KR101216894B1

KR101216894B1 - 은행 추출물을 포함하는 신종인플루엔자 ａ (ｈ1ｎ1) 바이러스 감염의 예방용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 기상필터 및 상기 필터를 포함하는 공기청정기

Info

Publication number: KR101216894B1
Application number: KR1020120082832A
Authority: KR
Inventors: 김형준; 박찬정
Original assignee: 코웨이 주식회사
Priority date: 2009-10-14
Filing date: 2012-07-27
Publication date: 2012-12-28
Also published as: JP2011084547A; KR20120092540A; KR20110040629A; JP5383577B2

Abstract

본 발명은 은행 추출물을 포함하는 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 기상필터 및 상기 필터를 포함하는 공기청정기에 관한 것으로, 은행 추출물을 포함하는 조성물은 뛰어난 항신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）활성을 가짐으로써 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방에 사용될 수 있으며 상기 조성물이 코팅된 필터는 공기 중의 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스를 효과적으로 제거할 수 있어 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

은행 추출물을 포함하는 신종인플루엔자 Ａ (Ｈ1Ｎ1) 바이러스 감염의 예방용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 기상필터 및 상기 필터를 포함하는 공기청정기{Composition for prevention of new influenza Ａ (Ｈ1Ｎ1) virus comprising extracts of ginkgo, air filter comprising the composition and air cleaning device comprising the filter}

본 발명은 은행 추출물을 포함하는 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물, 기 조성물을 포함하는 기상필터 및 상기 필터를 구비한 공기청정기에 관한 것이다.

2009년 3월부터 전세계적으로 범유행하고 있는 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스는 인플루엔자바이러스 A형 H1N1 아형(영어: Influenza A virus subtype H1N1)의 변종으로서 발생 초기 돼지 독감이라고 불리었으나 후에 돼지에 의해 감염되는 것이 아니라는 결론 하에 이름이 철폐되었고 한국 언론 및 정부에서는 신종 플루(new influenza) 또는 신종 인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스라는 이름을 사용하고 있으며, 같은 해 6월 11일, 세계보건기구는 H1N1 인플루엔자의 전염병 경보 수준을 대유행으로 격상했다.

현재 대한민국에서는 2009년 9월 16일 발표를 기준으로 약 1만명 이상이 감염되었고, 8명은 중증으로 입원 치료를 받고 있으며, 14명이 지병 합병증 또는 급성 합병증으로 사망하였다고 보고되고 있다.

종래 인플루엔자의 치료에 사용되는 약물로는 오셀타미비르(상품명: 타미플루), 자나미비르(상품명: 릴렌자), 페라미비르(en:Peramivir), 아만타딘(en:Amantadine) 등이 있다. 타미플루로 불려지는 오셀타미비르가 현재 Ｈ１Ｎ１ 인플루엔자 A형의 치료에 주로 사용되고 있다. 타미플루는 세계에서 유일하게 독점 생산하는 조류 인플루엔자(AI) 치료제이다. 바이러스를 증식시키는 효소 기능을 막아 치료효과를 내는 항바이러스제이며, 증상이 발생한 뒤 48시간 안에 복용해야 효과가 크다. 주요 치료 효과는 독감 증세의 악화 감소, 기관지염이나 폐렴 등 2차 합병증 발생 감소, 독감 잠복 기간의 감소 등이다. 인플루엔자 A와 B의 치료제로도 쓰인다. 자나미비르는 자나미비어(Zanamivir)로도 불리며 상품명은 릴렌자(Relenza)이다. 이는 뉴라미니다아제 저해제로 작용하여 인플루엔자 A 및 B형의 치료에 사용되고 있다.

그러나, 오셀타미르는 심각한 구토증세가 나타나는 부작용이 있으며 자나미비르는 항바이러스 효과는 높지만 생체이용율이 낮고 신장에서의 배출이 빠르다는 단점이 있다.

현재까지 개발된 항인플루엔자 치료제들은 부작용을 나타내는 경우가 대부분이다. 따라서, 인플루엔자의 예방 및 치료에 효과적인 항인플루엔자 조성물의 개발이 시급한 실정이다.

한편, 인플루엔자는 보통 기침이나 재채기를 통해 공기 중으로 나오는, 바이러스가 함유된 연무질을 흡입함으로써 인플루엔자에 감염된다. 이 외에도 타 개체의 배설물, 침, 콧물, 대변과 혈액으로도 전염될 수 있지만 대부분의 전염은 연무질 흡입으로 인한 비말감염이라고 할 수 있다. 이러한 인플루엔자는 햇빛, 소독제, 비누 등의 계면활성제로 불활성화되어 감염을 방지할 수 있지만 공기 중에 함유된 바이러스의 제거에는 도움이 되지 못하는 단점이 있다.

따라서, 이러한 공기 중의 바이러스를 제거할 수 있다면 인플루엔자의 감염을 효과적으로 방지할 수 있을 것이다.

기상필터(air filter)는 필터를 통과하는 기체 중 오염 입자를 걸러내어 필터를 통과한 기체가 정화되도록 하는 통기성 부재이다. 이러한 기상필터는 가전제품, 차량, 건물 등 다양한 장소에서 사용되며, 예를 들어, 공기청정기, 에어컨, 건조기, 청소기, 가습기, 제습기, 차량 공기조화장치, 건물 내 중앙 공기조화시스템 등에서 사용될 수 있다.

한편, 공기청정기(空氣淸淨器, air cleaner)는 오염된 공기를 정화하여 신선한 공기로 바꾸는 장치로서 하나의 공기청정기에 다수의 필터가 사용된다. 일반적으로, 입자가 큰 먼지 등을 제거하는 전처리 필터와; 냄새, 휘발성 유기화합물, 포름알데히드 등 유해물질을 제거하는 탈취 필터와; 미세먼지를 제거하는 고성능 필터인 헤파 필터와; 헤파 필터 전면에 설치되어 먼지로부터 헤파 필터를 보호하는 중간 필터 등이 하나의 공기청정기에서 각각 1개 내지 2개 이상 사용될 수 있다.

이러한 필터를 보다 많이 사용할수록 공기정화성능은 향상될 수 있으나, 전체적인 공기순환에 저항을 높일 수 있어서 전체적으로 3~5단계의 필터가 사용되는 것이 일반적이다.

최근에는 공기청정기를 사용하는 인체에 유해한 물질을 선택적으로 보다 정교하게 제거하거나 또는 유해한 물질을 인체에 이로운 물질로 대체할 수 있는 기능성 필터가 연구되고 있다. 연구되고 있는 예시로써, 유아를 위해 보다 미세한 물질을 걸러낼 수 있는 고성능 미세물질 필터, 또는 새집증후군에 의한 유해물질을 걸러낼 수 있는 새집증후군 전용 필터 등이 있다.

은행나무는 은행나무목(銀杏?目 Ginkgoales)에서 유일하게 살아 있는 대표적인 교목으로서, 생김새가 피라미드형으로 둥그런 기둥처럼 생긴 줄기에 가지가 많이 달리지 않으며, 키 30m, 지름 2.5m까지 자란다. 수피(樹皮)는 오래된 나무의 경우 회색빛이 돌고 골이 깊게 패어 있으며, 결이 코르크 같다. 목재는 엷은 색깔이며 가볍고 약하여 경제적 가치는 거의 없다. 잎은 부채 모양으로 공작고사리의 잎을 닮았으며 짧고 두꺼운 어린 가지에 달린다. 가죽질의 잎은 길이가 8㎝에 이르고 너비는 그 2배가 되기도 한다. 2개의 나란히맥이 긴 잎자루의 부착점에서 각 잎사귀 쪽으로 뻗어 잎가장자리로 가면서 반복되어 갈라져 있다. 대부분 잎은 가운데 있는 V자형의 새김을 중심으로 둘로 나누어져 있다. 잎은 여름에는 흐린 회녹색에서 황록색을 띠나 가을에는 황금색으로 바뀌며 늦가을까지 나무에 붙어 있다가 떨어진다. 껍질을 벗겨 말린 씨를 백과(百果)라고 하는데, 폐와 위를 깨끗하게 해주며, 진해?거담에 효과가 있다. 은행잎에서 추출되는 징코플라본 글리코사이드는 혈액순환 개선제로 쓰인다.

이에, 본 발명자들은 상기와 같은 점을 감안하여 항신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）조성물을 찾던 중 은행 추출물이 뛰어난 항신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１） 활성을 가짐으로써 이를 유효성분으로 포함하는 조성물이 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방에 사용될 수 있으며 상기 조성물을 필터에 코팅함으로써 공기 중의 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스를 효과적으로 제거할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 은행 추출물을 포함하는 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１） 바이러스 감염의 예방용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 기상필터를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 필터를 포함하는 공기청정기를 제공하는 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 일 양태로서, 은행 추출물을 유효성분으로 포함하는 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물이 제공된다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 조성물은 의약외품에 사용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 상기 조성물을 포함하는 기상필터가 제공된다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 상기 기상필터를 포함하는 공기청정기가 제공된다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 은행 추출물을 유효성분으로 포함하는 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물을 제공한다.

본 발명에서 용어, "예방"이란 조성물의 사용에 의해 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

Ｈ１Ｎ１인플루엔자 바이러스는 정식명칭이 인플루엔자바이러스 A형 Ｈ１Ｎ１의 아형(Influenza A virus subtype H1N1)으로, 사람에게 발병하는 인플루엔자에서 가장 흔한 유형이다. 사람 이외에도 돼지나 새에도 감염?발병할 수 있으며, 구체적인 종류로는 A/PR/8(H1N1), A/WSN/33(H1N1), A/Bervig-Mission/1/18(rvH1N1), A/Singapore/6/86(H1N1) 등이 있다.

신종인플루엔자 A(H1N1) 바이러스는 2009년 인플루엔자 범유행(2009 flu pandemic)을 일으킨 바이러스로서 A/California/O4/09, A/California/7/2009 등이 있다.

본 발명에서, 상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스는 독감, 감기, 인후염, 기관지염, 폐렴을 일으킬 수 있다.

본 발명에서 은행은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다.

본 발명에서, 은행은 잎, 열매, 수피, 뿌리 등의 부위를 사용할 수 있으며 바람직하게는 잎을 사용할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.

본 발명에서, 상기 은행 추출물은 그 추출방법에 있어 단순한 추출방법에서부터 지용성 성분까지 추출할 수 있는 모든 방법이 적용될 수 있으며, 추출이 용이하도록 분쇄하여 추출 용매에 의해 추출하고 이를 여과 및 농축하여 얻을 수 있다.

추출 용매로는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, n-헥산, n-헵탄 또는 DMSO 등이 있고 이들 중 2 이상의 용매를 혼합하여 추출 용매로 사용할 수도 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 추출하고자 하는 원료의 양, 추출 방법 등에 따라 당업자가 공지의 방법으로부터 적절히 선택할 수 있다. 추출 시간 및 온도도 추출 효율, 추출 용매 등을 고려하여 당업자가 공지의 방법으로부터 적절히 선택 가능하다. 바람직한 추출 시간은 10분 내지 1시간이며, 바람직한 추출 온도는 40 내지 100℃ 이다.

또한, 상기 추출방법에 의해 추출된 추출물을 감압 여과 등의 공지의 여과 방법에 의해 여과한 후 증류 등에 의해 농축할 수 있다. 이와 같은 추출, 여과 및 농축 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 따라서 당업자는 이를 적절히 선택하여 은행 추출물을 제조할 수 있다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１） 바이러스 감염의 예방용 조성물은 의약외품에 사용할 수 있다.

즉, 본 발명의 조성물은 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방을 목적으로 의약외품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적에 따라 적절하게 결정될 수 있다.

바람직하게는, 상기 의약외품 조성물은 필터 코팅제, 핸드워시, 가그린, 소독청결제, 샤워폼, 물티슈, 세제비누, 가습기 충진제, 마스크 또는 방향제의 제조에 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물을 포함하는 기상필터를 제공한다.

본 발명에서, 용어 "기상필터"란 공기 중의 미생물, 먼지 등을 제거하여 외부로부터의 미생물, 먼지 등의 위험물질 또는 오염물질의 유입을 방지하고, 필터에 의한 2차 오염을 방지하기 위한 필터를 말한다. 따라서, 본 발명에 따른 기상필터는 자동차용 기상필터, 가전제품용 기상필터, 공조기용 기상필터, 가스마스크용 기상필터, 공기정화기용 기상필터 또는 클린룸용 기상필터로 사용될 수 있으며, 바람직하게는 공기청정기용 기상필터에 사용될 수 있다.

더 나아가, 본 발명은 상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물을 포함하는 기상필터의 제조 방법을 제공하며, 하기에는 전술한 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물을 포함하는 기상필터의 제조 방법에 대하여 설명한다.

본 발명의 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물을 포함하는 기상필터의 제조 방법은,

(a) 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물을 제조하는 단계;

(b) 상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물을 필터 기재에 코팅하는 단계； 및

(c) 상기 코팅된 필터를 건조하는 단계를 포함하며,

상기 (b) 단계는,

상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물에 롤러를 침지한 후, 상기 침지된 롤러를 사용하여 상기 용액을 상기 필터 기재에 도포하는 단계；

상기 신종인플루엔자 Ａ（H1N1）바이러스 감염의 예방용 조성물에 상기 필터기재를 포함한 롤러를 침지하는 단계； 및

상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물을 상기 필터 기재에 스프레이하는 단계로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 단계에 의하여 수행되는 것을 특징으로 한다.

필터 기재로서는 금속, 플라스틱, 부직포, 필름 등이 사용될 수 있다. 공기청정기용 기상필터로써는 높은 다공성의 부직포가 사용되는 것이 바람직하나, 이에 제한되지는 않는다.

플라스틱 재료에는 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리우레탄, 아크릴, PVC 또는 폴리스티렌 등이 있으나 이에 제한되는 것은 아니며 바람직하게는 폴리프로필렌이다.

부직포(不織布)는 섬유 등을 적당히 배열하여 접착제 또는 자체 융착력 등에 의한 섬유 엉킴을 이용한 시트 모양의 천을 뜻하며, 그 기저(base)가 되는 물질에 따라 페이퍼(paper) 베이스 부직포, 섬유 베이스 부직포 등이 있다. 또한, 부직포 재료에는 레이온, 텐셀 또는 폴리프로필렌 등이 있으나 이에 제한되는 것은 아니며, 통상적인 부직포 재료로서 당업계에 공지된 재료는 모두 사용할 수 있다. 바람직하게는 폴리프로필렌이다.

본 발명의 필터 기재는 플라스틱 수지를 융점 부근의 온도로 가열하여 용융 방사하여 제조되는 필라멘트 사를 제직하는 제직형태 또는 섬유를 제직하지 않고 섬유의 웨브(web; 격자 모양으로 얽힌 것)를 만들고 이를 결합시키는 부직포 형태의 섬유용 필터로 제조하거나, 발포제를 추가하여 다공성의 발포체 필터로 제조할 수 있다.

기상필터 제조를 위해, 먼저 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물을 제조한다. 상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물은 바람직하기로는 일정 용매로 용해시키거나 희석하여 용액의 형태로 기상필터 제조에 사용될 수 있다. 여기에서 용매로는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올 또는 n-헥산, n-헵탄, DMSO 또는 이들의 혼합용매가 사용될 수 있다.

상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물로써 필터 기재를 코팅한다. 코팅하는 방법으로써, 스폰지와 같은 흡수성 부재가 외측에 부설된 롤러를 상기 조성물에 침지시킨 후 상기 롤러를 필터 기재에 롤링하고 이를 건조하여 코팅하는 방법, 필터 기재를 직접 상기 조성물에 침지시키고 건조시켜서 코팅하는 방법, 상기 조성물을 필터 기재에 스프레이시키고 건조시켜서 코팅하는 방법 등이 있다.

본 발명의 필터의 제조를 위한 코팅 공정은 이미 제조된 필터 기재에 적용할 수 있을 뿐만 아니라, 필터를 제직하기 전의 섬유 형태의 단계에서도 적용 가능하다. 섬유 형태인 경우, 필터 제직용 섬유를 먼저 본 발명의 조성물로 침지 또는 분사하는 코팅 공정을 수행하고, 상기 코팅 공정 후에 필터 기재를 제직하게 된다.

상기 본 발명의 조성물이 침지 또는 분사에 의해 코팅 처리된 필터를 건조하는 경우, 상온 또는 열풍 건조할 수 있으며, 건조 방법은 당업계에 공지된 방법을 제한 없이 사용할 수 있다. 건조에 의하여 본 발명의 조성물이 필터에 잘 흡착되어 장기간 동안 필터가 항균 효능을 가질 수 있다.

본 발명의 필터는 상기 본 발명의 조성물 외에도 기존의 항균 물질, 탈취제(예: 후라보노이드, 휘톤치트, 목초액, 식물추출물, 사이클로덱스트린, 금속이온, 이산화티탄) 또는 집진 여과제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 이들 성분은 함께 또는 성분별로 각각 별도 도포할 수 있으며, 도포 순서에는 특별한 제한이 없다.

또한, 본 발명은 상기 기상필터를 포함하는 공기청정기를 제공한다.

본 발명의 기상필터가 사용되는 일 실시예로서 공기청정기를 언급하면, 전술한 바와 같이 공기 청정기에는 다수의 필터가 사용되는데, 본 발명에 따른 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 조성물을 포함하는 기상필터는 기능성 필터로서 사용될 수도 있으며, 그 외의 공기청정기 내에 포함되는 어떠한 필터로써도 사용 가능하다.

본 발명의 상기 기상필터가 적용되는 공기청정기에는 그 제한이 없고, 가정 또는 사무실 내 공기청정기 또는 자동차용 실내정화용 필터 등이 그 예가 될 수 있으며, 이와 같은 통상의 공기청정기가 가지고 있는 통상의 구성요소를 포함할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 공기청정기는, 본 발명의 기상필터를 공기의 흡입구와 분출구의 사이에 배치하여 이루어진다.

또한, 본 발명은 상기 공기청정기를 사용하는 공기청정방법을 제공한다.

본 발명에 따른 은행 추출물을 포함하는 조성물은 뛰어난 항신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）활성을 가짐으로써 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방에 사용될 수 있으며 상기 조성물이 코팅된 필터는 공기 중의 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스를 효과적으로 제거할 수 있어 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방에 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 보다 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

제조예 1: 은행 추출물의 제조

본 제조예에서 사용한 은행은 잎 부위를 채취한 후 본 발명의 추출물을 효율적으로 얻기 위하여 건조시킨 후 파우더 형태로 분쇄하여 사용하였다. 은행 1 ㎏에 물 5 ℓ를 가하여 80℃의 수욕상에서 12시간 중탕하여 추출하고 여과지로 여과한 뒤 농축하여 은행 물 추출물을 얻었다.

제조예 2: 은행 추출물이 코팅된 본 발명 기상필터 제조

폴리프로필렌 필터 기재에 상기 제조예 1에서 제조된 은행 추출물을 물로 희석시켜 얻은 용액을 분무 코팅하여 140℃에서 4분 동안 건조하여 필터를 제조하였다.

실험예 1: 은행 추출물의 인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１） 바이러스 사멸활성 측정

본 발명의 제조예 1에서 얻은 은행 추출물의 인플루엔자 바이러스 사멸활성을 하기와 같이 측정하였다.

인플루엔자 바이러스로는 2009년 대유행이 선언(세계보건기구, 2009년 6월 11일 선언)된 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스로 WHO 표준균주인 인플루엔자 바이러스 H1N1 (A/California/O4/09) 과, 기존에 H1N1 타입으로 알려져 있는 다른 H1N1 타입의 바이러스로서 A/PR/8 (H1N1) 및 A/WSN (H1N1)을 사용하였다. 시료로는 상기 제조예 1에서 얻은 은행 추출물을 사용하였다. 보다 구체적인 실험 방법은 다음과 같았다.

먼저, MDCK(Mardine Darbine Canine Kidney) 세포주는 1.5 x 10⁶세포/㎖의 농도로 접종한 후 6-웰 플레이트(well plate)에서 37℃, 5% CO₂ 농도의 배양기로 24시간 동안 배양하였다. 또한, 은행 추출물을 100 ㎎/ml (1X)로 중외용수에 희석하였고, 이것을 10배씩 희석하여 시료를 준비하였다. 상기 준비한 시료를 96 웰 플레이트에 각각 90 ㎕씩 넣고, 인플루엔자바이러스 10 ㎕를 처리하고 10분간 반응시킨 후, 10배씩 PBS로 희석하였다. 그 후, 배양 접시 바닥에 가득 자란 MDCK 세포주를 상기 희석 용액 1 ㎖로 1시간 동안 감염시켰다. 한편,“감염+비투여”대조군(control, 인플루엔자바이러스로 감염시킨 후, 은행 추출물을 투여하지 않은 세포군)을 동일한 조건에서 반응 후 MDCK 세포주에 접종하여 배양하였다.

이후, 배지를 제거하고, 2×아가로스(Agarose)와 10 ㎍/㎖ 트립신이 포함된 2×MEM 배지를 중량비 1:1로 혼합한 후 2 ㎖씩 MDCK 세포주가 포함된 각각의 플레이트에 부었다. 상기 MDCK 세포주를 2일간 37℃ 인큐베이터에서 배양한 후 4% 파라포름알데히드 1 ㎖을 넣어 고정시키고, 물로 세척하여 아가로즈를 제거하였다. 그 다음 크리스탈 바이올렛(crystal violet)으로 염색하여 플라크(plaque)의 수를 측정하였으며 그 수는 플라크 형성 단위(plaque forming unit, pfu/㎖)로 계산하였다. 그 결과를 하기 표 1-3에 나타내었다.

[수학식 1]

각 시료 처리 후 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）(A/California/O4/09)의 역가

시료	바이러스 역가(pfu/㎖)	바이러스 저해율(%)
대조군	1.9x10⁶	-
은행 추출물	1.0x10²	99.99

각 시료 처리 후 인플루엔자 A/WSN/33 (H1N1)의 역가

시료	바이러스 역가(pfu/㎖)	바이러스 저해율(%)
대조군	3.4x10⁸	-
은행 추출물	7.0x10³	99.99

각 시료 처리 후 인플루엔자 A/PR/8 (H1N1)의 역가

시료	바이러스 역가(pfu/㎖)	바이러스 저해율(%)
대조군	3.9x10⁹	-
은행 추출물	6.0x10²	99.99

상기 표 1-3의 결과를 통해 대조군 그룹과 비교하여 은행 추출물을 처리한 경우 바이러스가 현저히 줄어드는바 본 발명의 은행 추출물이 뛰어난 항인플루엔자 바이러스 사멸 활성을 가짐을 알 수 있었다.

실험예 2: 본 발명 기상필터의 항인플루엔자 바이러스 사멸활성 측정

본 발명의 제조예 2에서 얻은 은행 추출물 처리 기상필터의 인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 사멸활성을 하기와 같이 측정하였다.

인플루엔자 바이러스로는 2009년 대유행이 선언(세계보건기구, 2009년 6월 11일 선언)된 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스로 WHO 표준균주인 인플루엔자 바이러스 H1N1 (A/California/O4/09)과, 기존에 H1N1 타입으로 알려져 있는 다른 H1N1 타입의 바이러스로서 A/PR/8/34(H1N1) 및 A/WSN/33(H1N1)을 사용하였다. 시료로는 상기 제조예 2에서 얻은 기상필터를 사용하였다. 대조구로는 어떠한 추출물도 처리하지 않은 기상필터를 사용하였다. 보다 구체적인 실험 방법은 다음과 같았다.

2×2 cm로 필터 여재를 채취한 후 필터에 바이러스액 일정량을 도포하고 10분동안 여재에 흡수하여 반응하게 한 후, 흡수된 필터 위에 배지(1 ㎖)를 넣고 10분 동안 흔들어 바이러스가 씻겨 나올 수 있게 한다. 이것을 희석하여 시료를 준비하였다. 상기 준비한 시료를 96 웰 플레이트에 각각 90 ㎕씩 넣고, 인플루엔자바이러스 10 ㎕를 처리하였다. 10분간 반응시킨 후, 10배씩 PBS로 희석하였다. 그 후, 배양 접시 바닥에 가득 자란 MDCK 세포주를 상기 희석 용액 1 ㎖로 1시간 동안 감염시켰다. 한편, “감염+비투여”대조군(control, 인플루엔자바이러스로 감염시킨 후, 어떠한 추출물도 투여하지 않은 세포군)을 동일한 조건에서 반응 후 MDCK 세포주에 접종하여 배양하였다.

이후, 배지를 제거하고, 2×아가로스(Agarose)와 10 ㎍/㎖ 트립신이 포함된 2×MEM 배지를 중량비 1:1로 혼합한 후 2 ㎖씩 MDCK 세포주가 포함된 플레이트에 부었다. 상기 MDCK 세포주를 2일간 37℃ 인큐베이터에서 배양한 후 4% 파라포름알데히드 1 ㎖을 넣어 고정시키고, 물로 세척하여 아가로즈를 제거하였다. 그 다음 크리스탈 바이올렛(crystal violet)으로 염색하여 플라크(plaque)의 수를 측정하였으며 그 수는 플라크 형성 단위 (plaque forming unit, pfu/㎖)로 계산하였다.

그 결과를 하기 표 4-6에 나타내었다.

시료	바이러스 역가(pfu/㎖)	바이러스 저해율(%)
대조군	1.9x10⁶	-
은행 추출물 처리 기상필터	Not-detected	99.99

각 시료 처리 후 인플루엔자 A/WSN/33 (H1N1)의 역가

시료	바이러스 역가(pfu/㎖)	바이러스 저해율(%)
대조군	3.4x10⁸	-
은행 추출물 처리 기상필터	Not-detected	99.99

각 시료 처리 후 인플루엔자 A/PR/8 (H1N1)의 역가

시료	바이러스 역가(pfu/㎖)	바이러스 저해율(%)
대조군	3.9x10⁹	-
은행 추출물 처리 기상필터	Not-detected	99.99

상기 표 4 내지 표 6의 결과를 통해 본 발명의 은행 추출물 처리 기상필터가 뛰어난 인플루엔자 바이러스 사멸활성을 가짐을 알 수 있었다.

Claims

은행 추출물을 유효성분으로 포함하는 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 의약외품 조성물로서, 상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스는 A/California/O4/09인 것을 특징으로 하는 의약외품 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, n-헥산, n-헵탄, DMSO 또는 이들의 혼합용매를 사용하여 추출한 것임을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 은행은 잎, 열매, 수피 또는 뿌리 부위인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염으로 인한 질환은 독감, 감기, 인후염, 기관지염 또는 폐렴인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 의약외품은 필터 코팅제, 핸드워시, 소독청결제, 샤워폼, 물티슈, 세제비누, 가습기 충진제, 마스크 또는 방향제임을 특징으로 하는 조성물.
제1항의 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 의약외품 조성물을 포함하는 기상필터.
(a) 제1항의 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 의약외품 조성물을 제조하는 단계;
(b) 상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 의약외품 조성물을 필터 기재에 코팅하는 단계; 및
(c) 상기 코팅된 필터를 건조하는 단계를 포함하며,
상기 (b) 단계는,
상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 의약외품 조성물에 롤러를 침지한 후, 상기 침지된 롤러를 사용하여 상기 용액을 상기 필터 기재에 도포하는 단계;
상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 의약외품 조성물에 상기 필터 기재를 포함한 롤러를 침지하는 단계; 및
상기 신종인플루엔자 Ａ（Ｈ１Ｎ１）바이러스 감염의 예방용 의약외품 조성물을 상기 필터 기재에 스프레이하는 단계로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 단계에 의하여 수행되는 것을 특징으로 하는, 기상필터의 제조 방법.
제7항에 있어서, 상기 필터 기재는 플라스틱 또는 부직포인 것을 특징으로 하는 제조 방법.
제8항에 있어서, 상기 부직포는 페이퍼 베이스 부직포 또는 섬유 베이스 부직포인 것을 특징으로 하는 제조 방법.
제6항의 기상필터를 포함하는 공기청정기.