KR100986945B1 - 젬시타빈 및 ｅｇｆｒ-억제제로의 치료 - Google Patents

젬시타빈 및 ｅｇｆｒ-억제제로의 치료 Download PDF

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Abstract

본 발명은 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈을, 기타 항암 약물 또는 방사선 치료와 같은 추가의 제제 또는 치료와 함께, 또는 추가의 제제 또는 치료 없이 사용하는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이를 위한 약제 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 약학적으로 허용되는 담체와 함께 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합을 포함하는 약학 조성물을 포함한다. 본 발명을 수행하는데 사용될 수 있는 EGFR 키나아제 억제제의 바람직한 예는 엘로티닙 HCl (TarcevaTM으로도 알려짐) 화합물이다.

Description

젬시타빈 및 ＥＧＦＲ-억제제로의 치료 {TREATMENT WITH GEMCITABINE AND AN EGFR-INHIBITOR}
본 발명은 암 치료에 의도되는 조성물 및 약제 제조 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 젬시타빈 (gemcitabine) 및 표피 성장 인자 (EGFR) 키나아제 억제제를 함유하는 약제를 제조하기 위한 방법에 관한 것이다.
암은 비(非)조절 성장, 분화의 결여, 국부 조직으로의 침범 및 전이 능력의 특징을 갖는 광범위한 세포성 암에 대한 총칭이다. 이러한 신생물성 암은 다양한 정도의 유병율로 신체의 모든 조직 및 장기에 영향을 미친다.
다수의 치료제가 지난 수십년 동안 여러 종류의 암 치료를 위해 개발되어 왔다. 가장 흔히 사용되는 항암제의 종류는 다음을 포함한다: DNA-알킬화제 (예를 들어, 시클로포스파미드, 이포스파미드), 항대사물질 (예를 들어, 메토트렉세이트, 엽산 길항제, 및 5-플루오로우라실, 피리미딘 길항제), 미세관 붕괴제 (예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 파클리탁셀), DNA 삽입제 (intercalator) (예를 들어, 독소루비신, 다우노마이신, 시스플라틴), 및 호르몬 치료 (예를 들어, 타목시펜, 플루타미드).
National Cancer Institute 에 의하면, 폐암은 미국 내에서 암 사망의 단독 의 가장 큰 원인이며, 미국 내 암 사망의 대략 30% 의 원인이다. World Health Organization 에 의하면, 매년 세계적으로 백이십만 건 이상의 폐 및 기관지 암이 있으며, 연간 약 백십만 명의 사망을 초래한다. NSCLC 는 폐암의 가장 흔한 형태이며, 모든 사례의 거의 80% 를 차지한다. 폐암의 치료 옵션은 암의 형태 및 단계에 따라, 수술, 방사선 요법, 화학요법의 단독 또는 조합이다. 진행된 NSCLC 의 경우, 활성인 것으로 나타난 제제는 시스플라틴, 카보플라틴, 파클리탁셀, 도세탁셀, 토포테칸, 이리노테칸, 비노렐빈, 젬시타빈 (예를 들어, gemzar®), 및 EGFR 키나아제 억제제 게피티닙 및 엘로티닙 (erlotinib) 을 포함한다. 시스플라틴-함유 및 카보플라틴-함유 조합 화학요법은 단일-제제 화학요법으로 달성된 것보다 높은 목표 반응율을 수득하는 것으로 나타났다 (Weick, J. K., et al. (1991) J. Clin. Oncol.9(7):1157-1162). 파클리탁셀이 제 IV 단계 환자에서 21% 내지 24% 범위의 반응율의 단일-제제 활성을 갖는 것이 보고되었다 (Murphy W. K., et al. (1993) J. Natl. Cancer Inst. 85 (5):384-388). 파클리탁셀 조합은 비교적 높은 반응율, 상당한 1 년 생존, 및 폐암 증상의 완화를 나타내었다 (Johnson D. H., et al. (1996) J. Clin. Oncol. 14 (7):2054-2060). 파클리탁셀 및 카보플라틴 요법으로, 32% 내지 54% 의 1-년 생존율과 함께 27% 내지 53% 범위의 반응율을 나타내었다. 그러나, 이러한 치료의 효율은, 어떠한 특정 요법도 현재 표준적인 치료로 고려될 수 없는 상태이다.
표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 키나아제, 또는 그의 리간드 TGF-α 의 과발 현은 유방암, 폐암, 직장결장암 및 두경부암을 포함하는 여러 암과 흔히 관련되며 (Salomon D.S., et al. (1995) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 19:183-232; Wells, A. (2000) Signal, 1:4-11), 이들 암의 악성 성장에 기여하는 것으로 생각된다. EGFR 유전자의 특정 삭제-돌연변이 또한 세포성 종양발생력 (tumorigenicity) 을 증가시키는 것으로 확인되었다 (Halatsch, M-E. et al. (2000) J. Neurosurg. 92:297-305; Archer, G. E. et al. (1999) Clin. CancerRes. 5: 2646-2652). EFGR 자극 신호 경로의 활성은 암-촉진 가능성이 있는 다중 과정, 예를 들어, 증식, 혈관형성, 세포 운동성 및 침입, 감소된 세포자멸사 및 약물 저항의 유도를 촉진한다. 종양억제제로서의 용도를 위한, EGFR 의 키나아제 활성을 직접적으로 억제하는 화합물, 및 EGFR 활성을 차단하여 EGFR 키나아제 활성을 감소시키는 항체의 개발은 집약적 연구의 분야이다 (de Bono J. S. and Rowinsky, E. K. (2002) Trends in Mol. Medicine 8:S19-S26; Dancey, J. and Sausville, E. A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2:92-313). 다수의 연구는 EGFR 키나아제 억제제 중 일부가 임의의 기타 항암제 또는 화학요법제 또는 치료와 함께 사용되는 경우 종양 세포 또는 신생물 치사를 개선할 수 있다는 것을 보여주거나 개시하였다 (예를 들어, Raben, D. et al. (2002) Semin. Oncol. 29: 37-46; Herbst, R. S. et al. (2001) Expert Opin. Biol. Ther. 1: 719-732; Magne, N et al. (2003) Clin. Can. Res. 9: 4735-4732; Magne, N. et al. (2002) British Journal of Cancer 86: 819-827; Torrance, C. J. et al. (2000) Nature Med. 6:1024-1028; Gupta, R.A. and DuBois, R. N. (2000) Nature Med. 6: 974-975; Tortora, et al. (2003) Clin. Cancer Res. 9: 1566-1572; Solomon, B. et al (2003) Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 55: 713-723; Krishnan, S. et al. (2003) Frontiers in Bioscience 8, el-13; Huang, S et al. (1999) Cancer Res. 59: 1935-1940; Contessa, J. N. et al. (1999) Clin. Cancer Res. 5: 405-411; Li, M. et al. Clin. (2002) Cancer Res. 8: 3570-3578; Ciardiello, F. et al. (2003) Clin. Cancer Res. 9: 1546-1556; Ciardiello, F. et al. (2000) Clin. Cancer Res. 6: 3739-3747; Grunwald, V. and Hidalgo, M. (2003) J. Nat. Cancer Inst. 95:851-867; Seymour L. (2003) Current Opin. Investig. Drugs 4 (6):658-666; Khalil M. Y. et al. (2003) Expert Rev. Anticancer Ther.3:367-380; Bulgaru, A.M. et al. (2003) Expert Rev. Anticancer Ther. 3:269-279; Dancey, J. and Sausville, E. A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2: 92-313; Kim, E. S. et al. (2001) Current Opinion Oncol. 13:506-513; Arteaga, C. L. and Johnson, D. H. (2001) Current Opinion Oncol. 13: 491-498; Ciardiello, F. et al. (2000) Clin. Cancer Res. 6: 2053-2063; Patent Publication Nos: US 2003/0108545; US 2002/0076408; and US 2003/0157104; and International Patent Publication Nos: WO 99/60023; WO 01/12227; WO 02/055106; WO 03/088971; WO 01/34574; WO01/76586; WO 02/05791; 및 WO 02/089842).
항신생물성 약물은 이상적으로 암세포를 선택적으로 죽일 수 있고, 비-악성 세포에 대한 그의 독성에 대해 넓은 치료 지수를 갖는다. 이는 또한 약물에 장기간 노출된 후에도 악성 세포에 대한 효능을 유지한다. 불행하게도, 현재의 화학요법 중 아무것도 이러한 이상적인 프로파일을 갖지 않는다. 대신, 대부분이 매우 좁은 치료 지수를 갖는다. 또한, 약간 치사량에 가까운 농도의 화학요법제에 노출된 암세포는 매우 흔히 그러한 제제에 내성을 갖게 되며, 기타 신생물 억제제에도 흔히 교차 내성을 갖게 될 것이다.
따라서, 신생물 및 기타 증식성 질병에 대해 더욱 효과적인 치료에 대한 필요가 있다. 기존의 약물의 치료 효능을 개선시키기 위한 방법은 그의 투여 계획의 변화, 및 또한 기타 항암제 또는 생화학 조절제와 조합한 그의 사용을 포함한다. 조합 치료는 각 제제의 치료적으로 적절한 투여량 단독 사용에 비해 보다 큰 효능 및 감소된 부작용을 초래하는 방법으로 잘 알려져 있다. 일부 경우, 약물 조합의 효능은 상가(相加)적 (조합의 효능이 각 약물 단독의 효과의 합과 대략 같음) 이나, 기타 경우에는 효과가 상승적 (조합의 효능이 주어진 각 약물 단독의 효과의 합보다 더 큼) 이다.
그러나, 폐암 및 기타 암의 개선된 치료에 대한 중요한 필요가 있다. 본 발명은 효능에 요구되는 개별 성분에 대한 투여량을 감소시킴으로써, 치료적 가치를 유지하거나 증가시키는 동안 각 제제와 관련된 부작용을 감소시키는, 항암 조합 치료를 제공한다. 본원에 기술된 발명은 새로운 약물 조합, 및 폐암 및 기타 암의 치료에 약물 조합을 사용하는 방법을 제공한다.
본 발명의 요약
본 발명은 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈이 사용되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법을 제공한다. 바람직하게는, EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈의 치료적 유효량의 조합은 기타 항암 약물 또는 방사선 치료와 같은 추가의 제제 또는 치료와 동시에 또는 순차적으로, 또는 추가의 제제 또는 치료 없이, 환자에게 투여하기 위한 의도이다.
본 발명은 또한 약학적으로 허용되는 담체와 함께 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합을 포함하는 약학적 조성물을 포함한다.
본 발명을 수행하는데 사용될 수 있는 EGFR 키나아제 억제제의 바람직한 예는 엘로티닙 HCl (TarcevaTM으로도 알려짐) 화합물이다.
도의 간단한 설명
도 1: 시간에 걸친 엘로티닙 혈청 농도 (A) 투여량-의존성 혈청 농도 (B) 종양 약물 농도 및 혈청 약물 농도의 관련. 종양을 가진 마우스에 0, 6.3, 12.5, 25.0, 100.0 또는 150.0 mg/kg 의 엘로티닙의 일일 경구 투여량이 21 일 동안 주어졌다. 종양 이식 후 제 28 일에, (후안 굴 (retro-orbital sinus) 로부터의) 혈액 및 종양 샘플을 투약 1 및 6 시간 후에 채취하였다. 엘로티닙의 농도를 LC-MS/MS 를 사용하여 측정하였다. 값은 평균값 (±SD, n=3) 이다.
도 2: H460a NSCLC 이종이식 모델에서의 평균 종양 부피에 대한 엘로티닙의 효과. 마우스에 H460a NSCLC 세포를 이식하였다. 촉진가능한 종양이 확립되었을 때, 동물들을 무작위로 골라 각 군이 100-150 mm3 의 평균 초기 종양 부피를 갖도록 하였다. 마우스에 0, 6.3, 12.5, 25 또는 100 mg/kg 의 엘로티닙 일일 경구 투여량이 21 일 동안 주어졌다. 종양 크기를 주 3 회 측정하였다. 값은 평균값 (n=10) 이다.
도 3: H460a NSCLC 이종이식 모델에서의 평균 종양 부피에 대한 엘로티닙 및 젬시타빈 단독 및 조합의 효과. 마우스에 H460a NSCLC 세포를 이식하였다. 촉진가능한 종양이 확립되었을 때, 동물들을 무작위로 골라 각 군이 100-150 mm3 의 평균 초기 종양 부피를 갖도록 하였다. 마우스를 21 일 동안 운반체, 25 또는 100 mg/kg/일의 경구 엘로티닙 단독, 30 또는 120 mg/kg 의 3 일당 1 회의 복막 내 젬시타빈 단독, 또는 25 mg/kg/일의 엘로티닙과 30 mg/kg 의 젬시타빈을 3 일당 1 회로 처리하였다. 종양 크기를 주 3 회 측정하였다. 값은 평균값 (n=10) 이다.
도 4: A549 NSCLC 이종이식 모델에서의 평균 종양 부피에 대한 엘로티닙 및 젬시타빈 단독 및 조합의 효과. 마우스에 A549 NSCLC 세포를 이식하였다. 촉진가능한 종양이 확립되었을 때, 동물들을 무작위로 골라 각 군이 100-150 mm3 의 평균 초기 종양 부피를 갖도록 하였다. 마우스를 21 일 동안 운반체, 25 또는 100 mg/kg/일의 경구 엘로티닙 단독, 30 또는 120 mg/kg 의 3 일당 1 회의 복막 내 젬시타빈 단독, 또는 25 mg/kg/일의 엘로티닙과 30 mg/kg 의 젬시타빈 3 일당 1 회로 처리하였다. 종양 크기를 주 3 회 측정하였다. 값은 평균값 (n=10) 이다.
도 5: 엘로티닙 투여 마우스에서의 피부 병변. 부검 시, 피부 샘플을 10% 완충 포르말린에서 고정시키고, 파라핀에 묻고, 5μ 로 절편하고 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하였다. 21 일 동안 100 mg/kg/일의 엘로티닙이 투여된 마우스에서, 피부 병변은 붉게되고 벗겨진 것으로 총체적으로 특징화되었다. 조직학적으로 병변은 널리 퍼진, 경증 내지 중등도의 표피 가시세포증, 표피 각화과다증, 국부 에스카로시스 (focal escharosis), 및 진피 내 주로 급성 염증성 세포 침윤을 포함하였다. 병변은 일시적이었고, 지속적인 치료로 없어졌다.
도 6: 이종이식 모델에서 NSCLC 의 면역조직화학적 염색 현미경사진. 대조군 마우스 (A) 및 100 mg/kg/일로 21 일 동안 엘로티닙 처리된 마우스 (B) 에서의 세포 증식을 검출하기 위해, 누드 마우스로부터의 종양 절편을 항원 Ki67 에 대해 염색하였다. 어두운 부위는 증식성 활성을 나타내는 Ki67 염색을 나타낸다.
표의 간단한 설명
표 1: 종양을 갖지 않은 암컷 nu / nu 무(無) 흉선 마우스에서의, 엘로티닙 20 및 100 mg / kg 의 1회 투여량 약동학.
표 2: 14 일 동안 처리된, 종양을 갖지 않은 무흉선 누드 마우스 (n=5) 에서 의 최대 허용 투여량 평가.
본 발명의 상세한 설명
동물에서의 "암" 이란 용어는 제어되지 않은 증식, 불후성, 전이 가능성, 빠른 성장 및 증식 속도와 같은, 암-유발 세포에 전형적인 특징, 및 임의의 독특한 형태학적 특징을 갖는 세포의 존재를 나타낸다. 흔히, 암세포는 종양의 형태일 것이나, 그러한 세포는 동물 내에서 단독으로 존재하거나, 백혈병 세포와 같이 독립적인 세포로서 혈류 내에서 순환될 수 있다.
본원에 사용된 "비정상적 세포 성장" 은 달리 제시되지 않는 한, 정상적 조절 기작으로부터 독립적인 세포 성장 (예를 들어, 접촉 억제 (contact inhibition) 의 손실) 을 나타낸다. 이는 다음의 비정상적 성장을 포함한다: (1) 돌연변이된 타이로신 키나아제를 발현시키거나 타이로신 키나아제 수용체의 과발현으로 증식되는 종양 세포 (종양); (2) 비정상적 타이로신 키나아제 활성이 발생하는 기타 증식성 질병의 양성 및 악성 세포; (4) 타이로신 키나아제 수용체에 의해 증식하는 임의의 종양; (5) 비정상적 세린/트레오닌 키나아제 활성에 의해 증식하는 임의의 종양; (6) 비정상적 세린/트레오닌 키나아제 활성이 발생하는 기타 증식성 질병의 양성 및 악성 세포.
본원에 사용된 용어 "치료함" 은 달리 제시되지 않는 한, 환자에서의 종양의 성장, 종양 전이, 또는 기타 암-유발 또는 신생물성 세포를 부분적으로, 또는 완전히 전환, 완화, 억제, 진행 억제 또는 방지하는 것을 의미한다. 본원에 사용된 용어 "치료" 는 달리 제시되지 않는 한, 치료 행위를 나타낸다.
"치료 방법" 이란 구 또는 그의 동등물은 예를 들어 암에 적용될 경우, 동물에서의 몇몇의 암세포를 감소 또는 제거하거나, 암의 증상이 완화되도록 하는 방법 또는 방책을 나타낸다. 암 또는 또 다른 증식성 질병의 "치료 방법" 은 반드시 암세포 또는 기타 질병이 실제로 제거되거나, 이들 세포 또는 질병이 실제로 감소하거나, 암 또는 기타 질병의 증상이 실제로 완화된다는 의미는 아니다. 흔히, 암 치료 방법은 성공 가능성이 낮지만, 동물의 병력 및 추정 예상 생존을 고려하여 종합적으로 이로운 방책인 것으로 생각되는 경우에서도 수행될 것이다.
"치료적으로 유효한 제제" 란 용어는 연구자, 수의학자, 의사 또는 기타 임상학자가 추구하는, 조직, 시스템, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 조성물을 의미한다.
"약제 제조 방법" 이란 용어는 본원에 명시된 징후에서의 사용, 및 특히 종양, 종양 전이, 또는 일반적으로 암에서의 사용을 위한 약제의 제조에 관련된다. 상기 용어는 명시된 징후에서 소위 "스위스-타입" 청구 형식에 관련된다.
"치료적 유효량" 또는 "유효량" 이란 용어는 연구자, 수의학자, 의사 또는 기타 임상학자가 추구하는, 조직, 시스템, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 대상 화합물 또는 조합의 양을 의미한다.
본원에서 하기에 나타낸 자료는 젬시타빈과 EGFR 키나아제 억제제의 병용투여가 직장결장 암과 같은 진행 암의 치료에 효과적인 것을 보여준다. 따라서, 본 발명은 환자 내의 종양 또는 종양 전이를 치료하기 위한 약제 제조 방법을 제공하며, 이는 치료적 유효량의 EGFR 키나제 억제제 및 젬시타빈 조합이 사용되는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는, 상기 조합은 환자에게 동시 또는 순차적 투여하기 위한 의도이다. 일 구현예에서, 치료될 종양 또는 종양 전이는 직장결장 종양 또는 종양 전이이다.
바람직하게는, 상기 물질은 환자에 동시 또는 순차적으로 투여하기 위한 의도이다. 따라서, 본 발명은 추가로 종양 또는 종양 전이를 치료하기 위한 약제 제조 방법을 제공하며, 이는 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합이 사용되며 환자에 동시 또는 순차적 투여를 의도로 하는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는, 추가적으로, 하나 이상의 기타 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 그러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물이 사용된다.
본 발명의 문맥에서, 추가의 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 그러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물에는 예를 들어 하기가 포함된다: 알킬화제, 또는 알킬화 작용을 지닌 제제, 예컨대 시클로포스파미드 (CTX; 예를 들면 Cytoxan®), 클로람부실 (CHL; 예를 들면 leukeran®), 시스플라틴 (CisP; 예를 들면 platinol®) 부술판 (예를 들면 myleran®), 멜팔란, 카르무스틴 (BCNU), 스트렙토조토신, 트리에틸렌멜라민 (TEM), 미토마이신 C, 등; 항대사제, 예컨대 메토트렉세이트 (MTX), 에토포시드 (VP16; 예를 들면 vepesid®), 6-메르캅토퓨린 (6MP), 6-티옥구아닌 (6TG), 시타라빈 (Ara-C), 5-플루오로우라실 (5-FU), 카페시타빈 (예를 들면 Xeloda®), 다카르바진 (DTIC), 등; 항생제, 예컨대 액티노마이신 D, 독소루비신 (DXR; 예를 들면 adriamycin®), 다우노루비신 (다우노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신 등; 알칼로이드, 예컨대 빈카 알칼로이드 예컨대 빈크리스틴 (VCR), 빈블라스틴, 등; 및 기타 항종양제, 예컨대 파클리탁셀 (예를 들면 taxol®) 및 팩티탁셀 유도체, 세포증식 억제제, 글루코코르티코이드 예컨대 덱사메타손 (DEX; 예를 들면 decadron®) 및 코르티코스테로이드 예컨대 프레드니손, 뉴클레오시드 효소 억제제 예컨대 히드록시우레아, 아미노산 고갈 효소 (amino acid depleting enzyme) 예컨대 아스파라기나아제, 류코보린, 폴린산, 및 기타 폴산 유도체, 및 유사한 여러 항종양제. 하기 제제가 또한 추가 제제로서 사용될 수 있다: 아르니포스틴 (예를 들면 ethyol®), 댁티노마이신, 메클로레타민 (질소 머스타드), 스트렙토조신, 시클로포스파미드, 로르누스틴 (CCNU), 독소루비신 리포 (예를 들면 doxil®), 다우노루비신 리포 (예를 들면 daunoxome®), 프로카르바진, 미토마이신, 도세탁셀 (예를 들면 taxotere®), 알데스류킨, 카보플라틴, 클라드리빈, 캄프토데신, CPT 11 (이리노테칸), 10-히드록시 7-에틸-캄프토테신 (SN38), 플록스우리딘, 플루다라빈, 이포스파미드, 이다루비신, 메스나, 인터페론 알파, 인터페론 베타, 미톡산트론, 토포테칸, 류프롤리드, 메게스트롤, 멜파란, 메르캅토퓨린, 플리카마이신, 미토탄, 페가스파르가아제, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 타목시펜, 테니포시드, 테스토락톤, 티옥구아닌, 티오테파, 우라실 머스타드, 비노렐빈, 클로람부실.
또한, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물이 사용되며, 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 의도되고, 여기서 또한 하나 이상의 항 호르몬제가 사용되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법이 더욱 바람직하다. 본원에서 사용된 바와 같이 용어 "항 호르몬제"에는 종양 상에 호르몬의 작용을 조절 또는 억제하는 천연 또는 합성 유기 또는 펩티드성 화합물이 포함된다.
항호르몬제에는 예를 들면 하기가 포함된다: 스테로이드 수용체 길항제, 항-에스트로겐 예컨대 타목시펜, 라록시펜, 아로마타아제 억제 4(5)-이미다졸, 다른 아로마타아제 억제제, 42-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY 117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜 (예를 들면 Fareston®); 항-안드로겐 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세레린; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 여포자극호르몬 (FSH), 갑상선자극호르몬 (TSH) 및 황체형성호르몬 (LH) 및 LHRH (황체형성호르몬 방출호르몬) 과 같은, 당단백질 호르몬의 작용제 및/또는 길항제; Zoladex® (AstraZeneca)로 시판되고 있는 LHRH 작용제 고세레린 아세테이트; LHRH 길항제 D-알라닌아미드 N-아세틸-3-(2-나프탈레닐)-D-알라닐-4-클로로-D-페닐알라닐-3-(3-피리디닐)-D-알라닐-L-세릴-N6-(3-피리딜카르보닐)-L-라이실-N6-(3-피리디닐카르보닐)-D-라이실-L-류실-N6-(1-메틸에틸)-L-라이실-L-프롤린 (예를 들면, Antide®, Ares-Serono); LHRH 길항제 가니레릭스 아세테이트; 스테로이드성 항-안드로겐 시프로테론 아세테이트 (CPA) 및 Megace® (Bristol-Myers Oncology)로 시판되고 있는 메게스트롤 아세테이트; Eulexin® (Schering Corp.)로 시판되고 있는 비스테로이드성 항-안드로겐 플루타미드 (2-메틸-N-[4,20-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐프로판아미드; 비스테로이드성 항-안드로겐 닐루타미드, (5,5-디메틸-3-[4-니트로-3-(트리플루오로메틸-4'-니트로페닐)-4,4-디메틸-이미다졸리딘-디온); 및 기타 비허용 수용체에 대한 길항제, 예컨대 RAR, RXR, TR, VDR 등에 대한 길항제.
화학요법적 치료법에서 상기에 기재된 세포독성 및 다른 항암제의 사용은 일반적으로 암치료 기술에서 잘 특성화되어 있으며, 본원에서의 이들의 용도는 허용 (tolerance) 및 효능의 모니터링 및 투여 경로 및 투여량의 제어에 대해, 동일한 고려사항 하에서 약간의 조정으로 부합된다. 예를 들면, 세포독성제의 실질적 투여량은 조직배양법(histoculture method)으로 측정된 환자의 배양 세포 반응에 따라 가변적일 수 있다. 일반적으로 투여량은 추가 다른 제제의 부재하에서 사용된 양과 비교시 감소될 것이다.
효과적 세포독성제의 전형적인 투여량은 제조자가 권장하는 범위내에 있을 수 있고, 동물 모델에서의 시험관 내 반응 또는 반응들에 의해 지시되는 경우 상기 투여량은 농도 또는 양 크기의 약 1 자리수까지 감소될 수 있다. 따라서, 실질적 투여량은 일차 배양된 악성 세포 또는 조직배양된 조직 샘플의 시험관 내 반응성 또는 적절한 동물 모델에서 관찰되는 반응을 기준으로 하는 치료방법의 효능, 의사의 판단 및 환자의 상태에 좌우된다.
본 발명에 있어서 상기 추가된 기타 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제 중에서 시스플라틴 및 카보플라틴이 바람직하다.
또한, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물이 사용되고, 환자에 동시 또는 순차적으로 투여되도록 의도되며, 여기서 또한 하나 이상의 혈관형성 억제제가 사용되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법이 더욱 바람직하다.
항혈관형성제에는 예를 들면 하기가 포함된다: VEGFR 억제제, 예컨대 SU-5416 및 SU-6668 (South San Francisco, Calif., USA의 Sugen Inc.), 또는 예를 들면 국제출원 WO 99/24440, WO 99/62890, WO 95/21613, WO 99/61422, WO 98/50356, WO 99/10349, WO 97/32856, WO 97/22596, WO 98/54093, WO 98/02438, WO 99/16755 및 WO 98/02437 및 U.S. 특허 5,883,113, 5,886,020, 5,792,783, 5,834,504 및 6,235,764에 기재된 것; VEGF 억제제 예컨대 IM862 (Kirkland, Wash., USA의 Cytran Inc.); Ribozyme (Boulder, Colo.)사의 합성 리보자임인 엔지오자임(angiozyme) 및 VEGF 에 대한 항체, 예컨대 베바시주마브 (예를 들면 Avastin™, Genentech, South San Francisco, CA), VEGF 에 대한 재조합 인간화 항체; 인테그린 수용체 길항제 및 인테그린 길항제, 예컨대 αvβ3, αvβ5 및 αvβ6 인테그린에 대한 것, 및 이의 서브타입, 예를 들면 실렌지타이드 (EMD 121974), 또는 항-인테그린 항체, 예컨대 αvβ3 특이적 인간화 항체 (예를 들면 Vitaxin®); 인자, 예컨대 IFN-알파 (U.S. 특허 41530,901, 4,503,035 및 5,231,176); 혈관형성억제인자 및 플라스미노겐 분절 (예를 들면 크링글 1-4, 크링글 5, 크링글 1-3 (O'Reilly, M. S. 등 (1994) Cell 79:315-328; Cao 등 (1996) J. Biol. Chem. 271: 29461-29467; Cao 등 (1997) J. Biol. Chem. 272:22924-22928); 엔도스타틴 (O'Reilly, M. S. 등 (1997) Cell 88:277; 및 국제특허공보 WO 97/15666); 트롬보스폰딘 (TSP-1; Frazier, (1991) Curr. Opin. Cell Biol. 3:792); 혈소판 인자 4 (PF4); 플라스미노겐 활성인자/유로키나아제 억제제; 유로키나아제 수용체 길항제; 헤파리나아제; 퓨마질린 유사체 예컨대 TNP-4701; 수라민 및 수라민 유사체; 혈관억제 스테로이드; bFGF 길항제; flk-1 및 flt-1 길항제; 항-혈관형성제 예컨대 MMP-2 (매트릭스-메탈로프로티나아제 2) 억제제 및 MMP-9 (매트릭스-메탈로프로티나아제 9) 억제제. 유용한 매트릭스 메탈로프로티나아제 억제제의 예는 국제특허 공보 WO 96/33172, WO 96/27583, WO 98/07697, WO 98/03516, WO 98/34918, WO 98/34915, WO 98/33768, WO 98/30566, WO 90/05719, WO 99/52910, WO 99/52889, WO 99/29667 및 WO 99/07675, 유럽 특허 818,442, 780,386, 1,004,578, 606,046, 및 931,788; 영국 특허 공보 9912961 및 U.S. 특허 5,863,949 및 5,861,510 에 기재되어 있다. 바람직한 MMP-2 및 MMP-9 억제제는 MMP-1 을 억제하는 활성이 거의 없거나 전혀 없는 것이다. 다른 매트릭스 메탈로프로티나아제(즉, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-1O, MMP-11, MMP-12 및 MMP-13)와 비교시 MMP-2 및/또는 MMP-9를 선택적으로 억제하는 것이 더욱 바람직하다.
또한, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물이 사용되고, 환자에게 동시에 또는 순차적으로 투여되도록 의도되며, 여기서 또한 하나 이상의 종양 세포 세포자멸촉진(pro-apoptotic) 또는 세포자멸 자극제가 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법이 더욱 바람직하다.
또한, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물이 사용되며, 환자에게 동시에 또는 순차적으로 투여되도록 의도되며, 여기서 또한 하나 이상의 신호 전달 억제제가 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법이 더욱 바람직하다.
신호 전달 억제제에는 예를 들면 하기가 포함된다: erbB2 수용체 억제제, 예컨대 유기분자, 또는 erbB2 수용체에 결합하는 항체, 예를 들면 트라스튜주마브 (예를 들면 Herceptin®); 다른 단백질 티로신-키나아제의 억제제, 예를 들면 이미티니브 (예를 들면 Gleevec®); 라스 억제제; 라프 억제제; MEK 억제제; mTOR 억제제; 사이클린 의존 키나아제 억제제; 단백질 키나아제 C 억제제; 및 PDK-1 억제제 (상기 억제제의 여러 예 및 암치료 임상 시험에서의 이들 용도 설명에 대한 Dancey, J. 및 Sausville, E.A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2:92-313 참조).
ErbB2 수용체 억제제에는 예를 들면 하기가 포함된다: ErbB2 수용체 억제제, 예컨대 GW-282974 (Glaxo Wellcome plc), 단일클로널 항체 예컨대 AR-209 (The Woodlands, Tex., USA의 Aronex Pharmaceuticals Inc.) 및 erbB2 억제제 예컨대 국제 공보 WO 98/02434, WO 99/35146, WO 99/35132, WO 98/02437, WO 97/13760, 및 WO 95/19970, 및 U.S. 특허 5,587,458, 5,877,305, 6,465,449 및 6,541,481 에 기재된 것.
또한, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물이 사용되고, 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 의도되며, 여기서 또한 항-HER2 항체 또는 이의 면역치료적으로 활성인 단편이 사용되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법이 더욱 바람직하다.
또한 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물이 사용되고, 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 의도되며, 여기서 또한 하나 이상의 추가 항-증식제가 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법이 더욱 바람직하다.
추가의 항증식제에는 예를 들면 하기가 포함된다: U.S.특허 6,080,769, 6,194,438, 6,258,824, 6,586,447, 6,071,935, 6,495,564, 6,150,377, 6,596,735 및 6,479,513, 및 국제 특허 공보 WO 01/40217 에 개시되고 청구된 화합물을 포함하는 효소 파르네실 단백질 전이효소의 억제제 및 수용체 티로신 키나아제 PDGFR의 억제제.
또한, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물이 사용되고, 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 의도되며, 여기서 또한 COX II (시클로옥시게나아제 II) 억제제가 사용되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법이 더욱 바람직하다. 유용한 COX-II 억제제의 예에는 알레콕시브 (예를 들면 Celebrex™), 발데콕시브 및 로페콕시브가 포함된다.
또한, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물이 사용되고, 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 의도되고, 여기서 또한 방사성 의약품이 사용되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법이 더욱 바람직하다. 방사성 의약품을 또는 추가로 첨가하는 것 대신에 방사선을 이용한 치료가 시행될 수 있다.
방사선 원은 치료될 환자 외부 또는 내부일 수 있다. 상기 원이 환자 외부인 경우에, 상기 치료는 외부 방사선 요법(EBRT)으로서 알려져있다. 상기 방사선 원이 환자 내부인 경우, 그 치료법은 급전치료(BT) 로 불리운다. 본 발명에 사용되기 위한 방사성 원자는 이에 제한되는 것은 아니지만 라듐, 세슘-137, 이리듐-192, 아메리슘-241, 금-198, 코발트-57, 구리-67, 테크네튬-99, 요오드-123, 요오드-131 및 인듐-111을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 본 발명에 따른 EGFR 키나아제 억제제가 항체인 경우, 그 항체를 상기 방사선 동위 원소로 표지하는 것이 가능하다.
방사선 요법은 절개 불가능 또는 수술불가능 종양 및/또는 종양 전이 제어용 표준 치료법이다. 방사선 요법이 화학요법과 조합된 경우에 향상된 결과가 나타났다. 방사선 요법은, 목표 부위로 전달된 고선량 방사가 종양 및 정상 조직 양자 모두 내의 재생성 세포 (reproductive cell) 사멸을 초래한다는 원리에 기초한다. 방사선 조사 요법은 일반적으로 방사선 흡수 선량률(Gy), 시간 및 분류 면에서 정의되고 종양학자에 의해 조심스럽게 정의되어야만 한다. 환자가 수용하는 방사선 양은 다양한 고려사항에 따라 좌우되나 두 가지 가장 중요한 것은 신체의 다른 결정적인 구조 또는 장기에 대한 종양의 위치 및 종양이 퍼진 정도이다. 방사선요법을 받고 있는 환자 치료의 전형적인 과정은, 1 주일에 5 일 동안 1일 1회 선량을 약 1.8 내지 2.0 Gy 으로, 환자에게 투여된 총 선량이 10 내지 80 Gy 으로 하여 1 내지 6 주 기간에 걸친 치료 스케줄일 것이다. 본 발명의 바람직한 구현예에는 인간 환자의 종양을 본 발명의 조합 치료 및 방사선으로 치료하는 경우, 상승 효과가 존재한다. 즉, 본 발명의 조합을 포함하는 제제에 의한 종양 성장 억제는, 방사선과, 임의로는 추가의 화학요법제 또는 항암제와 함께할 경우 향상된다. 보조 방사선 요법의 매개변수는 예를 들어 국제 특허 공보 WO 99/60023 에 포함된다.
또한, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물이 사용되며, 환자에게 동시에 또는 순차적으로 투여되도록 의도되며, 여기서 또한 하나 이상의 항종양 면역 반응을 향상할 수 있는 제제가 사용되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법이 더욱 바람직하다.
항종양 면역 반응을 향상시킬 수 있는 제제에는 예를 들면 하기가 포함된다: CTLA4 (cytotoxic lymphocyte antigen 4: 세포독성 림프구 항원) 항체 (예를 들면 MDX-CTLA4), 및 CTLA4를 차단할 수 있는 기타 제제. 본 발명에 사용될 수 있는 특이적 CTLA4 항체에는 U.S. 특허 6,682,736 에 기재된 것이 포함된다.
또한, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물이 상가적 또는 초상가적 (superadditive) 또는 상승적인 항암 효과를 나타내기에 효과적이고 종양 성장을 억제하는데 유효한 양으로 사용되며, 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 의도되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이에 의해 야기된 부작용 감소를 위한 약제 제조 방법이 더욱 바람직하다.
본 발명은 추가로 (i) 제 1 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염; 및 (ⅱ) 제 2 유효량의 젬시타빈을 암 치료를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 (i) 제 1 차선-치료량 (sub-therapeutic first amount) 의 EGFR 키나아제 억제제 엘로티닙, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염; 및 (ⅱ) 제 2 차선-치료량의 젬시타빈을 암 치료를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법을 제공한다.
추가적으로, 본 발명은 EGFR 억제제 및 젬시타빈을 약학적으로 허용가능한 담체 내에 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로, (i) 제 1 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 및 (ii) 제 2 유효량의 젬시타빈을 포함하는, 특히 암에 사용되기 위한 약학적 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 임의적으로 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 부형제를 포함한다.
본 발명은 추가로 (i) 제 1 차선-치료량의 EGFR 키나아제 억제제 엘로티닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 및 (ii) 제 2 치료량 이하의 젬시타빈을 포함하는, 특히 암에서 사용하기 위한 약학적 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 임의적으로는 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 부형제를 포함한다.
바람직하게는, EFGR 키나아제 억제제는 엘로티닙이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "환자" 는 임의의 목적을 위해 EGFR 키나아제 억제제로의 치료를 필요로 하는 인간, 더욱 바람직하게는 암 또는 전암증상 상태 또는 병변을 치료하기 위한 그러한 치료를 필요로 하는 인간을 지칭한다. 그러나, 용어 "환자"는 또한 EGFR 키나아제 억제제로 치료를 필요로 하는 비인간 동물, 바람직하게는 포유류, 예컨대 개, 고양이, 말, 소, 돼지, 양 및 비인간 영장류 등을 지칭할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 환자는 암, 또는 전암 병태 또는 병변의 치료가 필요한 인간이다. 암은 바람직하게, EGFR 키나아제 억제제를 투여함으로써 부분적으로 또는 완전하게 치료가능한 임의 암이다. 암은, 예를 들어, 폐암, 비소세포 폐 (NSCL) 암, 세기관지 세포 폐암, 뼈암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부의 암, 위장암, 위암, 결장암, 유방암, 자궁암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 호지킨 질병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직의 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장 또는 요관암, 신장세포 암종, 신우 암종, 중피종, 간세포암, 담도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 중추 신경계 (CNS) 신생물, 척추 종양, 뇌줄기신경아교종, 다형성아교모세포종, 별아교세포종, 신경초종, 뇌실막세포종, 속질모세포종, 수막종, 편평세포 암종, 뇌하수체 선종, 상기 임의 암들의 난치성 형태, 또는 상기 암들의 하나 이상의 조합일 수 있다. 전암 병태 또는 병변은 예를 들어, 구강 백반, 광선각화증 (태양각화증), 결장 또는 직장의 전암 용종, 위상피 이형성, 선종 이형성, 유전성 비용종성 결장암 증후군 (HNPCC), 바레트 식도, 방광 이형성, 및 전암 자궁경부 병태일 수 있다. 바람직하게 암은 결장암, 가장 바람직하게 직장결장암이다. 또한 바람직하게 암은 폐암, 가장 바람직하게 비-소세포 폐암 (NSCL) 이다.
본 발명의 목적 상, 젬시타빈과 EGFR 키나아제 억제제 (두 성분은 이후 "두 활성제" 라고 지칭함) "의 병용 투여" 및 "병용 투여함" 은, 조합 치료의 잇점을 얻기 위해 디자인된 적합한 투여 계획의 일부로서 두 활성제가 투여되는, 개별적으로, 또는 함께 두 활성제의 임의 투여를 의미한다. 따라서 두 활성제는 동일한 약학적 조성물의 일부로서, 또는 개별 약학적 조성물로서 투여될 수 있다. 젬시타빈은 EGFR 키나아제 억제제의 투여 전, 동시 또는 이후에, 또는 이의 조합으로 투여될 수 있다. EGFR 키나아제 억제제가 환자에게 반복적 간격으로, 예를 들어 표준 치료 과정 중, 젬시타빈은 EGFR 키나아제 억제제의 각 투여 전, 동시 또는 이후에, 또는 이의 임의의 조합으로, 또는 EGFR 키나아제 억제제 치료와는 다른 간격으로, 또는 EGFR 키나아제 억제제의 치료 과정 전, 치료 동안 임의 시간에, 또는 이후에 1회 투여량으로 투여될 수 있다.
당해 분야에 공지되고, 예를 들어 국제 특허 공개공보 제 WO 01/34574 호에 기재된 바와 같이, 환자가 치료받고 있는 암에 가장 효과적인 (효능 및 안정성 모두의 관점에서) 치료를 제공하기 위한 투약 계획에 따라 환자에게 EGFR 키나아제 억제제가 전형적으로 투여될 것이다. 본 발명의 치료 방법을 수행할 때, EGFR 키나아제 억제제는 당해 분야에 공지된 효과적인 임의 방식으로, 예컨대 경구, 국소, 정맥내, 복막내, 근육내, 관절내, 피하조직, 비강내, 안구내, 질, 직장, 또는 진피내 경로로, 치료되는 암의 유형에 따라서, 사용되는 EGFR 키나아제 억제제의 유형에 따라서 (예, 소분자, 항체, RNAi 또는 안티센스 구조물), 및 처방 의사의 의학적 판단에 기초하여, 예를 들어 출판된 임상 연구 결과에 기초하여 투여할 수 있다.
EGFR 키나아제 억제제의 투여량 및 EGFR 키나아제 억제제의 투여 시기는 치료되는 환자의 유형 (종, 성별, 연령, 체중 등) 및 병태, 치료되는 질병 또는 병태의 중증도, 및 투여 경로에 의존적일 것이다. 예를 들어, 소분자 EGFR 키나아제 억제제는 환자에게 체중 1 kg 당 0.001 내지 100 mg 범위의 투여량을, 하루 또는 1 주일 당 1회 또는 분할 투여로, 또는 계속적인 주입 (예를 들어 국제 특허 공보 번호 WO 01/34574 참고) 을 통해 투여될 수 있다. 특히 엘로티닙 HCl 을 환자에게 하루에 5-200 mg 범위, 또는 1 주일당 100-1600 mg 범위로, 1회 또는 분할 투여로, 또는 계속적인 주입을 통해 투여될 수 있다. 바람직한 투여량은 150 mg/일 이다. 항체-기재 EGFR 키나아제 억제제, 또는 안티센스, RNAi 또는 리보자임 구성물을 환자에게 체중 1 kg 당 0.1 내지 100 mg 범위의 투여량을 하루 또는 1 주일 당 1회 또는 분할 투여로, 또는 계속적인 주입을 통해 투여될 수 있다. 일부 경우, 상기 범위의 하한 미만 수준의 투여량도 매우 적절할 수 있는 반면, 다른 경우에는 어떠한 해로운 부작용을 야기하지 않는 한 여전히 더 많은 투여량이 사용될 수 있는데, 단 이러한 더 많은 투여량은 먼저 하루 동안 투여하기 위해 여러 개의 작은 투여량으로 나누어진다.
EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈은 동일 또는 상이한 경로를 통해, 그리고 여러 상이한 투여 형태로, 개별적으로 또는 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, EGFR 키나아제 억제제는 바람직하게 경구 또는 비경구 투여되는 반면, 젬시타빈은 바람직하게 비경구 투여된다. EGFR 키나아제 억제제가 엘로티닙 HCl (Tarceva™) 인 경우 경구 투여가 바람직하다.
EGFR 키나아제 억제제는 다양한 약학적으로 적합한 불활성 담체와 함께 정제, 캡슐, 마름모꼴 정제, 트로치, 경질 캔디, 분말, 스프레이, 크림, 고약, 좌약, 젤리, 젤, 페이스트, 로션, 연고, 엘릭시르, 시럽 등의 형태로 투여될 수 있다. 이러한 투여 형태의 투여는 1회 또는 다중 투여로 수행될 수 있다. 담체는 고체 희석제 또는 충전제, 멸균 수성 매질 및 다양한 비독성 유기 용매 등을 포함한다. 경구 약학적 조성물은 적합하게 감미료 및/또는 향료가미될 수 있다.
EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈은 다양한 약학적으로 허용되는 불활성 담체와 함께 스프레이, 크림, 고약, 좌약, 젤리, 젤, 페이스트, 로션, 연고 등의 형태로 함께 조합될 수 있다. 이러한 투여 형태의 투여는 1회 또는 다중 투여로 수행될 수 있다. 담체는 고체 희석제 또는 충전제, 멸균 수성 매질 및 다양한 비독성 유기 용매 등을 포함한다.
단백질성 EGFR 키나아제 억제제를 포함하는 모든 제형은 억제제의 변성 및/또는 분해 및 생물학적 활성의 손실을 피하도록 선택해야 한다.
EGFR 키나아제 억제제를 함유하는 약학적 조성물의 제조 방법은 당해 분야에 공지되고, 예를 들어 국제 특허 공개공보 제 WO 01/34574 호에 기재되어 있다. 젬시타빈을 함유하는 약학적 조성물의 제조 방법 또한 당해 분야에 공지되어 있다. 본 발명의 교시의 관점에서, EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈을 모두 함유하는 약학적 조성물의 제조 방법은, 상기 인용한 공보 및 다른 공지된 참고 문헌, 예컨대 "Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 18th edition (1990)" 에 명확히 기재되어 있을 것이다.
EGFR 키나아제 억제제의 경구 투여를 위해, 하나 또는 두 활성제를 함유하는 정제는 다양한 임의 부형제 예컨대, 미세결정질 셀룰로오스, 소듐 시트레이트, 칼슘 카르보네이트, 디칼슘 포스페이트 및 글리신과, 다양한 붕해제 예컨대, 전분 (및 바람직하게 옥수수, 감자 또는 타피오카 전분), 알긴산 및 특정 복합 실리케이트와 함께, 및 과립화 결합제, 예컨대 폴리비닐 피롤리돈, 자당, 젤라틴 및 아카시아와 함께 조합된다. 부가적으로 윤활제 예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 라우릴 설페이트 및 탈크가 정제화 목적으로 종종 매우 유용하다. 유사한 유형의 고체 조성물 또한 젤라틴 캡슐 내 충전제로 사용될 수 있고; 이러한 맥락에서 바람직한 재료는 또한 락토오스 또는 유당, 또한 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 수성 현탁액 및/또는 엘릭시르가 경구 투여로 요구될 때, EGFR 키나아제 억제제는 다양한 감미료 또는 향미료, 색소 또는 염료와 조합될 수 있고, 만약 요구된다면, 유화제 및/또는 현탁제 또한, 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 글리세린 및 다양한 이의 조합과 같은 희석제와 함께 조합될 수 있다.
두 활성제의 각각 또는 모두의 비경구 투여를 위해, 참기름 또는 땅콩 오일 또는 수성 프로필렌 글리콜 중의 용액이 사용될 수 있고, 또한 활성제 또는 이의 해당 수용성 염을 함유하는 멸균 수용액을 사용할 수 있다. 이러한 멸균 수용액은 바람직하게, 적합하게 완충된 것이고, 또한 바람직하게, 예를 들어 충분량의 염수 또는 포도당을 통해 등장성이 부여된 것이다. 이러한 특정 수용액은 특히 정맥내, 근육내, 피하조직 및 복강내 주사 목적으로 적합하다. 유성 용액은 관절내, 근육내 및 피하조직 주사 목적으로 적합하다. 멸균 조건하 이러한 모든 용액의 제조는 당업자에게 공지된 표준 약학적 기술을 통해 쉽게 이루어진다. 단백질성 EGFR 키나아제 억제제의 투여를 위해 선택된 임의 비경구 제형은 억제제의 변성 및 생물학적 활성의 손실을 피할 수 있도록 선택되어야 한다.
부가적으로 두 활성제를 각각 또는 모두를, 예를 들어 크림, 로션, 젤리, 젤, 페이스트, 연고, 고약 등을 통해, 표준 약학적 관행에 따라 국소적으로 투여할 수 있다. 예를 들어, EGFR 키나아제 억제제 또는 젬시타빈을 약 0.1% (w/v) 내지 약 5% (w/v) 의 농도로 포함하는 국소 제형을 제조할 수 있다.
수의학적 목적상, 활성제는 상기한 임의 형태 및 임의 경로를 통해 동물에게 개별적으로 또는 함께 투여될 수 있다. 바람직한 구현예에서, EGFR 키나아제 억제제는 캡슐, 볼루스 (bolus), 정제, 액체 드렌치의 형태로 주사 또는 임플란트를 통해서 투여된다. 대안적으로 EGFR 키나아제 억제제는 동물 사료와 함께 투여될 수 있고, 이러한 목적상 농축 사료 첨가물 또는 프리믹스 (premix) 를 보통 동물 사료와 함께 제조할 수 있다. 젬시타빈은 바람직하게 액체 드렌치의 형태로 주사 또는 임플란트를 통해서 투여된다. 이러한 제형은 통상적인 방식으로 표준 수의학적 관행에 따라 제조된다.
본 발명은 또한, EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈을 모두 포함하는 단독 용기를 포함하는 키트 (kit) 를 제공한다. 또한 본 발명은 EGFR 키나아제 억제제를 포함하는 제 1 용기, 및 젬시타빈을 포함하는 제 2 용기를 포함하는 키트를 제공한다. 바람직한 구현예에서 키트는 또한 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 키트는 또한, 부가적 개별 용기에 저장되는 멸균 희석제를 포함할 수 있다. 키트는 또한 암 치료 방법으로서 병용 치료의 용도에 대해 설명한 인쇄 지시문을 포함하는 패키지 삽입문을 포함한다.
본원에서 사용되는, 용어 "EGFR 키나아제 억제제" 는 당해 분야에 현재 공지된 또는 미래에 확인될 임의 EGFR 키나아제 억제제를 지칭하고, 그리고 환자에게 투여했을 때 달리, EGFR 에 그의 천연 리간드가 결합함으로써 야기되는 임의의 하류 생물학적 효과를 포함한 환자의 EGF 수용체의 활성과 관련된 생물학적 활성의 억제를 야기하는 임의의 화학적 구성요소를 포함한다. 이러한 EGFR 키나아제 억제제는 EGFR 활성 또는 환자의 암 치료와 관련된 EGFR 활성의 임의 하류 생물학적 효과를 방해할 수 있는 임의 제제를 포함한다. 이러한 억제제는 수용체의 세포내 도메인과 직접적으로 결합함으로써, 및 그 키나아제 활성을 억제함으로써 작용할 수 있다. 대안적으로 이러한 억제제는 EGFR 수용체의 리간드 결합 사이트 또는 그 일부를 점유하여 수용체에 그의 천연 리간드가 접근하지 못하게 함으로써 그의 정상적인 생물학적 활성이 예방 또는 감소되도록 함으로써 작용할 수 있다. 대안적으로 이러한 억제제는 EGFR 폴리펩타이드의 이량화 또는 EGFR 폴리펩타이드와 다른 단백질의 상호작용을 조절하여 작용하거나, 또는 EGFR 의 유비큐틴화 또는 세포내이입 분해를 증강시켜 작용할 수 있다. EGFR 키나아제 억제제는 비제한적으로, 저분자량 억제제, 항체 또는 항체 단편, 안티센스 구조물, 작은 억제 RNA (즉, dsRNA 를 통한 RNA 방해; RNAi) 및 리보자임을 포함한다. 바람직한 구현예에서, EGFR 키나아제 억제제는 인간 EGFR 에 특이적으로 결합하는 작은 유기 분자 또는 항체이다.
EGFR 키나아제 억제제는 예를 들어 퀴나졸린 EGFR 키나아제 억제제, 피리도-피리미딘 EGFR 키나아제 억제제, 피리미도-피리미딘 EGFR 키나아제 억제제, 피롤로-피리미딘 EGFR 키나아제 억제제, 피라졸로-피리미딘 EGFR 키나아제 억제제, 페닐아미노-피리미딘 EGFR 키나아제 억제제, 옥신돌 EGFR 키나아제 억제제, 인돌로카르바졸 EGFR 키나아제 억제제, 프탈라진 EGFR 키나아제 억제제, 이소플라본 EGFR 키나아제 억제제, 퀴날론 EGFR 키나아제 억제제, 및 티르포스틴 EGFR 키나아제 억제제, 예컨대 하기 특허 공보에 기재된 것 및 상기 EGFR 키나아제 억제제의 모든 약학적으로 허용되는 염 및 용매화물을 포함한다: 국제 특허 공개공보 WO 96/33980, WO 96/30347, WO 97/30034, WO 97/30044, WO 97/38994, WO 97/49688, WO 98/02434, WO 97/38983, WO 95/19774, WO 95/19970, WO 97/13771, WO 98/02437, WO 98/02438, WO 97/32881, WO 98/33798, WO 97/32880, WO 97/3288, WO 97/02266, WO 97/27199, WO 98/07726, WO 97/34895, WO 96/31510, WO 98/14449, WO 98/14450, WO 98/14451, WO 95/09847, WO 97/19065, WO 98/17662, WO 99/35146, WO 99/35132, WO 99/07701 및 WO 92/20642; 유럽 특허 출원 번호 EP 520722, EP 566226, EP 787772, EP 837063 및 EP 682027; 미국 특허 번호 5,747,498, 5,789,427, 5,650,415 및 5,656,643; 및 독일 특허 출원 번호 DE 19629652를 포함한다. 부가적인 저분자량 EGFR 키나아제 억제제의 비제한적 예는 "Traxler, P., 1998, Exp. Opin. Ther. Patents 8(12):1599-1625" 에 기재된 임의의 EGFR 키나아제 억제제를 포함한다.
본 발명에 따른 저분자량 EGFR 키나아제 억제제의 특정 바람직한 예는, 하기를 포함한다: [6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린-4-일]-(3-에티닐페닐) 아민 (또한 OSI-774, 엘로티닙, 또는 Tarceva™ (엘로티닙 HCl) 로 공지됨; OSI Pharmaceuticals/Genentech/Roche) (미국 특허 번호 5,747,498; 국제 특허 공개공보 제 WO 01/34574 호, 및 Moyer, J.D. 등 (1997) Cancer Res. 57:4838-4848); CI-1033 (이전엔 PD183805 로 공지됨; Pfizer) (Sherwood 등, 1999, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 40:723); PD-158780 (Pfizer); AG-1478 (University of California); CGP-59326 (Novartis); PKI-166 (Novartis); EKB-569 (Wyeth); GW-2016 (또한 GW-572016 또는 라파티닙 디토실레이트로 공지됨; GSK); 및 제피티니브 (또한 ZD 1839 또는 Iressa™ 로 공지됨; Astrazeneca) (Woodburn 등, 1997, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 38:633). 본 발명에 따라 사용할 수 있는 특히 바람직한 저분자량 EGFR 키나아제 억제제는 [6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린-4-일]-(3-에티닐페닐) 아민(즉, 엘로티닙), 그의 히드로클로리드 염 (즉, 엘로티닙 HCl, Tarceva™), 또는 기타 염 형태 (예, 엘로티닙 메실레이트) 이다.
항체-기재 EGFR 키나아제 억제제는, EGFR 그 활성을, 그의 천연 리간드를 통해서 부분적 또는 완전히 막는 임의의 항-EGFR 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 항체-기재 EGFR 키나아제 억제제의 비제한적인 예는 하기에 기재된 것을 포함한다: Modjtahedi, H., 등, 1993, Br. J. Cancer 67:247-253; Teramoto, T., 등, 1996, Cancer 77:639-645; Goldstein 등, 1995, Clin. Cancer Res. 1:1311-1318; Huang, S. M., 등, 1999, Cancer Res. 15:59(8):1935-40; 및 Yang, X., 등, 1999, Cancer Res. 59:1236-1243. 따라서, EGFR 키나아제 억제제는 단일클론 항체 Mab E7.6.3 (Yang, X.D. 등 (1999) Cancer Res. 59:1236-43), 또는 Mab C225 (ATCC Accession No. HB-8508) 일 수 있고, 또는 이의 결합 특이성을 가지는 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 적합한 단일클론 항체 EGFR 키나아제 억제제의 비제한적인 예는 IMC-C225 (또한 세툭시마브 또는 Erbitux™ 로 공지됨; Imclone Systems), ABX-EGF (Abgenix), EMD 72000 (Merck KgaA, Darmstadt), RH3 (York Medical Bioscience Inc.), 및 MDX-447 (Medarex/Merck KgaA) 를 포함한다.
선택된 숙주 동물, 특히 예를 들어 돼지, 소, 말, 토끼, 염소, 양 및 쥐에 적합한 항원 또는 항원요소를 투여하는 공지된 방법을 통해, 부가적인 항체-기재 EGFR 키나아제 억제제를 만들 수 있다. 항체 생산을 증강시키기 위해 당해 분야에 공지된 다양한 보조제를 사용할 수 있다.
본 발명을 실행하는데 유용한 항체가 다중클론일 수 있지만, 단일클론 항체가 바람직하다. 배양 중 무제한적 세포주를 통해 항체 분자의 생산을 제공하는 임의 기술을 통해 EGFR 에 대항한 단일클론 항체를 제조 및 단리 할 수 있다. 제조 및 단리 기술은 비제한적으로, Kohler and Milstein (Nature, 1975, 256: 495-497) 에 처음으로 기재된 하이브리도마 기술; 인간 B-세포 하이브리도마 기술 (Kosbor 등, 1983, Immunology Today 4:72; Cote 등, 1983, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 80: 2026-2030); 및 EBV-하이브리도마 기술 (Cole 등, 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96) 을 포함한다.
대안적으로 단일 사슬 항체 생산에 대해 설명한 기술 (미국 특허 번호 4,946,778 참고) 을 항-EGFR 단일 사슬 항체 생산에 채택할 수 있다. 본 발명을 실행하는데 유용한 항체-기재 EGFR 키나아제 억제제는 또한 비제한적으로, 무손상 항체 분자의 펩신 소화를 통해 생성된 F(ab').sub.2 단편, 및 F(ab').sub.2 단편의 이황가교를 환원시켜 생성된 Fab 단편을 포함하는 항-EGFR 항체 단편을 포함한다. 대안적으로 Fab 및/또는 scFv 발현 라이브러리를 구성하여 (Huse 등, 1989, Science 246: 1275-1281 참고) EGFR 에 대한 요구되는 특이성을 가지는 단편의 빠른 확인을 가능하게 할 수 있다.
단일클론 항체 및 항체 단편의 제조 및 분리 기술은 당업계에 주지되어 있으며, 문헌 [Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 및 J. W. Goding, 1986, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, London] 에 기재되어 있다. 인간화된 항-EGFR 항체 및 항체 단편은 또한 문헌 [Vaughn, T. J. 등 , 1998, Nature Biotech. 16: 535-539] 및 본원에 인용된 참조문헌에 기재된 바와 같은 공지의 기술에 따라 제조될 수 있으며, 이러한 항체 또는 이의 단편은 또한 본 발명의 실시에 유용하다.
본 발명에 사용하기 위한 EGFR 키나아제 억제제는 대안적으로는 안티센스 (antisense) 올리고뉴클레오티드 구축물을 기재로 할 수 있다. 안티센스 RNA 분자 및 안티센스 DNA 분자를 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오티드는 세포 내에서 EGFR mRNA 에 결합해서 단백질 번역을 방지하거나 mRNA 분해를 증가시켜, EGFR 키나아제 단백질 및 이에 따른 활성의 수준을 감소시킴으로써 EGFR mRNA 의 번역을 직접 차단하도록 작용할 것이다. 예를 들어, EGFR 을 인코딩하는 mRNA 전사 서열의 독특한 영역에 상보적인 약 15 개 이상의 염기의 안티센스 뉴클레오티드는 종래의 포스포디에스테르 기술에 의해 합성될 수 있으며, 예를 들어 정맥내 주사 또는 주입에 의해 투여될 수 있다. 그 서열이 공지된 유전자의 유전자 발현을 특이적으로 억제하는 안티센스 기술을 사용하는 방법은 당업계에 주지되어 있다 (예를 들어, 미국 특허 제 6,566,135 호; 제 6,566,131 호; 제 6,365,354 호; 제 6,410,323 호; 제 6,107,091 호; 제 6,046,321 호; 및 제 5,981,732 호 참조).
작은 억제성 RNA (small inhibitory RNA (siRNA)) 는 또한 본 발명에 사용하기 위한 EGFR 키나아제 억제제로도 기능할 수 있다. EGFR 유전자 발현은 종양, 대상체 또는 세포를 작은 이중 가닥 RNA (small double stranded RNA (dsRNA)), 또는 작은 이중 가닥 RNA 의 제조를 야기하는 벡터 또는 구축물과, EGFR 의 발현이 특이적으로 억제 (즉, RNA 간섭 (RNA interference) 또는 RNAi) 되도록 접촉시킴으로써 감소될 수 있다. 적절한 dsRNA 또는 dsRNA-인코딩 벡터의 선택 방법은 그 서열이 공지된 유전자에 대해 당업계에 주지되어 있다 (예를 들어, Tuschi, T., 등 (1999) Genes Dev. 13(24):3191-3197; Elbashir, S. M. 등 (2001) Nature 411: 494-498; Hannon, G.J. (2002) Nature 418:244- 251; McManus, M. T. 및 Sharp, P. A. (2002) Nature Reviews Genetics 3:737-747; Bremmelkamp, T. R. 등 (2002) Science 296: 550-553; 미국 특허 제 6,573,099 호 및 제 6,506,559 호; 및 국제 특허 공개공보 제 WO 01/36646 호, 제 WO 99/32619 호, 및 제 WO 01/68836 참조).
리보자임은 본 발명에 사용하기 위한 EGFR 키나아제 억제제로도 기능할 수 있다. 리보자임은 RNA 의 특이적 절단을 촉매작용할 수 있는 효소성 RNA 분자이다. 리보자임 작용 메카니즘은 상보적인 표적 RNA 에 대한 리보자임 분자의 서열 특이적 혼성화에 이은 핵산중간분해적 절단 (endonucleolytic cleavage) 을 수반한다. 이로 인해, EGFR mRNA 서열의 핵산중간분해적 절단을 특이적이고도 효율적으로 촉매작용하는 엔지니어링된 해머헤드 모티프 리보자임 분자 (engineered hammerhead motif ribozyme molecule) 는 본 발명의 범주 내에서 유용하다. 임의의 잠재적인 RNA 표적 내의 특이적 리보자임 절단 부위는 초기에는, 전형적으로 하기의 서열, GUA, GUU, 및 GUC 를 포함하는, 리보자임 절단 부위에 대한 표적 분자를 스캐닝함으로써 동정된다. 절단 부위를 함유하는 표적 유전자의 영역에 해당하는 약 15 내지 20 개의 리보뉴클레오티드의 짧은 RNA 서열이 일단 동정되면, 올리고뉴클레오티드 서열을 부적합하게 만들 수 있는 이차 구조와 같은 예상된 구조적 특징에 대해 평가될 수 있다. 후보 표적의 적합성은 또한 예를 들어, 리보뉴클레아제 보호 검정을 이용하여, 상보적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화에 대한 이의 접근성을 시험함으로써 평가할 수 있다.
EGFR 키나아제 억제제로서 유용한 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 리보자임은 둘 다 공지된 방법으로 제조될 수 있다. 이는 예를 들어, 고체 상 포스포라마다이트 화학적 합성 (solid phase phosphoramadite chemical synthesis) 과 같은 화학적 합성 기술을 포함한다. 다르게는, 안티-센스 RNA 분자는 RNA 분자를 인코딩하는 DNA 서열의 시험관내 또는 생체 내 전사에 의해 생성될 수 있다. 이러한 DNA 서열은 T7 또는 SP6 폴리머라아제 촉진제와 같은 적합한 RNA 폴리머라아제 촉진제를 삽입하는 다양한 벡터 내로 삽입될 수 있다. 세포내 안정성 및 반감기를 증가시킴으로써 본 발명의 올리고뉴클레오티드에 대한 각종 변형이 도입될 수 있다. 가능한 변형에는, 이에 제한되지는 않으나, 분자의 5' 및/또는 3' 말단에의 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드의 측면 서열 (flanking sequence) 의 첨가, 또는 올리고뉴클레오티드 백본 내에서 포스포디에스테라제 연결보다는 포스포로티오에이트 또는 2'-O-메틸의 사용이 포함된다.
본 발명은 또한 약학적으로 허용가능한 담체와 EGFR 키나아제 억제제 및 젬시타빈 조합물로 이루어진 약학 조성물을 포함한다.
바람직하게는, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체 및 비독성인 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 젬시타빈 조합물 (이들의 각 성분의 약학적으로 허용가능한 염 포함) 로 이루어진다.
또한, 이러한 바람직한 구현예 내에서, 본 발명은 약학적으로 허용가능한 담체 및 비독성인 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 젬시타빈 조합물 (이들의 각 성분의 약학적으로 허용가능한 염 포함) 을 함유하는, 질병의 치료용 약학 조성물, 및 신생물 세포의 성장, 양성 또는 악성 종양, 또는 전이를 억제하는 그의 용도를 포함한다.
용어 "약학적으로 허용가능한 염" 은 약학적으로 허용가능한 비독성 염기 또는 산으로부터 제조된 염을 말한다. 본 발명의 화합물이 산성인 경우, 그의 대응 염은 무기 염기 및 유기 염기를 포함하는 약학적으로 허용가능한 비독성 염기로부터 편리하게 제조된다. 이러한 무기 염기로부터 유도된 염에는, 알루미늄 염, 암모늄 염, 칼슘 염, 구리 (제 2 구리 및 제 1 구리) 염, 제 2 철 염, 제 1 철 염, 리튬 염, 마그네슘 염, 망간 (제 2 망간 및 제 1 망간) 염, 칼륨 염, 나트륨 염, 아연 염 등이 포함된다. 암모늄 염, 칼슘 염, 마그네슘 염, 칼륨 염 및 나트륨 염이 특히 바람직하다. 약학적으로 허용가능한 유기 비독성 염기로부터 유도된 염에는, 1 차, 2 차 및 3 차 아민, 및 시클릭 아민 및 치환 아민, 예컨대 자연 발생 및 합성 치환 아민의 염이 포함된다. 염을 형성할 수 있는 기타 약학적으로 허용가능한 유기 비독성 염기에는 이온 교환 수지, 예를 들어 아르기닌, 베타인, 카페인, 콜린, N',N'-디벤질에틸렌디아민, 디에틸아민, 2-디에틸아미노에탄올, 2-디메틸아미노에탄올, 에탄올아민, 에틸렌디아민, N-에틸모르폴린, N-에틸피페리딘, 글루카민, 글루코사민, 히스티딘, 히드라바민, 이소프로필아민, 리신, 메틸글루카민, 모르폴린, 피페라진, 피페리딘, 폴리아민 수지, 프로카인, 퓨린, 테오브로민, 트리에틸아민, 트리메틸아민, 트리프로필아민, 트로메타민 등과 같은 이온 교환 수지가 포함된다.
본 발명의 화합물이 염기성인 경우, 그의 대응 염은 무기산 및 유기산을 포함하는 약학적으로 허용가능한 비독성 산으로부터 편리하게 제조될 수 있다. 이러한 산에는, 예를 들어 아세트산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캄포르술폰산, 시트르산, 에탄술폰산, 푸마르산, 글루콘산, 글루탐산, 브롬화수소산, 염산, 이세티온산, 락트산, 말레산, 말산, 만델산, 메탄술폰산, 뮤스산, 질산, 팜산, 판토텐산, 인산, 숙신산, 황산, 타르타르산, p-톨루엔술폰산 등이 포함된다. 시트르산, 브롬화수소산, 염산, 말레산, 인산, 황산 및 타르타르산이 특히 바람직하다.
본 발명의 약학 조성물은 활성 성분으로서 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 젬시타빈 조합물 (이들의 각 성분의 약학적으로 허용가능한 염 포함), 약학적으로 허용가능한 담체 및 임의로는 기타 치료 성분 또는 보조제를 함유한다. 기타 치료제는 그러한 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제들의 효과를 증진시키는 상기 나열된 바와 같은 제제를 포함할 수 있다. 상기 조성물에는 경구적, 직장내, 국소적 및 비경구적 (피하, 근육내 및 정맥내 포함) 투여에 적합한 조성물이 포함되지만, 임의의 주어진 경우에 가장 적합한 경로는 특정 숙주, 및 활성 성분이 투여되는 상태의 성질 및 경중도에 따라 다를 것이다. 상기 약학 조성물은 편리하게는 단위 투여 형태로 제시될 수 있으며, 제약 업계에 주지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다.
실제로, EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 젬시타빈 조합 (이들의 각 성분의 약학적으로 허용가능한 염 포함) 으로 대표되는 본 발명의 화합물은 종래의 약학적 배합 기술에 따라 약학적 담체와의 친밀한 혼합물 중의 활성 성분으로서 조합될 수 있다. 담체는 투여에 요구되는 제제의 형태, 예를 들어 경구 또는 비경구 (정맥내 포함) 에 따라 다양한 형태를 취할 수 있다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 각각 소정량의 활성 성분을 함유하는 캡슐제, 카세제 (cachet) 또는 정제와 같이 경구 투여에 적합한 개별 단위로서 제시될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 산제, 과립제, 용액제, 수성 액체 중의 현탁액, 비수성 액체, 수중유 (oil-in-water) 에멀젼, 또는 유중수 (water-in-oil) 액체 에멀젼으로 제시될 수 있다. 상기 설명한 통상의 투여 형태에 부가하여, EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 젬시타빈 조합물 (이들의 각 성분의 약학적으로 허용가능한 염 포함) 은 또한 제어된 방출 수단 및/또는 전달 장치에 의해 투여될 수도 있다. 상기 조합 조성물은 임의의 제약 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 방법은 활성 성분을 하나 이상의 필수 성분을 구성하는 담체와 조합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 상기 조성물은 활성 성분을 액체 담체 또는 미세하게 분리된 고체 담체 또는 이들 둘 다와 균질하고도 친밀하게 혼합시킴으로써 제조된다. 이어서, 생성물을 원하는 제시형으로 알맞게 성형할 수 있다.
따라서, 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체 및 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 젬시타빈 조합물 (이들의 각 성분의 약학적으로 허용가능한 염 포함) 을 포함할 수 있다. EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 젬시타빈 조합물 (이들의 각 성분의 약학적으로 허용가능한 염 포함) 은 또한 하나 이상의 기타 치료적 활성 화합물과 함께 약학 조성물에 포함될 수도 있다. 기타 치료적 활성 화합물은 그러한 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제들의 효과를 증진시키는 상기 나열한 바와 같은 제제를 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명의 일 구현예에서, 약학 조성물은 항암제와 함께 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 젬시타빈을 함유할 수 있는데, 이 때, 상기 항암제는 알킬화 약물, 항대사물질, 미소관 억제제 (microtubule inhibitor), 포도필로톡신, 항생제, 니트로소우레아, 호르몬 치료, 키나아제 억제제, 종양 세포 세포자멸사의 활성화제 및 혈관신생방지제로 이루어진 군으로부터 선택된 일원이다.
이용되는 약학적 담체는 예를 들어, 고체, 액체 또는 기체일 수 있다. 고체 담체의 예에는 락토오스, 백토, 수크로오스, 탈크, 젤라틴, 한천, 펙틴, 아카시아, 마그네슘 스테아레이트 및 스테아르산이 포함된다. 액체 담체의 예는, 설탕 시럽, 땅콩유, 올리브유 및 물이다. 기체 담체의 예에는 이산화탄소 및 질소가 포함된다.
경구 투여 형태용 조성물의 제조 시, 임의의 편리한 약학적 매질이 이용될 수 있다. 예를 들어, 현탁제, 엘릭서 및 용액제와 같은 경구용 액체 제제를 형성하기 위해서는 물, 글리콜, 오일, 알콜, 착향료, 방부제, 착색제 등을 사용할 수 있으며; 산제, 캡슐제 및 정제와 같은 경구용 고체 제제를 형성하기 위해서는 전분, 당류, 미세결정질 셀룰로오스, 희석제, 과립화제, 윤활제, 결합제, 붕해제 등과 같은 담체를 사용할 수 있다. 정제 및 캡슐제는 그 투여 용이성으로 인해 바람직한 경구용 투여 단위이므로, 고체 약학 담체가 이용된다. 임의로, 정제는 표준 수성 또는 비수성 기술에 의해 코팅될 수 있다.
본 발명의 조성물을 함유하는 정제는 임의로는 하나 이상의 보조 성분 또는 보조제와 함께 압축 또는 성형시킴으로써 제조될 수 있다. 압축 정제는 적절한 기계 내에서, 활성 성분을 산제 또는 과립과 같이 자유롭게 흐르는 형태로 압축시킴으로써 제조될 수 있으며, 임의로 결합제, 윤활제, 불활성 희석제, 계면 활성제 또는 분산제와 혼합될 수 있다. 성형 정제는 적절한 기계 내에서, 불활성 액체 희석제로 습윤된 분말화된 화합물의 혼합물을 성형시킴으로써 제조될 수 있다. 각 정제는 바람직하게는 약 0.05 mg 내지 약 5 g 의 활성 성분을 함유하고, 각 사세제 또는 캡슐제는 바람직하게는 약 0.05 mg 내지 약 5 g 의 활성 성분을 함유한다.
예를 들어, 인간에 경구 투여하기 위한 제형은, 총 조성물의 약 5% 에서 약 95% 까지 변동될 수 있는 적절하고도 알맞은 양의 담체 물질과 배합된 활성 제제를 약 0.5 mg 내지 약 5 g 함유할 수 있다. 단위 투여 형태는 일반적으로 활성 성분을 약 1 mg 내지 약 2 g, 전형적으로는 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 800 mg 또는 1000 mg 함유할 것이이다.
비경구 투여에 적합한 본 발명의 약학 조성물은 물 중의 활성 성분의 용액 또는 현탁액으로서 제조될 수 있다. 예를 들어, 히드록시프로필셀룰로오스와 같은적절한 계면활성제가 포함될 수 있다. 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 오일 중 이들의 혼합물 중의 분산액이 제조될 수 있다. 또한, 해로운 미생물 성장을 방지하기 위해 방부제가 포함될 수 있다.
주사용에 적합한 본 발명의 약학 조성물에는 멸균 수용액 또는 분산액이 포함된다. 또한, 상기 조성물은 이러한 멸균 주사 용액 또는 분산액의 즉석 제제용 멸균 분말 형태일 수 있다. 모든 경우, 최종 주사 형태는 멸균되어야 하며, 효과적으로는 주사하기 용이하도록 유동성이 있어야 한다. 약학 조성물은 제조 및 저장 조건 하에서 안정해야 하며; 이에 따라, 바람직하게는 세균 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용에 대항하여 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 식물유 및 이들의 적절한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 예를 들어, 에어로졸, 크림, 연고, 로션, 살포제 등과 같이 국소용에 적합한 형태일 수 있다. 또한, 상기 조성물은 경피 장치에 사용하기에 적합한 형태일 수 있다. 이러한 제형은, 본 발명의 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 젬시타빈 조합물 (이들의 각 성분의 약학적으로 허용가능한 염 포함) 을 이용하여, 종래의 가공법을 통해 제조될 수 있다. 예로서, 약 5 중량% 내지 약 10 중량% 의 화합물과 함께, 친수성 물질 및 물을 혼합하여 크림 또는 연고를 제조하여, 원하는 점조도 (consistency) 를 갖는 크림 또는 연고를 생성한다.
본 발명의 약학 조성물은 담체가 고체인, 직장내 투여에 적합한 형태일 수 있다. 혼합물이 단위 투여 좌제를 형성하는 것이 바람직하다. 적합한 담체에는 코코아 버터 및 당업계에 통상 사용되는 기타 물질이 포함된다. 먼저 조성물을 연화 또는 용융된 담체(들)와 혼합한 후 저온 처리하여 주형 내에서 성형함으로써 좌제를 편리하게 형성할 수 있다.
앞서 언급한 담체 성분에 부가하여, 상술한 약학적 제형은 적절한 경우, 하나 이상의 추가 담체 성분, 예컨대 희석제, 완충제, 착향료, 결합제, 계면활성제, 증점제, 윤활제, 방부제 (항산화제 포함) 등을 포함할 수 있다. 또한, 기타 보조제를 포함시켜 제형을 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 할 수 있다. EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 젬시타빈 조합물 (이들의 각 성분의 약학적으로 허용가능한 염 포함) 을 함유하는 조성물은 또한 분말 또는 액체 농축 형태로 제조될 수도 있다.
본 발명의 조합물의 화합물에 대한 투여 수준은 대략 본원에 기재된 바와 같거나, 또는 이러한 화합물에 대해 당업계에 기술된 바와 같을 것이다. 그러나, 임의의 특정 환자에 대한 특이적 투여량 수준은 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 투여 경로, 배설률, 약물 조합 및 치료가 진행중인 특정 질환의 경중도를 포함하는 각종 인자에 따라 달라질 것으로 이해된다.
본 발명은 이하의 실험 세부사항으로부터 더 잘 이해될 것이다. 그러나, 당업자는, 논의된 특정 방법 및 결과가 단지, 이후 청구의 범위에서 보다 완전하게 기술되는 바와 같은 본 발명의 본 발명의 예시이며, 어떠한 식으로든 이에 제한되는 것이 아님을 용이하게 이해할 것이다.
실험의 상세한 설명:
개요
암세포-특이적 표피 성장 인자 수용체 (HER1/EGFR) 는 암 치료에서 유용한 분자 표적이다 (Ciardiello, F and Tortora G. (2002) Expert Opin. Investig. Drugs 11:755-768). 다수의 암은 HER1/EGFR 를 과발현한다: 두경부 편평상피 세포 암종 (70-100%), 비소세포 폐암 (NSCLC) (50-90%), 전립선암 (40-70%), 신경아교종 (10-50%), 위암 (30-60%), 유방암 (35-70%), 직장결장암 (45-80%), 췌장암 (30-50%) 및 난소암 (35-60%) (Ciardiello, F and Tortora G. (2002) Expert Opin. Investig. Drugs 11:755-768); Salomon D.S., et al. (1995) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 19:183-232). Salomon 등은 또한 과발현된 HER1/EGFR 와 진행된 질병, 전이 및 나쁜 예후 사이의 관련을 강조했다.
NSCLC 는 가장 흔한 폐암이다. 상기 질병의 정도에 따라, 치료 접근법이 다를 것이다. 질병의 초기 단계에서는, 수술이 유일한 치료법이며, 화학/방사선요법으로의 다중양상적 접근법은 개선된 결과와 연관될 수 있다. 진행된 질병에서는, 화학요법이 주요 옵션이며, 이는 종합적 생존에 적은 개선을 부여한다. 따라서, 더욱 효과적이며 보다 잘 허용되는 (well-tolerated) 요법에 대한 조사와 함께, NSCLC 에서의 의학적 필요가 여전히 남아있다. 빈데신, 카보플라틴, 에토포시드, 이포스파미드, 시클로포스파미드, 빈크리스틴, 및 미토마이신 및 시스플라틴을 포함하는 다수의 전통적 세포독성물질이 NSCLC 에서의 단일치료 (monotherapy) 로 사용되어 왔다 (Rajkumar S.V., and Adjei AA. (1998) Cancer Treat Rev. 24:35-53). 상기 약물로의 단일치료는 단지 적은 개선만을 초래하 지만, 시스플라틴과의 조합 치료는 랜덤화 실험에서 환자의 병을 감소시키고 그들의 삶의 질을 개선시켰다 (Bunn P.A. Jr, and Kelly K. (1998) Clin Cancer Res. 4(5): 1087-1100).
젬시타빈은 1990 년대에 개발되었고, 리보핵산 환원효소를 억제한다. 젬시타빈 단일치료는 표준 시스플라틴/에토포시드 화학요법 보다 큰 종양 반응 및 개선된 환자의 삶의 질 (감소된 모발 손실, 메스꺼움 및 구토, 및 식욕 감소에 있어서) 의 가능성을 가진다 (ten Bokkel W.W., et al. (1999) Lung Cancer 26(2):85-94).
European Organization for Research and Treatment of Cancer (EORTC) 에 의한 조합 시험은 시스플라틴 및 테니포시드를 시스플라틴 및 파클리탁셀과 비교하였다 (Giaccone G. et al. (1998) J Clin. Oncol. 16:2133-2141). 시스플라틴 및 파클리탁셀 조합은 (비록 명백한 생존 이익을 제공하지는 않았지만) 진행 NSCLC 를 더욱 경감시켰기 때문에 진행 NSCLC 환자를 위한 표준적인 간호법의 하나로 권고되어 왔다. 또한, 젬시타빈 및 시스플라틴의 조합은 시험관 내에서 상승작용 하는 것으로 나타났으며, 생체 내에서는 적어도 상가 작용하는 것으로 나타났다 (Peters G.J. et al. (1995) Semin. Oncol. 22(4 Suppl. 11):72-79). 제 II 상 시험에서, 젬시타빈 및 시스플라틴에 대한 반응율은 47% 이었고 중앙값 생존은 57 주였으며, 48% 의 1 년 생존율을 가졌다 (Bunn P.A. Jr, and Kelly K. (1998) Clin Cancer Res. 4(5): 1087-1100).
암에 대한 새로운 치료는 암세포-특이적 접근법을 사용하며, 기존의 세포독 성 약물보다 낮은 독성을 가질 것이다. 암세포-특이적 표적은 질병 병인의 일부일 뿐이므로, 표적형 및 통상적 약물을 혼합하는 치료가 상승 효과를 가질 수 있다. NSCLC 의 최적 치료는 통상적 화학요법과 함께 EGFR 억제제로 이루질 수 있다.
엘로티닙 (TarcevaTM, OSI-774) 은 선택적이며, 경구 이용가능한 HER1/EGFR 타이로신-키나아제 영역의 소분자 억제제이다. 이는 두경부 및 음문 암종의 예비 임상 동물 모델에서 강한 항종양 활성을 갖는다 (Pollack V.A., et al. (1999) J. Pharmacol. Exp. Ther. 291:739-48). 엘로티닙은 시험관 내에서 세포자멸사를 유도하며, 생체 내에서 여러 EGFR-발현 인간 종양 이종이식조직에 대해 활성이다 (Moyer J.D. et al. (1997) Cancer Res. 57:4838-4848). 백금-기재 화학요법 (Perez-Soler R. et al. (2001) Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 20:310a (Abstract 1235)) 이 실패한 NSCLC 환자의 개방-표지, 제 II 상 시험에서, 엘로티닙이 유망한 항암 활성을 가졌다.
이 실험에서는, 엘로티닙을 시스플라틴 또는 젬시타빈과 혼합하는 것이 NSCLC 이종이식 모델을 갖는 무흉선 누드 마우스에서 종양 성장을 억제하는데 상승적 또는 대항적으로 작용하는지 조사하였다. H460a 및 A549 NSCLC 종양 모델은 EGFR 를 확실히 발현하며, 세포 당 약 70,000-80,000 의 결합 부위를 갖기 때문에 선택되었다 (Bianco, C. et al. (2002) Clin. Cancer Res. 8(10):3250-3258; Lee, M. et al. (1992) J Natl. Cancer Inst. Monogr. (13): 117-123). A549 는 천 천히 자라며 H460a 는 더욱 공격적이며 더욱 빨리 자란다.
재료 및 방법
동물
약 10-12 주된, 23-25 g 체중의 암컷, 무흉선, nu/nu-nuBR 누드 마우스 (Charles River Labs, Wilmington, USA) 를 사용하였다. 마우스의 건강 상태를 매일, 관찰 및 공동 선반 상의 감시 동물 (sentinel animal) 로부터 채취한 혈액 샘플의 분석에 의해 평가하였다. 모든 동물을 1 주 동안 순응시키고 운반-관련 스트레스로부터 회복하도록 하였다.
멸균수 및 방사선조사된 사료 (5058-ms Pico Lab [마우스] 사육 사료, Purina Mills, Richmond, IN) 를 마음대로 먹게 하고, 동물을 12-시간 명암 주기에 유지시켰다. 우리, 깔짚 및 물병은 사용 전 멸균하고 매주 교체하였다. 모든 동물 실험은 Roche Animal Care and Use Committee 에 의해 승인된 프로토콜에 따랐다.
세포 배양 및 동물 실험
H460a 세포 (Dr Jack Roth, MD, Anderson 에 의해 제공됨) 을 10% 우태아 혈청 (FBS) 보충된 Dulbecco's Modified Eagle Media (DMEM) 에서 키웠다. A549 세포 (American Type Culture Collection [Manassas, VA]) 를 Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI) 1640 + 10% FBS 에서 키웠다. 이식을 위한 세포 농도는 H460a 에 대해 1x107 세포/0.2mL 및 A549 에 대해 7.5x106 세포/0.2mL 이었다.
세포를 인산-완충 염수에 현탁시키고, 각 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 촉진가능한 종양이 확립된 후, 동물을 무작위로 골라 모든 군이 100-150 mm3 의, 유사한 초기 평균 종양 부피를 갖도록 하였다. 종양 측정 및 마우스 체중을 주 3 회 실시하였다. 동물을 실험 내내 개별적으로 모니터하였다.
실험 제제 및 약물 처리
엘로티닙 (OSI Pharmaceuticals, Uniondale, NY) 을, 주사를 위해 소듐 카르복시메틸셀룰로오스 및 트윈 80 과 함께 물 중 미세한 현탁액으로 제형화시켰다. 엘로티닙 (0.2mL/동물) 을, 1 mL 주사기 및 18-게이지 영양법 (gavage) 바늘을 사용하여 경구 투여하였다. 모든 군들은 3 주 동안 매일 처리하였다.
동결건조된 젬시타빈 (GemzarTM, Lilly Research Center Ltd) 을 라벨 지시에 따라 멸균 염수와 함께 미리 포장된 바이얼에 제형화시켜, 38mg/mL 활성 화합물을 함유하는 용액을 제공하였다. 각 투여량 군에 대해, 전체 실험에 필요한 약물로 이루어진 바이얼의 원액 (stock solution) 의 분취량을 취하고, 멸균 염수로 추가로 희석하여, 각 동물에 대해 0.5 mL 투여량 부피의 용액을 수득하였다. 젬시타빈을 3 mL 주사기 및 26-게이지 바늘을 사용하여 복막내 투여하였다. 모든 군을 3 주 동안 3 일마다 처리하였다 (총 6 회 주사).
계산 및 통계학적 분석.
하기 식을 사용하여, 체중 감소를 평균 군 체중의 백분율 변화로 계산하였 다:
((W-W0)/W0)x100
[여기서, 'W' 는 특정 일에 처리군의 평균 체중을 나타내며, 'W0' 는 처리의 개시점에서의 동일군의 평균 체중을 나타낸다].
상기 식을 사용하여 최대 체중 감소를 계산하여, 특정 군에 대해 전체 실험에서 임의의 시간에 손실된 체중의 최대 백분율을 수득하였다. 치료 효능을 종양 성장 억제에 의해 평가하였다. 하기 식을 사용하여, 처리군의 종양 부피를 대조군의 종양 부피의 백분율 (%T/C) 로 수득하였다:
100x((T-T0)/(C-C0))
[여기서, 'T' 는 실험 동안 특정일에 처리군의 평균 종양 부피를 나타내며, 'T0' 는 처리 제 1 일에 동일군의 평균 종양 부피를 나타내며, C 는 실험의 특정일에 대조군의 평균 종양 부피를 나타내며, C0 는 처리 제 1 일에 동일군의 평균 종양 부피를 나타낸다].
종양 성장 억제는 하기 식을 사용하여 계산하였다:
100-%T/C
종양 부피 (mm3) 는 하기 타원체 식을 사용하여 계산하였다:
(Dx(d2))/2
[여기서, 'D' 는 종양의 큰 지름을 나타내며, 'd' 는 작은 지름을 나타낸다 ]. 어떤 경우, 종양 퇴행 및/또는 종양 부피의 변화 백분율은 하기 식을 사용하여 계산하였다:
((T-T0)/T0)x100
[여기서, 'T' 는 특정일에 처리군의 평균 종양 부피를 나타내며, 'T0' 는 처리의 개시점에서의 동일 처리군의 평균 종양 부피를 나타낸다].
통계적 분석은 순위합검정 및 일원변량분석 (ANOVA) 및 이후에 본페로니 t-검증 (Bonferroni t-test) (SigmaStat, version 2.03, Jandel Scientific, San Francisco, CA) 에 의한 것이었다. 유의 수준은 p≤0.05 으로 설정하였다.
약동학적 분석
1회-투여량 약동학 (PK) 을 위해, 시점 당 3 마리의 마우스로부터의 혈액 샘플을 심장 천자 (穿刺) 에 의해, 투약 후 5, 15, 30, 60 분 및 2, 4, 8, 16, 24 시간에 채취하였다. 장기간 처리된 동물에 대해, 시점 당 2 또는 3 마리의 마우스로부터의 혈액을, 후안 굴을 통해 1 시간 및 6 시간째에 채취하였다. 채취 튜브는 항응고제로서 에틸렌 디아민 테트라-아세트산 (EDTA) 을 함유하였다. 샘플을 -70℃ 에 저장하였다. 1 ng/mL 의 정량 제한의 이단계 질량 분석법 (tandem mass spectrometry; LC-MS/MS) 및 액체 크로마토그래피를 사용하여 엘로티닙의 혈청 농도를 측정하였다. PK 평가 프로그램인 WinNonlin PRO® version 3.1 (Pharsight Inc) 를 사용하여, PK 매개변수를 복합 자료의 비-구획 분석에 의해 평가하였다. 한 실험에서, 1 g 조직 당 lng/g 정량 제한의 선택적 LC-MS/MS 방법을 사용하여 엘로티닙 종양 (H460a) 농도를 측정하였다.
병리학/부검
실험 종료 시, 모든 잔여군으로부터 처리 당 5 마리의 마우스에 완전 부검을 실시하였다. 혈액학 및 임상 화학을 위해 상기 마우스들로부터 전혈 (全血) 을 채취하였다.
종양 샘플을 10% 아연 포르말린에 담궈 고정시킨 후, Tissue-Tek®VIP (Sakura) 로 처리하고 파라핀에 묻었다. 면역조직화학용 절편을 5μ 로 절단하였다. 면역-전 (pre-immune) 토끼 또는 염소 혈청 (Dako Ltd) 을 음성 대조군으로 사용하였다. 절편을 Target Retrieval Solution (Dako Ltd) 에 담그고, 가열기 (Black & Decker) 에서 20 분간 94℃ 로 가열하였다. 15 분간 메탄올 중 6% H2O2 로 내인적 퍼옥시다아제 활성을 켄치 (quench) 하였다.
비-특이적 조직-결합 부위를 블로킹 (blocking) 하기 위해, 2차 항체가 유도된 종으로부터의 10% 정상 혈청으로 절편을 블로킹하였다. 절편을 Ultra-V (Lab Vision) 에서 제조된 혈청 중, 실온에서 20 분간 인큐베이션하였다.
혈소판 표피 세포 부착 분자 (PECAM-1, CD31) 항원 및 EGFR 항원을 위해, 절편을 Antibody Diluent (Dako Ltd) 에 1:800 으로 희석된 다중클론 염소 항-PECAM-1 IgG (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) 와, 또는 Antibody Diluent (Dako Ltd) 1:50 희석된 다중클론 토끼 항-EGFR IgG (BioGenex, San Ramon, CA) 와, 실온에서 밤새 인큐베이션하였다. 절편을 Vectastain Elite ABC- peroxidase (Vector Laboratories) 과, 실온에서 45 분간 인큐베이션하였다.
Ki-67 항체를 위해, 절편을 Antibody Diluent (Dako Ltd) 에 1:2,000 희석된 다중클론 항-Ki-67 IgG (NeoMarkers, Fremont, CA) 와, 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션한 후, 30 분간 호스래디쉬 (horseradish) 퍼옥시다제-표지 스트렙아비딘 복합체의 첨가가 잇따랐다.
세포자멸사를 검출하기 위해, TUNEL TdT-FragELTMDNA 절편 검출 키트 (kit) (Oncogene Research Products, San Diego, CA) 를 제조사의 권고에 따라 사용하였다. 4개 모두의 항체에 대해, Vector Nova Red (Vector Laboratories) 가 최종의 색원체였고, 헤마톡실린이 핵 대비염색제였다.
결과 및 토론
결과
NSCLC 이종이식조직에서의 EGFR 면역조직화학적 염색
H460a 및 A549 종양에서의 EGFR 발현 패턴을 면역조직화학적으로 검사하였다. 모든 세포주는 EGFR 에 대해, 유사한 막형태 (membranous) 패턴의 염색을 가졌다 (자료 나타내지 않음). 이는 상기 두 종양 세포주에서 동등한 EGFR 발현을 나타내는 이전의 결과를 확증하였다 (Bianco, C. et al. (2002) Clin. Cancer Res. 8(10):3250 3258; Lee, M. et al. (1992) J Natl. Cancer Inst. Monogr. (13): 117-123).
무흉선 누드 마우스에서 엘로티닙의 1회 및 장기-투여량 PK 평가
비-종양 마우스 내.
20 및 100 mg/kg 엘로티닙을 암컷 nu/nu 무흉선 마우스에 영양법으로 투여했다. 상기 투여량은 91.5% 함량의 활성 약물 (유리 염기) 과의 히드로클로리드 염을 나타낸다. 제형은 각각 2.5mg/mL 및 12.5mg/mL 의 엘로티닙을 함유하는 소듐 카르복시메틸셀룰로오스 현탁액이었다. 시점 당 3 마리의 동물을 PK 자료를 위해 평가하였다 (도 4).
100mg/kg 이 투여된 마우스는 엘로티닙에 대해 전신 노출이 높았고, 약 196,000 h*ng/mL 의 AUClast 값을 가졌다. 20mg/kg 에 잇따른 AUClast 는 33,500 h*ng/mL 이었다. 노출 (AUC) 은 투여량에 비례하였다. 평균 최대 혈장 농도는 100mg/kg 후, 약 24,000ng/mL, 및 20mg/kg 후, 9,100ng/mL 였다. 최대 혈장 농도는 투약 0.5-1.0 시간 후였다. 평균 겉보기 말기 반감기는 약 4 시간이었고, 평균의 평균 체류 시간은 약 7 시간이었다.
종양 마우스
6.3, 12.5, 25.0, 100.0, 및 150.0 mg/kg 엘로티닙을 nu/nu 무흉선 마우스에 경구 투여한 후, 투약 1 시간 및 6 시간 후, 혈장 농도는 각각 16,700ng/mL 및 8,870ng/mL 이하였다 (도 1a). 혈장 샘플과 동일한 시점에서 채취된, 150mg/kg 의 경구 투여량 후의 각 평균 종량 농도는 1g 의 조직 당 4,800 및 3,090ng 이었다.
혈장 농도의 개체 간의 변이성은 보통이었고, 약 35-40% 의 상대 표준 편차 (RSD) (범위: 5.2-120%) 를 가졌다. 노출은 투여량에 의존하였으며, 증가하는 투여량에 대해 투여량-비례보다 컸다. 종양 농도 또한 본 실험의 혈장 농도와 뚜렷한 상관관계가 있었다 (도 1b).
무흉선 누드 마우스에서의 최대 허용 투여량 (MTD) 의 측정
엘로티닙 MTD
엘로티닙에 대한 MTD 는 100mg/kg (도 6) 이었다. 독성의 징후를 나타내는 마우스는 모두 유사한 병변을 가졌다. 육안상 독성이 피부 및 위장관에서 발견되었다. 400mg/kg 군의 1 마리의 마우스는 죽었다. 상기 군의 나머지 동물들은 사망률 때문에 안락사시켰다. 200mg/kg 가 투여된 마우스는 현저한 체중 감소를 나타냈고, 모두를 안락사시켰다. 그러나, 이전의 효능 실험은, 이 제형의 150mg/kg 엘로티닙도 3 주 동안 잘 허용되었다는 것을 보여주었다 (저자, 비공개 관찰).
젬시타빈 MTD
젬시타빈이 투여된 누드 마우스에서의 2-주 MTD 실험에서, 어느 처리 군에서도 명백한 독성의 징후 (중량 감소 또는 육안상 임상적 징후) 가 없었다. 젬시타빈의 주요 독성은 골수억제이다 (Hoang, T. et al. (2003) Lung Cancer 42(1):97-102; Philip PA. (2002) Cancer 95(4 Suppl):908-911; Tripathy, D.(2002) Clin. Breast Cancer 3 (Suppl 1):8-11). 전혈구 측정을 위한 최종 혈액 샘플을 채취하지 않았기 때문에, 어느 한 투여 군에서 골수억제가 있었는지 알려지지 않았다.
상기 결과 및 문헌 (Rajkumar S.V., and Adjei AA. (1998) Cancer Treat Rev. 24:35-53; Bunn P.A. Jr, and Kelly K. (1998) Clin Cancer Res. 4(5):1087-1100; ten Kokkel W.W., et al. (1999) Lung Cancer 26(2):85-94) 에 있는 자료에 근거하여, 3 일 당 120mg/kg 의 투여량을 이후의 효능 실험에서 최대 투여량으로 사용하기로 결정하였다. 종양을 가진 동물에 대해 서로 다른 민감도가 보여졌고, 허용 수준은 종양-라인-특이적일 수도 있기 때문에 (Merriman, R.L. et al. (1996) Invest. New Drugs 14(3):243-247), 더 높은 투여량 사용에 있어서 신중하였다.
확립된 NSCLC 이종이식조직에 대한 엘로티닙의 효과
H460a 에서의 투여량 반응 연구.
H460a NSCLC 이종이식에서의 연구의 말미 (종양 임플란트 28 일후) 에 단일 요법으로서의 엘로티닙은 현저한 투여량-의존적 효능을 가졌다. 100 mg/kg 군에서 성장 억제율은 61% (비히클 대조군에 대해 p≤O.OOl) 였다.
기타 군의 성장 억제율은 하기와 같았다: 25 mg/kg: 46 % (비히클 대조군에 대해 p≤O.OOl); 12.5 mg/kg: 36% (비히클 대조군에 대해 p=0.003); 6.25 mg/kg: 28% (비히클 대조군에 대해 p=0.014) (도 2). 부분적 또는 완전 퇴행은 나타나지 않았다.
H460a 에서의 엘로티닙 및 젬시타빈의 조합 활성.
28-일 종점에서, 엘로티닙 100 mg/kg 은 종양 성장을, 71% (p=0.002) 로 현저하게 억제하였다 (도 3). 엘로티닙 25mg/kg 은 30% 의 차선의 효능을 나타내 었다.
젬시타빈 단일치료는 120 mg/kg 의 MTD 에서 3 일마다 검사하고, MTD 의 1/4 인 30 mg/kg 에서 3 일마다 검사하였다. 120 mg/kg/3일의 젬시타빈은 종양 성장을 현저히 억제하였다 (93%, p≤0.001). 상기 MTD 의 일부로는 종양 성장 억제가 64% (p≤0.001) 였다.
120mg/kg/3일 젬시타빈 및 100mg/kg 경구 엘로티닙의 조합은 치사적이었고, 종양 이식 후 5 일에 독성의 징후가 있었다. 마우스는 종양 이식 후, 25 일째 (치료 제 15 일) 까지 모두 죽었다.
30mg/kg/3일 젬시타빈 및 25mg/kg 엘로티닙의 조합은 종양을 86% (비히클 대조군에 대해 p≤0.001) 억제하였다. 부분 또는 완전 퇴행이 없었다. 이러한 억제는 25% 의 MTD 에서 투여된 엘로티닙 또는 젬시타빈의 어느 것보다 현저히 양호한 것이 아니었기 때문에 상가적이지 않다. 상기 조합은 또한 100mg/kg 엘로티닙 또는 120mg/kg 젬시타빈보다 현저히 양호하지 않았다.
A549 에서의 엘로티닙 및 젬시타빈 조합 활성
연구의 말미 (종양 임플란트 47 일후, 치료 19 일) 에 엘로티닙 100mg/kg 은 87% (p≤O.OOl) 로, 종양의 성장을 현저하게 억제하였다 (도 5). 2개의 부분적 퇴행이 있었다 (16 및 7 %). 이전의 연구에서와 같이, 25mg/kg 엘로티닙은 48% 종양 성장 억제 (p=0.004) 의 차선의 효능을 가졌다.
120mg/kg 젬시타빈은 종양 성장을 75% (p≤O.001) 로 현저히 억제하였고, 하나의 부분 퇴행 (5%) 이 있었다. 30mg/kg 젬시타빈은 종양 성장을 42% (p=0.001) 억제하였다. 이전 연구의 독성때문에, 젬시타빈 및 엘로티닙은 높은 투여량으로 조합되지 않았다. 30mg/kg 젬시타빈 및 25mg/kg 엘로티닙 조합은 모든 마우스에 의해 잘 허용되었고, 현저한 중량 감소 또는 독성의 육안상 징후가 없었다. 상기 조합은 103% 의 유의한 종양 억제 (비히클 대조군에 대해 p≤O.001) 를 가졌고, 6 개의 부분 퇴행 (범위: 5%-67%) 이 있었다. 상기 종양 성장 억제 (p≤0.05) 는, MTD 의 1/4 로 투여된 젬시타빈 또는 엘로티닙의 어느 하나보다 현저히 양호했기 때문에 상가적이었다. 조합은 100mg/kg 엘로티닙, 또는 120 mg/kg 젬시타빈보다 현저히 양호하지 않았다.
정상 및 종양 조직에 대한 치료-관련 효과.
단일요법이 주어진 동물의 해부.
엘로티닙 단일요법이 주어진 동물에서는 혈액학적 요소 또는 임상 화학적 요소에서의 변화가 없었다 (자료 제공하지 않음). 피부에 처리-관련 거시학적 변화가 있었다. 마우스는, 피부에서의 높은 수준의 EGFR 발현 때문일 수 있는 입주위 피부에 상당한 붉어짐 (reddening) 및 가피 (crusting) 가 있었다 (도 7). 이러한 병변은 일과성이었고, 계속적인 치료에 의해 사라졌다. 처리-관련 항-종양 효과는, 두 가지의 NSCLC 이종이식 종양 모델에 엘로티닙 100mg/kg 투여 했을때, Ki-67 증식 수치의 완만한 감소로 이루어졌다 (도 8). 처리된 이종이식조직에서의 종양 세포의 세포자멸사의 빈도에 있어서 유의한 변화가 없었고, 내피 세포 마커 CD31 에 대한 면역조직화학 염색을 통한 미세혈관 밀도 (MVD) 로 측정된 혈관신생에 대한 명백한 효과도 없었다.
엘로티닙/젬시타빈 조합이 주어진 동물에서의 해부.
MTD 의 1/4 로 엘로티닙 및 젬시타빈이 주어진 마우스에 있어서, 조직학적으로 평가된 주요 장기에서의 중요한 발견은 없었다. 혈액학적 및 혈청 화학 요소에 대한 처리-관련 효과는 최소였다. 본 연구의 조건 하에서 처리-관련 독성의 흔적은 거의 없었다. 따라서, 25mg/kg 엘로티닙과 30mg/kg 젬시타빈의 조합이 명백한 항신생물성 효과를 가졌으나, 이는 독성을 증가시키는 것으로 보이지는 않았다. 조합 군에서의 증식에 대한 효과 (Ki67 염색으로 평가함) 은 엘로티닙 단일치료-처리 마우스의 것과 유사했다 (도 8b).
토론
이러한 결과는 HER1/EGFR 의, 강력하고 경구 투여 가능하고 선택적인 소분자 억제제인 엘로티닙이, 유사한 수의 HER1/EGFR 를 발현하는 인간 NSCLC 이종이식 모델에서, 단일요법 및 통상적인 화학요법과의 조합으로서, 강력한 항종양 활성을 지닌다는 것을 나타낸다.
이종이식 모델 H460a 에서, 이는 우수한 투여량-의존 관계를 지니고, 종양의 농도는 혈장 농도와 뚜렷한 상관관계가 있었다.
무흉선 마우스에서 피하조직 종양으로 자랐을 때 2 개의 인간 NSCLC 세포주는 상이한 종양 성장 동력학을 지녔는데, H460a 에서는 배가 (doubling) 시간이 5 일 이었고, A549 에서는 배가 시간이 10 일 이었다. 100mg/kg 의 엘로티닙 단일요법은 H460a 이종이식 모델 에서의 종양 성장을 현저하게 억제하였다.
젬시타빈/엘로티닙 조합을, 천천히 성장하는 A549 종양 (>100%) 에서, MTD 의 25 % 로 투여하였을 때 현저한 종양-성장 억제 및 부분적 경감이 있었다. 젬시타빈과 엘로티닙를 조합하는 경우 종양 성장 억제는 엘로티닙 단일요법과 비교하여 현저하게 증가하였다 (p≤0.05). 빨리 성장하는 H460a 종양에서, 두 화합물의 MTD 의 1/4 을 사용한 젬시타민/엘로티닙 조합에서 상당한 종양 성장 억제 (86%) 가 나타났다. 그러나, 상기 조합을 통한 종양 성장 억제는 단일 요법을 통한 것과 현저하게 다르지 않았다. A549 는 천천히 성장하며, 따라서 혈관신생에 더 의존적인 것으로 가정된다. 엘로티닙은 간접적인 항-신생혈관제인 것으로 생각되므로 (Kerbel, R, 및 Folkman, J. (2002) Nat. Rev. Cancer 2(10):727-39), A549 에 대해서 더 큰 효능을 가지는 것이 당연하다. 엘로티닙는 HER1/EGFR 의 세포내 타이로신 키나아제 도메인에 대한 아데노신 트리포스페이트 (ATP) 의 결합을 억제하고, 수용체 인산화 및 관련 하류 신호를 막는다 (Moyer J.D. 등 (1997) Cancer Res. 57:4838-4848). 결과는 종양 성장 및 진행, 예컨대 증식, 신혈관생성, 전이 및 세포자멸사로부터의 보호와 관련된 세포 과정의 억제이다 (Moyer J.D. 등 (1997) Cancer Res. 57:4838-4848). 불행히도, 엘로티닙으로 처리한 종양에서 MVD 를 통해 항-신생혈관 효과가 검출되지 않았는데, 이는 아마도 분석이 충분히 민감하지 않았기 때문일 것이다.
2 개의 NSCLC 모델에서, 젬시타빈 (30mg/kg) 과 엘로티닙 (25mg/kg) 을 MTD의 1/4 로 투여하였을 때, 잘 허용됐고, 체중 손실이 없거나 매우 적었으며, 이는 부작용의 위험은 적으면서 효능을 유지함으로써 잠재적인 중대한 환자의 삶의 질에서의 편익을 제안한다. 반대로, 그들의 개별적인 최대 투여량에서의 엘로티닙 및 통상 제제의 고-투여량 조합은 허용되지 않았다. 이는 보조 요법이 전임상적으로 사용될 수 없다는 사실과 관련이 있을 수 있다.
NSCLC 가 있는 인간에서 젬시타빈 및 시스플라틴과의, 또는 카보플라틴 및 파클리탁셀과의, 엘로티닙의 제 Ⅲ 상 실험은, 확정적인 생존 편익이 증명되지 않았기 때문에 실망스러웠다. 그럼에도 불구하고, 여기에 보고한 전임상 연구는 엘로티닙과 화학요법의 병용은 종양 성장 억제에 상가적인 효과를 주었다. 이러한 발견은 엘로티닙과 기타 화학요법제와의 순차적인 사용 및 선택된 환자층에서 등의 다양한 임상 세팅에서 엘로티닙의 효과에 대한 추가적인 조사가 필요함을 뒷받침하였다. 부가적으로 HER1/EGFR 은 두경부암, 전립선암, 신경아교종, 위장, 유방, 자궁경부, 췌장 및 난소암을 포함하는 다양한 암에서 과발현된다 (Ciardiello, F 및 Tortora G. (2002) Expert Opin. Investig. Drugs 11:755-768); Salomon DS, 등 (1995) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 19:183-232). 따라서, 엘로티닙과 젬시타빈의 병용은 HERl/EGFR-발현 고형 세포 종양이 있는 기타 암에서 효능 편익이 있을 수 있다.
결과적으로 NSCLC 에서, 유사한 수준의 EGFR 발현을 가지는 이종이식 종양에서의 엘로티닙 항종양 활성은, 단일요법 및 젬시타빈과의 조합 모두에서 강하다. 이러한 전망되는 암 치료에서 전망되는 새로운 길을 완전히 평가하기 위해서는 추가적인 조사가 필요하다.
첨가되는 참고문헌
본원에 기재된 모든 특허, 출판된 특허 출원 및 기타 참고문헌은 여기에 참 고문헌으로써 명확히 첨가된다.
균등물
당업자들은 정례적인 실험을 통해, 본원에 자세히 기재한 본 발명의 특정 구현예에 대한 많은 균등물을 인지하거나 또는 규명할 수 있다. 이러한 균등물은 하기 청구의 범위에 포함되는 것을 의도한다.
Figure 112006089525100-pct00001
Figure 112006089525100-pct00002

Claims (36)

  1. 엘로티닙(erlotinib) 및 젬시타빈(gemcitabine)의 조합물로 이루어진 유효성분을 포함하는, 췌장암 또는 비-소세포 폐암(Non-Small Cell Lung Cancer, NSCLC) 치료용 복합제제.
  2. 삭제
  3. 제 1 항에 있어서, 엘로티닙이 히드로클로리드 염으로 존재하는 복합제제.
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 제 1 항에 있어서, 복합제제가 췌장암 치료용인 복합제제.
  7. 삭제
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  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 엘로티닙을 포함하는 조성물 및 젬시타빈을 포함하는 조성물을 포함하는, 췌장암 또는 비-소세포 폐암에 사용되는 키트(kit).
  20. 제 19 항에 있어서, 멸균 희석제를 추가적으로 포함하는 키트.
  21. 삭제
  22. 제 19 항에 있어서, 환자에서의 췌장암 또는 비-소세포 폐암을 치료하기 위한 방법으로서 환자에게 엘로티닙 및 젬시타빈의 조합 치료의 사용을 지시하는 인쇄된 설명을 포함하는 패키지 삽입문을 추가적으로 포함하는 키트.
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. (ｉ) 제 1 유효량의 엘로티닙 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 조성물; 및 (ⅱ) 제 2 유효량의 젬시타빈을 포함하는 조성물을 포함하는, 췌장암 또는 비-소세포 폐암에 사용되는 키트.
  30. (ｉ) 제 1 차선-치료량의 엘로티닙 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 조성물; 및 (ⅱ) 제 2 차선-치료량의 젬시타빈을 포함하는 조성물을 포함하는, 췌장암 또는 비-소세포 폐암에 사용되는 키트.
  31. 제 19 항, 제 29 항 또는 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 엘로티닙을 포함하는 조성물 및 젬시타빈을 포함하는 조성물이 동일한 경로를 통해 환자에게 투여되는 것인 키트.
  32. 제 19 항, 제 29 항 또는 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 엘로티닙을 포함하는 조성물 및 젬시타빈을 포함하는 조성물이 상이한 경로를 통해 환자에게 투여되는 것인 키트.
  33. 제 19 항, 제 29 항 또는 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 엘로티닙을 포함하는 조성물이 비경구 또는 경구 투여를 통해 환자에게 투여되는 것인 키트.
  34. 제 19 항, 제 29 항 또는 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 젬시타빈을 포함하는 조성물이 비경구 투여를 통해 환자에게 투여되는 것인 키트.
  35. 삭제
  36. 삭제
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