MXPA06012009A - Formulaciones de liberacion prolongada - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona ampliamente con el campo de las formulaciones de liberación prolongada. Más específicamente, la invención describe composiciones y métodos que se relacionan con la formulación de proteínas y/o péptidos y/o péptidos conésteres deácido gálico purificado. En un ejemplo,eléster deácido gálico es pentagaloilglucosa (PGG) y en otro ejemplo eléster deácido gálico es epigalocatequina-3-galato (EGCG).

Description

FORMULACIONES DE LIBERACIÓN PROLONGADA Campo de la Invención La presente invención se relaciona ampliamente con el campo de las formulaciones de liberación prolongada. Más específicamente, la invención describe composiciones y métodos relacionados con la formulación de proteínas y/o péptidos con esteres de ácido gálico purificado. En un ejemplo, el éster de ácido gálico es PentaGaloilGlucosa (PGG) , donde el ácido gálico también se conoce como ácido 3, 4, 5 trihidroxibenzoico y en otro ejemplo el éster de ácido gálico es epigalocatequina-3-galato (EGCG) . Antecedentes de la Invención Para lograr el suministro continuo de la proteína o péptido in vivo, se desean una formulación de administración prolongada o liberación prolongada para evitar la necesidad de administraciones repetidas. Un enfogue para la administración del fármaco mediante la microencapsulación en donde el ingrediente activo está encerrado dentro de una membrana polimérica para producir micropartículas. Se ha demostrado que se puede encapsular un agente biológicamente o farmacéuticamente activo dentro de un material formador de paredes biocompatibles o biodegradables como un polímero para proporcionar la liberación prolongada o retardada. En estos métodos, el agente o fármaco normalmente REF:176219 se disuelve, dispersa Q emulsiona utilizando agitadores, mezcladores y otras técnicas de mezclado dinámico en uno o más solventes que contengan el material formador de pared. Luego el solvente se elimina dando como resultado la formación de micropartículas que encapsulan al agente o fármaco. Estas micropartículas pueden administrarse al paciente. Esta bien establecida la importancia de polímeros biocompatibles y/o biodegradables como portadores para los sistemas de administración parenteral de fármacos. Las sustancias biocompatibles, biodegradables y relativamente inertes como películas o microesferas de poli (láctido) (PLA) o poli (láctido-co-glicólido) (PLGA) que • contienen el agente activo que se va a administrar se utiliza comúnmente como dispositivos de liberación prolongada (para un repaso, ver M. Chasin, Biodegradable polymers for controlled drug delivery. en: J.O. Hollinger Editor, Biomedical Applications of Synthetic Biodegradable Polymers CRC, Boca Ratón, FL (1995) , págs. 1-15; T. Hayashi, Biodegradable polymers for biomedical uses. Prog. Polym. Sci . 19 4 (1994), págs. 663-700; y Harjit Tamber, Pal Johansen, Hans P. Merkle y Bruno Gander, Formulation aspects of biodegradable polymeric microspheres for antigen delivery Advanced Drug Delivery Reviews, Volumen 57, Ejemplar 3 , 10 de enero de 2005, Páginas 357-376) . Sin embargo, aún existen varios problemas para diseñar los sistemas de administración de agentes activos. Un requerimiento básico para estos sistemas de administración es que los materiales utilizados sOn aceptables para su aplicación parenteral. Como se menciona anteriormente, se desea que los materiales utilizados sean biodegradables para las formulaciones que se pretende usar para administraciones repetidas . Otra cualidad generalmente deseable es la biocompatibilidad: los materiales deberán ser bien tolerados y la biodegradación deberá producir compuestos inocuos que ya sea puedan eliminarse del cuerpo o incorporarse en el metabolismo intermedio. La lista de materiales utilizados generalmente para la elaboración de preparaciones parenterales está limitada y aún es corta para las formulaciones de proteínas parenterales . Otro atributo deseable es un control suficientemente bueno de la liberación del agente activo encapsulado .

Generalmente es importante mantener la concentración del agente activo dentro de un margen efectivo durante un periodo de tiempo suficiente para lograr el efecto deseado y evitar concentraciones excesivas que puedan conllevar a efectos , secundarios o resultados indeseables. Normalmente es difícil lograr la cinética de liberación deseada con micropartículas monolíticas ya que la fracción del agente activo liberado dentro del primer día después de la administración es comúnmente dependiente del nivel de carga del fármaco. Incluso otra característica deseada de las tecnologías de administración prolongada, particularmente cuando se aplican a la administración de macromoléculas, es que la integridad del agente activo se mantenga durante la elaboración. Nuevamente éste es un reto difícil ya que la mayoría de fármacos, péptidos y proteínas son dependientes de una conformación tridimensional para su bioactividad y esta conformación puede comprometerse con facilidad. Por ejemplo, la mayoría de los polímeros que son utilizados para la elaboración de preparaciones parenterales de liberación controlada no son hidrosolubles y en consecuencia la proteína o péptido se expone a un solvente orgánico en el paso de encapsulación. Los ejemplos de otras tensiones indeseables asociadas con la elaboración de preparaciones de liberación controladas que pueden comprometer la integridad de cualquier agente activo en particular son las elevadas fuerzas de corte usadas para formar gotículas de solución polimérica en una fase continua, la exposición a reacciones de polimerización, elevada temperatura y valores pH indeseablemente elevados o bajos. Otro atributo deseable de las modalidades de liberación prolongada es que la integridad del agente activo, particularmente de proteínas o péptidos, puede retenerse dentro de las micropartículas durante la liberación. Dependiendo de la duración de liberación elegida, este periodo puede ser de unos cuantos días hasta varios meses . Para los sistemas convencionales de matriz polimérica formados de PLGA, el microambiente ácido que se forma durante la biodegradación del polímero puede degradar los agentes activos incorporados en éste durante la incubación in vi tro e in vivo . La técnica anterior describe diversas composiciones de administración prolongada y métodos para elaborarlas, por ejemplo en los números de patente de EE.UU. 5,916,597; 5,019,400; 5,922,253 y 6,531,154. La liberación in vivo de los agentes activos incorporados a partir de polímeros biocompatibles y biodegradables es, en varios casos, inicialmente elevada o baja, y por lo tanto no es uniforme durante la vida del dispositivo de administración. Además, la microencapsulación con polímeros tiende a proporcionar una administración prolongada a largo plazo de péptidos que abarcan desde dos semanas hasta nueve meses o mas, mientras que se necesita perfiles de liberación a corto plazo para ciertos medicamentos. Por lo tanto, se necesita en la técnica composiciones de liberación prolongada con perfiles de liberación menores que aproximadamente una o dos semanas . Breve Descripción de la Invención - La presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un complejo estable de liberación prolongada que comprende una proteína y/o péptido y un éster de ácido gálico para permitir la administración prolongada de la proteína o péptido in vivo de administrar el complejo. En consecuencia, el complejo de la invención puede permitir la administración continua de un péptido farmacéuticamente activo en un paciente durante periodos de tiempo menores que aproximadamente una o dos semanas. El complejo de la invención está formado mediante la combinación de una proteína o péptido y un éster de ácido gálico en condiciones tales que se forme un complejo. En una modalidad preferida, el complejo es una sal de éster de ácido gálico y una proteína o péptido. Normalmente el complejo es poco soluble en agua y puede purificarse a partir de diversas soluciones acuosas. Ya que el complejo se encuentra en forma de un sólido (por ejemplo, una pasta, granulos, un polvo o un liofilizado) , el complejo puede prepararse para la administración en un paciente como una suspensión líquida estable o una dispersión semisólida estable. En una modalidad de la invención, el grupo adecuado para usarse en la formación de un complejo con un péptido o una proteína es un éster de ácido gálico. De preferencia, el éster por sí mismo se forma mediante la unión de un grupo ácido de ácido gálico en una entidad de alcohol en otro compuesto como azúcar. En una modalidad particular, el éster de ácido gálico es PentaGaloilGlucosa (PGG) , donde el ácido gálico también se conoce como ácido 3 , , 5-trihidroxibenzoico. En otra modalidad, el éster de ácido gálico es epigalocatequina-3-galato (EGCG) . Descripción Detallada de la Invención La presente invención se relaciona con composiciones que comprenden un complejo de liberación prolongada que comprende una proteína o péptido y un éster de ácido gálico, con métodos para elaborar estas composiciones y con métodos para utilizar estas composiciones . Aunque los esteres de ácido gálico son un componente conocido de ácido tánico, aun no se ha descrito el uso de un componente altamente purificado de ácidos tánicos como los esteres de ácido gálico, en particular para elaborar una sal con péptidos y polipéptidos para crear una formulación de liberación prolongada como se describe aguí. Las ventajas de las composiciones de la invención incluyen la administración de un péptido o porción proteica de un complejo, ya sea sistémicamente o localmente durante periodos controlados (por ejemplo, normalmente menos que aproximadamente una o dos semanas) . También se contempla administración durante periodos más prolongados . Como se utilizan aquí, los términos "proteína" y "péptido" pretenden incluir polímeros de aminoácidos unidos por enlaces amida. Normalmente, un péptido estará compuesto con menos de aproximadamente 50 aminoácidos, más comúnmente con menos de aproximadamente 30 residuos de aminoácidos, incluso más comúnmente con menos de aproximadamente 20 residuos de aminoácidos . Mientras que una proteína normalmente estará compuesta de más de 50 aminoácidos y tendrá una actividad y estructura biológica. La actividad biológica de la proteína puede ser enzimática o puede ser una actividad enlazante que confiere los cambios de conformación. Estos términos además pretenden abarcar los análogos y derivados que imitan la estructura química de los componentes de las proteínas o péptidos. Ejemplos de los análogos incluyen péptidos o proteínas que contienen uno o más aminoácidos no naturales. Ejemplos de derivados incluyen péptidos o proteínas que contienen cadenas secundarias de aminoácidos, estructuras principales peptídicas y/o terminales amino o carboxilo que se han derivatizado. Los péptidos adecuados para la formulación según la invención incluyen, entre otros, enfuvirtide (comercializada por Trimeris y Roche como Fuzeon®) , angiotensina, amilina, ACTH, sustrato de renina, amida de Cecropin A-Melitina, Cecropina B, Magainina 1, péptido inhibidor de renina, bombesina, osteocalcina, bradicinina, péptido inhibidor Bl, antagonistas de péptido bradicinina incluyendo antagonistas de péptido bradicinina descritos en la solicitud de patente de EE.UU. No. 10/972,236, presentado el 21 de octubre de 2004, kalidina, calcitonina, colecistocinina, factor liberador de corticotropina, Dinorfina A, endomorfina, sarafotoxina, encef liña, exendina, fibrinopéptido, galanina, gastrina, péptido liberador de gastrina, péptido imitador de glucagon, factor liberador de hormona de crecimiento, péptido OVA, hormona liberadora de hormona luteinizante, péptido atrial natriurético, hormona concentradora de melanina, péptido cerebral natriurético, vasonatrina, neurocinina, neuromedina, Neuropéptido Y, neurotensina, orexina, oxitocina, vasopresina, péptido de hormona paratiroidea, péptido liberador de prolactina, somatostatina, análogo de somatostatina inhibidor tumoral, hormona liberadora de tirotropina y variantes y derivados de éstos (ver también, Latha , (1999) Nat. Biotech., 17:755) . Las 'proteínas que pueden formarse según la invención incluyen, entre otros, el ligando Flt3, ligando CD40, eritropoyetina, trombopoyetina, calcitonina, ligando Fas, ligado para el activador del receptor NF-kappa B (RANKL) , ligando inductor de apoptosis relacionado con TNF (TRAIL) , ORK/Tek, linfopoyetina derivada del estroma tímico, factor estimulante de colonia de granulocitos, factor estimulante de colonias de macrófagos granulocíticos, factor de crecimiento de mastositos, factor de crecimiento de células madre, factor de crecimiento epidérmico, RANTES, hormona de crecimiento, insulina, insulinotropina, factor de crecimiento similares a insulina, hormona paratiroidea, factores de crecimiento nervioso, glucagón, interleucinas 1 a 18, factores estimulantes de colonias, linfotoxina-ß, factor de necrosis tumoral, factor inhibidor de leucemia, oncostatina-M y diversos ligandos para moléculas de superficie celular como Elk y Hek (como los ligandos para cinasas relacionadas con eph o LERKS) . Las descripciones para elaborar estas proteínas pueden encontrarse en, por ejemplo, Human Cytokines : Handbook for Basic and Clinical Research, Vol. II (Aggar al y Gutterman, Eds. Blackwell Sciences, Cambridge MA, 1998); Growth Factors: A Practical Approach (McKay y Leigh, Ed. Oxford University Press Inc., Nueva York, 1993) y The Cytokine Handbook (AW Thompson, ed.; Academic Press, San Diego CA; 1991) . Los receptores para cualquiera de las proteínas anteriormente mencionadas también pueden formularse según la invención, siempre que sean porciones solubles de una molécula adecuada para la administración en un paciente. Los ejemplos incluyen receptores para ambas formas de receptor de factor de necrosis tumoral (referido como p55 y p75) , receptores para Interleucina-1 (tipo 1 y 2), receptor de Interleucina-4, receptor de Interleucina-15, receptor de Interleucina-17, receptor de Interleucina-18, receptor de factor estimulante de colonias de macrófagos granulocíticos, receptor de factor estimulante de colonia de granulocitos, receptores para el factor inhibidor de leucemia y oncostatina-M, receptor del activador de NF-kappa B (RANK) , receptores de TRAIL y receptores que comprenden los dominios de muerte, el receptor inductor de apoptosis (AIR) o Fas . El receptor particularmente preferido es una forma soluble del receptor tipo II de IL-1; estas proteínas se describen en la patente de EE.UU. No. ,767,064, que se incorpora aquí por su referencia en su totalidad. Otras proteínas que se pueden formular según la invención incluyen variantes solubles de grupos de antígenos de diferenciación (referidos como proteínas CD) , por ejemplo, aguellos descritos en Leukocyte Typing VI [Tipificación de Leucocitos VI] (Proceedings of the VIth International Workshop and Conference [Procedimientos del VI Taller y Conferencia Internacional]; Kishimoto, Kikutani et al., Eds. Kobe, Japón 1996), o moléculas CD descritas en los talleres subsiguientes. Los ejemplos de estas moléculas incluyen CD27, CD30, CD39, CD40; y ligandos de estos (ligando CD27, ligando CD30 y ligando CD40) . Varios de estos son miembros de la familia de receptores TNF, que también incluye 41BB y OX40; normalmente los ligandos son miembros de la familia TNF (como son el ligando 41BB y ligando OX40) ; en consecuencia, los miembros de las familias TNF y TNFR también pueden producirse utilizando la presente invención. Las proteínas enzimáticamente activas también pueden formularse según la invención. Los ejemplos incluyen los miembros de las familias de metaloproteinasa-desintegrina, diversas cinasas, glucocerebroxidasa, alfa-galactosidasa A, superóxido dismutasa, activador de plasminógeno tisular, Factor VIII, Factor IX, apolipoproteína E, apolipoproteína A-I, globinas y antagonista IL-2, antitripsina alfa-1, enzima convertidora TNF-alfa y diversas enzimas adicionales. También pueden formularse los ligandos para proteínas enzimáticamente activas mediante la aplicación de la invención actual . Los métodos y composiciones inventivos también son útiles para la formulación de otros tipos de proteína, incluyendo moléculas de inmunoglobulina o sus porciones y anticuerpos quiméricos (es decir, un anticuerpo que tenga una región constante humana acoplada a una región de unión de antígeno de murino) o sus fragmentos. Se conocen diversas técnicas mediante las cuales se pueden manipular las moléculas de inmunoglobulina que codifican para ADN y producir ADN capaces de codificar para proteínas recombinantes como anticuerpo monocatenarios, anticuerpos con afinidad potenciada u otras proteínas basadas en anticuerpos (ver, por ejemplo, Larrick et al., 1989, Biotechnology 7:934-938; Reichmann et al., 1988, Nature 332:323-327; Roberts et al., 1987, Nature 328:731-734; Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-1536; Chaudhary et al., 1989, Nature 339:394-397). El término "anticuerpo humanizado" también abarca anticuerpos monocatenarios. Ver, por ejemplo, Cabilly et al., patente de EE.UU. No. 4,816,567; Cabilly t al., patente europea No. 0,125,023 Bl; Boss et al., patente EE.UU. No. 4,816,397; Boss et al., patente europea No. 0,120,694 Bl; Neuberger, M. S. et al., WO 86/01533; Neuberger, M. S. et al., patente europea No. 0,194,276 Bl; Winter, patente de los EE.UU. No. 5,225,539; Winter, patente europea No. 0,239,400 Bl; Queen et al., patente europea No. 0 451 216 Bl; y Padlan, E. A. et al., EP 0 519 596 Al. Por ejemplo, la invención puede utilizarse para formular anticuerpos humanos y/o humanizados que reconozcan inmunoespecíficamente los objetivos celulares específicos, por ejemplo, cualquiera de las proteínas anteriormente mencionadas, el receptor EGF humano, el antígeno her-2/neu, el antígeno CEA, el Antígeno Membranal Específico para Próstata (PSMA por sus siglas en inglés), CD5, CDlla, CD18, NGF, CD20, CD45, Ep-cam, otras moléculas de superficie de células cancerosas, TNF-alfa, TGF- betal, VEGR, otras citocinas, integrina alfa 4 beta 7, IgEs, proteínas víricas (por ejemplo, citomegalovirus) , etc., sólo para nombrar unos cuantos . También puede formularse según la invención diversas proteínas de fusión. Una proteína de fusión es una proteína o dominio o una proteína (por ejemplo, un dominio extracelular soluble) fusionada a un péptido o proteína heteróloga. Ejemplos de estas proteínas de fusión incluyen proteínas expresadas como una fusión con una porción de una molécula de inmunoglobulina, proteínas expresadas como proteínas de fusión con una región cremallera y novedosas proteínas polifuncionales como las proteínas de fusión de una citocina y un factor de crecimiento (es decir, GM-CSF e IL-3, MGF e IL-3) . Los documentos WO 93/08207 y WO 96/40918 describen la preparación de diversas formas oligoméricas solubles de una molécula llamada CD40L, incluyendo una proteína de inmunoglobulina de fusión y una proteína cremallera de fusión, respectivamente; las técnicas mencionadas ahí son aplicables a otras proteínas. Otra proteína de fusión es una TNFR:Fc recombinante, también conocida como "etanercept" . El etanercept es un dimero de dos moléculas de la porción extracelular del receptor p75 TNF, cada molécula comprende de 235 aminoácidos de proteínas derivadas de TNFR fusionada a la porción Fe de 232 aminoácidos de la IgGl humana. De hecho, cualquiera de las moléculas previamente descritas pueden expresarse como proteínas de fusión, incluyendo, entre otras, el dominio extracelular de la molécula de receptor celular, una enzima, hormona, citocina, una porción de molécula inmunoglobulina, un dominio cremallera y un epítopo. Como se utiliza aquí, el término "éster de ácido gálico" pretende referirse a una molécula que puede formar complejos con una proteína o un péptido para formar un complejo de liberación prolongada. En un ejemplo, la molécula de éster de ácido gálico es PentaGaloilGlucosa (PGG, también conocida en la técnica como 5GG) . Se entiende que la molécula PGG puede tener un grupo galoilo, dos grupos galoilo, tres grupos galoilo o cuatro grupos galoilo . Además se entiende que la glucosa puede ser reemplazada con otra estructura principal de carbono, como un alcohol o poliol, por ejemplo glicerol, etilenglicol o cualquier grupo de azúcar adecuado para éste uso. En otro ejemplo, el epigalocatequina-3-galato (EGCG) es la molécula de éster de ácido gálico útil en la invención para elaborar una sal con un péptido o proteína. EGCG es un flavonoide polifenol antioxidante aislado del té. El éster EGCG se une a la estructura de anillo que no es azúcar, a diferencia de PGG. Además, se entiende que el éster de ácido gálico puede asumir diferentes formas estereoquímicas . Por ejemplo, PGG puede tener ya sea formas alfa o beta. Un experto en la técnica es capaz, para las enseñanzas de la presente, identificar las apropiadas moléculas de éster de ácido gálico para usarse en las composiciones y métodos de la invención. Como se utiliza aquí, el término "complejo de liberación prolongada" pretende referirse a un complejo físicamente y químicamente estable que se forma al combinarse apropiadamente una proteína o péptido y un éster de ácido gálico descritos aquí. Este complejo comúnmente tiene forma de un precipitador que se produce al combinar preparaciones acuosas o no acuosas de la proteína o péptido y el éster de ácido gálico. Como se utiliza aquí, el término "administración prolongada" pretende referirse a la administración continua in vivo, de un agente farmacéutico durante un periodo después de la administración. La administración prolongada del agente puede demostrarse, por ejemplo, mediante el efecto terapéutico continuo del agente durante un periodo de tiempo . Alternativamente, la administración prolongada del agente puede demostrarse mediante la detección de la presencia del agente in vivo después de un periodo de tiempo. En una modalidad, la administración prolongada es menor a una semana y puede ser menor a cuatro días. Sin embargo, también se contempla que la administración prolongada pueda ser durante periodos mayores a una semana usando las composiciones de la invención, incluyendo más de dos semanas. La formación de un complejo PGG o EGCG con un péptido o proteína a diferentes pH puede afectar el periodo de administración del fármaco. Como se muestra a continuación en los Ejemplos 4 y 5, la formación de un complejo PGG con un péptido a un pH de 7.0 da como resultado una mayor duración en suero del complejo, es decir aproximadamente una semana, que aquellos complejos que se forma a un pH 7.6 y un pH 8.6, es decir menos de una semana. Por lo tanto, es una modalidad de la invención que la duración de la administración del fármaco sea controlada parcialmente mediante el pH en el cual se forma el complejo. Un intervalo representativo de pH es 6.0 a 9.0 y los intervalos de pH 6.5 a 8.6, pH 7.0 a 8.6 también son adecuados . Un experto en la técnica entiende fácilmente que pueden ser adecuados otros pH y dado lo que se muestra en la invención, no se necesita más que experimentación de rutina para determinar cuál pH se adecúa mejor al perfil de administración del fármaco deseado de un fármaco particular que ha formado complejos con los esteres de ácido tánico de la invención. Un aspecto de la presente invención concierne a una composición farmacéutica que comprende un complejo de liberación prolongada de un agente farmacéuticamente activo como una proteína o péptido y un éster de ácido gálico . Las composiciones farmacéuticas de la invención permiten la administración prolongada de una proteína o péptido en un paciente, in vivo, después de administrar la composición al paciente, donde la duración de la administración prolongada puede variar dependiendo de la solubilidad del complejo de éster de ácido gálico y el péptidó. Por ejemplo, en una modalidad, el complejo de liberación prolongada proporciona la administración prolongada de un agente farmacéuticamente activo en un paciente durante menos de una semana después que se administra al paciente el complejo de administración prolongada de la invención. En otra modalidad, el complejo de liberación prolongada proporciona una administración prolongada de una proteína o péptido a un paciente durante menos de cuatro días . las formulaciones que proporcionan la administración prolongada durante periodos de tiempo mayores o menores también están abarcadas por la invención, como las formulaciones que proporcionan la administración continua durante 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días o una semana o lo similar. Asimismo, está contemplado que estas composiciones puedan formularse de manera tal que proporcionen la administración continua del fármaco durante más de una semana y hasta dos semanas o más . Cualquier tamaño de cadena de aminoácidos puede ser adecuada para usarse en el complejo siempre que la proteína o péptido tenga la habilidad de formar un complejo no covalente de liberación prolongada con el éster de ácido gálico al combinar ambos . Además del complejo de liberación prolongada, las formulaciones farmacéuticas de la invención pueden comprender excipientes y/o portadores farmacéuticamente aceptables adicionales. Como se utiliza aquí, el término "portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes retardantes de absorción y agentes isotónicos y lo similar que sean •fisiológicamente combatibles. Preferiblemente, el portador se ha adecuado para su administración intravenosa, intramuscular, subcutánea o parenteral (por ejemplo, mediante inyección) . Los excipientes incluyen los desintegrantes y estabilizadores farmacéuticamente aceptables. Además de las formulaciones farmacéuticas de los péptidos que forman complejos con el éster de ácido gálico, la invención además abarca formulaciones envasadas que contienen estos complejos y jeringas que contienen estos complejos. En otra modalidad, la invención proporciona una jeringa que tiene un lumen, en donde el complejo de liberación prolongada de una proteína o péptido y éster de ácido gálico se incluye en el lumen. El complejo de la invención se prepara al combinar la proteína o péptido y el éster de ácido gálico en condiciones tales que se forme un complejo de liberación prolongada que incluye la proteína o péptido y el éster de ácido gálico. En consecuencia, otro aspecto de la invención concierne a métodos para formular formulaciones f rmacéuticas . En una modalidad, el método comprende proporcionar una proteina o péptido y un éster de ácido gálico, combinar la proteína o péptido y el éster de ácido gálico en condiciones tales ue se forme un complejo de la proteína o péptido y el éster de ácido gálico y preparar una formulación farmacéutica que comprenda el complejo. Por ejemplo, una solución de la proteína o péptido y una fusión del éster de ácido gálico se combinan hasta que se precipiten fuera de la solución el complejo de liberación prolongada de la proteína o péptido y el éster de ácido gálico. En ciertas modalidades, las soluciones de la proteína o péptido y el éster de ácido gálico son soluciones acuosas . Las cantidades de proteína o péptido y ,éster de ácido gálico necesarias para lograr el complejo de liberación prolongada pueden variar dependiendo de la proteína o péptido particulares y el éster de ácido gálico utilizado, de los solventes particulares usados y/o del procedimiento utilizado para lograr la formación del complejo. Normalmente, la proteína o péptido también se encuentra en exceso en base a peso/peso como se muestra en los Ejemplos. Una vez que se ha precipitado fuera de la solución el complejo de proteína o péptido/éster de ácido gálico, el precipitado puede retirarse de la solución por medios conocidos en la técnica, como filtración, centrifugación y lo similar. Luego, el , material recuperado puede secarse y el sólido puede triturarse o pulverizarse para formar un polvo por métodos conocidos en la técnica. Alternativamente, la pasta se puede congelar y liofilizar hasta secar. La forma en polvo del complejo puede dispersarse en una solución portadora para formar una suspensión líquida o una dispersión semisólida adecuada para inyectarse. En consecuencia, en diversas modalidades, una formulación farmacéutica de la invención es un sólido liofilizado, una suspención líquida o una dispersión semisólida. En otra modalidad, la formulación farmacéutica de la invención es una formulación estéril. Por ejemplo, después de la formación del complejo de liberación prolongada, el complejo puede esterilizarse mediante irradiación de rayos gama o esterilización mediante haz de electrones. Las formulaciones farmacéuticas, incluyendo polvos, suspensiones líquidas, dispersiones semisólidas, sólidos liofilizados y formas esterilizadas de la misma (por ejemplo, mediante irradiación de rayos gama o filtración estéril) , que se preparan según los métodos de la invención, también son abarcadas en la invención. Como se utiliza aquí, el término "paciente" pretende incluir animales de sangre caliente, preferiblemente mamíferos y con mayor preferencia, humanos. Como se utiliza aquí, el término "administrarle a un paciente" pretende referirse a despachar, administrar o aplicar una composición (por ejemplo, una formulación farmacéutica) en un paciente mediante cualquier ruta adecuada para la administración de la composición en la ubicación deseada del paciente, incluyendo la administración mediante ruta parenteral u oral, inyección intramuscular, inyección subcutánea/intradérmica, inyección intravenosa, administración oral, administración transdérmica y administración mediante la ruta rectal, colónica, vaginal, intranasal o de tracto respiratorio . Los siguientes ejemplos son meramente modalidades representativas y no pretenden ser limitantes con respecto a todo el alcance de la invención. Ejemplo 1 El Ejemplo 1 proporciona una descripción de una preparación de sal de péptido B-PGG (proporción molar 1:1 de péptido B (DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg) con respecto a PGG) . Se elabora una solución en existencia de PGG disolviendo 94 mg de PGG en 2 ml de solución de NaOH (concentración de NaOH de 0.10 a 0.20 N) después se filtra a través de un filtro de 0.2 um. A una solución en existencia de PGG (1.56 ml) se le agrega secuencialmente una solución de 109.4 mg de sal de acetato de péptido B en 0.8 ml de agua agitándose mientras se forma un precipitado . El precipitado se recupera mediante centrifugación. Se decanta el sobrenadante y el precipitado se lava con 0.5 ml de agua 3 veces . El precipitado se seca en un vacío a una temperatura aproximada de 30-35°C durante aproximadamente 20 horas para producir 125 mg (76%) . La sal de péptido B-PGG es un polvo color blanquecino . Ejemplo 2 Se elaboran . sales de péptido A-PGG y tanato de forma similar al péptido B-PGG en el Ejemplo 1. El péptido A es Acetilo Lys Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg. E emplo 3 Las siguientes Tablas 1 y 2 enumeran el contenido de péptidos y la solubilidad de las sales de péptido A (Acetilo Lys Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg) y péptido B (DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg) con tanato y PGG en agua y PBS. Los datos muestran que la sal de péptido PGG tiene un mayor contenido de péptidos que el tanato . El precipitado de PGG tiene una mayor solubilidad en PBS que el tanato .

Ejemplo 4 Se investigó el estudio del efecto del pH en la formación de sales (es decir, el nivel de concentración de NaOH) sobre la producción, contenido peptídico y solubilidad de la sal de péptido B-PGG. Se preparan y aislan cuatro sales de péptido B- PGG a un pH de 7.0, 7.2, 7.6 y 8.6. Luego se determinó su solubilidad en agua y PBS y también el contenido peptídico. Estos resultados demuestran (Tabla 3) que la solubilidad acuosa, producción de formación de sal y contenido peptídico aumentan conforme aumenta el pH durante la formación de sales . Ejemplo 5 Este ejemplo describe la liberación prolongada de sales de péptido B/PGG y péptido B/tanato, en ratas. Los estudios farmacocinéticos en ratas (PK) se llevan a cabo mediante una sola inyección subcutánea (dosis de 10 mg/kg) de sales de péptido B/PGG y sales de péptido B/tanato suspendidas en amortiguador TRIS; y una solución de PBS y acetato de péptido B como grupo testigo. Los resultados PK muestran una liberación prolongada semanal para la sal de péptido B/tanato y sal de péptido B-PGG que se preparó a un pH 7.0. Sin embargo, las sales de péptido B-PGG preparadas a un pH 7.6 y 8.6 mostraron una duración de liberación más corta (de aproximadamente 2-3 días) en comparación con la sal preparada a un pH 7.0 (hasta dos semanas) .

Ej emplo 6 Se preparan mediante un método similar al descrito para el Ejemplo 1 un anómero puro (beta-PGG) y una mezcla de anómeros (alfa + beta-PGG) de sales de PGG de péptido B (DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg) . No hubo diferencias significativas con respecto a la solubilidad acuosa de estas sales. Basándose en la solubilidad acuosa, se espera que la duración in vivo de liberación prolongada de estas sales sea similar . Ejemplo 7 El siguiente ejemplo describe el uso de EGCG para elaborar una sal con un péptido, que se probó en un estudio farmacocinético (PK) en animales para terminar la liberación prolongada. Se elabora una solución en existencia de EGCG (Sigma-Aldrich) disolviendo 184 mg de EGCG en 2 ml de 0.2 N NaOH seguido de filtración a través de un filtro de 0.2 um. A una solución en existencia de EGCG (1.4 ml) se le agrega lentamente una solución de 138 mg de sal de acetato de péptido B (DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg) en 1.2 ml de agua con agitación. La suspensión resultante se agita durante aproximadamente 10-15 minutos a temperatura ambiente. Después de la centrifugación, el sobrenadante se decanta y el precipitado se lava con 1 ml de agua (3 veces mediante centrifugación y decantación del sobrenadante) . El precipitado se seca al vacío a una temperatura aproximada de 30-35°C durante aproximadamente 20 horas para producir 218 mg (88%) de sal de péptido B-EGCG a manera de un polvo blanquecino. El contenido peptídico de las sales de péptido B/EGCG es de 47-50%. La solubilidad acuosa para la sal con una proporción molar de 1:3 de péptido con respecto a EGCG es < 0.5 mg/ml en agua y < 0.05 mg/ml en PBS y para una proporción molar de 1:2 de péptido con respecto a EGCG, la solubilidad es de aproximadamente 1 mg/ml en agua y aproximadamente 0.3 mg/ml en PBS. Se llevó a cabo un estudio en PK en rata usando una sola inyección subcutánea (dosis de 10 mg/kg) de sal de '593 /EGCG suspendida en amortiguador TRIS, pH 7.0. El resultado del estudio PK mostró una liberación prolongada de péptido B durante varios días con un nivel en sangre > 26 ng/ml a las 24 horas, luego una disminución hasta aproximadamente 5 ng/ml a las 96 horas. Tabla 1. Precipitados de Péptido A Tabla 2 Precipitados de Péptido B Tabla 3. Precipitado de péptido B formados a diferentes pH Aunque se ha descrito la presente invención en términos de las modalidades preferidas, se entiende que se le puede ocurrir a los expertos en la técnica diversas variaciones y modificaciones. Por lo tanto, se pretende que las reivindicaciones anexas cubran todas estas variaciones equivalentes que vienen dentro del alcance de las reivindicaciones . Cada una de las patentes, solicitudes y artículos citados anteriormente (de aquí en adelante, se llaman "referencia" y cada documento citado o que se ha hecho referencia aquí, como incluyendo durante el seguimiento de cualguiera de las patentes y/o solicitudes citadas aquí ("documentos de patentes citadas") y cualquiera de los catálogos o instructivos del fabricante para cualguiera de los productos citados aquí o mencionados en cualquiera de las referencias y en cualquiera de las patentes citadas en los documentos, como se incorporan aquí por referencia. Más aún, todos los documentos citados en este texto y todos los documentos citados o a los que se hace referencia en los documentos citados en este texto y cualquiera de los catálogos o instructivos del fabricante para cualquiera de los productos citados o mencionados en este texto o en cualquiera de los documentos incorporados aquí en este texto se incorporan por referencia. Los documentos incorporados como referencia en este texto o en cualquiera de las enseñanzas del texto pueden utilizarse para la práctica de la invención. Los documentos incorporados por referencia en este texto no se admiten como técnica anterior. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (20)

1. REIVINDICACIONES
2. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Una composición de liberación prolongada caracterizada porque comprende un complejo purificado de una proteína o péptido y un éster de ácido gálico purificado. 2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el complejo es una sal del péptido y el éster de ácido gálico.
3. 3. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el éster de ácido gálico se selecciona del grupo que comprende PentaGaloilGlucosa (PGG) y galato de epigalocatequina (EGCG) .
4. 4. La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque el éster de ácido gálico purificado es PentaGaloilGlucosa (PGG) .
5. 5. La composición de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque la sal de PGG y péptido tienen una duración de liberación en un animal de una semana.
6. 6. La composición de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque la sal de PGG y péptido tienen una duración de liberación en un animal de 3 días .
7. 7. La composición de conformidad con la reivindicación 3 , caracterizada porgue el éster de ácido gálico purificado es epigalocatequina-3-galato (EGCG) .
8. 8. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2, 3 ó 4, caracterizada porque el péptido es un antagonista del péptido Bl .
9. 9. La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el péptido se selecciona de i) DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg; y ii) Acetilo Lys Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg, donde DOrn es el isómero D de ornitina, Hyp es trans-4-hidroxi-prolina, Dtic es el isómero D de ácido 1, 2, 3 , 4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico y Cpg es ciclopentilglicina.
10. 10. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el péptido se selecciona de i) DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg; y ii) Acetilo Lys Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg.
11. 11. Un método para elaborar un complejo de liberación prolongada, caracterizado porque comprende los pasos de mezclar una proteína o péptido con un éster de ácido gálico y aislar el precipitado.
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el complejo se forma como un pH entre 6.5 a 8.6.
13. 13. El método de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizado porque el éster de ácido gálico es PGG.
14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el éster de ácido gálico es EGCG.
15. 15. Un método para administrar un complejo de liberación prolongada, caracterizado porgue el complejo comprende una formulación f rmacéuticamente aceptable de un complejo de una proteína o péptido de un éster de ácido gálico .
16. 16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el éster de ácido gálico es PGG.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el éster de ácido gálico es EGCG.
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el péptido es un antagonista del péptido Bl.
19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el péptido se selecciona de i) DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg; y ii) Acetilo Lys Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg donde DOrn es el isómero D de ornitina, Hyp es trans-4-hidroxi-prolina, Dtic es el isómero D de ácido 1, 2, 3 , 4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico y Cpg es ciclopentilglicina.
20. 20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el péptido se selecciona de i) DOrn Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg; y ii) Acetilo Lys Lys Arg Pro Hyp Gly Cpg Ser Dtic Cpg.