KR101464794B1

KR101464794B1 - Ａ2ａ-아데노신 수용체 효능제 및 이의 다형체의 제조 방법

Info

Publication number: KR101464794B1
Application number: KR1020097026178A
Authority: KR
Inventors: 제프 자블록키; 엘파티 엘제인
Original assignee: 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드
Priority date: 2007-05-17
Filing date: 2007-05-17
Publication date: 2014-11-27
Also published as: CN101668768B; KR20140041965A; PT2158208E; CA2685589A1; AU2007353780B2; JP2010527351A; JP5349461B2; IL201856A; NO341758B1; ZA200907565B; EP2158208B1; NZ580940A; ES2537959T8; CA2685589C; WO2008143667A1; IL201856A0; AU2007353780A1; CN101668768A; HK1140771A1; ES2537959T3

Abstract

A_2A-아데노신 수용체 효능제의 대규모 제조에 적합한 합성이 기재되어 있고, 또한 상기 화합물의 다형체, 및 특정 다형체의 단리 방법에 관한 것이다.

Description

Ａ2Ａ-아데노신 수용체 효능제 및 이의 다형체의 제조 방법 {PROCESS FOR PREPARING AN A2A-ADENOSINE RECEPTOR AGONIST AND ITS POLYMORPHS}

본 출원은 2007 년 2 월 2 일에 출원된 미국 특허 출원 일련번호 11/701,699 의 일부 연속이며, 이는 2006 년 5 월 18 일에 출원된 미국 가특허 출원 일련번호 60/801,857 및 2006 년 2 월 3 일에 출원된 미국 가특허 출원 일련번호 60/765,114 의 우선권을 주장하고, 이의 전체 개시는 본원에 참조로서 인용된다.

본 발명은 A_2A-아데노신 수용체 효능제의 대규모 제조 방법, 및 상기 화합물의 다형체, 및 특정 다형체의 단리 방법에 관한 것이다.

아데노신은 천연 발생 뉴클레오시드이고, 이는 A₁, A_2A, A_2B, 및 A₃ 으로 알려진 아데노신 수용체의 분류와 상호작용하여 이의 생물학적 효과를 발휘하고, 이들 모두는 중요한 생리학적 과정을 조절한다. 아데노신의 생물학적 효과 중 하나는 관상 혈관 확장제로서 작용하는 것이고; A_2A 아데노신 수용체와 상호작용하여 이러한 결과를 낸다. 아데노신의 이러한 효과는 심장의 화상 진찰에 보조로서 유용하다고 발견되었고, 여기서 관상 동맥은 화상 진찰제 (예를 들어, 탈륨 201) 의 투여 전에 팽창되어, 이와 같이 생성된 화상의 관찰에 의해 관상 동맥 질환의 존재 또는 부재가 결정될 수 있다. 이러한 기술의 이점은 관상 질환을 지닌 환자에게 명확히 바람직하지 않은 트레드밀 (treadmill) 상에서의 운동에 의해 관상 혈관 확장을 유도하는 더 전통적인 방법을 피하는 것이다.

그러나, 아데노신의 투여는 몇몇 단점을 가진다. 아데노신은 인간 내에서 반감기가 매우 짧고 (10 초 미만), 또한 A₁, A_2A, A_2B, 및 A₃ 수용체 상승작용과 관련된 효과를 모두 가진다. 따라서, 선택적인 A_2A 아데노신 수용체 효능제의 사용은 관상 혈관 확장 생성의 우수한 방법, 특히 반감기가 길고 부작용이 거의 없거나 없는 방법을 제공할 것이다.

이러한 바람직한 특성을 갖는 화합물의 분류는 미국 특허 제 6,403,567 호에 개시되어 있고, 이의 전체 개시는 본원에 참조로서 인용된다. 특히, 상기 특허에 개시된 하나의 화합물인 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드는 매우 선택적인 A_2A-아데노신 수용체 효능제라고 보여지고, 현재 심장 화상 진찰에 유용한 관상 혈관 확장제로서 임상적으로 시도되고 있다.

이러한 그리고 유사한 화합물에 관심이 증가하여, 양호한 수율 및 높은 순도의 물질을 대량으로 제조하기 위한 편리한 방법을 제공하는 신규 합성 방법을 발견하는 것이 바람직하다. 관심있는 화합물을 개시한 특허 (미국 특허 제 6,403,567 호) 는 상기 화합물의 몇몇 제조 방법을 제공한다. 그러나, 이러한 방법이 소규모 합성에 적합하더라도, 본 특허에 개시되어 있는 모든 합성 방법은 보호기를 이용하고, 이는 대규모 합성에 바람직하지 않다.

또한, 원하는 생성물 (즉, (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드) 은 3 종 이상의 상이한 결정형으로 존재할 수 있고, 이의 가장 안정한 것은 1 수화물이라는 것을 발견하였다. 이러한 다형체는 이의 융점 이하의 상대 습도 압력 조건 하에 안정하다. 따라서, 신규 합성으로 제조되는 최종 생성물은 안정한 1 수화물로 수득되는 것이 바람직하다.

발명의 개요

따라서, 본 발명의 목적은 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 및 이의 다형체, 바람직하게는 이의 1 수화물의 대규모 제조를 위한 편리한 합성을 제공하는 것이다. 따라서, 제 1 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (3) 의 화합물을 메틸아민과 접촉시키는 것을 포함하는, 하기 화학식 I 의 화합물의 제조에 관한 것이다:

[화학식 I]

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[화학식 3]

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하나의 구현예에서, 반응은 메틸아민 수용액 중에서 초기에는 약 0 내지 5 ℃, 이어서 약 50 내지 70 ℃ 로 가온시켜 수행된다. 대안적으로는, 반응은 밀폐 압력 반응기에서 상기와 같이 수행된다.

제 2 구현예에서, 생성물을 용매, 예를 들어 디메틸술폭시드에 용해시키고, 정제수를 첨가하고, 이와 같이 형성된 슬러리를 여과시키고, 여과기의 함유물을 물 이어서 에탄올로 세척하고, 40 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 잔류 고체를 건조시켜, 순수한 1 수화물로서 생성물을 단리시킨다.

제 2 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (2) 의 화합물을 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트와 접촉시키는 것을 포함하는, 하기 화학식 (3) 의 화합물의 제조에 관한 것이다:

[화학식 3]

,

[화학식 2]

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하나의 구현예에서, 반응은 에탄올 중에서 약 80 ℃ 의 온도에서 약 1.1 몰 당량의 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트로 수행된다.

제 3 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (1) 의 화합물을 히드라진과 접촉시키는 것을 포함하는, 하기 화학식 (2) 의 화합물의 제조에 관한 것이다:

[화학식 2]

,

[화학식 1]

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14.3-16.7 배 몰 과량의 히드라진이 사용될 수 있고, 반응은 약 60 내지 65 ℃ 의 온도에서 수행될 수 있다. 하나의 구현예에서, 히드라진을 우선 약 60 내지 65 ℃ 로 가열한 다음, 화학식 (1) 의 화합물을 첨가한다. (a) 반응 혼합물을 약 40 ℃ 로 냉각시키고, (b) 온도를 약 40 ℃ 로 유지하면서 4.2-4.9 질량 당량의 물을 첨가하고, (c) 혼합물을 약 10 ℃ 로 냉각시키고, 상기 온도를 약 1 시간 이상 유지하고, (d) 여과시키고, (e) 여과기의 함유물을 물 이어서 에탄올로 세척하고, (f) 12 시간 이상 30 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 잔류 고체를 건조시켜, 화학식 (2) 의 화합물을 단리시킬 수 있다.

상기 합성은 목적한 생성물의 대규모 합성에 적합하고, 이는 양호한 수율로 제공되지만, 하나의 소수 불순물이 최종 생성물에 나타난다. 이러한 불순물은 화학식 (2), 즉, 하기 화학식의 화합물의 미변경 중간체인 것으로 나타난다:

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이러한 불순물이 결정화에 의해 최종 생성물에서 제거될 수 있지만, 상기 합성의 모든 이점을 갖지만 최종 생성물 중 불순물로서 화학식 (2) 의 화합물을 제공하지 않는 대안적인 합성을 찾기로 결정하였다.

따라서, 제 4 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (4) 의 화합물을 메틸아민과 접촉시켜, (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드를 합성하는 방법에 관한 것이다:

[화학식 4]

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하나의 구현예에서, 반응은 메틸아민 수용액 중에서, 초기에는 약 0 내지 5 ℃, 이어서 약 50 내지 70 ℃ 로 가온시켜 수행된다. 바람직하게는, 반응은 밀폐 압력 반응기에서 수행된다.

다른 구현예에서, 반응은 약 2.5 내지 7.5 ℃ 의 온도에서 수행된다.

또 다른 구현예에서, 생성물을 용매, 예를 들어 디메틸술폭시드에 용해시키고, 정제수를 첨가하고, 이와 같이 형성된 슬러리를 여과시키고, 여과기의 함유물을 물 이어서 에탄올로 세척하고, 40 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 잔류 고체를 건조시켜, 순수한 1 수화물로서 생성물을 단리시킨다. 일부 다른 구현예에서, (a) 35 ℃ 이하에서 진공 하에 반응 혼합물을 탈기시켜 과량의 메틸아민을 제거하고, (b) 진공을 해제하고, 약 15 분 내지 1 시간 동안 0 내지 5 ℃ 로 냉각시키고, (c) 이와 같이 형성된 슬러리를 여과시키고, (d) 여과기의 함유물을 물 이어서 에탄올로 세척하고, (e) 40 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 잔류 고체를 건조시켜, 순수한 1 수화물로서 생성물을 단리시킬 수 있다.

일부 구현예에서, (i) 화합물을 약 78 내지 88 ℃ 로 가열된 디메틸술폭시드와 같은 용매에 용해시키고, (ii) 용액으로부터 임의의 고체 불순물을 여과시키고, (iii) 추가 용매로 헹구고, (iv) 약 78 내지 88 ℃ 로 유지되는 정제수에 용액을 첨가하여 슬러리를 형성하고, (v) 슬러리를 교반하고, (vi) 슬러리를 냉각시키고, (vii) 여과시키고, (viii) 여과기의 함유물을 물 이어서 에탄올로 세척하고, (ix) 40 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 잔류 고체를 건조시켜, (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드를 추가로 정제하여 1 수화물 형태로 제공한다.

제 5 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (2) 의 화합물을 과량, 바람직하게는 약 2 내지 10 배 과량, 더욱 바람직하게는 약 5 내지 10 배 과량의 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트와 접촉시키는 것을 포함하는, 하기 화학식 (4) 의 화합물을 합성하는 방법에 관한 것이다:

[화학식 4]

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[화학식 2]

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한 구현예에서, 반응은 약 80 ℃ 의 온도에서 에탄올 중에 수행된다. 에틸-2-포르밀-3-옥소프로피오네이트는 5-10 배의 과량으로 존재한다.

추가 구현예에서, 산의 존재 하에 하기 화학식 (2) 의 화합물을 과량의 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 (4) 의 화합물을 합성하는 추가 방법이 또한 존재한다:

[화학식 2]

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환류 하에 발생하는 반응은 통상적으로 에탄올 중에 수행된다. 반응은 촉매로서 HCl 을 사용하거나 하지 않고 발생한다. 0.1 몰 당량 이하, 바람직하게는 약 0.05 몰 과량의 HCl 및 약 5-10 배 몰 과량, 바람직하게는 약 6.8-7.5 배 몰 과량의 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트가 사용된다. (a) 완료된 반응 혼합물을 약 10 ℃ 로 냉각시키고, (b) 여과시키고, (c) 여과기의 함유물을 에탄올로 세척하고 (d) 40 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 잔류 고체를 건조시켜, 상기 반응의 생성물을 단리시킬 수 있다.

정의 및 일반적인 파라미터

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 하기 단어 및 구는 일반적으로 하기와 같은 의미를 가지는 것으로 의도되고, 사용되는 문맥이 이와 달리 언급되는 범위는 제외된다.

"임의의" 또는 "임의로" 는 이후 기재되는 사건 또는 상황이 발생할 수 있거나 발생하지 않을 수 있음을 의미하고, 기재 내용은 상기 사건 또는 상황이 발생하는 예 및 발생하지 않는 예를 포함한다.

용어 "치료적 유효량" 은 하기 정의되는 바와 같이, 치료를 필요로 하는 포유류에게 투여될 때, 치료를 수행하는데 충분한 화학식 I 의 화합물의 양을 언급한다. 치료적 유효량은 치료될 대상 및 질환 상태, 대상의 체중 및 연령, 질환 상태의 경중도, 투여 방식 등에 따라 변화될 것이고, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

용어 "치료" 또는 "치료하는" 은 하기를 포함하는, 포유류에서의 질환의 임의의 치료를 의미한다:

(i) 질환을 예방, 즉 질환의 임상적 증상이 발달하지 않도록 함;

(ii) 질환을 억제, 즉 임상적 증상의 발달을 억제함; 및/또는

(iii) 질환을 경감, 즉 임상적 증상의 퇴화를 일으킴.

본원에 사용된 바와 같이, "약학적으로 허용가능한 담체" 는 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 약학적으로 활성인 물질에 대한 이러한 매질 및 제제의 사용이 당업계에 공지되어 있다. 임의의 종래 매질 또는 제제에 있어서 활성 성분과 비상용성인 경우를 제외하고, 치료적 조성물에서 이의 사용이 고려된다. 또한, 추가의 활성 성분이 조성물에 혼입될 수 있다.

용어 "다형체"는 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드의 비결정질 및 용매화물을 포함하는 것으로 의도된다.

상기 화합물이 형태 A, 형태 B, 형태 C 로서 본원에서 언급하는, 3 개 이상의 상이한 결정질 형태, 및 비결정질 생성물로 존재할 수 있다는 것을 발견하였다.

형태 A: 이 다형체는 양성자성 용매, 예를 들어 에탄올 또는 에탄올/물 혼합물, 또는 극성 용매, 예를 들어 디메틸술폭시드/물로부터 1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드를 결정화시켜 제조될 수 있다. 형태 A 는 1 수화물인 것으로 나타나고, 주위 온도에서 다양한 다형체 중 가장 안정한 것이다. 이는 이의 융점 이하의 상대 습도 압력 조건 하에 안정하다.

형태 B: 이 다형체는 주위 온도에서 트리플루오로에탄올 중 1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드의 용액을 진공 하에 증발시켜 제조된다. 결정의 X-선 분석은 임의의 다른 다형체와 확실히 상이하지만 (도 4 참조), X-선 분석이 정렬되지 않은 광범위한 피크를 제공하기 때문에 이의 구조를 결정하기 어렵고, 상기 다형체는 다양한 양의 물을 함유한다. 이러한 다형체의 제조를 확실하게 재현하기는 어렵다는 것을 발견하였다.

형태 C: 이 다형체는 60 ℃ 에서 장기간 동안 아세토니트릴 중에서 1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드를 슬러리화시켜 제조된다. 결정의 X-선 분석은 임의의 다른 다형체와 확실히 상이하다 (도 5 참조). 다형체 C 는 다양한 수화물인 것으로 나타나고, 이는 승온에서 불안정한 형태로 탈용매화된다.

비결정질 물질: 이 다형체는 200 ℃ 이하의 온도에서 형태 A 다형체를 가열시켜 제조된다. 이 다형체는 대기 수분의 존재 하에 불안정하여, 다양한 수화물을 형성한다.

형태 A, B, C 및 비결정질 물질의 분석을 위한 기술

X-선 분말 회절

X-선 분말 회절 (XRPD) 분석은 Cu Kα 조사를 사용하는 Shimadzu XRD-6000 X-선 분말 회절분석기로 수행하였다. 상기 장치는 미세 초점 X-선 튜브를 장착하고, 튜브 전압 및 전류를 각각 40 kV 및 40 mA 으로 설정하였다. 발산 및 산란 슬릿 (divergence and scattering slit) 을 1" 로 설정하고, 수광 슬릿 (receiving slit) 을 0.15 mm 로 설정하였다. 회절 조사를 NaI 신틸레이션 (scintillation) 검출기로 검출하였다. 2.5 내지 40°2θ 로부터 3°/분 (0.4 초/0.02°스텝) 으로 세타-2 (theta-two) 세타 연속적 스캔을 사용하였다. 규소 표준을 장비 정렬을 확인하는데 사용하였다. XRD-6000 v. 4.1 소프트웨어를 사용하여 데이터를 수집하고 분석하였다.

X-선 분말 회절 (XRPD) 분석을 또한 28 범위의 120°를 갖는 CPS (Curved Position Sensitive) 검출기가 장착된 Inel XRG-3000 회절분석기를 사용하여 수행하였다. 장치 보정을 규소 기준 표준을 사용하여 수행하였다. 튜브 전압 및 전류를 각각 40 kV 및 30 mA 로 설정하였다. 단색화 슬릿을 80 ㎛ 에 의해 5 mm 로 설정하였다. 시료를 규소 삽입구를 갖는 알루미늄 시료 홀더 (holder) 또는 유리 XRPD-급 모세관에 놓았다. 데이터를 수득하는 동안 모세관을 회전하도록 동력화된 고니오미터 헤드 (goniometer head) 에 각 모세관을 올려놓았다. 0.03°2θ 의 분해능에서 Cu-Kα 조사를 사용하여 실시간 데이터를 수집하였다. 통상적으로, 데이터를 300 초에 걸쳐 수집하였다. 2.5-40°2θ 의 범위 내 데이터 점들 만을 표시한 XRPD 패턴으로 도면화하였다.

열분석

열중량 (Thermogravimetric, TG) 분석을 TA Instruments 2050 또는 2950 열중량 분석기로 수행하였다. 보정 표준은 니켈 및 Alumel™ 이었다. 시료를 알루미늄 시료 팬에 놓고, TG 퍼니스 (furnace) 에 삽입하고, 정확히 칭량하였다. 시료를 10 ℃/분의 속도로 300 또는 350 ℃ 까지 질소 하에 가열하였다. 달리 지시되지 않는 한, 시료 중량은 분석 전에 TGA 퍼니스에서 25 ℃ 에서 평형을 이루었다.

시차주사열량계 (DSC) 분석을 TA Instruments differential scanning calorimeter 2920 에서 수행하였다. 정확하게 칭량된 시료를 압력 방출하도록 하는 작은 구멍을 함유한 밀폐된 팬 또는 주름 잡힌 팬에 놓았다. 각 시료를 10 ℃/분의 속도로 300 또는 350 ℃ 까지 질소 하에 가열하였다. 인듐 금속을 보정 표준으로 사용하였다. 온도를 전이 최대에서 보고하였다.

적외선 흡광분석

적외선 스펙트럼을 Ever-Glo 중간/원 (mid/far) IR 원 (source), 확장된 범위의 브롬화칼륨 빔스플리터 (beamsplitter) 및 중수소화 트리글리신 설페이트 (DTGS) 검출기를 장착한 Magna 860® 푸리에 (Fourier) 변환 적외선 (FT-IR) 분광계 (Nicolet Instrument Corp.) 에서 수득하였다. 달리 언급되지 않는 한, Spectra-Tech, Inc. 확산 반사 액세서리 (Collector™) 를 시료채취에 사용하였다. 각 스펙트럼은 4 cm^-1 의 스펙트럼 분해능에서 256 공첨가된 스캔을 나타낸다. 화합물의 시료 제조는 시료를 마이크로컵에 놓고 프로스티드 유리 슬라이드 (frosted glass slide) 로 물질을 평평하게 하는 것으로 이루어졌다. 바탕 데이터 세트를 그 자리에 조정 거울을 이용하여 수득하였다. 스펙트럼은 바탕 단일 빔 데이터 세트에 대한 시료 단일-빔 데이터 세트의 비율을 나타낸다. 상기 장치의 파장 보정을 폴리스티렌을 사용하여 수행하였다.

NMR 흡광분석

용액 상 ¹H NMR 스펙트럼을 5.87 T (라머 주파수 (Larmor frequency): ¹H = 250 MHz) 에서 작동하는 Bruker model AM-250 분광계로 주위 온도에서 수득하였다. 5000 Hz 의 스펙트럼 창에서 1.6834 초의 수득 시간 및 7.5 ps 의 펄스 폭을 사용하여 시간-영역 데이터를 수득하였다. 총 16,384 데이터 점을 수집하였다. 5 초의 완화 지연 시간을 과도전류 사이에 사용하였다. 각 데이터 세트는 통상적으로 128 코아버리지드 과도전류 (coaveraged transient) 로 이루어졌다. GRAMS132 A1 소프트웨어, 버젼 6.00 을 사용하여 스펙트럼을 처리하였다. 자유 유도 붕괴 (free induction decay, FID) 는 데이터 점의 수의 4 배로 제로-필링되고 (zero-filled), 푸리에 변환 이전에 0.61 Hz 의 선폭 증가 인자를 이용하여 기하급수적으로 배가되었다. ¹H 스펙트럼은 내부 표준으로 첨가되는 테트라메틸실란 (0 ppm) 을 내부 기준으로 하였다.

대안적으로, NMR 분석을 실시예 4 에 기재된 바와 같이 수행하였다.

수분 수착/탈수착 분석

수분 수착/탈수착 데이터를 VTI SGA-100 증기 수착 분석기 (Vapor Sorption Analyzer) 에서 수집하였다. 수착 및 탈수착 데이터를 질소 퍼지 하에 10 % 의 RH 간격으로 5 % 내지 95 % 의 범위의 상대 습도 (RK) 에서 수집하였다. 염화나트륨 (NaCl) 및 폴리비닐피롤리돈 (PVP) 을 보정 표준으로 사용하였다. 분석에 사용된 평형 기준은 5 분 내에 0.0100 중량% 미만의 변화였고, 중량 기준이 충족되지 않는 경우의 최대 평형 시간은 180 분이었다. 도면화된 데이터는 초기 수분 함량에 대해서는 보정되지 않았다.

명명법

화합물 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드의 구조는 하기와 같다:

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(1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드의 합성

(1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드의 대규모 합성을 위한 하나의 방법을 하기 반응식 I 에 나타냈다. 모든 반응은 통상적으로 질소 분위기 하에 수행된다.

반응식 I

단계 1 - 화학식 (2) 의 제조

화학식 (2) 의 화합물은 용매의 부재 하에 히드라진 1 수화물과의 반응으로 화학식 (1) 의 화합물로부터 제조된다. 반응은 약 45 내지 55 ℃ 의 온도에서 수행된다. 반응이 완료되었을 때, 화학식 (2) 의 생성물은 화학식 (2) 의 화합물이 제한된 용해도를 갖는 양성자성 용매, 예를 들어 에탄올 또는 이소프로판올과의 교반 하에 단리된다. 혼합물을 약 1 내지 5 시간 동안 교반한 후, 여과시킨다. 고체를 물로 교반하고, 여과시키고, 물 이어서 이소프로판올로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 정제하고, 이를 정제 없이 다음 단계에 취한다.

단계 2 - 화학식 (3) 의 제조

이어서, 화학식 (2) 의 화합물을 약 1 내지 1.2 몰 당량의 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트와 반응시켜 화학식 (3) 의 화합물로 전환시킨다. 반응은 약 환류 온도에서, 약 2 내지 4 시간 동안 양성자성 용매, 바람직하게는 에탄올 중에 수행된다. 약 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 고체를 여과해내고, 차가운 에탄올로 세척하고, 감압 하에서 건조시킨다. 화학식 (3) 의 생성물을 정제 없이 다음 단계에 취한다.

단계 3 - 최종 생성물의 제조

최종 생성물을 메틸아민, 바람직하게는 수성 메틴아민과 반응시켜 화학식 (3) 의 화합물로부터 제조한다. 반응은 약 실온에서 약 4 시간 동안 수행된다. 종래 수단, 예를 들어 여과시키고, 차가운 에탄올로 고체를 세척하고, 감압 하에서 건조시켜 화학식 I 의 생성물을 단리시킨다.

출발 물질의 제조

(4S,2R,3R,5R)-2-(6-아미노-2-클로로퓨린-9-일)-5-(히드록시메틸)옥솔란-3,4-디올은 단계 1 에서 출발 물질로서 사용된다. 상기 화합물은 시판된다.

에틸 2-포르밀-3-옥소프로파노에이트는 단계 2 에서 출발 물질로서 사용된다. 이는 시판되거나, 하기 반응식 II 에 나타낸 바와 같이 제조될 수 있다.

반응식 II

에틸 3,3-디에톡시프로피오네이트는 강염기, 바람직하게는 수소화나트륨의 존재 하에서 에틸 포르메이트와 반응한다. 상기 반응은 약 0 내지 5 ℃ 에서 약 24 시간 동안 수행된다. 생성물은 종래 수단, 예를 들어 물의 첨가 및 종래 용매, 예를 들어 t-부틸메틸 에테르를 이용한 불순물의 추출, 예를 들어 염산을 이용한 수성상의 산성화 후, 디클로로메탄과 같은 용매를 이용한 추출, 감압 하에 건조된 추출물로부터 용매를 제거하여 단리된다. 에틸 2-포르밀-3-옥소프로파노에이트는 감압 하에 증류에 의해 정제된다.

(1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드의 대규모 합성을 위한 바람직한 방법을 하기 반응식 III 에 나타낸다.

반응식 III

단계 1 - 화학식 (2) 의 제조

이전과 같이, 화학식 (2) 의 화합물은 용매의 부재 하에 히드라진 1 수화물과 반응시켜 화학식 (1) 의 화합물로부터 제조된다. 그러나 본 방법에서는, 14.3-16.7 배 몰 과량의 히드라진 1 수화물을 우선 약 60 내지 65 ℃ 로 가열한 다음, 화학식 (1) 의 화합물을 첨가한다. 반응이 약 1 내지 3 시간에 걸쳐 완료되는 동안, 온도를 약 60 내지 65 ℃ 로 유지한다. 혼합물 중 화학식 (1) 의 잔류 화합물의 수준이 약 0.10 % 이하일 때, 이어서 반응 혼합물을 약 40 ℃ 로 냉각시킨다. 물을 서서히 첨가하면서 온도를 유지한다. 일단 약 4.2-4.9 질량 당량이 첨가되면, 혼합물을 약 10 ℃ 로 냉각시키고, 상기 온도를 1 시간 이상 유지한다.

그 다음 생성물을 여과로 단리시키고, 물로 세척한 다음, 무수 에탄올로 세척하였다. 고체를 12 시간 이상 30 ℃ 이하에서 진공 하에 건조시킨 다음, 추가의 정제없이 다음 단계에 취한다.

단계 2 - 화학식 (4) 의 제조

그 다음, 과량, 예를 들어 2 내지 10 배의 과량, 바람직하게는 약 5 내지 10 배, 이상적으로는 약 6.8 내지 7.5 배 과량의 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트와 반응시켜, 화학식 (2) 의 화합물을 화학식 (4) 의 화합물로 전환시킨다. 반응은 반응식 I 에서 화학식 (3) 의 화합물의 제조에 대해 기술된 것과 동일한 조건 하에 수행될 수 있다.

대안적으로, 약 0.05 몰 당량의 HCl 과 같은 산이 또한 상기 반응 혼합물에 첨가될 수 있다. 화학식 (2) 의 잔류 화합물의 수준이 0.50 % 이하가 되고, 형성될 수 있는 화학식 (3) 의 임의의 화합물의 양이 2.5 % 이하가 될 때까지, 상기 반응을 환류 온도에서 약 2 내지 4 시간 동안 진행시킨다. 약 10 ℃ 로 냉각시킨 후, 고체를 여과해내고, 무수 에탄올로 세척하고, 40 ℃ 이하에서 진공 하에 건조시켜 잔류 에탄올을 제거한다. 화학식 (4) 의 생성물을 정제없이 다음 단계에 취한다.

화학식 (4) 의 화합물은 (2E) 알켄 유도체로서 나타내는데, 이는 상기 반응에서 형성된 주요 이성질체이기 때문이다. 그러나, 상당량의 (2Z) 알켄 유도체, 즉 다음과 같은 에틸 (2Z)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)-옥솔란-2-일]-2-[4-(에톡시카르보닐)피라졸릴]퓨린-6-일}아미노)-2-포르밀프로프-2-에노에이트로 불리는 유도체가 상기 반응에서 또한 형성될 수 있다는 것을 주목해야만 한다:

.

따라서, 화학식 (4) 의 화합물이 (2E) 알켄 유도체로만 나타난다 하더라도, 용어 "화학식 (4) 의 화합물" 은 그것이 단지 (2E) 이성질체인 예, 및 생성물의 주요 부분이 (2E) 이성질체이고 (2Z) 이성질체의 소수 부분이 또한 존재하는 예 모두를 포함하는 것으로 의도된다. 단계 3 에 기재된 바와 같이 메틸아민과의 반응에 의한 화학식 (4) 의 화합물의 최종 생성물로의 전환은, 화학식 (4) 의 화합물이 (2E) 이성질체로서 존재하든지 (2E) 이성질체 및 (2Z) 이성질체의 혼합물로서 존재하든지와 상관없이 동일한 방식으로 진행된다.

단계 3 - 최종 생성물의 제조

최종 생성물은 메틸아민, 바람직하게는 수성 메틸아민과 반응시켜 화학식 (4) 의 화합물로부터 제조된다. 반응은 초기에는 약 0 내지 5 ℃ 에서 약 8 시간 동안, 바람직하게는 압력 반응기에서 수행된 후, 약 1 시간에 걸쳐 50 내지 60 ℃ 로 온도를 상승시키고, 상기 온도를 15 내지 30 분 동안 유지하면서 수행된다.

대안적으로, 메틸아민을 우선 압력 용기에 놓고, 약 2.5 내지 7.5 ℃ 로 냉각시킨 다음, 상기 온도를 유지하면서 화학식 (4) 의 화합물을 첨가한다. 화학식 (3) 의 잔류 화합물의 수준이 약 0.10 % 미만이 될 때까지 반응을 진행한다.

완료되면, 통상의 수단으로서, 예를 들어, 약 35 ℃ 이하에서 진공 하에 탈기시켜 과량의 메틸아민을 제거함으로써 생성물을 단리시킨다. 그 다음, 진공을 해제하고, 혼합물을 약 0 내지 5 ℃ 로 냉각시키고, 상기 온도에서 15 분 내지 한 시간 동안 유지한 다음, 여과시킨다. 이와 같이 수득된 고체를 물 이어서 에탄올로 세척하고, 약 40 ℃ 이하의 온도에서 감압 하에 건조시킨다.

상기 방법은 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드를 이의 1 수화물로 제공한다. 상기 다형체를 디메틸설폭시드 (DMSO) 에 용해시키고, 상기 용액으로부터 임의의 고체 불순물을 여과시키고, 추가의 DMSO 로 헹구고, 물에 첨가하여 용액으로부터 1 수화물을 침전시킴으로써, 상기 다형체를 추가로 정제할 수 있다. 상기 방법은 DMSO 용액 및 물이 약 78 내지 88 ℃ 로 가열되고, 교반 하에 상기 온도에서 약 1 시간 동안 유지되는 경우, 특히 효과적이다. 교반 후, 슬러리를 약 20 ℃ 로 서서히 냉각한다. 그 다음, 여과시키고, 정제수 이어서 에탄올로 세척하고, 상기 기술된 바와 같이 건조시켜 최종 생성물을 단리시킨다.

도 1 은 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2- 일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 1 수화물 (형태 A) 의 ¹H NMR 스펙트럼이다.

도 2 는 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 1 수화물의 열분석을 나타낸다.

도 3 은 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 1 수화물의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.

도 4 는 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 형태 B 의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.

도 5 는 형태 A 와 비교한 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 형태 C 의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.

실시예 1

에틸-2-포르밀-3-옥소프로피오네이트의 제조

자석 교반 막대, 열전대 (thermocouple), 디지털 온도계, 기체 유입구와 출구 및 첨가 깔때기가 장착된 3- 또는 4-목 둥근바닥 플라스크를 아르곤으로 씻어냈다. 테트라히드로푸란 중 에틸 3,3-디에톡시프로피오네이트 (64.5 g) 를 첨가 깔때기에 충전하였다. 수소화나트륨 (21.2 g 의 60 % 분산액), 이어서 테트라히드로푸란을 반응 플라스크에 충전하였다. 플라스크의 함유물을 빙조에서 0 내지 5 ℃ 로 냉각시키고, 에틸 포르메이트 (257 g) 를 첨가하였다. 혼합물을 0 내지 5 ℃ 로 냉각시키고, 내부 온도를 5 ℃ 미만으로 유지하면서 첨가 깔때기의 함유물을 적가하였다. 빙조를 제거하고, 함유물을 주위 온도로 가온시켰다. 에틸 3,3-디에톡시프로피오네이트의 소비를 TLC 분석으로 모니터링하였다. 반응을 냉수 (10.6 부피) 를 첨가하여 퀀치하고, 메틸 t-부틸 에테르 (각 5.4 부피) 로 3 회 추출하고, 유기층을 제거하였다. 수성상을 농축 염산을 이용해 pH 1 내지 1.5 로 산성화시켰다. 산성화된 수성층을 디클로로메탄으로 3 회 추출하고, 수합된 유기층을 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 진공 하에서 증류시켜, 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트 27.92 g 을 70 % 의 수율로 수득하였다.

실시예 2

A. 2-히드라지노아데노신 (2) 의 제조

기계적 교반기, 기체 유입구, 기체 출구 및 열전대가 장착된 플라스크를 아르곤으로 씻어냈다. 2-클로로아데노신 반수화물 (53.1 g), 그 후 히드라진 1 수화물 (134 g) 을 첨가하였다. 혼합물을 40 내지 45 ℃ 로 2 시간 동안 가열하면서 교반하였다. 반응을 진행하면서 TLC 분석을 하였다. 반응이 완료되었을 때, 열원을 제거하고, 에탄올 (800 ml) 을 첨가하였다. 혼합물을 2 시간 동안 주위 온도에서 교반한 후, 침전물을 여과로 수집하였다. 여과 케이크를 에탄올로 세척하고, 감압 하에 30 분 동안 건조시켰다. 고체를 기계적 교반기가 장착된 깨끗한 플라스크로 이동시키고, 물 (300 ml) 을 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 18 시간 동안 교반하고, 고체를 여과로 단리시켰다. 여과 케이크를 빙냉수 (300 ml), 그 후 빙냉 에탄올 (300 ml) 로 세척하였다. 고체를 감압 하에 건조시켜, 2-히드라지노아데노신 (41.38 g, 81.4 % 의 수율, 99.3 % 의 순도) 을 수득하였다.

B. 2-히드라지노아데노신 (2) 의 대안적 제조

히드라진 수화물 (258 g, 250 ml) 을 함유하는 반응 용기를 40 내지 50 ℃ 로 가열하였다. 상기 따뜻한 혼합물에 2-클로로아데노신 반수화물 (100 g) 을 45 내지 55 ℃ 로 온도를 유지하면서 조금씩 첨가하였다. 온도를 상기 온도로 2 시간 동안 유지한 후, 온도를 45 내지 55 ℃ 로 유지하면서 탈이온수 (500 ml) 를 30 분에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 3 시간에 걸쳐 0 내지 5 ℃ 로 서서히 냉각시킨 후, 상기 온도에서 추가로 30 분 동안 교반하였다. 이어서, 고체를 여과해내고, 냉 (2 내지 5 ℃) 탈이온수 (200 ml), 그 후 에탄올 (400 ml) 로 세척하였다. 고체를 진공 하에 12 시간 동안 건조시켜, 2-히드라지노아데노신을 수득하였다.

C. 2-히드라지노아데노신 (2) 의 대안적 제조

반응 용기를 히드라진 수화물 (1285 g) 로 충전하였다. 용액을 약 62 ℃ 로 가열하고, 온도를 약 62 ℃ 로 유지하면서 2-클로로아데노신 (500 g) 을 첨가하였다. 혼합물 중 잔류 2-클로로아데노신의 수준이 0.10 % 이하가 될 때까지, 혼합물을 2 시간 이상 62 ℃ 를 목표로 유지하였다. 혼합물을 약 40 ℃ 로 냉각시키고, 고체의 존재를 검증하기 위해 혼합물을 확인하였다. 온도를 약 40 ℃ 로 유지하면서 물 (2275 g) 을 서서히 첨가하였다. 상기 혼합물을 약 10 ℃ 로 냉각하고, 1 시간 이상 유지하였다. 생성물을 여과로 단리시키고, 물 (1195 g) 및 이어서 무수 에탄올 (1885 g) 로 세척하였다. 생성물을 12 시간 이상 30 ℃ 이하에서 진공 하에 건조시켜 2-히드라지노아데노신을 산출하였다.

실시예 3

에틸 1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-카르복실레이트 (3) 의 제조

에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트 (23.93 g, 0.17 mol) 를 기계적 교반기, 기체 유입구, 기체 출구 및 환류 응축기가 장착된 플라스크에 놓았다. 2-프로판올, 이어서 2-히드라지노아데노신 (44.45 g, 0.15 mol) 을 상기 플라스크에 첨가하였다. 혼합물을 2 내지 4 시간 동안 교반 하에 환류 가열하며, 반응을 진행하면서 TLC 분석을 하였다. 반응이 완료되었다고 판단되었을 때, 열원을 제거하고, 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 현탁액을 빙조에서 1.5 내지 2 시간 동안 교반 하에 냉각시켰다. 고체를 진공 여과로 단리시키고, 빙냉 2-프로판올로 세척하였다. 생성물인 에틸 1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-카르복실레이트를 감압 하에 일정한 중량으로 건조시켰다.

실시예 4

(1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드의 제조

에틸 1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-카르복실레이트 (46.4 g) 및 메틸아민 (수 중 40 %, 600 ml) 의 혼합물을 주위 온도에서 약 4 시간 동안 교반하며, 반응의 진행은 HPLC 분석을 따랐다. 대부분의 과량의 메틸아민을 감압 하에 제거하고, 잔류 혼합물을 0 ℃ 에서 2 시간 동안 냉각시켰다. 고체 물질을 여과해내고, 빙냉 200 표준도수 에탄올로 세척하고, 감압 하에 건조시켜, (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드를 이의 1 수화물로 제공하였다.

상기 물질의 구조를 ¹H NMR 로 확인하였다 (하기 도 1 참조). 열분석 (도 2 참조) 은 1 분자의 물의 존재와 일치하는 결과를 제공했다. X-선 분말 회절 패턴을 수득하였다 (도 3).

¹H 및 ¹³C NMR 스펙트럼을 하기와 같은 방식으로 수득하였다. 상기 수득된 물질의 2 개의 시료를 칭량하고, d₆-DMSO 에 용해시키고, 5.3 mg 을 ¹H 스펙트럼에 사용하고, 20.8 mg 을 ¹³C 스펙트럼에 사용하였다. ¹H 에 대해서 400 MHz 그리고 ¹³C 에 대해서 100 MHz 로 작동하는 JEOL Eclipse⁺ 400 분광계로 주위 온도에서 모든 스펙트럼을 수득하였다.

실시예 5

A. 에틸 (2E)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-2-[4-(에톡시카르보닐)피라졸릴]퓨린-6-일}아미노)-2-포르밀프로프-2-에노에이트 (4) 의 제조

2-히드라지노아데노신 (100 g, 0.34 mol), 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트 (242 g, 1.7 mol) 및 무수 에탄올의 혼합물을 반응기에 충전하고, 혼합물을 2 시간 동안 환류 가열하였다. 반응이 완료되었다고 판단되었을 때, 열원을 제거하고, 혼합물을 서서히 5 내지 10 ℃ 로 3 시간에 걸쳐 냉각시켰다. 슬러리를 상기 온도에서 30 분 동안 교반하고, 혼합물을 여과시켰다. 고체 물질을 냉 (5 내지 10 ℃) 무수 에탄올로 세척한 후, 40 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 건조시켜, 에틸 (2E)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-2-[4-(에톡시카르보닐)-피라졸릴]퓨린-6-일}아미노)-2-포르밀프로프-2-에노에이트를 제공하였다.

B. 에틸 (2E)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)-옥솔 란-2-일]-2-[4-(에톡시카르보닐)피라졸릴]퓨린-6-일}아미노)-2-포르밀프로프-2-에노에이트 (4) 의 대안적 제조

반응 용기를 2-히드라지노아데노신 (450 g) 및 무수 에탄올 (11376 g) 으로 충전하였다. HCl (7.47 g) 및 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트 (1557 g) 를 첨가하였다. 혼합물 중 잔류 2-히드라지노아데노신의 수준이 0.50 % 이하가 되고, 화학식 (3) 의 화합물의 수준의 2.5 % 이하가 될 때까지, 혼합물을 환류로 가열하고 시료화하였다. 상기 혼합물을 약 10 ℃ 로 서서히 냉각시켰다. 생성물인 화학식 (4) 의 화합물을 여과로 단리시키고, 무수 에탄올 (5121 g) 로 세척하였다. 잔류 에탄올이 5000 ppm 이하가 될 때까지 생성물을 40 ℃ 이하에서 진공 하에 건조시켜, 에틸 (2E)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-2-[4-(에톡시카르보닐)-피라졸릴]퓨린-6-일}아미노)-2-포르필프로프-2-에노에이트를 산출하였다.

실시예 5 A 의 생성물의 원소 분석으로 다음과 같은 결과를 수득하였다: C, 48.75 %; H, 4.86 %; N, 18.05 %; O, 27.57 %. 이론치: C, 49.72 %; H, 4.74 %; N, 18.45 %; O, 27.09 %. 상기 분석은 실험 오차 한계 내에서 목적하는 생성물의 반수화물에 해당한다 (C, 48.89 %; H, 4.81 %; N, 18.1 %; O, 28.12 %).

¹H 및 ¹³C NMR 스펙트럼을 다음과 같은 방식으로 수득하였다. 20.2 mg 의 화학식 (4) 의 화합물을 ~0.75 ml 의 DMSO-d6 에 용해시키고, ¹H 에 대해 400 MHz 및 ¹³C 에 대해 100 MHz 로 작동하는 JEOL ECX-400 NMR 분광계로 주위 온도에서 스 펙트럼을 수득하였다. 화학적 시프트는 DMSO 용매를 기준으로하여, ¹H 에 대해 2.50 ppm 및 ¹³C 에 대해 39.5 ppm 이었다.

결과

¹H 및 ¹³C 화학적 시프트를 표 1 에 열거하였다. ~60/30 의 비로 2 개의 이성질체를 표에 주요 및 소수로서 표지하여 ¹H 및 ¹³C 스펙트럼 모두를 관찰하였다.

화학식 (4) 의 화합물은 하기 2 개의 이성질체의 혼합물인 것으로 확인되었다:

[주요] [소수]

.

실시예 6

A. 화합물 (4) 로부터의 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드의 제조

40 % 메틸아민 수용액 (1300 ml) 을 압력 반응기에 넣고, 0 내지 5 ℃ 로 냉각시키고, 실시예 5 A 의 생성물인 에틸 (2E)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-2-[4-(에톡시카르보닐)피라졸릴]퓨린-6-일}아미노)-2-포르밀프로프-2-에노에이트 (100 g) 를 첨가하였다. 반응의 완료를 모니 터링하면서, 혼합물을 0 내지 5 ℃ 에서 8 시간 이상 교반하였다. 완료되었을 때, 1 시간 동안 50 내지 60 ℃ 의 온도로 유지하면서 혼합물을 가온시킨 후, 1 시간에 걸쳐 30 ℃ 미만으로 냉각시켰다. 온도가 30 ℃ 미만이었을 때, 혼합물을 100 내지 150 mmHg 의 압력을 사용하여 탈기시키고, 온도를 0 내지 5 ℃ 로 감소시켰다. 압력을 100 내지 150 mmHg 로 유지하면서, 혼합물을 0 내지 5 ℃ 에서 1 시간 이상 교반하였다. 이어서, 진공을 중지하고, 온도를 0 내지 5 ℃ 로 30 분 이상 유지하면서 질소로 대체했다. 이어서, 고체 생성물을 여과해내고, 물 (3 x 500 ml), 이어서 무수 에탄올 (625 ml) 로 세척하였다. 온도를 40 ℃ 를 초과하지 않도록 하면서 생성물을 진공 하에 건조시켜, (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드를 이의 1 수화물로 제공하였다.

B. 화합물 (4) 로부터의 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드의 대안적 제조

반응 용기를 47 % 의 메틸아민 용액 (10080 g) 으로 충전하였다. 용액을 냉각시키고, 목표 온도를 5 ℃ 로 유지하면서 상기 실시예 5 B 에서 제조된 화학식 (4) 의 화합물 (600 g) 을 첨가하였다. 혼합물 중 화학식 (3) 의 잔류 화합물의 수준이 0.10 % 미만이 될 때까지, 5 ℃ 의 목표 온도에서 혼합물을 교반하였다. 반응 혼합물을 35 ℃ 이하에서 진공 하에 탈기시켜 과량의 메틸아민을 제거하였다. 진공을 해제하고, 혼합물을 2.5 ℃ 로 냉각시키고, 30 분 이상 유지하였 다. 그 다음, 생성물을 여과로 단리시키고, 물 (9000 g 이상), 이어서 무수 에탄올 (2964 g 이상) 으로 세척하였다. 잔류 에탄올이 5000 ppm 이하가 될 때까지 생성물을 40 ℃ 이하에서 진공 하에 건조시켜, 조 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드를 이의 1 수화물로서 산출하였다.

¹H 및 ¹³C NMR 스펙트럼을 하기와 같은 방식으로 수득하였다. 실시예 6 A 에서 수득된 물질의 2 개의 시료를 칭량하고, d₆-DMSO 에 용해시키고, 5.3 mg 을 ¹H 스펙트럼에 사용하고, 20.8 mg 을 ¹³C 스펙트럼에 사용하였다. ¹H 에 대해 400 MHz 및 ¹³C 에 대해 100 MHz 로 작동하는 JEOL Eclipse⁺ 400 분광계로 주위 온도에서 모든 스펙트럼을 수득하였다.

원소 분석으로 하기와 같은 결과를 수득했다: C, 43.96 %; H, 4.94 %; N, 27.94 %. 이론치: C, 44.12 %; H, 4.94 %; N, 27.44 %; O, 27.09 %. 상기 분석은 실험 오차 한계 내에서 1 수화물에 해당한다.

실시예 7

A. (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3.4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 1 수화물의 정제

디메틸술폭시드 (300 ml) 중 실시예 4 에서 제조된 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 1 수화물 (100 g) 의 용액을 0.6 내지 0.8 마이크론 전여과기 및 0.2 마이크론 여과기로 여과시켜 임의의 고체 불순물을 제거하였다. 그 다음, 여과액을 교반 하에 1 시간 동안 탈이온수 (1 L) 에 서서히 첨가하고, 이와 같이 생성된 슬러리를 1 시간 이상 교반하였다. 고체를 여과해내고, 탈이온수 (2 x 1 L) 로 세척하고, 진공 하에 1 시간 이상 건조시켰다.

그 다음, 건조된 생성물을 2 시간 이상 다시 탈이온수 (1.5 L) 로 슬러리화하고, 여과해내고, 탈이온수 (1 L) 이어서 무수 에탄올 (750 ml) 로 세척하였다. 정제된 생성물을 12 시간 이상 40 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 건조시켜, 임의의 2-히드라지노아데노신 불순물을 함유하지 않는 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 1 수화물을 제공하였다.

B. (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6- 아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 1 수화물의 대안적 정제

(1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 1 수화물 (400 g) 의 용액을 DMSO (1320 g) 중에 용해시키고, 용액을 0.6 내지 0.8-마이크론 및 0.2-마이크론의 일련의 인-라인 여과기로 여과시켰다. 추가의 DMSO (880 g) 를 사용하여, 여과기 시스템을 헹궜다. 목표 온도를 83 ℃ 로 유지하면서, 용액을 서서히 정제수 (5000 g) 에 첨가하였다. 첨가하는 동안 생성물은 결정화되기 시작하고, 상기 슬러리를 83 ℃ 의 목표 온도에서 약 1 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 서서히 20 ℃ 로 냉각시켰다. 생성물을 여과로 단리시키고, 정제수 (8000 g) 로 세척하였다.

고체를 용기에 채우고, 정제수 (6000 g) 를 첨가하였다. 슬러리를 약 1 시간 동안 혼합하였다. 생성물을 여과로 단리시키고, 정제수 (4000 g) 이어서 무수 에탄올 (3160 g) 로 세척하였다. 잔류 물 함량이 5.5 % 이하가 되고, 잔류 에탄올이 2000 ppm 이하가 될 때까지, 생성물을 40 ℃ 이하에서 진공 하에 건조시켜, (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 1 수화물을 산출하였다.

Claims

2.5 내지 7.5 ℃ 의 온도에서 하기 화학식 (4) 의 화합물을 수성 메틸아민과 접촉시켜 하기 (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드의 1 수화물을 합성하는 방법:

,

[화학식 4]

.
제 1 항에 있어서, 반응이 밀폐 압력 반응기에서 수행되는 방법.
제 2 항에 있어서, 생성물을 하기 단계에 의해 단리시키는 방법:

(a) 35 ℃ 이하에서 진공 하에 탈기시켜 과량의 메틸아민을 제거하는 단계,

(b) 진공을 해제하고, 15 분 내지 1 시간 동안 0 내지 5 ℃ 로 냉각시키는 단계,

(c) 이와 같이 형성된 슬러리를 여과시키는 단계,

(d) 여과기의 함유물을 물 이어서 에탄올로 세척하는 단계, 및

(e) 40 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 잔류 고체를 건조시키는 단계.
제 3 항에 있어서, (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-6-아미노퓨린-2-일}피라졸-4-일)-N-메틸카르복사미드 최종 생성물을 하기 단계에 의해 추가로 정제하는 방법:

(i) 제 3 항의 단계 (e) 로부터의 건조된 고체를 디메틸술폭시드 중에 용해시키는 단계,

(ii) 용액으로부터 임의의 고체 불순물을 여과시키는 단계,

(iii) 추가 디메틸술폭시드로 헹구는 단계,

(iv) 78 내지 88 ℃ 로 유지되는 정제수에 용액을 첨가하여, 슬러리를 형성하는 단계,

(v) 슬러리를 교반하는 단계,

(vi) 슬러리를 냉각시키는 단계,

(vii) 여과시키는 단계,

(viii) 여과기의 함유물을 물 이어서 에탄올로 세척하는 단계, 및

(ix) 40 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 잔류 고체를 건조시키는 단계.
삭제
제 4 항에 있어서, 최종 생성물 중 잔류 물 함량이 5.5 % 이하이고, 잔류 에탄올이 2000 ppm 이하인 방법.
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제 6 항에 있어서, 반응이 에탄올에서 수행되는 방법.
제 6 항에 있어서, 0.1 몰 당량 이하의 HCl 인 산이 사용되는 방법.
제 9 항에 있어서, 반응이 환류로 발생하는 방법.
제 6 항에 있어서, 5-10 배 몰 과량의 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트가 사용되는 방법.
제 11 항에 있어서, 6.8-7.5 배 몰 과량의 에틸 2-포르밀-3-옥소프로피오네이트가 사용되는 방법.
제 12 항에 있어서, 생성물을 하기 단계에 의해 단리시키는 방법:

(a) 완료된 반응 혼합물을 10 ℃ 로 냉각시키는 단계,

(b) 여과시키는 단계,

(c) 여과기의 함유물을 에탄올로 세척하는 단계, 및

(d) 40 ℃ 이하의 온도에서 진공 하에 잔류 고체를 건조시키는 단계.
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