KR101140885B1 - 신규 플라본 유도체를 포함하는 아토피성 피부염 질환의 치료 및 예방용 조성물 - Google Patents

신규 플라본 유도체를 포함하는 아토피성 피부염 질환의 치료 및 예방용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 회화나무에서 분리된 염증억제 활성이 있다고 알려진 아이소플라본(isoflavone) 계열의 소포리코사이드(Sophoricoside) 유도체 화합물 및 이의 용도에 관한 것으로서, 플라본 계열의(flavone) 화합물들을 합성하여 이들이 아토피성 피부염증 반응을 유도하는 MCP-1, IL-6 및 IL-8을 효과적으로 억제함을 확인함으로써, 이를 포함하는 조성물을 아토피성 피부염 질환의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물 및 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있다.
회화나무, 소포리코사이드, 이소플라본, 플라본, 아토피성 피부염

Description

신규 플라본 유도체를 포함하는 아토피성 피부염 질환의 치료 및 예방용 조성물 {A composition comprising novel flavone derivative for treating and preventing atopic dermatitis disease}
본 발명은 회화나무에서 분리된 염증억제 활성이 있다고 알려진 아이소플라본(isoflavone) 계열의 소포리코사이드(Sophoricoside) 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것이다.
[문헌 1] Hanifin JM et al., Guidelines of care for atopic dermatitis. J. Am Acad . Dermatol ., 50, pp391-404, 2004.
[문헌 2] Williams HC., Clinical practice. Atopic dermatitis. N. Engl . J. Med ., 352, pp2314-24, 2005.
[문헌 3] Oh JW et al., Nationwide study for epidemiological change of atopic dermatitis in school aged children between 1995 and 2000 and kindergarten aged children in 2003 in Korea, Pediatr . Allergy Respir . Dis ., 13, pp227-237, 2003.
[문헌 4] Colloff MJ., Exposure to house dust mites in homes of people with atopic dermatitis. Br . J. Dermatol ., 127, pp322-327, 1992.
[문헌 5] Jeon SY et al., Correlation between house dust mite allergen concentrations in scalp dander and clinical severity of atopic dermatitis in children. Pediatr . Allergy Respir. Dis ., 9, pp32-40, 1999.
[문헌 6] Kino T et al., Tissue-specific glucocorticoid resistance hypersensitivity syndromes: multifactorial states of clinical importance. J. Allergy Clin . Immunol ., 109, pp609-613, 2002.
[문헌 7] Lu B et al., Abnorm alities in monocyte recruitment and cytokine expression in monocyte chemoattractant protein 1- deficient mice. J. Exp . Med ., 187, pp601-608, 1998.
[문헌 8] Karpus WJ et al., MIP-1 alpha and MCP-1 differentially regulate acute and relapsing autoimmune encephalomy elitis asell as Th1/Th2 lymphocyte differentiation. J. Leukoc . Biol ., 62, pp681-687, 1997.
[문헌 9] Harada A et al., Essential involvement of interleukin-8 (IL-8) in acute inflammation. J, Leukoc , Biol ,, 56, pp559-564, 1994.
[문헌 10] Fujimura M et al., Role of leukotriene B4 in bronchial hyperresponsiveness induced by interleukin 8. Eur . Respir . J., 11, pp306-311, 1998
[문헌 11] Kurashima K et al., Increase of chemokine levels in sputum precedes exacerbation of acute asthma attacks. J. Leukoc . Biol ., 59, pp313-316, 1996
[문헌 12] Bae, E. A. et al., Anti-Helicobacter pylori activity of herbal medicines. Biol Pharm Bull. 21, pp.990, 1998.
[문헌 13] Kim J. H et al., Decursin inhibits induction of inflammatory mediators by blocking nuclear factor-k B activation in macrophages. Molecular Pharmacology, 69(6), pp1783-1790, 2006.
[문헌 14] Yun J. Lee CK et al., Differential inhibitory inducts of sophoricoside analogs on bioactivity of several cytokines. Life Sciences, 67, pp2855-2863, 2000.
[문헌 15] Hirano Y, Shichijo M et al. Synergistic effect of PCD-2 via prostanoid DP receptor on TNF-alpha-induced production of MCP-1 and IL-8 in human monocytice THP-1 cells, Eur . J. Pharmacol 29(560), pp.81-88, 2007.
아토피성 피부염은 소양증, 건조증, 습진성 병변, 그리고 각질 등이 특징으로 만성 재발성 결과를 보이는 만성염증성 피부질환이다(Hanifin JM et al., Guidelines of care for atopic dermatitis. J. Am Acad. Dermatol., 50, pp391-404, 2004). 최근 우리나라를 포함하여 세계적으로 아토피성 피부염의 발병률이 급격하게 증가하고 있는 추세이나, 아직 근본적으로 질병의 경과를 바꿀 수 있는 치료법이 개발되지 못하여 대증적인 약물 치료만이 시행되고 있는 상태이다(Williams HC., Clinical practice. Atopic dermatitis. N. Engl. J. Med., 352, pp2314-24, 2005).
아토피성 피부염의 병인기전은 아직 완전하게 밝혀지지 않았지만 환경 내에 흔한 물질(알레르겐)에 대한 과민한 면역반응(알레르기반응)으로 피부에 만성적인 염증반응을 유발시켜 아토피성 피부염이 발생하는 것으로 알려져 왔다(Oh JW et al., Nationwide study for epidemiological change of atopic dermatitis in school aged children between 1995 and 2000 and kindergarten aged children in 2003 in Korea. Pediatr . Allergy Respir . Dis ., 13, pp227-237, 2003). 특히 그 근거로 집먼지 진드기에 노출된 양에 비례하여 아토피성 피부염의 발병 빈도 (Colloff MJ., Exposure to house dust mites in homes of people with atopic dermatitis. Br . J. Dermatol ., 127, pp322-327, 1992)과 아토피성 피부염의 중증도간의 유의한 상관성을 들 수 있다(Jeon SY et al., Correlation between house dust mite allergen concentrations in scalp dander and clinical severity of atopic dermatitis in children. Pediatr . Allergy Respir . Dis ., 9, pp32-40, 1999). 또한 환경 내에서 집먼지 진드기에 대한 노출을 줄임으로써 아토피성 피부염의 중증도를 감소시킬 수 있다고 알려져 있다.
스테로이드는 기관지천식 등의 염증성 질환에서 가장 널리 사용되는 효과적인 치료제이다. 최근 스테로이드에 대한 기전이 많이 밝혀지고 있으나, 아직은 그 기전을 완전히 이해하지 못한 상태이며 기관지 천식이나 류마티스 관절염 등의 환자들 중 일부는 스테로이드에 반응하지 않는 스테로이드 저항성을 보인다. 이러한 스테로이드 저항성을 보이는 환자들이 많지는 않으나 대개가 중증이고, 치료에 의한 합병증에 시달리며 치료비도 많이 들어 스테로이드 저항성의 기전을 밝히는 것은 조속히 해결해야 할 숙제이다(Kino T et al., Tissue-specific glucocorticoid resistance hypersensitivity syndromes: multifactorial states of clinical importance. J. Allergy Clin . Immunol ., 109, pp609-613, 2002).
만성 염증성 반응에서는 많은 세포를 통해 섬유화에 관련된 종양성장인자(Tumor growth factor-β, TGF-β), IL-4 및 IL-13 등의 다양한 사이토카인이 분비된다. 사이토카인은 섬유모세포(fibroblast)를 활성화시키는 IL-6의 분비를 증가시킴으로써 많은 섬유모세포의 분화 및 증식을 일으키고 세포외기질(extra cellular matrix)을 과생산하여 세포 및 조직의 변형과 섬유화를 야기시킨다.
아토피 피부염이 스테로이드 계통의 약제를 통해 치료가 되나, 만성화되면서 위와 같은 조직의 변형 및 섬유화로 인해 스테로이드 제제에 대한 내성을 보이게 하는 이유이다. 단핵구 화학유인물질 단백질-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1;이하 MCP-1)은 케모카인 수용체(Chemokine receptor;이하 CCR2)에 결합하며, MCP-1유전자가 제거된 생쥐는 단핵구(monocytes)에 대한 화학주성이 손상을 받고 특정 균의 감염에 대하여 저항성이 약화되는 것이 관찰되었으며(Lu B et al., Abnorm alities in monocyte recruitment and cytokine expression in monocyte chemoattractant protein 1-deficient mice. J. Exp . Med ., 187, pp601-608, 1998), 이러한 현상은 CCR2 유전자가 제거된 동물에서 관찰되는 증상과 유사하였다. 이 밖에도 MCP-1은 시험관에서 헬퍼 T 전구세포(Th0 cells)를 헬퍼 T세포 싸이토카인(Th2 cytokines)을 분비하는 세포로 전환시킨다는 보고가 있다(Karpus WJ et al., MIP-1 alpha and MCP-1 differentially regulate acute and relapsing autoimmune encephalomy elitis asell as Th1/Th2 lymphocyte differentiation. J. Leukoc. Biol ., 62, pp681-687, 1997). 그리고 MCP-1을 정맥주사 하였을 때 IL-12의 생성은 감소되고 IL-4의 생성이 증가한다. 이는 간접적으로 IgE-의존적 알레르기 염증을 악화시킬 수 있음을 의미한다.
초기염증반응에 중요한 IL-8은 기도상피세포에서 분비되는 중요한 염증성 케모카인으로서(Harada A et al., Essential involvement of interleukin-8 (IL-8) in acute inflammation. J, Leukoc , Biol ,, 56, pp559-564, 1994), IL-8에 의해 기관지과민성이 유발되고 알레르기비염이나 기관지천식 질환에서 증가되어 나타나며(Fujimura M et al., Role of leukotriene B4 in bronchial hyperresponsiveness induced by interleukin 8. Eur . Respir . J., 11, pp306-311, 1998 ; Kurashima K et al., Increase of chemokine levels in sputum precedes exacerbation of acute asthma attacks. J. Leukoc . Biol ., 59, pp313-316, 1996) 스테로이드에 의해 억제된다.
소프리코사이드(Sophoricoside)은 이소플라본 계열의 물질로써 회화나무에서 분리된 물질로서 최근에 항염증 및 알레르기 활성을 비롯하여 여러 가지 활성을 나타내어 주목 받고 있는 물질이다.
최근에는 소프리코사이드와 그 유도체인 아이소플라본(isoflavone)이 염증반응을 유도하는 싸이토카인인 IL-3, GM-CSF, IL-1β, TNF-α, IL-6 그리고 IL-5의 억제 활성을 보임으로써 염증반응을 억제한다고 밝혀진 바 있다(Yun J. Lee CK et al., Differential inhibitory inducts of sophoricoside analogs on bioactivity of several cytokines. Life Sciences, 67, pp2855-2863, 2000).
따라서 본 발명자는 소포리코사이드의 모핵인 이소플라본 골격을 변형하여 플라본(flavone)을 합성하고 그 모핵의 치환기를 도입함으로써 다양한 플라본(flavone) 유도체들을 합성하고 그들의 항아토피효과를 측정한 결과, 우수한 아토피 억제 효과를 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 플라본을 전구체로 하여 합성된 하기 일반식 (I)로 표기되는 신규 구조의 플라본 유도체(flavone derivative) 화합물, 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure 112009073715376-pat00001
(I)
상기 식에서,
R1 내지 R5 은 각각 독립적으로 수소원자, 히드록시기, 니트로기, 할로겐원자, C1 내지 C4 알킬기, C1 내지 C4 알콕시기, 및 C1 내지 C4 저급알킬 에스테르기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기이며;
R6 내지 R9 은 각각 독립적으로 수소원자, 히드록시기, 니트로기, 할로겐원자, C1 내지 C4 알킬기, C1 내지 C4 알콕시기, 및 벤질옥시기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기이다.
상기 일반식 (I) 화합물의 바람직한 화합물군으로는 R1 내지 R5 은 각각 독립적으로 수소원자, 히드록시기, 및 C1 내지 C4 알콕시기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기이고; R6 내지 R9 은 각각 독립적으로 수소원자, 히드록시기, C1 내지 C4 알콕시기, 및 벤질옥시기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기인 화합물군이다.
상기 일반식 (I) 화합물의 보다 바람직한 화합물군으로는 R1 내지 R5 은 각각 독립적으로 수소원자, 히드록시기, 및 메톡시기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기이고; R6 내지 R9 은 각각 독립적으로 수소원자, 히드록시기, 및 벤질옥시기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기인 화합물군이다.
가장 바람직하게는 일반식 (I) 화합물로는 하기와 같은 화합물들을 들 수 있으며, 본 발명은 발명의 범위를 이에 제한하고자 함이 아니다.
2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4a), 2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4b), 2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4c), 2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4d), 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a), 5-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9b), 5-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9c), 5-벤질옥시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9d), 6-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9e), 6-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9f), 6-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9g), 6-벤질옥시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9h), 7-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9i), 7-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9j), 7-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9k), 7-벤질옥시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9l), 5-하이드록시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10a), 5-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10b), 2-(3,4-디메톡시페닐)-5-하이드록시-4H-크로멘-4-온(10c), 5-하이드록시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10d), 6-하이드록시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10e), 6-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10f), 2-(3,4-디메톡시페닐)-6-하이드록시-4H-크로멘-4-온(10g), 6-하이드록시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10h), 7-하이드록시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10i), 7-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10j), 2-(3,4-디메톡시페닐)-7-하이드록시-4H-크로멘-4-온(10k), 7-하이드록시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10l).
상기 구조식 (Ⅰ)로 표시되는 본 발명의 화합물들은 당해 기술분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.
염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올 (예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.
이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온 산(propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산 (lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
상기의 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨 염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.
또한, 상기의 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 화합물은 비대칭 중심을 가지므로 상이한 거울상 이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 화 합물의 모든 광학 이성질체 및 R 또는 S형 입체 이성질체 및 이들의 혼합물도 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 한다. 본 발명은 라세미체, 하나 이상의 거울상 이성질체 형태, 하나 이상의 부분 입체 이성질체 형태 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함하며, 당업계에서 알려진 이성질체의 분리 방법이나 제조과정을 포함한다.
본 발명의 다른 목적은 상기 일반식 (Ⅰ) 화합물의 제조방법을 제공하는 것으로, 하기의 반응식들에 도시된 방법에 의해 화학적으로 합성될 수 있지만, 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.
하기의 반응식들은 본 발명의 대표적인 화합물들의 제조방법을 제조 단계별로 나타내는 것으로 본 발명의 여러 화합물들은 반응식 1 내지 반응식 2의 합성과정에서 사용되는 시약, 용매 및 반응 순서를 바꾸는 등의 작은 변경으로 제조될 수 있다. 본 발명의 몇몇 화합물들은 반응식 1 내지 반응식 2의 범주에 포함되지 않는 과정에 따라 합성되었으며, 이러한 화합물들에 대한 상세한 합성 과정은 이들 각각의 실시예에 설명되어 있다.
Figure 112009073715376-pat00002
반응식 (1)은 상용 화합물 또는 기존의 알려진 방법에 의하여 플라본 화합물을 제조하기 위한 2단계 제조과정을 나타낸다.
제 1단계에서는 2-하이드록시 아세토페논(1)을 무수 2-부텐온의 용매로 용해시킨 후에 포타슘카보네이트의 알칼화제를 넣고 3,4-디메톡시 벤조일클로라이드(2a-d)를 넣고 반응시킨다. 이때 사용되는 용매는 반응에 악영향을 미치지 않는 용매인 2-부텐온, 테트라하이드로푸란, 디에틸에테르, 디클로로메탄 및 클로로포름 등의 용매를 이용하여 반응을 수행하며, 바람직하게는 2-부텐온을 이용한다. 반응 온도는 일반적으로 70℃ 내지 80℃에서 수행할 수 있고, 바람직하게는 78℃에서 수행한다. 반응 시간은 48시간 내지 60시간동안 수행할 수 있고, 바람직하게는 48시간동안 교반한다. 반응액은 HCl등의 산을 넣어 pH 1 내지 5가 되게 하고 디클로로메탄등의 유기용매로 추출한다. 여액은 무수망초로 탈수하여 감압농축 하였으며 얻은 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피법으로 분리하여 찰콘체(3a-d)를 제조할 수 있다.
제 2단계에서는 찰콘체(3a-d)를 고리화 하는 반응이다. 이 찰콘을 메탄올에 용해시킨 후 진한 황산을 넣고 반응시킨다. 이때 사용되는 용매는 반응에 악영향을 미치지 않는 용매인 메탄올 및 에탄올 등의 용매를 이용하여 반응을 수행하며, 바람직하게는 메탄올을 이용한다. 반응 온도는 일반적으로 20℃ 내지 27℃에서 수행할 수 있고, 바람직하게는 25℃내외의 실온에서 수행한다. 반응 시간은 3일 내지 4일 동안 수행할 수 있고, 바람직하게는 3일 동안 교반한다. 반응액은 디클로로메탄 등의 유기용매로 추출하고 여액은 무수망초 등의 건조제로 탈수하여 감압농축하여 얻은 잔사를 실리카겔 컬럼크로마토그래피법으로 분리 및/또는 재결정방법을 통하여 플라본(4a-d)를 제조할 수 있다.
Figure 112009073715376-pat00003
반응식 2는 플라본(flavone)에 다양한 치환기를 갖는 플라본 유도체(flavone derivative)(9a-l, 10a-l)를 제조하는 과정을 나타낸다.
반응식 2는 상용 화합물 또는 기존의 알려진 방법에 의하여 합성된 화합물을 제조하기 위한 4단계 제조과정을 나타낸다.
제 1단계에서는 2,4-디하이드록시 아세토페논(1)을 무수 아세트나이트릴의 용매로 용해시킨 후에 포타슘 카보네이트 등의 알칼화제를 넣고 벤질브로마이드(6)를 넣고 반응시킨다. 이때 사용되는 용매는 반응에 악영향을 미치지 않는 용매인 아세트나이트릴, 테트라하이드로푸란, 디에틸에테르, 디클로로메탄 또는 클로로포름 등의 용매를 이용하여 반응을 수행하며, 바람직하게는 아세트나이트릴을 이용한다. 반응 온도는 일반적으로 70℃ 내지 80℃에서 수행할 수 있고, 바람직하게는 78℃에서 수행한다. 반응 시간은 1.5시간 내지 3시간동안 수행할 수 있고, 바람직하게는 2시간동안 교반한다. 반응액을 디클로로메탄 등의 유기용매로 추출한다. 여액은 무수망초로 탈수하여 감압농축 하였으며 얻은 잔사를 실리카겔 컬럼 분리를 통해 벤질옥시로 치환된 아세토페논(7a-c)를 제조할 수 있다.
제 2단계에서는 벤질옥시 아세토페논(7a-c)을 무수 2-부텐온 등의 용매로 용해시킨 후에 포타슘카보네이트 등의 알칼화제를 넣고 3,4-디메톡시 벤조일클로라이드(2a-d)를 넣고 반응시킨다. 이때 사용되는 용매는 반응에 악영향을 미치지 않는 용매인 2-부텐온, 테트라하이드로푸란, 디에틸에테르, 디클로로메탄 및 클로로포름 등의 용매를 이용하여 반응을 수행하며, 바람직하게는 2-부텐온을 이용한다. 반응 온도는 일반적으로 70℃ 내지 80℃에서 수행할 수 있고, 바람직하게는 78℃에서 수행한다. 반응 시간은 48시간 내지 60시간동안 수행할 수 있고, 바람직하게는 48시간동안 교반한다. 반응액은 HCl 등의 산을 가하여 pH 1 내지 5가 적정하고 디클로로메탄 등의 유기용매로 추출한다. 여액은 무수망초로 탈수하여 감압농축하고 여기 서 얻은 잔사를 실리카겔 컬럼 분리법을 통해 찰콘체(8a-l)를 제조할 수 있다.
제 3단계에서는 찰콘체(8a-l)를 고리화 하는 반응이다. 이 찰콘을 메탄올에 용해시킨 후 진한 황산 등의 강산을 넣고 반응시킨다. 이때 사용되는 용매는 반응에 악영향을 미치지 않는 용매인 메탄올 및 에탄올 등의 용매를 이용하여 반응을 수행하며, 바람직하게는 메탄올을 이용한다. 반응 온도는 일반적으로 20℃ 내지 27℃에서 수행할 수 있고, 바람직하게는 25℃내외의 실온에서 수행한다. 반응 시간은 2일 내지 4일 동안 수행할 수 있고, 바람직하게는 3일 동안 교반한다. 반응액은 디클로로메탄 등의 유기용매로 추출하고 여액은 무수망초로 탈수하여 감압농축하고 얻은 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피법으로 분리 및/또는 재결정법을 통해 벤질옥시 플라본(9a-l)를 제조할 수 있다.
제 4단계에서는 벤질옥시 플라본(9a-l)의 치환기의 제거 반응이다. 이 플라본을 메탄올, 클로로포름에 등의 유기용매에 용해시킨 후에 10% 팔라디움 카본(Pd/C) 등의 환원제를 넣고 반응시킨다. 이때 사용되는 용매는 반응에 악영향을 미치지 않는 용매인 테트라하이드로푸란, 디에틸에테르, 디클로로메탄 및 클로로포름 등의 용매를 이용하여 반응을 수행하며, 바람직하게는 메탄올을 이용한다. 반응 온도는 일반적으로 20℃ 내지 27℃에서 수행할 수 있고, 바람직하게는 25℃내외의 실온에서 수행한다. 반응 시간은 3시간 내지 24시간 동안 수행할 수 있고, 바람직하게는 6시간동안 교반한다. 반응액을 셀라이트를 이용하여 팔라디움 카본 잔사를 제거하고 여액을 감압농축 하여 얻은 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피법으로 분리 및/또는 재결정법을 통해 하이드록시 플라본(10a-l)를 제조할 수 있다.
상기 제조방법으로 얻어진 일반식 (I) 화합물은 진드기에 의해 유도된 MCP-1, IL-6, IL-8의 분비를 억제하는 효과를 나타냄을 확인함으로써, 본 발명의 화합물은 아토피성 피부염 질환의 예방 및 치료에 효과적인 약학 조성물 및 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 상기 일반식 (I)로 표기되는 신규 구조의 플라본 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 일반식 (I) 화합물을 포함하는 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
상세하게는, 제제화로 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose), 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가 있부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 0.0001 ~ 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 ~ 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 조성물에서 본 발명의 화합물은 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 50 중량%의 함량으로 배합될 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용가능한 염 의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 쥐, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명은 상기 일반식 (Ⅰ)로 표기되는 신규 구조의 플라본 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 질환의 예방 및 치료를 위한 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 화합물은 아토피성 피부염 질환의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.
본 발명의 화합물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
본 발명의 상기 화합물은 아토피성 피부염 질환의 예방 및 치료를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 화합물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 30 g, 바람직하게는 0.3 내지 10 g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.
상기 외에 본 발명의 화합물은 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
상기와 같이 본 발명의 플라본 유도체(flavone derivative) 화합물들은 THP-1 또는 EoL-1 세포에서 진드기에 의해 유도된 아토피성 피부염증 반응을 나타내는 MCP-1, IL-6 및 IL-8의 분비량을 효과적으로 억제하므로 아토피성 피부염 질환의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물 및 건강기능식품을 제공할 수 있다.
이하, 본 발명을 참조예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 참조예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 참조예, 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
참조예 1. 시약 및 기기
분석기기로는 1H-NMR (400MHz) 스펙트로미터(spectrometer, JNM-AL 400, JEOL Ltd., 일본), 멜팅 포인터(Melting pointer, Yamako, MD-S3, 일본), 질량분석기(MS, PE SCIX API 2000 MS/MS, 캐나다), 광학 측정기(Polarimeter, JASCO DIP-370, 일본)를 사용하였다. 각종 시약들은 알드리치사(Aldrich Chemical Co.)의 제품을 사용하였으며 기타 용매는 1급 이상의 시약을 정제하지 않고 사용하였다. 합성한 물질들의 정제를 위하여 실리카겔(Silica gel, Merck, 230-400 mesh)을 사용하였다.
참조예 2. THP -1 배양
사람의 단핵구(monocyte)인 THP-1 (human acute monocytic leukemia cell; 미국세포주은행)를 2.0 x 105/m로 RPMI 1640 배지, 항생물질 (페니실린 104 U/㎖, 스트렙토마이신 10 mg/㎖, 암포테리신 B 25 ㎍/㎖)과 10% FBS를 넣고, 37℃ CO2 배양기에서 3일간 배양하였다.
실시예 1. 2-(3- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온(4a)의 제조
Figure 112009073715376-pat00004
상기 반응식에서 나타낸 방법은 2단계를 거쳐 합성하였다.
단계 1.
첫 번째 단계는 아세토페논과 벤질클로라이드의 축합반응을 하여 찰콘을 형성하는 과정이다. 이 단계는 라운드 플라스크에 2-하이드록시아세토페논(1)(256㎕, 2.204mmol)을 무수 2-부텐온으로 용해시킨 후에 무수 탄산칼륨(913mg, 6.610mmol) 및 3-메톡시 벤조일 클로라이드(360㎕, 2.644mmol)(2a)를 넣고 가온하면서 50시간 동안 교반하였다. 반응혼합액에 6N HCl을 넣어 pH 2가 되게 하고 디클로로메탄으로 추출하였으며, 여액은 무수망초로 탈수하여 감압농축 하였다. 농축액은 실리카겔 컬럼 분리를 통해 순수한 생성물 3-하이드록시-1-(2-하이드록시페닐)-3-(3-메톡시페닐)프로프펜온(3a) 395mg을 얻었으며 이를 다음 단계에 바로 적용하였다.
단계 2.
상기 반응식에서 나타낸 바와 같이, 라운드 플라스크에 3-하이드록시-1-(2-하이드록시페닐)-3-(3-메톡시페닐)프로프펜온(3a, 7g, 0.017mol)을 넣고 메탄올로 용해시킨 후, 진한 황산을 취해 천천히 적가하고 3일 동안 교반하였다. 반응액은 감압 농축한 후, 클로로포름으로 추출하였으며, 여액은 무수망초로 탈수하여 감압농축하였다. 농축액은 실리카겔 컬럼 분리를 통해 하기 물성치를 갖는 순수한 생성물 2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4a) 5.55g을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 75% ;
고체상(solid);
m.p 121℃;
Rf= 0.26(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(Acetone-d6): δ ppm 8.125(dd, J=1.8, 8.2Hz, 1H), 7.823(t, J=8.4Hz, 1H), 7.751(d, J=8.4Hz, 1H), 7.669(d, J=8.0Hz, 1H), 7.631(d, J=2.0Hz, 1H), 7.528-7.478(m, 2H), 7.175(dd, J=2.2, 7.8Hz, 1H), 6.883(s, 1H), 3.936(s, 3H)
실시예 2. 2-(4-메톡시페닐)-4 H -크로멘-4-온(4b)의 제조
상기 실시예 1의 단계 1에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 벤조일 클로라이드(2a) 대신 4-메톡시 벤조일 클로라이드(2b)으로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 1의 단계 1과 반응과 동일한 공정을 수행하고 단계 2를 거쳐 하기 물성치를 갖는 2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4b)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 65.4% ;
고체상(solid);
m.p. 151℃;
Rf= 0.375(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(CDCl3): δ ppm 8.221(dd, J=1.8, 7.8Hz, 1H), 7.878(d, J=8.8Hz, 2H), 7.678(t, J=8.6Hz, 1H), 7.542(d, J=8.0Hz, 1H), 7.403(t, J=8.2Hz, 1H), 7.018(d, J=8.8Hz, 2H), 6.740(s, 1H), 3.886(s, 3H)
실시예 3. 2-(3,4-디메톡시페닐)-4 H -크로멘-4-온(4c)의 제조
상기 실시예 1의 단계 1에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 벤조일 클로라이드(2a) 대신 3,4-디메톡시 벤조일 클로라이드(2c)으로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 1의 단계 1과 반응과 동일한 공정을 수행하고 단계 2를 거쳐 하기 물성치를 갖는 2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4c)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 78.5% ;
고체상(solid);
m.p. 149℃;
Rf= 0.306(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CDCl3): δ ppm 8.233(dd, J=1.6, 8.0Hz, 1H), 7.697(t, J=8.6Hz, 1H), 7.577(dd, J=2.0, 8.4Hz, 2H), 7.432(d, J=8.0Hz, 1H), 7.399(d, J=1.6Hz, 1H), 6.997(d, J=8.4Hz, 1H), 6.768(s, 1H), 3.993(s, 3H), 3.973(s, 3H)
실시예 4. 2-(3,4,5-트리메톡시페닐)-4 H -크로멘-4-온(4d)의 제조
상기 실시예 1의 단계 1에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 벤조일 클로라이드(2a) 대신 3,4,5-트리메톡시 벤조일 클로라이드(2d)으로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 1의 단계 1과 반응과 동일한 공정을 수행하고 단계 2를 거쳐 하기 물성치를 갖는 2-(3,4,5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4d)을 얻어 실험예의 시료로 사 용하였다.
수율 : 71.1% ;
고체상(solid);
m.p 170℃;
Rf= 0.333(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CDCl3) δ ppm 8.195(d, J=7.6Hz, 1H), 7.686(t, J=7.8Hz, 1H), 7.566(d, J=8.4Hz, 1H), 7.404(t, J=7.4Hz, 1H), 7.117(s, 2H), 6.763(s, 1H), 3.961(s, 6H), 3.942(s, 3H)
Figure 112009073715376-pat00005
실시예 5. 5- 벤질옥시 -2-(3- 메톡시페닐 )-4H- 크로멘 -4-온 (9a)의 제조
Figure 112009073715376-pat00006
상기 반응식에서 나타낸 방법은 3단계를 거쳐 합성하였다.
단계 1.
첫 번째 단계는 아세토페논의 벤질기를 도입하는 과정이다. 이 단계는 라운드 플라스크에 2,6-디하이드록시아세토페논(5a)(6.27g,0.04 mol)을 무수 아세트나 이트릴로 용해시킨 후 무수 탄산칼륨(6.63g, 0.048 mol)을 넣고 78℃에서 30분 동안 교반하였다. 이 반응 혼합액에 벤질 브로마이드(6)(5.33ml, 0.44 mol)를 아세트나이트릴에 희석하여 천천히 적가한 후, 80℃정도로 가온하면서 1.5시간 내지 2시간을 교반하였다. 반응혼합액을 디클로로메탄으로 추출하였으며, 여액은 무수망초로 탈수하여 감압농축하였다. 농축액은 실리카겔 컬럼 분리를 통해 순수한 생성물 1-(2-벤질옥시-6-하이드록시페닐)에탄온(7a) 8.7g을 얻었으며 이를 다음 단계에 바로 적용하였다.
단계 2.
두 번째 단계는 벤질옥시 그룹을 도입한 아세토페논에 벤질클로라이드를 이용한 축합반응이다. 라운드 플라스크에 1-(2-벤질옥시-6-하이드록시페닐)에탄온(7a)(300mg, 1.238mmol)을 무수 2-부텐온으로 용해시킨 후 무수 탄산칼륨(513mg, 3.715 mmol)과 3-메톡시 벤조일 클로라이드(2a)(202㎕, 1.486 mmol)를 넣고 가온하면서 50시간 동안 교반하였다. 반응혼합액에 6N HCl을 넣어 pH 2가 되게 하고 디클로로메탄으로 추출하였으며, 여액은 무수망초로 탈수하여 감압농축 하였다. 농축액은 실리카겔 컬럼 분리를 통해 순수한 생성물 (Z)-1-(2-벤질옥시-6-하이드록시페닐)-3-하이드록시-3-(3-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온(8a) 352mg을 얻었으며 이를 다음 단계에 적용하였다.
단계 3.
상기 반응식에서 나타낸 바와 같이 라운드 플라스크에 (Z)-1-(2-벤질옥시-6-하이드록시페닐)-3-하이드록시-3-(3-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온(8a, 131 mg, 0.348 mmol)을 넣고 메탄올으로 용해시킨 후, 진한 황산을 취해 천천히 적가하여 넣고 3일 동안 교반하였다. 반응액은 감압농축한 후, 클로로포름으로 추출하였으며, 여액은 무수망초로 탈수하여 감압농축하였다. 농축액은 실리카겔 컬럼 분리를 통해 순수한 생성물 5-벤질옥시메틸-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a) 86.7 mg을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 69.6% ;
고체상(solid);
ｍｐ199-200℃;
Rf= 0.235(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 7.644(d, J=5.6Hz, 2H), 7.551-7.472(m, 2H), 7.425(d, J=7.2Hz, 4H), 7.318(t, J=6.6Hz, 1H), 7.150(dd, J=8.0, 13.2Hz, 1H), 7.068(s, 1H), 6.867(dd, J=8.0, 13.2Hz, 1H), 6.719(s, 1H), 5.319(s, 2H), 3.904(s, 3H)
실시예 6. 5- 벤질옥시 -2-(4- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9b)의 제조
상기 실시예 5의 제 2단계에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 클로라이드(2a) 대신 4-메톡시 클로라이드(2b)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 5-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9b)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 84.3% ;
고체상(solid);
mp 162℃;
Rf= 0.088(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 7.845(d, J=8.8Hz, 2H), 7.635(d, J=7.6Hz, 2H), 7.499(t, J=8.4Hz, 1H), 7.401(t, J=7.6Hz, 2H), 7.299(t, J=7.2Hz, 1H), 7.070(d, J=8.8Hz, 1H), 7.006(d, J=8.8Hz, 2H), 6.835(d, J=8.0Hz, 1H), 6.647(s, 1H), 5.296(s, 2H), 3.876(s, 3H)
실시예 7. 5- 벤질옥시 -2-(3,4- 디메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9c)의 제조
상기 실시예 5의 제 2단계에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 클로라이드(2a) 대신 3,4-디메톡시 클로라이드(2c)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 5-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9c)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 94.8% ;
고체상(solid);
mp 161-161.5℃;
Rf= 0.128(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 7.632(d, J=7.6Hz, 2H), 7.547-7.493(m, 2H), 7.408(t, J=7.4Hz, 2H), 7.355(s, 1H), 7.316(d, J=7.1Hz, 1H), 7.137(d, J=8.3Hz, 1H), 6.978(d, J=8.6Hz, 1H), 6.845(d, J=8.3Hz, 1H), 6.671(s, 1H), 5.317(s, 2H), 3.987(s, 3H), 3.963(s, 3H)
실시예 8. 5- 벤질옥시 -2-(3,4,5- 트리메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9d)의 제조
상기 실시예 5의 제 2단계에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 클로라이드(2a) 대신 3,4,5-트리메톡시 클로라이드(2d)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 5-벤질옥시-2-(3,4,5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9d)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 68.3% ;
고체상(solid);
mp 118℃;
Rf= 0.176(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 7.625(d, J=7.2Hz, 2H), 7.530(t, J=8.2Hz, 1H), 7.409(t, J=7.6Hz, 2H), 7.311(t, J=7.4Hz, 1H), 7.154(d, J=8.4Hz, 1H), 7.109(s, 2H), 6.859(d, J=8.8Hz, 1H), 6.688(s, 1H), 5.330(s, 2H), 3.963(s, 6H), 3.931(s, 3H)
실시예 9. 6- 벤질옥시 -2-(3- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9e)의 제조
상기 실시예 5의 제 1단계에서 라운드 플라스크에 2,6-디하이드록시아세토페논(5a)을 대신 2,5-디하이드록시아세토페논(5b)으로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 6-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9e)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 78.2% ;
고체상(solid);
mp 112℃;
Rf= 0.244(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 7.703(d, J=2.8Hz, 1H), 7.528(s, 1H), 7.505(s, 1H), 7.481(d, J=2.4Hz, 1H), 7.461(s, 1H), 7.444-7.408(m, 4H), 7.389-7.349(m, 2H), 7.068(dd, J=2.2, 7.8Hz, 1H), 6.802(s, 1H), 5.158(s, 2H), 3.890(s, 3H)
실시예 10. 6- 벤질옥시 -2-(4- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9f)의 제조
상기 실시예 5의 제 2단계에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 클로라이드(2a) 대신 4-메톡시 클로라이드(2b)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 6-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9f)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 81.0% ;
고체상(solid);
mp 163℃;
Rf= 0.463(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 7.880(d, J=8.8Hz, 2H), 7.706(d, J=3.2Hz, 1H), 7.517-7.466(m, 3H), 7.411(t, J=7.2Hz, 2H), 7.368(s, 1H), 7.349(dd, J=3.4, 5.8Hz, 1H), 7.026(d, J=8.8Hz, 2H), 6.746(s, 1H), 5.161(s, 2H), 3.892(s, 3H)
실시예 11. 6- 벤질옥시 -2-(3,4- 디메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9g)의 제조
상기 실시예 5의 제 2단계에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 클로라이드(2a) 대신 3,4-디메톡시 클로라이드(2c)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 6-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9g)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 79.8% ;
고체상(solid);
mp 181℃;
Rf= 0.371(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 7.669(d, J=2.9Hz, 1H), 7.522(dd, J=2.1, 8.4Hz, 1H), 7.501(s, 1H), 7.472(d, J=5.1Hz, 1H), 7.448(s, 1H), 7.398(t, J=7.2Hz, 2H), 7.350(d, J=2.2Hz, 1H), 7.337(s, 1H), 7.318(d, J=2.9Hz, 1H), 6.953(d, J=8.6Hz, 1H), 6.724(s, 1H), 5.122(s, 2H), 3.967(s, 3H), 3.940(s, 3H)
실시예 12. 6- 벤질옥시 -2-(3,4,5- 트리메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9h)의 제조
상기 실시예 5의 제 2단계에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 클로라이드(2a) 대신 3,4,5-트리메톡시 클로라이드(2d)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 6-벤질옥시-2-(3,4,5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9h)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 83.0% ;
고체상(solid);
mp 190.5℃;
Rf= 0.442(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 7.711(d, J=3.2Hz, 1H), 7.544(d, J=9.2Hz, 1H), 7.475(d, J=6.8Hz, 2H), 7.423(d, J=7.2Hz, 2H), 7.390-7.354(m, 2H), 7.131(s, 2H), 6.771(s, 1H), 5.168(s, 2H), 3.963(s, 6H), 3.936(s, 3H)
실시예 13. 7- 벤질옥시 -2-(3- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9i)의 제조
상기 실시예 5의 제 1단계에서 라운드 플라스크에 2,6-디하이드록시아세토페논(5a)을 대신 2,5-디하이드록시아세토페논(5b)으로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 7-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9i)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 84.7% ;
고체상(solid);
mp 155℃;
Rf= 0.200(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 8.146(d, J=8.8Hz, 1H), 7.473-7.368(m, 8H), 7.052(d, J=2.0Hz, 3H), 6.752(s, 1H), 5.191(s, 2H), 3.893(s, 3H)
실시예 14. 7- 벤질옥시 -2-(4- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9j)의 제조
상기 실시예 5의 제 2단계에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 클로라이드(2a) 대신 4-메톡시 클로라이드(2b)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 7-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9j)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 87.7% ;
고체상(solid);
mp 121-122℃;
Rf= 0.087(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 8.1360(d, J=8.8Hz, 1H), 7.848(d, J=9.0Hz, 2H), 7.473-7.350(m, 5H), 7.065-7.001(m, 4H), 6.675(s, 1H), 5.183(s, 2H), 3.886(s, 3H)
실시예 15. 7- 벤질옥시 -2-(3,4- 디메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9k)의 제조
상기 실시예 5의 제 2단계에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 클로라이드(2a) 대신 3,4-디메톡시 클로라이드(2c)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 7-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9k)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 79.1% ;
고체상(solid);
mp 183℃;
Rf= 0.186(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 8.136(d, J=9.2Hz, 1H), 7.532(dd, J=1.8, 8.6Hz, 1H), 7.480-7.347(m, 6H), 7.056(d, J=10.0Hz, 2H), 6.976(d, J=8.4Hz, 1H), 6.694(s, 1H), 5.184(s, 2H), 3.981(s, 3H), 3.965(s, 3H)
실시예 16. 7- 벤질옥시 -2-(3,4,5- 트리메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (9l)의 제조
상기 실시예 5의 제 2단계에서 라운드 플라스크에 3-메톡시 클로라이드(2a) 대신 3,4,5-트리메톡시 클로라이드(2d)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 5의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 7-벤질옥시-2-(3,4,5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (9l)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 90.2% ;
고체상(solid);
mp 141-142℃;
Rf= 0.300(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 8.118(d, J=9.2Hz, 1H), 7.477-7.350(m, 5H), 7.080(s, 2H), 7.053-7.023(m, 2H), 6.688(s, 1H), 5.171(s, 2H), 3.946(s, 6H), 3.934(s, 3H)
Figure 112009073715376-pat00007
실시예 17. 5- Hydroxy -2-(3- methoxyphenyl )-4 H - chromen -4- one (10a)의 제조
Figure 112009073715376-pat00008
상기 반응식에서 나타낸 방법은 플라본에 벤질옥시 그룹을 제거하는 과정의 합성방법이다.
상기 반응식에서 나타난 바와 같이 라운드 플라스크에 5-(벤질옥시)-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a)(20mg, 0.056mmol)을 메탄올과 디클로로메탄에 용해시킨 후 10% 팔라디움카본을 천천히 첨가한다. 이 반응 혼합액에 수소 기체를 풍선에 넣어 반응용기에 포화되도록 한 후 실온에서 5-6시간동안 교반하였다. 반응혼합액은 셀라이트를 이용하여 여과하여 농축한 후, 순수한 생성물(10a)을 얻기 위해 농축액은 실리카겔 컬럼 분리를 통해 하기 물성치를 갖는 5-하이드록시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10a) 12.7㎎을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 84.8% ;
고체상(solid);
m.p 131-132 ℃;
Rf= 0.171(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(CDCl3):δ ppm 12.561(s, OH), 7.554(d, J=8.2Hz, 1H), 7.504-7.420(m, 3H), 7.097(dd, J=2.4, 8.0Hz 1H), 7.005(d, J=8.4Hz 1H), 6.821(d, J=8.4Hz 1H), 6.729(s, 1H), 3.900(s, 3H)
실시예 18. 5- 하이드록시 -2-(4- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (10b)의 제조
상기 실시예 17에서 라운드 플라스크에 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a) 대신 5-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9b)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 17의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 5-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (10b)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 85.0% ;
고체상(solid);
mp 142℃;
Rf= 0.171(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 12.669(s, OH), 7.868(dd, J=1.8, 7.0Hz, 2H), 7.527(t, J=8.4Hz 1H), 7.023(d, J=8.8Hz 2H), 6.977(d, J=8.4Hz 1H), 6.799(d, J=8.0Hz 1H), 6.648(s, 1H), 3.897(s, 3H)
실시예 19. 5- 하이드록시 -2-(3,4,5- 트리메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (10d)의 제조
상기 실시예 17에서 라운드 플라스크에 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a) 대신 5-벤질옥시-2-(3,4,5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9d)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 17의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 5-하이드록시-2-(3,4,5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (10d)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 80.3% ;
고체상(solid);
mp 184℃;
Rf= 0.256(n-hexane:ethyl acetate=3:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 12.574(s, OH), 7.556(t, J=8.6Hz, 1H), 7.118(s, 2H), 7.017(dd, J=0.8, 8.4Hz 1H), 6.826(d, J=8.0Hz 1H), 6.682(s, 1H), 3.967(s, 6H), 3.944(s, 3H)
실시예 20. 6- 하이드록시 -2-(3- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (10e)의 제조
상기 실시예 17에서 라운드 플라스크에 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a) 대신 6-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9e)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 17의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 6-하이드록시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (10e)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 69.5% ;
고체상(solid);
mp 214℃;
Rf= 0.467(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(acetone-d6) : δ ppm 7.674-7.651(m, 2H), 7.615(t, J=2.1Hz 1H), 7.527-7.486(m, 2H), 7.335(dd, J=2.9, 9.0Hz 1H), 7.170(dd, J=1.7, 8.3Hz 1H), 6.851(s, 1H), 3.935(s, 3H)
실시예 21. 6- 하이드록시 -2-(4- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (10f)의 제조
상기 실시예 17에서 라운드 플라스크에 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a) 대신 6-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9f)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 17의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 6- 하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온 (10f)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 46.8% ;
고체상(solid);
mp 232-233℃;
Rf= 0.135(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CD3OD) : δ ppm 7.973(d, J=8.8Hz, 2H), 7.577(d, J=8.8Hz, 1H), 7.412(d, J=2.8Hz, 1H), 7.264(d, J=8.8Hz, 1H), 7.082(d, J=8.8Hz, 2H), 6.758(s, 1H), 3.880(s, 3H)
실시예 22. 2-(3,4- 디메톡시페닐 )-6- 하이드록시 -4 H - 크로멘 -4-온 (10g)의 제조
상기 실시예 17에서 라운드 플라스크에 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a) 대신 6-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9g)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 17의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 2-(3,4-디메톡시페닐)-6-하이드록시-4H-크로멘-4-온 (10g)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 67.1% ;
고체상(solid);
mp 188-189℃;
Rf= 0.073(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CD3OD) δ ppm 7.973(d, J=8.8Hz, 2H), 7.577(d, J=8.8Hz, 1H), 7.412(d, J=2.8Hz, 1H), 7.264(d, J=8.8Hz, 1H), 7.082(d, J=8.8Hz, 2H), 6.758(s, 1H), 3.880(s, 3H)
실시예 23. 6- 하이드록시 -2-(3,4,5- 트리메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (10h)의 제조
상기 실시예 17에서 라운드 플라스크에 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a) 대신 6-벤질옥시-2-(3,4,5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9h)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 17의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 6-하이드록시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10h)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 79.0% ;
고체상(solid);
mp 220℃;
Rf= 0.162(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(CDCl3) : δ ppm 77.844(s, 1H), 7.532(d, J=9.2Hz 1H), 7.306(d, J=8.0Hz 1H), 7.139(s, 2H), 6.779(s, 1H), 3.971(s, 6H), 3.939(s, 3H)
실시예 24. 7- 하이드록시 -2-(3- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (10i)의 제조
상기 실시예 17에서 라운드 플라스크에 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a) 대신 6-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9i)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 17의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 7-하이드록시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10i)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 84.7% ;
고체상(solid);
mp 171-171.5℃;
Rf= 0.324(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(acetone-d6) δ ppm 7.982(d, J=8.6Hz, 1H), 7.631(d, J=8.1Hz, 1H), 7.592(d, J=2.0Hz 1H), 7.499(t, J=8.1Hz 1H), 7.165(d, J=8.3Hz, 1H), 7.091(d, J=2.4Hz 1H), 7.003(dd, J=2.2, 8.8Hz, 1H), 6.763(s, 1H), 3.933(s, 3H)
실시예 25. 7- 하이드록시 -2-(4- 메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (10j)의 제조
상기 실시예 17에서 라운드 플라스크에 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크 로멘-4-온(9a) 대신 7-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9j)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 17의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 7-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10j)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 77.5% ;
고체상(solid);
mp 146℃;
Rf= 0.353(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(acetone-d6) δ ppm 9.614(s, OH), 8.018(dd, J=2.2, 6.8Hz, 2H), 7.973(d, J=8.8Hz, 1H), 7.127(dd, J=2.1, 7.0Hz 2H), 7.055(d, J=2.2Hz 1H), 6.819(d, J=8.8Hz, 1H), 6.664(s, 1H), 3.916(s, 3H)
실시예 26. 2-(3,4- 디메톡시페닐 )-7- 하이드록시 -4 H - 크로멘 -4-온 (10k)의 제조
상기 실시예 17에서 라운드 플라스크에 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a) 대신 7-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9k)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 17의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 2-(3,4-디메톡시페닐)-7-하이드록시-4H-크로멘-4-온(10k)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 53.5% ;
고체상(solid);
mp 151-151.5℃;
Rf= 0.103(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(acetone-d6) δ 9.593(s, OH), 7.967(d, J=8.5Hz, 1H), 7.667(dd, J=2.2, 8.3Hz, 1H), 7.603(d, J=2.2Hz, 1H), 7.141(d, J=8.6Hz, 1H), 7.059(d, J=2.2Hz, 1H), 6.981(dd, J=2.2, 8.8Hz, 1H), 6.694(s, 1H), 3.969(s, 3H), 3.920(s, 3H)
실시예 27. 7- 하이드록시 -2-(3,4,5- 트리메톡시페닐 )-4 H - 크로멘 -4-온 (10l)의 제조
상기 실시예 17에서 라운드 플라스크에 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a) 대신 7-벤질옥시-2-(3,4,5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9l)로 바꾸는 점만 제외하고는 실시예 17의 반응과 동일한 공정을 수행하여 하기 물성치를 갖는 7-하이드록시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10 l)을 얻어 실험예의 시료로 사용하였다.
수율 : 68.5% ;
고체상(solid);
mp 160℃;
Rf= 0.143(n-hexane:ethyl acetate=1:1) ;
1H-NMR(acetone-d6) δ 7.970(d, J=8.8Hz, 1H), 7.372(s, 2H), 7.076(d, J=2.0Hz, 1H), 6.996(d, J=8.6Hz, 1H), 6.760(s, 1H), 4.912(s, OH), 3.981(s, 6H), 3.825(s, 3H)
Figure 112009073715376-pat00009
실험예 1. THP-1에서 mite에 의해 유도된 MCP-1/IL-6/IL-8분비에 미치는 플라본 유 도체의 영향 측정
미국세포주은행에서 구입한 인간 단핵구(Monocyte) 세포주(human acute monocytic leukemia cell line; 이하 THP-1)를 이용하여 상기 실시예에서 합성한 플라본 유도체들의 ELISA를 측정하기 위하여 하기와 같이 문한에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다.(Hirano Y, Shichijo M et al. Synergistic effect of PCD-2 via prostanoid DP receptor on TNF-alpha-induced production of MCP-1 and IL-8 in human monocytice THP-1 cells, Eur. J. Pharmacol 29(560), pp.81-88, 2007)
상기 참조예 1에서 배양시킨 THP-1세포를 0.5% FBS가 든 RPMI에 2.0 x 106/m로 24 웰 플레이트에 분주한 후에 배양기 (37℃, 5% CO2)에서 16시간 배양하였다. 배양 후 플라본 유도체들 (10 ㎍/㎖; DMSO 처리)을 1시간 동안 처리한 후에 HDE[House Dust mite Extract:Dermatophagoides pteronissinus extract(DpE); 1㎍/㎖]를 각각 24시간 동안 처리한 다음에, ELISA를 이용하여 상층액에서 단핵구 화학유인물질 단백질-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1), IL-6, IL-8의 양을 측정하였고, 실험결과를 하기 표 1에 나타내었다.
THP-1세포에서의 정상군, 진드기 처리군 및 dexamethason 처리군의 MCP-1, IL-6 및 IL-8의 양
Compound Amount of MCP-1 Amount of IL-6 Amount of IL-8
normal 31.7(pg/ml) 40(pg/ml) 60.7(pg/ml)
mite 236.7(pg/ml) 252.9(pg/ml) 2703.6(pg/ml)
dexamethason 24.2(pg/ml) 42.9(pg/ml) 85.7(pg/ml)
합성한 플라본 유도체들의 THP-1세포에서 진드기 추출물(mite)에 의해서 증가된 MCP-1, IL-6 및 IL-8의 저해활성
Compound Amount of MCP -1 (%) Amount of IL -6 (%) Amount of IL -8(%)
4a 98.78 92.81 0.8135
4b 91.89 0 6.49
4c 100.00 91.45 59.59
4d 99.61 95.58 53.92
9a 100 85.91 17.16
9b 0 36.73 0
9c 0 55.80 22.70
9d 0 56.36 45.54
9e 23.61 25.13 0
9f 0 24.28 0
9g ND ND ND
9h 0 0 0
9i 0 0 0
9j 86.20 13.81 0
9k 0 0 0
9l 48.00 42.27 4.46
10a 0 28.41 0
10b 0 1.93 0
10c ND ND ND
10d 0 0 0
10e 93.51 30.91 26.49
10f 0 0 0
10g 100.00 90.32 25.54
10h 96.34 98.87 55.14
10i 73.61 10.76 28.51
10j 55.32 0 14.73
10k 100.00 97.23 64.46
10l 91.07 87.04 25.54
실험결과, THP-1 세포의 정상군에서의 MCP-1, IL-6 및 IL-8의 양은 31.7, 40.0 및 60.7 pg/ml인데 아토피를 유발하는 진드기를 처리하면 MCP-1, IL-6및 IL-8 의 양이 236.7, 252.9 및 2703.6 pg/ml으로 증가됨을 확인할 수 있었다(표 1). 이렇게 진드기에 의해서 증가된 상태에서 양성대조군인 덱사메타손을 처리하면 MCP-1, IL-6 및 IL-8의 양이 정상군과 거의 동등한 수준인 24.1, 42.9 및 85.7 pg/ml으로 감소됨을 알 수 있다.
한편, 합성한 플라본 유도체들 중 4a, 4c, 4d, 10g, 10h 및 10k 번 물질들이 THP-1 세포에서 아토피를 유발하는 진드기 추출물에 의해서 증가된 MCP-1 및 IL-6의 양을 양성대조군으로 사용한 덱사메타손과 거의 동등한 수준으로 강력하게 억제함을 알 수 있었다. 또한 합성한 플라본 유도체들은 전반적으로 THP-1 세포에서 아토피를 유발하는 진드기 추출물에 의해서 증가된 MCP-1이나 IL-6에 비해서 약하게 IL-8의 생성을 억제함을 알 수 있었다. 특히, 4c, 4d, 10h 및 10k와 같은 물질들은 THP-1 세포에서 아토피를 유발하는 진드기 추출물에 의해서 증가된 IL-8의 양을 50% 이상 억제하였다.
종합해 볼 때 THP-1 세포에 대해서 합성한 플라본 유도체들은 진드기에 의해서 증가된 MCP-1, IL-6 및 IL-8의 양을 전반적으로 감소시켰으며, 특히 4a, 4c, 4d, 10g, 10h 및 10k 물질들은 기존의 아토피질환에 사용되고 있는 약물인 덱사메타손과 거의 동등하게 또는 현저히 낮게 진드기에 의해서 증가된 MCP-1 및 IL-6의 양을 감소시켰다.
하기에 상기 조성물의 제제예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 산제의 제조
플라본 유도체 (10k) 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
플라본 유도체 (10k) 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캅셀제의 제조
플라본 유도체 (10h) 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제조
플라본 유도체 (10h) 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO412H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
플라본 유도체 (10k) 20 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 6. 건강 식품의 제조
플라본 유도체 (10h) 1000 ㎎
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 7. 건강 음료의 제조
플라본 유도체 (4c) 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
[이 발명을 지원한 국가연구개발사업]
[과제고유번호]
RIC-05-06-02
[부처명]
지식경제부
[연구사업명]
지역혁신센터사업
[연구과제명]
난치성면역질환의동서생명의학연구
[주관기관]
대전대학교 산학협력단
[연구기간]
2005년 03월 01일 ~ 2015년 02월 28일

Claims (7)

  1. 2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4a), 2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4b), 2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4c), 2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(4d), 5-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9a), 5-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9b), 5-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9c), 5-벤질옥시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9d), 6-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9e), 6-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9f), 6-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9g), 6-벤질옥시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9h), 7-벤질옥시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9i), 7-벤질옥시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9j), 7-벤질옥시-2-(3,4-디메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9k), 7-벤질옥시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(9l), 5-하이드록시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10a), 5-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10b), 2-(3,4-디메톡시페닐)-5-하이드록시-4H-크로멘-4-온(10c), 6-하이드록시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10e), 6-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10f), 2-(3,4-디메톡시페닐)-6-하이드록시-4H-크로멘-4-온(10g), 6-하이드록시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10h), 7-하이드록시-2-(3-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10i), 7-하이드록시-2-(4-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10j), 2-(3,4-디메톡시페닐)-7-하이드록시-4H-크로멘-4-온(10k), 또는 7-하이드록시-2-(3, 4, 5-트리메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(10l) 화합물 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 상기 제 1항의 플라본 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물.
  6. 상기 제 1항의 플라본 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 질환의 예방 및 개선을 위한 건강기능식품.
  7. 삭제
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Allergyology International, vol. 56, pp. 113-123, 2007*

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CN105669418A (zh) * 2016-01-25 2016-06-15 西北农林科技大学 α,β-不饱和酮化合物及其合成方法、以及含有该化合物的药物及应用

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