KR101213570B1 - 우울증을 치료 또는 예방하기 위하여 사용되는 약제 또는 기능성 식품의 제조에 사용되는 5?메틸?1，3?벤젠디올 또는 그의 유도체의 용도 - Google Patents

우울증을 치료 또는 예방하기 위하여 사용되는 약제 또는 기능성 식품의 제조에 사용되는 5?메틸?1，3?벤젠디올 또는 그의 유도체의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은, 약제 또는 기능성 식품의 제조에서, 본 발명에서 정의된 것과 같은 구성 성분의 변수(constituent variable)를 갖는, 화학식 I의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체, 또는 이를 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 연구는, 본 발명에서 정의된 것과 같은 구성 성분의 변수(constituent variable)를 갖는, 화학식 I의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체, 또는 이를 포함하는 약학 조성물은, 플루옥세틴 또는 이미프라민보다 더욱 상당히 항우울 효과를 나타낸다는 것을 보여준다.

Description

우울증을 치료 또는 예방하기 위하여 사용되는 약제 또는 기능성 식품의 제조에 사용되는 5?메틸?1，3?벤젠디올 또는 그의 유도체의 용도{THE APPLICATION OF 5-METHYL-1,3-BENZENEDIOL OR DERIVATIVES THEREOF IN THE PREPARATION OF MEDICINES AND FUNCTIONAL FOODS FOR TREATMENT OR PREVENTION OF DEPRESSION}
본 발명은 약제 또는 기능성 식품의 제조에 사용되는 5-메틸-1,3-벤젠디올(5-methyl-1,3-benzenediol) 또는 그의 유도체, 또는 이들을 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 출원은 2007년 8월 3일에 출원된 중국 가출원 제200710066088.7호의 우선권 이익을 주장하며, 상기 출원의 명세서에 개시된 모든 내용은 본 출원에 원용된다.
우울증은 총 인구의 최대 20%에 영향을 미치는 흔한 정신 장애이다. 우울증의 통상적인 증상은 다음과 같다: 우울한 상태, 불안, 초조, 수면 장애, 비정상적 스트레스 반응, 및 인지기능 손상의 지속 또는 반복.
지난 수십년 동안, 신경생리학의 원동력 하에서 항우울제의 활성을 평가하기 위하여 허용된 수많은 동물 모델들이 개발되어 왔다. 가장 광범위하게 사용된 모델은 설치류의 강제수영 검사(forced swim test) 및 꼬리 현수법(tail suspension test)이다. 최근 몇년간, 수많은 연구들은 지속적인 암흑(constant darkness), 수면 방해, 및 예측 불가능한 경도의 만성적 스트레스는 우울증 발생에 대한 병인학적(etiological) 모델이라는 것을 보여주었다. 이러한 모델은 항우울제 연구의 지반이 되었다. 우울증의 발병기전(pathogenesis)은 아직도 완전히 밝혀지지 않았지만, 해마의 시냅스 가소성(hippocampal synaptic plasticity)의 변화(예를 들면, 장기 상승 작용(long-term potentiation)) 및 인지 기능에서의 해마의 시냅스의 역할은 선행 우울증의 중요한 메커니즘 중의 하나가 될 수 있다.
5-메틸-1,3-벤젠디올(통상적으로 오르시놀(orcinol)로 알려져 있음)은 유기 합성에 대한 열분해 중간체의 가공에서 열중합의 저해제로서 통상적으로 사용된다. 5-메틸-1,3-벤젠디올은 또한 RNA의 특이적 결정을 위한 시약이다. 5-메틸-1,3-벤젠디올 및 그의 유도체는 종종 항산화제로서 사용되었고, 항균 활성을 가지고 있다. 지금까지, 우울증, 불안, 초조, 수면 장애, 비정상적 스트레스 반응, 또는 인지기능 손상을 감소시키는 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체의 용도에 대해서 어떠한 보고도 이루어진 바가 없다.
본 발명은 우울증의 치료 또는 예방을 위하여 약제 또는 기능성 식품의 제조에 사용되는, 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체, 또는 이들을 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다. 더욱 상세하게, 본 발명은 우울증 또는 그와 관련된 질환 및 이러한 질병의 원인의 치료를 위한 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체에 관한 것이다.
발명의 요약
본 발명의 화합물은 하기 화학식 I의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체이다.
Figure 112010009638809-pct00001
상기 R1 또는 R2는 수소, β-D-글루코피라노실(β-D-glucopyranosyl), β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 만노실(mannosyl), 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 알로실(allosyl), 갈락토실(galactosyl), 람노피라노실(rhamnopyranosyl), 퓨코실(fucosyl), 크실로실(xylosyl), 아라비노실(arabinosyl), 아세틸, 프로피오닐(propionyl), 벤조일, 시나모일(cinnamoyl), 숙시닐(succinyl), 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질이다.
더욱 바람직하게, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 II의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체이다:
Figure 112010009638809-pct00002
상기 R1은 수소, β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 만노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질이다.
더욱 바람직하게, 상기 R1은 수소; β-D-글루코피라노실; 올시놀(orcinol)로서 열거된, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실; 또는 올시놀-1-O-β-D-글로코피라노시드(orcinol-1-O-β-D-glucopyranoside); 또는 올시놀-1-O-[β-D-글루코피라노실-(1→6)]-β-D-글루코피라노시드이다.
더욱 바람직하게, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 III의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체이다:
Figure 112010009638809-pct00003
상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질이다.
특히, R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 또는 람노피라노실이다.
더욱 바람직하게, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 IV의 5-메틸-1,3-벤젠디올 유도체이다:
Figure 112010009638809-pct00004
상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질이다.
바람직하게, R2는 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실 또는 아세틸이다.
미국 정신과 협회에 의해 발행된 Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, fourth edition(DSM-IV), 및 International Classification of Diseases, tenth edition(ICD-10)에서 설명된 바와 같이, 우울증은 다음의 서로 다른 아류형(subtype)의 정신 질환 및 장애를 포함한다: (1) 우울증, 조증(mania), 혼합형 조증(mixed mania), 및 경조병(hypomania)과 같은, 우울증 및 기분 장애(mood disorder); (2) 우울 장애(depressive disorder) 및 기분 나쁨(bad mood)과 같은, 우울 장애; (3) 또다른 정동 장애(affective disorder), 예를 들어, 다른 정신 질환 또는 물질(예를 들어, 중독성 약물) 또는 치료법(수술, 방사선 치료, 또는 화학요법과 같은 것)에 의해 야기된 우울 장애 및 동정 장애의 특성을 가진 아류형의 장애를 포함하는, 좋지 않은 건강(ill-health)에 의해 야기된 것; (4) 우울증 및 경조병(hypomania)의 2 이상의 에피소드를 포함하며, 조증(mania)과 우울증의 에피소드가 번갈아서 나타나는 양극성 장애(bipolar disorder) 또는 양극성 정동 장애(bipolar affective disorder).
DSM-IV 및 ICD-10에서 설명한 우울증의 증상 외에도, 본 발명은 또한 서캐디안 리듬 장애(circadian rhythm disorder), 수면 장애, 만성 스트레스, 불안, 급성 스트레스에 의해 유발된 손상(acute stress-induced impairment), 인지기능 손상 또는 인지기능 장애의 치료 및 예방을 포함한다.
우울증 외에도, 본 발명은 또한 서캐디안 리듬 장애(circadian rhythm disorder), 수면 장애, 만성 스트레스, 불안, 급성 스트레스에 의해 유발된 손상, 인지기능 손상 또는 인지기능 장애와 관련된 질병의 치료 및 예방을 포함한다. 게다가, 본 발명은 또한 절망(예를 들면, 자살 생각 및 행동), 기분 장애(mood disorder), 및 비정상적 급성 스트레스 반응의 예방 및 치료를 포함한다.
수면 장애 및 서캐디안 리듬 장애(circadian rhythm disorder): 우울증을 겪는 환자의 매우 흔한 질병인, 수면 장애는 우울증의 정도를 평가하기 위한 평가 척도의 내용 중의 하나이다. 서캐디안 리듬 장애(circadian rhythm disorder)는 가장 필수적인 생리적 기능을 의미한다. 정상적인 서캐디안 리듬(circadian rhythm)은 낮과 밤의 교차에 의하여 구동된다. 시간 차이, 계절, 생활 습관, 또는 유전은 서캐디안 리듬 장애(circadian rhythm disorder)를 유발할 수 있고, 더욱이 우울증 및 인지기능 손상과 같은, 고위 뇌기능(higher brain function)의 결함을 유발할 수 있다. DSM-IV 또는 ICD-10에 따르면, 수면 장애는 다음의 주요한 3 개의 카테고리로 나뉜다: (1) 불면증, 과다수면, 기면증, 호흡-관련 수면 장애, 및 서캐디안-리듬-관련(circadian-rhythm-related) 수면 장애와 같은, 비정상 수면(dyssomnias); (2) 악몽, 수면 공황(sleep panic), 및 몽유병과 같은, 사건 수면(parasomnias); (3) 물질(예를 들면, 중독성 약물) 또는 치료법(수술, 방사선 치료, 또는 화학요법과 같은 것)에 의해 야기된 건강-관련 수면 장애 및 수면 장애.
불안은 우울증을 겪는 환자의 가장 흔한 증상이다. 불안은 우울증의 정도를 평가하기 위한 가이드라인 중 하나이다. 불안 장애는 다음의 주요한 2 개의 카테고리를 포함한다: (1) 공황 장애(panic disorder), 예를 들면, 광장공포증, 특수한 공황 장애(특정한 동물, 환경, 또는 수혈에 대한 두려움, 사회 공포(social phobia), 또는 강박장애(obsessive-compulsive disorder)와 같은 것), 외상후 스트레스성 장애, 급성 스트레스성 장애, 및 과도한 불안 장애; 및 (2) 건강-관련 불안 장애 및 물질에 의해 유발된 장애(예를 들어, 중독성 약물) 또는 치료법(수술, 방사선 치료 또는 화학요법과 같은 것). 고가 플러스형 미로(elevated plus maze) 실험 및 동결 거동(freezing behavior)은 약제의 항-불안 활성을 평가하기 위하여 설치류 급성 독성 시험에 대해 널리 사용된다.
스트레스는 생물체의 생리적 또는 심리적 항상성을 심각하게 교란하는 어떠한 상태라고 생물계에서 정의된다. 스트레스는 정신 질환 및 인지 기능 장애와 같은, 수많은 질환을 악화시키거나 유발하는 주요한 요인 중의 하나라고 인식된다. 스트레스 사건은 매일의 수많은 일상 사건을 포함할 수 있고, 개인마다 달라질 수 있다. 몇몇 물질을 섭취하는 것, 예를 들어, 중독성 약물의 섭취 또는, 수술과 같은 치료를 받는 것은, 통상적으로 비정상적 스트레스 반응을 이끌어낸다. 스트레스를 평가하기 위하여 흔히 사용되는 생물학적 인디케이터(biological indicator)는 학습 및 기억뿐만 아니라 해마의 시냅스 가소성(hippocampal synaptic plasticity)의 손상과 같은, 급성 스트레스에 의해 유발된 손상을 이끌 수 있는, 코르티코스테로이드(corticosteroid) 농도(설치류의 코르티코스테론 및 인간의 코르티솔과 같은 것)를 포함한다. 동물 실험에서, 흔히 사용되는 스트레스 방법은 발바닥 전기 쇼크 및 승강식 작업대(elevated platform)를 포함한다.
인지는 가장 중요한 고위 뇌기능(higher brain function)중 하나이다. 인지는 학습, 기억, 언어, 사고, 및 기분을 의미한다. 우울증은 일종의 인지 장애로 간주되며, 우울증을 겪는 환자는 무의식적으로 부정적 사고와 기분을 가진다. 1949년에, Hebb는 시냅스 변형이 학습과 기억의 기초가 된다는 아이디어를 제안하였다. 1973년에, 이러한 추측은 해마의 장기 상승 작용(long-term potentiation)(LTP)을 밝혀낸, Bliss et al에 의해 실험을 통하여 증명되었다. 그러나, 임상에서 우울증을 치료하기 위하여, 지금까지 LTP를 직접적으로 조절하는 어떠한 약제도 사용되지 않았다. 더 우수하고 더 빠른 치료 효과는 우울증, 그와 관련된 증상 및 그의 원인을 치료하는데 시냅스 가소성을 변형하는 약제를 개발함으로써 달성되었다.
5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체는 자유로운 형태 또는 약학 조성물에 직접적으로 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용되는 첨가제(excipient) 대비 0.1 내지 99%의 중량비의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체를 포함한다.
본 발명에서 사용된 용어 "약학적 담체(carrier) 또는 첨가제(excipient)"는 하나 이상의 고체, 반고체(semi-solid), 또는 액체 희석제, 충진제, 또는 여러가지 타입의 제형 보조제를 의미한다. 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체의 약학 조성물은 제약 업계 및 식품 업계에서 잘 알려진 기술에 의하여 약학적으로 허용되는 첨가제(excipient) 또는 식이적으로(dietarily) 허용되는 다양한 보충제로 제조될 수 있다. 약학적으로 허용되는 첨가제(excipient) 또는 식이적으로 허용되는 보충제는 스프레이, 에어로졸을 포함하거나, 주사, 현탁제, 에멀젼 및 시럽과 같은 액체, 및 태블릿, 캡슐, 과립을 포함하거나, 액체에 용해되거나 현탁된 분말과 같은 고체를 포함한다.
본 발명에 있어서, 투여 방법은 주사(injection) 또는 주입(infusion)(정맥내, 근육내, 복강내, 또는 피하), 및 경구, 설하 및 점막 투여를 포함한다.
상기에서 언급한 질병, 그의 원인 및 증상을 치료 또는 예방하기 위한 활성 성분(5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체)의 유효한 투여량은, 0.1 mg/성인/일 내지 12 g/성인/일이며, 바람직한 투여량은 50 내지 200 mg/성인/일이다.
우울증을 치료 또는 예방하기 위하여 사용되는 약제 또는 기능성 식품의 제조에 사용되는 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체, 이를 포함하는 약학 조성물은, 우울증과, 불안, 스트레스 및 인지 손상과 같은 우울증을 암시하는 증상을 치료 및 예방하기 위한 새로운 선택성을 제공한다는 것을 본 발명에서 밝혀냈다.
발명의 상세한 설명
본 발명에 관한 이해 및 보충을 위하여 다음의 실시예들은 화합물 및 방법에 관하여 상세하게 설명하지만, 이러한 실시예는 이하의 청구항에 기재된 본 발명의 내용을 제한하려는 의도가 아니며 본 발명의 내용을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 발명과 다른 방법에 의해 제조된 본 발명의 화합물 및 우울증, 우울증을 암시하는 증상, 및 우울증의 병인학적(etiological) 원인을 치료하는데 사용되는 그의 용도는 본 발명의 범위에 포함된다.
상기 올시놀(OR), 올시놀-1-O-β-D-글로코피라노시드(ORG) 및 올시놀-1-O-[β-D-글루코피라노실-(1→6)]-β-D-글루코피라노시드(ORGG)는 선모(Curculigo orchioides Garr )로부터 추출될 수 있다. 올시놀의 다른 유도체는 잘 알려진 기법에 의하여 제조될 수 있다. 특이 과정은 다음과 같다:
1. 올시놀은, R1 또는 R2가 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 또는 아라비노실인, 상응하는 당(sugar)의 아세틸화 산물과 반응할 수 있고, 빛을 차단한 상태에서 표지된 당의 아세틸화 산물과 올시놀을 메탄올에서 반응시키고, 브롬화수소산과 아세트산을 첨가하고 상온에서 1 내지 5시간 동안 교반함으로써, 올시놀 아세틸화 글리코시드가 수득된다. 상기 올시놀 아세틸화 글리코시드는 상온에서 1 내지 5 시간 동안 메탄올에서 소듐 메톡사이드로 처리되어 올시놀 글리코시드로 형성된다.
2. 상기 R1 및 R2가 아실일 때, 올시놀 또는 올시놀 글리코시드는 산 무수물 또는 아실 클로라이드 및 10 내지 20% 4-디메틸아미노피리딘을 첨가하고 60 내지 120 ℃에서 3 내지 5 시간 동안 교반함으로써 피리딘에 용해된다. 상기 혼합물을 물에 부은 후, 클로로포름으로 추출하여 대강의 산물을 얻었고 이를 정제하여 아세틸화 산물을 얻었다.
3. R1 및 R2가 알킬일 때, 올시놀 또는 올시놀 글리코시드는 소듐 하이드라이드를 첨가하고 30 내지 60분 동안 교반함으로써 테트라히드로퓨란 또는 디메틸 술폭시드에 용해된다. 알킬로젠(alkylogen)을 첨가한 후에, 반응 혼합물을 3 내지 5 시간 동안 추가적으로 교반한 후, 물에 부은 후에 클로로포름으로 추출하여 대강의 산물을 얻었고, 이를 정제하여 아세틸화 산물을 얻었다.
본 발명의 화학식 I의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체, 또는 이를 포함하는 약학 조성물은, 플루옥세틴 또는 이미프라민보다 더욱 우수한 항우울 효과를 나타낸다.
제조예 1
올시놀 -1-O-β-D- 글로코피라노시드 , 올시놀 및 올시놀 -1-O-[β-D- 글루코피라노실 -(1→6)]-β-D- 글루코피라노시드의 추출 및 분리
선모(Curculigo orchioides Garr .)를 수집한 후, 그늘이나 햇빛에서 말린 후, 분말화하였다.
분말화된 물질(20 kg)은 매회 리플럭스에서 2 시간씩 90% 에탄올(200 kg)을 사용하여 3회 추출하였다. 추출물은 결합되고 농축되어서 약 30 kg가 되었고, 12 시간 침전 후에 여과하였다. 대강의 추출물은 그 후 D-101 매크로 다공성(macroporous) 수지 컬럼(상기 수지의 중량은 20 kg이었다)에서 크로마토그래피되었고, 100 kg 증류수, 60 kg 70% 에탄올, 및 60 kg 90% 에탄올을 사용하여 성공적으로 녹여서 분리하였다. 상기 70% 에탄올 용리액(eluent) 및 90% 에탄올 용리액(eluent)은 분리하여 수집하였고 증발시켜서 건조하여, 70% 에탄올 용리액(340 g) 및 90% 에탄올 용리액(60 g)을 수득하였다.
수득된 70% 에탄올 용리액(340 g)은 메탄올에 용해한 후 400 g의 실리카겔에 흡수시켰다. 상온에서 건조하여 수득한, 고체는 분쇄되고 걸러져서 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(2.1 kg, 200 내지 300 메쉬)되었고 클로로포름-메탄올-물(90:10:1 내지 70:30:3, v/v/v)을 사용하여 녹여서 분리하여 26 개의 분획물을 얻었다. 각각의 분획물은 1500 ml였다. 분획물 2 내지 분획물 3이 결합하고, 농축되어서, 에탄올로부터 결정화되어서 올시놀(5 g)을 수득하였다. 분획물 9 내지 분획물 15가 결합하고, 농축되어서, 에탄올로부터 결정화되어서 올시놀-1-O-β-D-글로코피라노시드(50 g)를 수득하였다. 분획물 22 내지 분획물 26이 결합하고, 농축되어서, 에탄올로부터 결정화되어서 올시놀-1-O-[β-D-글루코피라노실-(1→6)]-β-D-글루코피라노시드(10 g)를 수득하였다.
구조의 결정: 선광도(optical rotation)는 SEPA-300 편광계를 사용하여 측정하였다; UV-VIS 스펙트럼은 UV-210A 분광계를 사용하여 얻었다; IR 데이터는 KBr 펠렛을 갖춘 Bio-Rad FTS-135 분광계에서 수집하였다; 핵자기 공명(1H NMR 및 13C NMR) 스펙트럼은 내부 표준 물질로서 CDCl3에 있는 TMS를 가진 Bruker DRX500 분광계에서 실행되었다. 컬럼 크로마토그래피 및 박막 크로마토그래피(thin-layer chromatography) 실리카겔용 물질은 Makall Group Co. Ltd.(Qingdao, China)로부터 구입하였다.
화합물명 : 올시놀 -1-O-β-D- 글리코피라노시드
Figure 112010009638809-pct00005
분자식: C13H18O7;
분자량: 286;
물성: 옅은 황색 분말;
[α]D -63.03°(c 5.95, 메탄올);
UV (메탄올): λmax (logε) 279 (3.19), 273 (3.21), 219 (3.99), 203 (4.58);
IR (KBr): νmax 3495, 3385, 1620, 1596, 1175, 1076, 1032 cm-1;
FAB-MS (-): m/z 285 [(M-1)-, 100], 123 [(M-1-glc)-, 87];
1H-NMR (CD3OD, 400 MHz)δH: 6.41 (1H, s, H-2), 6.36 (1H, s, H-6), 6.29 (1H, s, H-4), 4.84 (1H, d, J = 7.3 Hz, H-1'), 2.22 (3H, s, H-7);
13C-NMR (CD3OD,100 MHz)δC: 160.1 (s, C-1), 111.4(d, C-2), 159.2 (s, C-3), 102.4 (s, C-4), 141.3 (s, C-5), 110.0 (d, C-6), 21.6(q, C-7), 102.5(d, C-1'), 75.0 (d, C-2'), 78.1 (d, C-3')，71.6 (d, C-4'), 78.2 (d, C-5'), 62.7 (t, C-6').
화합물명 : 올시놀
Figure 112010009638809-pct00006
분자식: C7H8O2;
분자량: 124;
물성: 옅은 황백색(yellow-white) 분말;
UV (메탄올): λmax (logε) 281 (3.20), 275 (3.22), 204 (4.59);
IR (KBr): νmax 3313, 1629, 1601, 1512, 1477, 1332, 1208, 1148, 1032, 973 cm-1;
EI-MS (70 ev): m/z 125 [(M+1)+,8], 124 [M+, 100], 123 [(M-1)+, 55], 107[(M+1-18)+, 7], 95 (12), 77(8);
1H-NMR (CD3OD, 400 MHz)δH: 6.14 (2H, brs, H-2, 6), 6.10 (1H, brs, H-4), 2.16 (3H, s, H-7);
13C-NMR (CD3OD,100 MHz)δC: 159.2 (s×2, C-1, 3), 108.7 (d×2, C-2, 6), 108.7 (s, C-4), 141.2 (s, C-5), 21.5 (q, C-7).
화합물명 : 올시놀 -1-O-[β-D- 글루코피라노실 -(1→6)]-β-D- 글루코피라노시드
Figure 112010009638809-pct00007
분자식: C19H28O12;
분자량: 448;
물성: 백색 무정형 분말;
M.p.: 117 내지 119 ℃;
FAB-MS (-) (m/z): 447 [M-1]-, 123 [M-1-2glc];
1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δH: 6.43 (1H, brs, H-2), 6.40 (1H, brs , H-4), 6.28 (1H, brs, H-6), 4.82 (1H, d, J = 7.30 Hz, H-1'), 4.40 (1H, d, J = 7.73 Hz, H-1"), 2.21 (3H, s, H-7);
13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δC: 160.0 (s, C-1), 102.0 (d, C-2), 159.2 (s, C-3), 111.2 (d, C-4), 141.3 (s, C-5), 109.8 (d, C-6), 21.7 (s, C-7), 102.1 (d, C-1'), 74.8 (d, C-2'), 77.7 (d, C-3'), 71.3 (s, C-4'), 77.5 (d, C-5), 69.6 (t, C-6'), 104.6 (d, C-1"), 75.2 (d, C-2"), 77.8 (d, C-3"), 71.5 (d,C-4"), 77.9 (d, C-5"), 62.6(t, C-6").
제조예 2
1,3-O- 디아세틸올시놀의 제조
100 ml 둥근바닥 플라스크는 피리미딘(40 ml)과 올시놀(1.24 g, 0.01 mol)로 채웠다. 반응 혼합물을 상온에서 교반한 후 여기에 아세트산 무수물(3 ml)을 한 방울씩 떨어뜨렸다. 그 후 상온에서 24 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 200 ml의 얼음물에 부었다. 상기 혼합물은 에틸 아세테이트(3×50 ml)를 사용하여 추출하였다. 유기층이 결합된 후, 5% 염산을 사용하여 3회 수세하고, 포화된 NaHCO3 수용액으로 3회 수세하고, 포화된 염화 나트륨으로 3회 수세하고, Na2SO4에서 건조시킨 후 여과하고, 진공에서 증발시켜서 건조하였다. 대강의 산물은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피된 후 석유 에테르-아세톤(90:10, v/v)에 녹여서 분리하여 1,3-O-디아세틸올시놀(1.87 g, 수득율 90%)을 수득하였다.
화합물명 : 1,3-O- 디아세틸올시놀
Figure 112010009638809-pct00008
분자식: C11H12O4;
분자량: 208;
물성: 무색 오일;
1,3-O-디아세틸올시놀의 구조 데이터:
ESI-MS (+) m/z: 231 [M+Na]+;
IR (KBr)νmax : 1769, 1602, 1592, 1466, 1434, 1369, 1292, 1198, 1124, 1036 cm-1;
1H-NMR (CDCl3)δH: 6.78 (2H, s, J = 1.9 Hz, H-4, 6), 6.71 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 2.30 (3H, s, H-7), 2.19 (s, 6H);
13C-NMR (CDCl3)δC: 169.0 (s, CH3 CO), 169.0 (s, CH3 CO), 150.9 (s, C-1), 150.9 (s, C-3), 140.3 (s, C-5), 119.7 (d, C-4), 119.7 (d, C-6), 112.5 (d, C-2), 21.2 (q, C-7), 20.9 (q, CH3CO), 20.9 (q, CH3CO).
제조예 3
3-O-아세틸- 올시놀 -1-O-(2,3,4,6- 테트라아세틸 )-β-D- 글루코피라노시드의 제조
올시놀(286 mg)을 피리미딘(20 ml)에 용해하였다. 반응 혼합물을 상온에서 교반하고, 여기에 아세트산 무수물(2.5 g, 25 mmol)을 한 방울씩 떨어뜨렸다. 상온에서 24 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 50 ml의 얼음물에 부었다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트(3×20 ml)를 사용하여 추출하였다. 유기층이 결합한 후, 5% 염산으로 3회 수세하고, 포화된 NaHCO3 수용액으로 3회 수세하고, 포화된 염화 나트륨으로 3회 수세한 후, Na2SO4에서 건조하고 여과한 후, 진공하에서 증발시켜서 건조하였다. 대강의 산물은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피되어, 3-O-아세틸-올시놀-1-O-(2,3,4,6-테트라아세틸)-β-D-글루코피라노시드(421 mg, 수득율 85%)를 수득하였다.
화합물명 : 3-O-아세틸- 올시놀 -1-O-(2,3,4,6- 테트라아세틸 )-β-D- 글루코피라노시드
Figure 112010009638809-pct00009
분자식: C23H28O12;
분자량: 496;
물성: 흰색 무정형 분말;
ESI-MS (+) m/z: 519 [M+Na]+;
IR (KBr)νmax : 1759, 1625, 1590, 1373, 1241, 1211 cm-1;
1H-NMR (CDCl3)δH: 6.68 (1H, s, J = 1.9 Hz), 6.63 (1H, s, J = 1.9 Hz), 6.54 (1H, s, J = 1.9 Hz), 5.30-5.22 (m, 2H), 5.14 (t, 1H, J = 9.7 Hz), 5.06 (1H, d, J = 7.5 Hz), 4.28-4.14 (m, 2H), 3.89-3.85 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.03 (s, 3H);
13C-NMR (CDCl3)δC: 170.6 (s, CH3 CO), 170.2 (s, CH3 CO), 169.4 (s, CH3 CO), 169.3 (s, CH3 CO), 169.3 (s, CH3 CO), 157.2 (s, C-3), 151.1 (s, C-1), 140.6 (s, C-5), 117.2 (d, C-6), 115.1 (d, C-4), 107.6 (d, C-2), 98.8 (s, C-1′), 72.6 (d, C-3′), 72.0 (d, C-5′), 71.0 (d, C-2′), 68.2 (d, C-4′), 62.0 (t, C-6′), 21.5 (q, C-7), 21.1 (q, CH3CO), 20.6 (q, CH3CO×4).
제조예 4
올시놀 -1- 테트라 -O-아세틸- 람노피라노스의 제조
테트라-O-아세틸-람노피라노스(36 g)를 브롬화수소산과 아세트산의 혼합물(100 ml)에 용해하였다. 반응 혼합물은 빛을 차단한 상태에서 5 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 500 ml의 얼음물에 부은 후, 에틸 아세테이트(3×500 ml)를 사용하여 추출하였다. 유기층이 결합된 후, 물로 3회 수세하고, 5% NaHCO3 수용액으로 3회 수세하고, 포화된 염화 나트륨으로 3회 수세하고, Na2SO4에서 건조한 후, 여과하고, 진공에서 증발시켜서 건조하여, 테트라-O-아세틸-람노피라노실 브로마이드를 수득하였다.
올시놀(12.4 g)을 클로로포름(20 ml)에 용해하였다. 반응 혼합물을 교반한 후, 5% 소듐 히드록시드 용액(20 ml)을 첨가하였다. 온도가 50 ℃까지 상승되었을 때, 클로로포름에 용해된 테트라-O-아세틸-람노피라노실 브로마이드 용액(0.12 mol)을 한 방울씩 떨어뜨렸다. 반응이 완료될 때까지 상기 반응 혼합물을 50 ℃에서 교반한 후, 150 ml의 얼음물에 부었다. pH는 5% 염산을 사용하여 7로 조정하였다. 상기 혼합물은 에틸 아세테이트를 사용하여 추출하였다. 유기층이 결합된 후, 포화된 염화 나트륨으로 수세하고, Na2SO4에서 건조시키고 여과한 후, 진공하에서 증발시켜서 건조하였다. 대강의 산물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하고 에틸 아세테이트-석유 에테르(5:1, v/v)를 사용하여 녹여 분리하여, 올시놀-1-테트라-O-아세틸-람노피라노스(1.87 g, 수득율 90%)을 수득하였다.
제조예 5
올시놀 -1- 람노피라노스의 제조
소듐 메톡사이드(0.18 g)를 메탄올(20 ml)에 있는 올시놀-1-테트라-O-아세틸-람노피라노스(4.14 g)의 용액에 첨가하였다. 상온에서 2 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 5% 염산으로 중화시켰다. 증류수(50 ml)를 첨가한 후에 진공에서 메탄올을 제거하였다. 상기 혼합물을 n-부탄올(3×50 ml)을 사용하여 추출하였다. 유기층이 결합된 후, 포화된 염화 나트륨으로 수세하고 Na2SO4에서 건조시킨 후 여과하고, 진공에서 증발시켜서 건조하였다. 대강의 생성물이 에탄올로부터 결정화되어, 올시놀-1-람노피라노스를 수득하였다.
제조예 6
제조예 1에 따라서 제조된 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드를 주사용 증류수에 용해하였다. 박테리아 여과(0.2 내지 0.45 마이크로미터 여과)후에, 상기 용액을 바이알(vial)로 서브패키지(sub-packaged)하고, 밀봉한 후 멸균하여 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드의 주사(injection)를 완성하였다.
제조예 7
제조예 1에 따라서 제조된 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드를 무균 주사용 증류수에 용해시켰다. 상기 용액은 Buchner 퓨넬을 사용하여 진공 여과에 의해 여과하고, 무균 상태에서 정밀 필터(0.2 내지 0.45 마이크로미터 여과)를 사용하여 여과하고, 앰플로 서브패키지(sub-packaged)하고, 동결건조한 후 밀봉하여 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드 주사용 동결건조 분말을 완성하였다.
제조예 8
제조예 1에 따라서 제조된 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드를 첨가제(excipient)와 혼합하여 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드 주사용 분말을 완성하였다. 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드와 첨가제(excipient)의 중량비(올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드 : 첨가제)는 9:1이었다.
제조예 9
제조예 1에 따라서 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드를 제조하였다. 상기 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드와 첨가제(excipient)를 1:5 내지 1:10의 중량비로 혼합하여, 태블릿, 캡슐 및 과립으로 제조하였다.
제조예 10
제조예 1에 따라서 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드를 제조하였다. 종래의 방법에 따라서, 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드의 경구용 액체를 제조하였다.
제조예 11
제조예 1에 따라서 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드를 제조하였다. 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드와 첨가제(excipient)를 5:1의 중량비로 혼합하여, 캡슐 및 과립을 제조하였다.
제조예 12
제조예 1에 따라서 제조된 올시놀-1-O-β-D-글리코피라노시드(12.4 g), 전분(600 g), 락토오스(200 g), 멘톨(5 g) 및 소듐 카르복시메틸 전분(183 g)을 혼합하여, 기능성 식품으로서 트로키(troche)를 제조하였다.
본 발명의 본질에 대한 보다 나은 이해를 위하여, 올시놀 또는 그의 유도체를 포함하는 약학 조성물 및 약학적 담체(carrier) 또는 첨가제(excipient)의 약리 효과를 연구하였다. 그러나, 본 발명은 하기의 특정한 내용에 제한되지 않는 것으로 이해하여야 한다.
실험예 1
ORG 및 OR 의 약리 연구
1. 랫트 ( rat ) 및 마우스( mouse )의 꼬리 현수법 ( TST ) 및 강제수영 검사( FST )에서 투여량-효과의 관계를 이용한 ORG 및 OR 의 항우울 효과
1.1 실험 방법
Institute of Experimental Animals, People's Hospital of Sichuan Province의 Kunming 마우스 및 Sprague-Dawley 랫트(인증 번호: A4CXK(Chuan)2003-16)를 사용하였다. 마우스는 실험 초기에 3 내지 4 주령이었고, 마우스의 무게는 25 내지 30 g이었다. 랫트의 무게는 250 내지 300 g이었다. 각각의 그룹에 포함된 동물의 수는 표 1 내지 5에 나타냈다. 올시놀(OR), 올시놀-1-O-β-D-글로코피라노시드(ORG), 올시놀-1-O-[β-D-글루코피라노실-(1→6)]-β-D-글루코피라노시드(ORGG), 1,3-O-디아세틸올시놀(OR-2Ac), 및 3-O-아세틸-올시놀-1-O-(2,3,4,6-테트라아세틸)-β-D-글루코피라노시드(ORG-5Ac)는 제조예 1, 2, 및 3에 따라서 제조하였다. 동물은 다른 투여량, 운반체(vehicle) 그룹을 갖는 실험 그룹과 이미프라민 그룹(Sigma, Batch No.106k1588)과 벤라팍신 그룹(Wuhan Yuancheng Co., Ltd., Batch No.200701001)을 포함하는 2개의 양성 대조군 그룹으로 나누었다.
약제: ORG를 생리 식염수에 용해시켰다. 양성 대조군에서, 이미프라민 또는 벤라팍신은 초음파에 의하여 0.5% CMC-소듐을 포함하는 생리 식염수에 현탁하였다. 이미프라민 또는 벤라팍신의 투여량은 15 mg/kg었다. i.g. 주사 또는 i.p. 주사의 양은 마우스의 경우에 0.1 ml/10 g이었고, 랫트의 경우에는 1 ml/100 g 또는 0.1 ml/100 g이었다.
마우스의 FST : 실험 기구는 24±2 ℃에서, 17 cm 깊이까지 물로 채워진 실린더(24 cm 높이× 15 cm 직경)로 구성되었다. 모든 약제 및 운반체(vehicle)는 FST가 시작되기 전 24 시간째 및 5 시간째에 투여하였다. 총 6 분 주기 중 마지막 4 분 동안의 마우스의 부동 시간(immobility time)을 수기로(manually) 기록하였다.
랫트의 FST : 각각의 실험에서 2개의 수영 세션을 실시하였다. 먼저, 15 분 동안 프리-테스트(pre-test) 수영 세션을 실시하고, 첫번째 5분 주기 동안의 부동 시간(immobility time)을 수기로 기록하였다. 만약 부동 시간이 너무 길거나 너무 짧으면, 상기 랫트는 실험에서 제외하였다. 모든 약제 및 운반체(vehicle)는 프리-테스트 수영 세션 후 0 시간째와 19 시간째에 투여하였다. 프리-테스트 수영 세션 후 24 시간째의 부동시간과 5 분 테스트 세션 중의 부동 시간을 수기로 기록하였다.
마우스의 TST: 모든 약제 및 운반체(vehicle)를 TST를 시작하기 전 24 시간째 및 5 시간째에 투여하였다. 마우스는 시험기(testing chamber)의 바닥 상부 50 cm에 위치한 수평 바(bar)에 꼬리 끝부분의 2 cm 부분에 접착 테이프를 붙여서 마우스를 매달았다. 6 분 동안 부동 시간을 수기로 기록하였다.
데이터 분석: 결과는 평균±SEM으로 표시하였고 SPSS 11 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 그룹 간의 대조는 일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 최소 유의차(LSD) 검증을 실시하였다. 유의 수준은 P <0.05로 하였다. ED50 값은 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.
1.2 결과
1.2.1 랫트의 FST 에서 ORG (i.g.)의 항우울 효과
랫트의 FST에서 ORG(i.g.)의 투여량-부동 시간 간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 부동 시간(들)(평균±SEM) P 값
NS 1 ml/100 g 30 179.50±5.32





ORG		 0.0625 10 187.20±11.97 0.60
0.125 20 181.50±8.19 0.86
0.1875 20 138.90±13.31* 0.006
0.25 20 121.05±9.44* <0.001
0.5 20 113.70±6.74* <0.001
1 20 96.87±7.40* <0.001
2 20 91.60±7.06* <0.001
4 20 84.40±9.20* <0.001
8 20 94.30±9.86* <0.001
16 20 91.40±11.36* <0.001
32 19 107.26±10.74* <0.001
64 20 105.90±19.77* <0.001
128 20 103.00±17.42* <0.001
벤라팍신 15 10 100.80±9.84* <0.001
이미프라민 15 29 92.72±7.09* <0.001
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
랫트에 경구로 투여한 ORG의 투여량-효과 간의 관계를 평가하였다. ORG는 부동 시간을 감소시켰고 그 효과는 그 투여량에 상당히 의존하였다(표 1). 가장 효율적인 투여량은 4 mg/kg이었고, ED50는 약 0.22 mg/kg이었다.
1.2.2 마우스의 FST 에서 ORG (i.g.)의 항우울 효과
본 연구에서, ORG는 FST를 시작하기 전 24 시간째 및 5 시간째에 i.g. 투여하였다. 부동 시간이 감소하였고, 그 효과는 투여량에 상당히 의존하였다(표 2). 가장 효율적인 투여량은 3 mg/kg이었고, ED50는 약 0.22 mg/kg이었다.
마우스의 FST에서 ORG(i.g.)의 투여량-부동 시간 간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 부동 시간(들)(평균±SEM) P 값
NS 0.1 ml/10 g 108 178.50±3.04




ORG		 0.093 40 169.35±4.32 0.26
0.186 30 155.30±9.19* 0.01
0.3725 30 137.57±6.41* <0.001
0.75 60 139.45±7.04* <0.001
1.5 60 127.23±6.63* <0.001
3 78 114.41±6.23* <0.001
6 70 129.76±5.99* <0.001
12 70 122.71±5.56* <0.001
24 70 121.57±6.13* <0.001
48 69 135.36±4.60* <0.001
96 50 145.34±5.39* <0.001
벤라팍신 15 78 134.28±3.76* <0.001
이미프라민 15 79 131.20±3.91* <0.001
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
1.2.3 마우스의 TST 에서 ORG (i.g.)의 항우울 효과
ORG는 TST를 시작하기 전 24 시간째 및 5 시간째에 i.g. 투여하였다. 부동 시간이 감소하였고, 그 효과는 투여량에 상당히 의존하였다(표 3). 가장 효율적인 투여량은 12 mg/kg이었고, ED50는 약 0.73 mg/kg이었다.
마우스의 TST에서 ORG(i.g.)의 투여량-부동 시간 간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 부동 시간(들)(평균±SEM) P 값
NS 0.1 ml/10 g 38 161.18±5.47





ORG		 0.1875 40 161.70±6.89 0.95
0.375 40 155.68±6.77 0.52
0.5 30 125.30±6.93* <0.001
0.75 30 117.33±6.56* <0.001
1.5 30 109.27±6.81* <0.001
3 30 98.07±5.95* <0.001
6 30 89.73±5.02* <0.001
12 30 77.67±5.33* <0.001
24 30 91.03±7.44* <0.001
48 20 100.20±10.46* <0.001
96 19 107.68±8.85* <0.001
벤라팍신 15 20 102.85±9.34* <0.001
이미프라민 15 40 105.65±5.71* <0.001
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
1.2.4 마우스의 FST 에서 ORG (i.p.)의 항우울 효과
본 연구에서, FST를 시작하기 전 24 시간째 및 5 시간째에 OR을 i.p. 투여하였다. 부동 시간이 감소하였다(표 4).
마우스의 FST에서 부동 시간에 대한 OR(i.p.)의 효과
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 부동 시간(들)(평균±SEM) P 값
NS 0.1 ml/10 g 9 156.56±19.78
OR 10 10 82.40±10.64* 0.005
이미프라민 15 13 96.38±12.04 0.15
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
1.2.5 마우스의 FST 에서 ORG 의 유도체(i.p.)의 항우울 효과
본 연구에서, FST를 시작하기 전 24 시간째 및 5 시간째에 ORG의 유도체(ORGG, OR-2Ac, 및 ORG-5Ac)를 i.p. 주사를 투여하였다. 모든 ORG의 유도체는 FST 모델에서 마우스의 부동 시간을 감소시켰다(표 5).
마우스의 FST에서 부동 시간에 대한 ORG 유도체(i.p.)의 효과
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 부동 시간(들)(평균±SEM) P 값
NS 0.1 ml/10 g 10 213.60±3.77
ORGG 10 10 184.20±11.29* 0.012
OR-2Ac 10 10 170.10±6.37* <0.001
ORG-5Ac 10 10 178.90±9.61* 0.003
이미프라민 15 10 146.00±6.46* <0.001
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
1.3 ORG 의 항우울 활성의 치료 지수( TI )
급성 독성 시험에서, Kunming 마우스에 포화 농도 1750 mg/kg의 투여량으로 ORG를 투여하였을 때, 동물행동학적 및 조직학적 조사 결과 비정상적인 것은 아무것도 발견되지 않았다. 따라서 ORG의 정중 독성량(TD50)은 1750 mg/kg보다 높았다.
FST에서 마우스의 ORG의 치료 지수(TI) = TD50 ÷ ED50 = >1750 mg/kg ÷0.22 mg/kg = >7955.
TST에서 마우스의 ORG의 치료 지수(TI) = TD50 ÷ ED50 = >1750 mg/kg ÷ 0.73 mg/kg = >2397.
실험예 2
마우스의 강제수영 검사( FST )에서 시간 경로-의존성을 갖는 ORG 의 항우울 효과
2.1 실험 방법
Institute of Experimental Animals, People's Hospital of Sichuan Province로 부터 구입한 Kunming 마우스(인증 번호: A4CXK(Chuan)2003-16)를 사용하였다. 마우스는 실험 초기에 3 내지 4 주령이었고, 마우스의 무게는 25 내지 30 g이었다. 각각의 그룹에 포함된 동물의 수는 표 6 내지 8에 나타냈다. ORG는 제조예 1에 따라서 제조하였다. 동물은 서로 다른 투여량을 갖는 실험 그룹과 운반체(vehicle) 대조군 그룹으로 나누었다.
2.1.1 투여 및 실험 고안:
ORG를 서로 다른 농도로 생리 식염수(NS)에 용해하였다. 모든 약제와 그의 운반체(vehicle)는 0.1 ml/10 g의 양으로 경구 투여하였다.
2.1.2 투여의 주기:
동물을 24 시간 내에 ORG(3 mg/kg) 또는 NS로 1 내지 5 회 처리하였다. 부동 시간은 마지막 ORG 처리 후 5 시간째에 기록하였다.
2.1.3 서로 다른 투여량 및 투여 주기의 비교:
마우스를 24 시간 내에 6 mg/kg ORG로 1회 처리하거나, 3 mg/kg ORG로 2회 처리하였다. 부동 시간은 마지막 ORG 처리 후 5 시간째에 기록하였다.
2.1.4 항우울 활성에 있어서 ORG 의 효과(개시 시간 및 유지 시간):
마우스를 ORG(3 mg/kg)로 처리하였다. 투여 후 19 시간째에, 또다른 투여량의 ORG(3 mg/kg)를 처리하였다.
부동 시간은 2번째 투여 후 2.5 시간째, 5 시간째, 24 시간째, 72 시간째 및 2 주째에 기록하였다.
2.1.5 데이터 분석:
결과는 평균±SEM(%)로 표시하였다. NS 그룹의 부동 시간은 100%로 설정되었고, 각 그룹의 항우울 효과는 NS 그룹에 기초하여 계산되었다. 더 나은 항우울 효과는 더 낮은 퍼센트 값으로 나타난다. 이러한 정규화 방법을 통하여 실험 그룹간에 비교를 할 수 있었다. 일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 시험을 통하여 통계적 분석을 실시하였다. P <0.05의 값은 중요한 값으로 간주된다.
2.2. 결과
2.2.1 마우스의 FST 에서 24 시간 내에 서로 다른 투여 주기에서 ORG 의 항우울 효과
24 시간 내에 ORG(3 mg/kg)를 1 내지 5회 투여하였다. 부동 시간은 ORG를 사용하여 2 내지 3회 처리한 그룹에서 상당히 감소되었다(표 6). 이러한 결과는 10 내지 19 시간의 간격으로 24 시간 내에 2회 또는 3회 투여 후에 약제의 최고 효과를 얻을 수 있다는 것을 보여주는 것이다.
마우스의 FST에서 ORG의 투여 주기 및 항우울 효과
그룹 투여량
(mg/kg)		 24 시간 내에 투여 주기 동물 수 부동성(%NS)
(평균±SEM)		 P 값
NS 10 100


ORG		 3 1 10 83.57±6.66 0.098
3 2 10 64.98±5.96* 0.001
3 3 10 65.65±9.67* 0.001
3 4 10 89.81±6.50 0.302
3 5 10 91.26±5.93 0.375
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
2.2.2 24 시간 내에 동일한 최종 투여량으로 서로 다른 주기로 투여한 경우의 항우울 효과의 비교
마우스를 24 시간 내에 6 mg/kg ORG로 1회 처리하거나 3 mg/kg ORG로 2회 처리하였다. 부동 시간은 모든 그룹에서 감소하였다(표 7). 그러나 더 나은 효과는 24 시간 내에 3 mg/kg ORG를 2회 처리한 마우스에서 나타났다.
24 시간 내에 1회 투여하였을 때보다 동일한 투여량을 2회 투여한 경우에 더 나은 항우울 효과가 나타남
그룹 투여량
(mg/kg)		 24 시간 내에 투여 주기 동물 수 부동성(%NS)
(평균±SEM)		 P 값
NS 31 100
ORG 3 2 9 64.03±7.20* <0.001
ORG 6 1 30 80.70±4.64* =0.002
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
2.2.3 FST 에서 빠른 개시 및 오래 지속되는 유지( long - lasting maintenance)의 항우울 효과
마우스에 ORG(3 mg/kg)을 경구로 투여하였다. 19 시간 후에 다시 ORG(3 mg/kg)를 투여하였다. 부동 시간은 2번째 투여 후 2.5 시간째, 5 시간째, 24 시간째, 72 시간째 및 2 주째에 기록하였다. ORG의 항우울 효과는 2번째 투여 후 2.5 시간째에 급속하게 발생하였다. 최고 효과는 2번째 투여후 24 시간째에 발생하였고, 상기 효과는 적어도 72 시간동안 유지되었다(표 8). 이러한 결과는 ORG가 적어도 72 시간동안 지속되는 항우울 효과를 빨리 개시한다는 것을 보여주는 것이다.
마우스의 FST에서 ORG에 대한 시간-반응간의 관계
그룹 투여량
(mg/kg)		 마지막 투여 후의 시간 (h) 동물 수 부동성(%NS)
(평균±SEM)		 P 값
NS 50 100


ORG		 6 2.5 20 73.63±4.21* <0.001
6 5 20 71.92±6.05* 0.001
6 24 20 62.83±6.59* <0.001
6 72 20 77.33±6.07* 0.002
6 2 (주) 20 99.54±5.54 0.954
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
실험예 3
마우스의 예측 불가능한 경도의 만성적 스트레스 모델에서 ORG 의 항우울 효과
예측 불가능한 경도의 만성적 스트레스(CMS)는 인간의 우울증을 악화시키거나 야기하는 만성 스트레스와 같은 병인(etiology)을 가진 우울증 모델로 간주된다. 음료 또는 음식 제한, 결박, 및 수영과 같은 다양한 예측 불가능한 경도의 스트레스는 보상에 대한 반응의 결핍(예를 들면, 당이 함유된 음료수 선호)을 동물에게 유발할 수 있다. 부동 시간은 CMS 노출 후에 FST와 TST에서 상당히 증가하였으며, 이것은 더욱 심화된 우울증을 나타내는 것이다. 따라서, CMS는 스트레스에 의해 야기된 우울증에 대한 항우울제의 효과를 평가하기 위하여 널리 사용된다.
3.1. 실험 방법
Institute of Experimental Animals, People's Hospital of Sichuan Province로부터 구입한 Kunming 마우스(인증 번호: A4CXK(Chuan)2003-16)를 사용하였다. 마우스는 실험 초기에 3 내지 4 주령이었고, 마우스의 무게는 25 내지 30 g이었다. 각각의 그룹에 포함된 동물의 수는 표 9 내지 10에 나타냈다. ORG는 제조예 1에 따라서 제조하였다. 동물은 서로 다른 투여량을 갖는 실험 그룹과 운반체(vehicle) 대조군 그룹 및 양성 대조군인 이미프라민 그룹(Sigma, Batch No. 106k1588)으로 나누었다.
CMS 모델: Kunming 마우스에게 주어진 경도의 만성적 스트레스는 반전된 서캐디안 리듬, 계속되는 낮, 추위, 축축한 베딩, 틸트 케이지, 음식 및 물의 제한, 및 결박이었다. 이러한 스트레스 중 오직 하나의 스트레스만 각각의 마우스에게 24 시간 내에 랜덤하게 주었고, 동일한 스트레스를 연속적으로 두번 주지 않았다. 스트레스 기간은 8 주 동안 지속하였고, ORG는 7 일 연속으로 하루에 한번 투여하였다. 행동 양식 연구(behavioral test)는 마지막 투여 후에 30분째에 실시되었다. 테스트된 파라미터는 CMS 모델 마우스의 FST 및 TST에서의 부동 시간이다. FST 및 TST의 방법 및 데이터 분석은 상기에서 설명한 바와 같다.
3.2. 결과
3.2.1 CMS 모델 마우스의 FST 에서 ORG 의 항우울 효과
ORG는 FST에서 부동 시간을 상당히 감소시켰고, 이러한 효과는 투여량에 상당히 의존하였다(표 9). 항우울 효과에 대한 최적의 투여량은 20 mg/kg이었고, ED50는 0.81 mg/kg이었다.
CMS 모델 마우스의 FST에서 ORG의 투여량-부동 시간 간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 부동 시간(들)
(평균±SEM)		 P 값
NS 0.1 ml/10 g 28 208.00±5.57


ORG		 1.25 10 190.90±12.94 0.255
2.5 11 177.00±11.78* 0.033
5 10 177.50±12.39* 0.043
10 19 170.84±10.48* 0.002
20 20 164.95±11.36* <0.001
이미프라민 15 10 166.00±13.84* 0.005
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
3.2.2 CMS 모델 마우스의 TST 에서의 ORG 의 항우울 효과
ORG는 TST에서 부동 시간을 상당히 감소시켰고, 이러한 효과는 투여량에 상당히 의존하였다(표 10). 항우울 효과에 대한 최적의 투여량은 20 mg/kg이었고, ED50는 약 4.22 mg/kg이었다.
CMS 모델 마우스의 TST에서 ORG의 투여량-부동 시간 간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 부동 시간(들)
(평균±SEM)		 P 값
NS 0.1 ml/10 g 16 185.25±6.66

ORG		 1.25 10 171.20±13.02 0.392
5 10 146.30±11.66* 0.018
10 16 145.31±12.41* 0.006
20 16 140.69±14.14* 0.002
이미프라민 15 9 131.22±10.61* 0.002
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
3.3 CMS 모델 마우스의 TST 및 FST 에서 ORG 의 TI
급성 독성 시험에서, 마우스에 포화 농도 1750 mg/kg의 투여량으로 ORG를 투여하였을 때, 동물행동학적 및 조직학적 조사 결과 비정상적인 것은 아무것도 발견되지 않았다. 따라서 ORG의 정중 독성량(TD50)은 1750 mg/kg보다 높았다.
FST에서 CMS 마우스의 ORG의 치료 지수(TI) = >1750 mg/kg ÷ 0.81 mg/kg = >2160.
TST에서 CMS 마우스의 ORG의 치료 지수(TI) = TD50 ÷ ED50 = >1750 mg/kg ÷ 4.22 mg/kg = >415.
실험예 4
마우스의 지속성 암흑( DD ) 모델에서 ORG 의 항우울 효과
DD 모델은 서캐디안 리듬 장애와 관련된 우울증을 연구하기 위하여 사용된 최근에 보고된 동물행동학적 모델이다. 이러한 모델에서, 동물의 서캐디안 리듬은 우울증을 유발하거나 악화시키는 계속적인 암-사육 조건(dark-rearing condition)에서 변화된다. 따라서 이러한 연구에서, DD 모델은 우울증을 야기하거나 악화시키기 위하여 사용되었고, ORG의 항우울 효과는 FST 및 TST에서 테스트되었다.
4.1 실험방법
Institute of Experimental Animals, People's Hospital of Sichuan Province로부터 구입한 Kunming 마우스(인증 번호: A4CXK(Chuan)2003-16)를 사용하였다. 마우스는 실험 초기에 3 내지 4 주령이었고, 마우스의 무게는 25 내지 30 g이었다. 각각의 그룹에 포함된 동물의 수는 표 11 내지 12에 나타냈다. ORG는 제조예 1에 따라서 제조하였다. 동물은 서로 다른 투여량을 갖는 실험 그룹과 운반체(vehicle) 대조군 그룹 및 양성 대조군인 이미프라민 그룹(Sigma, Batch No. 106k1588)으로 나누었다.
마우스의 DD 모델: 마우스를 24 시간 연속해서 암상태(dark conditions)로 두었다. 패딩의 교체, 음식 및 물의 주입, 적색광의 강도가 1.0 럭스보다 약한 상태에서 다른 조작이 이루어졌다. 이와 같은 상태는 28 일 동안 지속하였다. 마지막 주에, ORG를 1 주일 동안 하루에 한번 경구 투여하였다. FST 및 TST는 마지막 투여 후 30 분째에 수행하였다. 방법 및 데이터 분석은 상기에서 설명한 바와 같다.
4.2 결과
4.2.1 DD 모델 마우스의 FST 에서 ORG 의 항우울 효과
ORG는 FST에서 부동 시간을 상당히 감소시켰고, 그 효과는 투여량에 상당히 의존하였다(표 11). 최적의 효율의 투여량은 10 mg/kg이었고, ED50는 약 1.48 mg/kg이었다.
DD 모델 마우스의 FST에서 ORG의 투여량-부동 시간간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 부동 시간(들)
(평균±SEM)		 P 값
NS 0.1 ml/10 g 32 193.13±5.57


ORG		 1.25 11 180.27±10.36 0.306
2.5 11 174.27±11.89 0.134
5 10 161.70±14.89* 0.016
10 21 151.86±8.89* <0.001
40 10 156.60±13.86* 0.005
이미프라민 15 11 161.22±13.08* 0.019
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
4.2.2 DD 모델 마우스의 TST 에서 ORG 의 항우울 효과
ORG는 TST에서 부동 시간을 상당히 감소시켰고, 그 효과는 투여량에 상당히 의존하였다(표 12). 최적의 효율의 투여량은 20 mg/kg이었고, ED50는 약 1.75 mg/kg이었다.
DD 모델 마우스의 TST에서 ORG의 투여량-부동 시간간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 부동 시간(들)(평균±SEM) P 값
N.S. 0.1 ml/10 g 16 185.25±6.66

ORG		 1.25 10 171.20±13.02 0.392
5 10 146.30±11.66* 0.018
10 16 145.31±12.41* 0.006
20 16 140.69±14.138* 0.002
이미프라민 15 9 131.22±10.61* 0.002
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
실험예 5
마우스의 수면 방해( SD ) 모델에서 ORG 의 항우울 효과
수면 장애는 우울증의 증상 중의 하나이다. 수면 장애는 우울증을 유발하거나 악화시키는 생리학적 요인 중의 하나일 수 있다. 부동성과 같은 우울증-유사 행동은 수면 방해에 의해 증강된다. 그 후, SD 모델은 우울증을 야기하거나 악화시키기 위하여 사용되었고, ORG의 항우울 효과는 SD 모델 마우스의 FST 및 TST에서 테스트되었다.
5.1 실험 방법
Institute of Experimental Animals, People's Hospital of Sichuan Province로부터 구입한 Kunming 마우스(인증 번호: A4CXK(Chuan)2003-16)를 사용하였다. 마우스는 실험 초기에 3 내지 4 주령이었고, 마우스의 무게는 25 내지 30 g이었다. 각각의 그룹에 포함된 동물의 수는 표 13에 나타냈다. ORG는 제조예 1에 따라서 제조하였다. 동물은 서로 다른 투여량을 갖는 실험 그룹과 운반체(vehicle) 대조군 그룹 및 양성 대조군인 이미프라민 그룹(Sigma, Batch No. 106k1588)으로 나sn었다.
SD 모델: 마우스의 SD 모델을 수립하기 위하여 수중 환경에서 다층의 플랫폼을 사용한 변형된 방법을 사용하였다. 플랫폼 위의 마우스는 자유롭게 먹고 마시게 하였다. 그러나, 마우스가 잠들면, 근긴장(muscle tone)을 상실하여 물속으로 빠지게 하였다. 물에 빠진 동물은 플랫폼에 괴어놓은 틸트 기둥을 통하여 다시 플랫폼으로 기어올라왔다. 수면 방해 72 시간 후에, FST를 시작하기 전 24 시간째 및 5 시간째에 ORG를 경구 투여하였다. 동물의 부동 시간을 기록하였다. 방법 및 데이터 분석은 상기에서 설명한 바와 같다.
5.2. 결과
5.2.1 SD 모델 마우스의 FST 에서 ORG 의 항우울 효과
3 일간의 수면 방해하고 3일째 되는 날에, FST를 시작하기 전 24 시간째 및 5 시간째에 ORG를 두번 투여하였다. ORG는 FST에서 부동 시간을 상당히 감소시켰고, 그 효과는 투여량에 상당히 의존하였다(표 13). 최적 효율의 투여량은 10 mg/kg이었고, ED50는 약 3.79 mg/kg이었다.
SD 모델 마우스에서 ORG와 TST의 투여량-부동 시간간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 부동 시간(들)(평균±SEM) P 값
NS 0.1 ml/10 g 26 189.27±9.67
ORG 1.25 10 198.00±11.43 0.570
ORG 2.5 12 177.67±15.95 0.421
ORG 5 10 160.80±11.64 0.064
ORG 7.5 10 153.00±11.83* 0.019
ORG 10 22 148.23±7.80* 0.001
ORG 20 21 162.67±9.27* 0.029
이미프라민 7.5 11 150.27±13.17* 0.009
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
5.3. DD 모델 및 SD 모델 마우스에서 ORG 의 치료 지수
ORG의 정중 독성량 (TD50)은 1750 mg/kg보다 높았다(상기 내용 참조). FST에서 DD 마우스의 ORG의 치료 지수 = TD50÷ED50 = >1750 mg/kg÷1.48 mg/kg = >1182. TST에서 DD 마우스의 ORG의 치료 지수 = TD50÷ED50 = >1750 mg/kg÷1.75 mg/kg = >1000. FST에서 SD 마우스의 ORG의 치료 지수 = TD50÷ED50 = >1750 mg/kg÷3.79 mg/kg = >462.
실험예 6
ORG 의 항-불안 효과의 약리적 연구
설치류의 전기 자극 및 조건화된 공포 스트레스에 의해 유발된 동결 거동(freezing behavior)은 불안의 정도를 평가하기 위한 모델로서 널리 수용되었다. 혐오하는 자극이 주어지면, 설치류는 동결 거동(freezing behavior)을 나타낸다. 피할 수 없는 공포 자극에 대한 동물의 정상적인 반응인 동결 거동은, 몸의 움직임이 전혀 없거나 웅크린 자세를 유지하는 것으로 정의된다. 불안 완화제는 동물의 동결 거동(freezing behavior)을 감소시킨다. 게다가, 고가 플러스형 미로(elevated plus maze)는 설치류의 불안을 평가하기 위하여 널리 수용된 모델이다. 불안의 평가는 새로운 탐험에 대한 성향과 높이에 대한 불안 간의 충돌에 기초하여, 설치류는 두려운 경우 자발적으로 고가 플러스형 미로(elevated plus maze)의 폐쇄 통로(closed arm)에서 더 많은 시간을 소비한다. 따라서, 새로운 탐험 행동은 불안 완화제에 의해 증강되며, 불안을 야기하는 것(anxiogenics)에 의해 저지된다.
6.1 실험 방법
Institute of Experimental Animals, People's Hospital of Sichuan Province로부터 구입한 Kunming 마우스(인증 번호: A4CXK(Chuan)2003-16)를 사용하였다. 마우스는 실험 초기에 3 내지 4 주령이었고, 마우스의 무게는 25 내지 30 g이었다. 각각의 그룹에 포함된 동물의 수는 표 13에 나타냈다. ORG는 제조예 1에 따라서 제조하였다. 동물은 ORG의 서로 다른 투여량을 갖는 약제 그룹과 운반체(vehicle) 대조군 그룹 및 양성 대조군인 다이아제팜(diazepam) 그룹(Jinyao Ltd. Co., Batch No. 106k1588)으로 나누었다.
전기 자극에 의해 유발된 동결 거동( freezing behavior ): 10 분간 훈련 시간을 위한 표준 조건화 상자(standard conditioning chamber)(Med Associates, USA)에 두기 전 24 시간째 및 5 시간 째에 동물에게 ORG 또는 운반체(vehicle)를 i.p. 주사하였다. 훈련 개시 후 2 분째, 4 분째, 6 분째, 및 10 분째에, 상자의 그리드 바닥을 통하여 전기 자극(0.8 mA, 2 s)을 전달하였다. 마지막 5분 동안의 동결 거동 시간을 기록하였다. 랫트는 첫번째 훈련 후 24 시간 동안 전기 자극 없이 상자에 두고, 동결 거동 시간을 기록하였다.
고가 플러스형 미로( EPM ): EPM은 같은 크기(30 cm 길이 × 5 cm 넓이)의 2 개의 개방 통로 및 2개의 폐쇄 통로를 가지고 있다. 2 개의 폐쇄 통로는 중앙의 5 cm × 5 cm 영역과 연결되어 있다. 전체 미로는 35 cm의 높이로 올려졌다. 시험을 시작하기 전 24 시간째 및 5 시간째에 ORG를 i.p. 투여하였다. 폐쇄 통로에 마주하고 있는 미로의 중앙에 마우스를 각각 놓아두었다. 각각의 동물은 1회 훈련에서 5 분 동안 테스트되었다. 개방 통로로 통하는 입구의 수, 폐쇄 통로로 통하는 입구의 수, 개방 통로에서 소비한 총 시간, 및 폐쇄 통로에서 소비한 총 시간을 기록하였다; 입구의 표준은 통로로 들어가는 팔(limb)로 한정하였다. 개방 통로로 들어가는 입구의 수, 및 개방 통로에서 소비한 시간은 더 많은 입구 또는 더 오랜 시간, 더 적은 불안 정도에 대한, 동물의 불안 정도를 평가하기 위한 주요한 지표였다.
데이터 분석: 테스트 결과는 평균±SEM으로 표현하였다. 일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 SPSS 11 소프트웨어를 사용하여 LSD 시험을 사용하였다. 유의 수준은 P <0.05로 설정하였다.
6.2 결과
6.2.1 랫트의 전기 자극에 의해 유발된 동결 거동( freezing behavior ) 테스트에서 ORG 의 항-불안 효과
테스트가 시작되기 전 24시간째 및 5 시간째에 ORG를 복강내 투여하였을 때 랫트의 동결 거동 시간이 상당히 감소하였다(표 14).
랫트의 전기 자극에 의해 유발된 동결 거동(freezing behavior) 테스트에서 ORG의 투여량-반응간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 랫트 수 거동 시간(들)의 지속(평균±S.E.) P 값
NS 0.1 ml/100 g 10 227.90±20.70
ORG 5 10 203.90±34.09 0.523
20 10 100.70±21.78* 0.002
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
6.2.2 랫트의 조건화된 공포 스트레스에 의해 유발된 동결 거동( freezing behavior) 테스트에서 ORG 의 항-불안 효과
랫트에게 전기 자극 전 24 시간째 및 5 시간째에 ORG를 i.p. 주사하고 24 시간 후에 전기 자극 없이 동일한 환경에 다시 노출시켰다. 환경 단서(environmental cue)에 의해 유발된 공포 기억의 재생은 랫트의 조건화된 공포 스트레스에 의해 유발된 동결 거동(freezing behavior)을 이끌어낸다. ORG는 상기 동결 거동(freezing behavior)을 상당히 감소시켰다(표 15).
랫트의 조건화된 공포 스트레스에 유발된 동결 거동(freezing behavior) 테스트에서 ORG의 투여량-반응 간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 랫트 수 거동 시간(들)의 지속 (평균±SEM) P 값
NS 0.1 ml/100 g 10 285.40±47.91
ORG 5 10 310.30±66.19 0.776
20 10 95.00±17.73* 0.004
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
6.2.3 마우스의 고가 플러스형 미로( elevated plus maze ) 테스트에서 ORG의 항-불안 효과
고가 플러스형 미로(elevated plus maze) 테스트 전 24 시간째 및 5 시간째에 두 번 투여된 ORG는 개방 통로로의 입구의 수와 개방 통로에서 보낸 총 시간을 증가시켰다(표 16 및 17). 이러한 결과는 ORG의 상당한 항-불안 효과를 나타내는 것이다.
ORG(i.p.)는 마우스의 개방 통로에서 소비한 총 시간을 상승시킴
그룹 투여량
(mg/kg)		 마우스 수 개방 통로에서 보낸 총 시간(들)
(평균±SEM)		 P 값
NS 0.1 ml/10 g 10 32.50±8.93

ORG		 5 10 50.00±8.99 0.151
20 10 16.50±3.60 0.188
100 10 70.60±11.56* 0.003
다이아제팜 2 10 46.90±7.19 0.236
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
ORG(i.p.)는 마우스의 개방 통로로 가는 입구 수를 상승시킴
그룹 투여량
(mg/kg)		 마웃스 수 개방 통로로 가는 입구 수
(평균±SEM)		 P 값
NS 0.1 ml/10 g 10 3.50±0.87

ORG		 5 10 4.50±0.58 0.279
20 10 1.80±0.79 0.069
100 10 5.90±0.57* 0.012
다이아제팜 2 10 4.80±0.77 0.161
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
실험예 7
ORG 의 항-스트레스의 약리적 연구
스트레스는 생물체의 생리적 또는 심리적 항상성을 심각하게 교란하는 어떠한 상태라고 생물계에서 정의된다. 스트레스는 수많은 질환을 악화시키거나 유발하는 주요한 요인 중의 하나라고 인식된다. 해마는 스트레스 반응을 조절할 뿐만 아니라 학습 및 기억의 뇌 형성에서 중요하다. 스트레스는 해마의 시냅스 가소성(hippocampal synaptic plasticity), 학습, 및 기억의 손상을 이끌어낼 수 있다. 혈청 코르티코스테론의 농도는 스트레스 정도를 평가하기 위한 가장 흔한 지표 중의 하나이다.
7.1 실험 방법
Institute of Experimental Animals, People's Hospital of Sichuan Province로부터 구입한 250 내지 300 g의 랫트를 사용하였다. 제조예 1에 따라서 ORG를 제조하였다. Wuhan Yuancheng Technology Co.(Wuhan, China; Batch No: 1004-0801002)로부터 플루옥세틴을 구입하였다.
혈청 코르티코스테론의 측정: 혈청 코르티코스테론의 농도에서 ORG의 효과를 측정하기 위하여 방사 면역 측정법(RIA; DSL 80100; Texas)을 사용하였다. 비-스트레스 그룹에서, 혈액은 ORG 주사 후 1 시간째에 에테르 마취제를 사용하여 심장 천자(cardiac puncture)에 의하여 수집하였다. 스트레스 그룹에서, ORG 주사 후 1 시간째에, 랫트를 30 분 동안 고위 플랫폼 스트레스에 두고, 상기와 같은 방법으로 샘플을 채취하였다. 혈액 샘플은 상온에서 4 시간 동안 두고, 15 분 동안 원심분리(3000 rpm)하였다. 상청액(혈청)을 수집한 후 -20 ℃에서 저장하였다.
해마에서 장기 상승 작용( LTP )의 기록 방법: ORG의 항-스트레스 효과를 측정하기 위하여 해마에서 흥분성 시냅스후 전위(EPSP)를 기록하였다. 스트레스는 해마의 CA1 영역에서 LTP를 손상시키고, 이것은 항-스트레스 약제에 의해 구제될 수 있다. 랫트는 다음과 같은 전기 자극에 의해 스트레스를 받았다: 2분 간격으로 1 mA의 전기를 2 초씩 5 번 자극하였다. 해마 절편을 준비하고, 34 내지 36 ℃에서 1 시간 동안 배양하고, 상온에 두었다. ORG를 배쓰 용액(bath solution)에 적용하였다. CA1의 NMDA 및 AMPA 수용체에 의해 매개된 EPSP는 20 분 동안 베이스라인이 안정될 때까지 기록하였다. 그 후 LTP를 유도하기 위하여 고주파 자극(HFS, 100 Hz, 100 펄스, 20 초 간격)을 사용하였다. HFS 후 1 시간 동안 EPSP을 기록하였다.
데이터 분석: 데이터는 평균±SEM으로 표현하고, LTP는 베이스라인 대비 마지막 10 분의 평균 진폭의 퍼센트로 나타냈다. 일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 SPSS 11 소프트웨어를 사용하여 LSD 시험을 사용하였다. 유의 수준은 P <0.05로 설정하였다.
7.2 결과
7.2.1 급성 스트레스에 의해 유발된 혈청 코르티코스테론 농도의 상승에서 ORG(i.p.)의 항-스트레스 효과.
대조군의 ORG의 i.p. 주사 후 1 시간째 또는 30 분 스트레스 경험 후에 심장 천자(cardiac puncture)에 의해 혈액을 수집하였다. ORG는 투여량-의존 방법에서 혈청 코르티코스테론의 농도를 상당히 감소시켰다(표 18).
ORG(i.p.)의 투여량-코르티코스테론 농도간의 관계
그룹 투여량(mg/kg) 동물 수 혈청 코르티코스테론의 농도(ng/ml)
(평균±SEM)		 P 값
비-스트레스 + NS 0.1 ml/100 g 16 116.06±27.84
비-스트레스+ ORG 0.875 8 209.02±52.77 0.197
3.5 8 166.06±41.90 0.649
14 16 70.04±14.75 0.084
28 8 63.13±22.21 0.122
비-스트레스 +
플루옥세틴		 15 16 167.20±31.35 0.559
30 8 178.14±38.77 0.490
스트레스 + NS 0.1 ml/100 g 16 324.30±48.81
스트레스 + ORG 0.875 8 349.85±61.75 0.706
3.5 8 263.63±49.14 0.372
14 16 237.63±32.45 0.120
28 8 137.41±26.84* 0.007
스트레스 +
플루옥세틴		 15 16 331.35±46.43 0.899
30 8 324.58±58.63 0.997
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
7.2.2 스트레스성-손상된 해마의 LTP 에서 ORG 의 회복 효과
전기 자극 스트레스에 노출된 후에 랫트로부터 해마 절편을 제조하였고, 상기 해마 절편은 해마 LTP를 손상하기 위하여 프로토콜을 수용하였다. 1 시간 동안 ORG를 사용하여 배양된 절편에서, 베이스라인 EPSP를 20 분 동안 기록하였다. ORG는 스트레스로 인해 손상된 LTP를 회복하였고, 심지어 5 마이크로몰/L의 투여량에서 LTP를 상당히 상승시켰으며, 이것은 투여량-의존 효과를 보여주는 것이다(표 19).
상기 결과는 ORG가 상당한 항-스트레스 효과를 가지며, 스트레스 병인을 가진 우울증을 치료하는데 중요한 임상적 가치를 갖는다는 것을 보여준다.
스트레스로 인해 손상된 LTP의 회복에 있어서 ORG를 사용하여 배양한 해마 절편에서 투여량-효과 간의 관계
그룹 투여량 절편 수 마지막 10 분의 평균
(평균±SEM)		 P 값
대조군 9 134.52±10.71
대조군 + ORG 5 마이크로몰 11 122.93±3.75 0.453
FS + NS 0.1 ml/10 g 11 113.22±6.77 0.234
FS + ORG 50 nM 9 128.99±7.30 0.732
FS + ORG 5 마이크로몰 8 189.56±23.6* 0.002
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
실험예 8
ORG 및 학습 및 기억의 증강에 관한 약리 연구
모리스 수중 미로(Morris water maze; MWM)는 해마-의존 학습 및 기억과 세포 메커니즘 및 분자 메커니즘에 널리 사용된다. MWM은 학습 및 기억의 효과적인 약리적 평가 방법이라고 수용된다. 동물의 공간 학습 및 기억을 조사하기 위하여 동물의 탈출 시간(escape latency), 전략 및 궤도는 자동적으로 추적되고 분석된다. 동물이 탈출하는 방법을 학습한 후에, 타겟 사분면(target quadrant)에서 기억을 시험하기 위하여 숨겨진 플랫폼을 제거하였다. 오른쪽 사분면에서 소비된 더 오랜 시간은 더 나은 기억을 나타내는 것이다.
8.1 실험 방법
Institute of Experimental Animals, People's Hospital of Sichuan Province로부터 구입한 Kunming 마우스(Certificate Number: A4CXK(Chuan)2003-16)를 사용하였다. 마우스는 실험 초기에 3 내지 4주령이었고 무게는 25 내지 30 g이었다. 각각의 그룹에서의 동물의 수는 표 20 및 21에 나타냈다. 제조예 1에 따라서 ORG를 제조하였다. 동물들은 플루옥세틴 또는 서로 다른 ORG 투여량을 사용한 약제 투여 그룹 및 운반체(vehicle) 대조군 그룹으로 나누었다. 약제 투여 그룹에 1.75 mg/kg 또는 3.5 mg/kg의 ORG가 투여되거나, 15 mg/kg의 플루옥세틴이 투여되었다. 동물에 대해 매일 훈련시킨 후 30 분째 또는 8 일째에 기억 테스트하기 전 30 분째에 약제 또는 운반체(vehicle)의 단회 i.p. 주사하였다.
모리스 수중 미로( Morris water maze ): 물 표면 및 대략 1 cm에 위치한 숨겨진 플랫폼(10 cm × 10 cm)을 갖춘 써큘러 풀(직경 100 cm 및 깊이 36 cm)에서 MWM을 실시하였다. 풀은 각각의 사분면(quadrant)에 걸려있는 다른 모양의 마커를 가진 황색 커튼으로 둘러싸여 있다. 마우스가 숨겨진 플랫폼을 찾기 위하여 소비한 시간 및 궤도는 컴퓨터에 의하여 기록되었다. 1 일째부터 7 일째까지, 숨겨진 고정된 플랫폼을 찾도록 마우스를 풀(pool)에 놓아두었다. 8 일째에, 플랫폼을 제거하고, 타겟 사분면(quadrant)에서 마우스가 소비한 시간을 자유 유영성(free swimming)의 1 분 동안 측정하였다.
데이터 분석: 테스트 결과는 평균±SEM로 나타냈다. 일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 SPSS 11 소프트웨어를 사용하여 LSD 테스트를 실시하였다. 유의 정도는 P <0.05로 설정하였다.
8.2. 결과
8.2.1 MWM 테스트에서 훈련 후에 즉시 주사한 ORG (i.p.)의 효과
매일 훈련시킨 후에 ORG를 투여하여, 기억 확립에 영향을 미침으로써 공간 기억 회복(타겟 사분면(quadrant)에서 동물이 소비한 시간)을 상당히 증진시켰다(표 20).
훈련 후에 매일 ORG를 투여한 마우스에서 공간 기억이 증진됨
그룹 투여량
(mg/kg)		 마우스 수 오른쪽 사분면(quadrant)에서 소비한 시간(들) (평균±SEM) P 값
NS 0.1 ml/10 g 10 27.10±2.79
ORG 1.75 10 28.18±1.70 0.74
ORG 3.5 10 34.24±2.01* 0.03
플루옥세틴 15 9 32.61±2.20 0.11
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
8.2.2 MWM 테스트에서 회복하기 전에 ORG (i.p.)의 효과
[113]마우스의 훈련은 7 일 후에 완료하였다. 회복 테스트는 8 일째에 수행하였다. 회복 전 30 분째에 ORG를 투여하였을 때, 공간 기억 회복은 상당히 증진되었다(표 21).
회복 전 30 분째에 ORG를 투여한 마우스에서 공간 기억이 증진됨
그룹 투여량
(mg/kg)		 마우스 수 오른쪽 사분면(quadrant)에서 소비한 시간(들) (평균±SEM) P 값
NS 0.1 ml/10 g 10 27.95±2.19
ORG
ORG		 1.75 10 29.38±2.16 0.65
3.5 10 35.52±2.43* 0.02
플루옥세틴 15 9 29.44±2.14 0.65
*P <0.05 (일원 변량 분석(ANOVA)에 뒤이어 LSD 실시).
실험예 9
ORG 의 독성 테스트
9.1 마우스에서 ORG 의 급성 독성 테스트
9.1.1 실험 방법
Institute of Experimental Animals, People's Hospital of Sichuan Province로부터 구입한 Kunming 마우스(Certificate Number: A4CXK(Chuan)2003-16)를 사용하였다. 마우스는 실험 초기에 3 내지 4 주령이었고, 무게가 25 내지 30 g이었다. ORG는 제조예 1에 따라서 제조하였다. 175 mg/ml의 농도가 되도록 ORG(1750 mg)를 10 ml NS에 용해시켰다. 마우스는 두 그룹으로 나뉘었고, 평가를 위한 ORG 그룹에 ORG를 투여하였고, 운반체 대조군으로서 한 그룹에는 NS로 처리하였다. ORG 및 NS는 0.1 ml/10 g의 양으로 각각의 그룹에 경구 투여하였다.
9.1.2. 결과
급성 독성 시험에서 마우스에게 1750 mg/kg로 ORG를 투여하였을 때, 동물의 외형, 행동, 정신 상태, 식용, 헤어, 색깔, 및 호흡을 14 일 동안 관찰하였으나, 비정상적인 것은 아무것도 발견되지 않았다. 모든 마우스는 실험 후에도 살아남았고 체중 증가는 정상이었다. 두 그룹간에 상당한 차이는 없었다. 모든 마우스는 14 일째에 희생시켜서, 심장, 간, 지라, 폐, 신장, 이자, 자궁, 고환, 소장, 및 다른 내장 기관을 병리학적으로 절단하여 조사하였으나 역시 비정상적인 것은 발견되지 않았다.
9.2 랫트에서 ORG 의 아급성( subacute ) 독성 시험
9.2.1 실험 방법
Institute of Experimental Animals, People's Hospital of Sichuan Province로부터 구입한 랫트(인증 번호: A4CXK(Chuan)2003-16)를 사용하였다. 랫트의 무게는 250 내지 300 g이었다. 제조예 1에 따라서 ORG를 제조하였다.
9.2.2 결과
마우스 FST에서의 ED50의 7955 배 및 마우스 TST에서의 ED50의 2397 배인 ORG(1750 mg/kg)를 14 일 연속해서 하루에 한번 경구 투여하였다. 동물의 외형, 행동, 정신 상태, 식욕, 헤어, 색깔 및 호흡을 14 일 동안 관찰하였으나, 비정상적인 것은 아무것도 발견되지 않았다. 모든 랫트는 실험 후에도 살아남았고 체중 증가는 정상이었다. 두 그룹간에 상당한 차이는 없었다. 모든 랫트는 14 일째에 희생시켜서, 심장, 간, 지라, 폐, 신장, 이자, 자궁, 고환, 소장, 및 다른 내장 기관을 병리학적으로 절단하여 조사하였고 절단된 조직의 이미지에서 비정상적인 것은 발견되지 않았다.
5- 메틸 -1,3- 벤젠디올 또는 그의 유도체의 약리적 요약
ORG 또는 그의 유도체의 투여량-효과 및 시간 경로-반응의 항우울 효과를 FST, TST , DD , SD , 및 CMS 의 모델을 사용하여 연구하였다. 결과는, OR, ORG 및 그의 유도체가 우울증 및 우울증을 암시하는 증상: 서캐디안 리듬 장애(circadian rhythm disorder), 수면 장애, 및 만성 스트레스를 치료 및 예방하는데 유용한 활성을 발휘한다는 것을 나타낸다. 항우울 메커니즘의 연구는 OR, ORG 또는 그의 유도체가 해마의 LTP의 손상을 치료하고, 해마-의존성 학습 및 기억을 증진시키며, 불안 및 급성 스트레스와 같은 우울증-관련된 요인을 치료 및 예방한다는 것을 보여주었다. 해마의 LTP의 메커니즘은 주로 NMDA 및 AMPA 수용체와 그의 분자 경로 및 세포 경로에 연관되어 있다. 결론적으로, OR, ORG 또는 그의 유도체는 조절제로서 이러한 타겟을 조정할 수 있으며, 해마의 LTP를 회복시킴으로써 우울증을 치료 및 예방하는 효과를 발휘할 수 있다.
뉴런은 화학적 시냅스를 통하여 주로 통신하며, 기억은 이러한 시냅스 내에 저장되는 것으로 여겨지며, LTP는 학습 및 기억의 기초를 이루는 주요한 세포 메커니즘 중의 하나로 여겨진다. 따라서, OR, ORG 또는 그의 유도체는 또한 알츠하이머 질병, 아동기 ADHD, 자폐증, 및 정신분열병과 같은 다른 장애를 치료 및 예방하기 위하여 사용될 수 있다. 모든 질병의 90% 이상이 스트레스에 의해 유발되거나 악화될 수 있기 때문에, 스트레스를 조절하는 해마의 기능은 시냅스 가소성(synaptic plasticity)을 포함하며, OR, ORG 또는 그의 유도체는 임상에서 많은 질병, 예를 들어, 금단 기간 동안에 극심한 스트레스를 경험하는 약물 중독자, 과도한 스트레스 또는 불안을 겪는 암환자 또는 심혈관 질환 환자의 치료, 예방 및 재활에 있어서 유익할 수 있다.
독성에 관한 예비 실험의 결과와 결합하여, OR, ORG 또는 그의 유도체는 높은 효율성 및 낮은 독성의 특성을 가진 우울증 및 우울증의 동물행동학적 원인의 치료 및 예방에 있어서 새로운 용도를 가진다. OR, ORG 및 그의 유도체의 다른 용도는 급성 스트레스 및 불안과 같은 우울증을 암시하는 증상의 치료 및 예방에서의 용도이다. OR, ORG 및 그의 유도체의 항우울 효과에 포함된 메커니즘은 혈청 코르티코스테로이드, NMDA 및 AMPA 수용체 및 그들의 세포내 신호 경로 및 학습 및 기억을 포함하는 해마의 시냅스 가소성(hippocampal synaptic plasticity)을 조절하는 것이다.
따라서, 본 발명의 OR, ORG 또는 그의 유도체의 치료적 용도 및 유익한 효과는 다음과 같다: (1) 우울증에 대한 치료 효과; (2) 우울증의 원인에 대한 치료 효과; (3) 우울증의 증상 또는 그외 다른 질병의 유사한 증상에 대한 치료 효과; (4) 본 발명의 OR, ORG 또는 그의 유도체의 잠재적 용도는 우울증을 치료 및 예방하는 방법에 대해서만 의도하는 것이 아니며 그에 제한하여 해석되어서는 아니되며, 스트레스, 불안 및 인지기능 손상을 포함하는 다른 질병에도 또한 유익할 수 있다.

Claims (26)

  1. 하기 화학식 I의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체 및 식이적으로 허용되는 식이 보충제를 포함하는 우울증 예방 효과를 갖는 기능성 식품 조성물.
    Figure 112012000261859-pct00019

    상기 R1은 수소, β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 또는 벤질이며,
    상기 R2는 수소, β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질임.
  2. 하기 화학식 II의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체 및 식이적으로 허용되는 식이 보충제를 포함하는 우울증 예방 효과를 갖는 기능성 식품 조성물.
    Figure 112012000261859-pct00020

    상기 R1은 수소, β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질임.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 R1은 수소, β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 또는 아라비노실인 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
  4. 제 3항에 있어서,
    상기 R1은 수소, β-D-글루코피라노실 또는 β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실인 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
  5. 하기 화학식 III의 화합물 및 식이적으로 허용되는 식이 보충제를 포함하는 우울증 예방 효과를 갖는 기능성 식품 조성물.
    Figure 112012066974896-pct00021

    상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질임.
  6. 제 5항에 있어서,
    상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 또는 아라비노실인 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
  7. 제 6항에 있어서,
    상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 또는 람노피라노실인 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
  8. 하기 화학식 IV의 화합물 및 식이적으로 허용되는 식이 보충제를 포함하는 우울증 예방 효과를 갖는 기능성 식품 조성물.
    Figure 112012066974896-pct00022

    상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질임.
  9. 제 8항에 있어서,
    상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 또는 숙시닐인 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
  10. 제 8항에 있어서,
    상기 R2는 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실 또는 아세틸이며,
    상기 화합물은 1, 3-O-디아세틸올시놀 또는 3-O-아세틸-올시놀-1-O-(2,3,4,6-테트라아세틸)-β-D-글루코피라노시드인 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
  11. 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 기능성 식품이 직접적으로 해마의 장기 상승 작용(long-term potentiation)(LTP)을 조절하고 심리적 스트레스를 상승시키는 당코르티코이드(glucocorticoid) 농도를 예방하는 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
  12. 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 우울증은
    (1) 우울증, 조울증(manic depression), 혼합형 우울증(mixed depression), 및 조증 장애(manic disorder)와 같은, 우울증 및 기분 장애(mood disorder), 또는 경조병(hypomania), 또는
    (2) 우울 장애 및 기분 저하증(dysthymia)과 같은, 우울 장애, 또는
    (3) 중독성 약물 또는 수술, 방사선 치료 및 화학요법으로부터 선택된 어느 하나 이상의 치료법에 의해 야기된 우울 장애,
    정동 장애의 특성을 보여주는 서로 다른 아류형(subtype)의 정신 질환, 또는
    정신 장애와 같은, 정동 장애(affective disorder), 또는
    (4)우울증 및 경조병(hypomania)의 2 이상의 에피소드를 포함하며, 조증(mania) 및 우울증의 에피소드가 번갈아서 나타나는 양극성 장애(bipolar disorder) 또는 양극성 정동 장애(bipolar affective disorder)를 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
  13. 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 우울증의 증상 또는 우울증을 암시하는 증상은 서캐디안 리듬 장애(circadian rhythm disorder), 수면 장애, 만성 스트레스, 불안, 급성 스트레스에 의해 유발된 손상, 인지기능 손상 또는 인지기능 장애인 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
  14. 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 기능성 식품이 양식(daily food), 음료(beverages) 또는 드링크(drink)인 것을 특징으로 하는 기능성 식품 조성물.
  15. 약학적으로 허용되는 담체(carrier) 또는 첨가제(excipient)와 함께 하기 화학식 I의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체를 포함하는 우울증 예방 또는 치료 효과를 갖는 약학 조성물.
    Figure 112012000261859-pct00023

    상기 R1은 수소, β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질이며,
    상기 R2는 수소, β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질임.
  16. 약학적으로 허용되는 담체(carrier) 또는 첨가제(excipient)와 함께 하기 화학식 II의 5-메틸-1,3-벤젠디올 또는 그의 유도체를 포함하는 우울증 예방 또는 치료 효과를 갖는 약학 조성물.
    Figure 112012000261859-pct00024

    상기 R1은 수소, β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질임.
  17. 제 16항에 있어서,
    상기 R1은 수소, β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 또는 아라비노실인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  18. 제 17항에 있어서,
    상기 R1은 수소, β-D-글루코피라노실 또는 β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  19. 약학적으로 허용되는 담체(carrier) 또는 첨가제(excipient)와 함께 하기 화학식 III의 화합물을 포함하는 우울증 예방 또는 치료 효과를 갖는 약학 조성물.
    Figure 112012066974896-pct00025

    상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질임.
  20. 제 19항에 있어서,
    상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 또는 아라비노실인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  21. 제 20항에 있어서,
    상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 또는 람노피라노실인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  22. 약학적으로 허용되는 담체(carrier) 또는 첨가제(excipient)와 함께 하기 화학식 IV의 화합물을 포함하는 우울증 예방 또는 치료 효과를 갖는 약학 조성물.
    Figure 112012066974896-pct00026

    상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 숙시닐, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 또는 벤질임.
  23. 제 22항에 있어서,
    상기 R2는 β-D-글루코피라노실, β-D-글루코피라노실-(1→6)-β-D-글루코피라노실, 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실, 만노실, 알로실(allosyl), 갈락토실, 람노피라노실, 퓨코실, 크실로실, 아라비노실, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 시나모일, 또는 숙시닐인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  24. 제 22항에 있어서,
    상기 R2는 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실 또는 아세틸이며,
    상기 화합물은 1, 3-O-디아세틸올시놀 또는 3-O-아세틸-올시놀-1-O-(2,3,4,6-테트라아세틸)-β-D-글루코피라노시드인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  25. 제 15항 내지 제 24항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 우울증을 치료 또는 예방하기 위한 상기 화학식 I 내지 IV의 화합물 및 이들의 유도체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유효한 투여량은 0.1 mg/성인/일 내지 12 g/성인/일이며, 최적의 투여량은 50 내지 200 mg/성인/일인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  26. 제 25항에 있어서,
    상기 우울증을 치료 또는 예방하기 위한 상기 화학식 I 내지 IV의 화합물 및 이들의 유도체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유효한 투여량은 50 내지 200 mg/성인/일인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
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