KR101248101B1

KR101248101B1 - 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 포함하는 미백 및 항산화용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101248101B1
Application number: KR1020120099492A
Authority: KR
Inventors: 박근동; 이대우; 하정욱
Original assignee: 주식회사 더마랩
Priority date: 2012-09-07
Filing date: 2012-09-07
Publication date: 2013-03-27

Abstract

본 발명은 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 포함하는 미백 및 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이며, 본 발명의 화장료 조성물은 우수한 미백효과 및 항산화 효과가 있으므로, 천연화장품으로서 사용이 가능하다.

Description

둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 포함하는 미백 및 항산화용 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising extract of Kummerowia stipulacea and Persicaria orientalis for whitening and antioxdiant}

본 발명은 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 포함하는 미백 및 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이다.

최근, 화장품업계나 식료품업계에서는 동물 유래 원료의 인체에 미치는 악영향이 많이 알려짐에 따라 동물 유래 원료 사용에 대한 규제가 강해지고 있어, 식물 유래 원료에 대한 관심이 한층 높아지고 있다.

또한, 생체 외로부터 받아들이거나, 생체 내에서 발생하는 활성 산소 등의 산화 반응의 영향에 의한 노화 촉진이나, 자외선에 의한 피부의 착색이나 발암 작용의 문제도 심각하게 고려 되고 있다. 예를 들면, 화장료 나 식료품의 제조, 가공 또는 저장·보존 중에 각종 소재 중에 포함되는 유지류가 공기 중의 산소에 의해 산화 및 과산화 되는 것이 문제가 되고 있다. 특히, 유지 중에 포함되는 리놀레산, 리놀렌산의 불포화 지방산은, 공기 중의 산소에 의해 용이하게 과산화 되어서 과산화 지질이나 자유 라디칼을 생성하고, 게다가 발암성 물질도 생성하는 것으로 알려져 있다. 이러한 산화 및 과산화가 일어나면, 제품이 착색, 변색, 변성, 악취 등의 외적 변화 또는 영양가나 유효성의 저하 등의 질적 변화가 생긴다. 더욱이, 변성이 진행되면 독물의 생성 등이 일어나 제품 그 자체의 품질의 열화를 초래한다. 그래서, 전술한 불포화 지방산의 산화 및 과산화를 억제하고, 품질의 열화를 방지하기 위해서 종래부터 여러 항산화제가 사용되고 있다. 항산화제는 산화시에 생기는 퍼옥시드 라디칼에 작용하여, 산화의 연쇄 반응을 정지시키거나, 또는 자유라디칼에 작용하여 산화 반응을 정지시킨다. 이러한 항산화제로는, 예를 들면 부틸히드록시아니솔(BHA), 부틸히드록시톨루엔(BHT) 등의 합성 항산화제가 일반적으로 사용되고 있다. 그러나, 최근에 합성 항산화제의 사용량이 증가함에 따라서 인체에의 영향 및 안전성이 문제가 되어 소비자의 거부 반응이 강해져 가고 있다. 또한, 이들 합성 항산화제는 유용성 때문에 수용액에의 사용이 곤란하다. 한편, 안정성이 높은 천연물 유래의 항산화제로는, 예를 들면 천연 비타민 E(α-토코페롤)나 비타민 C 등이 알려져 있다. 그러나, 이러한 천연물 유래의 항산화제는 극단적인 지용성 또는 수용성이라는 양극의 성질을 가지고 있기 때문에 그 이용에는 자연히 한계가 있고, 그 활성이 장시간 안정적으로 지속되지 않는 등의 결점도 있다. 따라서, 항산화 활성이 강하고, 물에의 용해성이 우수하며, 게다가 항산화 활성이 장시간 안정한 천연물 유래의 항산화제를 화장료 조성물에 이용하는 것이 요구되고 있다.

또한, 피부의 착색이나 얼룩 등의 색소 침착의 요인으로는 생체 내에서의 대사 장해 등의 내인적 요소와, 자외선 등에 의한 외인적 요소를 들 수 있다. 일반적으로 많이 보여지는 것은 후자의 외인적 요소에 의한 것이며, 자외선에 의해 멜라노사이트가 자극을 받고, 멜라노사이트가 활성화됨으로써 티로시나제 효소가 작용하여 피부에의 색소 침착 생긴다. 이 멜라노사이트의 활성을 억제하고, 티로시나제 효소 및 멜라닌 색소의 생성을 억제함으로써 피부의 착색이나 얼룩 등의 색소 침착을 방지할 수 있는 것이 알려져 있다. 그래서, 화장품업계에서는 미백 작용을 갖는 물질의 개발이 종래부터 중요시 되고 있고, 이에 따라 여러 미백제가 개발되고 있다.

둥근매듭풀(Kummerowiastipulacea)은 우리나라의 전국 각지의 산과 들 개울가 또는 길가에서 흔히 자란다. 세계적으로는 중국, 러시아, 시베리아지망, 일본에도 분포되어 있다. 콩과의 한해살이 풀이며 식물체의 높이 10~20cm이다. 줄기는 밑부분에서 가지가 많이 갈라지며 위를 향한 털이 있다. 잎은 어긋나게 붙고 잎자루가 짧으며 3개의 쪽잎으로 된 겹잎(3출복엽)으로 쪽잎은 밑부분의 것은 거꿀달걀모양(도란형)이고 끝이 오목하며 윗부분의 것은 좁은 거꿀달걀모양이며 모두 엄지잎줄(주맥)뒷면과 가장자리에 퍼진털이 있고 받침잎(턱잎)은 길게 뽀족해 진다. 8~9월에 꽃이 잎겨드랑이 (엽액)에서 핀다. 꽃은 꽃꼭지(소화경)가 짧은 홍자색의 꽃과 꽃잎이 없는 닫긴꽃(폐쇄화)이 있다. 꽃받침은 털이 없고 끝이 5개로 갈라지며 수술은 10개이고 꽃싸게잎(포)과 작은꽃싸게잎(소포)은 각각 1~3개의 줄이 있다. 꽃투리열매(협과)에는 1개의 씨가 들어있으며 9~10월에 익고 끝에 도드라기(돌기)가 있다. 매듭풀과 같이 가축의 사료용으로 쓰인다.

붉은털여뀌(Persicaria orientalis)는 높이가 2m 되는 한해살이 풀이다. 줄기에 털이 많으며 잎은 긴 달걀 모양이고 크며 담배 잎과 비슷하다. 진한 붉은색의 작은 꽃이 줄기 끝에 이삭처럼 내려 드리우며 각지의 들판, 마을 주변에서 자란다. 주성분으로는 전초에 플라보노이드인 쿠에르시트린(quercitrin),비텍신(vitexin), C₂₁H₂₀O₁₀, 타닌질, 카페산, 클로로겐산, 몰식자산, 흔적의 알카로이드, 질산칼륨과 β-시토스테롤, 많은 양의 플라스토퀴논-9 C₅₃H₈₀O₂이 있다. 성분 비텍신은 일정한 정도의 항암 활성이 있다. 전초 추출물은 흰 생쥐에서 진정작용이 있고 떼어낸 개구리 심장을 억제하며 개구리 뒷다리 핏줄과 토끼 귀 핏줄을 뚜렷이 수축한다. 동의 치료에서 전초(홍초, 수홍초, 천교)를 풍습을 없애며 건위작용이 있다고 하며 풍습성 관절염, 이질, 구토설사, 풍습수종, 각기, 어린이 감적에 15~16g 또는 30g까지 쓴다. 민간에서는 전초 달임 액으로 눈 앓이 때 씻거나 뱀 독을 푸는데 쓴다.

김태정 한국의 야생화와 자원식물2, 서울대학교출판부, 459p, 460p(2008) 약초의 성분과 이용, 과학백과사전출판사편, 203p(1999)

본 발명의 목적은 주름개선 및 탄력증진 효과에 의한 항노화 활성을 갖는 화장료 조성물을 제공하는 데에 있다.

본 발명은 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 포함하는 미백 및 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서, 둥근매듭풀은 및 붉은털여뀌는 강원도 원주시 문막읍 반계리 인근 섬진강 변에서 채집하여 사용하였으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌는 전초를 이용할 수 있다.

본 발명에서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물은 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌의 건조물을 먼저 혼합하고 추출한 추출물이나, 둥근매듭풀 단독 추출물 및 붉은털여뀌 단독 추출물의 혼합물 일 수도 있다. 또한, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물은 그 형상에 대한 부가적인 언급이 없는 한 액상일 수도 있고, 분말일 수 도 있다.

본 발명에서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물의 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 이들의 혼합용매(예를 들어, 함수알코올, 함수글리세린, 함수에틸렌글리콜, 함수프로필렌글리콜, 함수 부틸렌글리콜)중에서 선택된 것일 수 있고, 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매 중에서 선택된 것이 바람직하다. 즉, 물, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올 또는 함수알코올에서 선택된 용매로 추출되는 것이 바람직하다. 여기서, 탄소수 1 내지 4의 알코올은 메탄올, 에탄올, n-프로판올, iso-프로판올, n-부탄올, iso-부탄올, tert-부탄올일 수 있으며, 에탄올이 바람직하다. 여기서, 함수 알코올은 물을 0.3 내지 90(wt/wt)%로 함유할 수 있다.

이들 추출용매 중 함수 에탄올이 가장 바람직하며, 함유된 물의 양은 30 내지 90(wt/wt)% 내가 바람직하며, 70(wt/wt)%가 보다 더 바람직하다. 본 발명에서, 00(wt/wt)% 함수 알코올은 알코올이 00% 중량비로 함유된 것을 의미한다.

본 발명의 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌의 추출물은 통상의 기술자에게 알려진 공지의 추출법에 의해 제조된다. 예를 들어, 본 발명에서의 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 건조물을 세절하고, 그 건조 중량의 1~50배 부피량의 물, 탄소수 1~4의 알코올 또는 이들의 함수 알코올과 중에서 선택된 추출용매를 부가하여 4∼30℃에서 3∼20일간 침적시켜 유효성분을 추출한 후, 추출용매를 감압농축기로 농축하여 수득될 수 있다. 또한, 본 발명의 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌는 건조물을 분쇄하여 혼합하고, 이들의 혼합 건조 중량의 1~30배 부피량의 물, 탄소수 1~4의 알코올 또는 이들 알코올과 물과의 혼합용매, 에틸아세테이트, 물, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매를 사용하며, 이어서 용매가 증발되는 것을 방지하기 위하여 냉각 콘덴서를 구비한 추출기로 30∼100℃에서 3∼48시간 동안 가열 추출하거나 5∼30℃에서 1~5일간 침적시켜 유효성분을 추출하고, 추출 용매를 감압농축기로 농축하여 수득 될 수 있다.

또한, 위에서 열거한 추출용매에 공지된 초음파 추출법_등을 이용하여 제조할 수 있다.

본 발명의 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물의 추출온도는 추출용매에 따라 달라질 수 있으나, 50 내지 100℃이 바람직하다.

본 발명에서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌를 정제수로 깨끗이 세척하여 사용하며, 추출방법에 따라 건조시켜 세절 하거나 가루로 만들어 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명에서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌의 혼합 중량비는 다양하게 변할 수 있으나, 건조중량비로 1:3 내지 3:1으로 혼합된 것이 바람직하며, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌의 건조중량비가 2:1로 혼합된 것이 보다 더 바람직하다.

본 발명의 화장료 조성물에서 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001~10.0중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있고, 바람직하게는 0.001∼5.0중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 영양로션, 영양크림, 마사지크림, 영양세럼, 에센스, 팩 등의 제형을 가질 수 있다.

또한, 각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기의 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물 외에 다른 성분들을 기타 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 임의로 선정하여 배합할 수 있다. 예를 들어, 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 착색제(색소), 착향제(향료), 현탁화제, 유화제, 용해보조제, 안정제, 등장제, pH조절제, 점도조절제, 용제, 방부제 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물 이외에 미백 또는 항산화 효과를 나타내는 다른 유효성분을 1이상 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물 이외에 염증 완화 또는 피부자극완화 효과를 나타내는 다른 유효성분을 1이상 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 미백 효과 및 항산화 효과가 우수하다.

이하, 하기 실시예 및 실험예에 의해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니며, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로 해석되어야 할 것이다.

실시예 1. 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물의 분말 제조

강원도 원주시 문막읍 반계리 인근 섬진강 변에서 채집한 둥근매듭풀(학명: Kummerowia stipulacea) 및 붉은털여뀌(학명: Persicaria orientalis)를 정제수로 세척한 후, 건조시킨 둥근매듭풀 50g 및 붉은털여뀌 50g을 증류수 2㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 80℃로 2시간 끓여서 3회 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 실온에서 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(제품명: Coolace CCA-1100, 제조사: EYELA)를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 (모델명: B-290, BUCHI사 제품)를 다음조건으로 이용하여 건조시킨 표제의 추출 분말 10g을 얻었다.

- 인렛(Inlet) 온도 : 180 ℃

- 흡입기(Aspirator) 효율 : 100% (35㎤/시간)

- 펌프(Pump) 효율 : 25% (7.5㎖/분)

- 노즐 클리너 4(Nozzle Cleaner 4)

- 유량계(Rotameter) : 30㎜ (357리터/시간)

실시예 2 내지 실시예 11. 혼합비율에 따른 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물의 분말 제조

둥근매듭풀 및 붉은털여뀌의 혼합비율(혼합 중량비)은 하기 표와 같이 조절하여 실시예 1 과 동일한 방법으로 추출 및 여과하였다. 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌는 정제수로 세척 후 건조시킨 것을 이용하였고 하기 혼합비율은 건조중량비를 의미한다. 결과는 하기 표 1 과 같다.

[표 1]

실시예 12 내지 실시예 23. 추출 용매에 따른 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물의 분말 제조

정제수로 세척 후 건조시킨 둥근매듭풀 66.6g 및 붉은털여뀌 33.4g(실시예 7과 동일한 중량비로 사용함)을 사용하고 하기 [표 2]에 기재된 추출용매를 2kg 사용한 것을 제외하고, 실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여, 실시예 12 내지 23 의 표제의 분말을 제조하였다. 그 결과는 하기 [표 2]와 같다.

[표 2]

비교예 1. 둥근매듭풀 추출물 분말의 제조

실시예 14의 방법에서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌를 각각 66.6g 33.4g 사용한 것 대신에, 정제수로 깨끗이 세척하여 건조시킨 둥근매듭풀만을 100g을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법과 동일한 방법으로 실시하여, 표제의 분말을 9g 제조하였다.

비교예 2. 붉은털여뀌 추출물 분말의 제조

실시예 14의 방법에서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌를 각각 66.6g 33.4g 사용한 것 대신에 정제수로 깨끗이 세척하여 건조시킨 붉은털여뀌를 100g을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법과 동일한 방법으로 실시하여, 붉은털여뀌 추출물 분말을 8g 제조하였다.

비교예 3. 감초추출물 분말의 제조

실시예 14의 방법에서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌를 각각 66.6g, 33.4g을 사용한 것 대신에, 정제수로 깨끗이 세척하여 건조시킨 감초(구입처: 경동시장, 학명: Glycyrrhiza glabra)만을 100g을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법과 동일한 방법으로 실시하여, 표제의 분말을 9g 제조하였다.

비교예 4. 녹차추출물 분말의 제조

실시예 14의 방법에서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌를 각각 66.6, 33.4g을 사용한 것 대신에, 정제수로 깨끗이 세척하여 건조시킨 녹차(구입처: 경동시장 학명: Camellia sinensis)만을 100g을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법과 동일한 방법으로 실시하여, 녹차 추출물 분말을 8g 제조하였다

제형예 1. 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 이용한 화장수 제조

둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물(실시예 14)을 함유한 화장수(스킨로션)를 하기의 [표 3]의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.

[표 3]

상기 [표 3]에서 11번 물질에 2, 3, 4, 8번 물질을 순서대로 반응용기에 투입하고 교반하여 용해시킨 후, 5번 물질을 60℃ 정도로 가열하여 용해시켰다. 이 후, 10번 물질을 반응용기에 투입하여 용해한 후 11번 물질에 투입하였다. 마지막으로 1, 6, 7, 9번 물질을 투입하여 충분히 교반시킨 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 화장수를 제조하였다.

제형예 2. 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 이용한 영양 로션 제조

둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물(실시예 14)을 함유한 하이드로좀 영양로션을 하기의 [표 4]의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.

[표 4]

상기 [표 4]에서 10, 11, 13, 16번 물질을 혼합 교반 하면서 80 ~ 85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 12번 물질을 80 ~ 85℃사이로 가열 용해한 후 유화시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반 하면서 50℃까지 냉각한 뒤 15번 물질을 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 14번 물질을 투입하고 35℃에서 1번 물질을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 영양로션을 제조하였다.

제형예 3. 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 이용한 영양 세럼 제조

둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물(실시예 14)을 함유한 하이드로좀 영양세럼을 하기의 [표 5]의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.

[표 5]

상기 [표 5]에서 2, 3, 5번 물질을 혼합 교반 하면서 40 ~ 45℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 4, 6, 7번 물질을 제조부에 투입하고 유화시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반 하면서 35℃까지 냉각하고 1번 물질을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 영양 세럼을 제조하였다.

제형예 4. 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 이용한 에센스 제조

둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 함유한 하이드로좀 에센스를 하기의 [표 6]의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.

[표 6]

상기 표에서 2, 3, 4, 5 및 6번 물질을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질을 제조하였다. 이 비이온계 양친매성 지질과 1, 7, 8 및 14번 물질을 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루이다이져를 통과시키고 이어 9번 물질을 50 ~ 60℃로 가온하여 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루이다이져에 재차 통과시켰다. 그 후, 10, 11, 12, 13번 물질을 투입하여 분산시켜 안정화하고 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 에센스를 제조하였다.

실험예 1. 세포 무독성 및 세포 증식 효과 확인

상기 실시예에서 제조된 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물에 대하여 세포배양을 이용한 세포 증식 효과를 측정하였다.

1) 실험방법

세포 독성 및 증식 실험을 다음과 같은 방법으로 실시하였다. 배양하고 있는 세포(파이브로블라스트, 3T3)를 96 웰 마이크로플레이트에 5,000세포/웰로 분주하여 30분간 항온조에서 배양하고, 시료를 농도 별 각각 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0(%W/V))로 투여하여 72시간 동안 배양하였다. 그리고 티아졸린 블루(Thiazoline blue)를 1mL를 투여하고 4시간 동안 추가 배양을 하였다. 배양액을 모두 버리고 마이크로플레이트의 각 웰에 반응 정지액(acidic isopropanol)을 가하고 5분간 교반한 후, 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료 주입량만큼 10 % 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS) 배지를 투여하여 세포 성장의 최적 조건으로 동시배양을 하였으며, 대조군의 세포증식을 100%로 하고 시료 투입 실험군의 세포 증식률을 계산하였다.

2) 실험결과

세포증식률은 하기 [식 1]에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 [표 7]에 나타내었다.

[식 1]

[표 7]

[표 7]에서 나타난 바와 같이, 세포 성장 최적 조건에서의 세포 증식을 100%로 하였을 때, 측정 오차범위를 고려하면 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물은 모두 세포 무독성이며, 세포 증식 효과가 있음이 확인되었다.

실험예 2. 제형안정도 확인

둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 포함하는 제형예 1 내지 4에서 제조한 제형에 대하여 실온(25℃), 4℃ 및 45℃로 일정하게 유지되는 실내, 냉장고 및 항온수조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관 후 육안으로 변색, 변취 및 분리를 관찰하여, 안정성을 확인 하였으며, 그 결과는 [표 8]과 같다.

[표 8]

<제형 안정 등급>

0 : 변화 없음, 1 : 미세한 변화, 2 : 변화, 3: 극심한 변화

[표 8] 에서 나타난 바와 같이, 제형예 1 내지 4 제형 모두 실온, 4℃ 및 45℃ 온도 조건하에서 변색, 변취 및 분리 현상이 나타나지 않고 안정하였다.

실험예 3. B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정

둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물의 미백효과를 확인하기 위해서 B16F1 멜라노사이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도에 근거하여 이들의 미백 효과를 판단하였다.

본 실험예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며, 멜라닌 이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공 배양중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교평가 하였다. 본 실험예에서 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호: 6323)로부터 분양 받아 사용하였다.

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×10⁶ 세포수/mL농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 0.1%(wt/v)농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 37℃에서 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기에서 배양하였다. 여기서, 시료의 농도를 맞추기 위해 사용된 용매는 PBS(phosphate buffered saline)을 이용하였다. 72시간 배양 후 세포를 trypsin-EDTA 500μl를 처리하여 떼어 낸 후 세포 수를 측정한 다음 원심 분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이티드, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1ml를 첨가하여 5분간 와류 하여 세포를 파괴하였다. 원심분리(3,000rpm, 10분) 하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10% DMSO)를 120μL을 첨가하여 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 리더로 405nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 [식 2]에 의하여 계산하였으며, IC₅₀ 값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이며, 그 결과는 [표 9]와 같다.

[식 2]

저해율(%) = [(A-B)/A]X100

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양

[표 9]

상기 [표 9]와 같이, B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성억제 효과를 시험한 결과 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물의 멜라닌 합성 저해율은 0.1(wt/v%) 처리농도에서 0.35%로 둥근매듭풀 단독 추출물, 붉은털여뀌 단독 추출물 및 감초추출물 비해 우수하였다. 특히 본 발명의 추출물은 둥근매듭풀 단독추출물보다 약 1.75배, 붉은털여뀌 단독 추출물 보다 약 3.5배 이상 향상된 멜라린 생성 저해율을 나타내었다. 또한, 본 발명의 추출물은 감초추출물에 비해 약 11.7배 이상 향상된 멜라린 생성 저해율을 나타내었다.

실험예 4. NBT 법을 이용한 항산화 효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 14에서 수득한 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위해 실험실 조건에서 다른 항산화제 즉, 레티놀과 BHT(dibutyl hydroxytoluene)를 비교샘플로 하여, NBT법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.

항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가하였다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성된 활성산소를 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium; NBT)과 반응시켜 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정하였으며, 구체적인 활성산소 소거율 측정방법은 다음과 같다.

1. 0.05M Na₂CO₃------------------------------------ 2.4ml

2. 3mM 크산틴 용액 -------------------------------- 0.1ml

3. 3mM EDTA 용액 ---------------------------------- 0.1ml

4. BSA 용액 --------------------------------------- 0.1ml

5. 0.72mM NBT 용액 -------------------------------- 0.1ml

6. 크산틴 옥시다제 용액 --------------------------- 0.1ml

7. 6Mm CuCl₂ 용액 --------------------------------- 0.1ml

① 바이알(5ml vial)에 1, 2, 3, 4, 5를 가하고 여기에 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 0.1(wt/v)%농도로 제조한 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다.

② 그 후 6을 가하여 빨리 교반하고 25℃ 에서 20분간의 배양을 개시한다.

③ 그 후 7을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

④ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.

⑤ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 6대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

효과의 결과는 [식 3]에 의하여 산출하였으며, 결과는 [표 11]과 같다.

[식 3]

억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕X 100

St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

[표 10]

상기 [표 10]과 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었다. 특히 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물은 둥근매듭풀 또는 붉은털여뀌 단독 추출물에 비하여 우수한 항산화 효과를 나타냈을 뿐만 아니라, retinol과 BHT 보다 우수한 항산화 효과를 나타내었다.

실험예 5. DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정 실험

본 실험예는 실시예 14에서 수득한 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 녹차추출물과 비타민 E와 같은 항산화제를 비교 샘플로 하여 DPPH법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.

DPPH법은 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl free radical(DPPH)라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정하며, 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.

사용한 시약으로서는 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl free radical(Aldrich Chem. Co., MW=394.32g/mol) 0.1Mm 용액으로서 61.88mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 하며, 구체적인 측정방법은 다음과 같다.

① 96-웰 플레이트에 0.1mM DPPH 용액 0.15ml에 0.01(wt/v)% 농도의 정제수로 용해시킨 시료용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.

② 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

③ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.

④ 역시, 시료용액의 플랭크(Blank)는 0.1mM DPPH 용액 대신에 메탄올을 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

효과의 결과는 [식 4]에 의하여 산출하였으며, 결과는 [표 11]와 같다.

[식 4]

억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕X 100

St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

[표 11]

상기 [표 11]과 같이 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물은 0.01% 농도에서, 동일농도의 둥근매듭풀 또는 붉은털여뀌 단독 추출물 보다 우수한 항산화 효과를 나타내었다. 또한 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물은 우수한 항산화 효과를 가진 것으로 알려진 녹차추출물 비타민E 보다 더 우수한 항산화 효과를 나타내었다.

Claims

둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 포함하는 미백 및 항산화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 이들의 혼합용매 중에서 선택된 추출용매로 추출된 것인 미백 및 항산화용 화장료 조성물.
제2항에 있어서, 상기 추출 용매가 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매 중에서 선택된 것인 미백 및 항산화용 화장료 조성물.
제3항에 있어서, 상기 추출 용매가 70(wt/wt)%함수 에탄올인 미백 및 항산화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌의 건조중량비가 1:3 내지 3:1으로 혼합된 것인 미백 및 항산화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌의 건조중량비가 2:1로 혼합된 것인 미백 및 항산화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 둥근매듭풀 및 붉은털여뀌 추출물을 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 ~ 5중량%를 포함하는 미백 및 항산화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 화장료가 유연화장수, 영양화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 영양세럼, 에센스 또는 팩의 제형인 미백 및 항산화용 화장료 조성물.