KR101078635B1

KR101078635B1 - 백모증의 처리를 위한, 멜라닌 세포 내 글루타티온 수치를증가시킬 수 있는 화합물의 용도

Info

Publication number: KR101078635B1
Application number: KR1020077014338A
Authority: KR
Inventors: 스테판 꼬모
Original assignee: 로레알
Priority date: 2004-12-22
Filing date: 2005-12-20
Publication date: 2011-11-01
Also published as: US20080014229A1; FR2879444A1; US8481762B2; WO2006070101A1; JP2008525387A; FR2879444B1; KR101165648B1; EP1830825A1; JP5730462B2; KR20120116900A; CN101087584B; KR20070086593A; KR20100127890A; CN101087584A

Abstract

본 발명은 모낭 멜라닌 세포 내 글루타티온 (GSH) 수치를 증가시킬 수 있는 화합물의 백모증 처리를 위한 용도에 관한 것이다.

Description

백모증의 처리를 위한, 멜라닌 세포 내 글루타티온 수치를 증가시킬 수 있는 화합물의 용도 {USE OF A COMPOUND CAPABLE OF INCREASING GLUTATHIONE LEVEL IN MELANOCYTES FOR TREATING CANITIES}

본 발명은 백모증의 처리를 위한, 모낭의 멜라닌 세포 내 글루타티온 (GSH) 의 수치를 증가시킬 수 있는 화합물의 미용적 용도에 관한 것이다.

모낭은 피부의 심층까지 뻗어 있는, 표피의 관상 함입이다. 그 하부, 즉 모근은 그 자체가 함입을 포함하고 있으며, 여기에서는 진피 돌기가 발견된다. 모근의 하부는 세포 증식 구역이며, 여기에서는 모발을 구성하는 케라틴화된 세포의 전구체가 발견된다. 이들 전구체로부터 유도된 오름 세포는 모근의 상부에서 점차적으로 케라틴화되고, 이런 케라틴화된 세포 군이 모발 줄기를 형성할 것이다.

두발 및 체모의 색상은, 특히, 두 그룹의 멜라닌의 존재 (다양한 양 및 비) 에 좌우된다: 유멜라닌 (갈색 및 흑색 색소) 및 페오멜라닌 (적색 및 황색 색소). 두발 및 체모의 색소침착은 모낭의 모근 내 멜라닌세포의 존재를 요한다. 이들 멜라닌세포는 활성 상태인데, 즉 그들은 멜라닌을 합성한다. 이들 색소는 모발 줄기를 형성할 케라틴세포로 전달되며, 이로써 색소침착된 두발 또는 체모가 성장할 것이다. 이 구조를 이후 "모낭 색소침착 단위" 라고 칭한다.

포유류에서, 멜라닌형성은 적어도 세 가지의 효소와 관계있다: 티로시나아제, DOPA크롬 토토머라아제 (TRP-2: 티로시나아제 관련 단백질 2) 및 DHICA산화효소 (TRP-1, 티로시나아제 관련 단백질 1).

티로시나아제는 멜라닌의 생합성을 개시하는 효소이다. 그것은 또한 멜라닌형성의 제한효소라고도 설명된다.

TRP-2 는 DOPA크롬이 5,6-디히드록시인돌-2-카르복실산 (DHICA) 이 되는 토토머화에 촉매작용한다. TRP-2 의 부재 하에, DOPA크롬은 자발적인 탈카르복실화를 거쳐 5,6-디히드록시인돌 (DHI) 을 형성한다.

DHICA 및 DHI 는 모두 색소 전구체이고, TRP-1 은 DHICA 분자를 산화시켜 퀴논 유도체를 형성한다 (Pawelek JM. and Chakraborty AK. The Enzymology of Melanogenesis. In: Nordlund JJ, Boissy RE, Hearing VJ, King RA, Ortonne J-P, The Pigmentary System: Physiology and Pathophysiology, New York, Oxford University Press; 1998, p. 391-400).

세 가지 효소, 티로시나아제, TRP-2 및 TRP-1 은 분명히 멜라닌형성에 관여하는 것으로 보인다. 또한, 이들 세 가지 효소의 활성은 유멜라닌 생합성의 최대 활성에 필요하다고 설명되어 왔다.

두발 및 체모는 주기를 겪는다. 이 주기는 성장기 (anagen phase), 퇴행기 (catagen phase) 및 휴지기 (telogen phase) 를 포함하며, 이것에 이어서 새로운 성장기가 전개될 것이다. 이런 모발 주기에 기인하여, 그리고 표피 색소침 착 단위와 달리, 모낭 색소침착 단위는 역시 주기적으로 재생되어야만 한다.

백모증 (모발의 자연적인 백발화 (greying)) 은 모근의 멜라닌세포 및 멜라닌세포에 대한 전구 세포 모두에 영향을 주는, 모발 멜라닌세포의 특이적이며 점진적인 고갈과 연계되어 있다 (Commo et al, Br J Dermatol 2004; 150: 435-443). 모낭에 존재하는 기타 유형의 세포는 영향을 받지 않는다. 또한, 이런 멜라닌세포의 고갈은 표피에서는 관찰되지 않는다. 모낭 내 멜라닌세포 및 멜라닌세포 전구체의 이러한 점진적이며 특이적인 고갈 원인은 아직까지 확인되지 않았다.

그러므로, 인간 모낭으로부터의 멜라닌세포의 소실에 대응하기 위해서, 모근의 활동 멜라닌세포 및 모낭의 상부 영역의 무활동 멜라닌세포 모두에 영향을 주어 백모증에 대응하는 방법이 필요하다고 보인다.

본 출원인은 이미 효소 TRP-2 에 작용하여 모발의 백발화에 대응하는 방법을 설명하였다 (WO 03/103568).

놀랍게도 그리고 예상 밖으로, 본 출원인은 이제 효소 TRP-2 의 발현이 GSH 의 발현과 상호연관되어 있고; 사실상, TRP-2 의 발현이 멜라닌세포 내 GSH 의 수치 증가를 유도한다는 것을 발견하였다.

따라서, TRP-2 를 발현하지 않는 멜라닌세포 (예를 들어, 모발의 멜라닌세포 전구체) 에서는, 효소 TRP-2 를 발현하는 멜라닌세포 (예를 들어, 모든 피부 멜라닌세포) 에 비하여 GSH 의 수치가 낮음이 입증되었다.

그리하여 본 출원인은 이제 백모증의 처리를 위한 새로운 목표를 확인하였고; 멜라닌세포 내 GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물이, 문헌에 기재한 바와 같 은 그들의 탈색소침착 효과와 반대로, 모발 색소침착의 복구에 이르게 한다는 것을 입증하였다.

이런 용도는, 멜라닌세포 내 GSH 수치를 증가시킨다고 알려진 화합물, 예컨대 리포산 및 하이드로쿠마린 (Yamamura et al. 2002, Lin et al. 2002) 이, GSH 가 멜라닌 합성에 바람직하지 못하다는 증명 (Del Marmol et al. 1993, Jara et al. 1988) 과 일치하게, 멜라닌의 합성을 제한하여 피부의 색소침착을 감소시키는 작용제로서 설명된다는 점에서, 그 특징이 놀라운 것이다.

요컨대, 본 발명의 대상은 백모증의 진행을 예방, 제한 또는 중지하고, 두발 및/또는 체모의 자연적인 색소재침착을 유지 및/또는 촉진시킬 수 있는 작용제로서, 모발의 멜라닌세포 내 GSH 의 수치를 증가시킬 수 있는 화합물의 용도에 관한 것이다.

특히, 본 발명의 대상은 백모증 발생의 예방 및/또는 제한 및/또는 중지를 위한, GSH 의 수치를 증가시킬 수 있는 화합물의 용도에 관한 것이다.

GSH 의 수치를 증가시킬 수 있는 화합물은, 예를 들어, GSH 의 합성을 유발시키는 화합물 또는 다르게는 그의 소모를 제한하는 화합물이고; 그들은 특히 하기의 방법으로 확인할 수 있다:

a- 멜라닌세포, 예를 들어, Commo et al; Pigment Cell Res 2004; 17: 488-497 논문에 기재되어 있는 바와 같이 얻은 피부 또는 모발의 멜라닌세포의 일차 배양물을 배양시킴.

b- 상기 배양 배지에, GSH 수치 증가성을 시험하고자 하는 화합물을 첨가함.

c- 그 화합물이 활성이 되도록 하기에 충분한 기간 동안 멜라닌세포를 항온배양시킴.

d- GSH 수치를 측정함.

e- GSH 수치를 증가시키는 화합물을 선별함.

GSH 수치를 증가시키는 화합물을 확인하는 방법의 구체적인 구현예에서, 세포 배양은 37 ℃, 5 % CO₂ 에서 인큐베이터 내에서 수행한다.

특히, 단계 (a) 는 하기의 프로토콜에 따라 수행할 수 있다: D0 에 멜라닌세포를 M2 배지 (Promocell, Heidelberg, D) 로 접종한다. 이는, 예를 들어, Commo et al.; Pigment Cell Res 2004; 17: 488-497 논문에 기재되어 있는 바와 같이 얻은 모발 또는 피부의 멜라닌세포의 일차 배양물일 수 있다.

세포를, 처리하기 전 12 내지 72 시간에 이 배양 배지 내에 유지한다.

단계 (b) 는 하기의 프로토콜에 따라 수행할 수 있다: 멜라닌세포를 배양액 내에서, GSH 수치 증가성을 드러내는데 필요한 시간 동안 그 특성을 시험하고자 하는 화합물로 처리하며, 상기 시간은 일반적으로 12 내지 72 시간이다.

GSH 수치를 측정하기 위한 단계 (d) 는, 예를 들어, HPLC 법으로 수행할 수 있다. 이 측정의 특정 구현예에서, 배양 및 처리 세포로부터 추출한 유리 아미노산 (AA) 를 자동 HITACHI L-8500 아미노산 분석기를 이용하여 분석한다. 이런 방식으로, 유리 아미노산을 이온-교환 컬럼에서 리튬염계 용리액으로 분리한 후, 닌히드린과의 반응 후 비색법으로 검정한다.

GSH 검정은 또한 예를 들어 모노클로로비만 (Molecular Probes, USA) 과 같은 세포내 형광 GSH 탐침을 이용하는 형광법으로 수행할 수 있다.

다르게는, GSH 검정은 Bioxytech GSH -400 비색 검정 키트 (Calbiochem, USA) 와 같은 상업용 키트를 이용하여 수행할 수 있다.

본 발명의 대상은 또한 회색 두발 및/또는 체모의 자연적인 색소침착을 유지하기 위한, GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물의 용도에 관한 것이다.

GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물은 특히 리포산, 올티프라즈, 카웨올, 카페스톨, 안젤리칼락톤, 디알릴 설파이드 및 벤질 이소티오시아네이트로부터 선택될 수 있다 (Scharf G et al. Nurt Cancer. 2003; 45(1): 74-83, Huber WW et al. Environ Mol Mutagen. 2004; 44(4): 265-276, Sheen LY et al. Food Chem Toxicol 1996; 34(10): 971-978, Gupta E et al. Clin Cancer Res. 1995; 1(10): 1133-1138).

바람직하게는, GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물은 N-아세틸시스테인 또는 케르시틴이 아닐 것이다.

본 발명의 대상은 또한 미용적으로 허용가능한 매질 내에, 두피 박리 상태 대응제 및/또는 전색소침착 (propigmenting) 활성이 있는 식물 추출물로부터 선택되는 또다른 활성제와 조합된, N-아세틸시스테인 및 케르시틴을 제외한, 앞서 정의한 바와 같은 GSH 의 수치를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 화합물을 함유하는, 백모증 대응용 조성물이다.

바람직하게는, GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물은 리포산, 올티프라즈, 카웨올, 카페스톨, 안젤리칼락톤, 디알릴 설파이드 및 벤질 이소티오시아네이트로부터 선택된다.

본 발명은 또한 미용적으로 허용가능한 매질 내에, 모발 재생 촉진제와 조합된, 올티프라즈, 카웨올, 카페스톨, 안젤리칼락톤 및 벤질 이소티오시아네이트로부터 선택되는, GSH 의 수치를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 화합물을 함유하는, 백모증 대응용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 조성물은 GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물을 부피당 0.001 중량% 내지 10 중량%, 바람직하게는 부피 당 0.01 내지 5 중량%, 더욱 바람직하게는 또한 부피당 0.1 내지 1 중량% 의 양으로 함유한다.

본 발명에 따른 조성물은 경구 투여되거나 피부 (체모로 덮여 있는 부위의 임의의 피부 부위 전부) 및/또는 두피에 국소 적용할 수 있다.

경구 경로에 의하면, 본 발명에 따른 조성물은 GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물(들)을, 임의로는 착향된 수성 또는 수성-알코올성 용액과 같은 식이액 (dietary fluid) 중 용액 내에 함유할 수 있다. 그들은 또한 흡수성 고체 부형제에 통합될 수 있고, 예를 들어, 과립, 알약, 정제 또는 당-코팅 정제의 형태일 수 있다. 그들을 또한 그 자체가 흡수성 캡슐에 임의로 포장된 식이액 중 용액 내에 둘 수 있다.

투여 방식에 따라, 본 발명의 조성물은 특히 미용업에서 보통 사용되는 임의의 생약 형태일 수 있다.

본 발명의 바람직한 조성물은 두피 및/또는 피부에 대한 국소적 적용에 적합한 미용 조성물이다.

국소적 적용에 있어서, 본 발명에 따라 사용할 수 있는 조성물은 특히 수성, 수성-알코올성 또는 유성 용액 형태, 또는 로션 또는 세럼 유형의 분산액 형태, 지방상을 수상에 분산 (O/W) 또는 반대로 분산 (W/O) 시켜 수득한 우유 유형의 액체 또는 반액체 농도의 에멀션 형태, 또는 크림 또는 수성 겔 또는 무수물 유형의 연질 농도의 현탁액 또는 에멀션 형태, 또는 그 밖에 미소캡슐 또는 미소입자 형태, 또는 이온성 및/또는 비이온성 유형의 소포성 분산액 형태일 수 있다. 따라서, 고약, 팅크, 크림, 연고, 분말, 패치, 함침 패드, 용액, 에멀션 또는 소포성 분산액, 로션, 겔, 스프레이, 현탁액, 샴푸, 에어로졸 또는 포말의 형태일 수 있다. 그들은 무수성 또는 수성일 수 있다. 그것은 또한 비누 또는 글레이징 케익 (glazing cake) 을 구성하는 고체 제제를 이룰 수 있다.

이들 조성물은 통상의 방법에 따라 제조한다.

본 발명에 따라 사용할 수 있는 조성물은, 특히, 모발 관리용 조성물, 특히 샴푸, 헤어-세팅 로션, 트리트먼트 로션, 헤어-스타일링 크림 또는 겔, 임의로는 염색 샴푸 형태의 염색 (특히 산화 염색) 조성물, 모발 재건 로션, 또는 마스크일 수 있다.

본 발명에 따른 미용 조성물은 바람직하게는 크림, 헤어 로션, 샴푸 또는 컨디셔너일 것이다.

본 발명에 따라 사용할 수 있는 조성물의 각종 구성성분의 양은 해당 분야에 통상적으로 사용되는 양이다.

본 발명에 따라 사용할 수 있는 조성물이 에멀션인 경우, 지방상의 비율은 조성물 총 중량에 대하여 5 중량% 내지 80 중량%, 바람직하게는 5 중량% 내지 50 중량% 범위일 수 있다. 에멀션 형태의 조성물에 사용되는 오일, 왁스, 유화제 및 공유화제는 화장품 분야에 통상적으로 사용되는 것들로부터 선택된다. 유화제 및 공유화제는 조성물 내에 조성물 총 중량에 대하여 0.3 중량% 내지 30 중량%, 바람직하게는 0.5 내지 20 중량% 범위의 비율로 존재한다. 에멀션은 지질 운반체를 추가로 함유할 수 있다.

본 발명에 따라 사용할 수 있는 조성물이 유성 겔 또는 용액인 경우, 지방상은 조성물 총 중량의 90 % 초과를 나타낼 수 있다.

본 발명의 한 가지 변형에서, 조성물은 GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물을 미소구체, 나노구체, 올레오솜 또는 나노캡슐과 같은 코팅물에 캡슐화시킨 조성물일 것이며, 상기 코팅물은 GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물의 화학적 성질에 따라 선택될 것이다.

예로서, 미소구체는 특허 출원 EP 0 375 520 에 기재되어 있는 방법에 따라 제조할 수 있다.

나노구체는 수성 현탁액의 형태로 제공될 수 있고, 특허 출원 FR 0015686 및 FR 0101438 에 기재되어 있는 방법에 따라 제조할 수 있다.

올레오솜은 유성 구체로 형성된 수-중-유 에멀션을 이루는데, 단, 판상 액정 코팅물이 수상에 분산되어 있다 (특허 출원 EP 0 641 557 및 EP 0 705 593 참고).

GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물은 또한 실리콘 계면활성제로부터 수득한 판상 코팅물을 이루는 나노캡슐에 캡슐화시킬 수 있고 (특허 출원 EP 0 780 115 참고), 상기 나노캡슐은 또한 수분산성 설폰산 폴리에스테르를 기초로 제조할 수 있다 (특허 출원 FR 0113337 참고).

GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물은 또한, 크기와 상관없이, 양이온성 유성 구체의 표면에서 착물을 형성할 수 있다 (특허 출원 EP 1 010 413, EP 1 010 414, EP 1 010 415, EP 1 010 416, EP 1 013 338, EP 1 016 453, EP 1 018 363, EP 1 020 219, EP 1 025 898, EP 1 120 101, EP 1 120 102, EP 1 129 684, EP 1 160 005 및 EP 1 172 077 참고).

GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물은 최종적으로 나노캡슐 또는 나노입자의 표면에서 착물을 형성할 수 있는데, 단, 판상 코팅물로 제공되고 (EP 0 447 318 및 EP 0 557 489 참고), 표면에 양이온성 계면활성제를 함유 (양이온성 계면활성제에 대하여 앞서 인용한 참조문헌 참고) 한다.

특히, GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물을 함유하는 코팅물은 직경이 10 ㎛ 이하인 조성물이 바람직할 것이다. 코팅물이 구형 운반체를 형성하지 않는 경우, 용어 직경은 그 운반체의 장경인 것으로 본다.

알려진 대로, 본 발명에 따른 조성물은 또한 화장품 분야에 통례적인 보조제, 예컨대 친수성 또는 친지성 겔화제, 친수성 또는 친지성 첨가제, 보존제, 항산화제, 용매, 향료, 충전제, 차폐제, 냄새 흡수제 및 착색 물질을 함유할 수 있다. 이들 각종 보조제의 양은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예를 들어, 조성물 총 중량의 0.01 % 내지 10 % 이다. 이들 보조제는, 그들의 성질에 따라, 지방상 속에, 수상 속에 및/또는 지질공 (lipid spherule) 속에 도입시킬 수 있다.

본 발명에 사용할 수 있는 오일 또는 왁스로서, 미네랄 오일 (액체 파라핀), 식물성 오일 (시어 버터의 액체 분획, 해바라기유), 동물성 오일 (퍼하이드로스쿠알렌), 합성 오일 (퍼셀린 오일), 실리콘 오일 또는 왁스 (시클로메티콘) 및 불소화된 오일 (퍼플루오로폴리에테르), 밀랍, 카르나우바 왁스 또는 파라핀 왁스를 언급할 수 있다. 이들 오일에 지방성 알코올 및 지방산 (스테아르산) 을 첨가하는 것 또한 가능하다.

본 발명에 사용할 수 있는 유화제로서, 예를 들어, 글리세릴 스테아레이트, 폴리소르베이트 60 및 Gattefosse 사로부터 Tefose® 63 이라는 명칭으로 판매되는 PEG-6/PEG-32/글리콜 스테아레이트 혼합물을 언급할 수 있다.

본 발명에 사용할 수 있는 용매로서, 저급 알코올, 특히 에탄올 및 이소프로판올, 프로필렌 글리콜을 언급할 수 있다.

본 발명에 사용할 수 있는 친수성 겔화제로서, 카르복시비닐 중합체 (카보머), 아크릴 공중합체 예컨대 아크릴레이트/알킬 아크릴레이트 공중합체, 폴리아크릴아미드, 다당류 예컨대 히드록시프로필셀룰로오스, 천연 고무 및 점토를 언급할 수 있고, 친지질 겔화제로서, 개질 점토 예컨대 벤톤, 지방산의 금속 염 예컨대 알루미늄 스테아레이트 및 소수성 실리카, 에틸셀룰로오스, 폴리에틸렌을 언급할 수 있다.

본 발명에 따라 사용할 수 있는 조성물은 GSH 수치를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 화합물을 기타 활성제와 조합할 수 있다. 이들 활성제 중에서, 예로서, 하기를 언급할 수 있고:

- 피부 세포의 분화 및/또는 증식 및/또는 색소침착 조절제, 예컨대 레티놀 및 그의 에스테르, 비타민 D 및 그의 유도체, 오에스트로겐 예컨대 오에스트라디올, cAMP 조절제 예컨대 POMC 유도체, 아데노신, 또는 포르스콜린 및 그의 유도체, 프로스타글란딘 및 그의 유도체, 트리아이오도트리오닌 및 그의 유도체;

- 붓꽃 (Iridaceae) 으로부터 또는 대두로부터의 것들과 같은 식물 추출물, 이때, 이 추출물은 이소플라본을 함유하거나 그렇지 않을 수 있음;

- 미생물 추출물;

- 항-유리 라디칼제 예컨대 α-토코페롤 또는 그의 에스테르, 과산화물 디스뮤타아제 또는 그의 모방물, 특정 금속 킬레이트제 또는 아스코르브산 및 그의 에스테르;

- 지루모낭염 방지제 예컨대 특정 황-함유 아미노산, 13-시스-레틴산, 사이프로테론 아세테이트;

- 기타 두피 박리 상태 대응제 예컨대 아연 피리티온, 이황화셀레늄, 클림바졸, 운데실렌산, 케토코나졸, 피로크톤 올아민 (옥토피록스) 또는 시클로피로크톤 (시클로피록스);

특히, 그들은 재생을 촉진시키고/시키거나 탈모 둔화를 촉진시키는 활성제일 수 있고, 비제한적으로, 더욱 특히 하기를 언급할 수 있다:

- 니코틴산 에스테르, 특히 토코페릴 니코티네이트, 벤질 니코티네이트 및 C₁-C₆ 알킬 니코티네이트 예컨대 메틸 또는 헥실 니코티네이트 포함;

- 피리미딘 유도체, 예컨대 특허 US 4 139 619 및 US 4 596 812 에 기재되어 있는 2,4-디아미노-6-피페리디노피리미딘 3-옥사이드 또는 "Minoxidil"; WO 96/09048 에 기재되어 있는 Aminexil 또는 2,4-디아미노피리미딘 3-옥사이드;

- 모발 재생을 촉진시키는 지방산화효소-저해제 또는 시클로옥시다아제-유도제, 예컨대 유럽 특허 출원 EP 0 648 488 에서 출원인이 기재한 것들;

- 항균제 예컨대 마크롤라이드, 피라노사이드 및 테트라사이클린, 특히 에리트로마이신;

- 칼슘 길항제, 예컨대 신나리진, 니모디핀 및 니페디핀;

- 호르몬, 예컨대 오에스트리올 또는 유사물, 또는 티록신 및 그의 염;

- 항안드로겐제, 예컨대 옥센돌론, 스피로노락톤, 디에틸스틸베스트롤 및 플루타미드;

- 5-α-환원효소의 스테로이드 또는 비-스테로이드 저해제, 예컨대 유럽 특허 출원 EP 0 964 852 및 EP 1 068 858 에서 출원인이 기재한 것들, 또는 그 밖에 피나스테라이드;

- ATP-의존성 칼륨 통로 작동제 예컨대 크로마칼림 및 니코란딜;

- 전색소침착 활성이 있는 식물 추출물, 예컨대 FR 2768343 에 기재되어 있는 국화 (chrysanthemum) 추출물 및 FR 2782920A1 에 기재되어 있는 오이풀 (Sanguisorba) 추출물.

바람직하게는, GSH 수치를 증가시킬 수 있는 화합물은, 두피 박리 상태 대응제, 모발 재생 촉진제, 및 전색소침착 활성이 있는 식물 추출물로부터 선택되는 또다른 활성제와 조합한다.

본 발명의 또다른 대상은 GSH 수치를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 화합물을 함유하는 앞서 정의한 바와 같은 조성물을 투여하거나, 또는 처리할 부위에 적용하는 것을 특징으로 하는, 백모증의 미용적 처리 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 GSH 수치를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 화합물을 함유하는, 앞서 정의한 바와 같은 조성물을 처리할 부위에 적용하는 것을 특징으로 하는, 회색 또는 백색 두발 및/또는 체모의 자연적인 색소침착을 유지하고자 하는 미용적 처리 방법에 관한 것이다.

백모증 처리 및 회색 또는 백색 두발 및/또는 체모의 색소침착 방법은 또한 GSH 수치를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 화합물을 함유하는 조성물을 흡수하는데 있을 수 있다.

처리할 부위는, 예를 들어 그리고 비제한적으로, 두피, 눈썹, 콧수염 및/또는 턱수염 및 모발로 덮여 있는 임의의 피부 부위일 수 있다.

더욱 특히, 백모증의 미용적 처리 및 회색 또는 백색 두발 및/또는 체모의 자연적인 색소침착 방법은, GSH 수치를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 화합물을 함유하는 조성물을 적용하는데 있다.

백모증 대응용 및/또는 회색 또는 백색 두발 및/또는 체모의 자연적인 색소침착 유지용 미용적 처리 방법은, 예를 들어, 저녁에 모발 및 두피에 상기 조성물을 적용하고, 그 조성물을 밤새 유지하고 임의로는 아침에 헹구거나, 이 조성물을 사용하여 모발을 세척하고 다시 수 분 동안 접촉 방치시킨 후, 헹구는데 있을 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은, 임의로는 헹궈내는 헤어 로션의 형태 또는 심지어는 샴푸의 형태로 적용할 때, 특히 유리하다고 판명되었다.

도 1:

도 1 은 실시예 1 에 기재하는 바와 같이, 멜라닌세포주 WM35-wt (야생형), C2, C4, C7 및 C8 (형질전환 및 선별 클론) 에 대한 항-TRP-2 및 항-비멘틴 항체의 웨스턴 블랏 (Western blot) 을 나타낸다. 이 웨스턴 블랏으로부터, 클론 C2, C4 및 C8 만이 TRP-2 를 발현시킨다는 것이 명백하다.

도 2:

도 2 는 멜라닌세포주 WM35-wt (야생형), C2, C4, C7 및 C8 에서 검정한 선별 아미노산의 합에 대한 GSH 의 비를 나타내는 히스토그램이다 (실시예 1, 파트 C 참고).

도 3 및 4:

도 3 및 4 는 TRP-2 를 약하게 발현하거나 발현하지 않는 야생형 멜라닌세포 (다이아몬드), 멜라닌세포 TRP2(+) (정사각형) 및 카페스톨 + 카웨올 (도 3) 의 조합 또는 올티프라즈 (도 4) 로 처리한, TRP-2 를 약하게 발현하거나 발현하지 않는 야생형 멜라닌세포 (삼각형) 의 세포 생육성에 대한 산화성 스트레스 (H₂O₂) 의 효과를 나타낸다.

실시예 1: TRP - 2 의 발현 함수로서, 멜라닌세포 내 GSH 의 검정

A- TRP -2 양성 및 TRP -2 음성 멜라닌세포주의 제조

A1: TRP-2 단백질의 클로닝

TRP-2 단백질을 암호화하는 메신저 RNA 의 전영역을, 피부 멜라닌세포의 일차 배양물로부터 추출한 메신저 RNA 로부터, Genebank D17547 서열에 따라, 탐침 5'-GGAGATGGTGAGAAGCGCTAC-3' 및 5'-GCGGAAACTACAGCTAAGCAT-3' 를 이용하는 RT-PCR 기술에 의해서 클로닝하였다. 수득한 PCR 산물을 클로닝용 제한 부위에 해당하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 탐침: 5'-AGGGATCCATGAGCCCCCTTTGGTGGGGGTTT-3' 및 5'-GGAATTCAGCACCCTAGGCTTC-3' 를 이용하여 진핵성 발현 벡터 내로 다시 클로닝하였다. 사용하는 발현 벡터는 pCDNA3.1(+) 이다. 이어서, TRP-2 단백질을 암호화하는 영역을 포함하는 벡터를 적격 박테리아로부터 제조한 후, 정제하였고, 이때 이 벡터는 pCDNA-TRP2 라고 칭한다.

A2: TRP-2 양성 흑색종 세포주의 제조

시험관 내에서 구조적으로 TRP-2 단백질을 약하게 발현하는 흑색종 유형 WM35 의 세포 (Pak BJ et al. Melanoma Res. 2000; 10: 499) (야생형 세포주) 를 플라스미드 pCDNA-TRP2 로 형질전환시켰다. 이어서, 안정하게 형질전환된 세포 를 게네티신 (G418) 으로 처리하여 선별하였다. 이어서, 수득한 클론을 분리하고 증폭시켰다.

B: 다양한 선별 클론 내 TRP - 2 의 특이적 발현의, 웨스턴 블랏법에 의한 검사 (Commo et al; Pigment Cell Res 2004; 17: 488-497 참고)

클론 각각의 배양물을 단백질 추출 및 웨스턴 블랏 분석에 적당한 동일 용해 완충액으로 용해시켰다. 다양한 추출물 중 TRP-2 수치를 8 ㎍ 의 단백질 추출물로부터 웨스턴 블랏법에 의해서 측정하였다. 웨스턴 블랏 (Maniatis et al. 의 프로토콜 참고) 은 하기의 항체들로 생성하였다:

αPEP8h, Dr VJ Hearing 이 제공한 폴리클로날 항체 (NIH, Bethesda, USA), 및 α비멘틴, 모노클로날 항체 Vim3B4 (Cymbus, UK).

도 1 은 클론 7 및 야생형 (wt) 세포주에 비하여 클론 C2, C4 및 C8 이 TRP-2 단백질을 더 발현함을 보여준다.

C: TRP -2 양성 및 TRP -2 음성 클론에서의 GSH 검정

연구중인 클론 각각에 있어서, 세포를 2 × 10⁴ 세포/㎠ 의 비율로 접종하였다. 이어서, 세포 배양물을 용해 완충액 pH 2 를 이용하여 용해시켰다. 추출된 유리 아미노산 (AA) 를 자동 HITACHI L-8500 아미노산 분석기를 이용하여 분석하였다. 이런 방식으로, 리튬염계 용리액으로 이온-교환 컬럼에서 유리 AA 를 분리한 후, 닌히드린과 반응 후에 비색법으로 검정하였다. 각각의 추출물에서, 측정한 GSH 수치는 AA 의 합 (프롤린 (P), 글리신 (G), 알라닌 (A), 발린 (V), 시스테인 (C), 메티오닌 (M), 이소류신 (I), 류신 (L), 타이로신 (Y), 페닐알라닌 (F), 리신 (K), 히스티딘 (H), 아르기닌 (R)) 에 대하여 표현하여 샘플을 정규화하였다.

도 2 는 클론 C7 보다 그리고 야생형 세포주보다 클론 C2, C4 및 C8 이 더 높은 GSH 수치를 보유함을 보여준다.

실시예 2 - TRP -2 (-) 멜라닌세포의 생육성에 대한, GSH 수치를 증가시키고 그의 감소를 제한하는 화합물의 효과의 예

이 검정의 원리는 다음과 같다:

a- 실시예 1A 에 사용한 것과 유사한 방법에 따라 발생시킨, TRP-2 를 발현하고 TRP-2 를 발현하지 않는 두 가지 세포 유형, TRP2(+) 세포 및 TRP2(-) 세포를 각각 배양시킴; 이들은 임의의 세포 유형, 바람직하게는 멜라닌세포일 수 있음.

b- GSH 의 축적을 촉진시킬 수 있는 화합물을 TRP2(-) 세포 배양 배지에 첨가함.

c- 세포 내 GSH 수치를 증가시키기에 충분한 장기간 동안 배양물을 항온배양함.

d- 세포를 세포자멸사 또는 노화 유발 조건에 노출시킴.

e- 세포자멸사 또는 노화를 측정함.

f- GSH 의 축적을 촉진시키고, TRP2(-) 세포의 보호가 가능한 화합물을 선별함.

상기 방법의 특정 구현예에서, 세포 배양은 인큐베이터 내에서 37 ℃, 5 % CO₂ 에서 수행하였다.

특히, 단계 (a) 는 하기의 프로토콜에 따라 수행할 수 있다: 세포를 D0 에 M2 배지 (PromoCell, Heidelberg, D) 로 5 × 10⁴ 세포/㎠ 의 밀도로 접종하였다. 세포를 처리 전 12 내지 72 시간에 이 배양 배지 내에 유지하였다.

단계 (b) 는 하기의 프로토콜에 따라 수행할 수 있다: 이 특성이 드러나는데 필요한 시간 동안 세포를 시험 화합물로 배양물 내에서 처리하였고, 이 시간은 일반적으로 12 내지 72 시간이다.

단계 (d) 를 수행하기 위해서, TRP2(+) 세포 및 TRP2(-) 세포 모집단을 배양물 내에서 세포자멸사 또는 노화 유발 조건에 노출시켰고; 이는, 예를 들어, 시스플라틴 (Pak B.J. et al., 2000, Melanoma Res. 10: 499-505) 또는 옥살리플라틴으로, 아드리아마이신, 디히드록시페닐알라닌, 파라콰트, 파라세타몰, 4-히드록시오에스트라디올, 또는 다르게는 4-히드록시아니솔과 같은 독물 또는 독성 분자에 있어서의 전구 화합물로의 처리, 자외선에 대한 노출, 산화성 스트레스 (H₂O₂, 디에틸 말레이트) 일 수 있다 (Vaux D.L. & Strasser A., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 2239-2244 참고).

단계 (e) 를 수행하기 위해서, 세포자멸사 또는 노화를 보이기 위하여 하기의 방법이 사용가능할 것이다:

- 세포자멸사 반응은 세포자멸사를 드러내는 임의의 방법, 예를 들어, "TUNNEL" 법에 의해서 DNA 절편을 표지하는, 아가로오스 겔에서의 전기영동 후 DNA 분절의 확인 (Gavrieli Y et al. J Cell Biol 1992; 119: 493-501), 아넥신 V 의 노출 (ApoAlert Annexin V Apoptosis Kit (1996) CLONTECHniques XI(3): 9-11 (BD Biosciences, Belgium)), 세포질 뉴클레오솜의 검정 (Kit Cell Death Detection ElisaPlus (1-774-425, Roche, Germany)); 세포 생육성의 측정으로 측정할 수 있다.

- 노화 반응은 세포 노화를 드러내는 임의의 방법, 예를 들어, 끝분절 단축의 측정, 끝분절효소 활성의 측정 (TRAPeze 키트, Intergen), 사이클린 E 의 수치 감소의 측정, 인산화된 단백질 Rb 의 수치 감소의 측정 (Bandyopadhyay D et al. Experimental Gerontology 2001; 36: 1265-1275), 베타-갈락토시다아제 활성의 측정 (Dimri GP et al. PNAS 1995; 92: 9363-9367) 으로 측정할 수 있다.

본 경우에, 야생형 세포주 WM35 를 H₂O₂ 스트레스에 노출시켰을 때, 이 세포를 보호함으로써, 이 세포에서의 TRP-2 의 약한 발현을 보충하는, 한편으로는 카페스톨/카웨올 혼합물의, 그리고 다른 한편으로는, 올티프라즈의 능력의 측정을 수행하였다.

본 연구에서 "야생형" 세포주라고 칭하는, TRP-2 를 아주 약하게 발현하는 인간 멜라닌세포주 WM35 (Pak BJ et al. Melanoma Res. 2000; 10: 499) 및 형질전환 (실시예 1 의 포인트 A 및 B 참고) 에 의해 수득한, 본 연구에서 "클론-2" 라고 칭하는, TRP-2 를 고도로 발현하는 WM35 세포주 유래의 세포주를 이용하여 연구를 수행하였다.

시험을 수행하기 위해서, 세포를 2.5 × 10⁴ 세포/웰의 밀도로 접종한 후, 평가할 화합물로 처리하였다:

a- 4 ㎍/㎖ 의 카페스톨 및 카웨올을 함유하는 1:1 혼합물;

b- 50 μM 의 올티프라즈.

24 시간 후, 세포를 H₂O₂ 로 유발한 스트레스에 노출시켰다.

2',7'-디클로로디히드로플루오레세인 디아세테이트 (H₂DCFDA; D399, Molecular Probes) 를 이용하여, 스트레스 24 시간 후에 세포 생육성을 측정하였다.

수득한 결과 (표 1 및 2 및 도 3 및 4) 는 한편으로는 카페스톨/카웨올 혼합물을 이용한, 그리고 다른 한편으로는, 올티프라즈를 이용한 야생형 세포주의 처리가 H₂O₂ 유발 스트레스에 대한 세포의 민감성을 제한한다는 것을 보여준다. 따라서, 상기 결과는, 처리 후, 야생형 세포주의 민감성이 클론-2 세포주의 민감성에 비견할만해 진다는 것을 보여준다.

표 1: 카페스톨 + 카웨올 처리 (결과는 H₂O₂ 처리의 함수로서 % 생육성으로 표현함)

표 2: 올티프라즈 처리 (결과는 H₂O₂ 처리의 함수로서 % 생육성으로 표현함)

TRP-2 를 약하게 발현하거나 발현하지 않는 멜라닌세포를, 한편으로는 카페스톨/카웨올 혼합물로, 그리고 다른 한편으로는 올티프라즈로 처리하면, H₂O₂ 유발 스트레스에 대한 민감성과 관련하여 TRP-2 의 약한 발현이 보충되며, 따라서 TRP-2 발현 수치가 약하거나 없는 멜라닌세포에 유익하다고 결론지을 수 있다.

실시예 3 - 조성물

- 헤어 로션

DOPA크롬 토토머라아제의 대사 경로에 작용할 수 있는 화합물 0.5 g

프로필렌 글리콜 20 g

에탄올, 95 % 30 g

물 100 g 이 될 때까지

이 로션을 처리할 부위, 바람직하게는 두피 전체에 적어도 10 일 동안, 바람직하게는 1 내지 2 개월 동안 매일 적용하였다.

백색 또는 회색 모발의 출현이 감소하였고, 이때 회색 모발의 색소재침착이 관찰되었다.

- 트리트먼트 샴푸

DOPA크롬 토토머라아제의 대사 경로에 작용할 수 있는 화합물 1.5 g

폴리글리세릴 3-히드록시아릴 에테르 26 g

히드록시프로필셀룰로오스

(Hercules 사가 명칭 Klucell G 로 판매) 2 g

보존제 적량

에탄올, 95 % 50 g

물 100 g 이 될 때까지

이 샴푸를 체류 (leave-in) 시간 약 1 분으로 매 세척시 사용하였다. 대략 2 개월의 장기 사용은 회색 모발의 점차적인 색소재침착을 이끌어 내었다.

이 샴푸는 모발의 백발화를 지연시키기 위해서 예방적으로도 사용할 수 있다.

- 트리트먼트 겔

DOPA크롬 토토머라아제의 대사 경로에 작용할 수 있는 화합물 0.75 g

유칼립투스 정유 1 g

에코나졸 0.2 g

라우릴 폴리글리세릴 6 세테아릴 글리콜에테르 1.9 g

보존제 적량

Carbopol 934P (BF Goodrich Corporation 사 판매) 0.3 g

중화제 pH 7 이 될 때까지

물 100 g 이 될 때까지

이 겔을 처리할 부위에 1일 2 회 (아침 그리고 저녁) 적용하고 마사지로 마무리하였다. 3 개월 동안 적용한 후, 처리한 부위의 체모 또는 두발의 색소재침착이 관찰되었다.

Claims

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미용적으로 허용가능한 매질 내에,

아연 피리티온, 이황화셀레늄, 클림바졸, 운데실렌산, 케토코나졸, 피로크톤 올아민 (옥토피록스) 또는 시클로피로크톤 (시클로피록스)로부터 선택되는 두피 박리 상태 대응제; 국화 (chrysanthemum) 추출물 또는 오이풀 (Sanguisorba) 추출물로부터 선택되는 전색소침착 (propigmenting) 활성이 있는 식물 추출물; 또는 이들 모두로부터 선택되는 또다른 활성제와 조합된,

리포산, 올티프라즈, 카웨올, 카페스톨, 안젤리칼락톤, 디알릴 설파이드 및 벤질 이소티오시아네이트로 이루어진 군으로부터 선택되는, 글루타티온의 수치를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 화합물을 함유하는, 모발의 자연적인 백색화 (natural hair whitening) 대응용 미용 조성물.
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미용적으로 허용가능한 매질 내에,

니코틴산 에스테르; 모발 재생을 촉진시키는 시클로옥시다아제-유도제 또는지방산화효소-저해제; 항균제; 칼슘 길항제; 오에스트리올, 티록신 및 그들의 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 호르몬; 옥센돌론, 스피로노락톤, 디에틸스틸베스트롤 및 플루타미드로 이루어진 군으로부터 선택되는 항안드로겐제; 5-α-환원효소의 스테로이드 또는 비-스테로이드 저해제; 및 ATP-의존성 칼륨 통로 작동제로 이루어진 군으로부터 선택되는, 모발 재생 촉진제와 조합된,

올티프라즈, 카웨올, 카페스톨, 안젤리칼락톤 및 벤질 이소티오시아네이트로 이루어진 군으로 부터 선택되는, 글루타티온의 수치를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 화합물을 함유하는, 모발의 자연적인 백색화 (natural hair whitening) 대응용 미용 조성물.
제 5 항 또는 제 7 항에 있어서, 글루타티온 수치를 증가시킬 수 있는 화합물이 미소구체, 나노구체, 올레오솜 및 나노캡슐로 이루어진 군으로부터 선택되는 코팅물에 캡슐화되는 것을 특징으로 하는, 미용 조성물.
제 5 항 또는 제 7 항에 있어서, 두피 또는 모발로 덮여 있는 피부 부위에 국소 적용하기에 적합한 것을 특징으로 하는, 미용 조성물.
제 7 항에 있어서, 글루타티온의 수치를 증가시킬 수 있는 하나 이상의 화합물이 카웨올, 카페스톨, 안젤리칼락톤 및 벤질 이소티오시아네이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 미용 조성물.