KR101467568B1 - 개선된 피부 저류 및 발모 효과를 갖는 미녹시딜 함유조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 남성형 탈모증 치료 약물인 미녹시딜(Minoxidil, 2, 4-diamino-6- piperidinopyrimidine-3-oxide)의 피부 저류 증가 및 발모 효과 개선을 위한 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 조성물은 미녹시딜, 피부연화제 및 피부저류제를 필수적으로 함유하며, 5 알파 환원효소 억제효과를 갖는 불포화 지방산 또는 이를 포함하는 생약추출물을 함유한다.

본 발명의 조성물은 미녹시딜의 피부 투과 및 전신 흡수에 의한 부작용 없이 모근 및 모낭이 존재하는 피부에 미녹시딜의 저류량을 증가시키며, 모근에서의 혈류 촉진 작용을 증강시킴과 동시에 발모효과를 더욱 증강시킬 수 있다.

미녹시딜, 피부연화제, 피부저류제, 5 알파 환원효소 억제

Description

개선된 피부 저류 및 발모 효과를 갖는 미녹시딜 함유 조성물{Pharmaceutical solution containing minoxidil with enhanced dermal retention and hair growing effect}

본 발명은 남성형 탈모증 치료 약물인 미녹시딜(Minoxidil, 2, 4-diamino-6- piperidinopyrimidine-3-oxide)의 피부 저류 증가 및 발모 효과 개선을 위한 조성물에 관한 것이다.

인체의 정상적인 모발은 대략 10만 개 정도이며 각각의 모발은 서로 다른 주기를 가지며 성장기(Anagen), 퇴행기(Catagen) 및 휴지기(Telogen)를 거쳐 성장 탈락한다. 이러한 주기는 3~6년에 걸쳐 반복되는데 성장기는 모발이 가장 활발하게 성장하며 퇴행기는 매우 불안정하고 일시적인 상태이며 휴지기는 모발이 성장을 멈추고 탈락하는 시기이며 이러한 결과로 정상인의 경우 1일 평균 20~100개 가량의 모발이 탈락한다.

탈모증이란 이러한 모발의 주기 중에서 성장기의 모발 비율이 작아지고 퇴행 기 또는 휴지기의 모발 비율이 늘어남에 따라 비정상적으로 탈락하는 모발이 많아지는 현상을 말한다.

탈모증은 크게 대머리라 불리는 남성형 탈모증과 면역시스템 불균형 등에 의해 발생하는 원형 탈모증의 두가지로 나뉘며, 그 탈모의 원인은 아직까지 명확히 밝혀지지 않았으나 두피내 혈액순환 불량, 남성 호르몬의 과잉작용, 피지분비 과잉, 유전, 노화, 스트레스 등에 의해 발생하는 것으로 알려져 있다.

탈모증의 치료와 예방에 있어서 현재까지 미국식품의약품안전청(FDA)의 승인을 받은 제제는 외용제로 사용되는 미녹시딜과 경구제로 사용되는 피나스테리드가 있다.

미녹시딜은 1979년에 경구용 고혈압 치료제로서 미국 식품의약품 안전청에 승인을 받은 이후 고혈압 치료제로서의 임상시험에서 부작용으로 우연히 다모증이 관찰되어 발모제로 개발되어 사용되었고, 1988년에 2% 제제가 처방약으로 승인 받은 이후 1996년에 일반약으로 전환되었으며, 1997년에는 5% 제제가 일반의약품으로서 미국 식품의약품 안전청에 승인을 받았다(Fragrance Journal, 2, 33~37, 2000).

그런데, 미녹시딜은 모근 내의 혈류를 증가시킴으로써 발모 효력을 나타내는 약물로서 두피에 적용시 약물이 피부에 지속적으로 저류하지 않을 경우 효과는 그다지 만족스럽지 못하면서 동시에 전신 혈류로의 흡수에 의해 피부 자극성 등의 부 작용을 일으킬 수 있는 단점을 가지고 있다.

이에 미녹시딜을 함유하는 발모제에 있어서, 미녹시딜 제제의 피부 투과 증가, 저류량 증가, 피부 자극성 억제 등에 대한 다양한 연구가 이루어지고 있다.

대한민국 공개특허공보 제2000-38214호에는 미녹시딜, 은행 및 홍삼추출물을 함유하는 조성물에 의한 혈류량 증가 효과, 혈관 내피 성장 인자 합성 증가 효과 및 모근 세포 활성 효과가 기술되어 있으며, 대한민국 공개특허공보 제2001-71319호에는 미녹시딜과 항히스타민제를 함유하는 외용조성물의 미녹시딜에 의한 피부 적용시의 자극성을 감소시키는 효과가 기술되어 있다.

또한, 대한민국 공개특허공보 제2001-3063호에는 미녹시딜, 공계면활성제, 계면활성제 및 오일을 함유하는 에멀젼 조성물에 의한 피부투과도를 높이는 효과를 기재하고 있으나, 상기 종래기술은 다량의 오일과 계면활성제 사용시 두피에 대한 착용감이 떨어질 뿐만 아니라 피부 투과도 증가로 인하여 오히려 약물의 전신흡수 증가가 일어나 저혈압 등의 부작용이 발생할 수 있다는 문제점이 있다.

한편, 대한민국 공개특허공보 제2000-70370호에는 경피적으로 흡수된 미녹시딜을 진피에서 체류하도록 하여 머리털의 성장점인 모구부 주위에서 미녹시딜의 농도를 장시간 높이기 위한 목적으로 미녹시딜 배합 발모제에 디프로필렌글리콜을 배 합한 기술이 공지되어 있다.

본 발명자는 미녹시딜 외용제를 두피에 적용시 약물이 피부에 지속적으로 저류하지 않는 단점과 동시에 전신 혈류로의 흡수에 의해 피부 자극성 등의 부작용을 일으키는 문제점을 해결하기 위해 노력한 끝에 미녹시딜 함유 제제에 있어서, 필수적으로 피부연화제 및 피부저류제를 함유하는 조성물을 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 미녹시딜의 각질층 투과를 증가시킴과 동시에 진피내 저류를 증가시킴으로써 모근내 혈류 개선 효과를 증강시키고 발모 효력을 높이는 개선된 피부 저류 및 발모 효과를 갖는 미녹시딜 함유 조성물을 제공하는 것이다.

아울러 본 발명은 발모 촉진 효과를 갖는 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 활성성분으로서 미녹시딜 또는 그 유도체 및 그의 염을 함유하는 외용액 제제에 있어서, 각질연화제로서 레티놀 또는 그의 산부가염과 진피내 저류개선제로서 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트를 필수적으로 함유하는 미녹시딜 외용액 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 미녹시딜 외용액 조성물에 5 알파 환원효소 억제 효력을 갖는 불포화지방산 또는 이를 포함하는 생약 추출물을 더 함유함으로써 발모 촉진 효과를 갖는 미녹시딜 외용액 조성물을 제공한다.

본 발명에서 미녹시딜을 용해시키기 위한 용제로는 에탄올, 폴리에칠렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디에칠렌글리콜모노에칠에테르, 글리세린 등이 사용되며 바람 직하게는 이들을 적절히 조합하여 사용한다.

미녹시딜의 각질층 투과를 높이기 위한 목적으로 사용되는 각질연화제로서는 레티놀 또는 이의 산부가염으로써 초산레티놀, 팔미틴산레티놀 및 이의 산화물인 레티날, 레티노인산이 사용되어 질수 있으며, 약물과 각질연화제의 적정 중량 비율은 1 : 0.0005 ~ 1 : 0.005 이며, 바람직하게는 1 : 0.001~ 1:0.002 이고, 그 이하의 농도에서는 각질 연화작용이 저하할 수 있고, 또 그 이상의 농도에서는 피부자극이 발생할 수 있는 우려가 있다.

미녹시딜의 진피내 저류를 증가시키기 위한 목적으로 사용되는 피부저류제로는 토코페롤에 폴리에칠렌글리콜을 접합시킴으로써 친지성 및 친수성 특성을 동시에 갖도록 한 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트가 사용되어질 수 있으며, 약물과 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트의 적정 중량 비율은 1 : 0.05 ~ 1 : 0.5 이며 바람직하게는 1 : 0.1 ~ 1 : 0.2 이다.

미녹시딜의 피부저류증가에 의한 모근내 혈류 증가효과와 더불어 테스토스테론으로부터 탈모현상의 원인이 되는 디하이드로테스토스테론의 생성을 억제시키기 위한 목적으로 사용되는 5 알파 환원효소 억제제로는 불포화지방산으로서 리놀레산, 감마리놀렌산 또는 이들을 함유하는 생약 추출물이 있다.

5 알파 환원효소 억제 목적의 리놀레산 또는 감마리놀렌산을 함유하는 생약추출물로는 톱야자 추출물, 쐐기풀추출물, 호박씨추출물, 달맞이꽃종자유, 보라지오일, 블랙커런트오일, 포도씨 추출물 등이 있다.

미녹시딜과 5 알파 환원효소 억제제인 리놀레산 또는 감마리놀렌산 또는 이들을 함유하는 생약추출물로의 적정 중량 비율은 1 : 0.1 ~ 1: 2, 바람직하게는1 : 0.2 ~ 1 : 0.1 이다.

상기 언급 되어진 첨가제 외에 본 발명의 미녹시딜 함유 외용액 조성물 제조를 위해서는 토코페롤, 부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔 등의 항산화제, 덱스판테놀 등의 보습제 및 폴리소르베이트, 히드로게니티드 캐스터 오일, 라브라솔 등의 계면활성제 및 폴리비닐피롤리딘, 히드록시프로필메칠셀룰로오스 등의 안정제 등이 사용되어질 수 있다.

본 발명의 조성물은 먼저 약물을 적절한 용제에 용해시킨 다음 각질연화제, 피부 저류제 및 5 알파 환원효소 억제제를 직접 또는 미리 적절한 용제에 용해 또는 분산시킨 형태로 투입하여 용해시킨 다음 기타 항산화제, 계면활성제, 안정제 등을 넣어 용해시키고 최종적으로 물을 가하여 일정 용량으로 정용함으로써 제조할 수 있다.

본 발명의 미녹시딜 조성물은 각질연화제로서 레티놀 또는 그의 산부가염, 진피내 저류개선제로서 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트를 필수적으로 함유함으로써 미녹시딜의 각질층 투과 개선과 동시에 진피내 저류를 증가시켜 미녹시딜의 저류효율을 높일 수 있으며, 이와 동시에 미녹시딜과 함께 5 알파 환원효소억제제로서 불포화 지방산인 리놀레산, 감마리놀렌산 또는 이들을 함유하는 생약 추출물을 첨가함으로써 발모 효력을 개선시킬 수 있다.

본 발명의 미녹시딜 함유 조성물의 제조 및 평가에 대한 실시예 및 실험예는 다음과 같다.

<실시예 1 내지 3> 미녹시딜 함유 외용액 조성물 제조

에탄올과 농글리세린을 혼합하고 50℃로 가온한 다음 여기에 무수구연산과 물을 제외한 하기 표에 기재된 모든 성분들을 차례로 용해시킨 다음 물에 용해시킨 무수구연산을 첨가하였으며, 실온으로 냉각한 다음 최종적으로 물을 가하여 100 ml이 되도록 정용한 다음 200 메쉬 체를 이용하여 여과하여 실시예 1 내지 3의 미녹시딜 함유 외용액 조성물 100 ml를 제조하였다.

< 비교예 1 및 2> 미녹시딜 함유 외용액 조성물 제조

하기 표에 기재된 조성들을 상기 실시예와 동일한 방법으로 비교예 1 및 2의 미녹시딜 함유 외용액 조성물 100 ml를 제조하였다.

<실험예 1> 무모 마우스를 이용한 시험관내 경피 투과 시험 1

무모 마우스(Hairless Mouse)를 대상으로 레티놀의 각질 연화 효과에 의한 미녹시딜의 각질층 투과도 및 진피내 잔류량을 평가하였다.

1) 피부(각질층) 투과도 평가

에탄올 및 팔미틴산 레티놀 에탄올 용액(레티놀로서 330 IU / ml) 1 ml를 각각 무모 마우스(Hairless Mouse, 수컷, 8~9주령, 27~33 g) 등피에 도포한 후 12시 간 동안 방치한 다음 무모 마우스를 에테르로 마취시킨 뒤 경추 탈골 하여 등쪽 피부를 잘라내어 프란츠 셀(d=0.9 mm, 수용기 용적 5 ml)의 막으로 사용하고 37℃의 50 mM 인산염 완충액(pH 7.4)을 수용기 용액으로 사용하였다.

비교예 1의 미녹시딜 용액 0.1 ml(미녹시딜로서 5 mg 해당량)를 무모 마우스의 피부위에 도포한 다음 교반하여 주면서 1, 2, 4, 6, 8시간 이후 수용기 용액 200 l 를 취하여 고속액체크로마토그래프를 이용하여 피부 투과량을 측정하여 표 1에 나타내었으며, 분석 조건은 다음과 같다.

- 칼럼 : 4.6 mm X 250 mm, C18, Hichrome

- 검출기 : UV Detector, L-2400, Hitachi

- 이동상 : MeOH : H2O : 빙초산 = 700 : 300 : 10 (Na docusate 3 g/L, pH 3)

- 유속 : 1 ml/min

- 주입량 : 20 ul

2) 피부 잔류량 평가

상기 피부 투과도 평가를 마친 후, 피부 투과시험 면적(Diffusion area)만큼 피부를 잘라낸 다음 인산염 완충액으로 피부에 붙어 있는 약물을 씻어낸다. 투명 비닐 테이프를 이용하여 각질층을 벗겨낸 후 피부를 건조시키고 무게를 측정하였다. 측정된 피부를 가위로 잘게 잘라 15 ml 용량의 튜브에 넣어준 다음 메탄올 2 ml을 넣고 12시간동안 약물을 추출한 후 Homogeniozer를 이용하여 2~3분씩 3~4회 반복하여 피부조직을 잘게 갈아주고, 12,000 rpm에서 5분간 원심분리 후 상층액 만취하여 상기 피부투과도 시험과 동일한 방법으로 고속 액체크로마토그래프를 이용하여 검체중의 약물 농도를 측정하였다(표 2).

3) 피부 투과도 및 잔류량 평가 결과

실험예 1의 피부 투과도 평가 결과 및 진피내 잔류량 평가 결과는 하기 표 1, 표2 및 도 1과 같다.

상기 표 1, 2 및 도 1에서 보는 바와 같이, 에탄올을 전처리한 대조군에 비하여 각질연화제로서 레티놀을 함유한 에탄올 용액으로 전처리한 무모 마우스 피부로부터 미녹시딜 외용액의 피부 투과도 증가와 진피내 약물의 높은 잔류량을 확인할 수 있었으며, 이로써 레티놀에 의한 각질 연화 효과를 통해 미녹시딜의 피부(각질층) 투과도가 현저히 증가하고, 이에 따라 진피내 잔류하는 약물의 양 또한 높게 관찰됨을 알 수 있었다.

<실험예 2> 무모 마우스를 이용한 시험관내 경피 투과 시험 2

진피내 저류개선제로서 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트를 함유하는 미녹시딜 외용액의 피부투과도 및 진피내 저류 평가 목적으로 무모 마우스(Hairless Mouse)를 대상으로 실시예 1 및 비교예 1, 2의 미녹시딜 함유 외용액을 각각 2회 반복 도포하여 피부 투과도 및 저류량을 평가하였다.

1) 피부 투과도 평가

실시예 1 및 비교예 1, 2의 미녹시딜 함유 외용액 1 ml을 각각 무모 마우스(Hairless Mouse, 수컷, 8~9주령, 27~33 g) 등피에 도포한 후 12시간 동안 방치한 다음 무모 마우스 (Hairless Mouse, 수컷, 8~9주령, 27~33 g)를 에테르로 마취시킨 뒤 경추 탈골하여 등쪽 피부를 잘라내어 프란츠 셀(d=0.9 mm, 수용기 용적 5 ml)의 막으로 사용하고 37℃의 50 mM 인산염 완충액(pH 7.4)을 수용기 용액으로 사용하였다. 여기에 참고예 1, 2 및 비교예 1의 미녹시딜 용액 0.1 ml(미녹시딜로서 5 mg 해당량)씩을 각각 무모 마우스의 피부 위에 다시 도포한 다음 교반하여 주면서 1, 2, 4, 6, 8시간 이후 수용기 용액 200 l 를 취하여 고속액체크로마토그래프를 이용하여 피부 투과량을 측정하였으며 분석 조건은 상기 실험예 1의 고속액체크로마토그래프법과 동일하였다.

2) 피부 저류량 평가

상기 피부 투과도 평가를 마친 후 피부 투과시험 면적(Diffusion area)만큼 피부를 잘라낸 다음 인산염 완충액으로 피부에 붙어 있는 약물을 씻어낸다. 투명 비닐 테이프를 이용하여 각질층을 벗겨낸 후 피부를 건조시키고 무게를 측정한다. 측정된 피부를 가위로 잘게 잘라15 ml 용량의 튜브에 넣어준 다음 메탄올 2 ml을 넣고 12시간동안 약물을 추출한 후 Homogeniozer를 이용하여 2~3분씩 3~4회 반복하여 피부조직을 잘게 갈아주고, 12,000 rpm에서 5분간 원심분리 후 상층액 만취하여 실험예 1의 피부투과도 시험과 동일한 방법으로 고속 액체크로마토그래프를 이용하여 검체중의 약물 농도를 측정하였다.

3) 피부투과도 및 진피내 저류량 평가 결과

실험예 2의 피부 투과도 평가 결과 및 진피내 저류량 평가 결과는 하기 표3, 표4 및 도 2와 같다.

상기 표 3, 4 및 도 2에서 보는 바와 같이, 비교예 1의 미녹시딜 함유 외용액 조성물에 비교예 2와 같이 진피내 저류개선제로서 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트를 첨가할 경우 미녹시딜의 피부 투과도의 개선 효과는 나타나지 않은 반면 진피내 피부 저류량은 증가하였으며 이로써 토코페롤폴리에칠렌글리콜숙시네이트 첨가에 의하여 미녹시딜의 각질층 피부 투과도에는 영향 없이 진피내 저류량이 증가함을 알 수 있었다.

실시예 1과 같이 각질연화제로서 팔미틴산레티놀과 진피내 저류개선제로서 토코페릴폴리에칠렌글리콜과 함께 함유시킬 경우에는 실험예 1의 팔미틴산레티놀을 단독으로 적용시킬 때 나타난 미녹시딜의 높은 피부 투과도가 나타나지 않으면서 진피내 피부 저류량은 비교예 1 및 비교예 2에 비하여 더욱 증가하는 경향을 나타내었다.

이는 각질연화제로서 팔미틴산레티놀에 의해 미녹시딜이 보다 효율적으로 각질층을 투과하여 진피층에 도달하고, 진피층에서는 진피내 저류개선제로서 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트에 의해 약물의 진피층 저류가 증가하기 때문인 것으로 판단된다. 즉, 레티놀과 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트를 동시에 적용시킴으로써 미녹시딜이 각질은 효율적으로 통과하고 진피층에서는 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트에 의해 저류할 수 있도록 피부투과도를 조절할 수 있었으며, 이는 미녹시딜이 전신혈로 흡수되었을 때 나타날 수 있는 혈압강하와 같은 부작용 우려를 줄임과 동시에 진피층에서의 약물 저류를 통해 약효를 극대화시킬 수 있는 조성임을 알 수 있다.

<실험예 3> 5 알파 환원효소 억제 효력 평가

수컷 흰쥐의 전립선으로부터 5 알파 환원효소를 얻었으며 단백질 정량을 통하여 일정량의 단백 현탁액을 준비하였다. 또한 효소 반응 용액으로서 1 mM DTT, 20 mM K2HPO4, 20 mM KH2PO4 및 50 M NADPH를 물 1 L에 용해시켜 제조한 인산염 완충액 (pH 6.5)을 준비하였다.

5 알파 환원 효소 반응 기질(substrate)로는 방사선 표지(Radio labeled) 된 테스토스테론[1,2,6,7-3H testosterone]을사용하였으며 효소 반응 용액에 2.2 nM 이 되도록 첨가하였다.

방사선 표지된 테스토스테론을 함유하는 효소 반응 용액 730 ul에 단백 현탁액 40 ul(단백질로서 400 ug 해당량) 및 시험물질 각 20 ul를 첨가하여 혼합한 뒤 37℃ 항온조에서 1시간 동안 반응시킨 다음 에칠아세테이트 1 ml을 넣어 반응을 종료시킨다

시험물질로는 음성 대조군으로서 70% 에탄올 및 시험군으로서 리놀레산 및 감마리놀레산을 70% 에탄올에 각각 1% 농도로 분산시킨 액을 사용하였다.

에칠아세테이트 층 100 l를 취해서 TLC(Kieselgel 60 F 254)판에 로딩한 후 전개액(cyclohexane : ethyl acetate = 1 : 1)을 사용하여 전개시켰다.

전개된 판을 자연 건조 하고 프리뮬린(Primuline) 용액(10mg/400ml in acetone/water (4:1))을 분무하여 발색이 나타나는 테스토스테론 및 디하이드로테스토스테론 Spot을 연필로 표시하고 판에서 긁어내어 LSC cocktail 5 ml에 넣고 12시간 동안 방치한 다음 방사선 측정 장치(Liquid scintillation counter, counter)로 방사선을 측정함으로써 테스토스테론으로부터 디하이드로테스토스테론으로의 전환율을 측정함으로써 전환 억제율을 비교하였다.

리놀레산 및 감마리놀렌산에 의한 5알파 환원효소 억제 효력 평가 결과는 다음의 표 5와 같다.

표 5에서 보는 바와 같이, 불포화지방산인 리놀레산 및 감마리놀렌산은 각기 5 알파 환원효소 억제 효력을 나타내었으며, 이로써 미녹시딜 조성물에 함유시킬 경우 미녹시딜의 모근 혈류 개선 효과와 함께 5 알파 환원효소억제 효력에 의해 발모 효력이 더욱 향상될 것으로 판단되었다.

<실험예 4> 무모 마우스를 이용한 시험관내 피부 저류평가 시험

본 발명에 의한 실시예 2, 3에 대하여 무모 마우스를 대상으로 반복 투여에 의한 진피내 피부 저류량을 평가하였다.

본 발명에 의한 실시예 2, 3, 비교예 1 및 미녹시딜 시판제품 각 1 ml을 각각 무모 마우스(Hairless Mouse, 수컷, 7~8주령, 24~27 g) 등피에 1일 2회씩 3일간 반복 도포한 다음 마지막 적용 2시간 후 에테르로 마취시킨 뒤 경추 탈골하여 등쪽 피부를 일정한 면적(1.6cm2)으로 잘라내어 투명 비닐 테이프로 각질층을 제거시켰다. 각질층을 제거시킨 피부를 건조시키고 피부 무게를 측정한 다음 피부를 가위로 잘게 잘라 15 ml 용량의 튜브에 넣어준 후 메탄올 2 ml을 넣고 12시간동안 약물을 추출하고 Homogeniozer를 이용하여 2~3분씩 3~4회 반복하여 피부조직을 잘게 갈아준 다음 12,000 rpm에서 5분간 원심분리 후 상층액 만취하여 상기 실험예 1의 피부투과도 시험과 동일한 방법으로 고속 액체크로마토그래프를 이용하여 검체중의 약물 농도를 측정하였다.

진피내 피부 저류량 측정 결과는 표 6 및 도 3과 같다.

표 6 및 도 3에서 알 수 있는 바와 같이, 반복투여에 의한 피부저류량 평가 결과 팔미틴산레티놀 및 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트와 함께 리놀레산을 각각 1%, 3%씩 첨가한 실시예 2 및 실시예 3을 도포한 시험군에서의 미녹시딜의 진피내 저류량이 상기 첨가제를 함유하지 않은 비교예 1 및 시판제품을 도포한 시험군과 비교시 유의적으로 증가하였다. 실시예 2 및 실시예 3 사이의 피부 저류량 사이에 유의적인 차이는 없었으며 이로써 미녹시딜의 진피내 저류 효과는 팔미틴산레티놀 및 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트에 의하여 나타나며 리놀레산의 양에 따른 피부 저류량의 차이는 없는 것으로 나타났다.

<실험예 5> C57BL/6 마우스를 이용한 발모 평가

팔미틴산레티놀 및 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트와 함께 5 알파 환원효소 억제 효력을 가지는 불포화지방산인 리놀레산을 함유하는 본 발명에 의한 실시예 2에 대하여 C57BL/6 마우스를 대상으로 발모 효력을 평가하였다.

발모 시험에 사용한 C57BL/6 마우스는 체모가 검정색이고 자발적 탈모가 일어나는 특징을 가지고 있다. 또한 melanocyte가 모낭에만 한정적으로 존재하고 melanin의 합성이 모발성장주기(hair growth cycle)와 잘 일치되어 피부색으로 모발의 성장주기를 판정할 수 있는 장점을 가져 모발생리 연구에 널리 이용되고 있다.

C57BL/6 마우스 (수컷, 5주령)을 사육실(온도 23±2℃, 습도 55~60%, 조명 오전 7시부터 오후 7시까지) 1주간 순응시킨 후 실험 종료 시까지 사육하되 일반 사료 및 일반 수도수를 공급하였다.

순화시킨 마우스를 Zoletil 50으로 마취시킨 후 전기 Clipper(Oster, U.S.A.)와 제모 크림을 사용하여 등부위를 앞다리 아래쪽부터 뒷다리 윗쪽까지 일정크기로 제모 하였다. 제모한 다음날 피부표면 및 제모상태를 판단하여 각 군당 7두를 선별하여 군 분리를 실시하였으며, 제모 익일부터 종료일 전까지 시험물질을 1일 1회 0.2 ml씩 매일 제모된 등쪽 피부에 마이크로 피펫을 이용하여 2-3회로 나누어 점적한 후 면봉을 이용하여 피부에 골고루 20초간 도포하였다.

시험물질로는 생리식염수, 미녹시딜 시판제품 및 비교예 1을 사용하였다.

시험기간 중 모든 동물에 대하여 시험물질투여 전 털의 성장유무 및 일반상태를 매일 관찰하였으며, 평가는 2주부터 1주 간격으로 이미지 분석에 의한 평가법으로 실시하였다. 시험의 종료는 육안관찰에 의해 발모가 100% 관찰되는 시점으로 정하였다.

0일, 7일, 13일, 20일째에 털의 성장상태를 디지털카메라(Sony, Japan)로 촬영하였으며, Image analyzer(Image-Pro Plus, U.S.A.)를 이용하여 제모된 면적에 대한 털이 자란 면적 비율 (Hair-regrown area % / shaved area %)을 측정하였다.

얻어진 자료는 평균 ± 편차로 표기하였으며, 통계분석은 다중비교 검정법을 실시하였다. 일원배치분산분석(one-way ANOVA test)을 유의수준 a=0.05로 검정하였다.

관찰 기간 중 시판제품 투여군 일부에서 각질이 발생하였고 나머지 군에서는 자극성이나 각질과 같은 피부의 변화가 관찰되지 않았다. 이미지 분석에 의한 평가 결과는 표 7 및 도 4와 같으며 이미지 분석을 위해 촬영한 사진은 도 5에 나타내었다.

시험 결과 7 일째 등피의 색이 분홍빛을 띠고 있었으며 제모된 면적에 대한 털이 자란 면적의 비율은 음성 대조군, 비교예 및 실시예 사이에 유의적인 차이는 나타나지 않았다.

13 일째 제모된 면적에 대한 털이 자란 면적의 비율은 생리식염수, 시판제품, 비교예 1 및 실시예 2에서 각각 17.46, 46.00, 50.92, 62.95%로 관찰되었으며 시판제품, 비교예 1, 실시예 2 모두 음성대조군인 생리식염수 투여군 대비로 유의적으로 높은 제모면적 대비 발모면적 비율을 나타내었으며, 특히 본 발명에 의한 실시예 2의 경우 미녹시딜 시판제품 및 비교예 1 대비로 유의적으로 높은 제모면적대비 발모면적 비율을 나타내었다.

20일째 음성 대조군을 포함한 모든 투여군에서 제모된 면적에 대한 털이 자란 면적의 비율이 90% 이상이었으며 군간의 통계적으로 유의적인 차이는 나타나지 않았다.

상기 표 7 및 도 4 및 도 5에서 보는 바와 같이, 각질 용해제로서 팔미틴산레티놀, 진피내 저류제로서 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트 및 5 알파 환원효소 억제제로서 리놀레산을 함유시킨 본 발명에 의한 실시예 2의 투여군이 발모 평가 13일째부터 비교예 1 및 미녹시딜 시판제품에 비하여 유의적으로 개선된 발모 효과가 있음을 확인하였다.

그러므로 본 발명은 미녹시딜의 각질층 투과를 증가시킴과 동시에 진피내 저류를 증가시킴으로써 모근내 혈류 개선 효과를 증강시키고 발모 효력을 높이는 발모 촉진용 조성물을 제공한다.

도 1은 무모쥐(Hairless Mouse)를 이용한 시험관내 경피 투과 시험으로서,

도 1a는 레티놀 전처리에 의한 비교예 1의 미녹시딜 함유 외용액에 의한 피부 투과도를 평가한 결과를 나타낸 것이며,

도 1b는 레티놀 전처리에 의한 비교예 1의 미녹시딜 함유 외용액에 의한 잔류량을 평가한 결과를 나타낸 것이다.

도 2는 무모쥐(Hairless Mouse)를 이용한 시험관내 경피 투과 시험으로서,

도 2a는 실시예 1 및 비교예 1, 2의 조성물을 반복 피부 도포 후 미녹시딜의 피부 투과도를 비교한 결과를 나타낸 것이며,

도 2b는 실시예 1 및 비교예 1, 2의 조성물을 반복 피부 도포 후 미녹시딜의 저류량을 비교한 결과를 나타낸 것이다.

도 3은 무모쥐(Hairless Mouse)를 이용한 시험관내 피부 저류량 평가로서 본 발명에 의한 실시예 2, 3 및 비교예 1, 미녹시딜 시판제품을 반복 피부 도포 후 미녹시딜의 피부 저류량을 비교한 결과를 나타낸 것이다.

도 4는 제모된 C57BL/6 마우스를 이용한 발모 효력 평가로서 본 발명에 의한 실시예 2, 비교예 1, 미녹시딜 시판제품 및 생리식염수를 반복 피부 도포 후 발모 효과를 비교한 결과를 나타낸 것이다.

도 5는 제모된 C57BL/6 마우스를 이용한 발모 효력 평가로서 본 발명에 의한 실시예 2, 비교예 1, 미녹시딜 시판제품 및 생리식염수를 발모 효과를 비교한 결과로서,

도 5a는 시험 개시시 모발의 발육상태를 촬영한 사진을 나타낸 것이며,

도 5b는 시험 7일째 모발의 발육상태를 촬영한 사진을 나타낸 것이고,

도 5c는 시험 13일째 모발의 발육상태를 촬영한 사진을 나타낸 것이고,

도 5d는 시험 20일째 모발의 발육상태를 촬영한 사진을 나타낸 것이다.

Claims (7)

1. 활성성분으로서 미녹시딜을 함유하는 외용액 제제에 있어서,

   미녹시딜에 대하여 각질연화제인 팔미틴산레티놀과 진피내 저류개선제인 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트를 1 : 0.0024 : 0.1 중량비로 함유함을 특징으로 하는 탈모증 치료용 외용액 조성물.
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4. 활성성분으로서 미녹시딜, 각질연화제로서 팔미틴산레티놀, 진피내 저류개선제로서 토코페릴폴리에칠렌글리콜숙시네이트 및 리놀레산을 1 : 0.0024 : 0.1 : 0.2~0.6 중량비로 함유함을 특징으로 하는 탈모증 치료용 외용액 조성물.
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