18 207/208
11 Sindel_01_20 21/22 122 Sindel_12_18 243/244
19 Sindel_02_13 37/38 126 Sindel_13_11 251/252
20 Sindel_02_14 39/40 127 Sindel_13_14 253/254
30 Sindel_03_06 59/60 139 Sindel_14_04 277/278
27 Sindel_03_13 53/54 142 Sindel_14_19 283/284
29 Sindel_03_16 57/58 148 Sindel_15_12 295/296
43 Sindel_04_17 85/86 150 Sindel_15_16 299/300
54 Sindel_05_04 107/108 154 Sindel_15_20 307/308
50 Sindel_05_12 99/100 160 Sindel_16_08 319/320
62 Sindel_06_03 123/124 173 Sindel_17_19 345/346
66 Sindel_06_07 131/132 175 Sindel_18_01 349/350
75 Sindel_07_18 149/150 182 Sindel_18_18 363/364
95 Sindel_09_09 189/190 185 Sindel_19_01 369/370
96 Sindel_09_20 191/192 187 Sindel_19_05 373/374
102 Sindel_10_07 203/204 197 Sindel_20_15 393/394
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
9 Sindel_01_19 17/18 118 Sindel_12_02 235/236
27 Sindel_03_13 53/54 137 Sindel_14_03 273/274
29 Sindel_03_16 57/58 136 Sindel_14_12 271/272
47 Sindel_04_10 93/94 148 Sindel_15_12 295/296
48 Sindel_05_01 95/96 154 Sindel_15_20 307/308
49 Sindel_05_11 97/98 158 Sindel_16_03 315/316
50 Sindel_05_12 99/100 156 Sindel_16_13 311/312
57 Sindel_05_17 113/114 163 Sindel_17_01 325/326
61 Sindel_06_12 121/122 177 Sindel_18_13 353/354
74 Sindel_07_05 147/148 178 Sindel_18_14 355/356
81 Sindel_08_13 161/162 185 Sindel_19_01 369/370
90 Sindel_09_05 179/180 188 Sindel_19_06 375/376
100 Sindel_10_04 199/200 186 Sindel_19_11 371/372
103 Sindel_10_08 205/206 192 Sindel_19_18 383/384
105 Sindel_10_20 209/210 200 Sindel_20_19 399/400
110 Sindel_11_15 219/220 202 Sindel_20_20 403/404
113 Sindel_11_17 225/226
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
7 Sindel_01_06 13/14 82 Sindel_08_14 163/164
17 Sindel_02_03 33/34 89 Sindel_09_04 177/178
23 Sindel_02_08 45/46 90 Sindel_09_05 179/180
24 Sindel_02_18 47/48 92 Sindel_09_07 183/184
32 Sindel_03_08 63/64 124 Sindel_12_20 247/248
35 Sindel_03_10 69/70 129 Sindel_13_06 257/258
27 Sindel_03_13 53/54 136 Sindel_14_12 271/272
41 Sindel_04_03 81/82 153 Sindel_15_10 305/306
45 Sindel_04_09 89/90 152 Sindel_15_18 303/304
43 Sindel_04_17 85/86 154 Sindel_15_20 307/308
48 Sindel_05_01 95/96 158 Sindel_16_03 315/316
50 Sindel_05_12 99/100 162 Sindel_16_10 323/324
55 Sindel_05_16 109/110 182 Sindel_18_18 363/364
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76 Sindel_07_20 151/152
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
9 Sindel_01_19 17/18 120 Sindel_12_14 239/240
21 Sindel_02_05 41/42 131 Sindel_13_08 261/262
24 Sindel_02_18 47/48 126 Sindel_13_11 251/252
35 Sindel_03_10 69/70 135 Sindel_14_02 269/270
27 Sindel_03_13 53/54 139 Sindel_14_04 277/278
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51 Sindel_05_13 101/102 182 Sindel_18_18 363/364
57 Sindel_05_17 113/114 185 Sindel_19_01 369/370
77 Sindel_08_01 153/154 187 Sindel_19_05 373/374
81 Sindel_08_13 161/162 191 Sindel_19_17 381/382
90 Sindel_09_05 179/180 200 Sindel_20_19 399/400
93 Sindel_09_17 185/186 202 Sindel_20_20 403/404
110 Sindel_11_15 219/220
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
10 Sindel_01_08 19/20 95 Sindel_09_09 189/190
6 Sindel_01_18 11/12 102 Sindel_10_07 203/204
11 Sindel_01_20 21/22 112 Sindel_11_07 223/224
16 Sindel_02_12 31/32 118 Sindel_12_02 235/236
33 Sindel_03_09 65/66 117 Sindel_12_11 233/234
27 Sindel_03_13 53/54 121 Sindel_12_15 241/242
38 Sindel_04_11 75/76 127 Sindel_13_14 253/254
43 Sindel_04_17 85/86 136 Sindel_14_12 271/272
54 Sindel_05_04 107/108 142 Sindel_14_19 283/284
49 Sindel_05_11 97/98 152 Sindel_15_18 303/304
57 Sindel_05_17 113/114 157 Sindel_16_02 313/314
59 Sindel_05_19 117/118 164 Sindel_17_02 327/328
62 Sindel_06_03 123/124 168 Sindel_17_06 335/336
67 Sindel_06_08 133/134 182 Sindel_18_18 363/364
75 Sindel_07_18 149/150 184 Sindel_18_19 367/368
77 Sindel_08_01 153/154 192 Sindel_19_18 383/384
88 Sindel_09_03 175/176 197 Sindel_20_15 393/394
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
4 Sindel_01_04 7/8 131 Sindel_13_08 261/262
27 Sindel_03_13 53/54 134 Sindel_14_11 267/268
40 Sindel_04_02 79/80 147 Sindel_15_02 293/294
38 Sindel_04_11 75/76 151 Sindel_15_06 301/302
65 Sindel_06_05 129/130 153 Sindel_15_10 305/306
60 Sindel_06_11 119/120 148 Sindel_15_12 295/296
61 Sindel_06_12 121/122 161 Sindel_16_09 321/322
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90 Sindel_09_05 179/180 182 Sindel_18_18 363/364
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93 Sindel_09_17 185/186 188 Sindel_19_06 375/376
99 Sindel_10_02 197/198 192 Sindel_19_18 383/384
101 Sindel_10_13 201/202 198 Sindel_20_09 395/396
122 Sindel_12_18 243/244 201 Sindel_20_10 401/402
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
10 Sindel_01_08 19/20 100 Sindel_10_04 199/200
9 Sindel_01_19 17/18 103 Sindel_10_08 205/206
15 Sindel_02_02 29/30 105 Sindel_10_20 209/210
26 Sindel_03_02 51/52 119 Sindel_12_03 237/238
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마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
2 Sindel_01_02 3/4 95 Sindel_09_09 189/190
8 Sindel_01_07 15/16 93 Sindel_09_17 185/186
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21 Sindel_02_05 41/42 112 Sindel_11_07 223/224
27 Sindel_03_13 53/54 121 Sindel_12_15 241/242
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50 Sindel_05_12 99/100 151 Sindel_15_06 301/302
51 Sindel_05_13 101/102 146 Sindel_15_11 291/292
53 Sindel_05_14 105/106 155 Sindel_16_01 309/310
59 Sindel_05_19 117/118 158 Sindel_16_03 315/316
62 Sindel_06_03 123/124 169 Sindel_17_15 337/338
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70 Sindel_07_11 139/140 186 Sindel_19_11 371/372
84 Sindel_08_18 167/168 195 Sindel_20_06 389/390
90 Sindel_09_05 179/180 197 Sindel_20_15 393/394
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
14 Sindel_02_01 27/28 96 Sindel_09_20 191/192
35 Sindel_03_10 69/70 99 Sindel_10_02 197/198
27 Sindel_03_13 53/54 107 Sindel_11_12 213/214
28 Sindel_03_14 55/56 117 Sindel_12_11 233/234
39 Sindel_04_12 77/78 131 Sindel_13_08 261/262
44 Sindel_04_18 87/88 127 Sindel_13_14 253/254
54 Sindel_05_04 107/108 133 Sindel_13_19 265/266
49 Sindel_05_11 97/98 139 Sindel_14_04 277/278
57 Sindel_05_17 113/114 146 Sindel_15_11 291/292
65 Sindel_06_05 129/130 158 Sindel_16_03 315/316
64 Sindel_06_15 127/128 167 Sindel_17_05 333/334
73 Sindel_07_04 145/146 168 Sindel_17_06 335/336
74 Sindel_07_05 147/148 185 Sindel_19_01 369/370
78 Sindel_08_03 155/156 188 Sindel_19_06 375/376
84 Sindel_08_18 167/168 191 Sindel_19_17 381/382
97 Sindel_09_10 193/194 195 Sindel_20_06 389/390
93 Sindel_09_17 185/186 202 Sindel_20_20 403/404
마커번호 마커명 프라이머 서열번호 마커번호 마커명 프라이머 서열번호
8 Sindel_01_07 15/16 111 Sindel_11_06 221/222
22 Sindel_02_06 43/44 114 Sindel_11_09 227/228
20 Sindel_02_14 39/40 117 Sindel_12_11 233/234
24 Sindel_02_18 47/48 121 Sindel_12_15 241/242
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28 Sindel_03_14 55/56 130 Sindel_13_07 259/260
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54 Sindel_05_04 107/108 153 Sindel_15_10 305/306
50 Sindel_05_12 99/100 149 Sindel_15_14 297/298
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96 Sindel_09_20 191/192 186 Sindel_19_11 371/372
100 Sindel_10_04 199/200 198 Sindel_20_09 395/396
106 Sindel_10_09 211/212 202 Sindel_20_20 403/404
실시예 5: 증폭된 Indel 마커 산물의 코드화를 통한 품종인식 분석
실시예 5-1: 증폭된 Indel 마커 산물의 코드화
인식하고자 하는 콩 품종의 예로 “대풍”에서의 증폭된 산물을 표준 콩 품종의 증폭된 산물과 비교하여 코드화하였다. 구체적으로, 증폭된 Indel 마커 정보를 바탕으로 표준유전체인 Williams82와 같은 밴드크기를 보이는 결과는 ‘a’, 다른 결과는 ‘b’로 나타내었고, 증폭결과가 ‘a’인 경우를 디지털 신호 ‘0’으로 전환하여 흰색으로 표기하고, 증폭결과가 ‘b’인 경우 디지털 신호 ‘1’로 전환하여 검정색으로 표기하였다. 이러한 흰색과 검정색 표기를 이용하여 1차원 또는 2차원 표현의 바코드를 생성하였다.
1차원 표현의 경우, 염색체 1번부터 n번까지를 선형으로 연결하였고, 2차원 표현의 경우, 염색체별로 표시함으로써 DMB 특이 패턴을 한눈에 쉽게 이해할 수 있다(도 4).
실시예 5-2: 상기 코드화 결과의 계보도 표현에 의한 품종 인식
상기 코드화된 결과를 2차원으로 표현함으로써 모본 또는 부본에 상응하는 정보를 계보도로서 출력함으로써 보다 효과적으로 한눈에 품종을 인식할 수 있었다.
백운콩을 모본으로 하고, 신팔달콩 2호를 부본으로 하여 육성된 대풍과 신기 두 품종에 본 발명의 Indel 마커의 증폭결과를 2차원으로 코드화하였을 때 각 염색체별 변이영역(DMB) 유래가 모본, 또는 부본인지를 정확히 탐색할 수 있음을 확인하였다. 구체적으로, 1번 염색체를 대상으로, 신기의 경우 앞부분은 신팔달콩 2호에서, 뒷부분은 백운에서 고유의 변이영역(DMB)가 유전되었으나, 대풍의 경우 이와 반대의 경향을 보이고 있으며 더 많은 재조합(reshuffling)이 일어난 것을 확인할 수 있었다(도 6).
실시예 5-3: 상기 코드화 결과에 의한 여교배 품종의 인식
여교배로 육성된 품종의 경우, 반복친으로 사용된 품종과 유전적 유사도가 매우 높아 기존의 분자마커로는 두 품종을 구별하는 것이 어려웠다. 이를 해결하고자, SMV 저항성 유전자인 Rsv1을 소원콩에 도입하기 위해 여교배 방법으로 육성된 신화, Rsv3가 도입된 신강, 그리고 반복친으로 사용된 소원콩에 본 발명의 Indel 마커의 증폭결과를 2차원으로 코드화한 결과, 신화와 신강 두 품종은 소원콩과 매우 유전적 유사도가 높게 나타났으나 고유의 변이영역(DMB) 패턴으로 각 품종을 명확히 구별할 수 있었다(도 7).
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위의 의미 및 범위, 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Indel marker for discrimination of soybean cultivar <130> PA130868/KR <160> 404 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_01 forward primer <400> 1 ccacaagcca aaagtaaaac 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_01 reverse primer <400> 2 tgaaagtacc tgtaagggga 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_02 forward primer <400> 3 tccaatgatg tacgtgtgtc 20 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_02 reverse primer <400> 4 tttgcgtact tcttcttctt c 21 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_03 forward primer <400> 5 aaggaacaca aactcacgac 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_03 reverse primer <400> 6 aactgcttca taggaggaga 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_04 forward primer <400> 7 aaaaagagac gtacggttta 20 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_04 reverse primer <400> 8 tgctccaaaa caaaattatt a 21 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_05 forward primer <400> 9 tcctttagga taattgagct g 21 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_05 reverse primer <400> 10 ttcggtgaaa tctaaaaaga a 21 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_18 forward primer <400> 11 aatttcctca aaccacaaaa 20 <210> 12 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_18 reverse primer <400> 12 acccttggga tttgttatg 19 <210> 13 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_06 forward primer <400> 13 ccactaaaag caaaataacg a 21 <210> 14 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_06 reverse primer <400> 14 ccaattattt tagtcaagta ggg 23 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_07 forward primer <400> 15 gacaagtgtg ttttgtgtgc 20 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_07 reverse primer <400> 16 gacgaagcaa gtcaaaattc 20 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_19 forward primer <400> 17 aactaatttt tgcacatccc 20 <210> 18 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_19 reverse primer <400> 18 aatggaaaat gttggctaga 20 <210> 19 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_08 forward primer <400> 19 ggtaggaagg ttgttttatt t 21 <210> 20 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_08 reverse primer <400> 20 ttcctcacac ccttaaaaa 19 <210> 21 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_20 forward primer <400> 21 gtatgcttat gcttggacct 20 <210> 22 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_20 reverse primer <400> 22 aaagtaaagc aaggtgtcca 20 <210> 23 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_09 forward primer <400> 23 cttttacact gatcataact tgaa 24 <210> 24 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_01_09 reverse primer <400> 24 aaaaacactt acatttggta aaaa 24 <210> 25 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_11 forward primer <400> 25 aaaaattcac ttcaaaatca 20 <210> 26 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_11 reverse primer <400> 26 aacaccaatt ttgttttacg a 21 <210> 27 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_01 forward primer <400> 27 actctaaatt tgggtaattt tt 22 <210> 28 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_01 reverse primer <400> 28 acaaattgtg aaaccatcaa c 21 <210> 29 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_02 forward primer <400> 29 ataatgaatg gggaacacac 20 <210> 30 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_02 reverse primer <400> 30 gatgattatt caattcggga 20 <210> 31 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_12 forward primer <400> 31 tgaggtgtaa aagcttggtt 20 <210> 32 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_12 reverse primer <400> 32 aatagaacaa ttctcgtgcc 20 <210> 33 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_03 forward primer <400> 33 tttttctctg gttttctatg tt 22 <210> 34 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_03 reverse primer <400> 34 tcccagatct atgaacctct 20 <210> 35 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_04 forward primer <400> 35 tgtaaaatgc cccaaaaa 18 <210> 36 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_04 reverse primer <400> 36 ggtctattca taaacttgac cttt 24 <210> 37 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_13 forward primer <400> 37 ggtacaagaa tgagtgggtg 20 <210> 38 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> 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Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_08 reverse primer <400> 46 atgaaagata acacaacgca 20 <210> 47 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_18 forward primer <400> 47 ataacaccac cagcaaagtt 20 <210> 48 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_02_18 reverse primer <400> 48 ctttcccttc aaatagggtt 20 <210> 49 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_11 forward primer <400> 49 ttgattctat caagataacc ga 22 <210> 50 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_11 reverse primer <400> 50 aattatttta tactatccgt acatt 25 <210> 51 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_02 forward primer <400> 51 acattggatg tgaaaatggt 20 <210> 52 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_02 reverse primer <400> 52 tctaaaagcc atgagaggaa 20 <210> 53 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_13 forward primer <400> 53 aaacatgaat ggtgcttttt 20 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tgtttaatgt ttcagattgt cc 22 <210> 62 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_17 reverse primer <400> 62 tgtgaaattt tattttcatg ttaag 25 <210> 63 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_08 forward primer <400> 63 tttagtttat aagcataagt tgaga 25 <210> 64 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_08 reverse primer <400> 64 aaaaatattg actgaaaagg t 21 <210> 65 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_09 forward primer <400> 65 cttccatggc tctgttaatg 20 <210> 66 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_09 reverse primer <400> 66 tgggataaag gaaacaaaaa 20 <210> 67 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_19 forward primer <400> 67 acttgccagt ttggtgtaag 20 <210> 68 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_03_19 reverse primer <400> 68 ccacgagtac tgagtgcata 20 <210> 69 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> 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Sequence <220> <223> SIndel_05_12 reverse primer <400> 100 ttgtgtgtta ttgctcttct g 21 <210> 101 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_05_13 forward primer <400> 101 taagcacaag cctgttaagc 20 <210> 102 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_05_13 reverse primer <400> 102 agaacctcct gaaccacct 19 <210> 103 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_05_02 forward primer <400> 103 aaaaagatgg taaagttgga a 21 <210> 104 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_05_02 reverse primer <400> 104 tttggcttta atcccataat 20 <210> 105 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_05_14 forward primer <400> 105 tccattcaaa tgctgtaatt t 21 <210> 106 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_05_14 reverse primer <400> 106 tgttaaaaca gaaaagtgtt gc 22 <210> 107 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_05_04 forward primer <400> 107 caaatccagt ttcttatatt 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reverse primer <400> 366 catgtacatc ttatatgttg gatt 24 <210> 367 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_18_19 forward primer <400> 367 cttaattgaa acttttaaac atca 24 <210> 368 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_18_19 reverse primer <400> 368 ttgaatcagg tcttcttacc a 21 <210> 369 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_01 forward primer <400> 369 tctttcacga ttatgcattg 20 <210> 370 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_01 reverse primer <400> 370 acgtaataac actatcaact tgt 23 <210> 371 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_11 forward primer <400> 371 gcaacaccca ttttcatatt 20 <210> 372 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_11 reverse primer <400> 372 ccttaaacgt ctaggaacca 20 <210> 373 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_05 forward primer <400> 373 gagaaatttt gataatgagg gt 22 <210> 374 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_05 reverse primer <400> 374 tatcatgcat tgaaattgga 20 <210> 375 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_06 forward primer <400> 375 aacaaatgag ttaaactttg agc 23 <210> 376 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_06 reverse primer <400> 376 acaaaaccca atcaatcaat 20 <210> 377 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_08 forward primer <400> 377 agtcaaaacc tactgatttt caa 23 <210> 378 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_08 reverse primer <400> 378 tccttagatc catcgaacac 20 <210> 379 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_16 forward primer <400> 379 agcaactgca aaaatcctta 20 <210> 380 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_16 reverse primer <400> 380 ttttctgtat ctgtatgttg ttc 23 <210> 381 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_17 forward primer <400> 381 tgtctgtgtg ttgaatggag 20 <210> 382 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_17 reverse primer <400> 382 acaacctgtc aaacaagtcc 20 <210> 383 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_18 forward primer <400> 383 tgtgacctga tgtcaaatta 20 <210> 384 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_18 reverse primer <400> 384 cattttggtc tctatagctt ttt 23 <210> 385 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_19 forward primer <400> 385 tgtaggtcca tcgagtaatg 20 <210> 386 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_19 reverse primer <400> 386 ttcacaaaag aaatactaca cg 22 <210> 387 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_20 forward primer <400> 387 ttgagggctt gacaaaaa 18 <210> 388 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_19_20 reverse primer <400> 388 caggccatgt tgagtataaa 20 <210> 389 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_06 forward primer <400> 389 ccaccagtgg ttacatcata 20 <210> 390 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_06 reverse primer <400> 390 acgtgtgttt cctttgctat 20 <210> 391 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_07 forward primer <400> 391 gctaagcaat tagcaactca a 21 <210> 392 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_07 reverse primer <400> 392 tttataatgc atgcacattt tt 22 <210> 393 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_15 forward primer <400> 393 cattcttctc tcctccagtg 20 <210> 394 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_15 reverse primer <400> 394 tgagtttgag gataaggtcg 20 <210> 395 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_09 forward primer <400> 395 gctttgattt ggtcatgttt 20 <210> 396 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_09 reverse primer <400> 396 gtttgtcgca aaaggttaag 20 <210> 397 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_18 forward primer <400> 397 aagagggcta tttgtgattg 20 <210> 398 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_18 reverse primer <400> 398 tggacctatt cccatacttg 20 <210> 399 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_19 forward primer <400> 399 agagagagcc gaagagattt 20 <210> 400 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_19 reverse primer <400> 400 tttctatccc aacttctgct 20 <210> 401 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_10 forward primer <400> 401 taaagtttgg ggtctagcaa 20 <210> 402 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_10 reverse primer <400> 402 gatgcatttg gatttcattt 20 <210> 403 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_20 forward primer <400> 403 tcgataacat tgtaattata aacag 25 <210> 404 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SIndel_20_20 reverse primer <400> 404 aagatgatac aagagaacat aacg 24

Claims (24)

  1. 서열번호 1 내지 서열번호 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 27개 이상의 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 17 및 18로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 37 및 38로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 67 및 68로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 71 및 72로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 95 및 96으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 145 및 146으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 149 및 150으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 155 및 156으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 179 및 180으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 201 및 202로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 217 및 218로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 227 및 228로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 233 및 234로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 243 및 244로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 263 및 264로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 255 및 256으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 277 및 288로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 279 및 280으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 295 및 296으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 315 및 316으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 333 및 334로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 359 및 360으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 379 및 380으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 381 및 382로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 391 및 392로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 395 및 396으로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 33 및 34로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 75 및 76으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 87 및 88로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 99 및 100으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 119 및 120으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 127 및 128로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 145 및 146으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 179 및 180으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 181 및 182로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 199 및 200으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 239 및 240으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 261 및 262로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 263 및 264로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 255 및 256으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 275 및 276으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 279 및 280으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 305 및 306으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 291 및 292로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 315 및 316으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 319 및 320으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 329 및 330으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 333 및 334로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 347 및 348로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 363 및 364로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 375 및 376으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 385 및 386으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 397 및 398로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 399 및 400으로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 13 및 14로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 51 및 52로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 71 및 72로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 73 및 74로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 87 및 88로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 107 및 108로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 99 및 100으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 127 및 128로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 149 및 150으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 165 및 166으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 183 및 184로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 189 및 190으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 193 및 194로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 187 및 188로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 197 및 198로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 225 및 226으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 235 및 236으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 245 및 246으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 283 및 284로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 295 및 296으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 315 및 316으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 321 및 322로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 317 및 318로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 329 및 330으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 345 및 346으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 349 및 350으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 357 및 358로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 363 및 364로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 371 및 372로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 21 및 22로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 27 및 28로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 63 및 64로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 71 및 72로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 85 및 86으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 107 및 108로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 113 및 114로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 129 및 130으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 159 및 160으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 165 및 166으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 187 및 188로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 191 및 192로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 197 및 198로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 211 및 212로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 235 및 236으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 253 및 254로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 277 및 278로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 271 및 272로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 285 및 286으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 301 및 302로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 305 및 306으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 299 및 300으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 315 및 316으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 317 및 318로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 333 및 334로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 335 및 336으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 345 및 346으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 361 및 362로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 363 및 364로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 377 및 378로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 9 및 10으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 17 및 18로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 41 및 42로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 31 및 32로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 69 및 70으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 83 및 84로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 87 및 88로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 103 및 104로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 115 및 116으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 99 및 100으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 159 및 160으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 179 및 180으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 193 및 194로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 187 및 188로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 201 및 202로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 217 및 218로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 221 및 222로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 231 및 232로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 239 및 240으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 257 및 258로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 259 및 260으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 263 및 264로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 265 및 266으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 297 및 298로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 315 및 316으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 333 및 334로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 347 및 348로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 345 및 346으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 389 및 390으로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 399 및 400으로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 5 및 6으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 9 및 10으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 41 및 42로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 25 및 26으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 69 및 70으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 79 및 80으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 107 및 108로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 113 및 114로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 141 및 142로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 151 및 152로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 155 및 156으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 175 및 176으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 185 및 186으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 191 및 192로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 203 및 204로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 211 및 212로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 207 및 208로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 217 및 218로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 231 및 232으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 235 및 236으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 239 및 240으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 257 및 258로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 287 및 288로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 289 및 290으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 335 및 336으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 341 및 342로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 339 및 340으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 353 및 354로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 359 및 360으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 395 및 396으로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 393 및 394로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 1 및 2로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 9 및 10으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 25 및 26으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 61 및 62로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 71 및 72로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 73 및 74로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 85 및 86으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 131 및 132로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 137 및 138로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 159 및 160으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 179 및 180으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 183 및 184로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 193 및 194로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 215 및 216으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 231 및 232로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 225 및 226으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 233 및 234로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 249 및 250으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 261 및 262으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 267 및 268로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 283 및 284로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 301 및 302로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 303 및 304로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 323 및 324로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 311 및 312로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 335 및 336으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 347 및 348로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 337 및 338로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 349 및 350으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 353 및 354로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 395 및 396으로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 11 및 12로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 21 및 22로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 37 및 38로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 39 및 40으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 59 및 60으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 57 및 58로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 85 및 86으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 107 및 108로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 99 및 100으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 123 및 124로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 131 및 132로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 149 및 150으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 189 및 190으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 191 및 192로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 203 및 204로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 207 및 208로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 243 및 244로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 251 및 252로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 263 및 254로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 277 및 278로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 283 및 284로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 295 및 296으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 299 및 300으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 307 및 308로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 319 및 320으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 345 및 346으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 349 및 350으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 363 및 364로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 369 및 370으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 373 및 374로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 393 및 394로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 17 및 18로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 57 및 58로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 93 및 94로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 95 및 96으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 97 및 98로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 99 및 100으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 113 및 114로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 121 및 122로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 147 및 148로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 161 및 162로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 179 및 180으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 199 및 200으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 205 및 206으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 209 및 210으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 219 및 220으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 225 및 226으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 235 및 236으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 273 및 274로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 271 및 272로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 295 및 296으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 307 및 308로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 315 및 316으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 311 및 312로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 325 및 326으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 353 및 354로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 355 및 356으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 369 및 370으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 375 및 376으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 371 및 372로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 383 및 384로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 399 및 400으로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 403 및 404로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 13 및 14로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 33 및 34로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 45 및 46으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 47 및 48로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 63 및 64로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 69 및 70으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 81 및 82로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 89 및 90으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 85 및 86으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 95 및 96으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 99 및 100으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 109 및 110으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 117 및 118로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 131 및 132로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 133 및 134로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 151 및 152로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 163 및 164로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 177 및 178로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 179 및 180으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 183 및 184로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 247 및 248로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 257 및 258로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 371 및 372로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 305 및 306으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 303 및 304로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 307 및 308로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 315 및 316으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 323 및 324로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 363 및 364로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 387 및 388로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 391 및 392로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 395 및 396으로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 17 및 18로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 41 및 42로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 47 및 48로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 69 및 70으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 55 및 56으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 73 및 74로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 95 및 96으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 107 및 108로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 111 및 112로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 101 및 102로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 113 및 114로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 153 및 154로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 161 및 162로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 179 및 180으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 185 및 186으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 219 및 220으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 239 및 240으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 261 및 262로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 251 및 252로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 269 및 270으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 277 및 278로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 287 및 288로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 293 및 294로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 315 및 316으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 335 및 336으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 337 및 338로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 363 및 364로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 369 및 370으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 373 및 374로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 381 및 382로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 399 및 400으로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 403 및 404로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 19 및 20으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 11 및 12로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 21 및 22로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 31 및 32로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 65 및 66으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 75 및 76으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 85 및 86으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 107 및 108로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 97 및 98로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 113 및 114로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 117 및 118로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 123 및 124로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 133 및 134로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 149 및 150으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 153 및 154로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 175 및 176으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 189 및 190으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 203 및 204로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 223 및 224로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 235 및 236으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 233 및 234로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 241 및 242로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 253 및 254로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 271 및 272로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 283 및 284로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 303 및 304로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 313 및 314로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 327 및 328로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 335 및 336으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 363 및 364로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 367 및 368로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 383 및 384로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 393 및 394로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 7 및 8로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 79 및 80으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 75 및 76으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 129 및 130으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 119 및 120으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 121 및 122로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 127 및 128로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 145 및 146으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 155 및 156으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 169 및 170으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 179 및 180으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 189 및 190으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 185 및 186으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 197 및 198로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 201 및 202로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 243 및 244로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 261 및 262로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 267 및 268로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 293 및 294로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 301 및 302로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 305 및 306으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 295 및 296으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 321 및 322로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 327 및 328로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 341 및 342로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 345 및 346으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 361 및 362로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 363 및 364로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 367 및 368로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 375 및 376으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 383 및 384로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 395 및 396으로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 401 및 402로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  15. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 19 및 20으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 17 및 18로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 29 및 30으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 51 및 52로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 55 및 56으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 89 및 90으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 87 및 88로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 107 및 108로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 105 및 106으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 135 및 136으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 153 및 154로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 165 및 166으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 177 및 178로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 179 및 180으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 183 및 184로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 187 및 188로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 199 및 200으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 205 및 206으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 209 및 210으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 237 및 238로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 233 및 234로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 241 및 242로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 253 및 254로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 279 및 280으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 283 및 284로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 295 및 296으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 299 및 300으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 323 및 324로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 317 및 318로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 333 및 334로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 341 및 342로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 339 및 340으로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 399 및 400으로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  16. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 3 및 4로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 15 및 16으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 19 및 20으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 35 및 36으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 41 및 42로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 55 및 56로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 73 및 74로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 99 및 100으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 101 및 102로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 105 및 106으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 117 및 118로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 123 및 124로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 133 및 134로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 139 및 140으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 167 및 168로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 179 및 180으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 189 및 190으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 185 및 186으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 191 및 192로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 217 및 218로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 223 및 224로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 241 및 242로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 287 및 288로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 279 및 280으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 301 및 302로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 291 및 292로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 309 및 310으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 315 및 316으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 337 및 338로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 351 및 352로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 371 및 372로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 389 및 390으로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 393 및 394로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  17. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 27 및 28로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 69 및 70으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 55 및 56으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 77 및 78로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 87 및 88로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 107 및 108로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 97 및 98로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 113 및 114로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 129 및 130으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 127 및 128로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 145 및 146으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 147 및 148로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 155 및 156으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 167 및 168로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 193 및 194로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 185 및 186으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 191 및 192로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 197 및 198로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 213 및 214로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 233 및 234로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 261 및 262로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 253 및 254로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 265 및 266으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 277 및 278로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 291 및 292로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 315 및 316으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 333 및 334로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 335 및 336으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 369 및 370으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 375 및 376으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 381 및 382로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 389 및 390으로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 403 및 404로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  18. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 서열번호 15 및 16으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 43 및 44로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 39 및 40으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 47 및 48로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 53 및 54로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 55 및 56으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 79 및 80으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 107 및 108로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 99 및 100으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 101 및 102로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 155 및 156으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 157 및 158로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 161 및 162로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 177 및 178로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 191 및 192로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 199 및 200으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 211 및 212로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 221 및 222로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 227 및 228로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 233 및 234로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 241 및 242로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 243 및 244로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 259 및 260으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 267 및 268로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 305 및 306으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 297 및 298로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 299 및 300으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 313 및 314로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 333 및 334로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 361 및 362로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 369 및 370으로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 371 및 372로 구성되는 프라이머 세트; 서열번호 395 및 396으로 구성되는 프라이머 세트 및 서열번호 403 및 404로 구성되는 프라이머 세트를 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  19. 제2항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 1 이상의 프라이머 세트를 추가로 포함하는 콩 품종 인식용 조성물.
  20. (a) 콩 시료에서 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 서열번호 1 내지 서열번호 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 27개 이상의 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및 (b) 상기 증폭 산물을 검출하는 단계를 포함하는, 콩 품종 인식 방법.
  21. 제20항에 있어서, (c) 상기 증폭된 산물을 표준 콩 품종의 증폭된 산물과 비교하여 품종을 인식하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 콩 품종 인식 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 (c) 단계에서 품종을 인식함에 있어, 증폭된 산물을 표준 콩 품종의 증폭된 산물과 비교하여 코드화 하는 것을 특징으로 하는, 콩 품종 인식 방법.
  23. 서열번호 1 내지 서열번호 404의 올리고뉴클레오티드로 구성되는 202개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 27개 이상의 프라이머 세트를 포함하는, 콩 품종 인식용 키트.
  24. 제23항에 있어서, 상기 키트에는 DNA 중합효소, dNTPs 및 반응완충액을 추가로 포함하는, 콩 품종 인식용 키트.
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