KR101394817B1

KR101394817B1 - 봉독 또는 봉독 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101394817B1
Application number: KR1020090037402A
Authority: KR
Inventors: 김동현; 박준성; 문은정; 유선혜; 김덕희; 김한곤
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2009-04-29
Filing date: 2009-04-29
Publication date: 2014-05-14
Also published as: KR20100118629A

Abstract

봉독 또는 봉독 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 개시된다. 상기 화장료 조성물은 피부 항산화, 항노화 및 피부 주름 개선효과가 있으며, 화장품 분야에서 다양하게 활용 가능하다.

봉독, 추출물, 항산화, 항노화, 화장료

Description

봉독 또는 봉독 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic Composition Containing Bee Venom or Extracts of the Same}

본 발명은 봉독 또는 그 추출물을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 봉독 성분을 함유함으로써 항산화, 항노화 및 피부 주름 개선 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 25 세를 전후해서 피부노화가 촉진된다. 피부노화를 설명하는 이론들은 주로 프리 라디칼 반응에 초첨을 두고 있다. 세포대사 과정 중에 생성된 프리 라디칼은 각종 반응기구를 통해 노화에 관여한다. DNA에 손상을 입혀 돌연변이를 유발하며 막지질을 산화시켜 세포내 소기관들을 파괴한다. 이러한 일련의 과정들은 세포가 정상적으로 분열, 성장하는데 큰 위협이 되며 이것들이 축적되어 노화가 일어나기 시작한다.

또한, 피부가 자외선에 노출 되었을 때 섬유아세포에서 프리 라디칼의 한 종류인 활성산소종이 생성되어 콜라게네이즈 (collagenase, 이하 ‘MMP-1’이라 함)의 발현이 유도된다. MMP-1은 세포외 기질인 콜라겐을 분해하는 효소로서 기질 금속단백질분해효소 (matrixmetalloproteinase)의 한 종류이다. MMP-1은 콜라겐 타 입 I을 분해한다. MMP-1의 발현이 유도되면 콜라겐의 합성이 감소하여 피부에 주름이 발생하게 된다.

따라서, 피부 노화와 주름을 예방하기 위해서는 생체내에서 생성되는 프리라디칼의 발생을 억제하고 MMP-1의 작용을 저해하는 물질의 개발이 필요하다. 지금까지 연구보고 된 주름완화 및 피부노화 예방 물질로는 레티놀, 아데노신, AHA 등이 있다. 그러나, 이러한 물질들은 안정성이 떨어지며 피부자극을 유발하고 뚜렷한 가시적인 효과가 미흡하다는 문제점을 안고 있다.

본 발명의 일실시예의 목적은 봉독 또는 봉독 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 일실시예의 목적은, 항산화, 항노화 및 피부 주름 개선효과가 인정되는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 봉독 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 항산화, 항노화 및 피부 주름 개선효과가 있으며, 화장품 분야에서 다양하게 활용 가능하다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 유효성분으로 봉독 또는 봉독 추출물을 함유하는 것을 특징으로 한다. 일실시예에서, 상기 봉독 또는 봉독 추출물의 함량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.0001~30 중량%이며, 보다 구체적으로는 0.001~5 중량%이다. 봉독 또는 봉독 추출물의 함량이 상기 범위보다 낮은 경우에는 봉독 성분에 의한 항산화 내지 항노화 효과 등을 충분히 얻을 수 없고, 상기 범위를 초과하는 경우에는 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문이다.

일실시예에서, 본 발명에서 사용되는 봉독은, 당해 기술분야에서 통상적으로 인정되는 다양한 전처리 과정을 거칠 수 있다. 예를 들어, 수득된 봉독에 증류수를 첨가한 후 이물질을 걸러냄으로써, 정제된 상태의 봉독을 사용할 수 있다.

또 다른 일실시예에서, 상기 봉독 추출물은 다양한 용매 추출과정을 통해 추출된 물질일 수 있다. 사용 가능한 용매의 종류는, 특별히 제한되는 것은 아니며, 예를 들어 물, 유기용매, 또는 물과 유기용매의 혼합용매일 수 있다. 예를 들어, 상기 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트 및 클로로포름으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다. 일실시예에서, 상기 물과 유기용매의 혼합용매는, 유기용매의 비가 10 내지 90%(v/v)일 수 있다. 구체적으로는, 상기 봉독 추출물은 10 내지 90%(v/v) 에탄올, 보다 구체적으로는 70%(v/v) 에탄올을 이용하여 추출된 추출물일 수 있다.

본 발명에서 사용되는 “봉독”이란, 꿀벌의 산란관에서 나오는 독액(bee venom)을 의미하며, 신경통, 류머티즘, 요통 등에 효과가 좋아 민간요법으로 많이 이용되기도 한다. 또한, “봉독 추출물”이란, 상기 봉독에 대하여 당해 기술분야에서 알려진 다양한 추출법을 통해 추출된 물질 또는 용매의 분획을 총칭하는 의미이다.

봉독을 몸에 침투시켜 질병을 치료하는 방법으로는, 봉침을 이용하여 시술하는 봉침요법이 사용되기도 한다. 이러한 봉침요법은 관절염 등의 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 봉침요법의 사용형태를 유형별로 살펴보면 다음과 같이 나누어 볼 수 있다.

첫 번째는, 직자법(直刺法)이라 하여 살아있는 벌의 꽁무니를 시술하고자 하 는 부위에 대고 찌른 다음 약 30~60 초 가량 유침하여 봉독이 충분히 스며들게 한 다음 침을 뽑아주는 방법이다. 두 번째는, 발침법(拔針法)이라 하여 핀셋으로 벌에서 침을 떼어내어 시술하고자 하는 부위에 살짝 댄 후 뽑아서 또 다른 부위에 시술하는 방법이다. 발침법은 자극이 강하지 않고 벌침 하나로 3~5 군데를 시술할 수 있어서 비교적 많이 사용되는 방법이다. 세 번째는, 대상포진과 같은 광범위한 질환에 시술하는 방법으로 산자법(散刺法)이 있다. 산자법은 삼릉침을 사용하여 자침하는 방법과 유사하며 침을 재빠르게 찔렀다 빼는 동작을 반복하여 넓은 환부를 소량의 침으로 치료하는 봉침요법의 특성을 살린 치료법이다. 또한, 네 번째의 경우로 봉독액을 식염수를 통해 희석시킨 상태에서, 그 희석액을 주사기를 통해 직접 인체의 경혈에 주입하는 방법이다. 이 방법은 환자가 자각하는 통증도가 훨씬 적되, 경혈에 직접 봉독을 침투시키기에 효과 또한 빠르다는 장점이 있다.

그러나, 상기와 같은 방법들은 정확한 기혈을 찾아 봉독을 투입시키기에는 부족한 면이 많았으며, 이상적인 치료를 위한 봉독의 분량(Doss)을 정확히 조절하기가 힘들었던 것이 사실이다.

따라서, 이러한 문제를 해결하기 위해 창안된 시술의 형태가 한방용 침에 상기 봉독을 묻힌 상태에서 기혈을 찾아 침술과 함께 봉독을 경혈에 투입하는 방법이다. 한방용 침을 사용하는 방법은 그 침술방법의 특성상 그 의학적인 효과는 많이 증진된 우수한 방법이지만, 그에 따른 문제점도 있다.

예를 들어, 한방용 침의 끝단에 봉독을 묻힌 상태에서 표피를 뚫고 경혈의 내부로 침투하는 과정에서, 봉독이 표피로 퍼져 정확한 경혈의 내부로 침투하지 못 하면서 충분한 치료 효과를 기대하기 어려울 수 있다. 구체적으로는, 한방침 치료시 해당 혈 자리에 침을 정확히 놓기 위해서 침관을 사용하게 된다. 그러나, 환자의 통증을 줄이기 위해 침이 빠른 속도로 피부를 뚫도록 시침하게 되며, 이 과정에서 코팅된 봉독액이 경혈에 도착하기도 전에 표피층으로 흡수되어 본래의 효능을 기대할 수 없게 되는 것이다.

위에서 언급한 봉침요법을 이용한 봉독 사용법과는 달리, 봉독 성분을 함유한 화장료 조성물은 DPPH 산화 억제 실험을 통해 항산화 효능이 있음을 확인하였다. 또한, 프로콜라겐 생성 촉진과 콜라게나제 발현 억제효과가 있으며, 이 두 가지 활성의 복합 상승 작용으로 우수한 피부 주름 개선 효과를 제공할 수 있다.

일실시예에서, 본 발명은 상기 봉독 또는 봉독 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다. 상기 화장료 조성물은 피부의 산화방지, 노화억제 및 주름개선 등의 효과를 위해 사용될 수 있다. 화장료 조성물은, 특별히 제한되는 것은 아니며, 크림, 로션, 스킨, 에센스, 에멀젼 비누, 폼 클렌징, 팩, 샴푸, 린스, 바디워시 등의 다양한 형태로 제형화될 수 있다. 본 발명에 의한 봉독 또는 봉독 추출물은 그 사용이 특별히 제한되지 않으며, 예를 들어, 화장료 조성물 이외에 약제 조성물 등에 사용될 수 있다.

이하, 본 발명의 실시예 등을 통해 본 발명을 더욱 상술하지만, 하기 실시예 등은 본 발명의 효과를 예시적으로 확인하기 위한 것이며, 본 발명의 범주가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1] 봉독의 수득

전기 충격법에 의해 봉독을 수득하였다. 전기 충격법을 통해 수득된 봉독에 증류수를 부어 봉독에서 벌 또는 이물질을 부유시켰다. 부유된 벌 또는 이물질을 걸러내고 정제된 봉독을 수득하였다.

[실시예 2] 봉독 추출물의 제조

상기 실시예 1에서 수득된 봉독을 70% 에탄올을 이용하여 추출하였다.

구체적으로는, 수득된 봉독의 3 배 부피의 70% 에탄올을 첨가하고 상온에서 5 회 교반하면서 추출하여 탈지시켰다. 탈지된 봉독에 다시 4 배 부피의 70% 에탄올을 첨가하고 3 회 환류 추출한 후, 15℃에서 2 일간 침적시켰다.

침적물에 대한 여과 및 원심분리 과정을 거쳐 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 엑기스를 얻었다. 얻어진 엑기스를 물에 현탁한 후, 에테르를 이용하여 색소를 제거한 다음, 수층을 부탄올을 이용하여 5 회 추출하여 제거하였다.

수득된 유기용매층을 감압농축하여 엑기스를 얻었다. 얻어진 엑기스를 메탄올에 녹인 후, 에틸아세테이트를 추가하고 생성된 침전물을 건조시켜 봉독 추출물을 수득하였다.

[실험예 1] 항산화 효과 시험(DPPH 테스트)

실시예 1의 봉독 및 실시예 2의 봉독 추출물에 대한 DPPH 산화 억제 효능을 트롤록스와 비교하여 측정하였다. 구체적으로는, 유기 라디칼인 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)의 환원에 의해(항산화제는 산화됨) 발생되는 흡광도의 변화를 통해 항산화능을 평가하는 방법을 사용하였다. 봉독 및 봉독 추출물에 대한 DPPH의 산화가 억제되어 흡광도가 대조군에 비해 감소되는 정도를 측정하여, 대조군의 흡광도에 비해서 50％ 이하의 흡광도를 나타내는 농도를 유효 항산화 농도로 평가하였다.

100 μM(in 에탄올) DPPH 용액 190 ㎕와 봉독 10 ㎕ 넣어 반응액을 제조하였다. 제조된 반응액은 37℃에서 30 분간 반응시킨 후, 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조시료로는 널리 사용하고 있는 합성 항산화제인 트롤록스(Trolox)를 사용하였다.

각 물질의 DPPH 분석 결과는 하기 표 1에 나타내었으며, IC₅₀은 첨가한 시료에 의해 흡광도가 50％ 감소했을 때의 시료 농도를 의미한다.

시료	IC₅₀(ppm)
트롤록스	45
봉독	35
봉독 추출물	37

상기 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 의한 봉독 및 봉독 추출물은 대조군인 트롤록스에 비해 항산화능이 훨씬 우수함을 알 수 있다.

[실험예 2] 콜라게나제 발현 억제 효능 측정

실시예 1의 봉독 및 실시예 2의 봉독 추출물에 대한 콜라게나제 발현 억제능을 토코페롤 및 EGCG와 비교하여 측정하였다.

콜라게나제의 발현 정도가 낮을수록 콜라게나제의 발현 억제능이 높고, 피부내의 콜라겐의 분해가 적게 일어나며, 생성되는 주름의 양이 적어진다. 또한, 토코페롤 및 EGCG는 항산화 물질로서 피부의 표피 세포를 재생시켜 피부의 노화를 방지하는 기능이 있는 것으로 알려져 있다.

실험은 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어 있는 96공 평판배양기(96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/공(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 배양한 다음, 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 봉독, 토코페롤 및 EGCG를 10^-4 몰농도로 24 시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채취하였다.

채취한 세포배양액을 상업적으로 입수가능한 콜라게나제 측정기구(미국 아머샴파마샤 社)를 이용하여 콜라게나제 생성정도를 측정하였다. 먼저 1차 콜라게나제 항체가 균일하게 도포된 96-공 평판(96-well plate)에 채취된 세포 배양액을 넣고 3 시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다.

3 시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-공 평판(96-well plate)에 넣고 다시 15 분간 반응시켰다. 반응 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15 분간 발색을 유발시키고, 다시 1 M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시켰다. 반응액의 색깔은 노란색을 띄게 되며, 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다.

노란색을 띠는 96-공 평판(96-well plate)의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405 nm에서 측정하였고, 하기 수학식 1에 의해 콜라게나제의 합성정도를 계산하였다.

이때 조성물을 처리하지 않은 군에서 채취된 세포배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. 즉, 비처리군에서의 콜라게나제의 발현정도를 100으로 하고, 이에 대비하여 조성물을 처리한 군에서의 콜라게나제의 발현정도를 구하였으며, 결과는 표 2에 나타내었다.

물질	콜라게나제 발현정도(%)
비처리군	100
토코페롤	75
EGCG	60
봉독	55
봉독 추출물	57

상기 표 2에서 보면, 봉독 및 봉독 추출물은 시험관내(in vitro)에서 콜라게나제의 발현을 억제한다는 것을 확인할 수 있다. 또한, 콜라게나제의 발현 억제능이 토코페롤보다 우수하다는 것을 확인할 수 있다.

[실험예 3] 프로콜라겐 생성 촉진효능 실험

실시예 1의 봉독 및 실시예 2의 봉독 추출물에 대한 프로콜라겐 생성능을 비타민 C와 비교하여 측정하였다. 프로콜라겐은 콜라겐 생성 유도물질이다. 구체적으로는, 프로콜라겐은 콜라겐 생성과 노화 방지에 필요한 물질로서, 프로콜라겐의 생성정도가 높을수록 콜라겐의 생성정도가 높아지며 피부 주름의 생성을 방지할 수 있다. 또한, 비타민 C는 콜라겐의 합성에 필수성분으로 알려져 있다.

실험은 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어 있는 96공 평판배양기(96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/공(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 배양한 다음, 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 봉독 추출물, 비타민 C를 10^-4 몰농도로 24 시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채취하였다. 24 시간 후에 배지 중에 유리된 프로콜라겐의 양을 프로콜라겐 타입-1 C-펩타이드 EIA 키트(procollagen type-1 C-peptide EIA kit) (MK101, Takara, Japan)를 사용하여 측정하였다.

측정한 결과를 바탕으로 하기 수학식 2에 의해 프로콜라겐의 생성 정도를 계산하였다.

이 때 조성물을 처리하지 않은 군에서 채취된 프로콜라겐 생성 정도를 대조군으로 하였다. 비처리군에서의 프로콜라겐 생성 정도를 100으로 하고, 이에 대비하여 조성물을 처리한 군에서의 프로콜라겐 생성 정도를 구하였으며, 결과는 표 3에 나타내었다.

물질	프로콜라겐 생성정도(%)
비처리군	100
비타민 C	120
봉독	116
봉독 추출물	114

표 3을 참조하면, 봉독 및 봉독 추출물은 시험관내(in vitro)에서 프로콜라겐의 생성을 촉진한다는 것을 확인할 수 있다. 또한, 대체적으로 프로콜라겐의 생성 촉진 정도가 콜라겐의 합성에 필수적인 성분으로 알려져 있는 비타민 C와 비슷한 수준인 것을 확인할 수 있었다.

본 발명의 봉독 또는 봉독 추출물을 함유하는 조성물의 제형예를 하기에서 설명하지만, 본 발명의 화장료 조성물이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[제제예 1] 로션형 제제

실시예 1의 봉독 3.00

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00

수용성 콜라겐 (1% 수용액) 1.00

시트르산나트륨 0.10

시트르산 0.05

감초 엑기스 0.20

1,3-부틸렌글리콜 3.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

[제제예 2] 크림형 제제

실시예 1의 봉독 1.00

폴리에틸렌글리콜모노스테아레이트 2.00

자기유화형 모노스테아르산글리세린 5.00

세틸알코올 4.00

스쿠알렌 6.00

트리2-에틸헥산글리세릴 6.00

스핑고당지질 1.00

1.3-부틸렌글리콜 7.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

[제제예 3] 팩형 제제

실시예 2의 봉독 추출물 5.00

폴리비닐알코올 13.00

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00

라우로일히드록시프롤린 1.00

수용성 콜라겐 (1% 수용액) 2.00

1,3-부틸렌글리콜 3.00

에탄올 5.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

[제제예 4] 미용액형 제제

실시예 2의 봉독 추출물 2.00

히드록시에틸렌셀룰로오스 (2% 수용액) 12.00

크산탄검 (2% 수용액) 2.00

1,3-부틸렌글리콜 6.00

진한 글리세린 4.00

히알루론산나트륨 (1% 수용액) 5.00

정제수 잔량

Claims

봉독의 용매 추출물을 유효 성분으로 함유하고, 상기 봉독의 용매 추출물은

(a)봉독을 전기충격법을 이용하여 정제하는 단계;

(b)물, 유기용매 또는 물과 유기용매의 혼합용매로 상온에서 추출하고 엑기스를 얻는 단계;

(c)상기 엑기스에서 물과 유기용매를 사용하여 색소를 제거하는 단계;및

(d)상기 색소가 제거된 엑기스에 유기용매를 사용하여 침전물을 생성하고, 이를 건조시켜 봉독 추출물을 제조하는 단계;에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 봉독 추출물의 함량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.0001~30 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 2 항에 있어서,

상기 봉독 추출물의 함량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.001~5 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
제 1 항에 있어서,

상기 유기용매는, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트 및 클로로포름으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 혼합용매는 10 내지 90%(v/v) 에탄올인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
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