PT2158208E - Processo para preparar um agonista de recetor de adenosina-a2a e seus polimorfos - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO PROCESSO PARA PREPARAR UM AGONISTA DE RECETOR DE ADENOSINA—A2a

E SEUS POLIMORFOS

Campo da invenção A presente invenção refere-se a um processo para a preparação a grande escala de um agonista de recetor de adenosina-A2A e também se refere a polimorfos desse composto e a métodos de isolamento de um polimorfo especifico. Antecedentes A adenosina é um nucleósido que aparece de maneira natural, que exerce sus efeitos biológicos por interação com uma família de recetores de adenosina conhecidos como Ai, A2a, A2b e A3, todos os quais modulam importantes processos fisiológicos. Um dos efeitos biológicos da adenosina é agir como um vasodilatador coronário; sendo este resultado produzido pela interação com o recetor de adenosina-A2A. Este efeito da adenosina encontrou-se que é útil como uma ajuda para a formação de imagens do coração, em que as artérias coronárias são dilatadas anteriormente à administração de um agente de formação de imagens (por exemplo, tálio 201), e portanto, pela observação das imagens produzidas, portanto, pode ser determinada a presença ou ausência de doença arterial coronária. A vantagem de tal técnica, é que evita o método mais tradicional de induzir vasodilatação coronária por exercício numa esteira, que claramente é indesejável para um paciente que tem uma doença coronária.

No entanto, a administração de adenosina tem várias desvantagens. A adenosina tem uma semivida muito curta em seres humanos (menos de 10 segundos) e também tem todos os efeitos associados com o agonismo de recetor de Alr A2a, A2B e A3. Portanto, a utilização de um agonista de recetor de adenosina-A2A seletivo proporcionará um método superior de produzir vasodilatação coronária, particularmente um com uma semivida mais longa e poucos ou nenhum efeito secundário.

Uma classe de compostos que possuem estas propriedades desejáveis são descritos na Patente dos Estados Unidos N° 6.403.567. Em particular, um composto descrito nesta patente, (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida, é mostrado que é um agonista de recetor de adenosina-A2A altamente seletivo e atualmente é submetido a ensaios clínicos como um vasodilatador útil em imagem cardíaca.

Dado o alto interesse neste e similares compostos, é desejável encontrar novos métodos de síntese que proporcionem um método conveniente para fabricar grandes quantidades do material, de bom rendimento e alta pureza. A patente que revela o composto de interesse (Patente dos Estados Unidos N° 6.403.567), proporciona vários métodos para preparar o composto. No entanto, embora estes métodos sejam adequados para síntese a pequena escala, todos os métodos sintéticos revelados na patente utilizam grupos protetores, o qual é indesejável para a síntese a grande escala.

Além disso, descobriu-se que o produto desejado (que é (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximet il) oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-m etilcarboxamida) é capaz de existir em pelo menos três formas cristalinas diferentes, a mais estável das quais é um monoidrato. Este polimorfo é estável em condições de estresse de humidade relativa, até seu ponto de fusão. Por conseguinte, é desejável que o produto final produzido nas novas síntese, seja obtido como o monoidrato estável.

Sumário da invenção

Portanto, é um objeto desta invenção proporcionar sínteses convenientes para a preparação a grande escala de (1—{9 — [ (4S,2R,3R,SR)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida e polimorfos dos mesmos, preferentemente como seu monoidrato. Por conseguinte, num primeiro aspeto, a invenção refere-se à preparação de um composto da Fórmula I:

que compreende as etapas enumeradas na reivindicação 1. A invenção proporciona uma forma de realização que refere-se à preparação de um composto da fórmula (2):

que compreende: por em contacto um composto da fórmula (1): com hidrazina.

É utilizado um excesso molar de 14,3-16,7 vezes de hidrazina e a reação é realizada a uma temperatura de aproximadamente 60-65 °C. Numa forma de realização a hidrazina, primeiro é aquecida a aproximadamente 60-65 °C, seguido da adição do composto de fórmula (1). O composto de fórmula (2) pode ser isolado por (a) arrefecer a mistura de reação a aproximadamente 40 °C, (b) adicionar uma massa equivalente de água de 4,2-4,9, enquanto é mantida a temperatura a aproximadamente 40 °C, (c) arrefecer a mistura a aproximadamente 10 °C e mantendo essa temperatura durante pelo menos 1 hora aproximadamente, (d) filtrar, (e) lavar o conteúdo do filtro com água, seguido de etanol, e (f) secar o sólido a vácuo que permanece a uma temperatura que não exceda de 30 °C durante pelo menos 12 horas. A síntese descrita anteriormente é adequada para a síntese a grande escala do produto desejado, que é proporcionada com um bom rendimento. Além disso, a síntese anterior não dá o composto de fórmula (2) como uma impureza no produto final. A invenção refere-se a um método de sintetizar (1—{9 —[(4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxo-lan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamid a, que compreende a etapa de por em contacto composto da fórmula (4) :

com metilamina. A reação é realizada numa solução aquosa de metilamina. Preferentemente, a reação é realizada num reator de pressão fechado hermeticamente. A reação é realizada a uma temperatura de aproximadamente 2,5-7,5 0 C.

Ainda em outra forma de realização, o produto é isolado em forma do monoidrato puro dissolvendo o produto num solvente, por exemplo, sulfóxido de dimetilo, adição de água purificada, filtrar a suspensão assim formada, lavar o conteúdo do filtro com água seguido de etanol, e secar a vácuo o sólido que permanece a uma temperatura que não exceda de 40 °C. Em algumas outras formas de realização, o produto pode ser isolado em forma do monoidrato puro por (a) desgaseificar a mistura de reação a vácuo a não mais de 35 °C para retirar o excesso de metilamina, (b) libertar o vácuo e arrefecer a 0-5 °C durante aproximadamente de 15 minutos a uma hora, (c) filtrar a suspensão assim formada, (d) lavar o conteúdo do filtro com água seguido de etanol, e (e) secar a vácuo o sólido que permanece a uma temperatura que não exceda de 40 °C.

Em algumas formas de realização a (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2- il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida é purificada adicionalmente para proporcionar a forma monoidrato por (i) dissolver o composto num solvente, tal como sulfóxido de dimetilo, aquecido a aproximadamente 78-88°, (ii) filtrar qualquer impureza sólida da solução, (iii) enxaguar com solvente adicional, (iv) adição de solução a água purificada que é mantida a aproximadamente 78-88°, formando desse modo uma solução, (v) agitar a suspensão, (vi) arrefecer a suspensão, (vii) filtrar, (viii) lavar o conteúdo do filtro com água seguido de etanol, e (ix) secar a vácuo o sólido que permanece a uma temperatura que não exceda de 40 °C. A invenção refere-se a um método que compreende a etapa de sintetizar um composto da fórmula (4):

que compreende por em contacto um composto da fórmula (2) :

com um excesso de 2-formil-3-oxopropionato de etilo num excesso de 5-10 vezes. Numa forma de realização, a reação é realizada em etanol, a uma temperatura de aproximadamente 80 °C. O 2-formil-3-oxopropionato de etilo está presente num excesso de 5-10 vezes.

Numa forma de realização mais, também é apresentado um método adicional de sintetizar um composto da fórmula (4) que compreende por em contacto um composto da fórmula (2)

com um excesso como foi definido anteriormente de 2-formil-3-oxopropionato de etilo em presença de um ácido. A reação ocorre a refluxo, é realizada geralmente em etanol. A reação ocorre com ou sem a utilização de HC1 como um catalisador. É utilizado até 0,1 equivalente molar, preferentemente um excesso molar de HC1 de aproximadamente 0, 05 e aproximadamente um excesso molar de 5-10 vezes, preferentemente um excesso molar de 6,8-7,5 vezes aproximadamente, de 2-formil-3-oxopropionato de etilo. O produto desta reação pode ser isolado por (a) arrefecer a mistura de reação completada a aproximadamente 10 °C, (b) filtrar, (c) lavar o conteúdo do filtro com etanol, e (d) secar a vácuo o sólido que permanece a uma temperatura que não exceda de 40 °C. Definições E Parâmetros Gerais A FIGURA 1 é um espectro de RMN ΤΗ de monoidrato de (1—{9 —[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il )-N-metilcarboxamida (Forma A). A FIGURA 2 mostra a análise térmica do monoidrato de (1—{9 —[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il )-N-metilcarboxamida. A FIGURA 3 mostra o padrão de difração de Raios X para o monoidrato de 1-{9-[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi 5- (hidroximetil)oxolan-2- il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida. A FIGURA 4 mostra o padrão de difração de Raios X para (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil) oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarbo xamida Forma B.

A FIGURA 5 mostra o padrão de difração de Raios X (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil) oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarbo xamida Forma C em comparação com a Forma A.

Como é utilizado na presente memória descritiva, as seguintes palavras e frases se pretende geralmente que tenham os significados que são expostos a seguir, exceto na medida que o contexto em que são utilizados, indique de outro modo. "Opcional" ou "opcionalmente", significa que o evento ou circunstância descrito posteriormente pode ou pode não ocorrer e que a descrição inclui casos em que os ditos eventos ou circunstâncias ocorrem e casos em que não. A expressão "quantidade terapeuticamente eficaz", refere-se à quantidade de um composto de Fórmula I que é suficiente para efetuar o tratamento, como são definidos a seguir, quando são administrados a um mamífero que necessita de tal tratamento. A quantidade terapeuticamente eficaz variará dependendo do indivíduo e o estado patológico que esteja a ser tratado, o peso e a idade do indivíduo, a gravidade do estado patológico, o modo de administração e similares, que pode ser determinada facilmente por um perito comum na especialidade. 0 termo "tratamento" ou "tratar", significa qualquer tratamento de uma doença de um mamífero, que inclui: (i) prevenção da doença, isto é, fazendo com que que os sintomas clínicos da doença não se desenvolvam; (ii) inibição da doença, isto é, detendo os sintomas clínicos da doença; e/ou (iii) alívio da doença, isto é, causando a regressão dos sintomas clínicos.

Como é utilizado na presente memória, "veiculo farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotónicos e retardantes da absorção e similares. A utilização de tais meios e agentes para substâncias farmaceuticamente ativas é bem conhecido na técnica. Exceto na medida em que qualquer meio ou agente convencional é incompatível com o ingrediente ativo, se contempla sua utilização em composições terapêuticas. Também podem ser incorporados ingredientes ativos suplementares nas composições. 0 termo "polimorfo" pretende incluir amorfos e solvatos de (1—{9 —[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil) oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxa mida.

Descobriu-se que este composto é capaz de existir em pelo menos três formas cristalinas diferentes, referidos no presente documento como Forma A, Forma B, Forma C e um produto amorfo.

Forma A: Este polimorfo pode ser produzido por cristalização de 1—{9-[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroxime-til)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcar boxamida a partir de solventes próticos, por exemplo etanol ou misturas de etanol/água, ou a partir um solvente polar, por exemplo sulfóxido de dimetilo/água. A Forma A mostrou-se que é um monoidrato e é a mais estável dos diversos polimorfos a temperatura ambiente. É estável em condições de estresse de humidade relativa até seu ponto de fusão.

Forma B: Este polimorfo é produzido por evaporação a vácuo de uma solução de l-{9-[ (4S,2R,3R,5R)-3,4- dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pi razol-4-il)-N-metilcarboxamida em trifluoroetanol a temperatura ambiente. A análise de raios X dos cristais era claramente diferente de qualquer outro polimorfo (veja-se a

Figura 4) , mas foi difícil determinar sua constituição, já que as análises de raios X deram picos largos desordenados e o polimorfo continha quantidades variáveis de água. Encontrou-se que era difícil reproduzir de forma fiável a preparação deste polimorfo.

Forma C: Este polimorfo é produzido suspendendo 1— {9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan- 2- il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida em acetonitrilo durante um longo período de tempo a 60 °C. A análise de raios era claramente diferente de qualquer outro polimorfo (veja-se Figura 5) . Mostrou-se que o polimorfo C era um hidrato variável, que, a temperaturas elevadas, dessolvatava a uma forma instável.

Material Amorfo: Este polimorfo é produzido aquecendo o polimorfo de Forma à uma temperatura de até 200 °C. Este polimorfo é instável em presença de humidade atmosférica, formando hidratos variáveis. Técnicas para a análise das Formas A, B, C e Material Amorfo Difração de raios X de pó

As análises de difração de raios X de pó (XRPD) foram realizadas num difractómetro de raios X de pó XRD-6000 utilizando radiação Cu Κα. O instrumento foi equipado com um tubo de raios X de foco fino e a tensão e amperagem do tubo foram ajustadas a 40 kV e 40 mA respetivamente. As fendas de divergência e dispersão foram ajustadas em 1" e a fenda recetora foi ajustada em 0,15 mm. A radiação difractada foi detectada por um detector de centelleo de Nal. Foi utilizada um barrido continuo theta-dois theta a 3°/min (etapa 0,4 s/0,02°) de 2,5-40° 2Θ. Foi utilizado um padrão de silício para comprovar o alinhamento do instrumento. Os dados foram recolhidos e foram analisados utilizando o software XRD-6000 v. 4,1.

As análises de difração de raios X de pó (XRPD) também foram realizadas utilizando um difractómetro Inel XRG-3000 equipado com um detector CPS (Posição curvada sensível) com um intervalo 28 de 120°. A calibração do instrumento foi realizada utilizando um padrão de referência de silício. A tensão e amperagem do tubo foram ajustadas em 40 kV e 30 mA, respetivamente. A fenda monocromadora foi ajustada em 5 mm por 80 pm. As amostras foram colocadas num suporte de amostra de alumínio com um inserto de silício ou em capilares de vidro com qualidade XRPD. Cada capilar foi montado sobre uma cabeça goniómetro que foi motorizado para permitir o giro do capilar durante a aquisição de dados. Foram recolhidos dados em tempo real utilizando radiação Cu-Κα numa resolução de 0,03° 2Θ. Tipicamente, os dados foram recolhidos durante um período de 300 segundos. Somente os pontos de dados dentro do intervalo de 2,5-40° 2Θ, aparecem nos padrões XRPD plotados.

Análises térmicas

As análises termogravimétricas (TG) foram realizadas num analisador termogravimétrico TA Instruments 2050 ou 2950. Os padrões de calibração foram níquel e Alumel™. As amostras foram colocados num recipiente de amostra de alumínio, insertado no forno TG e pesadas com exatidão. As amostras foram aquecidas em azoto uma velocidade de 10 °C/min até 300 ou 350 °C. A menos que seja indicado de outro modo, os pesos das amostras foram equilibrados a 25 °C no forno TGA antes do análise.

As análises de calorimetria de varrimento diferencial (DSC) foram realizadas num calorímetro de varrimento diferencial de TA Instruments 2920. As amostras pesadas de forma precisa foram colocadas tanto em recipientes pinçados como recipientes fechados hermeticamente que continham um orifício pontual para permitir a libertação de pressão. Cada amostra foi aquecida sob azoto a uma velocidade de 10 °C/min até 300 ou 350 °C. Foi utilizado metal índio como o padrão de calibração. As temperaturas foram registadas nos máximos de transição.

Espectroscopia de Infravermelho

Foram adquiridos espectros de infravermelhos num espectrómetro Magna 860® com transformada de Fourier de infravermelhos (FT-IR) (Nicolet Instrument Corp.) equipado com uma fonte de IR médio/distante Ever-Glo, um divisor de feixe de brometo de potássio de alcance estendido e um detector de sulfato de triglicina deuterado (DTGS). A menos que seja indicado de outro modo, foi utilizado um acessório de refletância difusa Spectra-Tech, Inc. (o Collector™) para a amostragem. Cada espectro representa 256 varrimentos adicionados em conjunto a uma resolução espectral de 4 cm-1. A preparação da amostra para o composto consistiu em colocar a mostra numa microcápsula e a nivelação do material com um porta-objetos de vidro esmerilado. Foi adquirido um conjunto de dados iniciais com um espelho de alinhamento em seu lugar. 0 espectro representa uma relação do conjunto de dados de um único feixe de amostra ao conjunto de dados de um único feixe inicial. A calibração do comprimento de onda do instrumento foi realizada utilizando poliestireno.

Espectroscopia de RMN

Espectros de RMN Ή de fase de solução foram adquiridos a temperatura ambiente é um espectrómetro modelo Bruker AM-250 que opera a 5,87 T (frequência de: ' H = 250 MHz) . foram adquiridos dados de tempo de domínio utilizando uma amplitude de pulso de 7,5 ps e um tempo de adquisição de 1, 6834 segundos sobre uma janela espectral de 5000 Hz. Foram recolhidos um total de 16.384 pontos de dados . Utilizou-se um tempo de retardo de relaxamento de 5 segundos entre transitórios. Cada conjunto de dados tipicamente consistia em 128 transitórios ponderados. Os espectros foram processados utilizando software GRAMS132 Al, versão 6.00. O decaimento de indução livre (FID), foram preenchidos de zero a quatro vezes o número de pontos de dados e foi ultiplicado exponencialmente com um factor de linha de ampliação de 0,61 Hz antes da transformação de Fourier. Os espectros de 'H foram referenciados internamente a tetrametilsilano (0 ppm) que foi adicionado como padrão interno.

Como alternativa, a análise de RMN foi realizada como é descrito no Exemplo 4.

Análise de absorção /dessorção de humidade

Os dados de absorção/dessorção de humidade foram recolhidos num analisador de absorção de vapor VTI SGA-100. Os dados de absorção e dessorção foram recolhidos num intervalo de 5 % a 95 % de humidade relativa (RK) a intervalos de RH a 10 % sob uma purga de azoto. Foram utilizados cloreto de sódio (NaCl) e polivinilpirrolidona (PVP) como padrões de calibração. Os critérios de equilíbrio utilizados para análise foram uma mudança de menos do 0,0100 % em peso em 5 minutos, com um tempo de equilíbrio máximo de 180 minutos se o critério de peso não fosse cumprido. Os dados plotados não foram corrigidos pelo conteúdo de humidade inicial.

Nomenclatura A estrutura do composto (1—{9 —[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il} pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida é como segue:

Síntese_de (1—{9 —[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N- metilcarboxamida

Um método de referência para a síntese a grande escala de (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil) oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxa mida é mostrado no Esquema de Reação I. Todas as reações são realizadas tipicamente sob uma atmosfera de azoto.

ESQUEMA DE REAÇÃO I

Etapa 1 - Preparação de Fórmula (2) 0 composto de fórmula (2) é preparado a partir do composto de fórmula (1) por reação com monoidrato de hidrazina em ausência de um solvente. A reação é realizada a uma temperatura de aproximadamente 45-55 °C. Quando a reação está completa, o produto de fórmula (2) é isolado por agitação com um solvente prótico em que o composto de fórmula (2) limitou a solubilidade, por exemplo de etanol ou isopropanol. A mistura é agitada durante cerca de 1-5 horas e depois é filtrada. 0 sólido é purificado por agitação com água, filtração e lavagem com água seguido de isopropanol e seco a vácuo, que é levado à seguinte etapa sem purificação.

Etapa 2 - Preparação de Fórmula (3) 0 composto de fórmula (2) é convertido depois num composto de fórmula (3) por reação com aproximadamente 1-1,2 equivalentes molares 2-formil-3-oxopropionato de etilo. A reação é realizada num solvente prótico, preferentemente etanol, a cerca da temperatura de refluxo, durante cerca de 2-4 horas. Depois arrefecimento, a cerca de 0 °C, o sólido é retirado por filtração, é lavado com etanol frio e é seco a pressão reduzida. 0 produto de fórmula (3) é levado à seguinte etapa sem purificação.

Etapa 3 - Preparação do Produto Final 0 produto final é preparado a partir do composto de fórmula (3) por reação com metilamina, preferentemente metilamina aquosa. A reação é realizada a cerca da temperatura ambiente, durante cerca de 4 horas. 0 produto de Fórmula I é isolado por meios convencionais, por exemplo por filtração, lavagem do sólido com etanol frio e secagem a pressão reduzida. Preparação de Materiais de Partida É utilizado (4S,2R,3R,5R)-2- (6-amino-2-cloropurin-9-il)-5-(hidroximetil)oxolan-3,4-diol é utilizado como um material de partida na etapa 1. Este composto está disponível no mercado. É utilizado 2-formil-3-oxopropanoato de etilo como um material de partida na etapa 2, Está disponível no mercado ou pode hacerse como é mostrado no Esquema de Reação II.

ESQUEMA DE REAÇÃO II

3,3-dietoxipropionato de etilo é feito reagir com formiato de etilo em presença de uma base forte, preferentemente hidreto de sódio. A reação é realizada a cerca de 0-5 °C, durante cerca de 24 horas. O produto é isolado por meios convencionais, por exemplo por meio da adição de água e extração de impurezas com um solvente, por exemplo t-butilmetil éter, acidificação da fase aquosa com, por exemplo, ácido clorídrico, seguido da extração com um solvente tal como diclorometano e retirando o solvente do extracto seco a pressão reduzida. 2-Formil-3-oxopropanoato de etilo é purificado por destilação a pressão reduzida.

Um método preferido para a síntese a grande escala de (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan —2 — i1]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida é mostrado no Esquema de Reação III.

ESQUEMA DE REAÇÃO III

Etapa 1 - Preparação de Fórmula (2)

Como anteriormente, o composto de fórmula (2) é preparado a partir do composto de fórmula (1) por reação com monoidrato de hidrazina em ausência de um solvente. Neste método, no entanto, é aquecido primeiro um excesso molar de 14,3-16,7 vezes de monoidrato de hidrazina a aproximadamente 60-65 °C, seguido da adição do composto de fórmula (1) . A temperatura é mantida a aproximadamente 60-65 °C durante a reação que leva aproximadamente 1 a 3 horas para concluir. Quando o nível de composto residual de fórmula (1) na mistura não é maior que aproximadamente 0,10 %, depois a mistura de reação é arrefecida até aproximadamente 40 °C. A temperatura é mantida enquanto adiciona-se água lentamente. Uma vez que aproximadamente 4,2-4,9 equivalências de massa foram adicionadas, a mistura é arrefecida até aproximadamente 10 °C e é mantida a essa temperatura durante não menos de 1 hora.

Depois o produto é isolado por filtração, lavado com água e depois é lavado com etanol absoluto. O sólido é seco a vácuo a até 30 °C durante não menos de 12 horas e depois é levado à seguinte etapa sem purificação adicional.

Etapa 2 - Preparação de Fórmula (4) O composto de fórmula (2) depois é convertido num composto de fórmula (4) por reação com um excesso de 2-formil-3-oxopropionato etilo, um excesso de 5-10 vezes, de maneira ideal um excesso de aproximadamente 6,8-7,5 vezes. A reação pode ser realizada sob as mesmas condições como as descritas para a preparação do composto de fórmula (3) no Esquema de Reação I.

Como alternativa, também podem ser adicionados aproximadamente 0, 05 equivalentes molares de um ácido, tal como HC1, à mistura de reação. A reação deixa-se continuar a temperatura de refluxo, durante cerca de 2-4 horas, até que o nível de composto residual de fórmula (2) não seja maior que 0,50 % e a quantidade de qualquer composto de fórmula (3) , que pode ser formado, não seja maior que 2,5 %. Depois de arrefecimento, a cerca de 10 °C, o sólido é retirado por filtração, é lavado com etanol absoluto e seco a vácuo até 40 °C para retirar etanol residual. O produto de fórmula (4) foi recolhido para a seguinte etapa sem purificação. O composto de fórmula (4) é desenhado como um derivado de alceno (2E), já que este é o isómero principal formado nesta reação. No entanto, deve ser observado que também pode ser formada nesta reação uma quantidade significativa do derivado de alceno (2Z); isto é:

denominado como (2Z)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)-oxolan-2-il]-2-[4-(etoxicarbonil)pirazolil] purin-6-il}amino)-2-formilprop-2-enoato de etilo.

Por conseguinte, embora o composto de fórmula (4) seja representado somente como o derivado de alceno (2E), a expressão "composto de fórmula (4)" pretende incluir tanto o caso em que somente é o isómero (2E) e o caso em que a porção principal do produto é o isómero (2E) e uma porção menor do isómero (2Z) também está presente. A conversão do composto de fórmula (4) no produto final por reação com metilamina como foi descrito na Etapa 3, transcorre da mesma maneira, tanto se o composto de fórmula (4) está presente como o isómero (2E) como como uma mistura do isómero (2E) e o isómero (2Z) .

Etapa 3 - Preparação do Produto Final 0 produto final é preparado a partir do composto de fórmula (4) fazendo reagir com metilamina aquosa. A metilamina, primeiro é colocada no recipiente de pressão e é arrefecida a aproximadamente 2,5-7,5 °C e depois é adicionado o composto de fórmula (4) enquanto que a temperatura é mantida. A reação procede até que o nível de composto residual de fórmula (3) é menor que aproximadamente 0,10 %. A a finalização, o produto é isolado por meios convencionais, por exemplo, desgaseif icar a vácuo a não mais que aproximadamente 35 °C para retirar o excesso de metilamina. Depois se liberta o vácuo e a mistura é arrefecida a aproximadamente 0-5 °C e foi mantida à temperatura durante 15 minutos a uma hora, seguido de filtração. O sólido obtido desse modo é lavado com água seguido de etanol e é seco a pressão reduzida a uma temperatura de não mais que 40 °C.

Este processo proporciona (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4 -il)-N-metilcarboxamida como seu monoidrato. Este polimorfo pode ser purificado adicionalmente dissolvendo em sulfóxido de dimetilo (DMSO), filtrando qualquer impureza sólida da solução, enxaguandor com mais DMSO e precipitando o monoidrato da solução por adição à água. Este método é particularmente eficaz quando a solução de DMSO e a água são aquecidos a aproximadamente 78-88 °C e é mantida a essa temperatura com agitação durante aproximadamente 1 hora. Depois de agitar, a suspensão é arrefecida lentamente a aproximadamente 20 °C. Depois, o produto final é isolado por filtração, é lavado com água purificada seguido de etanol e é seco como foi descrito previamente. EXEMPLO de referência 1

Preparação de Etil-2-formil-3-oxopropionato

Um balão de fundo redondo de três ou quatro tubuladuras equipado com uma barra agitadora magnética, termopar, termómetro digital, entrada e saída de gás e funil de adição foi lavado abundantemente com árgon. Foi carregado 3,3-dietoxipropionato de etilo (64,5 g) em tetrahidrofurano no funil de adição. Foi carregado hidreto de sódio (21,2 g de uma dispersão a 60 %) ao balão de reação seguido de tetrahidrofurano. O conteúdo do balão foi arrefecido a 0-5 °C num banho de gelo e foi adicionado formiato de etilo (257 g) . A mistura foi arrefecida a 0-5 °C e foram adicionados gota a gota o conteúdo do funil de adição, mantendo uma temperatura interna de menos de 5 °C. O banho de gelo foi retirado e o conteúdo deixou-se a aquecer a temperatura ambiente. O consumo de 3,3-dietoxipropionato de etilo foi controlado por análise de TLC. A reação foi interrompida por meio da adição de água arrefecida por gelo (10,6 vol), e foi extraída três vezes com t-butilmetil éter (5,4 vol cada vez) e as fases orgânicas foram descarregados. A fase aquosa foi acidificada com ácido clorídrico cone, a um pH de 1 a 1,5. A fase aquosa acidificada foi extraída três vezes com diclorometano e as fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio. O solvente foi retirado a pressão reduzida e o resíduo foi destilado a vácuo, para proporcionar 2-formil-3-oxopropionato de etilo, 27,92 g, rendimento do 70 %. EXEMPLO de referência 2 A. Preparação de 2-Hidrazinoadenosina (2)

Um balão equipado com um agitador mecânico, entrada de gás, saída de gás e termopar foi lavado abundantemente com árgon. Foi adicionado hemi-hidrato de 2-cloroadenosina (53,1 g) , seguido de monoidrato de hidrazina (134 g). A mistura foi agitada enquanto se aquecia a 40-45 °C durante 2 horas. O progresso da reação foi seguido de análise de TLC. Quando a reação estava completa, a fonte de calor foi retirada e foi adicionado etanol (800 ml). A mistura foi agitada durante 2 horas a temperatura ambiente, depois o precipitado foi recolhido por filtração. A torta de filtro foi lavada com etanol e foi seca a pressão reduzida durante 30 minutos. Os sólidos foram transferidos a um balão limpo equipado com um agitador mecânico e foi adicionado água (300 ml) . A suspensão foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas e os sólidos foram isolados por filtração. A torta de filtro foi lavada com água arrefecida por gelo (300 ml) seguido de uma lavagem com etanol arrefecido com gelo (300 ml) . O sólido foi seco a pressão reduzida para proporcionar 2-hidrazinoadenosina (41,38 g, rendimento de 81,4 %, pureza de 99,3 %). B. Preparação alternativa de 2-Hidrazinoadenosina (2)

Um recipiente de reação que continha hidrato de hidrazina (258 g, 250 ml) , foi aquecido a 40-50 °C. À mistura quente foi adicionado em porções hemihidrato de 2-cloroadenosina (100 g) , mantendo a entre 45-55 °C. A temperatura foi mantida a esta temperatura durante duas horas, e depois foi adicionada água desionizada (500 ml) durante um período de 30 minutos, mantendo a temperatura a 45-55 °C. Depois, a mistura foi arrefecida gradualmente a 0-5 °C durante um período de 3 horas, depois foi agitada a esta temperatura durante 30 minutos mais. Depois, o sólido foi retirado por filtração e foi lavado com água desionizada (200 ml) gelada (2-5 °C) , seguido de etanol (400 ml). O sólido foi seco a vácuo durante 12 horas, para proporcionar 2-hidrazinoadenosina. C. Preparação Alternativa de 2-Hidrazinoadenosina (2)

Um recipiente de reação é carregado com hidrato de hidrazina (1285 g) . A solução é aquecida a aproximadamente 62 °C e é adicionado 2-cloroadenosina (500 g) enquanto que se mantém a temperatura de aproximadamente 62 °C. A mistura é mantida a um objetivo de 62 °C durante pelo menos 2 horas, até que o nível de 2-cloroadenosina residual não é maior de 0,10 %. A mistura é arrefecida a aproximadamente 40 °C e é comprovada a mistura para verificar a presença de sólidos. Água é adicionado lentamente (2275 g) enquanto que se mantém a temperatura a aproximadamente 40 °C. A mistura é arrefecida a aproximadamente 10 °C e mantida durante não menos de 1 hora. O produto é isolado por filtração, lavado com água (1195 g) e depois com etanol absoluto (1885 g) . O produto é seco a vácuo até 30 °C durante não menos de 12 horas, para dar 2-hidrazinoadenosina. EXEMPLO de referência 3

Preparação_de_1 — { 9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-carb oxilato de etilo (3)

Colocou-se 2-formil-3-oxopropionato de etilo (23,93 g. 0, 17 mol) num balão equipado com um agitador mecânico, entrada de gás, saída de gás e condensador de refluxo. Foi adicionado 2-propanol ao balão seguido de 2-hidrazinoadenosina (44,45 g. 0, 15 mol) . A mistura foi aquecida a refluxo em agitação durante 2-4 horas, seguindo o progresso da reação por análise de TLC. Quando a reação considerou-se concluída, a fonte de calor foi retirada e a mistura foi arrefecida a temperatura ambiente. A suspensão foi arrefecida em agitação num banho de gelo durante 1,5 a 2 horas. Os sólidos foram isolados por filtração a vácuo e foram lavados com 2-propanol arrefecido com gelo. O produto, 1—{9-[(4 S,2R,3R,SR)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-carboxilato de etilo, foi seco a pressão reduzida a um peso constante. EXEMPLO 4

Preparação_de_(1 — { 9 - [ (4S, 2R, 3R, 5R) -3,4-dihidroxi- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N- metilcarboxamida

Uma mistura de 1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-carboxilato de etilo (46,4 g) e metilamina (40 % em água, 600 ml) foi agitada a temperatura ambiente durante cerca de 4 horas, seguindo ο progresso da reação por análise de HPLC. A maioria do excesso de metilamina foi retirado a pressão reduzida e a mistura restante foi arrefecida a 0 °C durante 2 horas. O material sólido foi retirado por filtração, lavado com etanol de graduação 200 % arrefecido com gelo e foi seco a pressão reduzida, para proporcionar (1—{9 — [ (4S,2R,3R,SR)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida como seu monoidrato. A estrutura do material foi confirmada por RMN (veja-se a figura 1 e mais adiante). A análise térmica (veja-se a figura 2) proporcionou resultados consistentes, com a presença de uma molécula de água. Foram obtidos padrões de difração de raios X de pó (figura 3)

Foram adquiridos espectros de RMN 3Η e 13C da seguinte maneira. Duas amostras do material obtido anteriormente foram pesadas e dissolvidas em d5-DMSO - Foram utilizadas 5,3 mg para o espectro 3Η e foram utilizados 20,8 mg para o espectro 13C. Todos os espectros foram adquiridos a temperatura ambiente num espectrómetro JEOL Eclipse + 400 que operava a 400 MHz para 3H e 100 MHz para 13C.

EXEMPLO 5 A. Preparação de (2E)-3-({9-[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)-oxolan-2-il]-2-[4-(etoxicarbonil)pirazolil] purin-6-il}-amino)-2-formilprop-2-enoato de etilo (4)

Uma mistura de 2-hidrazinoadenosina (100 g. 0,34 mol). 2-formil-3-oxopropionato de etilo (242 g. 1,7 mol) e etanol absoluto foi carregado num reator e a mistura foi aquecido a refluxo durante 2 horas. Quando a reação considerou-se concluída, a fonte de calor foi retirada e a mistura foi arrefecida gradualmente a 5-10 °C durante um período de 3 horas. A suspensão foi agitada durante 30 minutos a esta temperatura e a mistura foi filtrada. O material sólido foi lavado com etanol absoluto frio (5-10 °C) e depois foi seco a vácuo a uma temperatura que não excedeu 40 °C, para proporcionar (2E)-3- ({9-[ (4S.2R.3R.5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxo lan-2-il]-2-[4-(etoxicarbonil)-pirazolil]purin-6-il} amino)-2-formilprop-2-enoato de etilo. B. Preparação Alternativa de (2E)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R) -3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)-oxolan-2-il]-2-[4-(etoxicar bonil) pirazolil]purin-6- il}amino)-2-formilprop-2-enoato de etilo (4)

Um recipiente de reação é carregado com 2-hidrazinoadenosina (450 g) e etanol absoluto (11376 g) . Foram adicionados HC1 (7,47 g) e 2-formil-3-oxopropionato de etilo (1557 g). A mistura é aquecida e são recolhidas amostras até que o nível de 2-hidrazinoadenosina residual não seja maior que 0,50 % e o nível do composto de fórmula (3) não seja maior que 2,5 %. A mistura foi arrefecida lentamente a aproximadamente 10 °C. O produto, o composto de fórmula (4) é isolado por filtração e lavado com etanol absoluto (5121 g). O produto é seco a vácuo até 40 °C, até que o etanol residual não é maior que 5000 ppm para dar (2E)-3- ({9-[ (4S.2R.3R.5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-ill-2 -[4-(etoxicarbonil)-pirazolil]purin-6-il}amino)-2-formilpro p-2-enoato de etilo.

Uma análise elementar do produto do Exemplo 5A deu os seguintes resultados: C, 48,75 %; H, 4,86 %; N, 18,05 %; O, 27,57, Teórico: C, 49,72 %; H, 4,74 %; N, 18,45 %; O, 27,09. A análise corresponde dentro dos limites de erro experimental ao hemihidrato do produto desejado. (C, 48, 89 %; H, 4,81 %; N, 18,1 %; O, 28,12)

Foram obtidos espectros de RMN 1H e 13C da seguinte maneira. Foram dissolvidos 20,2 mg do composto de fórmula (4) em -0,75 ml de DMSO-d6 e foi obtido o espectro a temperatura ambiente num espectrómetro JEOL ECX-400 RMN que operava a 400 MHz para 3H e 100 MHz para 13C. Os deslocamentos químicos foram referenciados ao solvente DMSO. 2,50 ppm para 3H e 39,5 ppm para 13C.

RESULTADOS

Os deslocamentos químicos 3H e 13C são enumerados no quadro 1. Foram observados dois isómeros numa proporção de -60/30 em tanto que os espectros 3H e 13C, etiquetados como maior e menor no quadro .

Confirmou-se que o composto de fórmula (4) era uma mistura dos dois isómeros seguintes:

EXEMPLO 6 A. Preparação_de (l-{9-F(4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2- il}pirazol-4-il)-N- metilcarboxamida a partir do Composto (4)

Colocou-se uma solução aquosa a 40 % de metilamina (1300 ml) num reator de pressão, arrefecida a 0-5 °C e foi adicionado o produto do Exemplo 5A ( (2E)-3- ({9-[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)ox olan-2-il]-2-[4-(etoxicarbonil)pirazolil]purin-6-il}amino)-2-formilprop-2-enoato de etilo (100 g) . A mistura foi agitada a 0-5 °C durante pelo menos 8 horas, controlando a reação para a conclusão. Quando estava completa, a mistura foi aquecida, foi mantida a temperatura entre 50 e 60 °C durante 1 hora e depois foi arrefecida a menos de 30 °C durante um período de 1 hora. Quando a temperatura foi inferior a 30 °C, a mistura foi desgaseifiçada utilizando uma pressão de 100-150 mmHg, permitindo que a temperatura diminuísse a 0-5 °C. A mistura foi agitada a 0-5 °C durante pelo menos 1 hora, mantendo a pressão a 100-150 mmHg. Depois foi interrompido o vácuo e foi substituído por uma atmosfera de azoto, mantendo a temperatura a 0-5 °C durante não menos de 30 minutos. Depois o produto sólido foi retirado por filtração, foi lavado com água (3 x 500 ml), depois com etanol absoluto (625 ml). O produto foi seco a vácuo, não permitindo que a temperatura excedesse 40 °C, para proporcionar (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi -5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-i 1)-N-metilcarboxamida como seu monoidrato. B . Preparação_Alternativa_de (1—{9 —[(4S,2R,3R,5R)~3,4-dihidro~5-(hidroximetil) oxolan-2-i 1]-6-aminopurin-2-il} pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida a partir do Composto (4)

Um recipiente de pressão é carregado com uma solução a 47 % de metilamina (10080 g). A solução é arrefecida e é adicionado o composto de fórmula (4) como preparado no Exemplo 5B anterior (600 g) , enquanto que se mantém um objetivo de temperatura de 5 °C. A mistura foi agitada a um objetivo de temperatura de 5 °C, até que o nível do composto residual de fórmula (3) na mistura foi menor de 0,10 %. A mistura de reação é desgaseifiçada a vácuo a não mais de 35 °C para retirar o excesso de metilamina. O vácuo é libertado e a mistura é arrefecida a 2,5 °C e é mantida durante pelo menos 30 min. Depois, o produto é isolado por filtração, lavado com água (não menos de 9000 g) e depois com etanol absoluto (não menos de 2964 g) . O produto é seco a vácuo até 40 °C, até que o etanol residual não é maior que 5000 ppm para dar (1—{9 —[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin- 2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida em bruto como seu monoidrato.

Foram obtidos espectros de RMN 3Η e 13C RMN da seguinte maneira. Duas amostras do material obtido no Exemplo 6A foram pesadas e dissolvidas em d6~DMSO - Foram utilizados 5,3 mg para o espectro 3Η e foram utilizados 20,8 mg para o espectro 13C. Todos os espectros foram adquiridps a temperatura ambiente num espectrómetro JEOL Eclipse3 400 que operava a 400 MHz para 3H e 100 MHz para 13C.

Uma análise elementar deu os seguintes resultados: C, 43, 96 %; H, 4,94 %; N, 27, 94. Teórico: C, 44,12 %; H, 4,94 %; N, 27,44 %; 0, 27,09. A análise corresponde dentro dos limites de erro experimental ao monoidrato. EXEMPLO 7 A. Purificação_de_monoidrato_de (1—{9 —[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il} pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida

Uma solução de monoidrato de (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -ill-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida, como foi preparado no Exemplo 4, (100 g) em sulfóxido de dimetilo (300 ml) foi filtrada através de um pré-filtro de 0, 6 a 0,8 micrómetros e um filtro de 0,2 micrómetros para retirar qualquer impureza sólida. Depois, foi adicionado lentamente com agitação o filtrado, durante um período de 1 hora, a água desionizada (1 litro) e a suspensão assim produzida foi agitada durante não menos de 1 hora. O sólido foi retirado por filtração, foi lavado com água desionizada (2x1 litro) e foi seco a vácuo durante não menos de 1 hora.

Depois, o produto seco foi suspenso de novo com água desionizada (1,5 litro) durante não menos de 2 horas, foi retirado por filtração e foi lavado com água desionizada (1 litro) seguido de etanol absoluto (750 ml). O produto purificado foi seco a vácuo a uma temperatura de não mais de 40 °C durante não menos de 12 horas, para proporcionar monoidrato de (1—{9 —[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N- metilcarboxamida livre de qualquer impureza de 2-hidrazinoadenosina. B . Purificação_alternativa_de_monoidrato_de (1—{9 —[(4S,2R,3R,5R)~3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il] -6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida

Uma solução de monoidrato de (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il} pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida, (400 g) , é dissolvida DMSO (1320 g) e a solução é filtrada através de filtros em linha em série de 0,6 a 0,8 micrómetros e 0,2 micrómetros. Foi utilizada DMSO adicional (880 g) para enxaguar o sistema de filtro. A solução é adicionada lentamente a água purificada (5000 g), enquanto se mantém uma temperatura objetivo de 83 °C. O produto começa a cristalizar durante a adição e a suspensão é agitada a um objetivo de 83 °C durante aproximadamente 1 h. A mistura é arrefecida lentamente a 20 °C. O produto é isolado por filtração e lavado com água purificada (8000 g) .

Os sólidos são carregados num recipiente e água purificada (6000 g) é adicionada. A suspensão é misturada durante aproximadamente 1 hora. O produto é isolado por filtração e foi lavado com água purificada (4000 g) e depois com etanol absoluto (3160 g) . O produto é seco a vácuo até 40 °C , até que o conteúdo de água residual não é maior de 5,5 % e o etanol residual não é mais de 2000 ppm, para dar monoidrato de (1—{9 —[(4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida.

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • US 6403567 B [0004] [0005]

Lisboa, 27 de Maio de 2015

Claims (14)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Um método de sintetizar (1—{9 — [ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2 -il]-6-aminopurin-2-il} pirazol-4-il) -N-metilcarboxamida

   que compreende as etapas de: (I) por em contacto um composto de fórmula (2):

   com um excesso molar de 5-10 vezes de 2-formil-3-oxopropionato de etilo, opcionalmente em presença de um ácido, para produzir um composto de fórmula (4) :

   e (II) por em contacto o composto de fórmula (4) com metilamina aquosa a uma temperatura de aproximadamente 2,5-7,5 °C para produzir (1—{9 —[(4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroxi-metil)oxola n-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamid a.
2. 2. 0 método de acordo com a reivindicação 1, em que a etapa (I) é realizada em etanol.
3. 3. 0 método de acordo com a reivindicação 1, em que o ácido é HC1 e é utilizado numa quantidade de até 0,1 equivalente molar.
4. 4. O método de acordo com a reivindicação 3, em que a reação ocorre a refluxo.
5. 5. O método de acordo com a reivindicação 1, em que é utilizado aproximadamente um excesso molar de 6,8-7,5 vezes de 2-formil-3-oxopropionato de etilo.
6. 6. O método de acordo com a reivindicação 5, em que o produto de fórmula (4) é isolado por (a) arrefecer a mistura de reação completada a aproximadamente 10 °C, (b) filtrar, (c) lavar o conteúdo do filtro com etanol, e (d) secar o sólido que permanece a vácuo a uma temperatura que não exceda de 40 °C.
7. 7. O método de acordo com a reivindicação 1, em que a etapa (II) é realizada num reator de pressão vedado hermeticamente.
8. 8. O método de acordo com a reivindicação 7, em que o produto da etapa (II) é isolado como um monoidrato por (a) desqaseificar a vácuo a não mais de 35 °C para retirar o excesso de metilamina, (b) libertar o vácuo e arrefecer a 0-5 °C durante aproximadamente 15 minutos a uma hora, (c) filtrar a suspensão assim formada, (d) lavar o conteúdo do filtro com água seguido de etanol, e (e) secar o sólido que permanece a vácuo a uma temperatura que não exceda de 40 °C.
9. 9. O método de acordo com a reivindicação 8, em que o produto final (1—{9 —[ (4S,2R,3R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil) -oxolan-2-il]-6-aminopurin-2il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxa mida é purificado adicionalmente por (i) dissolver o sólido seco da etapa (e) da reivindicação 8 num solvente, (ii) filtrar qualquer impureza sólida da solução, (iii) enxaguar com solvente adicional, (iv) adição de solução a água purificada que é mantida a aproximadamente 78-88 °C, formando desse modo uma solução, (v) agitar a suspensão, (vi) arrefecer a suspensão, (vii) filtrar, (viii) lavar o conteúdo do filtro com água seguido de etanol, e (ix) secar o sólido que permanece a vácuo a uma temperatura que não exceda de 40 °C.
10. 10 . O método de acordo com a reivindicação 9, em que o solvente utilizado nas etapas (i) e (iii) é sulfóxido de dimetilo.
11. 11. O método de acordo com a reivindicação 10, em que o conteúdo de água residual no produto final não é maior que o 5,5 % e o etanol residual não é maior de 2000 ppm.
12. 12 . O método de acordo com a reivindicação 1, em que o composto de fórmula (2) é preparado fazendo reagir um composto de fórmula (D :

    com um excesso molar de 14,3-16,7 vezes de hidrazina a uma temperatura de aproximadamente 60-65 °C.
13. 13. O método de acordo com a reivindicação 12, em que a hidrazina primeiro é aquecida a aproximadamente 60-65 °C seguido da adição do composto de fórmula (1).
14. 14. O método de acordo com a reivindicação 12, em que o composto de fórmula (2) é isolado por (a) arrefecer a mistura de reação a aproximadamente 40 °C, (b) adicionar umas 4,2-4,9 equivalências de massa de água enquanto é mantida a temperatura a aproximadamente 40 °C, (c) arrefecer a mistura a aproximadamente 10 °C e mantendo a essa temperatura durante pelo menos aproximadamente 1 hora, (d) filtrar, (e) lavar o conteúdo do filtro com água seguido de etanol, e (f) secar o sólido que permanece a vácuo a uma temperatura que não exceda de 30 °C durante pelo menos 12 horas. Lisboa, 27 de Maio de 2015