KR101132230B1 - 아미노산 탈아미노화 효소를 생산하는 프로테우스 불가리스 ｐ２?１ 균주 및 이를 이용한 유기산 생산방법 - Google Patents

아미노산 탈아미노화 효소를 생산하는 프로테우스 불가리스 ｐ２?１ 균주 및 이를 이용한 유기산 생산방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 아미노산 탈아미노화 효소를 생산하는 프로테우스 불가리스 P2-1 균주(KACC 91462P) 및 이를 이용한 유기산의 생산방법에 관한 것으로서, 상기 균주는 아미노산 탈아미노화 효소에 의해 아미노산을 케토산으로 전환시키는바, 다량의 유기산 생산이 가능하며, 상기 유기산은 항균제, 소독제, 살균제, 및 항생제 대체용 사료 첨가제로 활용될 수 있다.
아미노산 탈아미노화 효소, 프로테우스 불가리스, 유기산, 항균제

Description

아미노산 탈아미노화 효소를 생산하는 프로테우스 불가리스 Ｐ２?１ 균주 및 이를 이용한 유기산 생산방법{Proteus vulgaris P2-1 strain producing amino acid deaminase and method for producing organic acids using the same}
본 발명은 아미노산 탈아미노화 효소를 생산하는 프로테우스 불가리스 P2-1 균주 및 이를 이용한 유기산 생산방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 상기 효소를 생성하여 아미노산을 다양한 기능성 유기산으로 전환시킬 수 있는 신규 균주 및 이를 이용한 유기산 생산방법에 관한 것이다.
1997년 유럽연합(EU)이 항생제 첨가를 법적으로 규제하기 시작하면서 양돈업자와 관련 업체들은 체내잔류의 문제점이 없으면서도 동일한 효과를 가지는 항생제 대체제를 개발하기 위해서 노력하게 되었고, 여러 항생제 대체물질 중 유기산제에 대한 관심이 크게 대두되었다.
유기산제 중 구연산, 푸말산 및 포름산 등의 영양적 가치에 대한 연구는 오래전부터 진행되었으며, 프로피온산은 곰팡이 억제제로 사용되고 있고, 대부분의 유기산제는 최근 10여 년 동안 사료성분 보존제로서 사용되어 왔다. 이와 동시에 단일 제제 또는 복합제제의 유기산제가 시장에 나와 대부분 자돈사료에 광범위하게 사용되고 있는 실정이다. 유기산제는 다양한 효과가 있으나, 장내 pH를 감소시킴으로써 미발달된 장내 소화효소 체계를 보완하는 역할을 한다. 또한, 사료 내 미생물을 감소시켜, 사료섭취시 가축으로부터 발생할 수 있는 소화기성 질병의 위험을 줄이게 된다. 그리고 유기산의 종류에 따라 다르지만 대사과정에서 상당한 양의 에너지를 공급한다.
대표적인 유기산인 페닐락트산(phenyl lactic acid)은 페닐알라닌으로부터 유도되며 그람 양성 및 음성 병원성 세균 외에도 몇몇 병원성 곰팡이에 대해서도 주목할 만한 항균활성을 나타내어 항생제 대체제로서 산업적 관심이 증가하고 있다. 나아가, 페닐락트산은 파마코포어(pharmacophore) 합성전구체, 항-에이즈제(anti-HIV reagent), 레닌 저해제(renin inhibitor), 단백질 저해제(protease inhibitor) 등 다양한 기능성이 있는 것으로 알려짐에 따라 제약, 식품 및 사료에 널리 이용되고 있다(Yoshihiro H. 등, Bioscience Biotechnology and Biochemistry, vol. 60, pp. 1279-1283; 1996). 상기 페닐락트산은 일반적으로 L-아미노산 탈아미노화 효소에 의해 페닐알라닌으로부터 생성가능하기 때문에, 상기 효소를 생성하는 미생물을 이용한 생산방법이 주목을 끌고 있다.
L-아미노산 탈아미노화 효소(L-amino acid deaminase; L-AAD)는 리보플라빈 아데닌 디뉴클레오티드(FAD)가 비공유결합된 이합체 형태(dimeric form)의 효소로서, L-아미노산에 높은 기질 특이성을 나타낸다. 상기 효소는 뱀, 곤충의 독, 곰 팡이 및 조류 등에 존재하며 세균의 경우 로도코코스 오파쿠스(Rhodococcus opacus), 프로테우스 속(Proteus sp .), 프로비덴시아 속(Providencia sp .), 및 모르간넬라 속(Morganella sp .) 등 생물계에서 다양하게 분포되어 있다.
한편, 프로테우스 속(Proteus sp .) 중에서, 프로테우스 믹소파시엔스(Proteus myxofaciens), 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis) 및 프로테우스 레트게리(Proteus rettgeri) 등이 L-아미노산 탈아미노화 효소를 생산한다고 알려졌으며, 프로테우스 불가리스 균주 중에서 메티오닌, 트립토판 등에 강한 기질특이성을 나타내는 L-아미노산 탈아미노화 효소를 생산하는 균주가 보고된바 있으나(Eiji Takahashi 등, Bioscience Biotechnology and Biochemistry, vol.63(12), pp. 2244-2247; 1999), 페닐알라닌을 기질로 페닐락트산을 생산하는 균주는 아직 보고된 바 없다.
이에, 본 발명자들은 돼지 분변에서 신규 프로테우스 불가리스 P2-1 균주를 분리하였고, 상기 균주가 아미노산 탈아미노화 효소를 생성하여 페닐알라닌으로부터 기능성 유기산인 페닐락트산을 대량으로 생산할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 아미노산으로부터 유기산을 생산할 수 있는 신규 균주를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 균주를 이용한 유기산의 생산방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 균주 배양액의 건조물을 포함하는 유기산제 또는 사료첨가제를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아미노산 탈아미노화 효소를 생산하는 프로테우스 불가리스 P2-1 균주(KACC 91462P)를 제공한다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 균주를 아미노산을 함유하는 배지에서 배양하고 그 배양액으로부터 유기산을 회수하는 단계를 포함하는 유기산의 생산방법을 제공한다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 균주 배양액의 건조물을 포함하는, 유기산제 또는 사료 첨가제를 제공한다.
본 발명에 따른 프로테우스 불가리스 P2-1 균주는 아미노산 탈아미노화 효소를 생산하여 아미노산으로부터 유기산을 생산할 수 있으며, 상기 유기산은 항균제, 소독제, 살균제, 및 항생제 대체용 사료 첨가제로 유용하게 사용될 수 있다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 아미노산 탈아미노화 효소(amino acid deaminase; AAD)를 생산하는 프로테우스 불가리스 P2-1 균주(KACC 91462P)를 제공한다.
본 발명의 프로테우스 불가리스 P2-1 균주는 돼지 분변으로부터 분리될 수 있고, 글리세롤, D-아라비노스, 리보스, D-자일로스, 갈락토스, D-글루코스, α-메틸-D-글루코시드, N-아세틸-글루코사민, 알부틴, 에스쿨린, 살리신, D-투라노스 및 글루코네이트 등의 당을 기질로 이용할 수 있다. 한편, 분자생물학적 동정방법인 16S rDNA 서열분석(sequencing)에서, 상기 균주가 프로테우스 불가리스와 99.79%의 상동성을 나타내었으므로, 상기 미생물을 프로테우스 불가리스 P2-1(Proteus vulgaris P2-1)로 명명하고, 2009년 3월 27일자로 한국농업미생물자원센터에 기탁번호 KACC 91462P로 기탁하였다.
상기 균주의 아미노산 탈아미노화 효소는 기질 특이성 조사에서, 트립토판, 히스티딘, 및 메티오닌에 대해서 우수한 효소 활성을 나타내고, 특히 페닐알라닌에 대해 가장 높은 효소 활성을 나타낸다(실시예 3 참조). 이에 본 발명의 균주가 생산하는 아미노산 탈아미노화 효소는 페닐알라닌에 대해 기질특이성을 갖는 것을 특징으로 한다. 따라서 본 발명의 균주를 이용하여, 아미노산으로부터 다양한 유기산을 생산할 수 있으며, 특히 페닐알라닌을 기질로 하여 기능성 유기산인 페닐락트산을 효과적으로 대량 생산할 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 균주를 페닐알라닌 을 함유하는 배지에서 배양한 후, 배양액으로부터 페닐락트산을 분리, 정제함으로써 염화된 페닐락트산을 생산할 수 있었다(실시예 4 참조).
또한, 본 발명은 프로테우스 불가리스 P2-1 균주(KACC 91462P)를 아미노산을 함유하는 배지에서 배양하고, 그 배양액으로부터 유기산을 회수하는 단계를 포함하는 유기산의 생산방법을 제공한다. 상기 아미노산은 페닐알라닌이고, 이로부터 생성되는 유기산은 페닐락트산인 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이 경우, 상기 아미노산은 배지 1L 당 10 내지 20 g의 양으로 첨가되는 것이 바람직하다. 상기 배양방법은 당분야의 숙련자에게 공지된 일반적인 균주 배양 방법을 이용하여 수행될 수 있다.
본 발명의 균주를 이용하여 제조된 페닐락트산(균주 배양액의 건조물)을 단독으로 또는 다른 아미노산으로부터 생산된 유기산들과 서로 혼합 사용하여 유해세균의 성장을 억제하기 위한 유기산제를 제조할 수 있다. 본 발명의 유기산제는 초산, 젖산, 말산, 포름산, 프로피온산, 구연산 및 푸말산으로 이루어진 군에서 선택된 유기산을 더 포함할 수도 있으나, 상기 유기산에 제한되는 것은 아니다. 상기 유기산제는 살균제, 소독제, 및 항균제 등으로 활용될 수 있다.
한편, 본 발명은 본 발명의 균주를 배양하여 수득한 배양액의 건조물을 포함하는, 사료 첨가제를 제공한다. 상기 배양액의 건조물은 당분야의 숙련자에게 공 지된 일반적인 배양방법 및 건조방법을 이용하여 수득된 것일 수 있다. 한편, 상기 사료첨가제는 본 발명의 균주로부터 수득한 배양액의 건조물 외에도 미강, 탈지강, 대두박 또는 옥분 등의 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 사료첨가제는 항생제 대체용도로 유용하게 사용된다.
이하, 본 발명을 구체적인 실시예를 들어 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 아미노산 탈아미노화 효소 생산 균주 분리
돼지와 닭의 내장 및 분변 시료 각각 1 g을 0.85% 염화나트륨 용액 9 mL에 혼합한 후, 1 mL씩을 연속적으로 동일한 염화나트륨 용액에 십진희석하여 2% 박토펩톤, 2% DL-페닐알라닌, 0.02% 제2철 암모늄 시트레이트, 0.5% 염화나트륨 및 2% 아가가 함유된 수정된 티-모드 배지(Consiglio Nazione delle Ricerche, patent 47512A/87, January 1987, 이탈리아 국립 연구위원회)에 도말하였다. 이후, 37℃에서 1일간 배양하여 갈색의 환을 형성하는 후보 균주를 선발하였다(Maria C. 등, J. Clin. Microbiol ., vol. 26, pp. 791-793, 1988). 상기 후보 균주들의 활성을 검증하기 위하여, 상기 균주를 0.2% DL-페닐알라닌, 0.3% 효모추출물, 0.5% 염화나트륨, 0.1% 제2인산나트륨이 함유된 PA 액체배지(Ewing WH 등, Public Health Lab., vol. 15. pp. 153-161 (1957))에 접종하여 37℃에서 1일간 배양한 후, 1L 당 37% 염산이 2.5 mL 함유되어 있는 10% 염화 제2철 용액을 첨가하여 푸른색의 정도를 측정하고, 그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에서 알 수 있는 바와 같이, 기존 프로테우스 미라빌리스 균주와 비교하여 볼 때, 2종의 균주가 보다 우수하게 페닐피루브산을 생산함을 알 수 있었다.
한편, 상기 결과를 수치화하기 위하여, 각 분리균주를 PA 액체배지에 24시간 동안 배양하고, 그 배양액 1 mL를 동일한 비율로 희석한 후, 1% 페닐알라닌(Biobasic, 미국)을 0.05 M 인산염 완충액에 녹인 용액 1 mL를 사용하여 37℃에서 5분간 반응시킨 다음, 3 N 가성소다액으로 반응을 정지시킨 시험액과 공시험액의 흡광도를 분광광도계(Thermo, 미국) 320 nm에서 측정하여, 그 차이를 비교함으로써 생성된 페닐피루브산의 정도를 확인하였다. 측정결과를 하기 표 1에 나타내었다.
분리된 균주들의 아미노산 탈아미노화 효소 활성
균 주 명 생성된 페닐피루브산
(흡광도 320 nm)
프로테우스 미라빌리스 KCTC 2566 0.248
C-12 0.184
C-31 0.294
P1-1 0.035
P2-1 0.341
P2-2 0.226
P3-2 0.237
PI-1 0.038
PI-7 0.058
표 1의 측정결과를 바탕으로, 가장 많은 페닐피루브산을 생성하는 것으로 나타난 P2-1 균주를 선발하였다.
실시예 2: 아미노산 탈아미노화 효소 생산 균주의 동정
<2-1> 분리균주의 균주 특성 및 당 이용성 분석
실시예 1에서 분리 선발된 P2-1 균주의 당 이용성을 분석하기 위하여, 49종류의 당이 포함되어 있는 API50 CHB키트(BioMerieux)를 사용하여 생화학적 방법으로 특성을 파악하였다. P2-1 균주를 PA 한천 배지에 도말하여 37℃에서 하루 동안 배양한 후 콜로니를 5 mL의 희석액에 고농도로 현탁하고, 다시 5 mL의 희석액을 맥파란드 탁도(McFarland standard, BioMerieux, France) No. 2에 맞추어 5 mL CHB 배지에 접종하였다. 수분조절을 위하여 용기 내에 각 구역마다 5 mL씩 멸균수를 붓고, 접종된 CHB 배지를 CH50의 각 홀에 140 μL씩 분주하여 37℃에서 배양하면서 배지 내에 함유된 페놀프탈레인 지시약의 색 변화를 12시간 간격으로 조사하였다. 얻어진 결과는 반응 여부에 따라서 0~5점의 6단계로 분류하여 각각의 반응 정도를 표시하였다. 그리고 각 홀에서의 최종 반응 여부를 +, -로 구분하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
P2-1 균주의 당 이용능
기 질 이용능 기 질 이용능 기 질 이용능
글리세롤 + 에리스리톨 - D-아라비노스 +
L-아라비노스 - 리보스 + D-자일로스 +
L-자일로스 - 아도니톨 - β-메틸-자일로시드 -
갈락토스 + D-글루코스 + D-프락토스 -
D-만노스 - L-소르보스 - 람노스 -
튤시톨 - 이노시톨 - 만니톨 -
소르비톨 - α-메틸-D-만노시드 - α-메틸-D-글루코시드 +
N-아세틸-글루코사민 + 아미그달린 - 알부틴 +
에스쿨린 + 살리신 + 셀로비오스 -
말토스 + 락토스 - 멜리비오스 -
사카로스 + 트레할로스 - 인슐린 -
멜레지토스 - D-라피노스 - 아마돈 -
글루코겐 - 자일리톨 - β-젠티오비오스 -
D-투라노스 + D-라이조스 - D-타가토스 -
D-푸코스 - L-푸코스 - D-아라비톨 -
L-아라비톨 - 글루코네이트 + 2-세토-글루코네이트 -
5-세토-글루코네이트 -
상기 표 2에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 균주는 글리세롤, D-아라비노스, 리보스, D-자일로스, 갈락토스, D-글루코스, α-메틸-D-글루코시드, N-아세틸-글루코사민, 알부틴, 에스쿨린, 살리신, D-투라노스 및 글루코네이트 등의 당을 기질로 이용하는 것으로 확인되었다.
<2-2> 분리균주의 16S rDNA 동정
P2-1 균주를 NA 한천배지(Beef extract 0.3%, Peptone 0.5%, Agar 1.5%)에 도말하여 37℃에서 하루 동안 배양한 후, 콜로니를 1 mL의 증류수에 고농도로 현탁한 다음 아쿠프렙 게놈 DNA 추출키트(Accuprep　genomic DNA extraction kit, 바이오니아, 한국)를 이용하여 게놈 DNA를 추출하였다. 분리된 게놈 DNA는 전기영동을 통하여 확인하였다. 균주의 16S rDNA 염기서열 분석을 위해 추출한 게놈 DNA를 주형으로 DNA 가닥을 증폭시켰다. 프라이머는 27F 프라이머(5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'; 서열번호 1)와 1492R 프라이머(5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3'; 서열번호 2)를 사용하였고, 중합효소 연쇄반응은 94℃/1분, 55℃/1분, 72℃/1분의 조건으로 총 35 회 수행하였다. DNA 증폭 후 전기영동을 통하여 약 1500 bp 크기의 16S rDNA를 확인하였다. 증폭된 16S rDNA를 아쿠프렙 PCR 정제키트(바이오니아, 한국)로 정제한 후, 자동 DNA 서열분석기(ABI 3100, Applied Biosystem Inc., 미국)를 이용하여 염기서열을 분석하였고, 상기의 27F와 1492R 프라이머 외에 530F 프라이머(5'-GTGCCAGCMGCCGCGG-3'; 서열번호 3)와 1100R 프라이머 (5'-GGGTTGCGCTCGTTG-3'; 서열번호 4)의 두 가지 프라이머를 분석에 사용하였다. 염기서열을 조합한 후, 이즈택손(EzTaxon) 서버 (http://www.eztaxon.org/; Chun et al., 2007)를 이용하여 유연관계 동정 및 16s rDNA 유사도 측정을 하였다.
그 결과, 돼지 분변에서 분리된 P2-1 균주는 표준 균주인 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris) ATCC 29905T 균주와 99.79% 상동성을 나타내어, 이를 프로테우스 불가리스 P2-1(Proteus vulgaris P2-1)로 명명하고, 2009년 3월 27일자로 한국농업미생물자원센터(KACC)에 기탁번호 KACC 91462P로 기탁하였다(도 2 참조).
실시예 3: 본 발명에 따른 균주의 아미노산 탈아미노화 효소의 기질 특이성
실시예 2에서 동정된 프로테우스 불가리스 P2-1 균주가 생성하는 아미노산 탈아미노화 효소의 아미노산 기질 특이성을 살펴보기 위하여, 0.3% 효모추출물, 0.5% 염화나트륨 및 0.1% 제2인산나트륨이 함유된 배지에 19종의 L-아미노산을 0.2% 기질로 각각 첨가하여 액체 배지를 제조한 후, 본 발명에 따른 P2-1 균주를 접종하여 37℃에서 1일간 진탕 배양하였다. 이후, 상기 배양액을 4,000 rpm으로 원심분리하여 상등액을 회수한 다음, 각각의 배양상등액 1 mL에 10% 염화제이철 용액 1 mL를 첨가하여 90초 이내에 생성된 α-케토산의 양을 분광광도계(Thermo, 미국)를 이용하여 630 nm에서 흡광도로 측정하였다. 측정결과는 하기 표 3과 같다.
프로테우스 불가리스 P2-1 균주의 아미노산 탈아미노화 효소의 아미노산 기질특이성
아미노산 아미노산 탈아미노화 효소(% 활성)
글리신 7.6
알라닌 5.2
트립토판 49.4
아르기닌 9.6
히스티딘 71.2
아스파라긴 7.0
프롤린 4.6
루이신 16.9
트레올린 5.6
이소류신 9.0
아스파테이트 7.4
티로신 7.7
시스틴 11.1
페닐알라닌 100.0
발린 12.0
글루탐산 0.8
메티오닌 25.4
세린 6.7
리신 10.1
상기 표 3에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 프로테우스 불가리스 P2-1 균주는 페닐알라닌(100%), 히스티딘(71.2%) 트립토판(49.4%), 메티오닌(25.4%) 등에 높은 활성을 나타내었으며, 특히 페닐알라닌의 경우에는 100% 효소활성을 보여, 기질 특이성이 매우 높은 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 균주를 이용하는 경우, 아미노산으로부터 다양한 유기산을 생성할 수 있으며, 특히 페닐알라닌을 기질로 하여 기능성 유기산인 페닐락트산을 생성할 수 있을 것으로 판단된다.
실시예 4: 본 발명의 균주를 이용한 페닐락트산 생산
본 발명의 프로테우스 불가리스 P2-1 균주를 20 kg DL-페닐알라닌, 0.3 kg 효모추출물, 0.5 kg 염화나트륨 및 0.1 kg 제2인산나트륨이 함유된 액체배지에 접종하여 하루 동안 37℃에서 배양한 후, 상기 1톤 배양액을 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 상기 회수된 상등액에 동량의 암모니아수를 혼합하고, 이에 최종농도가 5%가 되도록 염화칼슘을 첨가하여 충분히 혼합한 후, 다시 5 N 염산용액으로 pH를 8.5로 조정하고나서 10분 동안 반응시켰다. 반응 후 원심분리하여 생성된 침전물을 40 내지 80℃로 열풍 혹은 진공 건조하여 10 kg의 염화된 페닐락트산을 생산하였다.
실시예 5: 본 발명의 균주를 이용한 다양한 유기산 생산
본 발명의 프로테우스 불가리스 P2-1 균주를 5% 복합아미노산, 0.3% 효모추출물, 0.5% 염화나트륨 및 0.1% 제2인산나트륨이 함유된 액체배지에 접종하여 하루 동안 37℃에서 배양한 후, 상기 배양액을 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 회수된 상등액을 실시예 4와 동일하게 건조시켜 다양한 항균 유기산을 생산할 수 있었다.
제조예 1: 유기산제의 제조
실시예 4에서 제조된 페닐락트산 40-70 중량%에 초산칼슘 20-40 중량%와 젖산칼슘 10-20 중량%를 혼합하여 유기산 혼합제를 제조하였다. 상기 유기산 혼합제는 유해세균의 성장을 억제하는 기능성 유기산이 다량 함유되어 있어 항균활성을 나타낸다.
제조예 2: 페닐락트산 함유 사료첨가제의 제조
실시예 4에서 제조된 페닐락트산 50-60 중량%에 미강 또는 탈지강 등의 강피류 20-30 중량% 및 탄산칼슘 10-20%를 혼합한 다음 분쇄하여 항생제 대체용 사료첨가제를 제조하였다.
도 1은 아미노산 탈아미노화 효소 생성 후보 균주들의 상기 효소의 활성을 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명에서 분리된 P2-1 균주를 16S rDNA 염기서열 분석으로 동정한 결과를 덴드로그램으로 나타낸 것이다.
<110> Biotopia Inc. <120> Proteus vulgaris P2-1 strain producing amino acid deaminase and method for producing organic acids using the same <130> FPD200907-0054 <160> 4 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 27F primer for PCR <400> 1 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1492R primer for PCR <400> 2 tacggytacc ttgttacgac tt 22 <210> 3 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 530F primer for sequence analysis <400> 3 gtgccagcmg ccgcgg 16 <210> 4 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1100R primer for sequence analysis <400> 4 gggttgcgct cgttg 15

Claims (7)

  1. 페닐알라닌에 대해 기질 특이성을 갖는 아미노산 탈아미노화 효소를 생산하는 프로테우스 불가리스 P2-1 균주(KACC 91462P).
  2. 삭제
  3. 프로테우스 불가리스 P2-1 균주(KACC 91462P)를 페닐알라닌을 함유하는 배지에 배양하고, 그 배양액으로부터 페닐락트산을 회수하는 단계를 포함하는 유기산의 생산방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 페닐알라닌이 배지 1L 당 10 내지 20 g의 양으로 첨가되는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 삭제
  6. 페닐알라닌에 대해 기질 특이성을 갖는 아미노산 탈아미노화 효소를 생산하는 프로테우스 불가리스 P2-1 균주(KACC 91462P) 배양액의 건조물을 포함하는, 유기산제.
  7. 페닐알라닌에 대해 기질 특이성을 갖는 아미노산 탈아미노화 효소를 생산하는 프로테우스 불가리스 P2-1 균주(KACC 91462P) 배양액의 건조물을 포함하는, 사료첨가제
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