CN116359519B - CLDN5蛋白、Cldn5基因及其修饰在抑郁障碍诊断和/或治疗中的应用 - Google Patents

CLDN5蛋白、Cldn5基因及其修饰在抑郁障碍诊断和/或治疗中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及CLDN5蛋白、Cldn5基因及其修饰的在抑郁障碍诊断和治疗中的应用。具体地，本发明实验证明了Cldn5基因及其H3K27me3修饰丰度可作为抑郁障碍发病的生物标志物；可作为筛选和制备预防和/或治疗抑郁障碍的产品的靶点。Cldn5基因及其修饰功能与抑郁障碍的关联将对抑郁障碍的防治提供重要的科学依据和应用价值。

Description

CLDN5蛋白、Cldn5基因及其修饰在抑郁障碍诊断和/或治疗中 的应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及CLDN5蛋白、Cldn5基因及其修饰在抑郁障碍诊断和/或治疗中的应用。
背景技术
抑郁障碍是一种常见的精神疾病，其核心症状主要表现为持续性心境低落、兴趣与快感丧失、精力缺乏等，具有高发病率，高致残率和高死亡率三大特征。全世界有逾 3 亿抑郁障碍患者，其中我国抑郁障碍发病率为 2-3%。然而，仅有 30-35%患者可通过现有心理干预或药物治疗途径获得一定程度的缓解和恢复，日益严重的精神健康危机给个人，家庭和社会带来了沉重的负担。作为一种病因和临床表现多样的精神疾病，抑郁障碍的发病机制十分复杂，部分患者疗效不佳，复发率较高，制约了抑郁障碍的临床治疗进展。因此，探索抑郁障碍发生发展的重要机制，发现抑郁障碍治疗的有效新靶点迫在眉睫。
作为维持中枢神经系统微环境动态平衡的重要结构，血脑屏障(Blood-brainbarrier, BBB) 在抑郁障碍等精神疾病中的作用已成为近年来的研究热点。临床研究显示，抑郁障碍患者脑内血管形成和血管发育的相关调控基因转录异常，且其病情严重程度和复发概率与 BBB 泄漏程度密切相关，提示血脑屏障异常是抑郁障碍发生发展的重要新机制。紧密连接结构是BBB发挥正常生理功能的基础，其中，紧密连接分子Claudin-5（Cldn5）对BBB结构与功能的完整性发挥着决定性作用。表观遗传修饰是外界环境因素调控机体Cldn5 功能的重要机制之一，然而Cldn5 基因的表观调控过程在调控抑郁障碍发生发展中的机制至今缺乏深刻的解释，需要进一步研究。
发明内容
本发明的第一方面，提供了一种抑郁障碍的生物标志物，所述的生物标志物为紧密连接分子Claudin-5（Cldn5分子）。
优选的，所述的Cldn5分子包括CLDN5蛋白、Cldn5基因、或Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度。
优选的，所述的Cldn5基因包括Cldn5的mRNA。
优选的，所述的Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度为Cldn5基因启动子区域的H3K27me3修饰丰度。进一步优选的，所述的Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度为Cldn5基因启动子区域中距离转录起始位点上游1000bp和/或2200bp处的H3K27me3修饰丰度。
优选的，所述的生物标志物的样本来源于血液、脑脊液或脑组织，进一步优选的，所述生物标志物的样本来源于脑组织的海马体。
本发明的第二方面，提供了一种上述第一方面的生物标志物的检测试剂，所述的检测试剂包括：
1）检测CLDN5蛋白表达水平的试剂；
2）检测Cldn5基因表达水平的试剂；
3）检测Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度的试剂；和/或，
4）检测Cldn5基因的H3K27me3修饰的修饰酶EZH2基因和/或蛋白表达水平的试剂。
根据具体实施方式的需要，所述的试剂可以是现有技术中任一试剂，只要能检测Cldn5基因的mRNA表达水平和/或CLDN5蛋白表达水平和/或检测Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度的试剂即可。
优选的，所述的检测Cldn5基因、Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度和/或修饰酶EZH2基因的试剂包括引物和/或探针，和/或所述的检测CLDN5蛋白表达水平和/或修饰酶EZH2蛋白表达水平的试剂包括抗体或酶的底物。
优选的，检测CLDN5蛋白表达水平包括但不限于使用检测CLDN5蛋白表达水平的ELISA试剂盒（购买自华美生物，货号CEB-EL005507MO）和/或检测CLDN5蛋白表达水平的CLDN5蛋白抗体（购买自thermofisher scientific，货号35-2500）以及酶的底物。
优选的，检测Cldn5基因的mRNA的引物包括正向引物（SEQ ID NO：1）：5’-ACTCTTTGTTACCTTGACCGG-3’和/或反向引物（SEQ ID NO：2）：5’-CAGCTCGTACTTCTGTGACAC-3’。
优选的，检测Cldn5基因的mRNA的探针（SEQ ID NO：3）包括：5’-TGAGTGCTACCCGTGCCTTAACTG-3’。
优选的，检测Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度的试剂包括但不限于检测Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度的H3K27me3抗体（购买自Cell signaling technology，货号#9773），和/或，检测Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度的引物。
优选的，所述的H3K27me3修饰丰度为Cldn5基因启动子区域中距离转录起始位点上游2200bp和1000 bp处的H3K27me3修饰丰度，所述H3K27me3修饰丰度越大，患者患有抑郁障碍的风险越高；其中距离转录起始位点上游2200bp处H3K27me3修饰丰度越高，患者的抑郁障碍症状越严重。
优选的，检测Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度的引物包括检测距离转录起始位点上游2200bp处的H3K27me3修饰丰度检测引物，和/或，距离转录起始位点上游1000 bp处的H3K27me3修饰丰度检测引物。
进一步优选的，所述的距离转录起始位点上游2200bp处的H3K27me3修饰丰度检测引物包括正向序列（SEQ ID NO：4）：5’- AGGATCGAGGAAGCATTGCC-3’和/或反向序列（SEQ IDNO：5）：5’- TGGTCCGAGCAAGTTCACAT -3’。
进一步优选的，所述的距离转录起始位点上游1000 bp处的H3K27me3修饰丰度检测引物包括正向序列（SEQ ID NO：6）：5’- CTGGCCAGGAAACTCCAAGT-3’和/或反向序列（SEQID NO：7）：5’- GCAGAGACACGATGGGACAT-3’
优选的，检测Cldn5基因的H3K27me3修饰的修饰酶EZH2表达水平的引物包括SEQID NO：10和/或11。
本发明的第三方面，提供了一种上述第一方面的生物标志物和/或上述第二方面的检测试剂在制备诊断抑郁障碍的产品中的应用。
优选的，所述的产品包括但不限于诊断试剂盒、基因芯片、抗体、引物和（或）探针。
本发明的第四方面，提供了一种诊断产品，所述的诊断产品包括上述第二方面的检测试剂。
优选的，所述诊断产品包括诊断试剂盒、基因芯片、抗体、引物和（或）探针。
本发明的第五方面，提供了一种上述第一方面的生物标志物的调节试剂，所述的调节试剂提高CLDN5蛋白表达水平，和/或，提高Cldn5基因表达水平，和/或，降低Cldn5基因H3K27me3修饰丰度，和/或，降低Cldn5基因H3K27me3修饰的修饰酶EZH2的表达水平。
根据具体实施方式的需要，所述的调节试剂可以是现有技术中任一试剂，只要能调节Cldn5基因的表达水平，例如Cldn5基因的mRNA表达水平和/或CLDN5蛋白表达水平和/或Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度的试剂即可。
优选的，所述的调节试剂包括：
1）CLDN5蛋白；
2）包含Cldn5基因的过表达载体或者促进Cldn5基因表达的调节因子，和/或，
3）H3K27me3修饰酶EZH2的干扰RNA或包含所述干扰RNA的载体。优选的，所述的促进Cldn5基因表达的调节因子包括但不限于增强子和/或启动子。
优选的，所述的EZH2的干扰RNA的靶点序列包含SEQ ID NO：8，所述的干扰RNA的序列包含SEQ ID NO：9。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的EZH2的干扰RNA的靶点序列如SEQ IDNO：8所示，或者干扰RNA的序列如SEQ ID NO：9所示。
优选的，所述的包含所述干扰RNA的载体为腺相关病毒。
本发明的第六方面，提供了一种上述第一方面的生物标志物或上述第五方面的调节试剂在制备治疗抑郁障碍的产品中的应用。
根据具体实施的需要，所述的应用还包括治疗抑郁障碍的并发症。
本发明的第七方面，提供了一种上述第五方面所述的调节试剂在制备治疗抑郁障碍的产品或制备治疗脑部炎症相关疾病的产品中的应用。
优选的，所述的产品通过治疗脑部炎症相关疾病而治疗抑郁障碍。
优选的，所述的治疗脑部炎症相关疾病包括抑制脑内炎症因子TNF-α和IL-1β的产生。
本发明的第八方面，提供了一种药物或药物组合物，所述的药物或药物组合物包括上述第五方面所述的调节试剂。
本发明的第九方面，提供了一种H3K27me3作为靶点在制备诊断诊断、预防、治疗和/或预后评估抑郁障碍或者脑部炎症相关疾病的产品中的应用。
根据本申请的实施例，Cldn5基因启动子区域中的H3K27me3修饰丰度增加与抑郁障碍有关，可以用于诊断、预防、治疗和/或预后评估抑郁障碍。
在本发明的一个具体实施方案中，所述的H3K27me3为Cldn5基因启动子区域中距离转录起始位点上游1000bp和/或上游2200bp处的H3K27me3修饰丰度。
本发明的第十一方面，提供了一种H3K27me3修饰酶EZH2的干扰RNA腺相关病毒，所述的干扰RNA的靶点如SEQ ID NO：8所示。
优选的，所述干扰RNA的序列包含SEQ ID NO：9所示核苷酸序列。进一步优选如SEQID NO：9所示核苷酸序列。
本发明的第十一方面，提供了一种H3K27me3修饰酶EZH2的干扰RNA，所述的干扰RNA的靶点如SEQ ID NO：8所示。
优选的，所述干扰RNA的序列包含SEQ ID NO：9所示核苷酸序列。进一步优选如SEQID NO：9所示核苷酸序列。
本发明的第十二方面，提供了一种上述的腺相关病毒和/或上述的干扰RNA在制备治疗抑郁障碍的产品中的应用。
优选的，所述的产品包括药物或药物组合物，进一步优选为上述第八方面的药物或药物组合物。
本发明的第十三方面，提供了一种抑制炎症因子的方法。
优选的，所述的方法包括向患病个体施用有效量的上述的调节试剂、上述的腺相关病毒、上述的干扰RNA和/或上述的药物或药物组合物。
优选的，所述的炎症因子为脑内的炎症因子。
在本发明的一个具体实施方式中，所述的炎症因子包括TNF-α和IL-1β。
本发明的第十四方面，本发明提供了一种治疗脑内炎症的方法。
优选的，所述的方法包括向患病个体施用有效量的上述的调节试剂、上述的腺相关病毒、上述的干扰RNA和/或上述的药物或药物组合物。
本发明的第十五方面，提供了一种治疗抑郁障碍的方法。
优选的，所述的方法包括向患病个体施用有效量的上述的调节试剂、上述的腺相关病毒、上述的干扰RNA和/或上述的药物或药物组合物。
本发明的第十六方面，提供了一种筛选治疗抑郁障碍和/或治疗脑部炎症相关疾病的候选药物的方法。
优选的，所述的方法包括将候选药物施用于抑郁障碍动物模型，筛选能够使Cldn5基因表达升高或使其H3K27me3修饰丰度（优选为Cldn5基因启动子区域中距离转录起始位点上游2200bp处的H3K27me3修饰丰度）降低的候选药物。
该方法可以为治疗目的，也可以为非治疗目的，该方法只是筛选哪些药物可以用于治疗抑郁障碍和/或治疗脑部炎症相关疾病，即治疗效果不是必然的。药物的筛选只是一种可能性。
本发明的第十七方面，提供了一种上述第一方面的生物标志物作为靶点在筛选诊断、治疗和/或预后评估抑郁障碍或者脑部炎症相关疾病的产品中的应用。
优选的，所述的筛选包括筛选CLDN5蛋白表达水平、Cldn5基因表达水平、Cldn5基因H3K27me3修饰丰度、Cldn5基因H3K27me3修饰的修饰酶EZH2表达水平的检测试剂作为诊断和/或预后评估抑郁障碍的产品，或者，所述的筛选包括筛选提高CLDN5蛋白表达水平，和/或，提高Cldn5基因表达水平，和/或，降低Cldn5基因H3K27me3修饰丰度，和/或，降低Cldn5基因H3K27me3修饰的修饰酶EZH2的表达水平的调节试剂作为治疗抑郁障碍或者脑部炎症相关疾病的产品。
该应用可以为治疗目的，也可以为非治疗目的，该应用只是筛选哪些产品可以用于诊断、治疗和/或预后评估抑郁障碍，即诊断和/或治疗效果不是必然的。只是一种可能性。
本发明的有益技术效果：
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种Cldn5基因启动子H3K27me3修饰在抑郁障碍诊断和治疗中的用途。
本发明发现，抑郁障碍模型小鼠血清和海马Cldn5基因表达均出现了明显的缺陷，其启动子上游+1000 bp处和+2200 bp处位点组蛋白3第27位赖氨酸三甲基化（Tri-methylation at lysine 27 of histone H3, H3K27me3）结合丰度异常增加，且+2200 bp处H3K27me3修饰丰度与抑郁障碍病情严重程度明显相关；Cldn5基因表达及H3K27me3修饰的相关信号通路在抑郁障碍的发生发展中发挥作用，靶向Cldn5基因表达及H3K27me修饰的相关信号通路分子，可对诊断和治疗抑郁障碍提供帮助。
以上只是概括了本发明的一些方面，不是也不应该认为是在任何方面限制本发明。
本说明书提到的所有专利和出版物都是通过参考文献作为整体而引入本发明的。本领域的技术人员应认识到，对本发明可作某些改变并不偏离本发明的构思或范围。
下面的实施例进一步详细说明本发明，不能认为是限制本发明或本发明所说明的具体方法的范围。
本发明所述的“产品”包含检测生物标志物的试剂和/或抑制生物标志物的试剂。包括但不限于药物、试剂盒、设备等等。
本发明术语“诊断”是指以查明患者过去、诊断时或将来是否患有疾病或病症，或者是查明疾病的进展或将来可能的进展。
本发明所述的“预后评估”指评估患者对治疗的反应，及将来患病的风险度。
本发明所述的“治疗”，表示在疾病已开始发展后减缓、中断、阻止、控制、停止、减轻、或逆转一种体征、症状、失调、病症、或疾病的进展或严重性，但不一定涉及所有疾病相关体征、症状、病症、或失调的完全消除。
本发明所述“有效量”是指在以单个或多个剂量给予至个体或器官之后提供所希望的治疗或预防的本发明的药物的量或剂量。
本发明术语“包括”或“包含”是开放式的描述，含有所描述的指定成分或步骤，以及不会实质上影响的其他指定成分或步骤。
本发明所述的“和/或”包含该术语所连接的项目的所有组合，应视为各个组合已经单独地在本文列出。例如，“A和/或B”包含了“A”、“A和B”以及“B”。又例如，“A、B和/或C”包含了“A”、“B”、“C”、“A和B”、“A和C”、“B和C”以及“A和B和C”。
本发明所述的“个体”可以为人或非人动物，所述的非人动物可以为鼠、牛、羊、兔、猪、猴等非人哺乳动物。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施例，各附图中或#表示P＜0.05；/>或##表示P＜0.01；/>或###表示P＜0.001，具体如下：
图1：慢性不可预知温和应激（CUMS）诱导的抑郁情绪的验证图；其中，A表示对照组和抑郁组的糖水偏好百分比；B表示对照组和抑郁组的悬尾实验中的不动时间；C表示对照组和抑郁组的强迫游泳实验中的不动时间，n = 6。
图2：CUMS对小鼠血清Cldn5基因表达的影响图；其中，A表示对照组和抑郁组的血清Cldn5基因的表达产物相对水平；B为对照组和抑郁组血清Cldn5基因的表达产物相对水平变化的百分比，n = 6。
图3：血清Cldn5基因水平与CUMS诱导的抑郁情绪严重程度的关系图；其中，A-C分别为血清中Cldn5基因表达产物的相对水平与糖水偏好百分比、悬尾不动时间与强迫游泳不动时间的相关性分析，n=6；
图4：CUMS对小鼠海马Cldn5基因表达的影响图；其中，A表示对照组和抑郁组的海马Cldn5 mRNA相对水平；B为对照组和抑郁组海马Cldn5 mRNA相对水平变化的百分比，n =6；
图5：海马Cldn5基因水平与CUMS诱导的抑郁情绪严重程度的关系图；其中，A-C分别表示海马中Cldn5 mRNA相对水平与糖水偏好百分比、悬尾不动时间与强迫游泳不动时间的相关性分析，n=6；
图6：对照组和抑郁组的Cldn5基因启动子区域H3K27me3的相对修饰丰度图，n =6。
图7：Cldn5基因距离TSS上游2200 bp处的H3K27me3修饰丰度与CUMS诱导的抑郁情绪严重程度的关系图；其中，A-C分别表示Cldn5基因启动子区域中距离转录起始位点2200bp处的H3K27me3修饰丰度与糖水偏好百分比、悬尾不动时间与强迫游泳不动时间的相关性分析结果，n = 6。
图8：Cldn5基因距离TSS上游1000 bp处的H3K27me3修饰丰度与CUMS诱导的抑郁情绪严重程度的关系图；其中，A-C分别表示Cldn5基因启动子区域中距离转录起始位点1000bp处的H3K27me3修饰丰度与糖水偏好百分比、悬尾不动时间与强迫游泳不动时间的相关性分析结果，n = 6。
图9：颅内注射 Cldn5基因的过表达载体对小鼠抑郁障碍的治疗效果；其中，A-C分别表示Cldn5基因过表达载体对对照组和抑郁组小鼠糖水偏好百分比、悬尾实验中的不动时间、强迫游泳不动时间的影响，n = 8；
图10：EZH2 RNAi对海马EZH2表达的调控效果，n=6；
图11：颅内注射EZH2 RNAi对小鼠抑郁障碍的治疗效果；其中，A-C分别表示EZH2RNAi对对照组和抑郁组小鼠糖水偏好百分比、悬尾实验中的不动时间、强迫游泳不动时间的影响，n=7；
图12：颅内注射Cldn5基因过表达载体对脑内炎症水平的调控效果；其中，A-B分别表示Cldn5基因过表达载体对小鼠海马IL-1β、TNF-α分泌水平的影响，n=7；
图13：颅内注射EZH2 RNAi对脑内炎症水平的调控效果；其中，A-B分别表示EZH2RNAi对小鼠海马IL-1β、TNF-α分泌水平的影响，n=7；
图14：抗抑郁药氟西汀对抑郁组小鼠血清中Cldn5基因的表达产物的影响，n = 6；
图15：抗抑郁药氟西汀对海马Cldn5基因和/或其表达产物的影响；其中，A-B分别表示氟西汀对抑郁组小鼠海马Cldn5 mRNA和Cldn5基因的表达产物的影响；C为Cldn5基因的表达产物的定量统计结果图，n=6；
图16：抗抑郁药氟西汀对Cldn5基因启动子区域H3K27me3修饰水平的影响；其中，A-B分别表示氟西汀对Cldn5基因启动子上游+2200bp和+1000bp处H3K27me3相对修饰丰度的影响，n=6。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。以下实施例中的方法中如无特别说明，所用的生化试剂均为市售试剂；未记载详述步骤的方法均为常规方法。
本发明中涉及的部分实验方法：
一、慢性不可预知温和应激模型具体实施步骤如下（该模型为经典抑郁模型，引用文献已在实施例1中标注）：
每天随机给予C57BL/6J小鼠如下刺激方式：禁食24小时，昼夜颠倒24小时，束缚6小时，4℃冰水游泳5分钟，45°斜笼7小时，潮湿垫料24小时，夹尾1分钟，并保证相邻2天的刺激方式不同，使应激程序满足不可预测性的条件，一共应激6周，对照组小鼠不接受任何刺激。
二、糖水偏好实验具体实施步骤如下：
小鼠单笼饲养，笼上放置 2 个水瓶，一个水瓶含有 1% (质量/体积) 的蔗糖溶液，另一个水瓶含有灭菌饮用水。小鼠适应双瓶饲养 24小时后进行正式实验，记录水瓶初始重量。为了避免位置偏好性，每隔 6 小时更换一次水瓶位置，24小时后记录水瓶最终重量。计算小鼠正式实验中摄入的饮用水量和糖水量，糖水偏好百分比 (%) = 摄入的糖水量/(摄入的饮用水量+摄入的糖水量)×100%。
三、悬尾实验具体实施步骤如下：
用胶带将小鼠的鼠尾悬吊 6.5分钟，使用视频记录系统记录小鼠悬尾后6.5分钟内的状态，并分析测试最后 5分钟内小鼠的不动时间。
四、强迫游泳实验具体实施步骤如下：
将小鼠置于直径20厘米，高度40厘米的透明丙烯酸圆筒中，筒内装有高度为30厘米的水，水温保持在22-24 ℃，记录小鼠入水后 6.5分钟内的状态，并分析测试最后5分钟内小鼠的不动时间。
五、组织RNA提取具体实施步骤如下：
（1）取新鲜的小鼠海马组织，加入1毫升Trizol试剂充分匀浆，超声至无组织碎块；
（2）加入200微升氯仿，剧烈震荡30秒，室温静止15分钟；
（3）4℃离心，12000 g×15分钟；
（4）吸取400微升上层无色水相至新的管中，加入600微升异丙醇，颠倒混匀，室温静置15分钟；
（5）4℃离心，12000 g×15分钟；
（6）弃去上清，加入1毫升75%乙醇，振摇，充分洗涤沉淀；
（7）4℃离心，7500 g×7分钟；
（8）弃去上清，倒置15分钟，使管内残余液体流尽；
（9）加入20微升 DEPC水溶解RNA。
六、实时荧光定量PCR具体实施步骤如下：
（1）取 2 μg RNA 按市售反转录试剂盒说明书进行反转录，所得cDNA 于-20 ℃保存;
（2）按表1配制PCR反应体系，将样品置于Real-time PCR仪中进行反应，反应程序为95℃预变性10分钟，95℃变性5秒，60℃退火30秒，72℃延伸35秒，共进行40个循环；最后72℃反应10分钟；
（3）程序结束后，根据溶解曲线判断引物特异性，以β-actin为内参，根据2-ΔΔCt法计算基因相对mRNA丰度：ΔCt=Ct目的基因-Ct内参基因，ΔΔCt=ΔCt实验组-ΔCt对照组，相对mRNA丰度=2-ΔΔCt。
表1 实时荧光定量PCR反应体系
其中，
正向引物（SEQ ID NO：1）：5’-ACTCTTTGTTACCTTGACCGG-3’；
反向引物（SEQ ID NO：2）：5’-CAGCTCGTACTTCTGTGACAC-3’。
Cldn5基因的mRNA的探针序列（SEQ ID NO：3）：5’-TGAGTGCTACCCGTGCCTTAACTG-3’。
七、免疫染色质共沉淀具体实施步骤如下：
（1）于冰上将组织剪碎成小块，加入终浓度为1.5%的甲醛，室温振摇20分钟；
（2）加入终浓度为0.125 M的甘氨酸，室温混合5分钟，终止交联；
（3）4℃离心，500 g×5分钟，弃去上清，加入1毫升PBS洗涤，重复三次；
（4）使用Dounce匀浆器研磨20-25次，将重悬于PBS的组织解离为单细胞悬液；
（5）4℃离心，2000 g×5分钟，弃上清，收集细胞核；
（6）加入酶解消化缓冲液和适量的微球菌核酸酶将染色质剪切至 150-900 bp，并进行超声破碎以释放染色质片段；
（7）4℃离心，9400 g×10分钟，收集上清；
（8）将上清样品与H3K27me3抗体和 IgG 抗体混合并于 4 ℃孵育过夜；
（9）加入ChIP 级链球菌蛋白 G磁珠于4℃转动孵育2小时；
（10）使用低盐洗涤液与高盐洗涤液洗去背景，收集磁珠，加入洗脱液并在65℃孵育30分钟以将染色质洗脱下来；
（11）加入NaCl和蛋白酶K，65 ℃解交联2小时并进行 DNA 纯化；
（12）纯化后的DNA使用Qubit 4.0 荧光定量仪进行浓度测定，并进行ChIP-qPCR实验；
（13）Cldn5基因的H3K27me3修饰丰度的检测引物序列如下：
距离转录起始位点上游2200bp处的H3K27me3修饰丰度检测引物：
正向序列（SEQ ID NO：4）：5’- AGGATCGAGGAAGCATTGCC-3’；
反向序列（SEQ ID NO：5）：5’- TGGTCCGAGCAAGTTCACAT -3’。
距离转录起始位点上游1000 bp处的H3K27me3修饰丰度检测引物：
正向序列（SEQ ID NO：6）：5’- CTGGCCAGGAAACTCCAAGT-3’；
反向序列（SEQ ID NO：7）：5’- GCAGAGACACGATGGGACAT-3’。
八、脑立体定位注射具体实施步骤如下：
（1）小鼠按80 mg/kg剂量腹腔注射 0.5%戊巴比妥钠溶液进行麻醉，并轻捏小鼠后肢确认麻醉深度；
（2）用汉密尔顿微量进样器吸取1微升病毒(滴度≥ 1×1012ml-1)，由微量注射泵缓慢注射至双侧海马，定位于前囟后2.2毫米，中线旁开1.8毫米，颅骨表面下1.8毫米为双侧海马注射点，注射时间为5分钟；
（3）注射完毕后留针5分钟，缓慢撤出进样针，清理创口滴加抗生素，缝合皮肤。
九、炎症因子ELISA测定具体实施步骤如下：
（1）按生工小鼠 IL-1β/TNF-α ELISA 试剂盒说明书进行炎症因子测定：用预冷的PBS冲洗组织，去除残留血液，将组织剪碎，按1：9的重量体积比加入一定体积的PBS，超声裂解组织；
（2）4 ℃离心，5000 g×10分钟，取上清用于后续检测
（3）实验前30分钟将试剂盒恢复至室温；
（4）向预先包被了抗炎症因子抗体的酶标孔中加入100微升标准品和样本；
（5）37 ℃孵育90分钟后弃去液体；
（6）加入100微升生物素标记的抗体工作液，37℃孵育60分钟；
（7）重复洗涤，弃去液体，甩干，每个反应空加入100微升辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，37℃孵育30分钟；
（8）重复洗涤，加入90微升显色剂，37℃避光孵育15分钟；
（9）加入50微升终止液，立刻于 450 nm 处测量吸光度值，以标准品浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线计算炎症因子浓度，计算样品炎症因子浓度。
十、Western Bot具体实施步骤如下：
（1）将脑组织置于含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液中匀浆，于4 ℃摇床上裂解1小时
（2）4 ℃离心，12000 rpm×10 分钟，取上清液进行BCA定量，按30微克/管进行蛋白分装变性，-80 ℃保存；
（3）配制SDS-PAGE 分离胶，混合均匀后倒入安装好的玻璃板中，并使用异丙醇压平液面；
（4）待分离胶凝固后，倒净异丙醇，迅速倒入浓缩胶，并放入梳子，避免引入气泡；
（5）待浓缩胶凝固后，移入电泳槽，倒入配制好的1×电泳液，拔出梳子，并对胶孔进行逐个吹打，避免胶丝残留，加入蛋白样品与蛋白分子量标记物；
（6）以50V进行恒压电泳40分钟后，调整电压至80V，电泳至溴酚蓝指示带接近分离胶底部；
（7）将硝酸纤维素膜、6张滤纸及2张海绵提前放入转膜液中浸泡，随后与分离胶一起按要求叠放后放入转膜槽中，于低温条件下150 mA 恒流转膜2.5小时；
（8）转膜完毕后，将NC膜放入5%脱脂牛奶中，室温封闭1.5小时；
（9）按目的蛋白的分子量将NC膜裁剪为合适的尺寸，并放入含有一抗的抗体孵育袋中，4 ℃摇床孵育过夜；
（10）隔天，将NC膜放入1×TBST中，室温清洗3次，每次10分钟；
（11）将NC膜放入含有二抗的抗体孵育袋中，室温摇床孵育1-2小时；
（12）将NC膜放入1×TBST中，室温清洗3次，每次10分钟；
（13）使用全自动化学发光仪进行蛋白免疫印迹成像，使用 Image J 软件进行定量分析。
实施例1 抑郁障碍小鼠血清Cldn5蛋白水平显著降低
CUMS是经典的抑郁症动物模型，CUMS所致的疾病发生和表征可较好模拟人类抑郁症症状以及其所引起的生化改变（参考文献Yan HC, Cao X, Das M, Zhu XH, Gao TM.Behavioral animal models of depression. Neurosci Bull. 2010;26(4); Li Y, SuP, Chen Y, et al. The Eph receptor A4 plays a role in demyelination anddepression-related behavior. J Clin Invest. 2022, 132(8); Leng L, Zhuang K,Liu Z, et al. Menin Deficiency Leads to Depressive-like Behaviors in Mice byModulating Astrocyte-Mediated Neuroinflammation. Neuron. 2018, 100(3)）。我们按文献所述方式连续6周给予小鼠CUMS构建抑郁症模式动物，并选择糖水偏好实验、悬尾实验和强迫游泳实验用于模型评价。糖水偏好实验中，动物糖水消耗百分比越低，说明动物快感越缺乏；悬尾实验和强迫游泳实验中，动物的不动行为被认为类似绝望行为，其不动时间越长，反映其绝望程度越严重(参考文献Walker AK, Wing EE, Banks WA, Dantzer R.Leucine competes with kynurenine for blood-to-brain transport and preventslipopolysaccharide-induced depression-like behavior in mice. Mol Psychiatry.2019;24(10); O'Connor JC, Lawson MA, André C, et al. McMurray KMJ, RamakerMJ, Barkley-Levenson AM, et al. Identification of a novel, fast-actingGABAergic antidepressant. Mol Psychiatry. 2018;23(2); Borbély É, Hajna Z,Nabi L, et al. Hemokinin-1 mediates anxiolytic and anti-depressant-likeactions in mice. Brain Behav Immun. 2017;59)。结果显示，与未经受处理的野生型组（对照组）相比，CUMS 6周（抑郁组）可导致小鼠糖水偏好指数降低（以下结果均以平均值±标准误表示。对照组：79.86%±2.61%，抑郁组：65.56±3.347%，P=0.0071），悬尾不动时间（对照组：117.3±9.882 s抑郁组：153.8± 11.92 s，P=0.0401）和强迫游泳不动时间（对照组：100.5±11.27 s抑郁组：177.0±11.73 s，P=0.0008）均延长，n=6，即CUMS 6周小鼠出现抑郁障碍（图1 A-C）。
收集对照组和抑郁组小鼠的血液，室温静置2小时待血液凝固，4℃以3000 rpm离心10分钟，取上层即为血清，并通过小鼠Cldn5蛋白ELISA试剂盒监测Cldn5基因表达产物的水平。实验结果显示，与对照组相比，抑郁组小鼠血清Cldn5蛋白水平显著减少（对照组：27.01±3.642 pg/ml，抑郁组：17.06±1.514 pg/ml，P=0.0357）（图2A），n=6。进一步，与对照组相比，抑郁组血清Cldn5蛋白水平相对变化百分比为35.87±5.690%（P=0.0357）（图2B），n=6。接下来，使用Graphpad Prism软件通过线性回归分析评价血清Cldn5蛋白水平和抑郁障碍病情严重程度的相关性，P<0.05即认为两个变量具有相关性（参考文献Matsuno H, Tsuchimine S, O'Hashi K, et al. Associationbetween vascular endothelial growth factor-mediated blood-brain barrierdysfunction and stress-induced depression. Mol Psychiatry. 2022;27(9); Ma H,Li C, Wang J, et al. Amygdala-hippocampal innervation modulates stress-induced depressive-like behaviors through AMPA receptors. Proc Natl Acad SciU S A. 2021;118(6)）。结果显示，糖水偏好百分比与血清Cldn5蛋白水平呈正相关（R2=0.6407，P=0.0018），悬尾不动时间（R2=0.5989，P=0.0031）和强迫游泳不动时间（强迫游泳：R2=0.6019，P=0.0030）与血清Cldn5蛋白水平呈负相关（图3A-C），n=6。
实施例2 抑郁障碍小鼠海马Cldn5基因表达显著降低
取对照组和抑郁组小鼠的双侧海马，取组织RNA并通过反转录PCR获得组织cDNA，最后通过实时荧光定量PCR法监测Cldn5基因水平。实验结果显示，与对照组相比，抑郁组小鼠海马Cldn5 mRNA相对水平显著降低（对照组：0.9940±0.03941，抑郁组：0.6705±0.06318，P=0.0025），且其相对对照组的mRNA水平下降百分比为32.55±5.690% （P=0.0025）（图4A和B），n=6。接下来，使用Graphpad Prism软件通过线性回归分析海马Cldn5基因水平和小鼠抑郁障碍病情严重程度的相关性。结果显示，小鼠糖水偏好百分比与海马Cldn5 mRNA相对水平呈正相关（R2=0.6333，P=0.0020），悬尾不动时间（R2=0.5601，P=0.0051）、强迫游泳不动时间（R2=0.5101，P=0.0091）与Cldn5 mRNA水平呈负相关，n=6（图5A-C）。结合实施例1说明Cldn5基因是抑郁障碍发生发展的关键风险因素，且抑郁障碍个体的血清和海马Cldn5基因水平可下降至正常机体的三分之二左右。
实施例3 抑郁障碍小鼠海马Cldn5基因H3K27me3修饰丰度升高
分离对照组和抑郁组小鼠的双侧海马，使用SimpleChIP Plus EnzymaticChromatin IP试剂盒（购自CST）进行ChIP-qPCR实验以监测Cldn5基因启动子上不同位点H3K27me3修饰丰度。结果显示，与对照组小鼠相比，抑郁组小鼠海马Cldn5基因启动子区域中距离转录起始位点（Transcription start site，TSS）上游1000 bp和2200 bp处H3K27me3修饰相对丰度均显著增加（+1000 bp：对照组：1.009±0.1104；抑郁组：1.685±0.1269，P=0.0152；+2200 bp：对照组：1.005±0.09874 抑郁组：1.689±0.09959，P=0.0039），n=6（图6）。进一步，对上述两个位点H3K27me3修饰丰度与抑郁障碍病情严重程度进行相关性分析，结果显示小鼠糖水偏好百分比（R2=0.7168，P=0.0005）、悬尾不动时间（R2=0.5674，P=0.0047）和强迫游泳不动时间（R2=0.6219，P=0.0023）均与距离TSS +2200 bp处的H3K27me3修饰丰度呈线性相关（图7A-C，n=6），但是与距离TSS+1000 bp处的H3K27me3修饰丰度无线性关系（糖水偏好比：R2=0.2509，P=0.0971；悬尾不动时间：R2=0.1688，P=0.1845；强迫游泳不动时间：R2=0.2456，P=0.1013）（图8A-C，n=6），上述结果说明Cldn5基因距离TSS上游2200 bp和1000 bp处的H3K27me3修饰丰度与抑郁障碍的出现有关，而且，距离TSS上游2200 bp的H3K27me3修饰丰度与抑郁障碍的病情严重程度具有密切关系。
实施例4 颅内注射Cldn5基因过表达载体可抑制小鼠抑郁障碍的发生发展
为了明确将Cldn5基因对抑郁障碍的调控作用，将Cldn5基因的编码区序列（NM_013805.4）插入腺相关病毒载体（载体名称：GV726，元件顺序：pAAV-ICAM2p-EGFP-MIR155(MCS)-SV40 PolyA）中构建Cldn5基因的过表达载体，并通过脑立体定位仪双侧注射至小鼠背侧海马齿状回，注射体积每侧1 μl。因腺相关病毒需3-4周才可稳定表达且术后小鼠需恢复≥1周才可进行造模，因此选择于CUMS造模前10天进行颅内病毒注射（参考文献Ma H, LiC, Wang J, et al. Amygdala-hippocampal innervation modulates stress-induceddepressive-like behaviors through AMPA receptors. Proc Natl Acad Sci U S A.2021;118(6)；Song Q, Fan C, Wang P, Li Y, Yang M, Yu SY. Hippocampal CA1 βCaMKII mediates neuroinflammatory responses via COX-2/PGE2 signaling pathwaysin depression. J Neuroinflammation. 2018;15(1)）。此外，新型的AAV-BR1血清型基于外壳改造具有尾静脉注射的便利性，可通过尾静脉注射特异性感染脑内内皮细胞，因此未来使用AAV-BR1血清型作为载体进行脑内Cldn5的递送更具有临床转化价值（参考文献Song X, Cui Y, Wang Y, et al. Genome Editing with AAV-BR1-CRISPR in PostnatalMouse Brain Endothelial Cells. Int J Biol Sci. 2022;18(2)；Sundaram SM, ArruloPereira A, Müller-Fielitz H, et al. Gene therapy targeting the blood-brainbarrier improves neurological symptoms in a model of genetic MCT8 deficiency.Brain. 2022;145(12)）。CUMS造模结束后，通过糖水偏好实验、悬尾实验和强迫游泳实验评价Cldn5基因过表达载体对抑郁障碍的治疗效果。向对照组和抑郁组分别注射空白载体作为空白组，向对照组和抑郁组小鼠海马分别注射Cldn5基因过表达载体作为治疗组。实验结果显示，抑郁组中，相对于空白组，通过向小鼠海马注射Cldn5基因过表达载体的治疗组可显著性升高抑郁组小鼠的糖水偏好百分比（抑郁+空白载体组：65.71±2.713%，抑郁+过表达载体组：79.23±1.166%，P＜0.0001），显著性降低悬尾不动时间（抑郁+空白载体组：190.0±7.128 s，抑郁+过表达载体组：146.6±11.84 s，P=0.0473）和强迫游泳的不动时间（抑郁+空白载体组：171.3±16.76 s，抑郁+过表达载体组：98.38±11.50 s，P=0.0011），n=8（图9 A-C），即颅内注射Cldn5基因过表达载体可减缓小鼠抑郁障碍的发生发展，而在对照组中，无论是空白载体组还是注射过表达载体组，糖水偏好百分比（对照+空白载体组：77.64±0.9925%，对照+过表达载体组：76.48±1.290%，P=0.9975）、悬尾不动时间（对照+空白载体组：136.8±11.15 s，对照+过表达载体组：138±10.22 s，P＞0.9999）和强迫游泳不动时间（对照+空白载体组：73.33±9.443 s，对照+过表达载体组：79.86±7.921 s，P=0.9995）都没有显著性的差异，n=8（图9 A-C），说明通过注射Cldn5基因过表达载体可以有效的缓解抑郁障碍。
实施例5 颅内注射EZH2 RNAi可抑制小鼠抑郁障碍的发生发展
为系统研究Cldn5基因H3K27me3修饰在抑郁障碍中的作用，首先我们构建了H3K27me3修饰酶EZH2的干扰RNA腺相关病毒EZH2 RNAi（病毒载体同Cldn5过表达载体），并以插入无义序列的腺相关病毒Scramble RNAi（购自上海吉凯基因公司）作为对照组，向海马齿状回立体定位注射，注射体积1μl，并于4周后取小鼠海马，通过实时荧光定量PCR对其EZH2含量进行检测及结果分析。结果所示，EZH2 RNAi可显著降低小鼠海马EZH2水平（对照组：1.050±0.04175，EZH2 RNAi组：0.6697±0.03612，P=0.0005），n=6（图10）。
EZH2 RNAi干扰靶点序列、EZH2 RNAi序列及其检测引物序列如下：
EZH2 RNAi干扰靶点序列为5’-AAGGAGTTTGCTGCTGCTCTT-3’（SEQ ID NO：8）。
EZH2 RNAi序列为：5’- gacgagctgtacaaggctagc CTGGAGGCTTGCTGAAGGCTGTATGCTGAAGAGCAGCAGCAAACTCCTTGTTTTGGCCACTGACTGACAAGGAGTTCTGCTGCTCTTCAGGACACAAGGCCTGTTACTAGCACTCACATGGAACAAATGGCCC aagctttaaatagctgaggcc-3’ （SEQ ID NO：9）；
EZH2水平检测引物：
正向引物：5’-CCTTCTCTGACTCTGCCTAATG-3’ （SEQ ID NO：10）；
反向引物：5’- CTGGTCGCTCTGGAAGTTG-3’ （SEQ ID NO：11）；
Scramble RNAi序列如下：
5’-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3’ （SEQ ID NO：12）。
进一步，我们向小鼠背侧海马齿状回注射EZH2 RNAi，并于小鼠接受病毒注射10天后进行抑郁障碍模型的建立，最后于造模完成后进行行为学检测以评价EZH2 RNAi对抑郁障碍的影响。向对照组和抑郁组分别注射Scramble RNAi作为阴性对照，向对照组和抑郁组小鼠海马分别注射EZH2 RNAi作为治疗组。实验结果显示，抑郁组中，相对于阴性对照，特异性降低抑郁组小鼠海马EZH2水平的治疗组可显著性升高糖水偏好百分比（抑郁+阴性对照组：67.64±2.419%，抑郁+治疗组：79.40±2.925，P=0.0234），显著性降低悬尾不动时间（抑郁+阴性对照组：163.8±9.534 s，抑郁+治疗组：97.67±6.955 s，P＜0.0001）和强迫游泳不动时间（抑郁+阴性对照组：113.0±5.610 s，抑郁+治疗组：77.50±4.617 s，P=0.0004），n=7（图11 A-C）。而在对照组中，无论是阴性对照还是治疗组，糖水偏好百分比（对照+阴性对照组：86.98±2.042%，对照+治疗组：84.73±2.736%，P=0.9907）、悬尾的不动时间（对照+阴性对照组：92.33±5.998 s，对照+治疗组：88.67±5.024 s，P=0.9995）和强迫游泳不动时间（对照+阴性对照组：70.83±5.759 s，对照+治疗组：71.67±3.938 s，P>0.9999）都没有显著性的差异，n=7，代表EZH2 RNAi可抑制抑郁障碍的发生发展（图11A-C）。
实施例6 颅内注射Cldn5基因过表达载体可降低脑内炎症水平
由于脑内炎症水平的升高已被报道和抑郁障碍的发病密切相关（参考文献Beurel E, Toups M, Nemeroff CB. The Bidirectional Relationship of Depressionand Inflammation: Double Trouble. Neuron. 2020;107(2)；Zhao X, Cao F, Liu Q,et al. Behavioral, inflammatory and neurochemical disturbances in LPS andUCMS-induced mouse models of depression. Behav Brain Res. 2019;364；Liu CH,Zhang GZ, Li B, et al. Role of inflammation in depression relapse. JNeuroinflammation. 2019;16(1)），因此，我们还检测了颅内注射Cldn5基因过表达载体对脑内炎症因子TNF-α和IL-1β的影响。处理步骤同实施例3。采用生工小鼠TNF-α和IL-1βELISA试剂盒对小鼠海马炎症水平进行检测。向对照组和抑郁组分别注射空白载体作为空白组，向对照组和抑郁组小鼠海马分别注射Cldn5基因过表达载体的为治疗组。结果显示，抑郁组中，相对于空白组，通过向小鼠海马注射过表达载体升高Cldn5基因含量的治疗组可显著性降低抑郁障碍小鼠海马TNF-α（抑郁+空白载体组：12.90±1.192 pg/100 mg组织，抑郁+过表达载体组：7.860±0.7047 pg/100 mg组织，P=0.0033）和IL-1β（抑郁+空白载体组：89.00±7.450 pg/100 mg，抑郁+过表达载体组：63.80±3.597 pg/100 mg组织，P=0.0239）的水平，n=7，即Cldn5基因可有效缓解脑内炎症水平（图12A和B）。而在对照组中，无论是空白组还是治疗组，TNF-α（对照+空白载体组：5.180±0.7067 pg/100mg组织，对照+过表达载体组：5.176±0.5669 pg/100 mg组织，P>0.9999）和IL-1β（对照+空白载体组：59.00±5.263 pg/100mg组织，对照+过表达载体组：49.60±4.082 pg/100 mg组织，P=0.7894）的水平没有显著差异，n=7（图12A和B）。
实施例7 颅内注射EZH2 RNAi可降低脑内炎症水平
为了进一步探索Cldn5基因H3K27me3修饰对脑内炎症水平的影响，我们同样采用ELISA法对接受EZH2 RNAi和Scramble RNAi处理的抑郁障碍小鼠进行脑内炎症水平的监测。向对照组和抑郁组分别注射Scramble RNAi作为阴性对照，向对照组和抑郁组小鼠海马分别注射EZH2 RNAi作为治疗组。实验结果显示，抑郁组中，与阴性对照相比，通过向小鼠海马注射EZH2 RNAi降低海马EZH2的表达的治疗组可显著性抑制炎症因子TNF-α（抑郁+阴性对照组：11.47±1.540 pg/100mg组织，抑郁+治疗组：5.302±0.8731 pg/100 mg组织，P=0.0062）和IL-1β（抑郁+阴性对照组：95.00±6.025 pg/100mg组织，抑郁+治疗组：66.20±6.644 pg/100 mg组织，P=0.0467）的产生，n=7（图13A和B），即颅内注射EZH2 RNAi可有效调控脑内的炎症水平。而对照组中，无论是阴性对照还是治疗组，TNF-α（对照+阴性对照组：5.106±0.7952 pg/100mg组织，对照+治疗组：4.194±0.9915 pg/100 mg组织，P=0.9930）和IL-1β（对照+阴性对照组：48.60±5.325 pg/100mg组织，对照+治疗组：51.40±8.471pg/100 mg组织，P=0.9999）的水平没有显著差异，n=7（图13 A和B）。
实施例8抗抑郁药氟西汀可提高Cldn5基因表达
为了研究Cldn5基因在筛选临床治疗抑郁障碍的候选药物中的作用，我们选用临床上治疗抑郁障碍患者的经典药物氟西汀处理抑郁障碍模型小鼠。具体给药方式为：在进行抑郁造模的同时，每天给予小鼠灌胃注射氟西汀一次，每次剂量为5 mg/kg。处理6周后分离小鼠海马组织，采用ELISA检测血清Cldn5蛋白水平，采用实时荧光定量PCR和Westernblot实验检测海马Cldn5基因和其表达产物水平。实验结果显示，给予氟西汀可以逆转CUMS所导致的血清Cldn5蛋白降低（对照组：24.52±2.892 pg/ml，抑郁组：14.55±1.375 pg/ml，抑郁+氟西汀组：23.11±2.257 pg/ml；对照组VS抑郁组：P=0.0112，对照组VS抑郁+氟西汀组：P=0.0263），n=6（图14）。另外，补充氟西汀也可恢复由于抑郁障碍导致的海马Cldn5基因水平（对照组：0.9549±0.02983，抑郁组：0.6698±0.01842，抑郁+氟西汀组：0.9677±0.07431；对照组VS抑郁组：P=0.0055，对照组VS抑郁+氟西汀组：P=0.0042）和Claudin-5蛋白表达水平（对照组：1.014±0.02911，抑郁组：0.5912±0.04900，抑郁+氟西汀组：0.9559±0.06061；对照组VS抑郁组：P=0.0004，对照组VS抑郁+氟西汀组：P=0.0012）的降低，n=6（图15 A-C）。
实施例9 抗抑郁药氟西汀可抑制Cldn5基因H3K27me3修饰
为了研究Cldn5基因H3K27me3修饰在筛选临床治疗抑郁障碍的候选药物中的作用，我们同样采用实施例8中的给药方式给予抑郁障碍小鼠氟西汀治疗。处理6周后分离小鼠海马组织，采用ChIP实验检测Cldn5基因H3K27me3修饰丰度。实验结果显示，补充氟西汀可显著性下降抑郁障碍所导致的Cldn5基因启动子距离TSS+2200bp处（对照组：1.001±0.01941，抑郁组：1.579±0.04632，抑郁+氟西汀组：1.064±0.03367；对照组VS抑郁组：P<0.0001，对照组VS抑郁+氟西汀组：P=0.001）和+1000bp处（对照组：0.9612±0.03550，抑郁组：1.407±0.05791，抑郁+氟西汀组：0.9510±0.08005；对照组VS抑郁组：P=0.0048，对照组VS抑郁+氟西汀组：P=0.0043）的H3K27me3修饰程度的升高，n=6（图16 A和B）。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (3)

1.一种调节试剂在制备治疗抑郁障碍的产品或者制备治疗脑部炎症相关疾病的产品中的应用；
所述的调节试剂降低Cldn5基因H3K27me3修饰的修饰酶EZH2的表达水平；
所述的调节试剂包括H3K27me3修饰酶EZH2的干扰RNA或包含所述干扰RNA的载体，所述的EZH2的干扰RNA的靶点序列如SEQ ID NO：8所示，和所述的EZH2的干扰RNA的序列如SEQID NO：9所示；
所述的治疗脑部炎症相关疾病是指抑制脑内炎症因子TNF-α和IL-1β的产生。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述包含所述干扰RNA的载体为腺相关病毒。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品通过治疗脑部炎症相关疾病而治疗抑郁障碍。
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