KR101418979B1 - 콜라겐 형성 촉진용 조성물 및 그를 이용한 화장품 - Google Patents

Abstract

본 발명은 프란게니딘(prangenidin) 및 진세노사이드 Re(ginsenoside Re)를 포함하는 콜라겐 형성 촉진용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 우수한 콜라겐 형성 촉진능을 가지며, 특히 유효성분이 소량 포함되는 경우에도 상기 효능이 우수하게 발휘된다는 장점이 있다. 이에 따라 본 발명의 조성물은 콜라겐 감소와 관련된 주름 발생의 억제 및 개선 능력이 뛰어나며, 또한 피부에 발생한 상처의 치유 효능이 우수하다. 추가로 본 발명의 조성물은 소량의 유효성분으로도 탁월한 효능을 발휘하기 때문에, 예를 들면 화장품 등에 적용될 때에 용제로의 용해성 등의 제한이 없이 각종의 다양한 제형으로 활용할 수가 있어서 응용 범위가 넓어진다는 장점을 가진다.

프란게니딘, 진세노사이드 Re, 콜라겐, 주름, 화장품

Description

콜라겐 형성 촉진용 조성물 및 그를 이용한 화장품 {Compositions for promotion of collagen synthesis and cosmetics using the same}

본 발명은 프란게니딘(prangenidin) 및 진세노사이드 Re (ginsenoside Re)를 포함하는 콜라겐 형성 촉진용 조성물 및 상기를 포함하는 화장품에 관한 것이다.

세포외기질(extracellular matrix)의 주요 구성 성분인 콜라겐은 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로서 세포외간질에 존재한다. 상기 콜라겐은 생체 단백질 총 중량의 약 30%를 차지하는 중요한 단백질로서 견고한 3중 나선구조를 가지고 있다. 콜라겐은 피부, 힘줄(tendon), 뼈 및 치아의 유기 물질의 대부분을 형성하는데, 특히 뼈와 피부(진피)에 많이 포함되어 있고, 다른 구조물에서는 주로 섬유상 봉입체로서 존재한다.

콜라겐은 비교적 약한 면역원인데, 그 원인 중 하나는 콜라겐의 나선 구조에 의한 잠재성 항원 결정인자의 차폐이다. 상기 나선 구조는 또한 콜라겐이 단백질 분해에 대한 내성을 갖도록 한다. 콜라겐의 주된 기능으로는 피부의 기계적 견고 성, 결합조직의 저항력 및 조직의 결합력, 세포 접착의 지탱, 세포 분할과 분화(유기체의 성장 혹은 상처 치유 시)의 유도 등이 알려져 있다(Van der Rest 등, Ann NY Acad Sci, 1990). 상기와 같은 콜라겐은 연령 증가 및 자외선 조사에 의한 광노화 등에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다 (Arthur K. Balin et al., Aging and the skin, 1989).

콜라겐은 또한 상처 치유에 있어서도 중요한 역할을 담당하며, 따라서 손상된 상피에서 콜라겐의 합성을 촉진시키면 상처를 신속하게 흉터 없이 회복시킬 수 있다.

이에 따라 콜라겐의 피부 보습 효과 및 상처 치유 효과를 이용하기 위하여 화장품 또는 연고 등과 같은 피부 외용제 조성물에 콜라겐을 배합한 제품들이 다수 출시되어 있다. 이들 제품들은 콜라겐 자체를 피부 표면에 도포하는 것인데, 고분자 물질인 콜라겐의 경피 흡수가 어려워 보습작용 또는 상처치유 효과를 기대할 수 없으므로 본질적인 피부기능 개선 및 상처치유의 기능을 나타내지 못한다.

이에 따라 콜라겐 합성 촉진 물질에 대한 관심이 높아졌으며, 종래에 알려진 콜라겐 합성 촉진 물질로는 비타민 C, 레티노산 (retinoic acid) 및 발암증식인자 (TGF: transforming growth factor, Cardinale G. et al, Adv. Enzymol., 41, p. 425, 1974) 등이 있다.

이외에도 일본특허공개공보 평8-231370호에서는 콜라겐 합성 물질로서, 동물 태반 유래의 단백질을 개시하고, 일본특허공개공보 평8-208424호에서는 베툴린산, 일본특허공개공보 평9-40523호 및 평10-36283호에서는 섬유아세포 증식 촉진 작용 을 나타내는 클로렐라 추출물 등을 개시하고 있다.

그러나, 전술한 종래의 물질들은 모두 피부 적용 시 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나, 효과가 미미하여 실질적으로 피부 기능 개선 또는 상처 치유의 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있으며, 이에 따라 기존의 피부 외용제 조성물보다 생체에 안전하고 효과가 높은 새로운 피부 외용제 조성물의 개발이 요구되고 있다.

본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점을 고려하여 이루어진 것으로, 생체에 대한 우수한 안정성 및 뛰어난 콜라겐 형성 촉진 효과를 가지며, 용제로의 용해성 등 가공성이 우수하여 다양한 제형으로 응용 가능한 콜라겐 형성 촉진용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 상기 과제를 해결하기 위한 수단으로서,

프란게니딘 및 진세노사이드 Re를 포함하는 콜라겐 형성 촉진용 조성물을 제공한다.

상기 본 발명의 조성물에서 프란게니딘은 조성물 내에 1 × 10^-5 내지 10 중량부의 양으로 포함되는 것이 바람직하고, 진세노사이드 Re는 조성물 내에 1 × 10^-5 내지 10 중량부의 양으로 포함되는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 조성물에서는 프란게니딘에 대한 진세노사이드 Re의 중량비(진세노사이드 Re/프란게니딘)가 1 내지 100의 범위에 있는 것이 바람직하고, 5 내지 30의 범위에 있는 것이 보다 바람직하다.

본 발명은 또한 상기 과제를 해결하기 위한 다른 수단으로서,

본 발명에 따른 조성물을 포함하는 주름 개선 또는 주름 생성 억제용 화장품을 제공한다.

상기 본 발명의 화장품의 제형은 제형이 분말제, 겔제, 분무제, 연고제, 크림제, 액제, 피부 점착타입 제형, 크림, 폼, 화장수, 팩, 유연수, 유액, 파운데이션, 메이크업베이스, 엣센스, 비누, 액체세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일 또는 분사형 액제일 수 있다.

또한 본 발명의 화장품은 항생제, 결합제, 붕해제, 희석제, 활택제, 안정제, 보존료, 향료, 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소 및 방부제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 우수한 콜라겐 형성 촉진능 및 교원질 분해효소 (collagenase) 억제능을 가지며, 특히 유효성분이 소량 포함되는 경우에도 상기 효능이 우수하게 발휘된다는 장점이 있다. 이에 따라 본 발명의 조성물은 콜라겐의 감소와 관련된 주름 발생의 억제 및 개선 능력이 뛰어나며, 또한 피부에 발생한 상처의 치유 효능도 우수하다. 추가로 본 발명의 조성물은 소량의 유효성분으로도 우수한 효능을 발휘하기 때문에, 예를 들면 화장품 등에 적용될 때에 용제로의 용해성 등의 제한이 없이 다양한 제형으로 활용될 수 있고, 이에 따라 응용 범위가 넓어진다는 장점을 가진다.

본 발명은 프란게니딘(prangenidin) 및 진세노사이드 Re(ginsenoside Re)를 포함하는 콜라겐 형성 촉진용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 우수한 콜라겐 형성 촉진능 및 교원질 분해효소(collagenase) 억제능을 가지며, 특히 소량의 유효성분으로도 상기 효능이 우수하게 발휘된다는 장점이 있다. 이에 따라 본 발명의 조성물은 콜라겐의 감소와 관련된 주름 발생의 억제 및 개선 능력이 뛰어나며, 피부에 발생한 상처의 치유 효능도 우수하다. 추가로 본 발명의 조성물은 소량의 유효성분으로도 우수한 효능을 발휘하기 때문에, 화장품 등에 적용될 때에 가공성이 탁월하여 각종의 다양한 제형으로 활용할 수가 있고, 이에 따라 응용 범위가 넓어진다는 장점을 가진다.

이하 본 발명의 콜라겐 형성 촉진용 조성물에 대하여 상세히 설명한다.

본 발명의 콜라겐 형성 촉진용 조성물은 프란게니딘 및 진세노사이드 Re를 포함하고, 이 때 프란게니딘으로는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 사용하는 것이 바람직하다.

[화학식 1]

상기 화학식 1로 표시되는 프란게니딘은 생체에 안전성을 가지면서, 피부 섬유아세포의 콜라겐 및 히알루로닉산 (hyaluronic acid) 합성(HAS2 mRNA 발현 증진 효과)을 촉진하는 효과가 뛰어나지만, 용제에 대한 용해도가 떨어져 화장품 등으로의 응용이 매우 제한된다. 그러나, 본 발명에서는 진세노사이드 Re의 병용을 통하여, 상기를 소량 사용하면서도 우수한 콜라겐 형성 촉진능을 나타낼 수 있다. 이에 따라 예를 들어 본 발명의 조성물이 화장품으로서 사용될 경우에 용해성 등의 문제를 해결할 수 있고, 우수한 주름 개선 및 상처 치유 효과를 나타내어 피부의 탄력을 유지시켜 줄 수 있다.

상기와 같은 프란게니딘은 이 분야에서 공지된 각종의 유기 화학적 방법 등을 통하여 합성할 수 있으며, 또한 식물 등으로부터 용이하게 수득할 수 있다. 프 란게니딘은 특히 구릿대와 같은 산형목과 식물의 뿌리에 많이 존재하는데, 이로부터 프란게니딘을 추출하는 방법은 특별히 한정되지 않고, 이 분야에서 공지된 각종의 추출법을 제한 없이 적용할 수 있다. 예를 들면, 산형목과 식물인 구릿대의 뿌리(백지)를 잘게 잘라서 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤 및 클로로포름으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 용매에 첨가하고, 가온 추출하여, 용매 분획한 후, 재결정화함으로써 얻을 수 있다.　

본 발명의 조성물은 또한 진세노사이드 Re를 포함하며, 이 때 진세노사이드 Re로는 하기 화학식 2로 표시되는 화합물을 사용하는 것이 바람직하다.

[화학식 2]

상기와 같은 진세노사이드 Re 역시 생체 안정성 및 콜라겐 합성 촉진능이 우수하다. 또한 상기 진세노사이드 Re는 콜라겐 분해 효소인 교원질 분해효소의 활성을 억제하는 효과를 나타내므로, 본 발명에 포함되어 조성물의 콜라겐 형성 촉진능을 향상시킨다. 이에 따라 예를 들어 본 발명의 조성물이 화장품으로서 사용될 경우 피부 주름의 개선 효과를 상승시켜 피부의 탄력을 향상시키는 역할을 하게 된다.

이와 같은 진세노사이드 Re는 이 분야에서 공지된 각종의 유기 화학적 방법 등을 통하여 화학적으로 합성할 수 있으며, 또한 프란게니딘과 같이 식물 등으로부터 용이하게 수득할 수 있다. 상기 진세노사이드 Re는 특히 인삼 또는 홍삼 등에 많이 존재하는데, 이로부터 목적 화합물을 추출하는 방법은 특별히 한정되지 않고, 이 분야에서 공지된 각종의 추출법을 제한 없이 적용할 수 있다. 이러한 방법의 예로는 인삼 등을 잘게 잘라서 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤 및/또는 클로로포름을 포함하는 용매에 첨가하고, 가온 추출하여 용매 분획한 후, 분리 정제 공정을 거치는 방법을 들 수 있다.　

본 발명의 콜라겐 형성 촉진용 조성물은 전술한 바와 같은 프란게니딘 및 진세노사이드 Re를 포함하며, 이를 통하여 유효 성분이 소량 포함되면서도 우수한 콜라겐 형성 촉진능을 발휘할 수 있다는 장점을 가진다. 구체적으로 본 발명의 조성물에서는 상기 프란게니딘 및 진세노사이드 Re가 전체 조성물 100 중량부에 대하여 각각 1 × 10^-5 내지 10 중량부의 양으로 포함되는 것이 바람직하며, 1 × 10^-5 내지 5 중량부의 양으로 포함되는 것이 보다 바람직하다. 상기 함량이 1 × 10^-5 중량부 미만이면 콜라겐 형성 촉진능이 저하될 우려가 있고, 10 중량부를 초과하면 용제로의 용해성 등 조성물의 전체적인 가공성이 떨어져, 후술하는 화장품 제형 등 각종 용도로의 사용이 제한될 우려가 있다.

본 발명에서는 또한 상기 프란게니딘 및 진세노사이드 Re의 중량비(진세노사이드 Re/프란게니딘)가 1 내지 100인 것이 바람직하고, 5 내지 30인 것이 보다 바람직하다. 상기 중량비가 1 미만이거나, 100을 초과하면, 콜라겐 합성효과의 상승효과가 미미해질 우려가 있다.

본 발명의 콜라겐 형성 촉진용 조성물에서 상기 유효 성분 외의 첨가물은 특별히 한정되지 않으며, 이 분야에서 통상 사용되는 것을 제한 없이 사용할 수 있다. 예를 들면, 상기 조성물이 의학적인 용도로 사용되는 경우에 약제학적으로 허용되는 통상의 담체가 포함될 수 있으며, 화장품 등에 적용될 경우에는 화장품 분야에서 통용되는 통상의 첨가제가 제한 없이 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 전술한 본 발명의 조성물을 포함하는 주름 개선 개선 및 억제용 화장품에 관한 것이다. 전술한 바와 같이 본 발명의 콜라겐 형성 촉진용 조성물은 인체로의 안정성 및 콜라겐 형성능이 매우 우수하여, 콜라겐의 감소가 주요한 원인이 되는 주름 발생의 억제 및 치료 효과가 우수하고, 이에 따라 화장품으로 적용되어 피부의 탄력 유지, 상처 치유 및 보습 효과를 높일 수 있다.

상기와 같은 본 발명의 화장품은 본 발명의 콜라겐 형성 촉진용 조성물을 유효 성분으로 하여, 화장품 분야에서 일반적으로 사용되는 제조법으로 제조할 수 있으며, 그 방법은 특별히 한정되지 않는다.

본 발명의 콜라겐 형성 촉진용 조성물이 화장품으로 적용될 때 그 제형은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면, 본 발명의 화장품은 분말제, 겔제, 분무제, 연고제, 크림제, 액제 또는 피부 점착타입 등의 화장료 제형; 크림, 폼, 화장수, 팩, 유연수, 유액, 파운데이션, 메이크업베이스, 엣센스, 비누, 액체세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일 및/또는 분사형 액제로 제조될 수 있다. 상기 각각의 제형 에서 첨가되는 첨가물 역시 특별히 한정되지 않으며, 화장품 분야에서 일반적으로 사용되는 첨가물을 그 용도에 따라 적절히 첨가할 수 있다. 화장품 분야의 일반적인 첨가물의 예로는 항생제, 결합제, 붕해제, 희석제, 활택제, 안정제, 보존료, 향료, 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소 및 방부제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 들 수 있다.

이하, 본 발명에 따르는 실시예 및 본 발명에 따르지 않는 비교예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 본 발명의 범위에 이하 제시된 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.

제조예 1: 프란게니딘의 제조

(1) 메탄올을 이용한 프란게니딘의 추출

백지(Angelica dahurica 또는 Angelica dahurica var. formosana)의 건조된 뿌리 1 kg을 메탄올 10 L에 넣고, 환류 냉각기가 장착된 추출기에서 80℃로 3시간 가온 추출하여, 메탄올 추출액 85 g을 얻었다.　 상기 메탄올 추출액으로부터 용매분획을 통하여 헥산 분획을 제거하여 얻어진 분획을 클로로포름으로 3회 분획하여 클로로포름 분획 9 g을 얻었다.　 상기 수회의 실리카 컬럼 크로마토그라피 (Silica column chromatography) 처리를 통하여, 상기 클로로포름 분획으로부터 프란게니딘을 포함하는 분획 0.3g을 수득하였다. 이어서 상기 분획에 분취용 HPLC(Prep- HPLC) 및 재결정 처리를 하여 목적 화합물인 프란게니딘을 얻었다.　 핵자기공명 (NMR) 및 질량분석 (Mass spectroscopy)을 통하여 수득된 프란게니딘의 성분과 함량(99.7중량%)을 확인하였으며, 이를 각각 도 1 내지 3 에 나타내었다. 도 1 및 2는 각각 수득된 프란게니딘의 ¹H-NMR　스펙트럼 및 ¹³C-NMR 스펙트럼을 나타내며, 도 3는 프란게니딘의 질량분광 스펙트럼을 나타낸다.

(2) 클로로포름을 이용한 프란게니딘의 추출

백지의 건조된 뿌리 1 kg을 클로로포름 10 L에 넣고 환류 냉각기가 장착된 추출기에서 100℃로 3시간 동안 가온 추출하여 클로로포름 추출액 12 g을 얻었다.　 얻어진 추출액을 클로로포름에 녹이고 알카리 수용액(0.1M NaOH 수용액)으로 용매 분획하여 알카리 수용액 가용부를 얻은 후, HCl로 중화시켰다. 클로로포름으로 용매 분획하여 얻은 클로로포름 분획 1 g에 분취용 HPLC(Prep-HPLC) 및 재결정 처리를 행하여 목적 화합물(프란게니딘)을 수득하였다.　　 핵자기공명(NMR) 및 질량분석 (Mass spectroscopy)을 통하여 수득된 화합물의 성분과 함량(99.7중량%)을 확인하였다.

(3) 메탄올을 이용한 임페라토린 ( imperatorin ) 및 크니디린(cnidirin)의 추출 및 화학 변형

백지의 건조된 뿌리 1 kg을 메탄올 10 L에 넣고, 환류 냉각기가 장착된 추출 기에서 80℃로 3시간 동안 가온 추출하여 메탄올 추출액 85 g을 얻었다.　 상기 추출액을 클로로포름으로 3회 분획하여 11 g의 클로로포름 분획을 얻은 후, 실리카 컬럼 크로마토그라피(Silica column chromatography)를 통하여 클로로포름 분획으로부터 백지의 주성분인 임페라토린 및 크니디린을 함유하는 분획을 7g을 얻었다. 상기에 N,N-디에틸아닐린(N,N-Diethylanilin) 25 g을 첨가하고, 220℃에서 1시간 동안 가열하여, 크라이젠(Claisen) 재배열 반응을 수행하였다. 5N 염산 용액으로 얻어진 반응물을 세척하여, 클로로포름에 녹여 냉장 방치함으로써 침전을 제조하였다. 상기 침전으로부터 분취용 HPLC(Prep-HPLC) 및 재결정 방법을 통하여 프란게니딘을 얻었다.　 NMR 및 질량 분광계(Mass spectroscopy)를 통하여 얻어진 프란게니딘의 성분과 함량(99.7 중량％)을 확인하였다.

제조예 2: 진세노사이드 Re 의 제조

건조 인삼 5kg을 분쇄하고, 중량 대비 10배의 에탄올을 사용하여 환류 냉각기를 달아 수욕상에서 4시간 가열하여 에탄올 추출물을 얻었다.　 상기 과정을 3회 반복하여 추출한 다음, 추출물을 합하여 여과한 후 감압 농축하였다.　 농축물에 50℃의 온수 2L를 가하여 완전 용해시킨 후, 에틸에테르(ethyl ether)로 200ml씩 3회 추출하여 지방질을 제거하고, 물을 포화시킨 n-부탄올 300ml씩을 분획 여두로 이용하여 5회 반복 추출해 조(粗)사포닌 추출액을 얻은 후, 상기 추출액을 완전히 감압 농축시켜 조(粗)사포닌 분말 120g을 얻었다. C18 수지를 이용한 컬럼 크로마토그라피(Silica column chromatography)를 통하여 상기 분말로부터 진세노사이드 Re를 포함하는 분획 6g을 얻었고, 분취용 HPLC(Prep-HPLC)를 이용하여 상기 분말로부터 진세노사이드 알이를 수득하였다.　 핵자기공명(NMR) 및 질량분석(Mass spectroscopy)을 통하여 얻어진 진세노사이드 Re의 성분과 함량(99.7중량%)을 확인하였다.　 도 4과 5는 각각 진세노사이드 알이의 ¹H-NMR　스펙트럼 및 질량분광 스펙트럼을 나타낸다.

시험예 1: 콜라겐 합성 효과의 시험

상기 제조예에서 제조된 프란게니딘, 진세노사이드 Re 및 이들 혼합물을 인간유래의 섬유아세포(human fibroblast cell)의 배양액에 첨가하여 세포수준에서 콜라겐 합성 효과를 실험하였다.　 합성된 콜라겐의 측정은 PICP EIA 키트(Procollagen Type I C-Peptide Enzyme ImmunoAssay KIT)를 이용하여 정량하였다.

실험에서 프란게니딘의 최종농도는 0.1㎍/ml 및 0.5 ㎍/ml, 진세노사이드 Re의 최종 농도는 10㎍/ml 및 20㎍/ml으로 하였으며, 프란게니딘 및 진세노사이드 Re의 혼합 비율은 하기 표 1에 나타난 바와 같았다. 각각의 시료는 인간 유래의 섬유아세포의 배양 배지에 첨가하여 1일간 배양한 후, 배양액을 취하여 PICP EIA 키트로 각 농도에서의 콜라겐 합성 정도를 분광광도계를 이용하여 450 nm에서 측정하였다.　 효과의 비교를 위하여 아무것도 첨가하지 않은 섬유아세포의 배양배지(대조군)와 비타민C를 최종농도 52.8 ㎍/ml가 되도록 첨가한 시료에 대하여 동일한 방법 으로 콜라겐 합성 정도를 측정하였다. 콜라겐 생성량은 UV흡광도로서 측정하였으며, 콜라겐 생성 증가율은 대조군에 대한 상대적인 콜라겐 생성량 비율로 계산하고, 그 결과를 표 1에 정리하였다.

[표 1] 세포 수준의 콜라겐 합성 효과

시료 (㎍/ ml )		콜라겐 생성량( Abs )	증가율 (%)
프란게니딘	진세노사이드 Re
-	-	1240	-
비타민 C (52.8 ㎍/ml)		1566	26.3
0.1	-	1278	3.1
0.5	-	1393	12.3
-	5	1306	5.3
-	10	1411	13.8
0.1	5	1582	27.6
0.1	10	1639	32.2
0.5	5	1605	29.4
0.5	10	1686	36.0

(반복 횟수 = 6)

상기 표 1의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 프란게니딘 및 진세노사이드 Re를 혼합하였을 경우, 일반적으로 콜라겐 합성 능력이 있는 것으로 알려진 비타민 C를 적용한 경우보다 적은 농도로 더 우수한 콜라겐 합성 효과를 발휘하였다. 또한 프란게니딘 및 진세노사이드 Re가 각각 단독으로 첨가되는 경우와 비교하여, 상기가 동시에 첨가되었을 때 현저한 상승 효과가 나타나는 점도 확인할 수 있었다.

시험예 2: 진세노사이드 Re 의 교원질 분해효소 억제 효과 시험

실시예 2에서 제조된 진세노사이드 Re를 5㎍/ml, 10㎍/ml 및 20㎍/ml의 농도로 사람 유래 섬유아세포의 배양액에 첨가하여 자외선에 의해 유발되는 콜라게네이 즈 발현 증가에 대한 억제 효과를 시험하였다. 콜라게네이즈의 측정은 BioTrak MMP-1 분석 키트 (Amersham Bioscience)를 이용하여 정량하였고, 얻어진 결과를 하기 식 1에 대입하여 저해율(%)을 계산하고, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다. 하기 표 2에서 자외선 대조군은 시료를 처리하지 않고 자외선만을 조사한 군이며, 음성 대조군은 시료 및 자외선을 적용하지 않은 군이다.

식 1: 저해율 = (자외선 대조군 - 실험군)/자외선 대조군 X 100

[표 2] 콜라게네이즈 발현억제 효과

진세노사이드 Re (㎍/ ml )	콜라게네이즈 발현억제(A450)	억제율(％)
5	0.739	22
10	0.540	43
20	0.493	48
음성대조군	0.537	-
자외선대조군	0.948	-

(반복 횟수 = 3)

상기 표 2에 나타난 바와 같이, 시험 결과로부터 진세노사이드 Re는 우수한 콜레게네이즈 발현 억제 효과을 나타냄을 알 수 있었다.

시험예 3: 피부 주름 개선 효과 시험

6주령 마우스(hairless mouse)를 이용하여, 광에 의해 유발된 피부 주름에 대하여 프란게니딘, 진세노사이드 Re 및 상기의 혼합시료의 피부 주름 개선 효과를 시험하였다.　 전술한 제조예에서 제조된 프란게니딘 및 진세노사이드 Re를 각각 1,3-부틸렌 글리콜에 5 mg/ml의 농도로 녹여 적용하였고, 혼합시료는 프란게니딘 및 진세노사이드 Re의 농도가 각각 0.5 mg/ml 및 4.5 mg/ml이 되도록 조절하여 적용하였다.　 구체적으로, 마우스에 태양광 조사기(solar simulator)를 이용하여 2 MED로 1주일에 3일씩, 10주간 조사하여 피부 주름을 형성시키고, 시료를 첨가하지 않은 1,3-부틸렌글리콜을 처리한 대조군과 5 mg/ml의 시료 용액을 1일 2회 0.5 ml/㎠(시료로 2.5 mg/㎠)씩 6주간 처리한 군을 대상으로 개선 정도를 정성 판단하였다. 주름개선 정도의 판단은 먼저 시료 처리 부위를 육안과 사진 촬영 등을 통해 육안 판정하였고, 판정기준은 시료 처리군 및 대조군을 시료처리 전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 상당한 개선의 3단계로 판정하여 하기 표 2 에 나타내었다.

[표 3] 마우스에 대한 피부 주름 개선 효과

	개선 없음	약간의 개선	상당한 개선
대조군	9	1	0
프란게니딘	3	4	3
진세노사이드 Re	2	5	3
혼합 시료	0	6	4

상기 표 2로부터 프란게니딘 및 진세노사이드 Re를 혼합하였을 경우, 상기 각각이 단독으로 사용되었을 경우에 비해 현저한 효과 상승이 나타남을 확인할 수 있었다.

실시예 1 및 비교예 1 내지 3

화장품 제조 분야의 일반적인 방법을 사용하여 하기 표 3에 나타난 조성을 갖으며, 잔량은 정제수로서 전체 중량이 100 중량부로 조절된 화장료 엣센스를 제 조하였다.

[표 4]

	실시예 1	비교예 1	비교예 2	비교예 3
프란게니딘	0.05	-	0.5	-
진세노사이드 Re	0.45	-	-	0.5
프로필렌 글리콜	10.0	10.0	10.0	10.0
글리세린	10.0	10.0	10.0	10.0
히아루론산 나트륨 수용액 ( Sodium Hyaluronic acid , 1％)	5.0	5.0	5.0	5.0
에탄올	5.0	5.0	5.0	5.0
폴리옥시에틸렌 경화 피마자유	1.0	1.0	1.0	1.0
파라옥시안식향산메틸	0.1	0.1	0.1	0.1
향	0.05	0.05	0.05	0.05

(단위: 중량부)

시험예 4: 화장료 엣센스의 주름개선효과 시험

패널 테스트를 통하여 상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 화장료 엣센스의 피부 주름개선 효과를 시험하였다. 구체적으로는, 35에서 50세까지의 건강한 여성 60명을 15명씩 4개의 군으로 구분하고 1군은 실시예 1 의 엣센스를, 2군은 비교예 1의 엣센스를, 3군은 비교예 2의 엣센스를, 4군은 비교예 3의 엣센스를 안면부에 1일 1회씩 3개월간 도포하고, 피부 주름의 개선정도를 피험자의 설문조사를 통해 평가하였다.　 피험자의 설문은 피부 주름개선 및 탄력증진에 관하여 사용전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 상당한 개선의 3단계로 판정하였으며 결과는 표 5에 나타내었다.

[표 5] 실시예의 피부 주름개선 효과 (설문조사)

	개선 없음	약간의 개선	상당한 개선
비교예 1	9	4	2
비교예 2	2	9	4
비교예 3	4	10	1
실시예 1	1	7	7

상기 표 5로부터 알 수 있는 바와 같이, 프란게니딘 및 진세노사이드 Re를 사용한 실시예 1의 경우, 상기 각각을 단독으로 사용하거나, 또는 사용하지 않은 비교예 1 내지 3의 엣센스 보다 피부 주름 개선 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다.

시험예 5: 영상분석을 통한 화장료 엣센스의 주름 개선 효과 시험

영상 분석을 통하여 실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 주름 개선 효과를 평가하였다. 구체적으로는 실험이 시작되기 전, 눈 밑의 레플리카(replica)를 채취하고(Xantopren, Bayer), 실험이 종료된 직후 레플리카를 동일 부위에서 채취하여 영상분석을 통해 피부 주름의 2차원적 분석으로 피부 주름의 밀도를 측정하였다.　 영상분석에 의한 피부 주름 밀도의 감소율은 엣센스 사용 전 피부 주름밀도에 대한 사용 후 피부 주름밀도의 비를 평균한 값이며, 상기 측정 결과를 하기 표 6에 정리하였다.

[표 6] 영상분석에 의한 피부 주름 개선 효과

	피부 주름 밀도 감소율 (％)
비교예 1	4
비교예 2	35
비교예 3	21
실시예 1	42

상기 표 6로부터 알 수 있는 바와 같이, 프란게니딘 및 진세노사이드 Re를 사용한 실시예 1의 경우, 상기 각각을 단독으로 사용하거나, 또는 사용하지 않은 비교예 1 내지 3의 엣센스 보다 우수한 주름개선 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 또한 상기 시험 과정에서 실시예 1의 엣센스에 의한 피부자극이나 부작용은 발견되지 않았다.

실시예 2

하기에 제시된 각각의 조성을 통하여, 각종의 화장품 제형을 제조하였다.

피부 외용 연고 (단위: 중량부 )

프란게니딘: 0.1

진세노사이드 Re: 0.9

디에틸 세바케이트: 8

경납: 5

올레일에테르포스페이트: 6

벤조산 나트륨: 0.1

와셀린을 잔량으로 하여 전체 중량부를 100으로 조절

화장료 크림 (단위: 중량부 )

프란게니딘: 0.02

진세노사이드Re: 0.18

스테아린산: 15.0

세탄올: 1.0

수산화칼륨: 0.7

글리세린: 5.0

프로필렌글리콜: 3.0

방부제: 0.05

향: 0.05

정제수를 잔량으로 하여 전체 중량부를 100으로 조절

유연 화장수 (단위: 중량부 )

프란게니딘: 0.02

진세노사이드 Re: 0.18

에탄올: 10.0

폴리라우린산 폴리옥시에틸렌소르비탄: 1.0

파라옥시안식향산 메틸: 0.2

글리세린: 5.0

1,3-부틸렌글리콜: 6.0

향: 0.05

색소: 0.05

정제수를 잔량으로 하여 전체 중량부를 100으로 조절

영양 화장수 (단위: 중량부 )

프란게니딘: 0.01

진세노사이드 Re: 0.09

와셀린: 2.0

세스퀴올레인산 소르비탄: 0.8

폴리옥시에틸렌 올레일에틸: 1.2

파라옥시안식향산메틸: 0.1

프로필렌글리콜: 5.0

에탄올: 3.2

카르복시 비닐폴리머: 18.0

수산화칼륨: 0.1

색소: 0.05

향: 0.05

정제수를 잔량으로 하여 전체 중량부를 100으로 조절

화장료 팩 (단위: 중량부 )

프란게니딘: 0.02

진세노사이드 Re: 0.18

글리세린: 5.0

프로필렌글리콜: 4.0

폴리비닐알코올: 15.0

에탄올: 8.0

폴리옥시에틸렌 올레일에틸: 1.0

파라옥시안식향산 메틸: 0.2

색소: 0.05

향: 0.05

정제수를 잔량으로 하여 전체 중량부를 100으로 조절

남성용 스킨 (단위: 중량부 )

프란게니딘: 0.01

진세노사이드 Re: 0.09

에탄올: 55.0

캐스터 오일 (PEG-40 Hydrogenated castor oil) : 0.5

1,3-부틸렌글리콜: 1.0

글리세레스-26 (Glycereth-26) : 1.0

방부제: 0.05

향: 0.05

정제수를 잔량으로 하여 전체 중량부를 100으로 조절

이상 살펴본 바와 같이 프란게니딘 및 진세노사이드 Re를 유효성분으로 포함하는 콜라겐 합성 촉진용 조성물은 피부의 섬유아세포에 대하여 매우 강력한 콜라겐 합성 효과를 나타내며, 또한 상기를 조성물은 주름개선효과가 매우 우수하다. 이는 본 발명의 조성물을 화장품 제형에 적용할 경우에, 용해도가 낮아 일반 화장품 제형에 적용하기 곤란한 프란게니딘을 낮은 농도로 사용하면서도, 충분한 주름개선 효과를 얻을 수 있기 때문에, 보다 다양한 제형의 제품에 적용 가능할 수 있다는 것을 의미한다. 이와 같은 프란게니딘 및 진세노사이드 Re의 병용 적용의 상승 효과는 콜라겐 생합성능이 우수한 프란게니딘 및 콜라게네이즈 발현 억제 효과가 우수한 진세노사이드 Re를 적절히 혼합함으로써 서로에 대해 시너지 효과를 나타내기 때문인 것으로 판단된다.

도 1은 실시예 1에서 제조된 프란게니딘의 ¹H-NMR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.

도 2는 실시예 1에서 제조된 프란게니딘의 ¹³C-NMR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.

도 3은 실시예 1에서 제조된 프란게니딘의 질량 스펙트럼을 나타내는 도면이다.

도 4는 실시예 2에서 제조된 진세노사이드 Re의 ¹H-NMR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.

도 5는 실시예 2에서 제조된 진세노사이드 Re의 질량 스펙트럼을 나타내는 도면이다.

Claims (10)

1. 프란게니딘 및 진세노사이드 Re를 포함하며, 프란게니딘에 대한 진세노사이드 RE의 중량비가 1 내지 100인 것을 특징으로 하는 콜라겐 형성 촉진용 조성물.
2. 제 1 항에 있어서,

   프란게니딘은 전체 조성물 100 중량부에 대하여 1 × 10^-5 내지 10 중량부의 양으로 포함되는 것을 특징으로 하는 콜라겐 형성 촉진용 조성물.
3. 제 2 항에 있어서,

   프란게니딘은 전체 조성물 100 중량부에 대하여 1 × 10^-5 내지 5 중량부의 양으로 포함되는 것을 특징으로 하는 콜라겐 형성 촉진용 조성물.
4. 제 1 항에 있어서,

   진세노사이드 Re는 전체 조성물 100 중량부에 대하여 1 × 10^-5 내지 10 중량부의 양으로 포함되는 것을 특징으로 하는 콜라겐 형성 촉진용 조성물.
5. 제 4 항에 있어서,

   진세노사이드 Re는 전체 조성물 100 중량부에 대하여 1 × 10^-5 내지 5 중량 부의 양으로 포함되는 것을 특징으로 하는 콜라겐 형성 촉진용 조성물.
6. 삭제
7. 제 1 항에 있어서,

   프란게니딘에 대한 진세노사이드 Re의 중량비(진세노사이드 Re/프란게니딘)가 5 내지 30인 것을 특징으로 하는 콜라겐 형성 촉진용 조성물.
8. 제 1 항 내지 제 5 항 및 제 7 항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 주름 개선 또는 주름 생성 억제용 화장품.
9. 제 8 항에 있어서,

   제형이 분말제, 겔제, 분무제, 연고제, 크림제, 액제, 피부 점착타입 제형, 크림, 폼, 화장수, 팩, 유연수, 유액, 파운데이션, 메이크업베이스, 엣센스, 비누, 액체세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일 또는 분사형 액제인 것을 특징으로 하는 화장품.
10. 제 8 항에 있어서,

    화장품은 항생제, 결합제, 붕해제, 희석제, 활택제, 안정제, 보존료, 향료, 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소 및 방부제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장품.

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