KR101459789B1 - 안정화된 인슐린-유사 성장 인자 폴리펩티드 - Google Patents

안정화된 인슐린-유사 성장 인자 폴리펩티드 Download PDF

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Abstract

본 발명은 IGF-1 또는 IGF-2 서열과 E-펩티드 서열을 갖는 안정화된 폴리펩티드에 관한 것으로, IGF로부터 E-펩티드의 천연 생리적 절단이 방지된다.
인슐린-유사 성장 인자 (IGF), E-펩티드, 근골격계 질환, 당뇨병, 신경 세포 사멸, 빈혈, 약제

Description

안정화된 인슐린-유사 성장 인자 폴리펩티드 {STABILIZED INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR POLYPEPTIDES}
인슐린-유사 성장 인자 (IGF)는 세포가 그의 생리적 환경과 소통하기 위해 사용하는 복합 시스템의 일부이다. 이러한 복합 시스템 (종종 인슐린-유사 성장 인자 축으로서 지칭됨)은 2종의 세포-표면 수용체 (IGF-1R 및 IGF-2R), 2종의 리간드 (IGF-1 및 IGF-2), 6종의 고친화성 IGF-결합 단백질 (IGFBP 1-6) 계열, 및 연합 IGFBP 분해 효소 (프로테아제)로 이루어진다. 이 시스템은 정상적인 생리 기능을 조절하는데 중요할 뿐만 아니라 수많은 병리학적 상태에도 중요하다 [참고: Glass, Nat Cell Biol 5:87-90, 2003].
IGF 축은 세포 증식을 증진시키고 세포 사멸 (세포자멸)을 억제시키는데 소정의 역할을 하는 것으로 밝혀졌다. IGF-1은 주로, 인간 성장 호르몬 (hGH)에 의한 자극의 결과로서 간에 의해 분비된다. 인체 내의 거의 모든 세포는 IGF-1에 의해 영향을 받는데, 특히 근육, 연골, 뼈, 간, 신장, 신경, 피부 및 폐 내의 세포가 그렇다. 인슐린-유사 효과 이외에도, IGF-1은 세포 성장을 조절할 수도 있다. IGF-1 및 IGF-2는 IGF-결합 단백질로서 공지된 계열의 유전자 생성물에 의해 조절된다. 이들 단백질은 IGF와 IGF 수용체와의 결합을 저해하여 IGF 작용을 억제할 뿐만이 아니라 상기 수용체로의 IGF 전달을 도와주고 혈류 내에서의 IGF 반감기를 증가시킴으로써 IGF 작용을 증진시키는 것을 포함하는 복합적인 방식으로 IGF 작용을 조정하는데 도움을 준다. 특징규명된 6종 이상의 결합 단백질 (IGFBP1-6)이 있다.
소마토메딘(somatomedin)으로 불리우기도 하는 인간 IGF-1
Figure 112008084230908-pct00001
의 성숙 형태는, 배양 중인 광범위한 세포의 성장을 자극하는 것으로 밝혀진 70개 아미노산의 소형 단백질이다. 이러한 성숙 단백질은, 초기에는 3종의 공지된 스플라이스 변이체 mRNA에 의해 코딩된다. 각 mRNA의 오픈 리딩 프레임(open reading frame)은 특정 IGF-1 mRNA에 따라 70개 아미노산 IGF-1 및 C-말단의 특정 E-펩티드를 함유하는 전구체 단백질을 코딩한다. 이들 E-펩티드는 Ea
Figure 112008084230908-pct00002
, Eb
Figure 112008084230908-pct00003
, 및 Ec
Figure 112008084230908-pct00004
펩티드로 명명되고, 길이가 35 내지 87개 아미노산이며 N-말단에는 공통 서열 영역을 포함하고 C-말단에는 가변 서열 영역을 포함한다. 예를 들어, IGF-1-Ea에 대한 야생형 오픈 리딩 프레임은 105개 아미노산의 폴리펩티드
Figure 112008084230908-pct00005
를 코딩한다. 생리적 발현에서는, E-펩티드가 내인성 프로테아제에 의해 전구체로부터 절단 제거되어 생체 활성인 것으로 공지된 성숙한 70개 아미노산 IGF-1을 산출시킨다. 특정의 맥락에서는, IGF-1의 N-말단 아미노산 중의 1 내지 3개가 생리적 조건하에 절단 된다고 공지되어 있는데, 이로써 67 내지 70개 아미노산을 갖는 활성 IGF-1이 산출된다. IGF-2 유전자 발현과 프로세싱은 인간 IGF-2에 대한 단지 1개의 E-펩티드
Figure 112008084230908-pct00006
만이 156개 아미노산 전구체
Figure 112008084230908-pct00007
에 대해 확인되었다는 것을 제외하고는 유사한 속성을 특징으로 한다. IGF-1과 IGF-2 둘 다는 불량한 약물 후보인 것으로 여겨지는데, 이는 이들 단백질이 환자의 혈청 내의 내인성 프로테아제에 의해 신속하게 분해되기 때문이다. 고려되어 온 한 가지 전략은 IGF-1을 그의 결합 단백질 중의 하나와 복합체를 형성시킴으로써 이를 약물로서 안정화시키는 것이다.
발명의 요약
본 발명은 실질적으로 E-펩티드를 함유하는 전구체 IGF-1 또는 IGF-2 단백질이 생체 활성이고 혈청의 존재하에 안정화되어, 제약으로서 유용한 IGF-1 또는 IGF-2 폴리펩티드가 생성된다는 발견에 기초한 것이다. 본 발명의 조성물에서는, 예를 들어 E-펩티드의 위치 1에서의 아르기닌 또는 위치 2에서의 세린 (야생형 전구체 IGF-1 내의 위치 71 및 72에 상응함)을 돌연변이시키거나 결실시킴으로써, E-펩티드가 IGF-1로부터 정상적으로 절단되는 것을 피한다. IGF-2에서는, 예를 들어 E-펩티드의 위치 1에서의 아르기닌 또는 위치 2에서의 아스파르트산 (야생형 전구체 IGF-2 내의 위치 68 및 69에 상응함)을 돌연변이시키거나 결실시킴으로써 상기 절단을 피하게 한다. IGF 전구체 단백질의 기타 변형도 이러한 절단을 피하게 할 수 있거나 저하시킬 수 있다.
또한, IGF-1 전구체 아미노산 서열을 추가로 변형시키는 것은 부가의 제약 이득을 부여할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드는 IGF-1 전구체에 대한 증가된 친화도를 나타낼 수 있거나, 또는 억제성 IGF-1 또는 IGF-2 결합 단백질과의 저하된 결합 능력을 나타낼 수 있다.
명료하고 일관되기 위해, 본 명세서와 청구의 범위 전반에 걸쳐 IGF-1 또는 IGF-2 전구체 또는 성숙 단백질 내의 아미노산 잔기 넘버링은 신호 펩티드를 수반하지 않는 야생형 전구체 단백질 서열 넘버링에 기초한 것이다.
따라서, 본 발명에는 인간 IGF-1 전구체 단백질을 함유하는 폴리펩티드가 포함되는데, 프로테아제에 의해 IGF-1로부터 E-펩티드가 절단되는 것이 상기 전구체 단백질의 변형에 의해 저하된다. E-펩티드는 Ea, Eb, 또는 Ec 펩티드일 수 있다. 전구체의 N-말단에서는, 가능한 R36 (예: R36A) 및 R37 (예: R37A) 처럼, 이러한 전구체 단백질의 아미노산 G1, P2, 또는 E3이 결실되거나 돌연변이될 수 있다.
전구체 단백질에는 추가로, 예를 들어 Ea의 아미노산 93-102를 Eb의 아미노산 N95와 T96 사이에 삽입함으로써 N-연결된 글리코실화 컨센서스(consensus) 서열 NXS/T가 포함될 수 있다. 일반적으로, 전구체 단백질에는 이러한 전구체 단백질의 아미노산 측쇄, 예를 들어 전구체 단백질의 아르기닌 측쇄에 공유 연결된 올리고당이 포함될 수 있다.
또한, 전구체 단백질의 잔기를 비-천연 아미노산 (예: 아세틸렌기 또는 아지도기를 포함하는 아미노산)으로 대체시킬 수 있다. 이러한 비-천연 아미노산은 폴 리(에틸렌 글리콜) 부분을 전구체 단백질의 측쇄에 연결시키는 것을 촉진시킬 수 있긴 하지만, 전형적인 단백질 PEG화(pegylation) 전략이 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
전구체 단백질은 이러한 전구체 단백질의 C-말단과 연결된 하나 이상의 부가의 E-펩티드를 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드는 N-말단에서 C-말단으로, (1) G1, P1, 및 E1이 결실되고, R36 또는 R37 중의 어느 하나 또는 둘 다가 돌연변이되며, R71 및 S72가 결실되고, 마지막 7개 C-말단 아미노산이 결실된 제1 Eb 펩티드를 갖는 IGF-1 전구체 단백질; (2) R71, S72, 및 마지막 7개 C-말단 아미노산이 결실된 제2 Eb 펩티드; (3) R71, S72, 및 마지막 7개 C-말단 아미노산이 결실된 제3 Eb 펩티드; 및 (4) R71 및 S72가 결실된 제4 Eb 펩티드를 포함할 수 있다.
E-펩티드가 IGF-1로부터 절단되지 못하게 하는데 유효한 수단은 R71 또는 S72의 결실 또는 돌연변이이다.
유사하게, 본 발명에는 인간 IGF-2 전구체 단백질이 포함되는데, 프로테아제에 의해 IGF-2로부터 E-펩티드가 절단되는 것이 상기 전구체 단백질의 변형에 의해 저하된다. 특히, R68 또는 D69를 결실 또는 돌연변이시키는 것이 IGF-2 전구체 단백질의 프로테아제 분해를 피하는데 유효한 수단일 수 있다.
또한, IGF-1의 모든 E-펩티드를 IGF-2와 조합할 수 있고, IGF-2의 모든 E-펩티드를 IGF-1과 조합하여 본원에 기재된 이득을 제공할 수 있다.
본 발명에는 추가로, 치료 유효량의 본 발명의 폴리펩티드를 투여함으로써 근골격계 질환, 당뇨병, 신경세포 사멸을 치료하는 방법이 포함된다. 마찬가지로, 본 발명에는 근골격계 질환, 당뇨병, 신경세포 사멸 또는 빈혈 치료용 약제의 제조에 있어서 본 발명의 폴리펩티드의 용도가 포함된다.
또다른 양태에서, 본 발명에는 E-펩티드를 수반하지 않지만 비-천연 아미노산이 PEG화 부위로서 내부에 도입된 PEG화 IGF-1이 포함된다. E-펩티드를 수반하지 않고, 본원에 기재된 바와 같은 비-천연 아미노산을 함유하는 변형된 PEG화 IGF-1이 또한, 본 발명에 포함된다.
본 발명에는 또한, 목적하는 효과를 획득하기 위해 유효량의 본 발명의 폴리펩티드를 투여하는 수의학적 방법 및 용도가 포함된다.
수의학적 용도에는 (i) 동물에서의 성장률 및/또는 성장 정도를 증강시키는 용도; (ii) 사료를 체 조직으로 전환시키는 효율을 증강시키는 용도; (iii) 젖분비 동물에게서의 유즙 생성을 증강시키는 용도; (iv) 악액질(cachexia), 외상 또는 기타 소모성 질환과 연관된 동물 소모 증후군을 치료하는 용도; 및 (v) 신생아 건강 개선을 위해 젖분비 동물을 치료하는 용도가 포함된다.
인용된 모든 참고 문헌 또는 공개 문헌은 본원에 참고로 도입된다.
도 1A-1C는 37℃에서 10％ 인간 혈청의 존재 또는 부재하에서 0 또는 16시간 인큐베이션한 후 본 발명의 폴리펩티드 및 야생형 IGF-1 전구체 폴리펩티드의 웨스턴 블롯(Western blot)이다. 각종 IGF-1 구조물을 코딩하는 발현 벡터를 Cos7 세포 내로 형질감염시키고, 조건화 배양 배지를 수득하였다. "3mut"는 다음 3종의 변형 세트를 갖는 hIGF-1-E-펩티드 전구체를 지칭한다: G1, P2, 및 E3의 결실; Arg 37에서 Ala로의 돌연변이 (R37A); 및 R71 및 S72의 결실. 도 1A는 Ea를 함유하는 야생형 및 3mut 전구체에 대한 웨스턴 블롯 결과 (hIGF-1에 대한 항체를 사용함)를 도시한 것이다. 도 1B는 Eb를 함유하는 야생형 및 3mut 전구체에 대한 웨스턴 블롯 결과 (hIGF-1에 대한 항체를 사용함)를 도시한 것이다. 도 1C는 Ec를 함유하는 야생형 및 3mut 전구체에 대한 웨스턴 블롯 결과 (hIGF-1에 대한 항체를 사용함)를 도시한 것이다.
도 2A-2D는 각종 IGF-1 폴리펩티드 ("리간드)의 생물학적 활성을 도시한 선 그래프이다. 생물학적 활성은 C2C12 근육모세포를 Cos7-발현된 폴리펩티드로 자극함으로써 측정하였다. 이어서, 이와 같이 자극된 C2C12 세포를 대상으로 하여, 총 AKT 및 인산화 AKT의 상대적 양에 관하여 검정하였다. long-R3-IGF-1은 E3R 돌연변이와 부가의 13개 아미노산 N-말단 연장 펩티드를 수반한, 성숙한 인간 IGF-1 아미노산 서열로 이루어진 시판용 시약 (Sigma 제품 번호 I-1271)이다. 도 2A는 IGF-1-Ea3mut의 활성을 도시한 것이다. 도 2B는 IGF-1-Eb3mut의 활성을 도시한 것이다. 도 2C는 Ea 아미노산 93 내지 102를 Eb의 아미노산 95와 96 사이에 삽입한 3mut 구조물인 IGF-1-Eab3mut의 활성을 도시한 것이다. 도 2D는 IGF-1-Ec3mut의 활성을 도시한 것이다.
도 3A-3D 및 4A-4D는 리간드 결합에 반응한 수용체 인산화에 관하여 검정함으로써, 본 발명의 IGF-1 전구체 폴리펩티드가 적당한 수용체에 대한 선택성을 유지하고 있는지를 도시한 선 그래프이다. 도 3A 및 3B는 IGF-1 수용체 (도 3A) 및 인슐린 수용체 (도 3B)에 대항한 IGF-1-Ea3mut의 수용체 선택성을 시험한 것이다. 도 3C 및 3D는 IGF-1 수용체 (도 3C) 및 인슐린 수용체 (도 3D)에 대항한 IGF-1-Eb3mut의 수용체 선택성을 시험한 것이다. 도 4A 및 4B는 IGF-1 수용체 (도 4A) 및 인슐린 수용체 (도 4B)에 대항한 IGF-1-Ec3mut의 수용체 선택성을 시험한 것이다. 도 4C 및 4D는 IGF-1 수용체 (도 4C) 및 인슐린 수용체 (도 4D)에 대항한 IGF-1-Eab3mut의 수용체 선택성을 시험한 것이다. "IGF1-R3"은 상기 언급된 long-R3-IGF-1을 지칭한다. "IGF1Eab"로서 열거된 폴리펩티드는 Ea 아미노산 93 내지 102를 Eb의 아미노산 95와 96 사이에 삽입시킨 구조물을 지칭한다.
도 5는 상이한 리간드에 의한 C2C12 근관의 자극시 (C2C12 근세포의 분화 3 내지 4일에 따른 결과) 상대적 AKT 인산화를 도시한 웨스턴 블롯이다. IGF-1Eb 다량체는 도 6A에 도식적으로 나타낸 구조물을 지칭한다.
도 6A 및 6B는 본 발명의 폴리펩티드 2개를 도식적으로 나타낸 것이다. 도 6A는 다음 4종의 변형 세트를 지닌 IGF-1-Eb 전구체 폴리펩티드를 도시한 것이다: G1, P2, 및 E3의 결실; R37에서 A로의 돌연변이; R71 및 S72의 결실; 및 마지막 7개 C-말단 아미노산의 결실. 또한, 폴리펩티드는 둘 이상의 Eb 펩티드 (단, R71 및 S72를 갖지 않고, 마지막 7개 C-말단 아미노산을 갖지 않음)를 이러한 폴리펩티드의 C-말단에 부가하고, 최종 Eb 펩티드 (단, R71 및 S72를 갖지 않음)를 상기 폴리펩티드의 C-말단에 부가함으로써 연장시킨다. 이 구조물은 종종 IGF-1-Eb 다량체로서 지칭된다. 도 6B는 다음 4종의 변형 세트를 지닌 IGF-1-Eab 전구체 폴리펩티드를 도시한 것이다: G1, P2, 및 E3의 결실; R37에서 A로의 돌연변이; R71 및 S72의 결실; 및 Ea 아미노산 93 내지 102를 Eb의 아미노산 95와 96사이에 삽입함.
도 7A는 인간 IGF-1 (서열 1)과 상응하는 동물 IGF-1과의 서열 정렬이다. 해당 서열에 대해 분석된 모든 동물 종과, 그의 상응하는 유전자은행 승인 번호가 제공된다. G1, P2, E3이 스텔레트(Sterlet) (여기서는, S2가 P2를 대체한다)를 제외한 분석된 모든 종에서 보존된다. R36 및 R37은 분석된 모든 종에서 보존된다.
도 7B는 인간 IGF-1 (서열 1)과 비교한 분석된 아미노산 서열의 계통발생학을 도시한 그래프이다. 트리(tree) 아래는 단백질 서열에 대한 100개 잔기당 "아미노산 치환" 수를 표시하는 눈금이다. 기무라(Kimura) 거리 공식을 사용하여 비-갭 미스매치물 수로부터 유래되고 침묵 치환에 대해 교정된 거리 값을 계산한다. 컴퓨터 처리시킨 값은 부위당 평균 차이 수이고, 이는 제로와 1 사이에 속한다. 제로는 완전한 실체를 나타내고 1은 실체가 없다는 것을 나타낸다. 계통발생학적 트리 눈금은 이들 값에 100을 곱하여 사용한다.
도 8A는 인간 Ea 펩티드 (서열 2)와 각종 동물 Ea 펩티드와의 서열 정렬이다. 해당 서열에 대해 분석된 모든 동물 종과, 그의 상응하는 유전자은행 승인 번호가 제공된다. R71 및 S72가 분석된 모든 종에서 보존된다.
도 8B는 인간 IGF-1 Ea 펩티드 (서열 2)와 비교한 분석된 아미노산 서열의 계통발생학을 도시한 그래프이다.
도 9A는 인간 Eb 펩티드 (서열 3)와 각종 동물 Eb 펩티드와의 서열 정렬이다. 해당 서열에 대해 분석된 모든 동물 종과, 그의 상응하는 유전자은행 승인 번호가 제공된다. R71 및 S72가 분석된 모든 종에서 보존된다.
도 9B는 인간 IGF-1 Eb 펩티드 (서열 3)와 비교한 분석된 아미노산 서열의 계통발생학을 도시한 그래프이다.
도 10A는 인간 Ec 펩티드 (서열 4)와 각종 동물 Ec 펩티드와의 서열 정렬이다. 해당 서열에 대해 분석된 모든 동물 종과, 그의 상응하는 유전자은행 승인 번호가 제공된다. R71 및 S72가 분석된 모든 종에서 보존된다.
도 10B는 인간 IGF-1 Ec 펩티드 (서열 4)와 비교한 분석된 아미노산 서열의 계통발생학을 도시한 그래프이다.
도 11A는 인간 IGF-2 (서열 7)와 상응하는 동물 IGF-2와의 서열 정렬이다. 해당 서열에 대해 분석된 모든 동물 종과, 그의 상응하는 유전자은행 승인 번호가 제공된다. R68이 분석된 모든 종에서 보존되고; D69가 침팬지를 제외하고 (이 위치에 히스티딘이 존재한다) 보존된다.
도 11B는 인간 IGF-2 (서열 7)와 비교한 분석된 아미노산 서열의 계통발생학을 도시한 그래프이다.
도 12A는 인간 IGF-2 E-펩티드 (서열 6)와 각종 동물 IGF-2 E-펩티드와의 서열 정렬이다. 해당 서열에 대해 분석된 모든 동물 종과, 그의 상응하는 유전자은행 승인 번호가 제공된다. R68이 분석된 모든 종에서 보존되고; D69가 침팬지를 제외하고 (이 위치에 히스티딘이 존재한다) 보존된다.
도 12B는 인간 IGF-2 E-펩티드 (서열 6)와 비교한 분석된 아미노산 서열의 계통발생학을 도시한 그래프이다.
본 발명은 활성 IGF-1 또는 IGF-2를 그의 E-펩티드로부터 방출시키는데 책임이 있는 전형적인 프로테아제 절단을 방지, 저하 또는 피하기 위해 변형시킨 E-펩티드를 실질적으로 함유하는 신규한 IGF-1 및 IGF-2 전구체 폴리펩티드에 관한 것이다. 본 발명의 폴리펩티드의 유용성은 이러한 전구체 폴리펩티드가 생물학적으로 활성이고, 안정하며 의약품으로서 유익하다는 놀라운 발견에 기초한 것이다.
활성 IGF 전구체 폴리펩티드에 대한 스크리닝
본 발명의 모든 폴리펩티드의 유용성은 다음 검정을 이용하여 평가할 수 있다.
안정성 본 발명의 폴리펩티드가 유효한 약물이 되기 위해서는, 인간 혈청에서와 같은 내인성 프로테아제의 존재하에서 충분한 안정성을 지녀야 한다. 안정성을 평가하기 위해, 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 발현 벡터를, 10％ 태아 소 혈청, 100 U/ml 페니실린 및 100 ㎍/ml 스트렙토마이신을 함유하는 DMEM 배지에서 Cos7 세포 (ATCC) 내로 형질감염시킬 수 있다. 분비된 폴리펩티드를 함유하는 배양 배지를 적용하여 추가로 분석할 수 있거나, 또는 또다른 방식에서는, 발현 벡터가 상기 폴리펩티드 중의 용이하게 이용 가능한 태그, 예를 들어 헥사-히스티딘 태그를 코딩하여 Cos7 배양물 중의 발현된 폴리펩티드의 효율적인 정제를 촉진시킬 수 있다. 제조된다 할지라도, 폴리펩티드 샘플을 정상 인간 혈청 (공급처: Sigma) 또는 PBS에서 각종 시간 (예: 0, 1, 5, 10, 및 16시간) 동안 인큐베이션하고, 이를 대상으로 하여 폴리아크릴아미드 겔 전기영동시키며, 니트로셀룰로스 상으로 블롯팅하며, 인간 IGF-1 또는 IGF-2에 대항한 일차 항체 및 예를 들어, 서양고추냉이 퍼옥시다제와 접합된 이차 항체를 사용하여 관련 단백질을 가시화하였다. 유사한 수많은 블롯팅 및 탐지 기술 (이들 중 몇몇은 형광성 염료 또는 심지어 방사성 핵종을 이용한다)을 사용할 수 있다. IGF-1 또는 IGF-2 밴드 세기와 비교한 전구체 밴드 세기는 전구체 폴리펩티드가 각종 조건하에 절단되는 정도를 표시해야 한다. 37℃에서 16시간 동안 인간 혈청에 노출시킨 본 발명의 폴리펩티드는 절단되지 않은 전구체 대 절단된 성숙 IGF의 비가 약 1:2 내지 1:0.1, 예를 들어 1:1 내지 1:0.5, 특히 약 1:1 또는 약 1:0.5의 비를 나타낼 수 있다. 전형적으로, 전구체는 적어도 1:1의 비를 나타내야 한다.
AKT 인산화 본 발명의 폴리펩티드는 IGF-1 수용체를 통하여 신호를 보낼 수 있는 능력을 유지해야 한다. (IGF-1과 IGF-2 둘 다가 IGF-1 수용체를 통하여 신호를 보낸다). 이러한 신호 전달 능력을 결정하기 위해, 하류 세포내 표적 AKT가 세포 표면에서 리간드 결합에 반응하여 인산화되는 지를 평가할 수 있다. AKT 인산화를 분석하기 위해, C2C12 근육모세포를 혈청 무함유 배지에서 고갈시킨 다음, 상이한 리간드로 자극한다. 세포를 용해시키고 원심분리시켜 청정하게 하였다. AKT 인산화 및 총 AKT 수준은 패트스캔(PathScan) 포스포 AKT (Ser473) 샌드위치 ELISA 키트 및 패트스캔 AKT 샌드위치 ELISA 키트 (공급처: Cell Signaling)를 각각 사용하여 ELISA함으로써 분석한다.
IGF-1 수용체 특이성 본 발명의 폴리펩티드는 바람직하게, IGF-1 수용체에 대한 특이성을 보유하고 있고 관련 인슐린 수용체와 저 친화도로 결합해야 한다. 수용체 특이성을 평가하기 위해, 폴리펩티드 샘플을, IGF-1 수용체 또는 인슐린 수용체를 과발현하는 혈청-고갈된 NIH3T3 세포에 가하고; 세포를 용해시킨 다음, 이 용해물을 대상으로 하여 두오세트(DuoSet) IC 인간 포스포-IGF-1 수용체 및 인슐린 수용체 ELISA 키트 (공급처: R&D Systems)를 사용하여 ELISA함으로써, IGF-1 수용체 인산화 또는 인슐린 수용체 인산화 수준을 결정한다.
비대증 마우스 모델에서의 생체내 시험
본 발명의 폴리펩티드가 이미 근 비대증을 유발시킨 상황하에 골격근 질량을 증가시키는 작용을 할 수 있는지를 결정하기 위해, 처치한 동물과 처치하지 않은 동물을 대상으로 하여 운동을 시킨 다음, 본 발명의 폴리펩티드를 투여한 동물에게서 이와 같이 처치하지 않은 동물에게서 보다 더 큰 근육이 발생하였는 지를 결정할 수 있다.
운동 모델:
당해 분야에 공지된 한 가지 모델은 사용자-가변적 하중을 지닌 자발적 러닝 휠(running wheel)을 사용하는 것에 기초한다 [참고: 예를 들어, Konhilas et al., Am J Physiol Heart Circ Physiol 289:H455-H465, 2005]. 자발적 케이지 휠에서는 강압적으로 운동시킨 모델에서 흔한 신체적 및 정신적 상해가 없으므로, 근육 질량 증가를 목적으로 하는 비교적 건강한 개체에게 사용되는 후보 약물을 평가하는데 보다 적당하다.
적합한 모든 마우스 균주를 사용할 수 있다. 예를 들어, 수컷 C57B1/6J 마우스를 무작위로 실험군 (예를 들어, IGF 전구체 폴리펩티드를 투여함)과 대조군으로 할당할 수 있다. 운동 휠을 수반한 케이지에서 동물을 개별적으로 사육하고; 앉아 있는 대조군 동물은 휠을 수반하지 않은 동일한 케이지에서 사육한다. 이 운동 휠은 다음 문헌에 기재되어 있다 [참고: Allen et al., J Appl Physiol 90:1900-1908, 2001]. 간략하게 언급하면, 시스템은 휠 회전에 의해 작동되는 디지털 자기 계수기 (모델 BC 600, 공급처: Sigma Sport, Olney, IL)가 장착된 5.0 cm-폭 러닝 표면을 갖는 11.5 cm-직경 휠로 이루어진다 (모델 6208, 공급처: Petsmart, Phoenix, AZ). 또한, 하중을 조정할 수 있는 저항 기전으로 각 휠을 공학 처리한다. 이는 스텐레스 스틸 피싱 라인을 케이지 상부에 부착시키고, 휠 하중에 일조하지 않도록 회전 축에서 케이지 휠에 대해 안전하게 한 고정된 도르래(immovable pulley) 주변을 와이어로 감아줌으로써 이루어진다. 이 와이어는 스프링과 나사를 이용하여 케이지 상부를 다시 한번 안전하게 한다. 이러한 설계로 인해, 휠 하중을 정밀하게 조정할 수 있어, 휠 하중이 휠 회전 전반에 걸쳐 골고루 분포된다. 시간과 거리 시행에 대한 매일 운동 값을 운동 기간 내내 운동시킨 각 동물에 대해 기록한다. 모든 동물에게 물과 표준 설치류 경질 음식을 임의로 공급한다. 자발적 러닝 (케이지 휠 노출)은 모든 군에 대해 평균 약 12주생에서 시작할 수 있다. 각 군은 실험군에 따라서 저항을 다양하게 하여 50일 동안 지속적으로 러닝시키는데, 동물 연령이 약 19주가 될 때까지 한다. 휠 상의 하중은 휠이 약간 전위될 때까지 휠 상에 공지된 중량을 꾸준히 매달아둠으로써 결정한다. 처음 1주 동안은 케이지 휠 상에 하중을 전혀 가하지 않고 모든 운동 군이 시작한다. 그러나, "하중을 전혀 가하지 않는" 조건은 실제로 2 g인데, 이는 휠 인테리어와 마찰 하중을 유지하는데 필요한 하중으로서 결정된다. 1주 간의 휠의 새환경 순응 기간을 고려하여, 1주 간격으로 휠 하중을 변화시킬 수 있는데, 단 하중이 보다 클 경우에는 2주 후에 변화시킬 수 있다. 하중 범위는 2 g 내지 12 g 이하의 어느 범위일 수도 있다. 운동시킨 동물과 앉아 있는 대조 동물은 구체적 운동 기간이 끝난 직후에 마취제를 흡입시켜 경추 탈구시킴으로써 안락사시킨다. 체중을 측정하고, 특이적 근육을 신속하게 절개하며, 세척한 다음, 후일 조직학적 또는 생화학적 검정을 위해 동결시킨다.
또다른 운동 비대증 모델이 또한 당업자에게 이용 가능하다. 예를 들어, 트레드밀(treadmill) 운동 모델은 문헌 [참고: Lerman et al., J Appl Physiol 92:2245-2255, 2002]에 기재되어 있다.
클렌부테롤 주사 모델:
클렌부테롤은 확인된 근육 질량 증가를 유발시켜 주는 성장-증진 특성을 지닌 β2-아드레날린 작동성 작동제이다. 정확한 클렌부테롤 작용 기전은 여전히 명확치 않지만, 근육 단백질 분해 상의 감소가 제안된 바 있다. 임상에서는, 클렌부테롤이 항천식 약물로서 사용되고 있지만, 이는 인간과 쇼(show) 동물 둘 다에서 근육 질량을 증가시키기 위한 신체-구성 작용제로서 대개 오용되는 것으로 여겨진다.
5마리 마우스에게 3, 7 또는 14일 동안 클렌부테롤을 매일 주사하여 (3 mg/kg, 피하(s.c.)) 근 비대증을 유발시킨다. PBS를 주사한 마우스가 음성 대조군으로서 제공된다. 동물을 대상으로 하여, 상기 처치에 대한 모든 부작용 (즉, 텁수룩한 외피, 무기력함)을 알아보기 위해 매일 모닝터링한다 (가시적 검사). 클렌부테롤 처치는 마우스가 보다 두려움을 느끼게 하거나 보다 공격적이게 만드는 잠재력을 지니고 있으므로, 마우스를 무리지어 사육하는 경우에 싸움을 일으키는 것에 관하여 특히 모니터링해야 한다. 마우스는 움직일 수 있고, 정상적으로 먹고 마실 수 있다. 마우스를 3, 7 및 14일 째에 안락사시킬 때까지 매일 모니터링하고, 추가 분석을 위해 조직을 수집한다.
근 위축증 모델에서의 생체내 시험 각종 골격근 위축증 모델에서, 본 발명의 IGF 전구체 폴리펩티드를 대상으로 하여, 일반적으로 근육 질량을 감소시키는 조건하에 근육 질량을 유지시킬 수 있는 능력에 관하여 알아보기 위해 시험할 수 있다. 다음에 기재된 실시예 모델을 이용하여, 당업자는 IGF 전구체 폴리펩티드가 근육 질량을 증가시킬 수 있는지를 결정하기 위해 이러한 전구체 폴리펩티드를 투여 및 사용하는 것을 포함하는 제어 실험을 용이하게 설계 및 이행할 수 있다.
예를 들어, C57B16/2 수컷 마우스는 공급처 (The Jackson Laboratories)로부터 구입한다. 마우스는 각 실험을 시작할 무렵에 약 9주생인 것으로 구입한다. 일반적으로, 마우스는 정상 설치류 식사가 제공되는 미소절연체 케이지에서 사육한다. 각 실험을 시작할 무렵에 마우스를 칭량한다. 각 실험이 끝날 무렵, 일반적으로 마우스에게 CO2를 흡입시킨 다음, 경추 탈구시킴으로써 안락사시키고 추가의 가공 처리를 위해 근육 조직을 수거하였다. 마우스를 칭량하여 "최종 체중"을 제공한다. 수거할 수 있는 골격근은 전방 경골근(tibialis anterior m), 장지 신근(extensor digitorum longus m), 가자미근(soleus m), 및 장딴지근(gastrocnemius m)이다. 종종 수거되는 기타 조직은 심장, 간, 비장, 신장, 고환 및 뇌이다. 모든 근육과 조직은 완전히 해부하고 0.0001 g까지 측정할 수 있는 저울에서 칭량한다. 그 다음, 나중의 RNA 및 단백질 추출을 위해 조직을 액체 질소에서 스냅-동결시키거나, 또는 조직을 코크 디스크 상의 OCT에 스냅-동결 포매시킨다. 나중의 냉동절편법을 위해 코크 디스크 상에서 동결시킨 근육은 액체 질소에 의해 두꺼운 슬러쉬가 되도록 냉각시킨 이소펜탄에 담근다. 모든 샘플을 -80℃에서 저장한다.
덱사메타손(dexamethasone) 처치:
마우스에서 근육 쇠약을 유도시키는 약리학적 방법은 덱사메타손을 20 mg/kg으로 매일 복강내 주사하는 것이다. 덱사메타손은 글루코코르티코이드 부류 호르몬의 합성 구성원이다. 이는 소염제와 면역억제제로서 작용하고, 그 효력이 히드로코르티손의 약 40배이다. 덱사메타손은 많은 염증 질환과 자가면역 질환, 예를 들어 류마티스성 관절염을 치료하기 위해 사용된다. 이는 화학요법을 진행하고 있는 암 환자에게도 제공되는데, 이는 그들의 특정의 항종양 치료 부작용을 방해한다. 덱사메타손은 마우스와 인간 환자 둘 다에게서 근 위축증을 유발시킨다.
마우스에게 덱사메타손을 3, 7 또는 14일 동안 복강내 주사한다. 마지막 날에는 CO2를 사용하여 대상체를 안락사시키고 다리 근육을 수거한다. 이러한 처치에 대한 모든 부작용 (즉, 텁수룩한 외피, 무기력함)을 알아보기 위해 상기 동물을 매일 모닝터링한다 (가시적 검사). 마우스는 통상적으로 움직일 수 있고, 정상적으로 먹고 마실 수 있다. PBS를 주사한 마우스는 음성 대조군이다.
캐스트 고정(Cast Immobilization):
각종 근육군을 신체적으로 사용하지 않게 되면 이들 근육의 위축증이 발생한다. 발목 관절 고정 ("핀 뒤꿈치" 또는 캐스팅)은 래트 및 마우스 뒷다리 근육계의 신체적 고정을 유도시키는데 고도로 유용하고 재현 가능한 방식인 것으로 입증되었다.
마우스를 고정시키기 위해 이소플루오란으로 마취시킨다. 발목과 손목 관절은 이러한 관절 주변에 경량 캐스팅 재료 (VET-LITE)를 이용하여 90°로 고정시킨다. 이 재료를 온수에 침지시킨 다음, 다리 주변을 감싸면, 발가락과 엉덩이 관절은 자유롭게 된다. 이 관절은 캐스팅 재료가 건조해질 때까지 90°위치로 유지시킨다. 반대측 다리가 대조군으로서 제공된다. 그 다음, 마우스가 마취에서 회복되게 하고, 정상적인 미소절연체 케이지에서 사육한다. 캐스팅이 과도한 스트레스를 유발시키는 것으로 관찰되지 않았고, 동물은 음식물을 먹고 마시기 위해 케이지 주변을 자유롭게 움직인다. 그러나, 체중, 활동성 및 자극에 영향을 미치는 모든 불리한 사건을 알아보기 위해 마우스를 매일 모니터링한다.
일단 캐스트가 마우스에 적용되면, 츄잉(chewing)이 일어날 수 있기 때문에 이러한 캐스트가 원 위치에 여전히 존재하는지를 확신하기 위해 동물을 매일 모니터링한다. 동물은 마취에서 깨어난 후에 움직이고, 마시고 음식물을 먹을 수 있으며, 이들에게 특수 침상, 캐이징 또는 기타 원조가 필요치 않다.
신경 제거(Denervation):
일반적으로, 마우스의 신경을 제거하기 위해 이를 이소플루오란 기체로 마취시킨다. 무균 외과 수술을 이용하여 (최종 에탄올 세척을 수반하여 베타딘으로 3회 세척함), 우측 궁둥 신경을 허벅지 중앙에서 분리시키고, 2 내지 5 mm 조각을 절단 제거하였다. 반대측 다리가 대조군으로서 제공된다.
보다 구체적으로 언급하면, 피부 절개를 봉합사 클립으로 밀봉시키고, 동물에게 단일 용량의 부프레노르핀을 주사한 후, 마취로부터 회복되게 하였다. 수술한지 3, 7 또는 14일 후, 동물에게 CO2를 흡입시킨 다음, 경추 탈구시킴으로써 안락사시키고, 조직학적 및 생화학적 분석을 위해 근육 (복합 장딴지근, 전방 경골근, 장지 신근, 가자미근)을 제거하였다.
궁둥 신경을 횡절단한 경우에는, 이에 영향을 받은 다리는 움직일 수 없게 되어 이와 연관된 근육의 골격근 위축증이 유도된다. 그 밖의 다른 동물은 마취에서 회복한 후에 움직이고, 마시며 음식물을 먹을 수 있고, 특수 침상, 케이지 또는 기타 원조가 필요치 않다. 그럼에도 불구하고, 수술 직후와 회복 기간 내내 (1 내지 2시간) 동물을 모니터링한다. 또한, 수술 후 3일 동안 절개 부위와 동물의 일반적 건강 상태를 모니터링한다. 수술 후 7 내지 10일째에 봉합사 클립을 제거한다.
유전적 모델:
유전적으로 조작된 트랜스제닉 마우스를 근 위축증 모델로서 사용할 수도 있다. 예를 들어, 소위 미니(Mini) 마우스 (공급처: The Jackson Laboratory, Stock No. 003258)는 IGF-1 유전자 내에 녹아웃(knock out) 돌연변이를 함유하는데, 이로써 생후 성장이 비정상적으로 감소될 뿐만 아니라 체중과 크기가 작아진다. 부가의 정보에 관해서는, 다음 문헌을 참고할 수 있다 [참고: Powell-Braxton et al., Genes Dev 7:2609-2617, 1993]. 또한, 소위 미디(Midi) 마우스 (공급처: The Jackson Laboratory, Stock No. 003259)는 IGF-1 유전자 내에 상이한 돌연변이를 함유하는데, 이로써 낮은 성체 체중과 기타 심혈관성 표현형을 나타내는 왜소 체형으로 된다. 부가의 정보에 관해서는, 다음 문헌을 참고할 수 있다 [참고: Lembo et al., J Clin Invest 98:2648-2655, 1996].
IGF 전구체 중에서의 결정적 및 임의의 돌연변이 또는 변형
결정적 돌연변이 본 발명은 부분적으로, 실질직으로 그의 E-펩티드를 함유하는 IGF 전구체 폴리펩티드가 혈청의 존재하에서도 여전히 생활성이고 안정적이란 관찰 결과에 기초한다. E-펩티드가 이염기성 프로테아제 부위를 표적으로 하는 내인성 프로테아제에 의해 절단되지 않는다는 것을 보장하기 위해, 일반적으로 전구체 중의 E-펩티드의 2개의 N-말단 이염기성 아미노산 중의 어느 하나를 결실, 돌연변이, 또는 은폐시킨다. hIGF-1의 경우에는, 이들 2개의 아미노산이 R71 및 S72인 반면, hIGF-2의 경우에는, 이들 첫 번째 2개 아미노산이 R68 및 D69이다.
각종 변형으로 이러한 절단을 방지시킬 수 있다:
(1) 하나 또는 둘 다의 이염기성 잔기를 결실시킨다.
(2) 하나 또는 둘 다의 이염기성 잔기를 비-염기성 아미노산 (예: 알라닌)이 되도록 돌연변이시킨다.
(3) 하나 이상의 비-염기성 아미노산을 상기 이염기성 잔기 사이에 삽입시킨다.
(4) 글리코실화 부위를 프로테아제 부위를 은폐시키기에 충분한 이염기성 잔기 근처에 놓아둔다.
(5) 어느 하나의 이염기성 잔기를 다음에 기재되는 바와 같은 비-천연 아미노산으로 대체시키거나, 상기 이염기성 잔기 사이에 또는 근처에 삽입하는 것을 이용하여 부위-지시된 PEG화를 수행한다.
또한, 잔기 K68 및 K65는 IGF-1/E-펩티드 절단에 일정 역할을 하는 것으로 여겨지므로, 이들 잔기의 돌연변이 또는 결실을 상기 언급된 바와 같은 이염기성 아미노산에 대해 유도된 모든 택틱(tactic) 내로 혼입시킬 수 있다.
성숙 IGF 의 N-말단에서의 돌연변이 본 발명의 특정 양태에서는, IGF 전구체 폴리펩티드가 처음 수 개의 N-말단 아미노산의 결실이나 돌연변이를 수반한다. IGF-1의 경우, 처음 3개의 N-말단 아미노산이 결실되거나 돌연변이될 수 있는 반면, IGF-2의 경우에는 처음 6개의 N-말단 아미노산이 결실되거나 돌연변이될 수 있다. 특정의 N-말단 아미노산이 생체 내에서 자연적으로 절단되고, 이들 돌연변이 또는 결실을 도입하면 본 발명의 폴리펩티드와 IGF 결합 단백질 (IGFBP)과의 생체내 연합이 최소화되는 것으로 관찰되었다. IGF-1 및 IGF-2와 IGF-1 수용체 간의 상호 작용은 IGFBP에 의해 조절된다. 6개 모든 IGFBP가 IGF 작용을 억제하는 것으로 밝혀졌지만 (특히, IGFBP5), 몇몇 경우에는 자극 효과가 관찰되었다. 순환되는 IGF의 99％ 이상이 정상적으로 IGFBP와 결합된다. 신생기 이후 순환되는 가장 풍부한 IGFBP는 IGFBP3인데, 이는 IGF-1 및 IGF-2 둘 다와 유사한 친화도로 결합할 수 있다. 천연 발생적 절단된 IGF-1 (G1, P2, 및 E3의 결실을 보유함)은 천연 IGF-1 보다는 몇 배 더 낮은 친화도로 IGFBP3과 결합한다. 또한, G3은 IGFBP 결합에 있어 중요하고, G6은 IGF-2 펩티드에서 유사한 역할을 한다.
따라서, hIGF-1 전구체의 경우, G1, P2, 또는 E3 중의 어느 것도 단독으로 또는 조합하여 결실되거나 돌연변이될 수 있다. 돌연변이가 요망되는 경우에는, 알라닌으로의 돌연변이를 도입할 수 있다. 또다른 예에서, hIGF-2 전구체의 경우에는 P4, S5, 및 E6 중의 어느 것도 단독으로 또는 조합하여 결실되거나 돌연변이될 수 있다. 돌연변이가 요망되는 경우에는, 알라닌으로의 돌연변이를 도입할 수 있다.
잔기 36 및 37에서의 돌연변이 IGF-1은 인간 혈청에 존재하는 세린 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. R36 또는 R37 중의 어느 하나가 A로 돌연변이되면, R36과 R37 사이의 예정된 절단 부위에서의 IGF-1의 절단을 방지할 수 있다. hIGF-2의 경우에는, R38을 돌연변이 또는 결실시켜 이러한 유해한 절단을 방지시킬 수 있다.
글리코실화 이용 본 발명의 폴리펩티드의 생체내 반감기는 N-연결된 글리코실화를 수행할 수 있는 포유류 또는 기타 진핵 세포에서 발현된 경우에, N-연결된 글리코실화 부위를 전구체의 E-펩티드 부분 또는 IGF 내로 부가함으로써 개선시킬 수 있다. 인간 IGF-1 Ea는 N92 및 NlOO에서 글리코실화되는 것으로 시험관 내에서 밝혀졌는데, 이는 이들 Ea 부분이 N-X-S/T의 컨센서스 N-연결된 글리코실화 서열 (여기서, X는 모든 아미노산일 수 있고, 삼중선의 제3 아미노산은 S 또는 T이다)에 적합하기 때문이다. 컨센서스의 인접한 아미노산 상황이, 아스파라긴을 글리코실화시키는 것에 대해 얼마나 강력하게 영향을 미칠지도 역시 공지되어 있다. 따라서, 글리코실화 부위를 Eb 또는 Ec 내로 도입하기 위한 한 가지 전략은 컨센서스 서열 주변의 Ea 아미노산을 Eb 또는 Ec의 대략 동일한 부분 내로 삽입하는 것이다. 이러한 전략의 특별한 이행이 다음 실시예에 예시되어 있다. 어느 경우에서도, 당업자에게 공지된 기타 모든 컨센서스 N-연결된 글리코실화 부위 (주변 상황 아미노산 포함)를 본 발명의 전구체 폴리펩티드 내로 삽입할 수 있다. 또한, 본 발명의 폴리펩티드의 O-연결된 글리코실화는 이러한 폴리펩티드를 생성시키기 위해 사용된 특별한 숙주를 선택함으로써 달성할 수 있다. 예를 들어, IGF-1 발현을 위한 특정한 효모 균주를 사용하면, 올리고당이 세린 또는 트레오닌 상에 부가된다 [참고: 미국 특허 제5,273,966호].
폴리(에틸렌 글리콜)의 부가 폴리(에틸렌 글리콜)과의 접합 (PEG; PEG화)은 치료적 단백질 약물의 반감기를 연장시키는데 유리한 것으로 입증되었다. 본 발명의 IGF 전구체 폴리펩티드를 PEG화시키면 유사한 제약 이점이 생길 수 있는 것으로 예상된다. IGF-1을 PEG화시키는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허공개공보 제2006/0154865호에는 리신-모노PEG화 IGF-1의 유리한 특성이 기재되어 있다. 이러한 리신-모노PEG화는 본 발명의 전구체 IGF 폴리펩티드에 맞도록 적응시킬 수 있다. 또한, PEG화는 비천연 아미노산을 도입함으로써 본 발명의 폴리펩티드의 어느 부분에서도 달성할 수 있다. 특정의 비천연 아미노산은 다음 문헌에 기재된 기술에 의해 도입할 수 있다 [참고: Deiters et al., J Am Chem Soc 125:11782-11783, 2003; Wang and Schultz, Science 301:964-967, 2003; Wang et al., Science 292:498-500, 2001; Zhang et al., Science 303:371-373, 2004 또는 미국 특허 제7,083,970호]. 간략하게 언급하면, 이들 발현 시스템 중의 몇몇은 논센스 코돈, 예를 들어 앰버(amber) TAG를 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 오픈 리딩 프레임 내로 도입하기 위한 부위-지시된 돌연변이 유발을 포함한다. 이어서, 이러한 발현 시스템을 숙주 내로 도입하여, 도입된 논센스 코돈에 대해 특이적인 tRNA를 활용할 수 있고, 선택되는 비천연 아미노산을 충전시킨다. 부분들을 본 발명의 폴리펩티드와 접합시킬 목적으로 유리한 특별한 비천연 아미노산에는 아세틸렌 및 아지도 측쇄를 지닌 아미노산이 포함된다. 이어서, 이들 신규한 아미노산을 함유하는 IGF 전구체 폴리펩티드를 단백질 내의 상기 선택된 부위에서 PEG화할 수 있다. 또한, E-펩티드를 수반하지 않는 상기 PEG화된 IGF 분자가 또한 치료제로서 유용하다.
E-펩티드의 다량체 특정의 약리학적 상황하에서는, 특정 펩티드 또는 단백질 약물이 혈액-뇌 장벽의 한쪽 측면 또는 기타 측면 상에 여전히 존재한다는 것을 보장하기 위해 이러한 펩티드 또는 단백질 약물의 크기를 증가시키는 것이 유리하다. 성숙 IGF 분자는 비교적 저분자 펩티드이기 때문에, E-펩티드가 부착되어 있다 할지라도, 본 발명의 폴리펩티드의 크기를 증가시키는 것이 유리할 수 있다. 이러한 하는데 있어서의 한 가지 수단은 다음에 기재된 특정 실시예에 예시된 바와 같이, IGF 전구체 폴리펩티드의 C-말단에 E-펩티드의 다량체를 제공하는 것이다.
E-펩티드의 C-말단 결실 Eb의 위치 81에서의 자유 시스테인은 동종-이량체화(homodimerization)를 유발시킬 수 있거나 또는 기타 효과를 가져다 줄 수 있는 것으로 추정되는데, 이러한 효과는 본 발명의 폴리펩티드에 존재하는 경우에 보다 낮은 활성 약물을 유발시킬 수도 있다. 따라서, Eb 내의 C81의 결실 또는 돌연변이는 약물 활성을 최적화시킬 수 있다. 특별한 예에서는, Eb의 마지막 7개 아미노산 (즉, 아미노산 81-87)을 결실시키는 것이 유리하다.
기타 돌연변이 또는 변형 본 발명의 IGF 전구체 폴리펩티드 내로 혼입될 수 있는 IGF의 부가의 돌연변이 또는 변형이 미국 특허 제5,077,276호; 및 미국 특허공개공보 제2005/0287151호, 제2006/0211606호 및 제2006/0166328호에 기재되어 있다.
본 발명은 인간 IGF-1 및 IGF-2 이외에도, 실질적으로 그의 E-펩티드를 함유하는 (이러한 E-펩티드의 정상적인 절단은 본발명의 변형에 따라서 회피되거나 저하된다) 모든 공지된 및 공지되지 않은 비-인간 동물 전구체 IGF-1 또는 IGF-2 서열을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
사용될 IGF의 바람직한 유형은 치료받고자 하는 대상체의 종에 좌우된다.
예를 들어, 암소를 치료하고자 하는 경우에는 IGF가 종-매칭되는 것이 바람직하고, IGF의 바람직한 유형은 소의 IGF이다.
모든 형태의 IGF가 고 서열 상동성으로 인해 상이한 대상체에서 효과를 지니는 것으로 예상되긴 하지만, 종 매칭은 상이한 종으로부터의 IGF에 대한 면역 반응 유도로부터 유래되는 불리한 잠재적 면역학적 합병증을 피할 것이다.
본 발명의 한 양태에서는, 변형된 비-인간 동물 전구체 IGF-1 서열이 제공된다.
실질적으로 그의 E-펩티드를 함유하는 전구체 IGF-1 서열이 바람직한데, 이러한 E-펩티드의 정상적 절단은 척추동물로부터 본 발명의 변형에 따라서 회피되거나 저하된다.
예를 들어, 이러한 서열에는 마우스, 래트, 암소, 돼지, 말, 양, 염소, 조류, 개, 고양이, 어류 등으로부터의 서열이 포함되지만, 이에 제한되지 않고, 이들은 천연이든, 합성이든 아니면 재조합이든지 간에 모든 공급원으로부터 유래된다.
본 발명의 또다른 양태에서는, 변형된 비-인간 동물 전구체 IGF-2 서열이 제공된다.
실질적으로 그의 E-펩티드를 함유하는 전구체 IGF-2 서열이 바람직한데, 이러한 E-펩티드의 정상적 절단은 척추동물로부터 본 발명의 변형에 따라서 회피되거나 저하된다.
예를 들어, 이러한 서열에는 마우스, 래트, 암소, 돼지, 말, 양, 염소, 조류, 개, 고양이, 어류 등으로부터의 서열이 포함되지만, 이에 제한되지 않고, 이들은 천연이든, 합성이든 아니면 재조합이든지 간에 모든 공급원으로부터 유래된다.
IGF 전구체 폴리펩티드의 치료적 용도
적응증 본 발명에는 또한, 근골격계 질환을 치료 또는 예방하기 위한 약제를 제조하는데 있어서 본 발명의 IGF 전구체 폴리펩티드의 용도가 포함된다. 또한, 본 발명에는 개체가 근골격계 질환을 갖고 있든지 아니면 이러한 질환에 걸릴 위험이 있든지 간에, 이러한 개체에게서 근육 또는 뼈 질량을 증가시키기 위한 IGF 전구체 폴리펩티드의 용도가 포함된다.
특히, 근골격계 질환은 근 위축증일 수 있다. 근 위축증의 원인으로는 여러 가지가 있는데, 이에는 글루코코르티코이드, 예를 들어 코르티솔, 덱사메타손, 베타메타손, 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 또는 프레드니솔론을 이용한 치료에 따른 결과가 포함된다. 근 위축증은 또한, 신경 외상으로 인한 신경 제거의 결과일 수 있거나, 또는 변성, 대사성 또는 염증성 신경병증 [예: 길랑-바레(Guillian-Barre) 증후군, 말초 신경병증, 또는 환경상 독소 또는 약물에 대한 노출]의 결과일 수 있다. 또한, 근 위축증은 성인 운동 신경세포 질환, 영아 척수 근 위축증, 유년성 척수 근 위축증, 다병소 전도 차단을 수반한 자가면역 운동 신경병증, 뇌졸증 또는 척수 손상으로 인한 마비; 외상, 장기 침상, 자발적 비활동, 비자발적 비활동, 대사성 스트레스 또는 영양 결핍으로 인한 골격 고정; 암, AIDS, 단식, 횡문근육종, 갑상선 장애, 당뇨병, 양성 선천성 긴장 저하, 중심 핵병(central core disease), 네말렌(nemalene) 근육병증, 근 세관성 (중심핵성) 근육병증, 화상 손상, 만성 폐쇄성 폐 질환, 간 질환, 패혈증, 신부전증, 울혈성 심장 마비 또는 노화의 결과일 수 있다.
근골격계 질환은 또한, 근육 퇴행위축 증후군, 예를 들어 뒤시엔느(Duchenne), 벡터(Becker), 근육 긴장성, 안면 견갑 상완(fascioscapulohumeral), 에머리-데이푸스(Emery-Deifuss), 안구 인두, 견갑 상완골, 지대(limb girdle), 선천성 근육 퇴행위축증 또는 유전성 원위성 근육병증일 수 있다. 근골격계 질환은 또한, 골다공증, 뼈 골절, 단신(short stature) 또는 왜소증일 수 있다.
IGF-1은 인슐린-민감성 당뇨병에 대한 치료제로서 제안되는데, 이는 IGF-1이 IGF-1 수용체와 인슐린 수용체의 이종-이량체와 결합할 수도 있기 때문이다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 당뇨병을 치료하기 위해 사용할 수 있다.
IGF-1은 향신경성이고 신경세포의 생존을 증가시켜 준다. IGF-1은 근위축성 측상 경화증 (ALS), 뇌 위축증, 노화 및 치매에서 관찰되는 바와 같은 운동-신경세포 사멸 경우를 치료하기 위해 사용할 수 있는 것으로 제안되었다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 신경세포 사멸과 연관된 질환, 예를 들어 ALS, 뇌 위축증 또는 치매를 치료하기 위해 사용할 수 있다.
IGF-1은 백혈구 집단과 적혈구 집단 둘 다를 증가시키고, 에리트로포이에틴을 투여하는 부가 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 빈혈을 치료하기 위해 사용할 수 있다.
IGF-1 및 IGF-2는 세포 분할 및 척추동물 성장을 위한 편재성이면서도 필수적인 조절인자이기 때문에, 이들은 동물에게서 성장을 외적으로 증강 또는 유지시키기 위한 각종 수의학 방법에 유리하게 사용될 수 있다. 몇몇 예에는 다음이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다:
(i) 동물에게서 성장 속도 및/또는 정도를 증강시키는데, 예를 들어 돼지, 가축, 가금류 및 어류에서 근육 성장을 증강시키고;
(ii) 예를 들어, 돼지, 가축, 양, 가금류 및 어류에서 사료를 체 조직으로 전환시키는 효율 (야윔 대 비만 비율)을 증강시키며;
(iii) 젖분비 동물, 예를 들어 젖소, 양, 염소에게서 유즙 생성을 증강시킨다.
기타 수의학적 치료 적용에는 다음이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다:
(iv) 예를 들어, 애완용 동물, 예를 들면 개, 고양이 및 말에게서 악액질, 외상 또는 기타 소모병과 연관된 동물 쇠약 증상을 치료하고;
(v) 신생아 건강을 개선시키기 위해 젖분비 동물을 치료하는데, 예를 들어 신생아 행동을 개선시키기 위해 젖분비 암퇘지를 치료한다.
투여 방법 본 발명의 폴리펩티드는 유전자 전달 장치의 사용을 포함한 각종 방식으로 전달할 수 있다. 단백질 또는 핵산과 같은 작용제를 치료적 전달하기 위해 당해 분야에 공지된 방법은, 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 함유하는 재조합 세포를 제공함으로써 본 발명의 폴리펩티드를 치료적 전달하는데 사용할 수 있고, 이러한 방법으로는 예를 들어, 세포성 형질감염, 유전자 요법, 전달 장치 또는 제약상 허용 가능한 담체를 이용한 직접적인 투여, 또는 간접적 전달이 있다.
각종 전달 시스템이 공지되어 있고, 이를 사용하여 본 발명의 폴리펩티드를 투여할 수 있는데, 이러한 전달 시스템으로는 예를 들어, 리포솜 내에서의 피막화, 미립자, 미소캡슐, 해당 단백질을 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개된 세포내 이입 [참고: 예를 들어, Wu and Wu, J Biol Chem 262:4429-4432, 1987]; 레트로바이러스성, 아데노 관련 바이러스성, 아데노바이러스성, 폭스 바이러스성 (예: 아비폭스 바이러스성, 특히 조류폭스 바이러스성) 또는 기타 벡터의 일부로서의 핵산 구축 등이 있다. 도입 방법은 경장적 또는 비경구일 수 있고, 이에는 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 폐, 비내, 안내, 경막 및 경구 경로가 포함되지만, 그에 제한되지 않는다. 본 발명의 폴리펩티드는 편리한 모든 경로에 의해, 예를 들어 주입 또는 거환 주사에 의해, 상피 또는 피부점막 내층 (예: 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여할 수 있고, 기타 생물학적 활성제와 함께 투여할 수 있다. 투여는 전신성이거나 국소적일 수 있다. 또한, 본 발명의 제약 조성물을 적합한 모든 경로, 예를 들어 심실내 및 포막내 주사에 의해 중추 신경계 내로 도입하는 것이 요망될 수 있는데; 심실내 주사는, 예를 들어 저장기 [예; 옴마야(Ommaya) 저장기]에 부착된 심실내 카테터에 의해 촉진시킬 수 있다. 폐 투여는, 예를 들어 흡입기 또는 분무기를 사용하고, 에어로솔화제와 제형화함으로써 이용할 수도 있다.
구체적 양태에서는, 본 발명의 제약 조성물을 치료가 필요한 부위에 국소적으로 투여하는 것이 요망될 수 있는데; 이는, 예를 들어 수술 동안 국소 주입하거나, 예를 들어 주사하거나, 카테터를 통하거나 또는 이식재를 통하여 국부 적용함으로써 달성될 수 있는데, 이러한 이식재는 막, 예를 들어 시알라스틱(sialastic) 막, 섬유 또는 상업용 피부 대체물을 포함한, 다공성, 비다공성 또는 젤라틴성 물질이다.
또다른 양태에서는, 활성제를 소포, 특히 리포솜 중에서 전달할 수 있다 [참고: Langer, Science 249:1527-1533, 1990]. 또다른 양태에서는, 활성제를 제어 방출 시스템으로 전달할 수 있다. 한 양태에서는, 펌프를 사용할 수 있다. 또다른 양태에서는, 중합체성 물질을 사용할 수 있다 [참고: Howard et al., J Neurosurg 71: 105, 1989]. 본 발명의 활성제가 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산인 또다른 양태에서는, 이러한 핵산을 적당한 핵산 발현 벡터의 일부로서 구축한 다음 이것이 세포내적이 되도록 이를 투여함으로써, 예를 들어 레트로바이러스성 벡터를 사용하거나 [참고: 예를 들어, 미국 특허 제4,980,286호], 직접 주사하거나, 미립자 충격을 이용하거나 (예를 들어, 유전자 총; Biolistic, Dupont), 지질 또는 세포 표면 수용체 또는 형질감염제로 피복시키거나, 또는 핵을 유입시키는 것으로 공지되어 있는 호메오박스(homeobox)-유사 펩티드와 연쇄하여 투여함으로써 [참고: 예를 들어, Joliot et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868, 1991], 상기 핵산을 생체내 투여하여 그의 코딩된 단백질의 발현을 증진시킬 수 있다. 또다른 한편으론, 핵산을 세포내적으로 도입하고, 발현을 위해 숙주 세포 DNA 내에 동종 재조합에 의해 혼입시킬 수 있다.
세포성 형질감염 및 유전자 요법 본 발명은 세포를 시험관내 및 생체 내에서 형질감염시키기 위한, 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 용도를 포함한다. 이들 핵산은 표적 세포 및 유기체를 형질감염시키기 위해 널리 공지된 수많은 벡터 내로 삽입할 수 있다. 이러한 핵산은 벡터와 표적 세포 간의 상호 작용을 통하여 생체외 및 생체내에서 세포 내로 형질감염시킨다. 조성물은 치료적 반응을 유발시키기에 충분한 양으로 대상체에게 투여한다 (예를 들어, 근육 내로의 주사에 의함).
또다른 국면에서, 본 발명은 세포를 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산으로 형질감염시키는 것을 포함한 (이러한 핵산은 표적화 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산과 작동적으로 연결된 유도성 프로모터를 포함한다), 인간 또는 기타 동물에게서 표적 부위, 즉 표적 세포 또는 조직을 치료하는 방법을 제공한다. 인간 질병을 치료 또는 예방하는데 있어서의 유전자 요법 과정에 관해서는 다음 문헌을 참고할 수 있다 [참고: Van Brunt Biotechnology 6:1149-1154, 1998].
병용 요법 수많은 양태에서는, 본 발명의 폴리펩티드를 하나 이상의 부가 화합물 또는 요법과 병용해서 투여할 수 있다. 예를 들어, 다중 폴리펩티드를 1종 가지 이상의 치료 화합물과 연계해서 공동-투여할 수 있다. 병용 요법은 동시 또는 교대 투여를 포함할 수 있다. 또한, 병용 요법은 급성 또는 만성 투여를 포함할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드는 단백 동화 작용제, 예를 들어 테스토스테론 또는 특이적 안드로겐 수용체 조정제 (SARM)와 병용해서 투여할 수 있다. 부가의 단백 동화 작용제에는 성장 호르몬 (GH) 및 GH 방출을 유도시키는 분자가 포함된다. 그렐린(Ghrelin)이 악액질에 대한 병용 요법에 특히 유용한데, 이는 그렐린이 식욕 증가를 유발시킬 수 있기 때문이다. 유사한 특성으로, 본 발명의 폴리펩티드는 단백질 보충제와 병용하여 단백 동화를 증가시킬 수 있거나, 또는 물리 요법이나 운동과 병용해서 체중을 증가시킬 수 있다. 미오스타틴(myostatin)을 억제시키는 모든 분자가 병용 요법에 대한 후보이기도 하다.
제약 조성물 본 발명은 또한, 본 발명의 IGF 전구체 단백질과 제약상 허용 가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 용어 "제약상 허용 가능한"이란 연방 정부 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나, 또는 미국 약전 또는 동물이나 인간에게 사용하도록 일반적으로 인식된 기타 약전에 열거된 것을 의미한다. 용어 "담체"는 치료제와 함께 투여되는 희석제, 아주반트, 부형제 또는 비히클을 지칭한다. 이러한 제약 담체는 멸균성 액체, 예를 들어 물 및 오일 (이에는 석유, 동물성, 식물성 또는 합성 기원의 오일이 포함된다), 예를 들면 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등일 수 있다. 적합한 제약 부형제에는 전분, 글루코스, 락토스, 슈크로스, 제라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 쵸크, 실리카 겔, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 탈지 분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등이 포함된다. 본 발명의 조성물은 경우에 따라, 미량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수도 있다. 이들 조성물은 용제, 현탁제, 에멀션, 정제, 환제, 캅셀제, 산제, 지속 방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 조성물은 전통적인 결합제 및 담체, 예를 들어 트리글리세라이드를 수반한 좌제로서 제형화될 수 있다. 경구 제형은 표준 담체, 예를 들어 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 삭카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다. 적합한 제약 담체의 예가 다음 문헌에 기재되어 있다 [참고: "Remington's Pharmaceutical Sciences" by E. W. Martin].
몇몇 양태에서, 본 발명의 조성물은 통상적인 과정에 따라서, 인간에게 정맥내 투여하도록 적용시킨 제약 조성물로서 제형화한다. 필요에 따라, 조성물은 가용화제 및 주사 부위에서의 통증을 가볍게 하기 위한 국소 마취제, 예를 들어 리도카인(lidocaine)을 포함할 수도 있다. 조성물을 주입 투여하는 경우에는, 멸균성 제약 등급의 물 또는 식염수를 함유하는 주입용 병을 이용하여 투약할 수 있다. 조성물을 주사 투여하는 경우에는, 주사용 멸균수 또는 식염수의 앰풀을 제공하여 성분들이 투여에 앞서 혼합될 수 있도록 한다.
본 발명의 폴리펩티드는 중성 또는 염 형태로서 제형화할 수 있다. 제약상 허용 가능한 염에는 자유 아미노기, 예를 들어 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등으로부터 유래된 것과 형성된 염; 및 자유 카복실기, 예를 들어 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 수산화철, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유래된 것과 형성된 염이 포함된다.
질환 또는 질병을 치료하는데 유효한 본 발명의 폴리펩티드의 양은 본 명세서에 기초한 표준 임상 기술에 의해 결정할 수 있다. 또한, 시험관내 검정을 임의로 이용하여 최적의 투여량 범위를 확인하는데 도움을 줄 수 있다. 제형화에 이용될 정확한 용량은 또한, 투여 경로, 및 해당 질환의 중증도에 좌우될 것이고, 실시자의 판단과 각 대상체의 환경에 따라서 결정되어야 한다. 그러나, 정맥내 투여에 적합한 투여량 범위는 일반적으로, 체중 킬로그램당 활성 화합물 약 20 내지 5000 마이크로그램이다. 비내 투여에 적합한 투여량 범위는 일반적으로, 체중 kg당 약 0.01 pg 내지 체중 kg당 1 mg이다. 유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유래된 용량-반응 곡선으로부터 외삽할 수 있다. 특히, 가능한 투여량 섭생은 약 60 내지 120 ㎍/체중 kg을 1일 2회씩 피하 투여하는 것일 수 있다.
수의학적 용도
전술된 인간에 대한 투여 방법 이외에도, 수의학적 투여에 관하여 부가적으로 고려할 수 있다.
건강한 동물에게 투여하는 경우의 투여량과 질병을 앓고 있는 동물에게 투여하는 경우의 투여량은 상이할 수 있다. 적당한 투여량의 평가는 당해 분야에 공지된 검정, 예를 들어 다음에 기재되는 바와 같은 근육모세포 증식 검정 (실시예 79) 또는 유방 상피 조직 검정 (실시예 80)을 이용하여 당업자에 의해 용이하게 이루어질 수 있다. IGF를 측정하기 위한 일반적인 검정이, 예를 들어 실시예 81에서와 같이 당해 분야에 또한 공지되어 있다.
당업자는 몇몇 동물 종이 광주기 길이에 의해 영향을 받는 계절성 번식력을 나타낸다는 것을 인식할 것이다. 수의학적 방법 또는 용도의 모든 양태는 임의로, 목적하는 효과를 달성하기 위해 해당 동물의 생식 주기 내의 특정 시간에 치료 방법을 시작하는 것을 포함할 수 있다. 당업자는 생식 상태와 주기가 용이하게 결정될 수 있고, 경우에 따라 적당한 섭생을 사용함으로써 동시에 일어날 수 있다는 것을 알고 있을 것이다.
기존에 인간 용도로 언급된 방법 이외에도, 수의학적 적응증에 사용하는 경우, 본 발명의 IGF-1 또는 IGF-2 펩티드를 경구 드렌치(drench) 또는 동물용 경구 또는 고형 사료에 대한 보충제로서 사용할 수도 있다.
본 발명이 다음 실시예로써 추가로 기재되지만, 그에 제한되지 않는다.
실시예 1
다음 변형을 함유하는 hIGF-1-Ea 전구체 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 발현 벡터를 구축하였다: G1의 결실, P2의 결실, 및 E3의 결실; R37에서 A로의 돌연변이; 및 R71의 결실 및 S72의 결실. 이들 돌연변이는 종종, 본 명세서 전반에 걸쳐 "3mut"로서 지칭된다. 이로써 다음의 분비된 단백질 서열이 생성된다:
Figure 112008084230908-pct00008
Cos7 세포 (ATCC로부터 입수 가능함)를, 10％ 태아 소 혈청, 100U/ml 페니실린 및 100 ㎍/ml 스트렙토마이신을 함유하는 DMEM에 유지시키고, 10-cm 판당 1 x 106개 세포 밀도로 도말하였다. 이들 세포 배양물을 제조업자의 지시에 따라서 푸젠 [Fugene (공급처: Roche)]을 이용하여 8 ㎍의 발현 벡터로 형질감염시켰다. 형질감염시킨지 24시간 후, 세포를 1회 세척하고 혈청 무함유 배지에서 48시간 동안 배양하였다. 상등액을 수집하고 -80℃에서 저장하였다.
인간 혈청 중에서의 폴리펩티드 안정성을 평가하기 위해, 야생형(wt) hIGF-1Ea 및 hIGF-1Ea3mut로 형질감염시킨 Cos7 세포로부터 수집된 상등액을 10％ 인간 혈청 (공급처: Sigma)의 부재 또는 존재하에 37℃에서 16시간 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 18％ SDS-PAGE에 의해 격리시키고, 인간 IGF-1에 대한 염소 폴리클로날 항체를 사용하여 면역블롯팅을 수행하였다. 도 1A의 결과는 wt hIGF-1Ea를 혈청과 함께 16시간 동안 인큐베이션한 후에는 이것이 실질적으로 분해되긴 하였지만, hIGF-1Ea3mut는 안정화되었다는 것을 나타낸다. 밀도 측정법은 절단되지 않은 IGF-1 대 절단된 IGF-1의 비가 약 1:6.2이지만, hIGF-1Ea3mut에 대한 비는 약 1:0.68이라는 것을 표시하는데, 이는 이들 돌연변이로 인해 안정된 폴리펩티드가 생성된다는 것을 보여준다.
hIGF-1Ea3mut가 IGF-1R을 통하여 신호 전달할 수 있었다는 것을 확증하기 위해, 상기 폴리펩티드와 접촉하는 세포의 AKT 인산화를 측정하였다. C2C12를 ATCC로부터 구입하고, 이를 10％ 태아 소 혈청(AMIMED), 100 U/ml 페니실린 (공급처: Invitrogen), 100 ㎍/ml 스트렙토마이신 (공급처: Invitrogen) 및 2 mM 글루타민 (공급처: Invitrogen)을 함유하는 고 글루코스 수반 둘벡코 변형 이글 배지 (DMEM) (공급처: Invitrogen)에서 유지시켰다. AKT 인산화를 분석하기 위해, C2C12 세포를 6-웰 판의 웰당 0.15 x 106개 세포 밀도로 도말하고, 성장 배지에서 72시간 동안 배양하였다. 세포를 혈청 무함유 배지에서 4시간 동안 고갈시킨 다음, 37℃에서 30분 동안 상이한 리간드로 자극하였다. 각종 프로테아제 억제제를 함유하는 포스포세이프 (PhosphoSafe) 완충제 (공급처: Cell Signaling)로 세포를 용해시키고, 4℃에서 15분 동안 14,000 x g으로 원심분리시킴으로써 청정하게 하였다. AKT 인산화 및 총 AKT 수준은 패트스캔 포스포 AKT (Ser473) 샌드위치 ELISA 키트 및 패트스캔 AKT 샌드위치 ELISA 키트 (공급처: Cell Signaling)를 각각 사용하여 ELISA함으로써 분석하였다. AKT 인산화 결과가 도 2A에 요약되어 있는데, 이는 hIGF-1Ea3mut가 long-R3-IGF-1 양성 대조군 시약 및 재조합 IGF-1과 유사한 정도로 IGF-1R 세포성 경로를 활성화시킬 수 있었다는 것을 나타낸다. 또한, 도 5의 데이터는 hIGF-1Ea3mut가 AKT 인산화를 유발시켰다는 것을 직접적으로 보여준다.
이어서, hIGF-1Ea3mut의 수용체 특이성이 IGF-1R의 경우에도 유지되었다는 것을 보장하기 위해, IGF-1R 또는 인슐린 수용체 (InsR)를 과발현하는 NIH3T3의 배 양물에 각종 리간드를 가하였다. 이들 세포를 Cos7 세포에 대해 상기 언급된 바와 동일한 조건하에 배양하였다. IGF-1R 및 InsR 인산화를 분석하기 위해, NIH3T3-IGF1R 및 N1H3T3-InsR 세포를 6-웰 판의 웰당 0.2 x 106개 세포 밀도로 도말하고, 성장 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 세포를 혈청 무함유 배지에서 18시간 동안 고갈시킨 다음, 37℃에서 10분 동안 상이한 리간드로 자극하였다. 세포를 AKT 실험에 대해 상기 언급된 바와 같이 용해시키고, 듀오세트 (DuoSet) IC 인간 포스포-IGF1R 및 -InsR ELISA 키트 (공급처: R&D Systems)를 사용하여 ELISA함으로써 IGF-1R 및 InsR 인산화 수준을 분석하였다. 도 3A 및 3B에 요약된 결과는 이러한 IGF-1 전구체 폴리펩티드가 IGF-1 수용체에 대한 특이성을 보유하고 있고 관련 인슐린 수용체와 저 친화도로 결합해야 한다는 것을 나타낸다.
실시예 2
다음 돌연변이를 함유하는 hIGF-1-Eb 전구체 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 발현 벡터를 구축하였다: G1의 결실, P2의 결실, 및 E3의 결실; R37에서 A로의 돌연변이; 및 R71의 결실 및 S72의 결실 (즉, "3mut"). 이로써 다음의 분비된 단백질 서열이 생성된다:
Figure 112008084230908-pct00009
상기 폴리펩티드는 상기 실시예 1에 기재된 과정에 따라서 검정하였다. 도 1B 및 밀도 측정법 사용은 절단되지 않은 IGF-1 대 절단된 IGF-1의 비가 약 1:9이지만, hIGF-1Eb3mut에 대한 비는 약 1:1이라는 것을 표시하는데, 이는 이들 돌연변 이로 인해 안정된 폴리펩티드가 생성된다는 것을 보여준다. 도 2B는 hIGF-1Eb3mut가 long-R3-IGF-1 양성 대조군 시약 및 재조합 IGF-1과 유사한 정도로 IGF-1R 세포성 경로를 활성화시킬 수 있었다는 것을 나타낸다. 또한, 도 5의 데이터는 hIGF-1Eb3mut가 AKT 인산화를 유발시켰다는 것을 직접적으로 보여준다. 도 3C 및 3D에 요약된 결과는 이러한 IGF-1 전구체 폴리펩티드가 IGF-1 수용체에 대한 특이성을 보유하고 있고 관련 인슐린 수용체와 저 친화도로 결합해야 한다는 것을 나타낸다.
실시예 3
다음 돌연변이를 함유하는 hIGF-1-Ec 전구체 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 발현 벡터를 구축하였다: G1의 결실, P2의 결실, 및 E3의 결실; R37에서 A로의 돌연변이; 및 R71의 결실 및 S72의 결실 (즉, "3mut"). 이로써 다음의 분비된 단백질 서열이 생성된다:
Figure 112008084230908-pct00010
상기 폴리펩티드는 상기 실시예 1에 기재된 과정에 따라서 검정하였다. 도 1C 및 밀도 측정법 사용은 절단되지 않은 IGF-1 대 절단된 IGF-1의 비가 약 1:5이지만, hIGF-1Ec3mut에 대한 비는 약 1:0.96이라는 것을 표시하는데, 이는 이들 돌연변이로 인해 안정된 폴리펩티드가 생성된다는 것을 보여준다. 도 2D는 hIGF-1Ec3mut가 long-R3-IGF-1 양성 대조군 시약 및 재조합 IGF-1과 유사한 정도로 IGF-1R 세포성 경로를 활성화시킬 수 있었다는 것을 나타낸다. 또한, 도 5의 데이터는 hIGF-1Ec3mut가 AKT 인산화를 유발시켰다는 것을 직접적으로 보여준다. 도 4A 및 4B에 요약된 결과는 이러한 IGF-1 전구체 폴리펩티드가 IGF-1 수용체에 대한 특이성을 보유하고 있고 관련 인슐린 수용체와 저 친화도로 결합해야 한다는 것을 나타낸다.
실시예 4
hIGF-1-Eb 펩티드에 대한 다음 변형을 함유하는 hIGF-1-Eab 키메라 전구체 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 발현 벡터를 구축하였다: G1의 결실, P2의 결실, 및 E3의 결실; R37에서 A로의 돌연변이; R71의 결실 및 S72의 결실 (즉, "3mut"); 및 Ea 아미노산 93 내지 102를 Eb의 아미노산 95와 96사이에 삽입함. 이러한 삽입으로 인해, N92에 추정상의 N-연결된 글리코실화 신호가 창출된다. 이로써 다음의 분비된 단백질 서열이 생성된다:
Figure 112008084230908-pct00011
상기 폴리펩티드는 상기 실시예 1에 기재된 몇몇 과정에 따라서 검정하였다. 도 2C는 hIGF-1Eab3mut가 long-R3-IGF-1 양성 대조군 시약 및 재조합 IGF-1과 유사한 정도로 IGF-1R 세포성 경로를 활성화시킬 수 있었다는 것을 나타낸다. 도 4C 및 4D에 요약된 결과는 이러한 IGF-1 전구체 폴리펩티드가 IGF-1 수용체에 대한 특이성을 보유하고 있고 인슐린 수용체를 활성화시키지 않는다는 것을 나타낸다.
실시예 5
다음 돌연변이를 함유하는 hIGF-1-Eb 다량체 전구체 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 발현 벡터를 구축하였다: G1의 결실, P2의 결실, E3의 결실, R36의 결실, R37 의 결실, R71의 결실, S72의 결실, Eb의 마지막 7개 C-말단 아미노산의 결실; 및 이러한 전구체의 C-말단에, R71 및 S72와 마지막 7개 C-말단 아미노산을 둘 다 수반하지 않는 2개의 부가의 Eb 펩티드, 및 R71과 S72를 수반하지 않는 제4 및 최종 Eb 펩티드를 삽입함. 도 6A는 이러한 구조물의 도식적 도면이다. 이로써 다음의 분비된 단백질 서열이 생성된다:
Figure 112008084230908-pct00012
상기 폴리펩티드를 대상으로 하여 실시예 1에 기재된 바와 같은 AKT 인산화 검정을 수행하였다. 도 5는 이러한 hIGF-1-Eb 다량체가 IGF-1R 경로를 통하여 신호 전달할 수 있었다는 것을 나타낸다.
실시예 6
도 6B에 도식적으로 제시된 바와 같은 본 발명의 hIGF-1-Eb 전구체 폴리펩티드를 발현시킬 수 있다. 이 구조물은 다음 변형을 함유하고 있다: G1의 결실, P2의 결실, E3의 결실, R36의 결실, R37의 결실, R71의 결실, S72의 결실; 및 Ea 아미노산 93-102을 Eb의 아미노산 95와 96 사이에 삽입함으로써, 위치 N92 및 N100에 N-연결된 글리코실화 부위를 창출시킴. 이로써 다음의 분비된 단백질 서열이 생성된다:
Figure 112008084230908-pct00013
실시예 7
다음 변형을 갖는 본 발명의 hIGF-2-E 전구체 폴리펩티드를 발현시킬 수 있다: P4의 결실, S5의 결실, 및 E6의 결실; R38에서 A로의 돌연변이; 및 R68의 결실 및 D69의 결실. 이로써 다음의 분비된 단백질 서열이 생성된다:
Figure 112008084230908-pct00014
실시예 8
다음 돌연변이를 갖는 본 발명의 hIGF-1-Ea 전구체 폴리펩티드를 발현시킬 수 있다: G1의 결실 및 P2의 결실; E3에서 X로의 돌연변이 (여기서, X는 PEG화되는 비천연 아미노산이다); R37에서 A로의 돌연변이; 및 R71의 결실 및 S72의 결실. 이로써 다음의 분비된 단백질 서열이 생성된다:
Figure 112008084230908-pct00015
실시예 9-78 (△=결실)
Figure 112008084230908-pct00016
Figure 112008084230908-pct00017
Figure 112008084230908-pct00018
Figure 112008084230908-pct00019
Figure 112008084230908-pct00020
Figure 112008084230908-pct00021
Figure 112008084230908-pct00022
Figure 112008084230908-pct00023
Figure 112008084230908-pct00024
Figure 112008084230908-pct00025
Figure 112008084230908-pct00026
Figure 112008084230908-pct00027
Figure 112008084230908-pct00028
Figure 112008084230908-pct00029
실시예 79: 근육모세포 증식 검정
근육모세포 증식 검정은 IGF 활성의 신뢰할 만한 시험관내 지표를 제공하고, 배아 근육모세포와 성체 위성 세포에 영향을 미치는 요인에 대한 모델로서 사용된다. 이러한 시스템에서 활동중인 요인은 근육모세포의 일차 배양물에서 유사하게 작용한다. 본 발명의 펩티드에 의한 시험관내 근육모세포 증식 증강은 근육모세포 증식 증가를 유발시키는데 있어서의 그의 활성을 나타내므로, 자궁 내의 최종 근섬유 수 증가를 유발시키는데 있어서의 그의 활성을 나타낸다. 또한, 유사한 근육모세포 증식 증강은 본 발명의 펩티드를 사용하여, 예를 들어 위성 근육 세포 증식의 자극을 통하여 성인 근 비대증을 증강시킬 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 80: 유방 상피 조직 검정
젖분비 동물에서는, 유방 상피 조직의 양이 유즙 생성에 있어서의 제한 요인인데, 이는 유즙을 생산하고 분비하는 세포이기 때문이다. 시험관내 시스템을 이용하여, 동물의 유선으로부터 수득한 상피 세포를 본 발명의 변형된 IGF-1 또는 IGF-2에 의해 자극하여 증가 량의 유즙 구성분을 증식 및 생성시킬 수 있다. 이러한 하나의 시험관내 세포 시스템에서 증식시키기 위해 자극시킨 유방 상피 세포를 청정해진 유방 지방체에 재이식하고 자극하여 젖분비 암컷 동물에게서 유즙을 증식 및/또는 생성시킬 수 있다는 사실을 추가로 입증할 수 있다.
실시예 81: 혈액 또는 기타 체액에서의 IGF-1 또는 IGF-2 측정
1회분당 비경구적으로 투여된 펩티드의 유효량은 용량-반응 곡선에 의해 측정할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 변형된 IGF 펩티드는 치료하고자 하는 대상 체의 혈액 또는 체액 중에서 측정하여 투여량을 결정할 수 있다. 또다른 한편으론, 증가 량의 펩티드를 상기 대상체에게 투여하고, 변형된 IGF-1 및 IGF-2에 대한 대상체의 혈청 수준을 검사할 수 있다. 이용될 펩티드의 양은 변형된 IGF-1 또는 IGF-2의 혈청 수준을 기준으로 한 몰에 근거하여 계산할 수 있다.
상기 펩티드의 적당한 투여량을 결정하는 한 가지 방법으로, 생물학적 유체, 예를 들어 체액 또는 혈액 중에서의 본 발명의 IGF 펩티드를 측정할 수 있게 된다. 이러한 수준을 측정하는 것은 RIA 및 ELISA를 포함한 모든 수단에 의해 수행할 수 있다. IGF 수준을 측정한 후, 단일 또는 수 회분 용량을 이용하여 상기 유체를 펩티드와 접촉시켰다. 이러한 접촉 단계 후, IGF 수준을 유체에서 재측정하였다. 유체 IGF 수준이 목적하는 효능 (이를 위해 해당 분자를 투여해야 한다)을 가져다 주기에 충분한 양으로 감소한 경우, 이러한 분자의 용량을 조정하여 최대 효능을 가져다줄 수 있다. 이 방법은 시험관내 또는 생체 내에서 수행할 수 있다. 바람직하게는, 상기 방법을 생체 내에서 수행하는데, 즉 유체를 대상체로부터 추출하고 IGF 수준을 측정한 후, 본원의 펩티드를 단일 또는 수 회분 용량을 이용하여 포유류에게 투여한 다음 (즉, 접촉 단계는 동물에게 투여함으로써 달성된다), 해당 동물로부터 추출된 유체로부터 IGF 수준을 재측정하였다.
투여량을 결정하기 위한 또다른 방법은 펩티드에 대한 항체를 사용하는 것이거나 또는 펩티드를 LIFA 포맷으로 탐지하는 또다른 방법이다.
실시예 82: hIGF-1-Ec 3mut의 생체내 약동학
성체 수컷 마우스 (무리당 n = 3)에게 rhIGF-1을 1 mg/kg으로, 그리고 hIGF- 1-Ec 3mut (실시예 3에 기재됨)을 1.55 mg/kg으로 정맥내 (i.v.) 거환 주사하였다. 시험 물질을 투여한지 5, 15, 30 및 60분 후에 일련의 혈액 표본을 수집하였다. rhIGF-1 및 hIGF-1-Ec 3mut의 혈청 농도를 ELISA에 의해 결정하였다. 이 검정은 hIGF-1에 대해 특이적이다.
등 몰 용량의 rhIGF-1 및 hIGF-1-Ec 3mut를 마우스에게 정맥내 투여하였다. 그 결과, 조사된 모든 시점에서 rhIGF-1과 비교해서 상당히 더 높은 수준의 hIGF-1-Ec 3mut 단백질이 나타났는데, 이는 hIGF-1-Ec 3mut가 70개 아미노산-long IGF-1 보다 대사적으로 더 안정하다는 지표이다.
Figure 112008084230908-pct00030
SEQUENCE LISTING <110> Novartis AG <120> STABILIZED INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR POLYPEPTIDES <130> 50210 <140> PCT/US07/070468 <141> 2007-06-06 <150> 60/812,349 <151> 2006-06-09 <150> 60/862,244 <151> 2006-10-20 <150> 60/897,187 <151> 2007-01-24 <160> 181 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 70 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> Human IGF-1 also called Somatomedin <400> 1 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Pro Ala Lys Ser Ala 65 70 <210> 2 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> IGF-1 mRNA E-peptide (Ea) <400> 2 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 3 <211> 77 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(77) <223> IGF-1 mRNA E-peptide (Eb) <400> 3 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys 20 25 30 Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu 35 40 45 Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile 50 55 60 Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 65 70 75 <210> 4 <211> 40 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(40) <223> IGF-1 mRNA E-peptide (Ec) <400> 4 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys 20 25 30 Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 35 40 <210> 5 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(105) <223> Wild type IGF-1 e-peptide (Ea) <400> 5 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Pro Ala Lys Ser Ala Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp 65 70 75 80 Met Pro Lys Thr Gln Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly 85 90 95 Ser Ala Gly Asn Lys Asn Tyr Arg Met 100 105 <210> 6 <211> 89 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(89) <223> E-peptide Human IGF-2 <400> 6 Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg 1 5 10 15 Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Lys Gln Ser Thr 20 25 30 Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly 35 40 45 His Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala Lys Arg His 50 55 60 Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala His Gly Gly Ala 65 70 75 80 Pro Pro Glu Met Ala Ser Asn Arg Lys 85 <210> 7 <211> 156 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(156) <223> IGF-2 precursor to E-peptide in Sequence 6 <400> 7 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala 20 25 30 Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn 65 70 75 80 Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Lys 85 90 95 Gln Ser Thr Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala 100 105 110 Arg Arg Gly His Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala 115 120 125 Lys Arg His Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala His 130 135 140 Gly Gly Ala Pro Pro Glu Met Ala Ser Asn Arg Lys 145 150 155 <210> 8 <211> 100 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(100) <223> 3MUT HIGF-1 Ea <400> 8 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys 85 90 95 Asn Tyr Arg Met 100 <210> 9 <211> 142 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(142) <223> 3MUT HIGF-1-EB Precursor <400> 9 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr 100 105 110 Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu 115 120 125 Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 10 <211> 104 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(104) <223> 3 MUT HIGF-1 (Ec) Precursor <400> 10 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 65 70 75 80 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys 85 90 95 Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 <210> 11 <211> 152 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(152) <223> HIGF-1-EAB CHIMERIC PRECURSOR creates CREATES A PUTATIVE N-LINKED GLYCOSYLATION SIGNAL AT N92 by deletion <400> 11 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala 85 90 95 Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr 100 105 110 His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile 115 120 125 Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala 130 135 140 Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 12 <211> 350 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(350) <223> HIGF-1-EB MULTIMER <400> 12 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp 35 40 45 Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys Ser 50 55 60 Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr 65 70 75 80 Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly 85 90 95 Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala 100 105 110 Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly 115 120 125 Ser Arg Asn Ala Glu Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met 130 135 140 Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys 145 150 155 160 Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln 165 170 175 Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu 180 185 190 Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Arg Ser Val Arg Ala 195 200 205 Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser 210 215 220 Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr 225 230 235 240 His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile 245 250 255 Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala 260 265 270 Glu Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 275 280 285 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 290 295 300 Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr 305 310 315 320 Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu 325 330 335 Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 340 345 350 <210> 13 <211> 150 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(150) <223> HIGF-1-EB: N-LINKED GLYCOSYLATION SITE AT POSITION N92 AND N100 <400> 13 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp 35 40 45 Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys Ser 50 55 60 Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr 65 70 75 80 Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn 85 90 95 Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro 100 105 110 Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly 115 120 125 Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys 130 135 140 Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 14 <211> 151 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(151) <223> HIGF-2-E PRECURSOR DELETION OF P4, DELETION OF S5, AND DELETION OF E6; MUTATION OF R38 TO A; AND DELETION OF R68 AND DELETION OF D69 <400> 14 Ala Tyr Arg Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala Ser Arg Val 20 25 30 Ser Arg Ala Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala Lys Ser Glu 50 55 60 Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg Tyr Pro 65 70 75 80 Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Lys Gln Ser Thr Gln Arg 85 90 95 Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly His Val 100 105 110 Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala Lys Arg His Arg Pro 115 120 125 Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala His Gly Gly Ala Pro Pro 130 135 140 Glu Met Ala Ser Asn Arg Lys 145 150 <210> 15 <211> 101 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(101) <223> Xaa is non-natural amino acid that is pegylated. <400> 15 Xaa Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn 85 90 95 Lys Asn Tyr Arg Met 100 <210> 16 <211> 101 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(101) <223> HIGF-1-EA:Deletions: at G1, at P2, at E3; R36A;at R71 <400> 16 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn 85 90 95 Lys Asn Tyr Arg Met 100 <210> 17 <211> 101 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(101) <223> HIGF-1-EA: deletions at G1, P2, E3; R36A; S72 <400> 17 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn 85 90 95 Lys Asn Tyr Arg Met 100 <210> 18 <211> 100 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(100) <223> HIGF-1-EA: deletions at G1, P2, E3; R36A; R71, S72 <400> 18 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys 85 90 95 Asn Tyr Arg Met 100 <210> 19 <211> 101 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(101) <223> HIGF-1-EA: deletions at G1, P2, E3; R37A; R71 <400> 19 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn 85 90 95 Lys Asn Tyr Arg Met 100 <210> 20 <211> 101 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(101) <223> HIGF-1-EA: deletions at G1, P2, E3; R37A; S72 <400> 20 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn 85 90 95 Lys Asn Tyr Arg Met 100 <210> 21 <211> 100 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(100) <223> HIGF-1-EA: deletions G1, P2, E3, R37; R71 <400> 21 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys 85 90 95 Asn Tyr Arg Met 100 <210> 22 <211> 100 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(100) <223> HIGF-1-EA: deletions at G1, P2, E3, R37; S72 <400> 22 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys 85 90 95 Asn Tyr Arg Met 100 <210> 23 <211> 99 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(99) <223> HIGF-1-EA: deletions at G1, P2, E3; R37; R71, S72 <400> 23 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 65 70 75 80 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 85 90 95 Tyr Arg Met <210> 24 <211> 143 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(143) <223> HIGF-1-EB: deletions G1, P2, E3; R36A; R71 <400> 24 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 25 <211> 143 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(143) <223> HIGF-1-EB: deletions at G1, P2, E3; R36A; S72 <400> 25 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 26 <211> 143 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(143) <223> HIGF-1-EB: deletions at G1, P2, E3; R37A; R71 <400> 26 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 27 <211> 143 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(143) <223> HIGF-1-EB: deletions at G1, P2, E3; R37A; S72 <400> 27 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 28 <211> 142 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(143) <223> HIGF-1-EB: deletions at G1, P2, E3; R37A; R71, S72 <400> 28 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr 100 105 110 Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu 115 120 125 Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 29 <211> 142 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(143) <223> HIGF-1-EB: deletions at G1, P2, E3, R37; R71 <400> 29 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr 100 105 110 Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu 115 120 125 Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 30 <211> 142 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(142) <223> HIGF-1-EB: deletions at G1, P2, E3, R37; S72 <400> 30 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr 100 105 110 Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu 115 120 125 Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 31 <211> 141 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(141) <223> HIGF-1-EB: deletions at G1, P2, E3, R37; R71, S72 <400> 31 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 65 70 75 80 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys 85 90 95 Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu 100 105 110 Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile 115 120 125 Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 32 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(106) <223> HIGF-1-EC: deletions at G1, P2, E3; R36A; R71 <400> 32 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 <210> 33 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(106) <223> HIGF-1-EC: deletions at G1, P2, E3; R36A; S72 <400> 33 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 <210> 34 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(105) <223> HIGF-1-EC: deletions at G1, P2, E3; R36A; R71, S72 <400> 34 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 <210> 35 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(106) <223> HIGF-1-EC: deletions at G1, P2, E2; R37A; R71 <400> 35 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 <210> 36 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(106) <223> HIGF-1-EC: deletions at G1, P2, E3; R37A; S72 <400> 36 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 <210> 37 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(105) <223> HIGF-1-EC: deletions at G1, P2, E3; R37A; R71, S72 <400> 37 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 <210> 38 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(105) <223> HIGF-1-EC: deletions at G1, P2, E3, R37, R71 <400> 38 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 <210> 39 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(105) <223> HIGF-1-EC: deletions at G1, P2, E3, R37, S72 <400> 39 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 <210> 40 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(153) <223> HIGF-1-EAB: deletions at G1, P2, E3; R36A; R71; INSERTION OF EA AA 93-102 BETWEEN AA 95 AND 96 OF EB (I.E., "EAB") <400> 40 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser 85 90 95 Ala Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys 100 105 110 Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln 115 120 125 Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn 130 135 140 Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 41 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(153) <223> HIGF-1-EAB: deletions at G1, P2, E3; R37A; R71 <400> 41 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser 85 90 95 Ala Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys 100 105 110 Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln 115 120 125 Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn 130 135 140 Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 42 <211> 152 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(152) <223> HIGF-1-EAB: deletions at G1, P2, E3, R37, R71 <400> 42 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala 85 90 95 Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr 100 105 110 His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile 115 120 125 Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala 130 135 140 Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 43 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(153) <223> HIGF-1-EAB: deletions at G1, P2, E3; R36A; S72 <400> 43 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser 85 90 95 Ala Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys 100 105 110 Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln 115 120 125 Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn 130 135 140 Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 44 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(153) <223> HIGF-1-EAB: G1, P2, E3; R37A; S72 <400> 44 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser 85 90 95 Ala Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys 100 105 110 Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln 115 120 125 Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn 130 135 140 Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 45 <211> 152 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(152) <223> HIGF-1-EAB: G1, P2, E3, R37, S72 <400> 45 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Arg Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala 85 90 95 Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr 100 105 110 His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile 115 120 125 Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala 130 135 140 Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 46 <211> 152 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(152) <223> HIGF-1-EAB: G1, P2, E3; R36A; R71, S72 <400> 46 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala 85 90 95 Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr 100 105 110 His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile 115 120 125 Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala 130 135 140 Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 47 <211> 151 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(151) <223> HIGF-1-EAB: G1, P2, E3, R37, R71, S72 <400> 47 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 35 40 45 Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 65 70 75 80 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly 85 90 95 Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His 100 105 110 Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg 115 120 125 Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu 130 135 140 Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 48 <211> 101 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(101) <223> HIGF-1-EA: P2, E3; R37A; R71, S72 <400> 48 Gly Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn 85 90 95 Lys Asn Tyr Arg Met 100 <210> 49 <211> 143 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(143) <223> HIGF-1-EB: P2, E3; R37A; R71, S72 <400> 49 Gly Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 50 <211> 346 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(346) <223> HIGF-1-EB MULTIMER: (G1, P2, E3; R37A)-3XEB(R71, S72, C-TERM 7 AA)-EB(R71, S72) <400> 50 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr 100 105 110 Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu 115 120 125 Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met 130 135 140 Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys 145 150 155 160 Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln 165 170 175 Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu 180 185 190 Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln Arg 195 200 205 His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn 210 215 220 Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro 225 230 235 240 Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly 245 250 255 Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val 260 265 270 Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro 275 280 285 Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro 290 295 300 Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu 305 310 315 320 Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg 325 330 335 Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 340 345 <210> 51 <211> 347 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(347) <223> HIGF-1-EB MULTIMER: (P2, E3; R37A)-3XEB(R71, S72, C-TERM 7 AA)-EB R71, S72) <400> 51 Gly Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp 130 135 140 Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr 145 150 155 160 Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu 165 170 175 Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys 180 185 190 Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln 195 200 205 Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr 210 215 220 Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His 225 230 235 240 Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg 245 250 255 Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu 260 265 270 Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln 275 280 285 Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp 290 295 300 Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser 305 310 315 320 Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser 325 330 335 Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 340 345 <210> 52 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(106) <223> HIGF-1-EC: P2, E3; R37A; R71, S72 <400> 52 Gly Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 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<212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(145) <223> HIGF-1-EB: E3A; R37A; R71, S72 <400> 64 Gly Pro Ala Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Pro Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro 65 70 75 80 Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser 85 90 95 Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys 100 105 110 Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln 115 120 125 Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly 130 135 140 Lys 145 <210> 65 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(108) <223> HIGF-1-EC: E3A; R37A; R71, S72 <400> 65 Gly Pro Ala Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val 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Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 70 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(153) <223> HIGF-1-EAB: P2, E3; R37A; R71, S72 <400> 70 Gly Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser 85 90 95 Ala Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys 100 105 110 Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln 115 120 125 Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn 130 135 140 Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 71 <211> 347 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(347) <223> HIGF-1-EB MULTIMER: (P2, E3; R37A)-3XEB(R71, S72, C-TERM 7 AA)-EB(R71, S72) <400> 71 Gly Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp 130 135 140 Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr 145 150 155 160 Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu 165 170 175 Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys 180 185 190 Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln 195 200 205 Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr 210 215 220 Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His 225 230 235 240 Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg 245 250 255 Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu 260 265 270 Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln 275 280 285 Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp 290 295 300 Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser 305 310 315 320 Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser 325 330 335 Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 340 345 <210> 72 <211> 143 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(143) <223> Xaa is non-natural amino acid that is pegylated. <400> 72 Xaa Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 73 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(106) <223> Xaa is non-naturaly amino acid that is pegylated. <400> 73 Xaa Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 <210> 74 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(153) <223> Xaa is non-natural amino acid that is pegylated. <400> 74 Xaa Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser 85 90 95 Ala Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys 100 105 110 Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln 115 120 125 Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn 130 135 140 Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 75 <211> 347 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(347) <223> Xaa is non-natural amino acid that is pegylated. <400> 75 Xaa Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp 130 135 140 Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr 145 150 155 160 Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu 165 170 175 Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys 180 185 190 Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln 195 200 205 Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr 210 215 220 Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His 225 230 235 240 Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg 245 250 255 Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu 260 265 270 Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln 275 280 285 Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp 290 295 300 Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser 305 310 315 320 Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser 325 330 335 Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 340 345 <210> 76 <211> 101 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(101) <223> Xaa is non-natural amino acid that is pegylated. <400> 76 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Xaa Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn 85 90 95 Lys Asn Tyr Arg Met 100 <210> 77 <211> 143 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(143) <223> Xaa is non-natural amino acid that is pegylated <400> 77 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Xaa Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 78 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(106) <223> Xaa is non-natural amino acid that is pegylated. <400> 78 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Xaa Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105 <210> 79 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(153) <223> Xaa is non-natural amino acid that is pegylated <400> 79 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Xaa Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser 85 90 95 Ala Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys 100 105 110 Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln 115 120 125 Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn 130 135 140 Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 80 <211> 347 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(347) <223> HIGF-1-EB MULTIMER: (G1, P2, E3; R37A)-EB(R71; S72X; C-TERM 7 AA)-2XEB(R71, Xaa is non-natural amino acid that is pegylated. <223> Xaa is a non-naturaly amino acid pegylated <400> 80 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Xaa Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly 100 105 110 Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg 115 120 125 Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp 130 135 140 Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr 145 150 155 160 Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu 165 170 175 Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys 180 185 190 Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln 195 200 205 Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr 210 215 220 Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His 225 230 235 240 Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg 245 250 255 Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu 260 265 270 Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln 275 280 285 Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp 290 295 300 Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser 305 310 315 320 Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser 325 330 335 Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys 340 345 <210> 81 <211> 100 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(100) <223> Xaa is non-natural amino acid that is pegylated. <400> 81 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Glu Val His Leu Lys Xaa Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys 85 90 95 Asn Tyr Arg Met 100 <210> 82 <211> 142 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(142) <223> Xaa is non-natural amino acid that is pegylated. <400> 82 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr 100 105 110 Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu 115 120 125 Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Xaa Arg Gly Lys Lys Gly Lys 130 135 140 <210> 83 <211> 152 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(152) <223> Xaa is non natural amino acid that is pegylated. <400> 83 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala 85 90 95 Gly Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr 100 105 110 His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile 115 120 125 Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala 130 135 140 Glu Xaa Arg Gly Lys Lys Gly Lys 145 150 <210> 84 <211> 346 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(346) <223> HIGF-1-EB MULTIMER (G1, P2, E3; R37A)-3XEB(R71, S72, Xaa is non-natural amino acid that is pegylated. <223> Xaa is a non-naturaly amino acid pegylated <400> 84 Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 20 25 30 Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 35 40 45 Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln 65 70 75 80 Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg 85 90 95 Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr 100 105 110 Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu 115 120 125 Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met 130 135 140 Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys 145 150 155 160 Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln 165 170 175 Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu 180 185 190 Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val Arg Ala Gln Arg 195 200 205 His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn 210 215 220 Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro Lys Thr His Pro 225 230 235 240 Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly 245 250 255 Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Val 260 265 270 Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys Tyr Gln Pro 275 280 285 Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys Gly Trp Pro 290 295 300 Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr Glu Ala Ser Leu 305 310 315 320 Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu Ile Gly Ser Arg 325 330 335 Asn Ala Glu Xaa Arg Gly Lys Lys Gly Lys 340 345 <210> 85 <211> 70 <212> PRT <213> Ovis aries <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> SHEEP REF NP_001009774.1 <400> 85 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Ala Ala Lys Ser Ala 65 70 <210> 86 <211> 61 <212> PRT <213> Ovis aries <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(61) <223> ABB02295.1 <400> 86 Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe 1 5 10 15 Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr 20 25 30 Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu 35 40 45 Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Ala Ala Lys Ser Ala 50 55 60 <210> 87 <211> 70 <212> PRT <213> Capra hircus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(60) <223> P51457 <400> 87 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Pro Thr Lys Ser Ala 65 70 <210> 88 <211> 70 <212> PRT <213> Ailuropoda melanoleuca <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> Q6JLX1 <400> 88 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Pro Ala Lys Ser Ala 65 70 <210> 89 <211> 70 <212> PRT <213> Cervus elaphus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> ABL98032.1 <400> 89 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Ser Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Pro Thr Lys Ala Ala 65 70 <210> 90 <211> 70 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(90) <223> AAB48032.1 <400> 90 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Pro Ala Lys Ala Ala 65 70 <210> 91 <211> 70 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> REF NP_849197.1 <400> 91 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Pro Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ile Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Val Arg Cys 50 55 60 Lys Pro Thr Lys Ser Ala 65 70 <210> 92 <211> 70 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> RAT CAA29436.1 <400> 92 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Pro Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ile Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Pro Thr Lys Ser Ala 65 70 <210> 93 <211> 70 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> MOUSE ISO1 REF NP_034642.1 <400> 93 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Pro Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ile Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 50 55 60 Lys Pro Thr Lys Ala Ala 65 70 <210> 94 <211> 70 <212> PRT <213> Anser anser <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> Goose ABF 57993.1 <400> 94 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Arg Leu His His Lys Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Ile 50 55 60 Lys Pro Pro Lys Ser Ala 65 70 <210> 95 <211> 70 <212> PRT <213> Oncorhynchus tshawytscha <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> CHINOOK SALMON AAA67268.1 <400> 95 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Pro Ser Ser Arg Arg Ser His Asn Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Glu Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Val 50 55 60 Lys Ser Gly Lys Ala Ala 65 70 <210> 96 <211> 70 <212> PRT <213> Acipenser ruthenus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> STERLET ABC54785.1 <400> 96 Gly Ser Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ala Ser Ser Arg Arg Pro His His Arg Gly Ile Val Asn Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Val 50 55 60 Lys Pro Ala Lys Ala Ser 65 70 <210> 97 <211> 68 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(68) <223> HALIBUT CAA09267.1 <400> 97 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Pro Asn Ala Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Gln 35 40 45 Ser Cys Glu Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Ala Lys Thr 50 55 60 Ser Lys Ala Ala 65 <210> 98 <211> 70 <212> PRT <213> Oncorhynchus mykiss <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> RAINBOW TROUT Q02815 <400> 98 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Pro Ser Ser Arg Arg Ser His Asn Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Glu Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Val 50 55 60 Lys Ser Gly Lys Ala Ala 65 70 <210> 99 <211> 70 <212> PRT <213> Ictalurus punctatus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> CHANNEL CATFISH AAQ56592.1 <400> 99 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Pro Asn Ser Arg Arg Leu His Asn Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Glu Leu Lys Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Val 50 55 60 Lys Ser Gly Lys Ala Pro 65 70 <210> 100 <211> 70 <212> PRT <213> Cyprinus carpio <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> CARP AAY21902.1 <400> 100 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Pro Ser Ser Arg Arg Ser His Asn Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Glu Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Val 50 55 60 Lys Pro Gly Lys Thr Pro 65 70 <210> 101 <211> 70 <212> PRT <213> Cyprinus carpio <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> CARP AAP78926.1 <400> 101 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Pro Ser Ser Arg Arg Ser His Asn Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Glu Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Val 50 55 60 Lys Pro Gly Lys Thr Pro 65 70 <210> 102 <211> 70 <212> PRT <213> Danio rerio <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> ZEBRAFISH NP_571900.1 <400> 102 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Pro Ser Ser Arg Arg Ser His Asn Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Glu Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Val 50 55 60 Lys Thr Gly Lys Ser Pro 65 70 <210> 103 <211> 70 <212> PRT <213> Myxocyprinus asiaticus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> CHINESE SUCKER ABH12114.1 <400> 103 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Pro Ser Ser Arg Arg Ser His Asn Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Glu Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Val 50 55 60 Lys Pro Gly Lys Ala Pro 65 70 <210> 104 <211> 70 <212> PRT <213> Pimephales promelas <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> FATHEADMINNOW AAT02176.1 <400> 104 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Ala Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Asn Ser Arg Arg Ser Asn Asn Tyr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Glu Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Val 50 55 60 Lys Thr Gly Lys Thr Pro 65 70 <210> 105 <211> 70 <212> PRT <213> Carassius auratus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> GOLDFISH AAC83443.1 <400> 105 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Pro Asn Ser Arg Arg Ser His Asn Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Glu Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Val 50 55 60 Lys Pro Gly Lys Thr Pro 65 70 <210> 106 <211> 70 <212> PRT <213> Xenopus laevis <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> African clawed frog AAA70330.1 <400> 106 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Asn Asn Arg Arg Ser His His Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Asp Phe Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Ala 50 55 60 Lys Pro Ala Lys Ser Ala 65 70 <210> 107 <211> 70 <212> PRT <213> Xenopus laevis <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> African clawed frog 1A P16501 <400> 107 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Asn Asn Arg Arg Ser His His Arg Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Gln Ser Cys Asp Phe Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Ala 50 55 60 Lys Gln Ala Lys Ser Ala 65 70 <210> 108 <211> 70 <212> PRT <213> Monodelphis domestica <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(70) <223> Gray short-tailed opossum XP_001373491.1 <400> 108 Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 1 5 10 15 Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Ser Arg Arg Leu His His Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Ile 50 55 60 Lys Pro Ala Lys Ser Ala 65 70 <210> 109 <211> 35 <212> PRT <213> Sus scrofa <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> PIG REF NP_999421.1 <400> 109 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Thr Ser Arg Gly Ser Ser Gly Asn Lys Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 110 <211> 35 <212> PRT <213> Sus scrofa <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> PIG CLASS1 ABG88023.1 <400> 110 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Arg Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Thr Ser Arg Gly Ser Ser Gly Asn Lys Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 111 <211> 35 <212> PRT <213> Bos taurus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> COW CAA33746.1 <400> 111 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Thr Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 112 <211> 33 <212> PRT <213> Canis familiaris <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(33) <223> DOG P33712 <400> 112 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Thr 20 25 30 Tyr <210> 113 <211> 35 <212> PRT <213> Canis familiaris <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> DOG ISO2 XP_853117.1 <400> 113 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 114 <211> 35 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> RABBIT AAB48032.1 <400> 114 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Thr Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 115 <211> 35 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> RAT REF NP_849197.1 <400> 115 Arg Ser Ile Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Thr Ser Arg Gly Ser Ala Gly Asn Lys Thr 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 116 <211> 35 <212> PRT <213> Gallus gallus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> CHICKEN NP_001004384.1 <400> 116 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Thr Ser Arg Gly Asn Thr Gly Asn Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 117 <211> 35 <212> PRT <213> Meleagris gallopavo <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> TURKEY AAC26006.1 <400> 117 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Glu Leu His Leu Lys Asn Thr Ser Arg Gly Asn Thr Gly Asn Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 118 <211> 30 <212> PRT <213> Anser anser <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(30) <223> GOOSE ABF57993.1 <400> 118 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Leu Lys Asn Thr Ser Arg Gly Asn Thr Glu Asn 20 25 30 <210> 119 <211> 35 <212> PRT <213> Oncorhynchus tshawytscha <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> CHINOOK SALMON AAA67268.1 <400> 119 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Arg Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 120 <211> 35 <212> PRT <213> Acipenser ruthenus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> STERLET ABC54785.1 <400> 120 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Ser Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Asn Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Ile 35 <210> 121 <211> 35 <212> PRT <213> Perca fluviatilis <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> PERCH CAE52916.2 <400> 121 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Arg Ala Pro Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 122 <211> 35 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> HALIBUT CAA09267.1 <400> 122 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Arg Ala Pro Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Thr Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 123 <211> 35 <212> PRT <213> Ictalurus punctatus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> CHANNEL CATFISH AAQ56592.1 <400> 123 Arg Ser Val Arg Glu Gln Arg His Thr Asp Thr Pro Lys Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 124 <211> 35 <212> PRT <213> Cirrhinus molitorella <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> MUD CARP AAY21902.1 <400> 124 Arg Ser Ile Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Ser Pro Lys Thr Ala Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 125 <211> 35 <212> PRT <213> Cirrhinus molitorella <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> MUD CARP AAP78926.1 <400> 125 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Ser Pro Arg Thr Ala Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Ile 35 <210> 126 <211> 35 <212> PRT <213> Danio aequipinnatus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> GIANT DANIO ABB05519.1 <400> 126 Arg Ser Leu Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Ile Pro Arg Thr Ala Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 127 <211> 35 <212> PRT <213> Danio rerio <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> ZEBRAFISH NP_571900.1 <400> 127 Arg Ser Leu Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Ile Pro Arg Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 128 <211> 35 <212> PRT <213> Myxocyprinus asiaticus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> CHINESE SUCKER ABH12114.1 <400> 128 Arg Ser Leu Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Ile Pro Arg Thr Pro Lys 1 5 10 15 Asp Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 129 <211> 35 <212> PRT <213> Barbus barbus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> SPINYBARBUS ABE03747.1 <400> 129 Arg Ser Leu Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Ser Pro Arg Thr Ala Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Ile 35 <210> 130 <211> 35 <212> PRT <213> Pimephales promelas <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> FATHEADMINNOW AAT02176.1 <400> 130 Arg Ser Leu Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Ile Thr Arg Thr Ala Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Ile Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 131 <211> 35 <212> PRT <213> Carassius auratus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> GOLDFISH AAC83443.1 <400> 131 Arg Ser Leu Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Gly Thr Arg Thr Ala Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Met 35 <210> 132 <211> 35 <212> PRT <213> Xenopus laevis <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> African clawed frog AAA70330.1 <400> 132 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Pro Lys Asn Thr Ser Arg Gly Asn Thr Gly Ser Arg Gly 20 25 30 Phe Arg Met 35 <210> 133 <211> 35 <212> PRT <213> Kuhlia rupestris <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> BREAM AAK16727.1 <400> 133 Arg Ser Leu Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Ile Thr Arg Thr Ala Lys 1 5 10 15 Glu Val His Gln Lys Asn Ser Ser Arg Gly Asn Thr Gly Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Arg Ile 35 <210> 134 <211> 35 <212> PRT <213> Xenopus laevis <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(35) <223> African clawed frog 1A P16501 <400> 134 Arg Ser Val Arg Thr Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Glu Val His Pro Lys Asn Thr Ser Arg Gly Asn Thr Gly Ser Arg Gly 20 25 30 Phe Arg Met 35 <210> 135 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> majority consensus sequence for Seq. ID. Nos. 136-147 <400> 135 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Lys Thr Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Gly Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu 35 40 45 <210> 136 <211> 41 <212> PRT <213> Sus scrofa <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(41) <223> PIG AAT47735.1 <400> 136 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Lys Thr Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu His Lys 35 40 <210> 137 <211> 30 <212> PRT <213> Bos indicus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(31) <223> COW INDIA AAU93628.1 <400> 137 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Lys Met Lys Ser Gln Arg Arg Arg 1 5 10 15 Lys Gly Gly Pro Lys Lys Arg Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu 20 25 30 <210> 138 <211> 50 <212> PRT <213> Bos taurus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(50) <223> CATTLE AAA03497.1 <400> 138 His Ala Gln Gly Ser Glu Gly Lys Pro Ala Arg Gly Gly Gly Glu Gly 1 5 10 15 Arg Pro Ser Ser Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Lys Met Lys Ser 20 25 30 Gln Arg Arg Arg Lys Gly Gly Pro Lys Lys Arg Pro Gly Gly Glu Gln 35 40 45 Lys Glu 50 <210> 139 <211> 30 <212> PRT <213> Bubalus bubalis <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(30) <223> WATER BUFFALO AAU93630.1 <400> 139 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Lys Met Lys Ser Gln Arg Arg Arg 1 5 10 15 Lys Gly Gly Pro Lys Lys His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu 20 25 30 <210> 140 <211> 30 <212> PRT <213> Ovis aries <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(30) <223> SHEEP AAU93626.1 <400> 140 Tyr Gln Leu Pro Ser Thr Asn Lys Lys Met Lys Ser Gln Arg Arg Arg 1 5 10 15 Lys Gly Gly Pro Lys Lys His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu 20 25 30 <210> 141 <211> 41 <212> PRT <213> Canis familiaris <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(41) <223> DOG XP_866946. <400> 141 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Tyr His Pro Pro Ser Thr Thr Lys Arg Met Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Cys Lys 35 40 <210> 142 <211> 41 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(41) <223> RABBIT Q95222 <400> 142 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Lys Met Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu His Lys 35 40 <210> 143 <211> 76 <212> PRT <213> Pan troglodytes <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(76) <223> CHIMPANZEE XP_001156459.1 <400> 143 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Gly Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr 35 40 45 Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu 50 55 60 Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys 65 70 75 <210> 144 <211> 90 <212> PRT <213> Macaca mulatta <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(90) <223> RHESUS MONKEY XP_001094129.1 <400> 144 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Gly Pro Lys Thr His Pro Gly Gly Glu Gln Lys Glu Gly Thr 35 40 45 Glu Ala Ser Leu Gln Ile Arg Gly Lys Lys Lys Glu Gln Arg Arg Glu 50 55 60 Ile Gly Ser Arg Asn Ala Glu Cys Arg Gly Lys Lys Gly Lys Trp Arg 65 70 75 80 Thr Gly Gly Leu Ser Arg Gln Arg Gln Gly 85 90 <210> 145 <211> 63 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(60) <223> MOUSE NP_908941.1 <400> 145 Arg Ser Ile Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Ser Pro Ser Leu Ser Thr Asn Lys Lys Thr Lys Leu Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Glu Pro Lys Thr His Pro Glu Gly Glu Gln Glu Glu Val Thr 35 40 45 Glu Ala Thr Arg Lys Ile Arg Gly Pro Arg Glu Lys Arg Leu Gly 50 55 60 <210> 146 <211> 63 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(63) <223> RAT AAA41214 <400> 146 Arg Ser Ile Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Ser Gln Pro Leu Ser Thr His Lys Lys Arg Lys Leu Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Glu Ser Lys Ala His Pro Gly Gly Glu Gln Glu Glu Gly Ala 35 40 45 Glu Ala Thr Gln Lys Ile Arg Gly Asp Arg Glu Arg Arg Pro Ser 50 55 60 <210> 147 <211> 41 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(41) <223> MOUSE AAX61180. <400> 147 Arg Ser Ile Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Ser Pro Ser Leu Ser Thr Asn Lys Lys Thr Lys Leu Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu His Lys 35 40 <210> 148 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Majority consensus sequence for Seq. ID Nos. 149-155. <400> 148 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Lys Thr Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu His 35 40 <210> 149 <211> 39 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(39) <223> HUMAN EAW97695.1 <400> 149 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Lys 20 25 30 Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg 35 <210> 150 <211> 40 <212> PRT <213> Sus scrofa <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(40) <223> PIG AAT47735.1 <400> 150 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Lys Thr Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu His 35 40 <210> 151 <211> 40 <212> PRT <213> Canis familiaris <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(40) <223> DOG IB XP_866946.1 <400> 151 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Ala Gln Lys 1 5 10 15 Tyr His Pro Pro Ser Thr Thr Lys Arg Met Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Cys 35 40 <210> 152 <211> 40 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(40) <223> RABBIT Q95222 <400> 152 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Lys Met Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu His 35 40 <210> 153 <211> 40 <212> PRT <213> Macaca mulatta <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(40) <223> RHESUS MONKEY XP_001094016.1 <400> 153 Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg 35 40 <210> 154 <211> 40 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(40) <223> MOUSE IB AAX61180.1 <400> 154 Arg Ser Ile Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Ser Pro Ser Leu Ser Thr Asn Lys Lys Thr Lys Leu Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu His 35 40 <210> 155 <211> 40 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(40) <223> RAT IB A40912 <400> 155 Arg Ser Ile Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr Gln Lys 1 5 10 15 Ser Gln Pro Leu Ser Thr His Lys Lys Arg Lys Leu Gln Arg Arg Arg 20 25 30 Lys Gly Ser Thr Leu Glu Glu His 35 40 <210> 156 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Majority consensus sequence for Seq. ID Nos. 157-169 <400> 156 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala 20 25 30 Ser Arg Val Asn Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn 65 70 75 80 Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Lys 85 90 95 Gln Ser Ala Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala 100 105 110 Arg Arg Gly Arg Met Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala 115 120 125 Lys Arg His Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala His 130 135 140 Gly Gly Ala Ser Pro Glu Ala Ser Ser Asn Arg Lys 145 150 155 <210> 157 <211> 156 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(156) <223> HUMAN NP_000603.1 <400> 157 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala 20 25 30 Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn 65 70 75 80 Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Lys 85 90 95 Gln Ser Thr Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala 100 105 110 Arg Arg Gly His Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala 115 120 125 Lys Arg His Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala His 130 135 140 Gly Gly Ala Pro Pro Glu Met Ala Ser Asn Arg Lys 145 150 155 <210> 158 <211> 157 <212> PRT <213> Sus scrofa <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(157) <223> PIG NP_999048.1 <400> 158 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala 20 25 30 Ser Arg Val Asn Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn 65 70 75 80 Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Arg Tyr Asp Thr Trp Lys 85 90 95 Gln Ser Ala Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala 100 105 110 Arg Arg Gly Arg Thr Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Val Arg Glu Ala 115 120 125 Lys Arg His Arg Pro Leu Thr Ala Arg Pro Thr Arg Asp Pro Ala Ala 130 135 140 His Gly Gly Ala Ser Pro Glu Ala Ser Gly His Arg Lys 145 150 155 <210> 159 <211> 155 <212> PRT <213> Bos taurus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(155) <223> CATTLE NP_776512.2 <400> 159 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ser 20 25 30 Ser Arg Ile Asn Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Ala Ser Thr Thr Val Leu Pro Asp Asp 65 70 75 80 Val Thr Ala Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Ile Trp Lys 85 90 95 Gln Ser Thr Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Phe Leu Arg Ala 100 105 110 Arg Arg Gly Arg Thr Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Leu Arg Glu Ala 115 120 125 Lys Ser His Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala Thr 130 135 140 His Gly Gly Ala Ser Ser Lys Ala Ser Ser Asp 145 150 155 <210> 160 <211> 155 <212> PRT <213> Ovis aries <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(155) <223> SHEEP NP_001009311.1 <400> 160 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ser 20 25 30 Ser Arg Ile Asn Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Ala Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Ala Ser Thr Thr Val Leu Pro Asp Asp 65 70 75 80 Phe Thr Ala Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Ser Asp Thr Trp Lys 85 90 95 Gln Ser Thr Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Phe Leu Arg Ala 100 105 110 Arg Arg Gly Arg Thr Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Leu Arg Glu Ala 115 120 125 Lys Ser His Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala Thr 130 135 140 His Gly Gly Ala Ser Ser Glu Ala Ser Ser Asp 145 150 155 <210> 161 <211> 158 <212> PRT <213> Canis familiaris <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(158) <223> DOG ISO1 XP_540785.2 <400> 161 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ala 20 25 30 Ser Arg Val Thr Arg Arg Ser Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp 65 70 75 80 Asn Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp 85 90 95 Lys Gln Ser Ala Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg 100 105 110 Ala Arg Arg Gly Arg Met Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu 115 120 125 Ala Lys Arg His Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr His Asp Pro Ala 130 135 140 Thr His Gly Gly Ala Ser Pro Glu Ala Ser Gly Asn Gln Lys 145 150 155 <210> 162 <211> 161 <212> PRT <213> Canis familiaris <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(161) <223> DOG ISO2 XP_851137.1 <400> 162 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Asp Leu Ser 20 25 30 Arg Pro Ala Ser Arg Val Thr Arg Arg Ser Ser Arg Gly Ile Val Glu 35 40 45 Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys 50 55 60 Ala Thr Pro Ala Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val 65 70 75 80 Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr 85 90 95 Asp Thr Trp Lys Gln Ser Ala Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala 100 105 110 Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly Arg Met Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala 115 120 125 Phe Arg Glu Ala Lys Arg His Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr His 130 135 140 Asp Pro Ala Thr His Gly Gly Ala Ser Pro Glu Ala Ser Gly Asn Gln 145 150 155 160 Lys <210> 163 <211> 170 <212> PRT <213> Canis familiaris <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(170) <223> DOG ISO3 XP_863200.1 <400> 163 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Asp Ala Ala 20 25 30 Leu Leu Pro Pro Val Gly Leu Pro Gly Arg Pro Ala Ser Arg Val Thr 35 40 45 Arg Arg Ser Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys 50 55 60 Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala Lys Ser Glu 65 70 75 80 Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg 85 90 95 Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Lys Gln Ser Ala 100 105 110 Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly 115 120 125 Arg Met Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala Lys Arg His 130 135 140 Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr His Asp Pro Ala Thr His Gly Gly 145 150 155 160 Ala Ser Pro Glu Ala Ser Gly Asn Gln Lys 165 170 <210> 164 <211> 164 <212> PRT <213> Gallus gallus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(164) <223> REDJUNGLEFOWL XP_421026.2 <400> 164 Ala Tyr Gly Thr Ala Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Val 20 25 30 Gly Arg Asn Asn Arg Arg Ile Asn Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Lys Ser 50 55 60 Val Lys Ser Glu Arg Asp Leu Ser Ala Thr Ser Leu Ala Gly Leu Pro 65 70 75 80 Ala Leu Asn Lys Glu Ser Phe Gln Lys Pro Ser His Ala Lys Tyr Ser 85 90 95 Lys Tyr Asn Val Trp Gln Lys Lys Ser Ser Gln Arg Leu Gln Arg Glu 100 105 110 Val Pro Gly Ile Leu Arg Ala Arg Arg Tyr Arg Trp Gln Ala Glu Gly 115 120 125 Leu Gln Ala Ala Glu Glu Ala Arg Ala Met His Arg Pro Leu Ile Ser 130 135 140 Leu Pro Ser Gln Arg Pro Pro Ala Pro Arg Ala Ser Pro Glu Ala Thr 145 150 155 160 Gly Pro Gln Glu <210> 165 <211> 156 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(156) <223> RAT NP_113699.1 <400> 165 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Ser Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Asn Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr Ser Gln Ala Val Leu Pro Asp Asp 65 70 75 80 Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Lys Phe Asp Thr Trp Arg 85 90 95 Gln Ser Ala Gly Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala 100 105 110 Arg Arg Gly Arg Met Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala 115 120 125 Lys Arg His Arg Pro Leu Ile Val Leu Pro Pro Lys Asp Pro Ala His 130 135 140 Gly Gly Ala Ser Ser Glu Met Ser Ser Asn His Gln 145 150 155 <210> 166 <211> 156 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(156) <223> MOUSE NP_034644.1 <400> 166 Ala Tyr Gly Pro Gly Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Ser Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Asn Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys Phe 35 40 45 Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr Cys Ala Thr Pro Ala 50 55 60 Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Thr Ser Gln Ala Val Leu Pro Asp Asp 65 70 75 80 Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Arg 85 90 95 Gln Ser Ala Gly Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala 100 105 110 Arg Arg Gly Arg Met Leu Ala Lys Glu Leu Lys Glu Phe Arg Glu Ala 115 120 125 Lys Arg His Arg Pro Leu Ile Val Leu Pro Pro Lys Asp Pro Ala His 130 135 140 Gly Gly Ala Ser Ser Glu Met Ser Ser Asn His Gln 145 150 155 <210> 167 <211> 160 <212> PRT <213> Pan troglodytes <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(160) <223> CHIMPANZEE XP_001153640.1 <400> 167 Ala Tyr Arg Pro Ser Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Lys Ala Ser 20 25 30 Thr Pro Ala Ala Phe Pro Ile Thr Arg Pro Leu Arg Arg Val Gly Gln 35 40 45 Arg Cys Cys Arg Gly Gly Cys Pro Pro Ala Asp Leu Arg Asp Ala Ser 50 55 60 Ala Phe Pro Arg Arg Glu Ser Arg His Leu Leu Thr Ser Pro Phe Pro 65 70 75 80 Ser Gln Asp Asn Phe Pro Arg Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr 85 90 95 Asp Thr Trp Lys Gln Ser Thr Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala 100 105 110 Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly His Met Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala 115 120 125 Phe Arg Glu Ala Lys Arg His Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln 130 135 140 Asp Pro Ala His Gly Gly Ala Pro Pro Glu Met Ala Ser Asn Arg Lys 145 150 155 160 <210> 168 <211> 167 <212> PRT <213> Danio rerio <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(166) <223> ZEBRAFISH ISO1 XP_001338042.1 <400> 168 Glu Val Ala Ser Ala Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Ala 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Glu Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Ser Arg Pro Thr 20 25 30 Ser Arg Ser Asn Ser Arg Arg Ser Gln Asn Arg Gly Ile Val Glu Glu 35 40 45 Cys Cys Phe Ser Ser Cys Asn Leu Ala Leu Leu Glu Gln Tyr Cys Ala 50 55 60 Lys Pro Ala Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Ala Thr Ser Leu Gln Val 65 70 75 80 Ile Pro Val Met Pro Ala Leu Lys Gln Glu Val Pro Arg Lys His Val 85 90 95 Thr Val Lys Tyr Ser Lys Tyr Asp Val Trp Gln Arg Lys Ala Ala Gln 100 105 110 Arg Leu Arg Arg Gly Ile Pro Ala Ile Leu Arg Ala Lys Lys Phe Arg 115 120 125 Arg Gln Ala Glu Arg Ile Lys Ala Gln Glu Gln Leu Leu His His Arg 130 135 140 Pro Leu Ile Thr Leu Pro Ser Lys Leu Pro Pro Ile Leu Leu Pro Thr 145 150 155 160 Glu Asn Tyr Val Ser His Lys 165 <210> 169 <211> 161 <212> PRT <213> Danio rerio <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(167) <223> ZEBRAFISH ISO2B NP_571508.1 <400> 169 Asn Val Thr Ala Gly Glu Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr 1 5 10 15 Leu Gln Phe Val Cys Gly Glu Asp Gly Phe Tyr Ile Ser Arg Pro Asn 20 25 30 Arg Ser Asn Ser Arg Arg Pro Gln Arg Gly Ile Val Glu Glu Cys Cys 35 40 45 Phe Arg Ser Cys Glu Leu His Leu Leu Gln Gln Tyr Cys Ala Lys Pro 50 55 60 Val Lys Ser Glu Arg Asp Val Ser Ser Thr Ser Leu Gln Val Phe Pro 65 70 75 80 Val Ser Gln Ala Leu His Lys Asp Thr Ile Asn Val Lys Tyr Ser Lys 85 90 95 Tyr Glu Val Trp Gln Gln Lys Ala Ala Gln Arg Leu Arg Arg Gly Val 100 105 110 Pro Ser Ile Leu Leu Ala Arg Lys Phe Arg Arg Gln Met Glu Lys Ile 115 120 125 Gln Asp Glu Glu Gln Thr Ser Phe His Arg Pro Leu Met Thr Leu Pro 130 135 140 Asn Arg Gln Pro Ala Ile Val Pro His Val Gln Ile Ser Thr Ser Arg 145 150 155 160 Lys <210> 170 <211> 89 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Majority consensus sequence for Seq. ID Nos. 171-180. <400> 170 Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg 1 5 10 15 Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Lys Gln Ser Ala 20 25 30 Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly 35 40 45 Arg Met Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala Lys Arg His 50 55 60 Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala His Gly Gly Ala 65 70 75 80 Ser Pro Glu Ala Ser Ser Asn Arg Lys 85 <210> 171 <211> 90 <212> PRT <213> Sus scrofa <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(90) <223> PIG NP_999048.1 <400> 171 Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg 1 5 10 15 Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Arg Tyr Asp Thr Trp Lys Gln Ser Ala 20 25 30 Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly 35 40 45 Arg Thr Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Val Arg Glu Ala Lys Arg His 50 55 60 Arg Pro Leu Thr Ala Arg Pro Thr Arg Asp Pro Ala Ala His Gly Gly 65 70 75 80 Ala Ser Pro Glu Ala Ser Gly His Arg Lys 85 90 <210> 172 <211> 88 <212> PRT <213> Bos taurus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(88) <223> CATTLE NP_776512.2 <400> 172 Arg Asp Val Ser Ala Ser Thr Thr Val Leu Pro Asp Asp Val Thr Ala 1 5 10 15 Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Ile Trp Lys Gln Ser Thr 20 25 30 Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Phe Leu Arg Ala Arg Arg Gly 35 40 45 Arg Thr Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Leu Arg Glu Ala Lys Ser His 50 55 60 Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala Thr His Gly Gly 65 70 75 80 Ala Ser Ser Lys Ala Ser Ser Asp 85 <210> 173 <211> 88 <212> PRT <213> Ovis aries <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(88) <223> SHEEP NP_001009311.1 <400> 173 Arg Asp Val Ser Ala Ser Thr Thr Val Leu Pro Asp Asp Phe Thr Ala 1 5 10 15 Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Ser Asp Thr Trp Lys Gln Ser Thr 20 25 30 Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Phe Leu Arg Ala Arg Arg Gly 35 40 45 Arg Thr Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Leu Arg Glu Ala Lys Ser His 50 55 60 Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala Thr His Gly Gly 65 70 75 80 Ala Ser Ser Glu Ala Ser Ser Asp 85 <210> 174 <211> 90 <212> PRT <213> Canis familiaris <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(90) <223> DOG ISO1 XP_540785.2 <400> 174 Arg Asp Val Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Pro Asp Asn Phe Pro Arg 1 5 10 15 Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Lys Gln Ser Ala 20 25 30 Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly 35 40 45 Arg Met Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala Lys Arg His 50 55 60 Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr His Asp Pro Ala Thr His Gly Gly 65 70 75 80 Ala Ser Pro Glu Ala Ser Gly Asn Gln Lys 85 90 <210> 175 <211> 96 <212> PRT <213> Gallus gallus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(96) <223> REDJUNGLEFOWL XP_421026.2 <400> 175 Arg Asp Leu Ser Ala Thr Ser Leu Ala Gly Leu Pro Ala Leu Asn Lys 1 5 10 15 Glu Ser Phe Gln Lys Pro Ser His Ala Lys Tyr Ser Lys Tyr Asn Val 20 25 30 Trp Gln Lys Lys Ser Ser Gln Arg Leu Gln Arg Glu Val Pro Gly Ile 35 40 45 Leu Arg Ala Arg Arg Tyr Arg Trp Gln Ala Glu Gly Leu Gln Ala Ala 50 55 60 Glu Glu Ala Arg Ala Met His Arg Pro Leu Ile Ser Leu Pro Ser Gln 65 70 75 80 Arg Pro Pro Ala Pro Arg Ala Ser Pro Glu Ala Thr Gly Pro Gln Glu 85 90 95 <210> 176 <211> 89 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(89) <223> RAT NP_113699.1 <400> 176 Arg Asp Val Ser Thr Ser Gln Ala Val Leu Pro Asp Asp Phe Pro Arg 1 5 10 15 Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Lys Phe Asp Thr Trp Arg Gln Ser Ala 20 25 30 Gly Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly 35 40 45 Arg Met Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala Lys Arg His 50 55 60 Arg Pro Leu Ile Val Leu Pro Pro Lys Asp Pro Ala His Gly Gly Ala 65 70 75 80 Ser Ser Glu Met Ser Ser Asn His Gln 85 <210> 177 <211> 89 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(89) <223> MOUSE NP_034644.1 <400> 177 Arg Asp Val Ser Thr Ser Gln Ala Val Leu Pro Asp Asp Phe Pro Arg 1 5 10 15 Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Arg Gln Ser Ala 20 25 30 Gly Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly 35 40 45 Arg Met Leu Ala Lys Glu Leu Lys Glu Phe Arg Glu Ala Lys Arg His 50 55 60 Arg Pro Leu Ile Val Leu Pro Pro Lys Asp Pro Ala His Gly Gly Ala 65 70 75 80 Ser Ser Glu Met Ser Ser Asn His Gln 85 <210> 178 <211> 89 <212> PRT <213> Pan troglodytes <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(89) <223> CHIMPANZEE XP_001153640.1 <400> 178 Arg His Leu Leu Thr Ser Pro Phe Pro Ser Gln Asp Asn Phe Pro Arg 1 5 10 15 Tyr Pro Val Gly Lys Phe Phe Gln Tyr Asp Thr Trp Lys Gln Ser Thr 20 25 30 Gln Arg Leu Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Leu Arg Ala Arg Arg Gly 35 40 45 His Met Leu Ala Lys Glu Leu Glu Ala Phe Arg Glu Ala Lys Arg His 50 55 60 Arg Pro Leu Ile Ala Leu Pro Thr Gln Asp Pro Ala His Gly Gly Ala 65 70 75 80 Pro Pro Glu Met Ala Ser Asn Arg Lys 85 <210> 179 <211> 97 <212> PRT <213> Danio rerio <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(97) <223> ZEBRAFISH ISO1 XP_001338042.1 <400> 179 Arg Asp Val Ser Ala Thr Ser Leu Gln Val Ile Pro Val Met Pro Ala 1 5 10 15 Leu Lys Gln Glu Val Pro Arg Lys His Val Thr Val Lys Tyr Ser Lys 20 25 30 Tyr Asp Val Trp Gln Arg Lys Ala Ala Gln Arg Leu Arg Arg Gly Ile 35 40 45 Pro Ala Ile Leu Arg Ala Lys Lys Phe Arg Arg Gln Ala Glu Arg Ile 50 55 60 Lys Ala Gln Glu Gln Leu Leu His His Arg Pro Leu Ile Thr Leu Pro 65 70 75 80 Ser Lys Leu Pro Pro Ile Leu Leu Pro Thr Glu Asn Tyr Val Ser His 85 90 95 Lys <210> 180 <211> 93 <212> PRT <213> Danio rerio <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(93) <223> ZEBRAFISH ISO2B NP_571508.1 <400> 180 Arg Asp Val Ser Ser Thr Ser Leu Gln Val Phe Pro Val Ser Gln Ala 1 5 10 15 Leu His Lys Asp Thr Ile Asn Val Lys Tyr Ser Lys Tyr Glu Val Trp 20 25 30 Gln Gln Lys Ala Ala Gln Arg Leu Arg Arg Gly Val Pro Ser Ile Leu 35 40 45 Leu Ala Arg Lys Phe Arg Arg Gln Met Glu Lys Ile Gln Asp Glu Glu 50 55 60 Gln Thr Ser Phe His Arg Pro Leu Met Thr Leu Pro Asn Arg Gln Pro 65 70 75 80 Ala Ile Val Pro His Val Gln Ile Ser Thr Ser Arg Lys 85 90 <210> 181 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)...(16) <223> HIGF-1-EC: P2, E3; R37A; R71, S72 <400> 181 Gly Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys 1 5 10 15 Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Arg Ala Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg 35 40 45 Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro 50 55 60 Ala Lys Ser Ala Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp Met Pro Lys Thr 65 70 75 80 Gln Lys Tyr Gln Pro Pro Ser Thr Asn Lys Asn Thr Lys Ser Gln Arg 85 90 95 Arg Lys Gly Ser Thr Phe Glu Glu Arg Lys 100 105

Claims (27)

  1. 변형된 IGF-1 및 변형된 Ea-펩티드로 이루어져 있으며, 여기서 아미노산 G1, P2 및 E3이 결실되거나 또는 아미노산 E3 만이 결실되며, 아미노산 R37이 알라닌으로 돌연변이되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실되며, 상기 아미노산 G1, P2, E3, R37, R71 및 S72의 넘버링은 서열 5에 해당하는 것인 인간 IGF-1 전구체 단백질.
  2. 제1항에 있어서, 아미노산 G1, P2 및 E3이 결실되고, 아미노산 R37이 알라닌으로 돌연변이되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실된 인간 IGF-1 전구체 단백질.
  3. 제1항에 있어서, 아미노산 E3이 결실되고, 아미노산 R37이 알라닌으로 돌연변이되고, 아미노산 R71 및 S72가 결실된 인간 IGF-1 전구체 단백질.
  4. 서열 53의 서열로 이루어진 폴리펩티드.
  5. 서열 53의 서열로 이루어진 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  6. 전구체 단백질의 측쇄에 공유 부착된 폴리(에틸렌 글리콜) 부분을 포함하는, 서열 53의 서열로 이루어진 폴리펩티드.
  7. 서열 8의 서열로 이루어진 폴리펩티드.
  8. 서열 8의 서열로 이루어진 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  9. 전구체 단백질의 측쇄에 공유 부착된 폴리(에틸렌 글리콜) 부분을 포함하는, 서열 8의 서열로 이루어진 폴리펩티드.
  10. 치료 유효량의 제1항 내지 제4항, 제6항, 제7항 및 제9항 중 어느 한 항의 인간 IGF-1 전구체 단백질 또는 폴리펩티드를 포함하는, 근골격계 질환, 당뇨병, 근위축성 측상 경화증 (ALS), 뇌 위축증, 치매 또는 빈혈을 치료하기 위한 제약 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 폴리펩티드가 전구체 단백질에 공유 부착된 폴리(에틸렌 글리콜) 부분을 더 포함하는 것인 제약 조성물.
  12. 제10항에 있어서, 근골격계 질환이 근 위축증인 제약 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 근 위축증이 화상 손상 또는 만성 폐쇄성 폐 질환의 결과인 제약 조성물.
  14. 제1항 내지 제4항, 제7항 및 제9항 중 어느 한 항의 인간 IGF-1 전구체 단백질 또는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산.
  15. 제14항에 따른 핵산을 포함하는 벡터.
  16. 제15항에 따른 벡터로 형질감염된 세포.
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