CN108697642A - 新型长效人生长激素缀合物液体制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及长效人生长激素缀合物的液相制剂及其制备方法。

Description

新型长效人生长激素缀合物液体制剂
技术领域
本发明涉及长效人生长激素缀合物液体制剂和其制备方法。
背景技术
人生长激素(下文称为“hGH”)是在人垂体腺中产生的由191个氨基酸构成的分子量大约22,000的多肽激素的，，，并且主要用于治疗垂体性侏儒症。常规地，已经使用从人垂体腺提取的hGH，但是由于其有限的供应仅仅非常有限数量的人得到治疗。另外，已经禁止使用从垂体腺提取的hGH，这是由于报道在使用从垂体腺提取的hGH治疗的一些患者中发现了致命的退行性神经障碍——克雅二氏病。最近，遗传工程技术的发展已经使得大肠杆菌和酵母菌中的hGH生产成为可能，并且由其生产的重组hGH制剂自1985年已经在多个国家被批准，并且在经过毒理学和临床测试后已经变为商业上可获得的。
多肽比如hGH具有低稳定性并且因而容易变性，以及被血液中的血清蛋白酶降解并且因而经由肾脏或肝脏容易清除。因此，包含多肽作为药物成分的蛋白质药物必须被频繁地施用至患者以维持其血液浓度和效价。然而，在以注射液的形式给患者施用蛋白质药物的情况下，频繁注射蛋白质药物以维持活性多肽的血液浓度给患者造成极大痛苦。为了解决这样的问题，已经存在许多尝试以增加蛋白质药物在血液中的稳定性和维持其血液浓度处于高水平持续长时段以最大化药物功效。优选的是，这样的蛋白质药物的长效制剂增加蛋白质药物的稳定性，维持高的药物效价，并且不引起免疫反应。
同时，韩国专利号10-0567902和10-0725315公开了通过连接免疫球蛋白Fc区和非肽基聚合物与生理学活性多肽制备的缀合物作为蛋白质药物的长效制剂，其能够最小化蛋白质活性的降低和增加蛋白质稳定性。
可以使用hGH作为生理学活性多肽，使用上面的方法制备长效hGH缀合物。必不可少的是，防止由于在储存和运输过程期间由光、热、或添加剂中的杂质引起的降解引起的物理化学变化比如变性、聚集、吸附、或水解，同时维持hGH的体内活性。由于长效hGH缀合物与hGH多肽相比具有更大的大小和增加的分子量，与hGH多肽相比难以稳定缀合物。
在液体制剂中不稳定，蛋白质这样的稳定性问题已经通过冻干解决。冻干的蛋白质制剂具有维持长期稳定性的优势，但是不便在于必须使用增溶剂重构用于注射并且问题在于在重构或冻干期间产生聚合物引起活性丢失，并且花费大量时间和成本冻干蛋白质。
为了研发稳定的液体hGH制剂，重要的是，通过脱酰胺、聚合物产生和氧化控制hGH的降解模式，比如降解产物产生速率。
虽然液体制剂的温度、pH和添加剂影响降解产物的产生速率，能够稳定临床待应用的所有蛋白质的组合物仍是未知的。稳定特定蛋白质的液体制剂可能不被应用于稳定其它蛋白质。对于最大化液体中蛋白质——具体地hGH——的稳定性，本领域熟知，这必须广泛地事先选择能够最小化蛋白质的特异性分解产物的产生速率的因子或添加剂或其组合。
另外，不同的蛋白质，由于其物理化学差异，在存储期间的不同比率和条件下可能是逐渐失活的。即，由于用于稳定的物质引起的对延长保存期的作用对于不同的蛋白质是不等同的，并且结果，用于提供保存期稳定性的稳定剂取决于目标蛋白质的物理化学性质而具有多种比率、浓度和类型。而且，当组合使用时，稳定剂可能引起由于其间的竞争性相互作用的不利作用和副作用，而非预期的作用。另外，储存的蛋白质的性质和浓度在储存期间可能改变，引起不同的作用。因此，溶液中的蛋白质稳定需要许多努力和防范。
具体而言，由于具有改进的体内耐久性和稳定性的长效hGH缀合物处于hGH——生理学活性肽——被连接至免疫球蛋白Fc区的形式，所以其分子量和体积极大地不同于一般的hGH，从而需要用于蛋白质稳定的特殊组合物。另外，由于生理学活性肽hGH和免疫球蛋白Fc区是具有不同物理化学性质的肽或蛋白质，因此它们应当同时被稳定。然而，如上面描述的，不同的肽或蛋白质可能由于其物理化学性质的差异在储存期间在不同的比率和条件下逐渐失活。而且，当组合使用适合每种肽或蛋白质的稳定剂时，它们可能引起由于其间的竞争性相互作用的不利作用和副作用，而非预期的作用。因此，对于长效hGH缀合物，难以发现能够同时稳定生理学活性肽hGH和免疫球蛋白Fc区二者的稳定剂的组合物。
公开内容
技术问题
本发明人已经做出大量努力以发现用于蛋白质的改进的稳定性和降低的沉淀而没有病原性病毒的污染的组合物，该蛋白质用于长效hGH缀合物的延长的储存。结果，已经确认，使用包括缓冲剂、糖醇和非离子型表面活性剂而不包括等张剂的稳定剂可以增加长效hGH缀合物的稳定性，从而产生经济的和稳定的液体制剂。另外，本发明人已经确认了当液体制剂进一步包括防腐剂时，可以提供能够维持高的长效hGH缀合物的稳定性的用于多次施用的液体制剂，从而完成了本发明。
技术方案
本发明的目标是提供长效hGH缀合物液体制剂，其包括长效hGH缀合物和无白蛋白的稳定剂，该无白蛋白的稳定剂包括缓冲溶液、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂。
本发明的另一个目标是提供用于制备长效hGH缀合物液体制剂的方法。
本发明的还另一个目标是提供长效hGH缀合物液体制剂用于制备治疗垂体性侏儒症、生长激素缺乏、普-韦二氏综合征、或特发性身材矮小症的药物的用途。
本发明的还另一个目标是提供用于治疗垂体性侏儒症、生长激素缺乏、普-韦二氏综合征、或特发性身材矮小症的方法，其包括给需要其的对象施用长效hGH缀合物液体制剂。
有益效果
由于根据本发明的长效hGH缀合物液体制剂不包括人血清白蛋白和任何潜在危险因子，不需要担心病毒污染。另外，通过将hGH连接至免疫球蛋白Fc区形成的长效hGH缀合物具有与天然提供物(provide)相比更大的分子量和改进的体内生理学耐久性，并且缀合物液体制剂为长效hGH缀合物提供了优越的稳定性。液体制剂可以是能够多次施用的包括防腐剂的稳定液体制剂。本发明这样的液体制剂，作为简单的制剂，显示了优越的保存期稳定性并且因而与其它稳定剂或冻干制剂相比可以被更经济地提供。它还可以被用作高效的药物制剂，这是由于体内蛋白质活性与常规的hGH制剂相比维持长时间。
附图说明
图1a和1b是根据本发明的用于多次施用的含防腐剂的液体制剂对低浓度长效hGH缀合物的稳定性的作用的实验结果。图1a和1b分别是在4℃和25℃下储存后通过IE-HPLC分析的图表。IE-HPLC(％)指的是(面积％/开始面积％)低浓度长效hGH缀合物相对于初始值的残留率。结果显示在当包括间甲酚、苯酚、或苯甲醇作为防腐剂时和当不包括防腐剂时之间不存在显著的稳定性差异。
图2a和2b是基于图1的液体制剂进一步包括用于多次施用的防腐剂对高浓度长效hGH缀合物的稳定性的作用的实验结果。图2a和2b分别是在4℃和25℃下储存后通过IE-HPLC分析的图表。IE-HPLC(％)指的是(面积％/开始面积％)高浓度长效hGH缀合物相对于初始值的残留率。与图1a和1b的结果相同，结果显示了在当包括间甲酚、苯酚、或苯甲醇作为防腐剂时和当不包括防腐剂时之间不存在显著的稳定性差异。
最佳模式
为了实现上面的目标，本发明的示例性实施方式是长效hGH缀合物液体制剂，其包括(i)长效人生长激素(hGH)缀合物，和(ii)无白蛋白的稳定剂，其包括缓冲溶液、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂。
作为具体的实例，无白蛋白的稳定剂不包括等张剂，例如氯化钠。
作为另一个具体的实例，长效hGH缀合物是hGH被连接至免疫球蛋白Fc区的缀合物。
作为另一个具体的实例，长效hGH缀合物处于融合蛋白的形式，其中hGH和免疫球蛋白Fc区经由非肽基聚合物或使用重组技术连接。
作为另一个具体的实例，非肽基聚合物选自聚丙二醇、聚乙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、聚氧乙烯多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯乙醚、生物降解聚合物比如聚乳酸(PLA)和聚乳酸-乙醇酸(PLGA)、脂质聚合物、几丁质、透明质酸、和其组合。
作为另一个具体的实例，非肽基聚合物是聚乙二醇。
作为另一个具体的实例，缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂或醋酸盐缓冲剂。
作为另一个具体的实例，缓冲剂具有在4.0至7.0的范围中的pH。
作为另一个具体的实例，糖醇是选自甘露醇、蔗糖和山梨醇的至少一种。
作为另一个具体的实例，相对于液体制剂的总体积，糖醇具有在1％(w/v)至10％(w/v)的范围中的浓度。
作为另一个具体的实例，非离子型表面活性剂是聚山梨醇酯或泊洛沙姆。
作为另一个具体的实例，相对于液体制剂的总体积，非离子型表面活性剂具有在0.001％(w/v)至0.1％(w/v)的范围中的浓度。
作为另一个具体的实例，防腐剂是选自间甲酚、苯酚和苯甲醇的至少一种。
作为另一个具体的实例，相对于液体制剂的总体积，防腐剂具有0.01％(w/v)至1.0％(w/v)的范围中的浓度。
作为另一个具体的实例，液体制剂用于多次施用。
作为另一个具体的实例，长效hGH缀合物具有在1mg/mL至100mg/mL的范围中的浓度。
作为另一个具体的实例，稳定剂进一步包括选自糖类、多羟基醇和氨基酸的至少一种。
作为另一个具体的实例，hGH是与天然hGH具有相同氨基酸序列的hGH、在天然hGH的氨基酸序列上具有修饰的hGH、或与天然hGH具有类似活性的衍生物。
作为另一个具体的实例，长效hGH缀合物液体制剂包括(i)长效hGH缀合物，其中hGH被连接至免疫球蛋白Fc区，和(ii)无白蛋白的稳定剂，其由缓冲溶液、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂构成。
作为另一个具体的实例，缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂，糖醇是甘露醇，表面活性剂是聚山梨醇酯80，并且防腐剂选自间甲酚、苯酚和苯甲醇。
作为另一个具体的实例，免疫球蛋白Fc区源自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM。
作为另一个具体的实例，免疫球蛋白Fc区的每个结构域是具有源自选自IgG、IgA、IgD、IgE和IgM的免疫球蛋白的不同起源的结构域的杂合。
作为另一个具体的实例，免疫球蛋白Fc区是由单链免疫球蛋白组成的二聚物或多聚物，单链免疫球蛋白由具有相同起源的结构域构成。
作为另一个具体的实例，免疫球蛋白Fc区是无糖基化的人IgG4Fc区。
作为另一个具体的实例，制剂被用于治疗垂体性侏儒症、生长激素缺乏、普-韦二氏综合征、或特发性身材矮小症。
本发明的另一个示例性实施方式是用于制备长效hGH缀合物液体制剂的方法，其包括使长效hGH缀合物——其中hGH被连接至免疫球蛋白Fc区——与缓冲剂、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂混合。
本发明的还另一个示例性实施方式是长效hGH缀合物液体制剂用于制备治疗垂体性侏儒症、生长激素缺乏、普-韦二氏综合征、或特发性身材矮小症的药物的用途。
本发明的还另一个示例性实施方式是用于治疗垂体性侏儒症、生长激素缺乏、普-韦二氏综合征、或特发性身材矮小症的方法，其包括给需要其的对象施用长效hGH缀合物液体制剂。
具体实施方式
本发明的示例性实施方式提供长效人生长激素(hGH)缀合物液体制剂，其包括(i)hGH缀合物，其中hGH被连接至免疫球蛋白Fc区，和(ii)无白蛋白的稳定剂，其包括缓冲溶液、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂。
在下文，详细描述了长效hGH缀合物和其组成成分。进一步，本发明中公开的每个描述和实施方式可以在本文应用于描述不同的描述和实施方式。换句话说，本发明中公开的多种组分的所有组合包括在本发明的范围内。
如本文使用的，术语“长效人生长激素(hGH)缀合物”指的是作为生理学活性肽hGH被连接至运载体的蛋白质的缀合物，其具有与天然hGH相比改进的体内生理学持续性。具体地，缀合物可以是生理学活性肽hGH被连接至免疫球蛋白Fc区的蛋白质。
运载体可以选自免疫球蛋白Fc区、白蛋白、转铁蛋白和PEG，并且具体地是免疫球蛋白Fc区，但是不限于此。
如本文使用的，术语“长效”指的是与天然hGH相比改进的生理学活性耐久性，而术语“缀合物”指的是hGH被连接至运载体的形式。
具体地，长效hGH缀合物处于hGH和运载体——其具体地是免疫球蛋白Fc区——经由非肽基聚合物被连接的形式或hGH和蛋白质形式的运载体——其具体地是免疫球蛋白Fc区——使用重组技术被连接的融合蛋白的形式，但是不限于此。在融合蛋白的情况下，hGH和蛋白质形式的运载体——具体地免疫球蛋白Fc区——经由肽连接体被连接的形式包括在本发明的范围中。
在本发明中，hGH包括与天然hGH具有相同氨基酸序列的hGH、在天然hGH的氨基酸序列上具有修饰的hGH、或与天然hGH具有类似活性的肽衍生物。修饰的实例包括构成hGH的氨基酸的置换、缺失和插入，但是不限于此，并且氨基酸序列可以被修饰，只要其生物学活性不被显著地影响。
另外，hGH可以是天然或重组形式，具体地使用微生物作为宿主细胞制备的重组hGH，但是不限于此。微生物的实例是大肠杆菌。
hGH序列可以由通用数据库比如NCBI GenBank获得。另外，hGH可以与天然hGH的氨基酸序列具有70％或更高，具体地80％或更高，更具体地90％或更高，甚至更具体地95％或更高，和最具体地98％或更高的氨基酸序列同源性，只要它具有hGH活性。
如本文使用的，术语“非肽基聚合物”指的是一种生物相容性聚合物，其中一个或多个重复单元被连接，并且重复单元通过肽键之外的任何共价键彼此接合。在本发明中，术语非肽基聚合物可以与术语非肽基连接体可互换地使用。
非肽基聚合物可以选自包括聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇-丙二醇共聚物、聚氧乙烯多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯乙醚、聚乳酸(PLA)和聚乳酸-乙醇酸(PLGA)的生物降解聚合物、脂质聚合物、几丁质、透明质酸、和其组合。具体地，非肽基聚合物是聚乙二醇，但是不限于此。另外，本领域已知的衍生物和本领域技能内可以容易制备的那些包括在本发明的范围中的非肽基聚合物中。
在通过常规的符合读框的融合方法获得的融合蛋白中使用的肽连接体具有的缺点在于，通过蛋白水解酶容易体内切割，并且因而不能如预期获得通过运载体增加活性药物的血液半衰期的效果。然而，当使用对蛋白水解酶具有抗性的聚合物时，可以维持与运载体类似的肽的血液半衰期。因此，可以非限制性地使用任何非肽基聚合物，只要它是具有上述功能的聚合物，即，对体内蛋白水解酶具有抗性的聚合物。非肽基聚合物具有1kDa至100kDa，和具体地1kDa至20kDa范围内的分子量，但是不限于此。另外，连接至免疫球蛋白Fc区的本发明的非肽基聚合物可以是一种类型的聚合物或不同类型的聚合物的组合。
如本文使用的，术语“免疫球蛋白Fc区”指的是免疫球蛋白的重链恒定区2(CH2)和重链恒定区3(CH3)——不包括重链和轻链的可变区、重链恒定区1(CH1)和轻链恒定区1(CL1)。而且，本发明的免疫球蛋白Fc区可以是延长的Fc区，其包括除免疫球蛋白的重链和轻链的可变区以外的重链恒定区1(CH1)和/或轻链恒定区1(CL1)的一部分或全部，只要它具有与天然Fc区相比基本上等价的或改进的效果。另外，免疫球蛋白Fc区可以是片段，其中对应于CH2和/或CH3的相当长部分的氨基酸序列被缺失。即，本发明的免疫球蛋白Fc区可以包括1)CH1结构域、CH2结构域、CH3结构域和CH4结构域，2)CH1结构域和CH2结构域，3)CH1结构域和CH3结构域，4)CH2结构域和CH3结构域，5)至少一个结构域和免疫球蛋白铰链区(或铰链区的一部分)的组合，或6)重链恒定区和轻链恒定区中每个结构域的二聚物。
由于免疫球蛋白Fc区具有与完整免疫球蛋白分子相比相对低的分子量，其在缀合物的制备、纯化和产率方面是优选的。进一步，因为显示由于每种抗体的不同氨基酸序列引起的高异质性的Fab区被去除，可以预期同质性显著地增加并且血液中抗原性的可能性降低。
本发明的免疫球蛋白Fc区不仅包括天然氨基酸序列而且还包括其衍生物(突变体)。氨基酸序列衍生物指的是通过缺失、插入、非保守或保守置换天然氨基酸序列的至少一个氨基酸残基或其组合而具有与天然序列不同的序列。例如，在IgG Fc中，214位至238位、297位至299位、318位至322位、或327位至331位的氨基酸残基，其已知对蛋白质结合是重要的，可以是适合的修饰目标。
另外，可以使用其它类型的衍生物，包括去除能够形成二硫键的区、去除天然Fc的N-端处的几个氨基酸残基、或在天然Fc的N-端处添加甲硫氨酸残基的衍生物。进一步，为了消除效应子功能，可以去除补体-结合位点，例如，c1q-结合位点或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)位点。WO97/34631和WO 96/32478中公开了用于制备免疫球蛋白Fc区的这样的序列衍生物的技术。
不修饰总体分子活性的蛋白质和肽中的氨基酸的交换是本领域已知的(H.Neurath,R.L.Hill,The Proteins,Academic Press,New York,1979)。最常见的交换是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Thy/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly在两个方向上的交换。在一些情况下，可以通过磷酸化、硫酸化、丙烯酰化、糖基化、甲基化、法尼基化、乙酰化和酰胺化修饰Fc区。
Fc衍生物展现了与本发明的Fc区相同的生物学活性，并且它们针对热和pH具有增强的结构稳定性。
另外，这些Fc区可以由从任何或其它动物比如牛、山羊、猪、小鼠、兔、仓鼠、大鼠和豚鼠分离的天然蛋白质获得，或可以是从转化的动物细胞或微生物获得的重组体、或其衍生物。从天然形式获得Fc区的方法可以包括从人或动物分离整个免疫球蛋白并使用蛋白酶对它进行处理。当使用木瓜蛋白酶处理时，免疫球蛋白被切割为Fab和Fc区，并且当使用胃蛋白酶处理时，切割为pF'c和F(ab)2。Fc或pF'c可以通过尺寸排阻色谱法分开以分离Fc或pF'c。具体地，Fc区可以是重组免疫球蛋白Fc区，其中从微生物获得人源性免疫球蛋白Fc区，但是不限于此。
此外，免疫球蛋白Fc区可以处于具有天然糖链、与天然形式相比增加的糖链、或与天然形式相比减少的糖链的形式，或可以处于去糖基化形式。可以使用本领域常用的方法进行免疫球蛋白Fc糖链的增加、减少或去除，包括化学方法、酶促方法、和使用微生物的遗传工程方法。在此，从Fc去除糖链的免疫球蛋白Fc区具有对c1q的显著降低的结合亲和力以及降低的或消除的抗体依赖性细胞毒性或补体依赖性细胞毒性，并且因而可以避免不必要的体内免疫应答。就此而言，去糖基化或无糖基化形式的免疫球蛋白Fc区作为药物运载体对本发明的目标可以是更合适的。
如本文使用的，术语“去糖基化”指的是通过酶去除糖的Fc区，而术语“无糖基化”指的是在原核生物、具体地大肠杆菌中产生并且因而没有被糖基化的Fc区。
同时，免疫球蛋白Fc区可以起源自人或其它动物，包括牛、山羊、猪、小鼠、兔、仓鼠、大鼠和豚鼠，具体地起源自人，但是不限于此。
另外，免疫球蛋白Fc区可以是源自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM的Fc区，或通过其组合或杂合制备的Fc区。具体地，它可以源自IgG或IgM，其是人血液中最丰富的，并且更具体地源自IgG，其已知改进配体-结合蛋白质的半衰期。
如本文使用的，术语“组合”指的是当形成二聚物或多聚物时编码相同起源的单链免疫球蛋白Fc区的多肽和不同起源的单链多肽之间的连接。即，二聚物或多聚物可以由选自IgG Fc、IgA Fc、IgM Fc、IgD Fc和IgE Fc片段的两种或更多种片段形成。
如本文使用的，术语“杂合”指的是对应于在单链免疫球蛋白Fc区中存在的不同起源的免疫球蛋白Fc片段的至少两种序列。在本发明中，可以使用多种类型的杂合。换句话说，结构域的杂合可以由选自IgG Fc、IgM Fc、IgA Fc、IgE Fc和IgD Fc的CH1、CH2、CH3和CH4的一种至四种结构域组成，并且可以包括铰链区。
同时，IgG还可以被分为亚类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，并且其组合或杂合在本发明中也是可能的。具体地，IgG可以是亚类IgG2和IgG4，并且更具体地IgG4的Fc区，其几乎不具有效应子功能，比如补体依赖性细胞毒性(CDC)。
还更具体地，作为本发明的药物运载体的免疫球蛋白Fc区是人IgG4源性非糖基化的Fc区。人源性Fc区相对于非人源性Fc区是优选的，非人源性Fc区可能在人体中充当抗原并且引起非期望的免疫应答比如针对抗原产生新抗体。
可以通过如下制备在本发明中使用的长效hGH缀合物：将通过任何方法由天然或重组形式制备的hGH连接至使用某种蛋白酶处理天然IgG制备或使用重组技术由转化的细胞产生的免疫球蛋白Fc区。作为用于此目的的连接方法，缀合物可以通过使用非肽基聚合物交联hGH和免疫球蛋白Fc区制备，或可以产生为融合蛋白，其中使用重组技术连接hGH和免疫球蛋白Fc区。
韩国专利登记号10-0725315(使用免疫球蛋白片段的蛋白质缀合物及其制备方法)和美国专利申请公布号2013-0288333的说明书被包括作为用于制备在本发明中使用的长效hGH缀合物的引用的本发明的参考文献。
在下文，将详细描述长效hGH缀合物液体制剂的组成。如上面描述的，本发明中公开的每个描述和实施方式可以应用于每个其它描述和实施方式。换句话说，本发明中公开的多种要素的所有组合包括在本发明的范围内。
如本文使用的，术语“长效hGH缀合物液体制剂”指的是包括长效hGH缀合物液体制剂。液体制剂包括用于内部和外部应用的液体制剂。在本发明中，长效hGH缀合物液体制剂可以包括药学有效量的长效hGH缀合物。一般而言，hGH的药学有效量在单次使用的小瓶中是大约1mg至3mg，但是不限于此。
本发明的液体制剂中包含的长效hGH缀合物的浓度可以是1mg/mL至200mg/mL，具体地1mg/mL至100mg/mL，更具体地10mg/mL至58.5mg/mL，但是不限于此。当以低浓度以及高浓度包括长效hGH缀合物时，本发明的长效hGH缀合物液体制剂可以稳定地储存长效hGH缀合物而没有沉淀，使得能够供应体内存在的高浓度hGH。
本发明的长效hGH缀合物液体制剂可以包括药学有效量的长效hGH缀合物以及无白蛋白的稳定剂。
如本文使用的，术语“稳定剂”指的是包括允许长效hGH缀合物稳定储存的成分的试剂。关于蛋白质比如长效hGH缀合物，半衰期稳定性对于确保剂量准确性和阻抑抗原性物质比如长效hGH缀合物的聚集体的潜在形成是重要的。
稳定剂优选地包括缓冲剂、糖醇和非离子型表面活性剂，并且它可以进一步包括防腐剂。更具体地，稳定剂可以基本上由缓冲剂、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂构成，但是不限于此。另外，稳定剂可以不包括等张剂比如氯化钠，但是不限于此。
缓冲剂在维持液体制剂的pH中发挥作用以防止液体制剂的pH的显著波动，用于长效hGH缀合物的稳定性。
缓冲剂可以包括碱性盐(例如，磷酸钠或磷酸钾，或其一元或二元盐)、柠檬酸钠/柠檬酸、醋酸钠/醋酸，和本领域已知的任何其它药学上可接受的pH缓冲剂，以及其组合。
出于本发明的目的，缓冲剂更具体地是醋酸或柠檬酸缓冲剂(例如，醋酸钠或柠檬酸钠)，并且还更具体地是柠檬酸盐缓冲剂。
组成醋酸盐或柠檬酸盐缓冲剂的醋酸盐或柠檬酸盐具有在1mM至100mM，更具体地3mM至100mM的范围中的浓度，但是不限于此。
缓冲剂具有在4.0至8.0，更具体地4.0至7.0的范围中的pH，但是不限于此。
糖醇可以在改进长效hGH缀合物的稳定性中发挥作用。
相对于液体制剂的总体积，本发明中使用的糖醇具有具体地在1％(w/v)至20％(w/v)，并且更具体地1％(w/v)至10％(w/v)的范围中的浓度。
糖醇可以是选自甘露醇、蔗糖和山梨醇中的至少一种。糖醇可以具体地是甘露醇或山梨醇，并且更具体地甘露醇，但是不限于此。
非离子型表面活性剂在通过降低蛋白质溶液的表面张力来防止蛋白质被吸附至疏水表面上或聚集中发挥作用。
本发明中可以使用的非离子型表面活性剂的具体实例是聚山梨醇酯类型非离子型表面活性剂、泊洛沙姆类型非离子型表面活性剂、和其一种或两种的组合。具体地，可以使用聚山梨醇酯类型非离子型表面活性剂，但是非离子型表面活性剂不限于此。
聚山梨醇酯类型非离子型表面活性剂的实例是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80，但是不限于此。具体地，可以使用聚山梨醇酯80，但是非离子型表面活性剂不限于此。
本发明的液体制剂可以包括低浓度的非离子型表面活性剂：0.1％(w/v)以下，并且更具体地0.001％(w/v)至0.1％(w/v)的范围中，但是不限于此。
本发明的稳定剂优选地不包括白蛋白。由于人血清白蛋白——其可以被用作蛋白质的稳定剂——由人血液产生，存在被人源性病原性病毒感染的风险。存在明胶或牛血清白蛋白在一些患者中可能引起疾病或诱发变态反应的可能性。相比之下，由于本发明的无白蛋白的稳定剂不包括异源蛋白质比如人源性或动物源性血清白蛋白或纯化的明胶，不存在病毒感染的风险。
另外，本发明的稳定剂可以进一步包括糖类、多羟基醇和中性氨基酸。
为了增加长效hGH缀合物的保存期稳定性，可以进一步包括糖类和多羟基醇。糖类的具体实例包括单糖比如甘露糖、葡萄糖、果糖和木糖，以及多糖比如乳糖、麦芽糖、蔗糖、棉子糖和葡聚糖。多羟基醇的那些包括丙二醇、低分子量聚乙二醇、甘油、低分子量聚丙二醇和其组合。
除上面描述的缀合物、缓冲剂、糖醇和非离子型表面活性剂之外，本发明的长效hGH缀合物液体制剂还可以进一步包括防腐剂以防止用于多次施用的制剂的微生物污染。
如本文使用的，术语“防腐剂”指的是药物制剂中添加的起抗菌剂作用的化合物。防腐剂的实例包括苯乙铵、氯己啶、苯酚、间甲酚、苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯丁醇、邻甲酚、对甲酚、氯甲酚、氯化苯甲烃铵、硝酸苯汞、硫柳汞和苯甲酸，但是不限于此。
防腐剂可以单独使用或以两种或更多种的随机组合使用。具体地，本发明的液体制剂可以包括选自间甲酚、苯酚和苯甲醇的至少一种作为防腐剂。对于本发明的液体制剂，可以以0.01％(w/v)至3％(w/v)，具体地0.1％(w/v)至1.0％(w/v)的量包括防腐剂，但是不限于此。
在本发明的具体实例中，苯酚、间甲酚和苯甲醇中的每种以0.1％(w/v)至1.0％(w/v)的量包括在本发明的液体制剂中并且分析其对长效hGH缀合物的稳定性的作用。结果，维持缀合物的稳定性而没有长效hGH缀合物的沉淀。
因此，其中稳定剂进一步包括上面描述的防腐剂的新型长效hGH缀合物液体制剂可以被用于多次施用。
除上面描述的缓冲剂、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂之外，本领域已知的其它成分或物质也可以选择性地包括在本发明的液体制剂中，只要本发明的效果不被影响。
更具体地，液体制剂可以包括(i)长效hGH缀合物，其中hGH被连接至免疫球蛋白Fc区；和(ii)无白蛋白的稳定剂，其由缓冲溶液、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂构成，但是不限于此。
在此，缓冲剂可以是柠檬酸盐缓冲剂，糖醇可以是甘露醇，表面活性剂可以是聚山梨醇酯80，并且防腐剂可以选自间甲酚、苯酚和苯甲醇。
还更具体地，当长效hGH缀合物的浓度在10.0mg/mL和58.5mg/mL之间时，液体制剂可以包括20mM的柠檬酸钠(pH 5.2)，4％甘露醇，0.005％聚山梨醇酯80，和作为防腐剂的间甲酚、苯酚、或苯甲醇。
另外，制剂可以用于治疗垂体性侏儒症、生长激素缺乏、普-韦二氏综合征、或特发性身材矮小症。即，制剂可以是药物组合物。
在另一方面，本发明提供了用于制备液体制剂的方法。
液体制剂和其成分如上面描述的。
制备方法可以包括使长效hGH缀合物——其中hGH被连接至免疫球蛋白Fc区——与缓冲剂、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂混合。
更具体地，本发明的液体制剂制备方法可以包括配制长效hGH缀合物和使配制的长效hGH缀合物与包括缓冲剂、糖醇和非离子型表面活性剂的稳定剂混合。另外，可以通过添加防腐剂至稳定剂来制备用于多次施用的稳定的长效hGH缀合物液体制剂。
根据本发明的实施方式，包括柠檬酸钠作为缓冲剂，甘露醇作为糖醇，聚山梨醇酯80作为表面活性剂，和间甲酚、苯酚、或苯甲醇作为防腐剂的稳定剂显示是针对低和高浓度长效hGH缀合物二者提供稳定性而没有沉淀的稳定剂。即，当长效hGH缀合物的浓度在10.0mg/mL和58.5mg/mL之间时，可以在没有沉淀的情况下制备稳定的液体制剂。
在还另一方面，本发明提供了长效hGH缀合物液体制剂用于制备治疗垂体性侏儒症、生长激素缺乏、普-韦二氏综合征、或特发性身材矮小症的药物的用途，该长效hGH缀合物液体制剂包括(a)长效hGH缀合物，其中hGH被连接至免疫球蛋白Fc区，和(b)无白蛋白的稳定剂，其包括缓冲溶液、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂。
液体制剂和其成分如上面描述的。
包括hGH的长效hGH缀合物液体制剂可以具有减轻、预防或治疗垂体性侏儒症、生长激素缺乏、普-韦二氏综合征、或特发性身材矮小症的作用。
在还另一方面，本发明提供了治疗垂体性侏儒症、生长激素缺乏、普-韦二氏综合征、或特发性身材矮小症的方法，其包括给需要其的对象施用长效hGH缀合物液体制剂，该长效hGH缀合物液体制剂包括(a)长效hGH缀合物，其中hGH被连接至免疫球蛋白Fc区，和(b)无白蛋白的稳定剂，其包括缓冲溶液、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂。
液体制剂和其成分如上面描述的。
在下文，将参考下面的实施例详细描述本发明。实施例仅出于说明性目的被公开并且不应当解释为限制本发明的范围。
制备实施例：制备长效hGH缀合物
ALD-PEG-ALD——在两个末端处具有醛官能团的分子量为大约3.4kDa的聚乙二醇——与hGH(分子量为22kDa)缀合，并且然后被连接至人IgG4源性无糖基化的Fc区(大约50kDa)的N-端以制备hGH-PEG-Fc缀合物(在下文称为“长效hGH缀合物”)，其是本发明的代表性长效hGH缀合物。然后纯化长效hGH缀合物。
实施例1：根据防腐剂评价低浓度长效hGH缀合物液体制剂的稳定性
本发明人已经发明了长效hGH缀合物液体制剂，其包括药理学有效量的生理学活性肽hGH被连接至免疫球蛋白Fc区的长效hGH缀合物、缓冲剂、糖醇、表面活性剂和等张剂(韩国申请公布号10-2010-0067796)，以及高和低浓度长效hGH缀合物液体制剂，其包括药理学有效量的长效hGH缀合物、缓冲剂、糖醇和表面活性剂(韩国申请公布号10-2015-0035681)。
然而，由于仍然需要生产进一步包括防腐剂的长效hGH缀合物液体制剂，本发明人尝试研发优化的长效hGH缀合物液体制剂，其包括如下面显示的防腐剂。具体地，考察添加用于多次施用的防腐剂对低浓度hGH缀合物的稳定性的作用。
下面表1中显示的组合物被用作长效hGH缀合物液体制剂并且在4℃和25℃下储存0至3个月，并且使用离子交换色谱法(IE-HPLC)和尺寸排阻色谱法进行分析。表2和3中的IE-HPLC(％)和SE-HPLC(％)是(面积％/开始面积％)，其指示长效hGH缀合物相对于初始值的残留率。表2显示了在4℃下储存的低浓度长效hGH缀合物的IE-HPLC和SE-HPLC残留率，而表3显示了在25℃下储存的低浓度长效hGH缀合物的IE-HPLC和SE-HPLC残留率。
[表1]
[表2]
[表3]
如上面的结果中显示的，作为在4℃下储存后IE-HPLC和SE-HPLC的结果，当长效hGH缀合物的浓度是10.0mg/mL时，在缀合物(表2的#2至#4)——其进一步包括间甲酚、苯酚或苯甲醇作为防腐剂——和不具有任何防腐剂的缀合物(表2的#1)的稳定性之间不存在显著差异。
另外，作为在25℃下储存后IE-HPLC和SE-HPLC的结果，当长效hGH缀合物的浓度是10.0mg/mL时，与不具有任何防腐剂的缀合物(表3的#1)相比，进一步包括防腐剂的缀合物(表3的#2至#4)的稳定性轻微降低，其不是显著的差异。
当在4℃和25℃下储存时，低浓度长效hGH缀合物的稳定性根据防腐剂的类型是类似的。
实施例2：根据防腐剂评价高浓度长效hGH缀合物液体制剂的稳定性
基于实施例1中确认的液体制剂，考察添加用于多次施用的防腐剂对高浓度hGH缀合物的稳定性的作用。
下面表4中显示的组合物被用作长效hGH缀合物液体制剂并且在4℃和25℃下储存0至3个月，并且使用离子交换色谱法(IE-HPLC)和尺寸排阻色谱法(SE-HPLC)进行分析。表5和6中的IE-HPLC(％)和SE-HPLC(％)是(面积％/开始面积％)，其指示长效hGH缀合物相对于初始值的残留率。表5显示了在4℃下储存后高浓度长效hGH缀合物的IE-HPLC和SE-HPLC残留率，而表6显示了在25℃下储存后高浓度长效hGH缀合物的IE-HPLC和SE-HPLC残留率。
[表4]
[表5]
[表6]
如上面的结果中显示的，作为在4℃下储存后IE-HPLC和SE-HPLC分析的结果，当长效hGH缀合物的浓度是58.5mg/mL时，在缀合物(表5的#2至#4)——其包括间甲酚、苯酚、或苯甲醇作为防腐剂——和不具有任何防腐剂的缀合物(表5的#1)的稳定性之间不存在显著差异。
另外，作为在25℃下储存后的IE-HPLC和SE-HPLC，当长效hGH缀合物的浓度是58.5mg/mL时，与不具有任何防腐剂的缀合物(表6的#1)相比，包括防腐剂的缀合物(表6的#2至#4)的稳定性轻微降低，其不是显著的差异。
当在4℃和25℃下储存时，高浓度长效hGH缀合物的稳定性根据防腐剂的类型是类似的。
具体而言，如实施例1和2的结果中显示的，在20mM柠檬酸钠(pH 5.2)、4％甘露醇和0.005％聚山梨醇酯80的条件下当长效hGH缀合物的浓度在10.0mg/mL和58.5mg/mL之间时，缀合物显示了优越的稳定性，即使它包括间甲酚、苯酚、或苯甲醇作为防腐剂。
虽然已经参考具体的说明性实施方式描述了本发明，但是本发明所属领域技术人员将理解可以以其它具体的形式呈现本发明，而不背离本发明的技术精神或基本特性。因此，上面描述的实施方式在所有方面被认为是说明性的并且不是限制性的。另外，本发明的范围由所附权利要求而不是具体实施方式限定，并且应当理解来源于本发明的含义和范围的所有修改或变型以及其等价物包括在所附权利要求的范围中。

Claims (24)

1.长效人生长激素(hGH)缀合物液体制剂，其包括：
(i)长效hGH缀合物，其中所述hGH被连接至免疫球蛋白Fc区；和
(ii)无白蛋白的稳定剂，其包括缓冲溶液、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂，而不包括等张剂。
2.权利要求1所述的液体制剂，其中所述长效hGH缀合物处于融合蛋白的形式，其中hGH和免疫球蛋白Fc区经由非肽基聚合物或重组技术连接。
3.权利要求2所述的液体制剂，其中所述非肽基聚合物选自聚丙二醇、聚乙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、聚氧乙烯多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯乙醚、生物降解聚合物比如聚乳酸(PLA)和聚乳酸-乙醇酸(PLGA)、脂质聚合物、几丁质、透明质酸、和其组合。
4.权利要求2所述的液体制剂，其中所述非肽基聚合物是聚乙二醇。
5.权利要求1所述的液体制剂，其中所述缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂或醋酸盐缓冲剂。
6.权利要求1所述的液体制剂，其中所述缓冲剂具有在4.0至7.0的范围中的pH。
7.权利要求1所述的液体制剂，其中所述糖醇是选自甘露醇、蔗糖和山梨醇的至少一种。
8.权利要求1或7所述的液体制剂，其中相对于所述液体制剂的总体积，所述糖醇具有1％(w/v)至10％(w/v)的范围中的浓度。
9.权利要求1所述的液体制剂，其中所述非离子型表面活性剂是聚山梨醇酯或泊洛沙姆。
10.权利要求1或9所述的液体制剂，其中相对于所述液体制剂的总体积，所述非离子型表面活性剂具有在0.001％(w/v)至0.1％(w/v)的范围中的浓度。
11.权利要求1所述的液体制剂，其中所述防腐剂是选自间甲酚、苯酚和苯甲醇的至少一种。
12.权利要求1或11所述的液体制剂，其中相对于所述液体制剂的总体积，所述防腐剂具有在0.01％至1.0％(w/v)的范围中的浓度。
13.权利要求1所述的液体制剂，其中所述液体制剂用于多次施用。
14.权利要求1所述的液体制剂，其中所述长效hGH缀合物具有在1mg/mL至100mg/mL的范围中的浓度。
15.权利要求1所述的液体制剂，其中所述稳定剂进一步包括选自糖类、多烃基醇和氨基酸的至少一种。
16.权利要求1所述的液体制剂，其中所述hGH是与天然hGH具有相同氨基酸序列的hGH、在所述天然hGH的氨基酸序列上具有修饰的hGH、或与所述天然hGH具有类似活性的衍生物。
17.权利要求1所述的液体制剂，其中所述长效hGH缀合物液体制剂包括：
(i)长效hGH缀合物，其中所述hGH被连接至免疫球蛋白Fc区；和
(ii)无白蛋白的稳定剂，其由缓冲溶液、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂构成。
18.权利要求1或17所述的液体制剂，其中所述缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂，所述糖醇是甘露醇，所述表面活性剂是聚山梨醇酯80，并且所述防腐剂选自间甲酚、苯酚和苯甲醇。
19.权利要求1所述的液体制剂，其中所述免疫球蛋白Fc区源自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM。
20.权利要求1所述的液体制剂，其中所述免疫球蛋白Fc区中的每个结构域是具有源自选自IgG、IgA、IgD、IgE和IgM的免疫球蛋白的不同起源的结构域的杂合。
21.权利要求1所述的液体制剂，其中所述免疫球蛋白Fc区是由单链免疫球蛋白组成的二聚物或多聚物，单链免疫球蛋白由具有相同起源的结构域构成。
22.权利要求1所述的液体制剂，其中所述免疫球蛋白Fc区是无糖基化的人IgG4Fc区。
23.权利要求1所述的液体制剂，其中所述制剂被用于治疗垂体性侏儒症、生长激素缺乏、普-韦二氏综合征、或特发性身材矮小症。
24.用于制备权利要求1所述的制剂的方法，其包括使所述hGH被连接至所述免疫球蛋白Fc区的所述长效hGH缀合物与缓冲剂、糖醇、非离子型表面活性剂和防腐剂混合。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20220054586A1 (en) * 2018-09-10 2022-02-24 Samsung Bioepis Co., Ltd. Liquid composition comprising protein
KR20220095204A (ko) * 2019-10-30 2022-07-06 제이씨알 파마 가부시키가이샤 혈청 알부민과 성장 호르몬의 융합 단백질을 함유하는 수성 의약 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100725315B1 (ko) * 2003-11-13 2007-06-07 한미약품 주식회사 면역글로불린 단편을 이용한 단백질 결합체 및 그의제조방법
CN103068366A (zh) * 2010-07-14 2013-04-24 韩美科学株式会社 长效人生长激素缀合物的液体制剂
KR20130111462A (ko) * 2012-03-30 2013-10-10 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬의 고농도 액상 제제
KR20150035681A (ko) * 2013-09-27 2015-04-07 한미약품 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 제제

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU5103200A (en) * 1999-05-31 2000-12-18 Mitsubishi Chemical Corporation Freeze dried hgf preparations
KR20100103846A (ko) * 2007-12-21 2010-09-28 메르크 파텐트 게엠베하 내부 고체 코어 내에 성장 호르몬을 함유하는 고체 지질 마이크로캡슐

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100725315B1 (ko) * 2003-11-13 2007-06-07 한미약품 주식회사 면역글로불린 단편을 이용한 단백질 결합체 및 그의제조방법
US20130288333A1 (en) * 2003-11-13 2013-10-31 Hanmi Science Co., Ltd Protein complex using an immunoglobulin fragment and method for the preparation thereof
CN103068366A (zh) * 2010-07-14 2013-04-24 韩美科学株式会社 长效人生长激素缀合物的液体制剂
KR20130111462A (ko) * 2012-03-30 2013-10-10 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬의 고농도 액상 제제
KR20150035681A (ko) * 2013-09-27 2015-04-07 한미약품 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 제제

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