KR101201638B1

KR101201638B1 - 서방성 제형

Info

Publication number: KR101201638B1
Application number: KR1020067021346A
Authority: KR
Inventors: 메릴 에스 골든버그; 지안 화 구
Original assignee: 암젠 인코포레이티드
Priority date: 2004-04-23
Filing date: 2005-04-25
Publication date: 2012-11-15
Also published as: PT1750683E; JP5829870B2; EP1750683B1; US7732399B2; US7323169B2; US20070292506A1; CN1997356A; HK1200092A1; PL1750683T3; US20050271722A1; CA2563185C; KR20070026457A; JP2012046520A; JP2007534698A; ZA200609401B; CN103920162A; WO2005105057A1; CN103920162B; DK1750683T3; SI1750683T1

Abstract

본 발명은 광범위하게 서방성 제형 분야에 관한 것이다. 좀더 특별하게, 본 발명은 정제된 갈릭산 에스테르와 함께 단백질 및/또는 펩티드를 제형화시킨 조성물 및 방법을 기술하고 있다. 하나의 실시예에서, 갈릭산 에스테르는 펜타갈로일글루코스 (PGG) 이고, 또다른 실시예에서는, 갈릭산 에스테르가 에피갈로카테킨 갈산염 (EGCG) 이다.

서방성 복합체, 갈릭산 에스테르, 펜타갈로일글루코스 (PentaGalloylGlucose, PGG), 에피갈로카테킨 갈산염 (epigallocatechin gallate, EGCG)

Description

서방성 제형{SUSTAINED RELEASE FORMULATIONS}

본 출원은 2004 년 4 월 23 일자로 제출된 미국 가출원 일련 번호 제 60/565,247 호를 우선권으로 주장하고 있다.

본 발명은 광범위하게 서방성 제형 분야에 관한 것이다. 좀더 특별하게, 본 발명은 정제된 갈릭산 에스테르(gallic acid esters)와 함께 단백질 및/또는 펩티드를 제형화시킨 조성물 및 방법을 기술하고 있다. 하나의 실시예에서, 갈릭산 에스테르는 펜타갈로일글루코스(PentaGalloylGlucose, PGG)이고, 이 경우에, 갈릭산은 또한 3,4,5-트리히드록시벤조산으로 공지되어 있으며, 다른 실시예에서는, 갈릭산 에스테르가 에피갈로카테킨 갈산염(epigallocatechin gallate, EGCG)이다.

생체내에서 단백질 또는 펩티드의 연속적인 수송을 위해서는 반복적으로 투여할 필요가 없는 서방성 제형이 바람직하다. 약물의 서방성에 관한 하나의 연구법으로 마이크로캡슐화(microencapsulation)가 있으며, 여기에서 마이크로입자를 생산하기 위해 유효성분은 중합체 멤브레인 내에 둘러싸여 있다.

서방성을 제공하기 위해, 중합체와 같은 생체적합하고 생분해가능한 벽막(wall) 형성 물질 안에서 생물학적 활성제 또는 약리학적 활성제를 캡슐화할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 이러한 방법에서 약제 또는 약물은 교반기, 애지테이터(agitator), 또는 그밖의 다른 동적 혼합 기술을 사용하여 상기 벽막 형성 물질을 함유한 하나 또는 그 이상의 용매 내에서 일반적으로 용해되거나, 분산되거나, 또는 유화된다. 그리고나서 용매를 제거하여 약제 또는 약물을 캡슐화하는 마이크로입자를 형성하게 된다. 그리고나서 이러한 마이크로입자들을 환자에게 투여할 수 있다.

비경구 약물 전달 시스템에 적합한 담체로서 생체적합하고/하거나 생분해가능한 중합체의 중요성은 현재 잘 확립되어 있다. 투여하려는 활성제를 함유하는 폴리(락티드)(PLA)나 폴리(락티드-코-글리콜리드)(PLGA) 미소립자 또는 필름과 같은 생체적합하고, 생분해가능하며 상대적으로 불활성인 물질은 일반적으로 서방성 장치로 사용된다(리뷰로서 M. Chasin, Biodegradable polymers for controlled drug delivery. In: J.O. Hollinger Editor, Biomedical Applications of Synthetic Biodegradable Polymers CRC, Boca Raton, FL(1995), pp. 1-15 ; T. Hayashi, Biodegradable polymers for biomedical uses. Prog. Polym. Sci. 19 4(1994), pp. 663-700 ; and Harjit Tamber, Pal Johansen, Hans P. Merkle and Bruno Gander, Formulation aspects of biodegradable polymeric microspheres for antigen delivery Advanced Drug Delivery Reviews, Volume 57, Issue 3, 10 January 2005, Pages 357-376 참조하라.).

그러나, 활성제에 적합한 전달 시스템을 설계하려는 많은 시도가 여전히 존재한다. 이러한 전달 시스템에 적합한 기본 요건은 사용하는 물질이 비경구 투여에 이용가능하다는 것이다. 상기 언급한 바와 같이, 사용하는 물질은 반복 투여하고자 하는 제형의 경우에 생분해가능한 것이 바람직하다. 일반적으로 또다른 바람직한 특성은 생체적합성(biocompatability)으로 : 물질은 생체내 주위환경에 잘 적응해야 하며(tolerated), 생분해성(biodegradation)은 신체로부터 제거되거나 또는 중간대사에 혼입되는 무해 화합물을 생산해야 한다. 비경구용 제제를 제조하는데 일반적으로 사용되는 물질의 목록은 제한되어 있으며 비경구 단백질 제형의 경우에도 여전히 제한되어 있다.

또다른 바람직한 속성은 캡슐화된 활성제의 방출을 충분히 조절하는 것이다. 바람직한 효과를 수득하고, 부작용 또는 부적당한 결과를 야기할 수 있는 과도한 농도를 피하는데 충분한 기간 동안 유효 영역(effective window) 내에서 활성제의 농도를 유지하는 것이 일반적으로 중요하다. 투여한 후 1 일 이내에 방출된 활성제의 분획이 종종 약물의 부하 농도에 의존하기 때문에, 모놀리식(monolithic) 마이크로입자로 바람직한 방출 동력학을 수득하는 것은 어렵다.

그러나 또다른 서방성 기술의 바람직한 특성은, 특히 고분자의 수송에 사용할 때, 제조과정 동안에 활성제의 보존성(integrity)을 유지하는 것이다. 대부분의 단백질 및 펩티드 약물들이 이들의 생활성도에 대하여 3 차원 형태에 의존하며 이러한 형태가 쉽게 손상될 수 있기 때문에 시도하는데 종종 어려움을 겪는다. 예를 들어, 서방성의 비경구 제제를 제조하는데 사용되는 대부분의 중합체는 물에서 불용성이므로 캡슐화 단계에서 단백질 또는 펩티드를 유기용매에 노출시킨다. 어떤 특정 활성제의 보존성을 손상시킬 수 있는 서방성 제제를 제조하는 것과 관련 있는 그밖의 다른 바람직하지 않은 변형력(stress)의 예로는 연속적 상에서 중합체 용액의 작은 물방울(소적)을 형성하는데 사용되는 높은 전단력, 중합반응에 노출, 고온 및 바람직하지 않은 낮거나 높은 pH 값이 있다.

서방성 양상의 또다른 바람직한 특성은, 활성제, 특히 단백질이나 펩티드의 보전성이 방출하는 동안에 마이크로 입자 내에서 유지되는 것이다. 선택한 방출 기간에 따라, 이러한 기간은 몇일에서 몇달까지 될 수 있다. PLGA 로 형성된 통상적인 중합체 매트릭스 시스템 경우에, 중합체의 생분해 기간 동안에 형성된 산성의 미세환경이 생체내 및 생체내 항온 기간 동안에 중합체 매트릭스 시스템 내로 혼입된 활성제를 분해시킬 것이다.

선행기술(예를 들어, 미국 특허 번호 제 5,916,597 호 ; 제 5,019,400 호 ; 제 5,922,253 호 ; 및 제 6,531,154 호)은 다양한 서방성 조성물 및 이러한 조성물의 제조방법을 기술하고 있다. 대다수의 경우에서, 생체적합하고 생분해가능한 중합체로부터 혼입된 활성제의 생체내 방출은 초기에 높거나 또는 낮으므로, 수송 장치의 수명 기간 동안 내내 일정하지 않다. 또한, 중합체를 이용한 마이크로캡슐화는 2 주에서 9 개월 또는 그 이상의 기간 동안 펩티드의 장기간의 서방성을 제공하기 쉬운 반면에, 특정 약제의 경우에 있어서는 단기간의 수송 프로필이 요구되기도 한다. 따라서, 본 분야에서 약 1 주 또는 2 주 미만의 방출 프로필을 갖는 서방성 조성물이 요구된다.

발명의 요약

본 발명은 단백질 및/또는 펩티드와 갈릭산 에스테르로 구성된 안정한 서방성 복합체를 포함하는 약학적 조성물을 제공하며, 상기 갈릭산 에스테르는 상기 서방성 복합체 투여시 생체내에서 단백질이나 펩티드의 서방성을 가능케 한다. 따라서, 본 발명의 복합체는 약 1 주 또는 2 주 미만의 기간 동안에 피실험자에게 약리학적 활성 펩티드의 연속적 수송을 가능케 할 수 있다.

본 발명의 복합체는 복합체가 형성되는 조건 하에서 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르를 화합(결합)시킴으로써 형성된다. 바람직한 실시형태에서, 복합체는 갈릭산 에스테르와 단백질이나 펩티드의 염 형태이다. 복합체는 일반적으로 물에서 불용성이며 다양한 수용액으로부터 정제할 수 있다. 복합체가 고형(예를 들어, 페이스트, 과립, 분말 또는 동결건조분말)의 형태이기 때문에, 본 발명의 복합체는 안정한 액체 현탁액이나 또는 반-고체 분산액 형태로 피실험자에게 투여하도록 제조될 수 있다.

본 발명의 하나의 실시형태에서, 펩티드 또는 단백질과 함께 복합체 형성에 사용하기 적합한 기는 갈릭산 에스테르이다. 바람직하게, 에스테르 자체는 당과 같은 다른 화합물 상의 알콜 성분에 갈릭산의 산성기가 결합함으로써 형성된다. 특정 실시형태에서, 갈릭산 에스테르는 펜타갈로일글루코스(PGG)이고, 이 경우에 갈릭산은 또한 3,4,5-트리히드록시벤조산으로 공지되어 있다. 다른 실시형태에서, 갈릭산 에스테르는 에피갈로카테킨 갈산염(EGCG)이다.

본 발명은 단백질이나 펩티드 및 갈릭산 에스테르로 구성된 서방성 복합체를 포함하는 조성물, 이러한 조성물을 제조하는 방법 및 상기 조성물을 이용하는 방법에 관한 것이다. 갈릭산 에스테르는 공지된 탄닌산의 성분이지만, 본원에 기재되어 있는 바와 같은 서방성 제형을 제조하기 위해 펩티드 및 폴리펩티드와 함께 염을 생성하는 특정의 갈릭산 에스테르와 같은 고도로 정제된 탄닌산의 성분의 용도는 언급된 바가 없었다. 본 발명의 조성물의 이점은 복합체의 펩티드 또는 단백질 부분이 조절되는 기간(예를 들어, 일반적으로 약 1 주 또는 2 주 미만) 동안 전신적으로 또는 국소적으로 수송되는 것을 포함한다. 또한, 보다 오랜 기간 동안 수송되는 것이 고려된다.

본원에 사용한 바와 같이, 용어 "단백질" 및 "펩티드" 는 아미드 결합에 의해 결합된 아미노산의 중합체를 포함한다고 이해된다. 일반적으로, 펩티드는 약 50 개 미만의 아미노산, 더 일반적으로 약 30 개 미만의 아미노산 잔기, 좀 더 일반적으로 약 20 개 미만의 아미노산 잔기로 구성되어 있다. 반면에, 단백질은 일반적으로 50 개보다 많은 아미노산으로 구성되어 있으며, 구조 및 생물학적 활성을 갖는다. 단백질의 생물학적 활성은 효소적이거나 또는 입체구조 변화를 부여하는 생물학적 활성일 수 있다. 상기 용어들은 또한 단백질 또는 펩티드 성분의 화학적 구조와 유사한 유사체 및 유도체를 포함한다. 유사체의 예는 하나 또는 그 이상의 비-천연 아미노산을 포함하는 펩티드 또는 단백질을 포함한다. 유도체의 예는 아미노산 곁사슬(들), 펩티드 골격구조 및/또는 유도된 아미노- 또는 카르복시-말단을 포함하는 펩티드 또는 단백질을 포함한다.

본 발명의 제형에 적합한 펩티드는 다음을 포함하나 이에 한정되지 않는다 : 엔푸버타이드(Fuzeon^® 로서 Trimeris and roche 에서 입수 가능), 안지오텐신, 아밀린, ACTH, 레닌 기질, 세크로핀 A-멜리틴 아미드, 세크로핀 B, 마가이닌 1, 레닌 저해 펩티드, 봄베신, 오스테오칼신, 브라디키닌, B1 저해 펩티드, 2004 년 10 월 21 일자로 출원된 미국 특허 출원 번호 제 10/972,236 호에 기재되어 있는 브라디키닌 펩티드 길항물질을 포함하는 브라디키닌 펩티드 길항물질, 칼리딘, 칼시토닌, 콜레시스토키닌, 부신피질 자극 호르몬 방출 인자, 다이놀핀 A, 엔도몰핀, 사라포톡신(Sarafotoxin), 엔케팔린, 엑센딘, 섬유소펩티드, 갈라닌, 가스트린, 가스트린 방출 펩티드, 글루카곤-유사 펩티드, 성장 호르몬 방출 인자, OVA 펩티드, 황체형성 호르몬 방출 호르몬, 심방 나트륨 배설 촉진 펩티드, 멜라닌 농축 호르몬, 뇌 나트륨 배설 촉진 펩티드, 바소나트린(Vasonatrin), 뉴로키닌, 뉴로메딘, 뉴로펩티드 Y, 뉴로텐신, 오렉신, 옥시토신, 바소프레신, 부갑상선 호르몬 펩티드, 프로락틴 방출 펩티드, 소마토스타틴, 소마토스타틴 종양 억제 유사체, 갑상선 자극 호르몬 방출 호르몬, 및 상기한 물질들의 변이체 및 유도체[또한, Latham (1999) Nat. Biotech., 17 : 755 를 참조하라].

본 발명에 따라 제형화할 수 있는 단백질은 다음을 포함하나 이에 한정되지 않는다 : Flt3 리간드, CD40 리간드, 에리트로포이에틴, 트롬보포이에틴, 칼시토닌, 파스 리간드(Fas ligand), NF-카파 B 의 수용체 활성인자에 대한 리간드(RANKL), TNF-관련 아포토시스 유도 리간드(TRAIL), ORK/Tek, 흉선 스트로마-유도 림포포이에틴(thymic stroma-derived lymphopoietin), 과립구 군체 자극 인자, 과립구-대식세포 군체 자극 인자, 비만세포 성장 인자, 줄기세포 성장 인자, 상피세포 성장 인자, RANTES, 성장 호르몬, 인슐린, 인슐리노트로핀(insulinotropin), 인슐린-유사 성장 인자, 부갑상선 호르몬, 신경 성장 인자, 글루카곤, 인터루킨 1 내지 18, 군체 자극 인자, 림포톡신-β, 종양 괴사 인자, 백혈병 억제 인자, 온코스타틴-M, 및 세포 표면 분자 Elk 및 Hek 에 대한 다양한 리간드(예를 들어, eph-관련 키나제에 대한 리간드 또는 LERKS). 이러한 단백질을 제조하는 방법은 예를 들어, Human Cytokines : Handbook for Basic and Clinical Research, Vol. Ⅱ (Aggarwal and Gutterman, Eds. Blackwell Sciences, Cambridge MA, 1998) ; Growth Factors : A Practical Approach (McKay and Leigh, Eds. Oxford University Press Inc., New York, 1993) 및 The Cytokine Handbook (AW Thompson, ed. ; Academic Press, San Diego CA ; 1991)에 기재되어 있다.

앞서 언급한 모든 단백질에 대한 수용체가 피실험자에게 투여하기에 적합한 분자의 수용성 부분이라는 조건 하에, 상기 수용체는 본 발명에 따라 제형화할 수 있다. 상기 수용체의 예는 다음을 포함한다 : 2 가지 형태의 종양 괴사 인자 수용체(p55 및 p75 라 함)에 대한 수용체, 인터루킨-1 수용체(제 1 형 및 제 2 형), 인터루킨-4 수용체, 인터루킨-15 수용체, 인터루킨-17 수용체, 인터루킨-18 수용체, 과립구-대식세포 군체 자극 인자 수용체, 과립구 군체 자극 인자 수용체, 온코스타틴-M 및 인터루킨 저해 인자에 대한 수용체, NF-카파 B 의 수용체 활성인자(RANK), TRAIL 에 대한 수용체, 및 Fas 또는 아포토시스-유도 수용체(AIR)와 같은, 죽음 도메인(death domain)을 포함하는 수용체. 특히 바람직한 수용체는 수용성 형태의 IL-1 수용체 제 Ⅱ 형이며 ; 이러한 단백질은 본원에 인용문헌으로 인용하고 있는 미국 특허 번호 제 5,767,064 호에 기재되어 있다.

본 발명에 따라 제형화할 수 있는 다른 단백질은 분화 항원의 클러스터의 수용성 변이체(CD 단백질이라 함), 예를 들어, Leukocyte Typing Ⅵ(Proceedings of the Ⅵth International Workshop and Conference ; Kishimoto, Kikutani 등의 Eds. Kobe, Japan, 1996)에 기재되어 있는 단백질 또는 이후 워크샵에서 밝혀진 CD 분자를 포함한다. 이러한 분자의 예는 CD27, CD30, CD39, CD40 ; 및 이들의 리간드(CD27 리간드, CD30 리간드 및 CD40 리간드)를 포함한다. 이들 중 몇몇은 41BB 및 OX40 을 포함하는 TNF 수용체 계열의 구성요소이고 ; 상기 리간드는 주로 TNF 계열의 구성요소(41BB 리간드 및 OX40 리간드라 함)이며 ; 따라서, TNF 및 TNFR 계열의 구성요소도 또한 본 발명을 사용하여 제조할 수 있다.

효소학적으로 활성인 단백질 또한 본 발명에 따라 제형화할 수 있다. 상기 단백질의 예는 금속 단백질 가수분해 효소-디스인테그린 과의 구성요소, 다양한 키나제, 글루코세레브로시다제(glucocerebrosidase), 알파-갈락토시다제 A, 슈퍼옥사이드-디스뮤타제, 조직 플라스미노겐 활성인자, 인자 Ⅷ, 인자 Ⅸ, 아포리포단백질 E, 아포리포단백질 A-I, 글로빈, IL-2 길항물질, 알파-1 항트립신, TNF-알파 전환 효소, 및 다수의 다른 효소를 포함한다. 효소학적으로 활성인 단백질에 대한 리간드 또한 본 발명에 사용하여 제형화할 수 있다.

본 발명의 조성물 및 방법은 면역글로불린 분자 또는 이의 일부, 및 키메라 항체(즉, 마우스 항원 결합 영역에 결합되는 인체 불변 영역을 갖는 항체) 또는 이의 단편을 포함하는 다른 유형의 단백질로 이루어진 제형에도 유용하다. 단쇄 항체, 증가된 친화도를 갖는 항체 또는 다른 항체-기저 단백질과 같은 재조합 단백질을 코드할 수 있는 DNAs 를 수득하기 위해 면역글로불린 분자를 코드하는 DNA 를 조작할 수 있는 수많은 기술들은 공지되어 있다(예를 들어, Larrick 등의 1989, Biotechnology 7 : 934-938 ; Reichmann 등의 1988, Nature 332 : 323-327 ; Roberts 등의 1987, Nature 328 : 731-734 ; Verhoeyen 등의 1988, Science 239 : 1534-1536 ; Chaudhary 등의 1989, Nature 339 : 394-397 을 참조하라). 용어 인간화 항체는 또한 단쇄 항체를 포함한다. 예를 들어, Cabilly 등의 미국 특허 번호 제 4,816,567 호 ; Cabilly 등의 유럽 특허 번호 제 0,125,023 B1 호 ; Boss 등의 미국 특허 번호 제 4,816,397 호 ; Boss 등의 유럽 특허 번호 제 0,120,694 B1 호 ; Neuberger, M. S. 등의 제 WO 86/01533 호 ; Neuberger, M. S. 등의 유럽 특허 번호 제 0,194,276 B1 호 ; Winter 미국 특허 번호 제 5,225,539 호 ; Winter 유럽 특허 번호 제 0,239,400 B1 호 ; Queen 등의 유럽 특허 번호 제 0 451 216 B1 호 ; 및 Padlan, E. A. 등의 제 EP 0 519 596 A1 호를 참조하라. 예를 들어, 본 발명은 특이적인 세포 표적, 예를 들어, 앞서 언급한 모든 단백질, 인체 EGF 수용체, her-2/neu 항원, CEA 항원, 전립선 특이 막 항원(PSMA), CD5, CD11a, CD18, NGF, CD20, CD45, Ep-cam, 다른 암 세포 표면 분자, TNF-알파, TGF-베타1, VEGF, 다른 사이토카인, 알파 4 베타 7 인테그린, IgEs, 바이러스 단백질(예를 들어, 사이토메갈로바이러스) 등을 면역학적으로 특이적으로 인지하는 인간 및/또는 인간화 항체를 제형화하는데 사용할 수 있다.

다양한 융합 단백질 또한 본 발명에 따라 제형화할 수 있다. 융합 단백질은 단백질 또는 도메인, 또는 이종의 단백질 또는 펩티드에 융합된 단백질(예를 들어, 수용성 세포내 도메인)이다. 이러한 융합 단백질의 예는 면역글로불린 분자의 일부를 갖는 융합체로서 발현되는 단백질, 지퍼 성분을 갖는 융합 단백질로서 발현되는 단백질, 및 사이토카인 및 성장 인자로 이루어진 융합 단백질과 같은 신규한 다작용성 단백질(즉, GM-CSF 및 IL-3, MGF 및 IL-3)을 포함한다. 제 WO 93/08207 호 및 제 WO 96/40918 호에는 각각 면역글로불린 융합 단백질 및 지퍼 융합 단백질을 포함하는 CD40L 이라 불리는 다양한 수용성 올리고머 형태의 분자가 기재되어 있으며 ; 상기 문헌에 논의되어 있는 기술은 다른 단백질에도 적용시킬 수 있다. 다른 융합 단백질은 "에타너셉트(etanercept)" 로 공지된 재조합 TNFR : Fc 이다. 에타너셉트는 p75 TNF 알파 수용체의 세포외 부분의 2 분자로 이루어진 이량체이고, 각각의 분자는 인체 IgG1 의 232 개의 아미노산으로 이루어진 Fc 부분에 융합되는 235 개의 아미노산으로 이루어진 TNFR-유도 단백질로 이루어져 있다. 사실상, 앞서 언급한 모든 분자는 세포 수용체 분자의 세포외 도메인, 효소, 호르몬, 사이토카인, 면역글로불린 분자의 일부분, 지퍼 도메인 및 에피토프를 포함하나 이에 한정되지 않는 것들을 포함하는 융합 단백질로서 발현될 수 있다.

본원에 사용한 바와 같이, 용어 "갈릭산 에스테르" 는 서방성 복합체를 형성하기 위해 단백질 또는 펩티드와 복합시킬 수 있는 분자를 의미한다. 하나의 실시형태에서, 갈릭산 에스테르 분자는 펜타갈로일글루코스(PGG, 또한 본 분야에서는 5GG 라고도 함)이다. PGG 분자는 1 개의 갈로일기, 2 개의 갈로일기, 3 개의 갈로일기 또는 4 개의 갈로일기를 가질 수 있다. 또한, 글루코스는 알콜 또는 폴리올과 같은 다른 탄소 골격구조물, 예를 들어, 글리세롤, 에틸렌 글리콜 또는 사용하기에 적합한 모든 당기로 치환될 수 있다. 다른 실시예에서, 에피갈로카테킨 갈산염(EGCG)은 펩티드 또는 단백질과 함께 염을 생성하기 위한 본 발명에서 유용한 갈릭산 에스테르 분자이다. EGCG 는 녹차로부터 분리된 항-산화성 폴리페놀 플라보노이드이다. EGCG 에스테르는 PGG 와는 달리 당이 아닌 고리 구조물에 결합된다. 또한, 갈릭산 에스테르는 상이한 입체화학적 형태라고 추측할 수 있다. 예를 들어, PGG 는 알파 형태이거나 베타 형태이다. 본 분야의 숙련자들은 본원에 기재되어 있는 바에 따라 본 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 적합한 갈릭산 에스테르 분자를 확인할 수 있다.

본원에 사용한 바와 같이, 용어 "서방성 복합체" 는 본원에 기재되어 있는 단백질이나 펩티드 및 갈릭산 에스테르를 적당히 혼합시켜 형성된 물리적이고 화학적으로 안정한 복합체를 의미한다. 이러한 복합체는 일반적으로 수성 또는 비-수성 제제인 단백질이나 펩티드 및 갈릭산 에스테르를 혼합시켜 생성한 침전물 형태이다.

본원에 사용한 바와 같이, 용어 "서방성" 은 투여 후 일정 기간 동안 생체내에서 약학적 제제가 지속적으로 수송되는 것을 의미한다. 제제의 서방성은 예를 들어, 시간 동안 지속된 제제의 치료학적 효과로 나타낼 수 있다. 선택적으로, 제제의 서방성은 시간 동안 생체내 제제의 존재를 검출함으로써 나타낼 수 있다. 하나의 실시형태에서, 서방성은 1 주 이내이며 4 일 이내일 수 있다. 그러나, 서방성은 본 발명의 조성물을 사용하여 1 주 보다 긴 시간 동안, 2 주 보다 긴 시간을 포함하는 시간 동안 이루어진다고 고려된다.

상이한 pH 에서의 펩티드 또는 단백질을 수반하는 PGG 또는 EGCG 복합체의 형성은 약물 수송 기간에 영향을 미칠 수 있다. 하기의 실시예 4 및 5 에 나타낸 바와 같이, pH 7.0 에서의 펩티드를 수반하는 PGG 복합체 형성은 pH 7.6 및 pH 8.6 에서 형성된 복합체의 혈청내 지속기간, 즉 1 주 미만보다 복합체의 혈청내 지속기간을 약 1 주로 연장시킨다. 따라서, 본 발명의 실시형태에서, 약물 수송의 지속기간은 복합체가 형성되는 pH 에 의해 조절된다. 대표적인 pH 범위는 6.0 내지 9.0 및 pH 6.5 내지 8.6 의 범위이고, pH 7.0 내지 8.6 도 적합하다. 본 분야의 숙련자들은 다른 pH 도 적합하며, 이는 본 발명의 기술 범주 내에 주어져 있고, 본 발명의 탄닌산 에스테르와 함께 복합된 특정 약물의 바람직한 약물 수송 프로필에 적합한 최적의 pH 를 결정하는 것은 일상적인 실험이라는 것을 쉽게 이해할 수 있다.

본 발명의 하나의 양상은 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르와 같은 약학적으로 유효한 제제의 서방성 복합체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 약학적 조성물은 피실험자에게 조성물을 투여한 후에 생체내에서 피실험자에 대한 단백질 또는 펩티드의 서방성을 가능하게 하며, 여기에서 서방성의 지속시간은 펩티드 및 갈릭산 에스테르 복합체의 용해도에 따라 다양할 수 있다. 예를 들어, 하나의 실시형태에서, 서방성 복합체는 피실험자에게 본 발명의 약학적 조성물을 투여한 후에 1 주일 미만 동안에 피실험자에게 약학적으로 유효한 제제의 서방성을 제공한다. 또 다른 실시형태에서, 서방성 복합제는 4 일 미만 동안 피실험자에게 단백질 또는 펩티드의 서방성을 제공한다. 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 5 일, 6 일 또는 1 주일 등의 기간 동안에 지속적인 수송을 제공하는 제형과 같은, 보다 길거나 또는 보다 짧은 지속시간 동안 서방성을 제공하는 제형은 본 발명에 의해 또한 포함될 수 있다. 마찬가지로, 1 주일 이상, 2 주일까지 또는 그 이상 동안에 지속적인 약물 수송을 제공하도록 이러한 조성물을 제형화시킬 수 있음을 예상할 수 있다.

두 가지의 물질을 복합하는 경우에, 단백질 또는 펩티드가 갈릭산 에스테르와 함께 서방성 비공유결합 복합체를 형성하는 능력을 가지고 있는 한 모든 크기의 아미노산 사슬은 복합체에서 사용하기에 적합할 수 있다.

서방성 복합체에 더하여, 본 발명의 약학적 제형은 부가적인 약학적으로 용인가능한 담체 및/또는 부형제를 포함할 수 있다. 본원에서 사용한 바와 같은, "약학적으로 용인가능한 담체" 는 생리학적으로 양립할 수 있는 모든 용매, 분산매, 코팅제, 항균제, 항진균제, 등장성 및 흡수 지연 제제(isotonic and absorption delaying agents) 등을 포함한다. 바람직하게, 담체는 정맥내, 근육내, 피하 또는 비경구 투여(예를 들어, 주사에 의한)에 적합하다. 부형제는 약학적으로 용인가능한 안정제 및 붕괴제를 포함한다.

갈릭산 에스테르와 복합체화된 펩티드의 약학적 제형에 더하여, 본 발명은 이러한 복합체를 함유하는 포장된 제형 및 이러한 복합체를 함유하는 주사기를 추가로 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 본 발명은 루멘을 갖는 주사기를 제공하며, 여기에서 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르의 서방성 복합체는 루멘에 포함된다.

본 발명의 복합체는 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르의 서방성 복합체가 형성되는 조건 하에서 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르를 결합시켜 제조하였다. 따라서, 본 발명의 또 다른 양상은 약학적 제형을 제조하는 방법에 관한 것이다. 하나의 실시형태에서, 방법은 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르를 제공하고, 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르의 복합체가 형성되는 조건 하에서 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르를 배합시키며 복합체를 포함하는 약학적 제형을 제조하는 방법을 포함한다.

예를 들어, 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르의 서방성 복합체가 용액에서 침전될 때까지 단백질 또는 펩티드의 용액 및 갈릭산 에스테르의 용액을 배합시켰다. 특정 실시형태에서, 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르의 용액은 수용액이다. 서방성 복합체를 수득하기 위해 필요한 단백질이나 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르의 양은 복합체를 수득하기 위해 사용된 특정 단백질 또는 펩티드와 갈릭산 에스테르, 사용된 특정 용매 및/또는 사용된 방법에 따라 좌우된다. 흔히, 단백질 또는 펩티드는 또한 실시예에서 설명된 바와 같이 중량/중량 기준을 초과할 수 있다.

단백질이나 또는 펩티드/갈릭산 에스테르 복합체가 용액에서 침전되면, 여과 및 원심분리법 등과 같은 본 분야에서 공지된 방법에 의해 용액으로부터 침전물을 제거할 수 있다. 그리고 난 다음에 회수한 물질을 건조시킬 수 있고, 고형물을 본 분야에서 공지된 방법에 의해 분말로 분쇄시킬 수 있거나 또는 가루로 만들 수 있다. 선택적으로, 페이스트제(paste)를 건조시키기 위해 냉동 및 동결건조시킬 수 있다. 복합체의 분말 형태는 주사하기에 적합한 액체 현탁액 또는 반고형 분산액(semi-solid dispersion)을 형성하기 위해 담체 용액에 분산시킬 수 있다. 따라서, 다양한 실시형태에서, 본 발명의 약학적 제형은 동결건조시킨 고형분, 액상의 현탁제 또는 반고형 분산제이다.

또 다른 실시형태에서, 본 발명의 약학적 제형은 멸균 제형이다. 예를 들어, 서방성 복합체를 형성한 다음에, 복합체를 감마선 조사 또는 전자선 멸균법으로 멸균시킬 수 있다. 본 발명의 방법에 따라 제조된 분말, 액상의 현탁제, 반고형 분산제, 동결건조시킨 고형분 및 이의 멸균시킨 형태(예를 들어, 감마선 조사 또는 멸균 여과에 의해)를 포함하는 약학적 제형은 또한 본 발명에 의해 포함된다.

본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "피실험자" 는 온혈동물, 바람직하게 포유동물, 가장 바람직하게 인체를 포함함을 의미한다.

본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "피실험자에게 투여함" 은 비경구 경로 또는 경구 경로에 의한 수송, 근육내 주사, 피하/피내 주사, 정맥내 주사, 구강 투여, 경피 수송 및 직장, 결장, 질, 비강내 또는 기도 경로에 의한 투여를 포함하는, 피실험자의 원하는 부위에 조성물을 수송하기 위한 모든 적합한 경로로 피실험자에게 조성물(예를 들어, 약학적 제형)을 투여, 수송 또는 적용하는 것을 언급한 것임을 의미한다.

다음의 실시예는 단지 대표적인 실시형태이며, 이로 인하여 본 발명의 전체 범위를 제한하려는 의도는 아니다.

실시예 1

실시예 1 은 펩티드 B-PGG 염[펩티드 B(DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg) 대 PGG 의 1 : 1 몰 비율]의 제조방법을 제공한다(여기에서, DOrn 은 오르니틴의 D 이성질체이고, Hyp 는 트랜스-4-히드록시-프롤린이고, Dtic 는 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-3-카르복실산의 D 이성질체이며, Cpg 는 시클로펜틸글리신이다). 2 ml 의 NaOH 용액(0.10 내지 0.20 N 의 NaOH 농도)에 94 mg 의 PGG 를 용해시켜 PGG 의 원액을 제조한 다음, 상기 원액을 0.2 um 필터를 통해 여과시켰다. 0.8 mL 의 물에 용해시킨 109.4 mg 의 펩티드 B 아세트산염의 용액을 교반시키면서 PGG 의 원액(1.56 mL)에 첨가하고 순차적으로 형성된 침전물을 첨가하였다. 침전물을 원심분리하여 회수하였다.

상청액을 따르고 침전물을 0.5 mL 의 물로 3 번 세척하였다. 약 30-35 ℃ 에서 약 20 시간 동안 진공에서 침전물을 건조시켜 125 mg (76 %)을 수득하였다. 펩티드 B-PGG 염은 회색이 도는 백색의 분말이다.

실시예 2

실시예 1 에서 펩티드 B-PGG 를 제조한 방법과 유사한 방법으로 펩티 드 A-PGG 의 염 및 탄닌산염을 제조하였다. 펩티드 A 는 아세틸 Lys Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg 이다.

실시예 3

하기에 기재된 표 1 및 표 2 는 물 및 PBS 에 용해시킨 탄닌산염 및 PGG 를 수반하는 펩티드 A(아세틸 Lys Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg) 및 펩티드 B(DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg) 염의 펩티드 함량 및 용해도를 나타낸 것이다. 데이터는 PGG 펩티드 염이 탄닌산염 보다 높은 펩티드 함량을 가짐을 나타내었다. PGG 침전물은 탄닌산염 보다 높은 PBS 용해도를 가진다.

실시예 4

펩티드 B-PGG 염의 수득률, 펩티드 함량 및 용해도에 관한 염 형성 pH (예를 들어, NaOH 의 농도 수준)의 효과를 연구하였다. pH 7.0, 7.2, 7.6 및 8.6 에서의 4 가지의 펩티드 B-PGG 염을 제조하였고 분리하였다. 그리고 난 다음에 물 및 PBS 에서 이들의 용해도 및 또한 이들의 펩티드 함량을 측정하였다. 염 형성 동안에 pH 증가와 함께 수용해성(aqeous solubility), 염 형성의 수득률 및 펩티드 함량이 증가되었음이 이러한 결과로부터 증명되었다(표 3).

실시예 5

본 실시예에는 랫에서의 펩티드 B/PGG 및 펩티드 B/탄닌산염의 서방성을 기재하였다. 랫의 약물동태학(PK) 연구를 TRIS 완충액에 현탁시킨 펩티드 B/PGG 염 및 펩티드 B/탄닌산염 ; 및 대조군으로 펩티드 B 아세트산염의 PBS 용액을 단일 피하 주사(10 mg/kg 투여량)하여 수행하였다. PK 의 결과 pH 7.0 에서 제조한 펩티드 B/탄닌산염 및 펩티드 B-PGG 염에 대해 1 주일의 서방성을 나타내었다. 그러나, pH 7.6 및 8.6 에서 제조한 펩티드 B-PGG 염은 pH 7.0(2 주까지)에서 제조한 염과 비교하여 보다 짧은 방출 지속시간(약 2-3 일)을 나타내었다.

실시예 6

순수한 아노머(anomer)(베타-PGG) 및 펩티드 B(DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg)의 PGG 염의 아노머(α+β-PGG)의 혼합물을 실시예 1 에 기재된 방법과 유사한 방법으로 제조하였다. 이러한 염의 수용해성에서 현저한 차이점은 없었다. 수용해성을 기초로, 생체내에서 이러한 염의 서방성 지속시간도 유사할 것임을 예측하였다.

실시예 7

다음의 실시예에는 서방성에 대한 동물 약물동태학(PK) 연구에서 시험한 펩티드와 함께 염을 제조하기 위한 EGCG 의 사용을 기재하였다. 2 mL 의 0.2 N NaOH 용액에 184 mg 의 EGCG 를 용해시켜 EGCG의 원액(Sigma-Aldrich 에서 입수)을 제조한 다음, 상기 원액을 0.2 um 필터를 통해 여과시켰다. 1.2 mL 의 물에 용해시킨 138 mg 의 펩티드 B(DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg)의 아세트산염의 용액을 EGCG(1.4 mL)의 원액에 교반시키면서 서서히 첨가하였다. 결과적으로 생성된 현탁액을 실온에서 약 10-15 분 동안 교반시켰다. 원심분리시킨 후에, 상청액을 따르고 침전물을 1 mL 의 물로 세척하였다(원심분리 및 상청액의 분리에 의해 3 번). 약 30-35 ℃ 에서 약 20 시간 동안 침전물을 진공 하에서 건조시켜 회색이 도는 백색의 분말인 218 mg(88 %)의 펩티드 B-EGCG 염을 수득하였다.

펩티드 B/EGCG 염의 펩티드 함량은 47-50 % 이다. 펩티드 대 EGCG 의 1 : 3 몰 비율에서 염에 대한 수용해성은 물에서 < 0.5 mg/ml 및 PBS 에서 < 0.05 mg/ml 이며, 펩티드 대 EGCG 의 1 : 2 몰 비율에서 용해도는 물에서 약 1 mg/ml 및 PBS 에서 약 0.3 mg/ml 이다. pH 7.0 의 TRIS 완충액에 현탁시킨 ‘593/EGCG 염을 단일 피하 투여(10 mg/kg 투여량)하여 랫의 PK 연구를 실행하였다. PK 결과 24 시에서 혈중농도 > 26 ng/ml 로 여러 날 동안에 펩티드 B 의 서방성을 나타내었고 그리고 난 다음에 96 시에서 약 5 ng/ml 로 감소됨을 나타내었다.

본 발명을 바람직한 실시형태에 의하여 기재하였지만 이는 본 분야의 숙련자들에 의해 변이 및 변형될 수 있음을 인지할 수 있다. 따라서, 첨부된 청구의 범위는 청구의 범위의 범주 내에서 제조되는 모든 동등한 변이를 포함할 수 있음을 의도한다.

상기에서 인용한 각각의 특허 문헌, 출원서 및 논문(이후부터 "참고문헌" 이라 함), 및 본원에서 인용한 모든 특허 문헌 및/또는 출원서("특허 인용 문헌")의 실행 기간을 포함하여 상기 문헌에서 인용하거나 참조한 각각의 문헌, 및 본원에서 인용하거나 또는 모든 참고문헌과 모든 특허 인용 문헌에서 언급한 모든 생성물에 대한 모든 제조업자의 설명서 또는 목록을 본원에서 참고문헌으로 인용하였다. 게다가, 이러한 본문에서 인용한 모든 문헌, 및 이러한 본문에서 인용한 문헌에서 인용하거나 참조한 모든 문헌, 및 이러한 본문 또는 이러한 본문에서 인용한 모든 문헌에서 인용하거나 언급한 모든 생성물에 대한 모든 제조업자의 설명서 또는 목록을 본원에서 참고문헌으로 인용하였다. 이러한 본문에서 참고문헌으로 인용한 문헌 또는 상기 문헌에서의 모든 내용은 본 발명에서 실행하여 사용할 수 있다. 이러한 본문에서 참고문헌으로 인용한 문헌은 선행기술로 인정하지 않는다.

Claims

삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
20 개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드 및 정제된 갈릭산 에스테르로 구성된 서방성 복합체를 포함하는 약학적 제형이되, 여기에서, 상기 펩티드는 B1 펩티드 길항물질이고, 상기 정제된 갈릭산 에스테르는 펜타갈로일글루코스(PGG) 및 에피갈로카테킨 갈산염(EGCG) 중에서 선택한 것임을 특징으로 하는 약학적 제형.
제 21 항에 있어서, 복합체는 펩티드와 갈릭산 에스테르의 염 형태임을 특징으로 하는 약학적 제형.
제 21 항에 있어서, 약학적으로 허용가능한 담체, 약학적으로 허용 가능한 부형제, 또는 이 둘 모두를 추가로 포함함을 특징으로 하는 약학적 제형.
삭제
제 21 항에 있어서, 정제된 갈릭산 에스테르는 펜타갈로일글루코스(PGG) 임을 특징으로 하는 약학적 제형.
제 25 항에 있어서, 복합체는 펩티드와 PGG 의 염 형태이며, 상기 염은 동물에서 1 주일 미만 또는 1 주일 동안 방출됨을 특징으로 하는 약학적 제형.
제 25 항에 있어서, 복합체는 펩티드와 PGG 의 염 형태이며, 상기 염은 동물에서 4 일 미만 동안 방출됨을 특징으로 하는 약학적 제형.
제 21 항에 있어서, 정제된 갈릭산 에스테르는 에피갈로카테킨 갈산염(EGCG) 임을 특징으로 하는 약학적 제형.
제 21 항에 있어서, 복합체 내의 펩티드는 중량/중량 기준으로 정제된 갈릭산 에스테르의 양보다 과량으로 존재함을 특징으로 하는 약학적 제형.
제 21 항에 있어서, 펩티드 대 정제된 갈릭산 에스테르의 몰비율이 1:1, 1:2 또는 1:3 임을 특징으로 하는 약학적 제형.
제 25 항에 있어서, 복합체는 펩티드와 PGG 의 염 형태이며, 상기 염은 동물에서 최대 2 주일 동안 방출됨을 특징으로 하는 약학적 제형.
삭제
제 21 항에 있어서, 상기 펩티드는 다음 (ⅰ) 및 (ⅱ) 중에서 선택한 것임을 특징으로 하는 약학적 제형

(ⅰ) DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg ;

(ⅱ) 아세틸 Lys Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg,

여기에서, DOrn 은 오르니틴의 D 이성질체이고, Hyp 는 트랜스-4-

히드록시-프롤린이고, Dtic 는 1,2,3,4-테트라히드로이소

퀴놀린-3-카르복시산의 D 이성질체이며, Cpg 는

시클로펜틸글리신이다.
다음의 (a) 및 (b) 단계를 포함하는, 제 21 항의 약학적 제형을 제조하는 방법

(a) 20 개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드와 정제된 갈릭산 에스테르의 복합체를 형성하는 조건 하에서, 상기 20 개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드 용액과 정제된 갈릭산 에스테르 용액

을 혼합하는 단계 ; 및

(b) 상기 복합체를 포함하는 약학적 제형을 제조하는 단계,

여기에서, 상기 펩티드는 B1 펩티드 길항물질이고, 상기 정제된 갈릭산 에스테르는 펜타갈로일글루코스(PGG) 및 에피갈로카테킨

갈산염(EGCG) 중에서 선택한 것이다.
제 34 항에 있어서, 펩티드 용액과 갈릭산 에스테르 용액을 혼합시키고, 혼합된 용액에서 복합체를 침전시킴을 특징으로 하는 방법.
제 34 항에 있어서, 복합체는 pH 6.5 내지 pH 8.6 에서 형성됨을 특징으로 하는 방법.
제 34 항에 있어서, 갈릭산 에스테르는 PGG 임을 특징으로 하는 방법.
제 34 항에 있어서, 갈릭산 에스테르는 EGCG 임을 특징으로 하는 방법.
20 개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드 및 정제된 갈릭산 에스테르로 구성된 정제된 복합체를 포함하는 서방성 조성물이되, 여기에서 상기 펩티드는 B1 펩티드 길항물질이고, 상기 갈릭산 에스테르는 펜타갈로일글루코스(PGG) 및 에피갈로카테킨 갈산염(EGCG) 중에서 선택한 것임을 특징으로 하는 서방성 조성물.
제 39 항에 있어서, 복합체는 펩티드와 갈릭산 에스테르의 염 형태임을 특징으로 하는 서방성 조성물.
삭제
제 39 항에 있어서, 정제된 갈릭산 에스테르는 펜타갈로일글루코스(PGG) 임을 특징으로 하는 서방성 조성물.
제 42 항에 있어서, 복합체는 펩티드와 PGG 의 염 형태이며, 상기 염은 동물에서 1 주일 미만 또는 1 주일 동안 방출됨을 특징으로 하는 서방성 조성물.
제 42 항에 있어서, 복합체는 펩티드와 PGG 의 염 형태이며, 상기 염은 동물에서 4 일 미만 동안 방출됨을 특징으로 하는 서방성 조성물.
제 39 항에 있어서, 정제된 갈릭산 에스테르는 에피갈로카테킨 갈산염(EGCG) 임을 특징으로 하는 서방성 조성물.
제 39 항에 있어서, 상기 펩티드는 다음 (ⅰ) 및 (ⅱ) 중에서 선택한 것임을 특징으로 하는 서방성 조성물

(ⅰ) DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg ;

(ⅱ) 아세틸 Lys Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg,

여기에서, DOrn 은 오르니틴의 D 이성질체이고, Hyp 는 트랜스-4-

히드록시-프롤린이고, Dtic 는 1,2,3,4-테트라히드로이소

퀴놀린-3-카르복시산의 D 이성질체이며, Cpg 는

시클로펜틸글리신이다.
20 개 이하의 아미노산으로 구성된 B1 펩티드 길항물질 펩티드와 정제된 갈릭산 에스테르를 혼합하는 단계 및 침전물을 분리하는 단계를 포함하는, 서방성 조성물을 제조하는 방법.
제 47 항에 있어서, 침전물이 pH 6.5 내지 pH 8.6 에서 형성됨을 특징으로 하는 방법.
제 47 항에 있어서, 갈릭산 에스테르는 PGG 임을 특징으로 하는 방법.
제 47 항에 있어서, 갈릭산 에스테르는 EGCG 임을 특징으로 하는 방법.
제 39 항에 있어서, 복합체 내의 펩티드는 중량/중량 기준으로 정제된 갈릭산 에스테르의 양보다 과량으로 존재함을 특징으로 하는 서방성 조성물.
제 39 항에 있어서, 펩티드 대 정제된 갈릭산 에스테르의 몰비율은 1:1, 1:2 또는 1:3 임을 특징으로 하는 서방성 조성물.
제 39 항에 있어서, 복합체는 펩티드와 PGG 의 염 형태이며, 상기 염은 동물에서 최대 2 주일 동안 방출됨을 특징으로 하는 서방성 조성물.
삭제
삭제