KR101264076B1 - 관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법 및 이를 통해 제조된 겨우살이 환 - Google Patents

관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법 및 이를 통해 제조된 겨우살이 환 Download PDF

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Abstract

본 발명은 관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법 및 이를 통해 제조된 겨우살이 환에 관한 것으로, 보다 상세하게는 휴대성 및 항노화 활성이 뛰어나면서도 관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법 및 이를 통해 제조된 겨우살이 환을 제공하는 것이다.

Description

관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법 및 이를 통해 제조된 겨우살이 환{Manufacturing method of pills prepared with mistletoe and using thereof}
본 발명은 관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법 및 이를 통해 제조된 겨우살이 환에 관한 것으로, 보다 상세하게는 휴대성 및 항노화 활성이 뛰어나면서도 관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법 및 이를 통해 제조된 겨우살이 환을 제공하는 것이다.
겨우살이(mistletoe)는 참나무, 물오리나무, 밤나무, 팽나무 등에 기생하는 다년생 반 기생식물의 상록식물로 둥지같이 둥글게 자라 지름이 1m에 달하는 것도 있다. 잎은 마주나고 다육질이며 바소꼴로 잎자루가 없다. 가지는 둥글고 황록색으로 털이 없으며 마디 사이가 3~6cm이다.
꽃은 3월에 황색으로 가지 끝에 피고 꽃대는 없으며, 작은 포(苞)는 접시 모양이고 암수딴그루이다. 화피(花被)는 종 모양이고 4갈래이며, 열매는 둥글고 10월에 연노란색으로 익는다. 과육이 잘 발달되어 산새들이 좋아하는 먹이가 되며 이 새들에 의해 나무로 옮겨져 퍼진다.
여러 종류의 겨우살이 중에서 민간 약재로 사용되었던 것은 주로 Viscum속의 식물로서 유럽지역에 서식하는 것은 Viscum album loranthacea이며, 한국 지역에서 서식하는 것은 Viscum album coloratum으로서 분류학상 그 차별성이 인정되고 있다(Khwaja TA 등, 1986, Oncology 43 Suppl 1:42-50; Khawaja T.A. 등, 1980. Experimentia, 36: 599-600) 유럽지역에 서식하는 겨우살이는 체액성 및 세포성 면역체계를 자극하는 면역 증강효과가 있는 것이 인정되었고, 동물 및 인간에 대한 임상 실험 결과, 종양세포에 대하여 직ㆍ간접적으로 대응하는 대식세포 및 자연 살해 세포의 활성을 증가시킴으로써 종양세포의 성장을 억제하고, 암환자의 생존율을 증진시키는 효과가 있는 것으로 보고되었다. 겨우살이의 이러한 항암효과는 겨우살이의 면역 증강 작용뿐만 아니라, 종양세포에 대한 직접적인 세포독성 효과도 관여하는 것으로 알려져 있으며, 대표적인 활성물질인 렉틴 성분에 주목하여 이들의 특이성 및 이에 따른 면역학적, 생화학적 연구가 진행되었다.
따라서, 겨우살이 추출물을 의약품 및 화장품으로 활용하는 연구가 이루어졌으나, 이를 포함하는 건강식품의 경우 관능성이 떨어지거나 겨우살이 추출물에 포함된 유효성분의 함량이 현저하게 저감하는 문제가 있었다.
본 발명은 상술한 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 본 발명의 첫번째 해결하려는 과제는 휴대성 및 항노화 활성이 뛰어나면서도 관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 두번째 해결하려는 과제는, 상기 제조방법을 통해 제조된 겨우살이 환을 제공하는 것이다.
상술한 본 발명의 첫번째 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 1) 한국산 겨우살이( Viscum album L. var. coloratum)를 분쇄하고, 초임계 이산화 탄소를 이용하여 유용성분을 탈지하여 겨우살이 탈지박을 제조하는 단계; 2) 상기 겨우살이 탈지박을 용매에 혼합한 후, 이를 추출하여 겨우살이 추출물을 제조하는 단계; 및 3) 상기 추출된 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여 산약, 뽕잎, 감초, 계피, 황련, 황기, 백출, 백봉령 잎, 숙지황 및 작약으로 구성되는 군으로부터 선택되는 2개 이상의 생약재 10 ~ 50 중량부를 혼합하는 단계를 포함하여 관능성이 우수한 겨우살이 환을 제조한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 2)단계의 용매는 주정알콜일 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 3) 단계에서 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여 자일리톨, 옥타코사놀, 스테아린산마그네슘, 비타민 C, 타우린, 허브, 알긴산나트륨 및 스쿠알렌으로 구성되는 군으루부터 선택되는 어느 하나 이상의 물질을 더 혼합할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 3) 단계에서 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여, 감초 26 ~ 28중량부, 계피 8 ~ 10중량부, 자일리톨 3 ~ 5중량부, 비타민 C 3.7 ~ 3.9 중량부, 옥타코사놀 0.9 ~ 1.1 중량부, 스테아린산마그네슘 0.1 ~ 0.3 중량부를 혼합할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 3) 단계에서 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여, 백출 26 ~ 28중량부, 백봉령 잎 8 ~ 10중량부, 자일리톨 3 ~ 5중량부, 비타민 C 3.7 ~ 3.9 중량부, 옥타코사놀 0.9 ~ 1.1 중량부, 스테아린산마그네슘 0.1 ~ 0.3 중량부를 혼합할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상술한 본 발명의 제조방법을 통해 제조된 관능성이 우수한 겨우살이 환을 제공한다.
본 발명에 의해 제공하는 겨우살이 환은 겨우살이를 환(pills) 형태로 가공함으로써 휴대 및 복용이 간편하고 겨우살이에 대한 저장을 용이하게 할 뿐 아니라 겨우살이의 유효성분의 함량이 높으면서도 관능성이 현저하게 우수하다.
도 1은 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 겨우살이 환의 제조방법을 나타내는 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 겨우살이 탈지박의 추출수율 및 생리활성을 나타내는 그래프이다.
도 3은 카테킨의 보정곡선(calibration curve)이다.
도 4는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 겨우살이 탈지박의 멜라닌 생성 억제효과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 바람직한 일실시예에 따른 겨우살이 탈지박의 항염효과를 나타내는 그래프이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
상술한 바와 같이, 겨우살이 추출물은 의약품 및 화장품으로 활용하는 연구가 이루어졌으나, 이를 포함하는 건강식품의 경우 관능성이 떨어지거나 겨우살이 추출물에 포함된 유효성분의 함량이 현저하게 저감하는 문제가 있었다.
이에 본 발명에서는 1) 한국산 겨우살이( Viscum album L. var . coloratum)를 분쇄하고, 초임계 이산화 탄소를 이용하여 유용성분을 탈지하여 겨우살이 탈지박을 제조하는 단계; 2) 상기 겨우살이 탈지박을 용매에 혼합한 후, 이를 추출하여 겨우살이 추출물을 제조하는 단계; 및 3) 상기 추출된 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여 산약, 뽕잎, 감초, 계피, 황련, 황기, 백출, 백봉령 잎, 숙지황 및 작약으로 구성되는 군으로부터 선택되는 2개 이상의 생약재 10 ~ 50 중량부를 혼합하는 단계를 포함하여 관능성이 우수한 겨우살이 환을 제조하는 방법을 제공한다. 이를 통해 겨우살이를 환(pills) 형태로 가공함으로써 휴대 및 복용이 간편하고 겨우살이에 대한 저장을 용이하게 할 뿐 아니라 겨우살이의 유효성분의 함량이 높으면서도 관능성이 현저하게 우수한 겨우살이 환을 제조할 수 있다.
도 1은 본 발명의 바람직한 일구현예에 따른 겨우살이 환의 제조방법을 나타낸 흐름도이다. 이를 구체적으로 살펴보면 먼저, 1) 단계로서 한국산 겨우살이( Viscum album L. var . coloratum)를 초임계 이산화 탄소를 이용하여 유용성분을 탈지하여 겨우살이 탈지박을 제조한다. 본 발명에 사용되는 겨우살이는 유럽산에 비하여 항암성 및 항암성의 효과가 우수한 한국산 겨우살이( Viscum album L. var . coloratum)를 사용하는 것이 유리하다. 이 때 사용되는 겨우살이는 잎, 줄기, 열매 중 어느 하나 이상의 부분을 사용할 수 있으며, 이 경우 겨우살이를 분쇄 또는 세절한 후 유용성분을 탈지하는 것도 가능하다. 그 뒤 분쇄 또는 분쇄되지 않은 한국산 겨우살이를 초임계 이산화 탄소를 이용하여 유용성분을 탈지하여 겨우살이 탈지박을 제조한다. 구체적으로 겨우살이 추출물의 추출방법은 캐리어 가스로 이산화탄소를 사용하고 초임계(초고압) 추출법을 이용하여 추출한 것을 특징으로 한다. 이러한 초임계 추출법은 기존 열 추출이나 용매 추출과는 달리 저온에서 초고압으로 식물의 필요한 성분만을 고농도로 추출하는 방법으로 겨우살이가 가지는 항산화 성분등 피부에 유용한 성분들을 파괴하지 않고 추출할 수 있으며, 유기 용매 대신 인체에 무해한 이산화탄소를 이용하기 때문에 이를 환으로 제조하는 경우 인체의 유해성분을 최소화할 수 있다. 이 경우 이산화 탄소를 이용한 초임계 추출법은 통상의 조건에 따라 진행될 수 있으며, 바람직하게는 30 ~ 50℃, 250 ~ 350기압의 압력에서 1 ~ 3 시간 동안 수행할 수 있다. 이를 통해 유용성분을 탈지하고, 겨우살이 탈지박을 제조할 수 있다.
그 뒤, 2) 단계로서 상기 겨우살이 탈지박을 용매에 혼합한 후, 이를 추출하여 겨우살이 추출물을 제조할 수 있다. 이 경우 사용될 수 있는 용매는, 정제수 또는 주정알콜을 사용할 수 있지만, 바람직하게는 주정알콜을 사용하는 것이 항노화 활성을 극대화하는데 매우 유리하다.
구체적으로 겨우살이 추출물을 얻을 때 용매를 정제수로 사용하는 경우 겨우살이 탈지박을 겨우살이 중량 대비 3～30배량의 정제수에 놓고 90～110℃에서 최초 정제수의 함량이 10～50％이 되도록 추출하여 겨우살이 추출물을 얻을 수 있다.
상기의 겨우살이 추출물을 얻을 때 용매를 주정알콜로 사용하는 경우 겨우살이를 겨우살이 중량 대비 3～10배량의 주정알콜에 놓고 50～60℃에서 1～5시간 동안 추출하여 겨우살이 추출물을 얻을 수 있다. 본 발명에서 사용가능한 주정알콜은 50 ~ 100% 농도의 주정알콜을 사용할 수 있으며, 상술한 바와 같이 용매로서 정제수를 대신하여 주정알콜을 사용하는 경우 항노화 활성을 극대화하면서 관능성을 개선할 수 있다(실시예 참조).
그 뒤 3) 단계로서 상기 추출된 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여 산약, 뽕잎, 감초, 계피, 황련, 황기, 백출, 백봉령 잎, 숙지황 및 작약으로 구성되는 군으로부터 선택되는 2개 이상의 생약재 10 ~ 50 중량부를 혼합하는 단계를 포함하여 관능성이 우수한 겨우살이 환을 제조한다. 상술한 바와 같이 겨우살이 추출물을 주성분으로하여 환을 제조하는 경우 관능성 낮아 일반 수요자들의 기호에 맞지 않는 문제가 있다. 이에 본 발명에서는 상기 추출된 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여 산약, 뽕잎, 감초, 계피, 황련, 황기, 백출, 백봉령 잎, 숙지황 및 작약으로 구성되는 군으로부터 선택되는 2개 이상의 생약재 10 ~ 50 중량부를 혼합하여, 기능성 및 관능성을 극대화시켰다.
이 때, 상기 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여 자일리톨, 옥타코사놀, 스테아린산마그네슘, 비타민 C, 타우린, 허브, 알긴산나트륨 및 스쿠알렌으로 구성되는 군으루부터 선택되는 어느 하나 이상의 기능성 물질을 더 혼합할 수 있다.
한편, 가장 바람직하게는 상기 3) 단계에서 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여, 감초 26 ~ 28중량부, 계피 8 ~ 10중량부, 자일리톨 3 ~ 5중량부, 비타민 C 3.7 ~ 3.9 중량부, 옥타코사놀 0.9 ~ 1.1 중량부, 스테아린산마그네슘 0.1 ~ 0.3 중량부를 혼합하여 환을 제조하는 경우 관능성이 가장 우수한 겨우살이 환을 제조할 수 있다.
바람직하게는, 상기 3) 단계에서 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여, 백출 26 ~ 28중량부, 백봉령 잎 8 ~ 10중량부, 자일리톨 3 ~ 5중량부, 비타민 C 3.7 ~ 3.9 중량부, 옥타코사놀 0.9 ~ 1.1 중량부, 스테아린산마그네슘 0.1 ~ 0.3 중량부를 혼합하여 환을 제조하는 경우 관능성이 우수한 겨우살이 환을 제조할 수 있다.
본 발명의 겨우살이 환 및 겨우살이 환 제조시 사용하는 부형제(賦形劑), 결합제, 붕해제(崩解劑), 활택제(滑澤劑) 중에서 선택된 어느 하나 이상을 포함할 수 있우 겨우살이 100중량부에 대하여 0.1～ 5중량부를 포함할 수 있다. 상기에서 부형제의 일예로 유당, 전분, 셀룰로오스, 미세결정셀룰로오스 중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있다. 상기에서 결합제의 일례로 녹말, 덱스트린, 꿀, 시럽제, 셀룰로오스 중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있다. 상기에서 붕해제의 일예로 결정셀룰로오스, 전분, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘염, 메틸셀룰로오스 중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있다. 상기에서 활택제의 일예로 스테아린산마그네슘, 글리세릴 베헤네이트, 탈크, 식물경화유 중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있다. 상기에서 언급한 부형제(賦形劑), 결합제, 붕해제(崩解劑), 활택제(滑澤劑)는 환 제조시 사용하는 성분이므로 본 발명에서 이러한 성분을 사용할 경우 당업자가 적의 선택하여 적용할 수 있으므로 이하 자세한 내용은 생략하기로 한다.
본 발명의 겨우살이 환 및 겨우살이 환 제조시 겨우살이를 포함하는 원료를 환 제조기를 이용하여 겨우살이 환을 얻을 수 있으며, 본 발명의 겨우살이 환의 일예로서 무게가 0.15～2g의 겨우살이 환을 얻을 수 있다.
본 발명의 겨우살이 환 및 겨우살이 환 제조시 환이기를 이용하여 겨우살이 환을 제조한 후 겨우살이 환의 표면을 코팅하여 표면이 코팅된 겨우살이 환을 얻을 수 있다. 이때 환의 표면에 코팅하는 코팅제는 인체에 유해성이 없으며, 식품관련 분야에서 코팅제로서 사용할 수 있는 것이라면 어떠한 것이라도 사용할 수 있으며, 이러한 코팅제의 일예로서 하이드록시 프로필 메틸 셀룰로오스(Hydroxy prophyl methyl cellulose, HPMC), 셀락(Shellac), 젤라틴(gelatin), 아라비아검(Arabic Gum), 카카오(cacao), 레시틴(lecitin)을 환의 표면에 코팅할 수 있다.
상기에서 겨우살이 환의 표면에 코팅제로 코팅시 상기 코팅제를 스프레이(spray)와 같은 분무장치를 이용하여 겨우살이 환의 표면을 코팅할 수 있다. 한편, 겨우살이 환의 표면에 코팅제로 코팅하는 방법은 당업자가 적의 선택하여 실시할 수 있으므로 이하 자세한 내용은 생략하기로 한다.
본 발명의 겨우살이 환 제조시 겨우살이 환의 원료 성분들의 혼합은 겨우살이 환의 원료 성분들이 잘 혼합될 수 있도록 하기 위해 10～20℃에서 20～60분 동안 실시할 수 있다. 이때 겨우살이 환의 원료 성분들의 혼합시 겨우살이와 생약재를 한꺼번에 혼합할 수 있고, 기능성 물질을 추가로 더 첨가하는 경우 겨우살이, 생약재, 기능성물질을 한꺼번에 혼합하거나 또는 생약재, 기능성물질을 1차로 혼합한 후 겨우살이 성분을 첨가하여 2차로 혼합할 수 있다.
본 발명의 겨우살이 환 제조시 겨우살이 환의 원료 성분들의 혼합한 후 숙성시킬 수 있다. 구체적으로 본 발명의 겨우살이 환 제조시 겨우살이 환의 원료 성분들의 혼합한 후 10～30℃에서 1～5시간 동안, 바람직하게는 10～20℃에서 2～4시간 동안, 보다 더 바람직하게는 20℃에서 3시간 동안 숙성시킬 수 있다. 겨우살이 환의 원료 성분들은 수분함량이 각기 다르므로 겨우살이 환의 원료 성분들의 수분평형이 이루어지도록 하여 겨우살이 환 제조를 보다 원활하기 위해 상기와 같은 조건으로 겨우살이 환의 원료 성분들을 혼합한 후 숙성을 실시하는 것이 유리하다.
본 발명의 겨우살이 환 및 겨우살이 환 제조시 겨우살이 환의 기능성을 보다 더 향상시키기 위해 2차 기능성물질을 더 포함하거나 사용할 수 있다. 본 발명의 겨우살이 환 및 겨우살이 환 제조시 겨우살이 환의 기능성을 보다 더 향상시키기 위해 호로파씨(Fenugreek seed) 분말의 2차 기능성물질을 더 포함하거나 사용할 수 있다. 본 발명의 겨우살이 환 및 겨우살이 환 제조시 겨우살이 환의 기능성을 보다 더 향상시키기 위해 모시잎(ramie leaf) 분말의 2차 기능성물질을 더 포함하거나 사용할 수 있다. 상기의 2차 기능성물질인 호로파씨 분말은 겨우살이 100중량부에 대하여 0.5～10중량부를 더 포함하거나 또는 사용할 수 있다. 상기의 2차 기능성물질인 모시잎 분말은 겨우살이 100중량부에 대하여 0.5～10중량부를 더 포함하거나 또는 사용할 수 있다.
상기의 호로파씨(Fenugreek seed) 분말은 호로파씨를 호로파씨 중량 대비 3～30배의 환수에 첨가하고 90～110℃에서 최초 환수의 부피 대비 5～50%, 바람직하게는 5～35%, 보다 바람직하게는 5～30%, 보다 더 바람직하게는 5～25%가 되도록 추출한 후 여과하고 분무건조방법에 의해 분말화한 다음 입도크기가 10～100메쉬(mesh)로 조절한 것을 사용할 수 있다.
상기의 모시잎(ramie leaf) 추출물은 모시잎을 모시잎 중량 대비 3～30배의 환수에 첨가하고 90～110℃에서 최초 환수의 부피 대비 5～50%, 바람직하게는 5～35%, 보다 바람직하게는 5～30%, 보다 더 바람직하게는 5～25%가 되도록 추출한 후 여과하고 분무건조방법에 의해 분말화한 다음 입도크기가 10～100메쉬(mesh)로 조절한 것을 사용할 수 있다.
본 발명의 겨우살이 환 및 이의 제조방법에 대해 다양한 조건으로 실시한바, 본 발명의 목적을 달성하기 위해서는 상기에서 언급한 조건에 의해 겨우살이 환 및 이의 제조방법을 제공하는 것이 바람직하다.
이하 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 권리범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
1. 기기 및 시약
본 연구에 사용한 겨우살이는 경동시장에서 국내산을 구매하여 사용하였으며, 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH, Sigma, USA), Tris(hydroxymethyl) aminomethane(Sigma, USA), EDTA(Sigma, USA), pyrogallol(Sigma, USA), Folin-ciocalteu's phenol(Sigma, USA), catechin(Sigma, USA), Absorbance Microplate(Bio-Tek, USA), Dulbecco's modified Eagle's medium(Sigma, USA), Fetal bovine serum(Sigma, USA), Trypsin EDTA solution(Sigma, USA), Nutrient mixture F-12 Ham(Sigma, USA), Phosphate buffer saline(Sigma, USA), Human normal fibroblast(ATCC, Korea), IL-8(Dakara, Japan), ELISA kit(Dakara, Japan)의 특급 시약 및 기기를 이용하였다.
<제조예 1>
국내산 겨우살이(Viscum album)를 경동시장에서 추말(굵은 가루) 상태를 구입하여 믹서기를 이용하여 미분하여 분말상태의 것을 사용하였다. 추출기는 내부 볼륨이 10L인 추출기를 이용하였으며, 고압용 기체펌프를 이용하여 추출기 내부에 초암계 이산화탄소를 공급하여 온도와 압력을 높혔다. 구체적으로 batch별 시료량은 2Kg, 추출시간은 2시간, 추출 온도는 40℃, 추출기 내부압력은 300bar로 탈지 하였다.
상기 초임계 이산화탄소를 통해 추출된 겨우살이 탈지박 시료 100g에 주정 1,000ml를 사용하여 80℃에서 환류 추출한 후 진공감압농축기를 이용하여 감압농축하여 주정알콜을 제거한 후 동결 건조하여 각 3반복씩 진행하여 평균치를 산출하고 활성 분석에 사용하였다.
<제조예 2>
용매로서 주정을 대신하여 정제수 1,000ml을 사용한 것을 제외하고는 제조예 1과 동일하게 제조하여 겨우살이 추출물을 제조하였다.
<시험예>
상기 제조예 1 및 제조예 2에서 추출된 겨우살이 추출물에 대하여 하기와 같은 물성을 측정하였다.
1. 추출수율 측정
유지를 제거한 겨우살이 탈지박의 추출 수율은 정제수를 추출용매로 사용한 추출물은 20.86% 이었으며, 주정을 추출 용매로 사용한 추출물은 27.14%로서 주정을 사용한 경우 추출수율이 현저하게 높게 나타났다(도 2 참조).
2. 전자공여능(Electron donation abilities, EDA) 측정
활성산소(reactive oxygen)는 물질대사 과정에서 지속적으로 생성되는 부산물로 세포 또는 조직의 손상을 초래하여 염증, 노화, 종양, 당뇨병을 포함한 여러 질환에 직간접적으로 관련되어 있다. 활성산소를 제거하기 위한 생체방어 시스템은 SOD, catalase, glutathione peroxidase 등에 의한 효소적 방어체계와 식품을 통해 섭취한 항산화 물질에 의한 비효소적 방어체계가 있다. 본 실험에서 초임계 이산화탄소를 이용한 겨우살이 탈지박 추출물의 항산화능을 비교 분석하기 위하여 전자공여능을 DPPH 라디칼을 이용하여 측정하였다.
구체적으로 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH, Sigma, USA)라디칼 소거능은 Blois의 방법(Blois MS., 1958)으로 측정하였다. 시료를 MeOH로 녹여 최종 농도가 10mg/ml이 되도록 1.5ml tube에 넣고 0.3mM DPPH 500ul 넣어 총 양이 1ml가 되도록 하였다. 실온에서 30분간 반응시킨 후 Aborbance Microplate(Bio-Tek, USA)로 517nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. DPPH 라디칼 소거능은 시료 용액의 첨가구와 무첨가군 사이의 흡광도의 차이를 백분율로 나타내었다.
EDA(%) = (1- (A/B)) X 100
A : 추출물 첨가구의 흡광도
B : 추출물 무첨가구의 흡광도
도 2는 전자공여능 측정결과로서, 제조예 1의 전자공여능은 79.97%를 나타냈으나 제조예 2는 46.17%에 불과하였다.
3. SOD(Superoxide dismutase, SOD) 활성 측정
항산화 효소 중의 하나인 SOD는 환원 산소종을 과산화수소(H2O2)로 전환하는 반응을 촉매하는 효소이며, 과산화수소는 peroxidase나 catalase에 의하여 무해한 물분자와 산소분자로 전환된다. 구체적으로 Superoxide dismutase(SOD) 활성 측정은 Marklund등의 방법(Marklund S and Marklund G., 1075)으로 측정하였다. 1,000ug/ml 농도의 시료 2ml, Tris-HCl buffer[50mM Tris(hydroxymethyl) aminomethane + 10mM EDTA, pH 8.5] 3ml, 7.2mM pyrogallol 0.2ml을 첨가하여 25℃에서 10분간 반응시키고 1N HCl 1ml를 가하여 반응을 정지시켰다. 반응 액 중 산화된 pyrogallol의 양은 420nm에서 Aborbance Microplate(Bio-Tek, USA)를 사용하여 흡광도를 측정하였으며, SOD 유사활성은 시료 용액의 첨가구와 무첨가구 사이의 흡광도 차이를 백불율로 나타내었다.
SOD(%) = (1- (A/B)) X 100
A : 추출물 첨가구의 흡광도
B : 추출물 무첨가구의 흡광도
도 2에서 알 수 있듯이, 정제수를 이용한 추출물은 20.70%, 주정을 이용한 추출물은 18.97%로 나타나유사한 활성을 보였다. 한편 식품의약품안전청에서 인정한 면역력 증강 효과가 있는 홍삼 뿌리 주정 추출물의 20.2%(Choi ME, Jeon BK, Kim DS, Mun YJ, Woo WH. 2009. A study on application for beauty food of mixture of Korean red ginseng and Fagopyrum esculentum. Korean J Oriental Medical Prescription 17: 153-162.)와 유사한 활성을 나타냈다.
4. 폴리페놀 함량 측정
폴리페놀 함량 측정은 Folin-Denis법(Coseteng and Lee., 1987)을 일부 변경하여 측정하였다. 1,000ug/ml 농도의 시료 1ml에 Folin-ciocalteu's phenol 시약 2.5ml을 가하고 10분간 방치한 다음 7.5% NaCO3 1ml을 첨가하여 30분간 실온에서 방치한 후 Aborbance Microplate(Bio-Tek, USA)로 725nm에서 흡광도를 측정하였고, 표준물질로는 catechin(Sigma Chenical Co.)을 이용하여 환산 정량하였다.
도 3에서 알 수 있듯이 폴리페놀 함량은 카테킨을 표준물질로 10-500ug/ml의 농도범위에서 표준곡선을 작성하여 이를 환산 정량하였으며, 초임계 이산화탄소를 이용한 겨우살이 탈지박을 정제수를 추출용매로 사용한 추출물이 3.42% 이었으며, 주정을 추출용매로 사용한 추출물은 4.98%를 나타냈다(도 2).
5. 미백 효능 측정
BF16-F10 melanoma 세포를 10% FBS가 함유된 DMEM으로 6well에 세포수 2ⅹ104cells/well의 농도로 각 well에 2ml씩 첨가하고 5% CO2, 37℃ 조건하에서 24h 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 10% FBS, 0.2mM theophylline이 함유된 DMEM으로 교체하고 농도별로 희석한 시료를 각각 첨가하고 나서 5% CO2, 37℃ 조건하에서 세포가 약 80% 이상 될 때까지 배양하였다. 배양 후 배지를 제고한 다음 PBS로 세척하고 trypsin으로 처리하여 세포 pellet을 회수하였다. 회수된 pellet을 1.5ml eppendorf tube로 옮겨 5,000rpm으로 10분간 원심 분리 한 후 상등액을 제거하였다. 상등액이 제거되 pellet을 60℃ 항온기에서 24시간 건조시킨 후 1N NaOH를 첨가하여 세포내의 melanin을 용해시켰다. 용해된 melanin을 PBS로 적당량 희석 후 Aborbance Microplate를 이용하여 490nm에서 흡광도를 측정한 후 melanin 생성 저해율(%)을 계산하였다.
멜라닌 생성 억제 효과(%) = ((대조군-실험군)/대조군) ⅹ 100
BF16-F10 melanoma 세포를 이용하여 초임계 이산화탄소를 이용한 겨우살이 탈지박의 정제수 및 주정 추출물 시료를 각각 0.0025 ~ 0.01%(W/V)로 처리한 후 24시간 배양한 후 멜라닌 생성량을 알부틴과 비교하여 측정한 결과 정제수 추출물은 알부틴과 유사한 멜라닌 생성 억제 효과를 나타내었고, 주정 추출물은 알부틴보다 높은 효과를 나타내었다(도 4).
6. 항염 효능 측정
DMEM과 HAM's/F-12 media를 3:1의 비율로 조성하고 FBS를 10% 농도의 배양액에서 human normal fibroblast를 배양하였다. Fibroblast를 12 well plate에 분주한 후 24시간 배양하였다. 그 후 2ⅹ 10-4 M의 H2O2를 control을 제외한 모든 well에 처리하였다. 8시간 후 배양액을 교환해주며 sample을 처리하여 48시간 배양하였다. 이 중 배양 상등액을 취하여 배양액 중으로 유리된 IL-8을 ELISA kit로 정량 하였다.
Human normal fibroblast를 이용하여 초임계 이산화탄소를 이용한 겨우살이 탈지박의 정제수 및 주정 추출물 시료를 각각 0(control), 0.5, 1.0, 5.0%(W/V) 농도로 처리한 후 측정한 결과 control과 비교하여 최고 주정 추출물은 5% 농도에서 약 60% 감소하였다(도 5).
<실시예 1>
제조예 2에서 제조한 겨우살이 추출물을 분무건조한 후 입도크기를 조절하여 입도크기가 80메쉬인 겨우살이 분말을 얻었다.
상기의 겨우살이 분말 100중량부에 대하여 산약 27중량부, 뽕잎 9중량부, 자일리톨 4중량부, 비타민C 3.8중량부, 옥타코사놀 1중량부, 스테아린산마그네슘 0.2중량부를 20℃에서 40분 동안 호바트 믹서기로 1차 혼합한 후 겨우살이 분말을 첨가하여 골고루 혼합하였다.
그 뒤 겨우살이 분말이 포함된 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 숙성시키고 환이기를 이용하여 압력 8kg/cm2, 순간온도 80℃으로 환하여 1개당 무게가 0.3g인 겨우살이 환을 제조하였다.
상기의 겨우살이 환의 표면에 하이드록시 프로필 메틸 셀룰로오스(HPMC) 3％ 용액으로 스프레이(spray) 코팅하여 표면이 HPMC로 코팅된 겨우살이 환을 제조하였다.
상기에서 산약, 뽕잎, 자일리톨, 비타민 C, 옥타코사놀, 스테아린산마그네슘은 모두 각각 분쇄기로 분쇄하여 겨우살이 분말과 동일한 입도크기로 조절한 것을 사용하였다.
<실시예 2>
산약 27중량부, 뽕잎 9중량부를 대신하여, 감초 27중량부 및 계피 9중량부를 혼합한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 겨우살이 환을 제조하였다.
<실시예 3>
산약 27중량부, 뽕잎 9중량부를 대신하여, 황련 27중량부 및 황기 9중량부를 혼합한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 겨우살이 환을 제조하였다.
<실시예 4>
산약 27중량부, 뽕잎 9중량부를 대신하여, 백출 27중량부 및 백봉령 잎 9중량부를 혼합한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 겨우살이 환을 제조하였다.
<실시예 5>
산약 27중량부, 뽕잎 9중량부를 대신하여, 숙지황 27중량부 및 작약 9중량부를 혼합한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 겨우살이 환을 제조하였다.
<실시예 6>
제조예 1에서 제조한 겨우살이 추출물을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 겨우살이 환을 제조하였다.
<실시예 7>
제조예 1에서 제조한 겨우살이 추출물을 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 실시하여 겨우살이 환을 제조하였다.
<실시예 8>
제조예 1에서 제조한 겨우살이 추출물을 사용한 것을 제외하고는 실시예 3과 동일하게 실시하여 겨우살이 환을 제조하였다.
<실시예 9>
제조예 1에서 제조한 겨우살이 추출물을 사용한 것을 제외하고는 실시예 4와 동일하게 실시하여 겨우살이 환을 제조하였다.
<실시예 10>
제조예 1에서 제조한 겨우살이 추출물을 사용한 것을 제외하고는 실시예 5와 동일하게 실시하여 겨우살이 환을 제조하였다.
<실시예 11>
제조예 1에서 제조한 겨우살이 추출물을 분무건조한 후 입도크기를 조절하여 입도크기가 80메쉬인 겨우살이 분말을 얻었다.
상기의 겨우살이 분말 100중량부에 대하여 감초 27중량부, 계피 9중량부, 자일리톨 4중량부, 비타민C 3.8중량부, 옥타코사놀 1중량부, 스테아린산마그네슘 0.2중량부, 호로파씨 3중량부를 20℃에서 40분 동안 호바트 믹서기로 1차 혼합한 후 겨우살이 분말을 첨가하여 골고루 혼합하였다.
그 뒤 겨우살이 분말이 포함된 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 숙성시키고 환이기를 이용하여 압력 8kg/cm2, 순간온도 80℃으로 환하여 1개당 무게가 0.3g인 겨우살이 환을 제조하였다.
상기의 겨우살이 환의 표면에 하이드록시 프로필 메틸 셀룰로오스(HPMC) 3％ 용액으로 스프레이(spray) 코팅하여 표면이 HPMC로 코팅된 겨우살이 환을 제조하였다.
상기에서 감초, 계피, 자일리톨, 비타민 C, 옥타코사놀, 스테아린산마그네슘은 모두 각각 분쇄기로 분쇄하여 겨우살이 분말과 동일한 입도크기로 조절한 것을 사용하였다.
상기에서 호로파씨(Fenugreek seed)는 호로파씨를 호로파씨 중량 대비 20배의 환수에 첨가하고 100℃에서 최초 환수의 부피 대비 20%가 되도록 추출한 후 여과지로 여과하고 분무건조방법에 의해 분말화한 다음 겨우살이 분말과 입도크기가 동일하도록 조절한 것을 사용하였다.
<실시예 12>
제조예 1에서 제조한 겨우살이 추출물을 분무건조한 후 입도크기를 조절하여 입도크기가 80메쉬인 겨우살이 분말을 얻었다.
상기의 겨우살이 분말 100중량부에 대하여 감초 27중량부, 계피 9중량부, 자일리톨 4중량부, 비타민C 3.8중량부, 옥타코사놀 1중량부, 스테아린산마그네슘 0.2중량부, 모시잎(ramie leaf) 2.5중량부를 20℃에서 40분 동안 호바트 믹서기로 1차 혼합한 후 겨우살이 분말을 첨가하여 골고루 혼합하였다.
그 뒤 겨우살이 분말이 포함된 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 숙성시키고 환이기를 이용하여 압력 8kg/cm2, 순간온도 80℃으로 환하여 1개당 무게가 0.3g인 겨우살이 환을 제조하였다.
상기의 겨우살이 환의 표면에 하이드록시 프로필 메틸 셀룰로오스(HPMC) 3％ 용액으로 스프레이(spray) 코팅하여 표면이 HPMC로 코팅된 겨우살이 환을 제조하였다.
상기에서 감초, 계피, 자일리톨, 비타민 C, 옥타코사놀, 스테아린산마그네슘은 모두 각각 분쇄기로 분쇄하여 겨우살이 분말과 동일한 입도크기로 조절한 것을 사용하였다.
상기에서 모시잎(ramie leaf)은 모시잎을 모시잎 중량 대비 20배의 환수에 첨가하고 100℃에서 최초 환수의 부피 대비 20%가 되도록 추출한 후 여과지로 여과하고 분무건조방법에 의해 분말화한 다음 겨우살이 분말과 입도크기가 동일하도록 조절한 것을 사용하였다.
<비교예 1>
제조예 2에서 제조한 겨우살이 추출물을 분무건조한 후 입도크기를 조절하여 입도크기가 80메쉬인 겨우살이 분말을 얻었다.
그 뒤 겨우살이 분말을 20℃에서 3시간 동안 숙성시키고 환이기를 이용하여 압력 8kg/cm2, 순간온도 80℃으로 환하여 1개당 무게가 0.3g인 겨우살이 환을 제조하였다.
상기의 겨우살이 환의 표면에 하이드록시 프로필 메틸 셀룰로오스(HPMC) 3％ 용액으로 스프레이(spray) 코팅하여 표면이 HPMC로 코팅된 겨우살이 환을 제조하였다.
<시험예 1>
실시예 1 내지 실시예 12에서 제조한 각각의 겨우살이 환에 대하여 식품관련 분야에서 3년 이상 관능검사 경험을 지닌 남녀 20명(남여 각각 10명)으로 하여금 9점 척도법에 의해 맛, 향, 색, 외관, 씹힘성(저작성), 기호도와 같은 관능검사를 실시하고 그 결과를 아래의 표 1에 나타내었다.
처리구 맛 향 색 외관 씹힘성 기호도
실시예 1 7.7 7.6 7.7 7.9 7.7 7.7
실시예 2 8.3 8.5 8.6 8.4 8.7 8.5
실시예 3 8.2 8.3 8.2 8.2 7.8 8.1
실시예 4 8.3 8.5 8.4 8.5 8.5 8.3
실시예 5 8.2 8.4 8.1 8.0 8.3 8.3
실시예 6 7.9 7.8 8.0 7.8 7.7 7.8
실시예 7 8.4 9.0 8.6 8.7 8.9 8.9
실시예 8 8.2 8.5 8.3 8.3 7.8 8.2
실시예 9 8.4 8.6 8.5 8.5 8.6 8.4
실시예 10 8.3 8.5 8.0 8.2 8.7 8.5
실시예 11 8.5 9.1 8.6 8.8 9.1 9.0
실시예 12 8.5 9.0 8.6 8.6 9.0 8.9
비교예 1 4.7 5.5 6.9 7.1 6.5 5.1
본 발명의 실시예 1 ~ 12의 겨우살이 환은 겨우살이 만으로 이루어진 비교예 1의 겨우살이 환에 비하여 관능성이 현저하게 우수하다. 한편, 실시예 2의 겨우살이 환의 기호도가 가장 높았으며, 전반적으로 추출용매로서 물을 사용한 실시예 1 ~ 5의 겨우살이 환에 비하여 주정알콜을 사용한 실시예 6 ~ 10의 겨우살이 환의 기호도가 높았다. 나아가, 호로파씨 또는 모시잎을 첨가한 실시예 11, 12의 겨우살이 환이 이를 추가하지 않은 실시예 6에 비하여 높은 기호도를 나타내었다.
본 발명의 겨우살이 환은 겨우살이를 환(pills) 형태로 가공함으로써 휴대 및 복용이 간편하고 겨우살이에 대한 저장을 용이하게 할 뿐 아니라 겨우살이의 유효성분의 함량이 높으면서도 관능성이 현저하게 우수하므로 식품산업에 널리 활용될 수 있다.

Claims (5)

1) 한국산 겨우살이(Viscum album L. var. coloratum)를 초임계 이산화 탄소를 이용하여 유용성분을 탈지하여 겨우살이 탈지박을 제조하는 단계;
2) 상기 겨우살이 탈지박을 용매에 혼합한 후, 이를 추출하여 겨우살이 추출물을 제조하는 단계; 및
3) 상기 추출된 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여, 감초 26 ~ 28중량부, 계피 8 ~ 10중량부, 자일리톨 3 ~ 5중량부, 비타민 C 3.7 ~ 3.9 중량부, 옥타코사놀 0.9 ~ 1.1 중량부, 스테아린산마그네슘 0.1 ~ 0.3 중량부를 혼합하는 단계를 포함하는 관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법.
제1항에 있어서, 상기 2)단계의 용매는 주정알콜인 것을 특징으로 하는 관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법.
제1항에 있어서, 상기 3) 단계에서 겨우살이 추출물 100중량부에 대하여 타우린, 허브, 알긴산나트륨 및 스쿠알렌으로 구성되는 군으루부터 선택되는 어느 하나 이상의 물질을 더 혼합하는 것을 특징으로 하는 관능성이 우수한 겨우살이 환의 제조방법.
삭제
겨우살이 추출물 100중량부에 대하여, 감초 26 ~ 28중량부, 계피 8 ~ 10중량부, 자일리톨 3 ~ 5중량부, 비타민 C 3.7 ~ 3.9 중량부, 옥타코사놀 0.9 ~ 1.1 중량부, 스테아린산마그네슘 0.1 ~ 0.3 중량부를 포함하는 관능성이 우수한 겨우살이 환.
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