MXPA06014015A

MXPA06014015A - Tratamiento con gemcitabina y un inhibidor del receptor del factor de crecimiento epidermico.

Info

Publication number: MXPA06014015A
Application number: MXPA06014015A
Authority: MX
Inventors: Brian Higgins; Kenneth Kolinsky
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 2004-06-03
Filing date: 2005-05-27
Publication date: 2007-02-08
Also published as: KR100986945B1; AU2005249205A1; RU2006146619A; BRPI0511760A; US20050272688A1; CA2567836A1; EP1755608A1; WO2005117887A1; NO20066056L; JP2008501652A; KR20070029736A; ZA200610049B; CN1960732A; NZ551406A; IL179525A0

Abstract

La presente invencion proporciona un metodo para la fabricacion de un medicamento destinado al tratamiento de tumores o metastasis tumorales, que se caracteriza por el uso de una cantidad terapeuticamente efectiva de un inhibidor de la actividad cinasa de EGFR y de gemcitabina, con o sin agentes o tratamientos adicionales, como otros farmacos antineoplasicos o radioterapia. La invencion tambien comprende una composicion farmaceutica que esta formada por una combinacion de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemicitabina a su vez combinada con un portador farmaceuticamente aceptable. Un ejemplo preferido de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR utilizable en la practica de esta invencion es el compuesto erlotinib clorhidrato (tambien conocido como TarcevaTM).

Description

TRATAMIENTO CON GEMCITABINA Y UN INHIBIDOR DEL RECEPTOR DEL FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDÉRMICO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención está dirigida a composiciones y métodos para la elaboración de medicamentos con el propósito de tratar el cáncer. En particular, la presente invención está dirigida a métodos para la elaboración de medicamentos que comprenden gemcitabina y un inhibidor de la actividad cinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El cáncer es el nombre genérico utilizado para un amplio rango de tipos de células neoplásicas caracterizadas por un crecimiento incontrolado, falta de diferenciación y capacidad para invadir tejidos locales y producir metástasis. Estas enfermedades neoplásicas pueden afectar, con diferentes grados de prevalencia, a cada uno de los tejidos y órganos del cuerpo . A lo largo de las últimas décadas se han desarrollado una gran cantidad de agentes terapéuticos para el tratamiento de diversos tipos de cáncer. Los tipos más utilizados de agentes antineoplásicos incluyen: agentes alquilantes del DNA (por ejemplo, ciclofosfamida, ifosfamida) , antimetabolitos (por ejemplo, metotrexato, un antagonista del folato, y 5- REF.: 177772 fluorouracilo, un antagonista de la pirimidina) , disgregadores de microtúbulos (por ejemplo, vincristina, vinblastina, paclitaxel) , intercalantes de DNA (por ejemplo, doxorubicina, daunomicina, cisplatino) y terapia hormonal (por ejemplo, tamoxifeno, flutamida) . Según el Instituto Nacional del Cáncer (National Cáncer Institute) , el cáncer de pulmón es la principal causa individual de muertes por cáncer en los Estados Unidos y es responsable de cerca del 30% de las muertes por cáncer en este país. Según la Organización Mundial de la Salud, existen más de un millón doscientos mil casos de cáncer de pulmón y bronquios en todo el mundo cada año, provocando anualmente un número de muertes aproximado de un millón cien mil. El CPNM (cáncer de pulmón no microcítico) es la forma más común de cáncer de pulmón y cubre casi el 80 por ciento de todos los casos . Las opciones de tratamiento para el cáncer de pulmón son la cirugía, la radioterapia y la quimioterapia, tanto solas como en combinación, dependiendo de la forma y el estadio del cáncer. Para el CPNM avanzado, los agentes que han demostrado ser activos incluyen cisplatino, carboplatino, paclitaxel, docetaxel, topotecan, irinotecan, vinorelbina, gemcitabina (por ejemplo gemzar®) y los inhibidores de la actividad cinasa del EGFR, gefitinib y erlotinib. Los regímenes de quimioterapia combinada que contienen cisplatino y carboplatino producen tasas de respuesta objetivas mayores que las logradas con agentes de quimioterapia únicos ( eick, J.K., et al. (1991) J. Clin. Oncol. 9 (7) .1157-1162) . Se ha descrito que el paclitaxel posee actividad como agente único en pacientes en estadio IV, con tasas de respuesta en el rango del 21% al 24% (Murphy W.K., et al. (1993) J. Nati. Cáncer Inst. 85 (5) : 384-388) . Las combinaciones de Paclitaxel han mostrado unas tasas de respuesta relativamente altas, una supervivencia.de un año significativa, y una paliación de los síntomas del cáncer de pulmón (Johnson D.H. , et al. (1996) J. Clin. Oncol. 14 (7) : 2054-2060) . Con un régimen de paclitaxel más carboplatino, las tasas de respuesta están en el rango del 27% al 53% con tasas de supervivencia de un año del 32% al 54% . No obstante, la eficacia de estos tratamientos hace que en la actualidad no se pueda considerar ningún régimen específico como tratamiento estándar. La sobrexpresión de la cinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) , o su ligando TGF-alfa, con frecuencia está asociada con muchos tipos de cáncer, incluyendo el cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer colorrectal y cáncer de cabeza y cuello (Salomón D.S., et al. (1995) Crit. Rev. Oncol. Hematol . 19:183-232; Wells, A. (2000) Signal, 1:4-11), y se cree que contribuye al crecimiento maligno de estos tumores. Se ha encontrado que una mutación por deleción en el gen del EGFR también aumenta la tumorigenicidad celular (Halatsch, M-E. et al. (2000) J.

Neurosurg. 92:297-305; Archer, G.E. et al. (1999) Clin. Cáncer Res. 5:2646-2652). La activación de las rutas de señalización estimuladas por el EGFR promueven múltiples procesos que potencialmente son promotores del cáncer, por ejemplo proliferación, angiogénesis, motilidad e invasión celular, disminución de la apoptosis e inducción de la resistencia a fármacos. El desarrollo de compuestos que directamente inhiban la actividad cinasa del EGFR para utilizarlos como agentes antitumorales, así como de anticuerpos que reduzcan la actividad cinasa del EGFR mediante el bloqueo de la activación del EGFR, son áreas a las que se está dedicando un gran esfuerzo en investigación (de Bono J.S. y Rowinsky, E.K. (2002) Trends in Mol. Medicine 8:S19-S26; Dancey, J. y Sausville, E.A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2:92-313). Muchos estudios han demostrado o descrito que algunos inhibidores de la actividad cinasa del EGFR pueden mejorar la supresión de células tumorales o de neoplasias cuando se utilizan en combinación con otros tipos de agentes o tratamientos antineoplásicos o quimioterapéuticos determinados (por ejemplo Raben, D. et al. (2002) Semin. Oncol. 29:37-46; Herbst, R.S. et al. (2001) Expert Opin. Biol. Ther. 1:719-732; Magne, N et al. (2003) Clin. Can. Res. 9:4735-4732; Magne', N. et al. (2002) British Journal of Cáncer 86:819-827; Torrance, C.J. et al. (2000) Nature Med. 6:1024-1028; Gupta, R.A. y DuBois, R.N. (2000) Nature Med. 6:974-975; Tortora, et al. (2003) Clin. Cáncer Res. 9:1566-1572; Solomon, B. et al (2003) Int. J. Radiat.

Oncol. Biol. Phys. 55:713-723; Krishnan, S. et al. (2003) Frontiers in Bioscience 8, el-13; Huang, S et al. (1999) Cáncer Res. 59:1935-1940; Contessa, J. N. et al. (1999) Clin.

Cáncer Res. 5:405-411; Li, M. et al. Clin. (2002) Cáncer Res. 8:3570-3578; Ciardiello, F. et al. (2003) Clin. Cáncer Res. 9:1546-1556; Ciardiello, F. et al. (2000) Clin. Cáncer Res. 6:3739-3747; Grunwald, V. e Hidalgo, M. (2003) J. Nat. Cáncer Inst. 95:851-867; Seymour L. (2003) Current Opin. Investig.

Drugs 4 (6) : 658-666; K alil, M.Y. et al. (2003) Expert Rev.

Anticancer Ther .3 : 367-380; Bulgaru, A.M. et al. (2003) Expert Rev. Anticancer Ther .3 :269-279; Dancey, J. y Sausville, E.A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2:92-313; Kim, E.S. et al. (2001) Current Opinión Oncol. 13:506-513; Arteaga, C.L. y Johnson, D.H. (2001) Current Opinión Oncol. 13:491-498; Ciardiello, F. et al. (2000) Clin. Cáncer Res. 6:2053-2063; Publicación de Patente N9 : US 2003/0108545; US 2002/0076408; y US 2003/0157104; y Publicación de Patente Internacional Ns : WO 99/60023; WO 01/12227; WO 02/055106; WO 03/088971; WO 01/34574; WO 01/76586; WO 02/05791; y WO 02/089842) . Un fármaco antineoplásico idealmente suprimirá de forma selectiva las células cancerosas, con un elevado índice terapéutico en relación a su toxicidad hacia las células no malignas. También mantendrá su eficacia frente a células malignas, aún tras una exposición prolongada al fármaco. Desafortunadamente, ninguna de las quimioterapias actuales posee tal perfil idílico. En su lugar, la mayoría presenta índices terapéuticos muy bajos. Además, las células cancerosas expuestas a concentraciones ligeramente subletales de un agente quimioterapéutico desarrollan con mucha frecuencia una resistencia a este agente y también, bastante a menudo, una resistencia cruzada a otros agentes antineoplásicos diferentes. Así, existe una necesidad de tratamientos más eficaces frente a la neoplasia y a otros trastornos proliferativos. Las estrategias para aumentar la eficacia terapéutica de los fármacos existentes han implicado hasta el momento cambios en el calendario de su administración, y también el uso de estos en combinación con otros agentes moduladores bioquímicos o antineoplásicos . El tratamiento combinado es bien conocido como un método que puede dar lugar a una mayor eficacia y una disminución de los efectos secundarios relacionados con el uso de la dosis terapéuticamente relevante de cada uno de los agentes individualmente. En algunos casos, la eficacia de la combinación de fármacos es acumulativa (la eficacia de la combinación es aproximadamente igual a la suma de los efectos de cada fármaco por separado) , pero en otros casos el efecto es sinérgico (la eficacia de la combinación es mayor que la suma de los efectos de cada fármaco administrado de forma individual) . No obstante, sigue existiendo una necesidad muy importante de mejorar los tratamientos para el cáncer de pulmón y otros cánceres. Esta invención proporciona un tratamiento combinado frente al cáncer que reduce las dosis necesarias de sus componentes individuales para que sean eficaces, de modo que se disminuyen los efectos secundarios asociados para cada agente, a la vez que se mantiene o incrementa su valor terapéutico. La invención aquí descrita proporciona nuevas combinaciones de fármacos y métodos para utilizar combinaciones de fármacos para el tratamiento del cáncer de pulmón y otros cánceres . SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de tumores o metástasis, que se caracteriza por el uso de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina. Preferentemente, la combinación de cantidades terapéuticamente efectivas de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina está destinada para su administración simultánea o secuencial y con agentes o tratamientos adicionales, o sin ellos, como otros fármacos antineoplásicos o la radioterapia. La invención también incluye una composición farmacéutica que consta de una combinación de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina, a su vez en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. Un ejemplo escogido de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR que puede utilizarse para poner en práctica esta invención es el compuesto erlotinib clorhidrato (también conocido por Tarceva™) . BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figuras 1A-1B: Concentraciones plasmáticas de erlotinib en función del tiempo (Fig. ÍA) Concentraciones plasmáticas dependientes de la dosis (Fig. IB) Correlación entre las concentraciones del fármaco en el tumor y las concentraciones del fármaco en plasma. Se administraron dosis orales diarias de erlotinib de 0; 6.3; 12.5; 25.0; 100.0 y 150.0 mg/kg durante 21 días a ratones con tumores. Veintiocho días después del implante del tumor se recogieron muestras de sangre (del seno retroorbital) y muestras del tumor, 1 y 6 horas después de la administración de la dosis. Se determinaron las concentraciones de erlotinib utilizando LC-MS/MS. Los resultados se expresan como la media ± DE, n=3. Figura 2 : Efecto de erlotinib en el volumen medio del tumor en el modelo de xenoinjerto de CPNM H460a. Se implantaron en ratones células de CPNM H460a. Cuando aparecieron tumores palpables, los animales se aleatorizaron de modo que cada grupo tenía un volumen medio inicial del tumor de 100-150 mm3. Los ratones recibieron dosis diarias de erlotinib de 0; 6.3; 12.5; 25 o 100 mg/kg durante 21 días. El tamaño del tumor se midió 3 veces por semana. Se muestran las medias, n=10. Figura 3: Efecto de erlotinib y gemcitabina, individualmente o en combinación, sobre el volumen medio del tumor en el modelo de xenoinjerto de CPNM H460a. Se implantaron en ratones células de CPNM H460a. Cuando aparecieron tumores palpables, los animales se aleatorizaron de forma que cada grupo tenía un volumen medio inicial del tumor de 10-150 mm3. Los ratones se trataron durante 21 días con un vehículo, solo con erlotinib oral a 25 o 100 mg/kg/día, solo con gemcitabina i.p. a 30 o 120 mg/kg cada 3 días o con erlotinib a 25 mg/kg/día en combinación con gemcitabina a 30 mg/kg cada 3 días. El tamaño del tumor se midió 3 veces por semana. Se muestran las medias, n=3. Figura 4: Efecto de erlotinib y gemcitabina, individualmente y en combinación, sobre el volumen medio del tumor en el modelo de xenoinjerto de CPNM A549. Se implantaron en ratones células de CPNM A549. Cuando aparecieron tumores palpables, los animales se aleatorizaron de forma que cada grupo presentaba un volumen medio inicial del tumor de 100-150 mm3. Los ratones se trataron con vehículo, solo erlotinib oral a 25 o 100 mg/kg/día, solo gemcitabina i.p. a 30 o 120 mg/kg cada 3 días o erlotinib a 25 mg/kg/día en combinación con gemcitabina a 30 mg/kg cada 3 días. El tamaño del tumor se midió 3 veces por semana. Se muestran las medias, n=3. Figura 5: Lesiones dérmicas en ratones tratados con erlotinib. Durante la necropsia, las muestras de piel se fijaron en formaldehido al 10% en solución amortiguadora, se incluyeron en parafina, se realizaron cortes de 5 µm y se tiñeron con hematoxilina y eosina. En los ratones que recibieron erlotinib a 100 mg/kg/día durante 21 días, las lesiones de la piel se caracterizaban por estar extremadamente enrojecidas y escamosas. Histológicamente, las lesiones consistían en una acantosis difusa leve o moderada, hiperqueratosis epidérmica, escarosis focal e infiltración en la dermis de la mayoría de las células implicadas en la inflamación aguda. Las lesiones fueron transitorias y desaparecieron con el tratamiento continuado. Figuras 6A-6B: Fotomicrografías de la tinción inmunohistoquímica en modelos de xenoinjerto de CPNM. Las secciones de tumores de ratones nude se tiñeron con el antígeno Ki67 para detectar proliferación celular en ratones control (fig. 6A) y ratones tratados con erlotinib a 100 mg/kg/día durante 21 días (fig. 6B) . Las áreas oscuras representan tinción con Ki67, que indica actividad proliferativa .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El término «cáncer» en un animal se refiere a la presencia de células que poseen unas características típicas de las células causantes de cáncer, como una proliferación incontrolada, inmortalidad, capacidad de metástasis, crecimiento y tasa de proliferación rápidos y ciertos aspectos morfológicos característicos. A menudo, las células cancerosas se encuentran en forma de tumor, aunque dichas células pueden encontrarse de forma individual en un animal, por ejemplo circulando por el torrente sanguíneo como células independientes como es el caso de las células causantes de leucemia. Un «crecimiento celular anormal», como se usa aquí, a menos que se indique de otro modo, se refiere al crecimiento celular que es independiente de los mecanismos de regulación normales (por ejemplo, pérdida de la inhibición por contacto) . Esto incluye el crecimiento anormal de lo siguiente: (1) células tumorales (tumores) que proliferan por la expresión de una tirosina cinasa mutada o por la sobrexpresión de un receptor de tirosina cinasa; (2) células benignas o malignas de otras enfermedades proliferativas en las que se produce una activación anormal de tirosina cinasas; (4) cualquier tumor que prolifere a causa de los receptores tirosina cinasa; (5) cualquier tumor que prolifere por una activación anormal de serina/treonina cinasas; y (6) células benignas o malignas de otras enfermedades proliferativas en las que se produce una activación anormal de serina/treonina cinasas. El término «tratar» se utiliza aquí, a menos que se indique lo contrario, para referirse a la remisión, alivio, inhibición del progreso y prevención, tanto parcial como total, del crecimiento de tumores, metástasis u otras células causantes de cáncer o neoplasia en un paciente. El término «tratamiento» se utiliza aquí, a menos que se indique lo contrario, para referirse a la acción de tratar. La frase «método de tratamiento» o su equivalente cuando, por ejemplo, se aplica a cáncer, se refiere a un procedimiento o acción que se diseña para reducir o eliminar el número de células cancerosas en un animal, o aliviar los síntomas de un cáncer. Un «método de tratamiento» del cáncer o de otra alteración proliferativa no significa, necesariamente, que las células cancerosas o de otra alteración serán eliminadas, que las células cancerosas o de otra alteración serán reducidas, o que los síntomas del cáncer o de otra alteración serán aliviados. A menudo, un método de tratamiento se llevará a cabo incluso cuando la probabilidad de éxito sea baja, pero en el que, según los antecedentes médicos y la esperanza de vida estimada de un animal, aun así se estima una acción beneficiosa global. El término «agente terapéuticamente efectivo» se refiere a una composición que desencadenará la respuesta médica o biológica en un tejido, sistema, animal o humano, buscada por el investigador, el veterinario, el médico u otro profesional sanitario. El término «método de fabricación de un medicamento» se refiere a la fabricación de un medicamento para su uso en las indicaciones aquí especificadas y, en particular, para su uso frente a tumores, metástasis o cáncer en general. El término se refiere al formato de reivindicación denominado «Swiss-type» para la indicación especificada. El término «cantidad terapéuticamente efectiva» o «cantidad efectiva» se refiere a la cantidad de un compuesto o de una combinación en estudio, que desencadena la respuesta en un tejido, sistema, animal o humano buscada por el investigador, el veterinario, el médico u otro profesional sanitario . Los datos presentados en los ejemplos mostrados más adelante en este documento demuestran que la coadministración de gemcitabina con un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es eficaz en el tratamiento de cánceres avanzados, como el cáncer colorrectal. Por consiguiente, la presente invención proporciona un método de fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de tumores o metástasis en un paciente que se caracteriza por el uso de una combinación de gemcitabina y de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR en cantidades terapéuticamente efectivas . Preferentemente, dicha combinación está destinada para la administración al paciente de manera simultánea o secuencial. En una de las realizaciones, los tumores o las metástasis tratados son los tumores y las metástasis colorrectales . Preferentemente, dichas sustancias están destinadas para su administración al paciente de manera simultánea o secuencial. Por tanto, la presente invención además proporciona un método de fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores o metástasis, que se caracteriza por el uso de una combinación de gemcitabina y de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR en cantidades terapéuticamente efectivas, y que está destinado para la administración a un paciente de forma simultánea o secuencial. Además, se utilizan preferiblemente uno o más agentes citotóxicos, quimioterapéuticos o antineoplásicos o compuestos que potencian los efectos de tales compuestos. En el contexto de esta invención, otros agentes citotóxicos, quimioterapéuticos o antineoplásicos adicionales o compuestos que potencian los efectos de tales compuestos, incluyen, por ejemplo: agentes alquilantes o agentes con una acción alquilante, como la ciclofosfamida (CTX; por ejemplo cytoxan®) , clorambucil (CHL; por ejemplo leukeran®) , cisplatino (CisP; por ejemplo platinol®) busulfán (por ejemplo mueran®) , melfalán, carmustina (BCNU) , estreptozotocina, trietilenomelamina (TEM) , mitomicina C y similares; antimetabolitos, como el metotrexato (MTX) , etopósido (VP16; por ejemplo vepesid®) , 6-mercaptopurina (6MP) , 6-tioguanina (6TG) , citarabina (Ara-C), 5-fluorouracilo (5-FU) , capecitabina (por ejemplo Xeloda®) , dacarbazina (DTIC) y similares; antibióticos, como la actinomicina D, doxorubicina (DXR; por ejemplo adriamicina®) , daunorubicina (daunomicina) , bleomicina, mitramicina y similares; alcaloides como los alcaloides de la vinca, como la vincristina (VCR) , vinblastina y similares; y otros agentes antitumorales, como el paclitaxel (por ejemplo taxol®) y derivados de paclitaxel, los agentes citoestáticos, glucocorticoides como la dexametasona (DEX; por ejemplo decadron®) y corticosteroides como la prednisona, los inhibidores enzimáticos de nucleósidos como la hidroxiurea, enzimas hidrolíticas de aminoácidos como la asparaginasa, leucovorina, ácido folínico y otros derivados de ácido folínico, y, diversos agentes antitumorales similares. Los siguientes agentes también pueden utilizarse como agentes adicionales: amifostina (por ejemplo ethyol®), dactinomicina, mecloretamina (mostaza de nitrógeno) , estreptozocina, ciclofosfamida, lornustina (CCNU) , doxorubicina liposomal (por ejemplo doxil®) , daunorubicina liposomal (por ejemplo daunoxome®) , procarbazina, mitomicina, docetaxel (por ejemplo taxotere®) , aldesleucina, carboplatino, cladribina, camptotecina, CPT 11 (irinotecan) , 10-hidroxi 7-etil-camptotecina (SN38) , floxuridina, fludarabina, ifosfamida, idarubicina, mesna, interferón alfa, interferón beta, mitoxantrona, topotecan, leuprolida, megestrol, melfalán, mercaptopurina, plicamicina, mitotano, pegaspargasa, pentostatina, pipobromán, plicamicina, tamoxifen, tenipósido, testolactona, tioguanina, tiotepa, mostaza de uracilo, vinorelbina, clorambucilo. También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores o metástasis tumorales, que se caracteriza por que se utiliza una cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de inhibidor de la actividad cinasa de EGFR y gemcitabina y está destinado a la administración a un paciente de forma simultánea o secuencial, y en el que, además, se utilizan uno o más agentes antihormonales. Tal como se utiliza aquí, el término «agente antihormonal» incluye compuestos naturales o sintéticos, orgánicos o peptídicos que actúan para regular o inhibir la acción de hormonas sobre los tumores . Los agentes antihormonales incluyen, por ejemplo: antagonistas de receptores esteroideos, antiestrógenos como el tamoxifeno, raloxifeno, 4 (5) -imidazoles inhibidores de aromatasa, otros inhibidores de aromatasa, 42-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY 117018, onapristona y toremifeno (por ejemplo Fareston®) ; antiandrógenos como la flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolido y goserelina; y sales farmacéuticamente aceptables, ácidos o derivados de cualquiera de los compuestos anteriores; agonistas o antagonistas de hormonas glicoproteicas como la hormona foliculoestimulante (FSH) , hormona estimuladora de la tiroides (TSH) , la hormona luteinizante (LH) y LHRH (hormona liberadora de la hormona luteinizante) ; el acetato de goserelina, antagonista de la LHRH, comercializado como Zoladex® (AstraZeneca) ; D-alaninamida N-acetil-3- (2-naftalenil) -D-alanil-4-cloro-D-fenilalanil-3- (3-piridinil) -D-alanil-L-seril-N6- (3-piridinilcarbonil) -L-lisil-N6- (3-piridinilcarbonil) -D-lisil-L-leucil-N6- (1-metiletil) -L-lisil-L-prolina (por ejemplo, Antide®, Ares-Serono) , otro antagonista de la LHRH; acetato de ganirelix, también antagonista de la LHRH; los antiandrógenos esteroideos acetato de ciproterona (CPA) y acetato de megestrol, comercializados como Megace® (Bristol-Myers Oncology) ; el antiandrógeno no esteroideo flutamida (2-metil-N- [4, 20-nitro-3- (trifluorometil) fenilpropanamida) , comercializado como Eulexin® (Schering Corp.); el antiandrógeno no esteroideo nilutamida, (5, 5-dimetil-3- [4-nitro-3- (trifluorometil-4 ' -nitrofenil) -4, 4-dimetil-imidazolidina-diona) ; y antagonistas de otros receptores no permisivos, como los antagonistas para RAR, RXR, TR, VDR y similares.

El uso de los agentes citotóxicos y otros agentes antineoplásicos descritos anteriormente en regímenes quimioterapéuticos, está en general bien caracterizada en el campo de la terapia tumoral, y su uso en la presente se sitúa bajo las mismas consideraciones de monitorización de la tolerancia y efectividad y de control de las vías de administración y de las dosis, con algunos ajustes. Por ejemplo, las dosis actuales de los agentes citotóxicos pueden variar dependiendo de la respuesta de las células cultivadas del paciente determinada por el uso de métodos de histocultivo . En general, la dosis se reducirá en comparación con la cantidad utilizada en ausencia de otros agentes adicionales . Las dosis habituales de un agente citotóxico efectivo pueden variar según los rangos recomendados por el fabricante, y cuando se indique mediante las respuestas in vi tro o respuestas en modelos animales, puede reducirse hasta en un orden de magnitud de concentración o cantidad. Así, la dosis actual dependerá del juicio del médico, la enfermedad del paciente y la efectividad del método terapéutico basado en la respuesta in vi tro de las células primarias malignas cultivadas o muestra de tejido histocultivado, o la respuesta observada en los modelos animales apropiados . Los compuestos preferidos de los anteriores agentes citotóxicos, quimioterapéuticos o antineoplásicos adicionales, en el contexto de esta invención, son cisplatino y carboplatino. También es más preferido un método para fabricar un medicamento para el tratamiento de tumores o metástasis tumoral, que se caracteriza por que se utiliza una cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina y está destinado para la administración a un paciente de forma simultánea o secuencial, en que además, se utilizan uno o más inhibidores de la angiogenesis . Los agentes antiangiogénicos incluyen, por ejemplo: inhibidores de VEGFR, como SU-5416 y SU-6668 (Sugen Inc. de South San Francisco, Calif., USA), o como se ha descrito en, por ejemplo Solicitud Internacional núm. WO 99/24440, WO 99/62890, WO 95/21613, WO 99/61422, WO 98/50356, WO 99/10349, WO 97/32856, WO 97/22596, WO 98/54093, WO 98/02438, WO 99/16755 y WO 98/02437, y Patentes Estadounidenses núm. 5 883 113, 5 886 020, 5 792 783, 5 834 504 y 6 235 764; inhibidores de VEGF como IM862 (Cytran Inc. de Kirkland, Wash., USA); angiozima, una ribozima sintética de Ribozyme (Boulder, Coló.); y anticuerpos contra VEGF, como bevacizumab (por ejemplo Avastin™, Genentech, South San Francisco, CA) , un anticuerpo recombinante humanizado contra VEGF; antagonistas del receptor de integrina y antagonistas de integrina, como las integrinas avß3/ avß5 y vß6, y subtipos de las mismas, por ejemplo cilengitida (EMD 121974) , o los anticuerpos anti-integrinas, como por ejemplo anticuerpos humanizados específicos avß3 (por ejemplo Vitaxin®) ; factores como IFN-alfa (Patentes U.S. núm. 41530,901, 4,503,035, y 5,231,176); angiostatina y fragmentos de plasminógeno (por ejemplo kringle 1-4, kringle 5, kringle 1-3 (O'Reilly, M. S. et al. (1994) Cell 79:315-328; Cao et al. (1996) J. Biol. Chem. 271: 29461-29467; Cao et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:22924-22928); endostatina (O'Reilly, M. S. et al. (1997) Cell 88:277; y la Publicación de Patente Internacional núm. WO 97/15666); trombospondina (TSP-1; Frazier, (1991) Curr. Opin. Cell Biol. 3:792); factor plaquetario 4 (PF4) ; inhibidores de urocinasa/activadores de plasminógeno; antagonistas del receptor de urocinasa; heparinasas; análogos de fumagilina como TNP-4701; suramina y análogos de suramina; esteroides angiostáticos; antagonistas de bFGF; antagonistas de flk-1 y flt-1; agentes antiangiogénicos como los inhibidores de MMP-2 (metaloproteinasa de matriz 2) e inhibidores de MMP-9 (metaloproteinasa de matriz 9). Ejemplos de inhibidores de metaloproteinasa útiles se describen en la Publicación de Patente Internacional núm. WO 96/33172, WO 96/27583, WO 98/07697, WO 98/03516, WO 98/34918, WO 98/34915, WO 98/33768, WO 98/30566, WO 90/05719, WO 99/52910, WO 99/52889, WO 99/29667 y WO 99/07675, las Publicaciones de Patente Europea núm. 818 442, 780 386, 1 004 578, 606 046 y 931 788; la Publicación de Patente Británica núm. 9912961, y las Patentes Estadounidenses núm. 5 863 949 y 5 861 510. Los inhibidores de MMP-2 y MMP-9 preferidos son aquellos que no presentan actividad inhibidora de MMP-1 o la presentan baja. Más preferidos, son aquellos que inhiben selectivamente MMP-2 y/o MMP-9 en relación al resto de metaloproteinasas de matriz (es decir, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12 y MMP-13) . También es más preferido un método para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores o metástasis de tumores, caracterizado en que se utiliza una cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina y está destinada para la administración al paciente de forma simultánea o secuencial, en que además, se utilizan uno o más agentes estimulantes de la apoptosis o agentes tumorales proapoptóticos . También es más preferido un método para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores o metástasis de tumores, caracterizado en que se utiliza una cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina y está destinada para la administración al paciente de forma simultánea o secuencial, en que además, se utilizan uno o más inhibidores de la transducción de señal .

Los inhibidores de la transducción de señal incluyen, por ejemplo: inhibidores del receptor de erbB2 , como las moléculas orgánicas, o anticuerpos que se unen al receptor de erbB2 , por ejemplo, trastuzumab (por ejemplo Herceptin®) ; inhibidores de otras proteínas tirosina cinasas, por ejemplo imitinib (por ejemplo Gleevec®) ; inhibidores de ras; inhibidores de raf; inhibidores de MEK; inhibidores de mTOR; inhibidores de cinasas dependientes de ciclina; inhibidores de proteínas cinasas C; e inhibidores de PDK-1 (véase Dancey, J. y Sausville, E.A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2:92-313, para una descripción de varios ejemplos de tales inhibidores, y su uso en ensayos clínicos para el tratamiento del cáncer) . Los inhibidores del receptor de ErbB2 incluyen, por ejemplo: inhibidores del receptor de ErbB2 , como GW-282974 (Glaxo Wellcome pie) , anticuerpos monoclonales como AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc. de The Woodlands, Tex. , USA), e inhibidores de erbB2 como los descritos en la Publicación Internacional núm. WO 98/02434, WO 99/35146, WO 99/35132, WO 98/02437, WO 97/13760, y WO 95/19970, y las Patentes Estadounidenses núm. 5 587 458, 5 877 305, 6 465 449 y 6 541 481. También es más preferido un método para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores o metástasis de tumores, caracterizado por que se utiliza una cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina y está destinada a la administración al paciente de forma simultánea o secuencial, en el que además, se utiliza un anticuerpo anti-HER2 o un fragmento inmunoterapéuticamente activo del mismo. También es más preferido un método para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores o metástasis de tumores, caracterizado en que se utiliza una cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina, y está destinado a la administración al paciente de forma simultánea o secuencial, y en el que además se utilizan uno o más agentes antiproliferativos adicionales. Agentes antiproliferativos adicionales incluyen, por ejemplo: inhibidores de la enzima farnesil proteintransferasa e inhibidores del receptor tirosina del PDGFR, que incluye los compuestos descritos y reivindicados en las Patentes Estadounidenses Núm. 6 080 769, 6 194 438, 6 258 824, 6 586 447, 6 071 935, 6 495 564, 6 150 377, 6 596 735 y 6 479 513, y la Publicación de Patente Internacional WO 01/40217. También es más preferido un método para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores o metástasis de tumores, caracterizado en que se utiliza una cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina y está destinada a la administración al paciente de forma simultánea o secuencial, en el que además se utiliza un inhibidor de COX II (ciclooxigenasa II) . Ejemplos de inhibidores de COX-II útiles incluyen alecoxib (por ejemplo Celebrex™) , valdecoxib, y rofecoxib. También es más preferido un método para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores o metástasis de tumores, caracterizado en que se utiliza una cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina y está destinada a la administración al paciente de forma simultánea o secuencial, en el que además se utiliza un radiofármaco . En lugar de un radiofármaco, o adicionalmente, se puede llevar a cabo el tratamiento con radiación. La fuente de irradiación puede ser tanto externa como interna al paciente a tratar. Cuando la fuente es externa al paciente, el tratamiento se conoce como radioterapia con haz externo (del inglés EBRT) . Cuando la fuente de radiación es interna al paciente, el tratamiento se denomina braquiterapia (BT) . Los átomos radioactivos para su uso en el contexto de esta invención pueden seleccionarse del grupo que incluye, pero no se limita a, radio, cesio-137, iridio-192, americio- 241, oro-198, cobalto-57, cobre-67, tecnecio-99, yodo-123, yodo -131 e indio-111. cuando el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR de acuerdo con esta invención es un anticuerpo, es posible marcar el anticuerpo con tales isótopos radioactivos. La radioterapia es un tratamiento estándar para controlar los tumores o las metástasis tumorales no reseccionables o inoperables. Se ha observado una mejora en los resultados cuando la radioterapia se ha combinado con quimioterapia. La radioterapia se basa en el principio que la radiación a altas dosis liberadas a un área diana, resultará en la muerte de las células reproductoras en ambos tejidos tumorales y normales . El régimen de dosis de la radiación se define generalmente en términos de dosis de radiación absorbida (Gy) , tiempo y fraccionamiento, y debe definirse cuidadosamente por el oncólogo. La cantidad de radiación que un paciente puede recibir dependerá de varias consideraciones, pero las dos más importantes son la localización del tumor en relación a otras estructuras críticas u órganos del cuerpo, y la extensión que ha alcanzado la propagación del tumor. Un ciclo habitual de tratamiento para un paciente sometido a radioterapia es un régimen de tratamiento a lo largo de un periodo de 1 a 6 semanas, con una dosis total de entre 10 y 80 Gy administrados al paciente en una fracción única diaria de alrededor de 1.8 a 2.0 Gy, 5 días a la semana. En una realización preferida de esta invención existe sinergia cuando se tratan los tumores de pacientes humanos con el tratamiento combinado de la invención y con radiación. En otras palabras, la inhibición del crecimiento tumoral por medio de los agentes que comprenden la combinación de la invención se ve potenciada cuando se combina con radiación, o de forma opcional con agentes quimioterapéuticos o antineoplásicos adicionales. Los parámetros de las radioterapias adyuvantes se encuentran, por ejemplo, en la Publicación de Patente Internacional WO 99/60023. Otro método más preferido es uno para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de tumores o metástasis tumorales, que se caracteriza por el uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina pensada para la administración simultánea o secuencial al paciente, y en el que, además, se utilizan uno o más agentes con capacidad de potenciar las respuestas inmunitarias antitumorales . Los agentes con capacidad de potenciar las respuestas inmunitarias antitumorales incluyen, por ejemplo, los siguientes: anticuerpos (por ejemplo MDX-CTLA4) frente a CTLA4 (antígeno 4 asociado a los linfocitos citotóxicos) , y otros agentes con capacidad de bloquear CTLA4. Los anticuerpos específicos para CTLA4 que se pueden utilizar en la presente invención incluyen los descritos en la Patente Estadounidense núm. 6,682,736. También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento que reduzca los efectos secundarios causados por el tratamiento de tumores o metástasis tumorales, que se caracteriza por el uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina, destinada a la administración simultánea o secuencial al paciente en cantidades que sean efectivas para producir un efecto antitumoral aditivo, superaditivo o sinérgico, y que sean efectivas para inhibir el crecimiento del tumor. La presente invención también proporciona un método para el tratamiento del cáncer, que comprende la administración a un sujeto que necesite dicho tratamiento de (i) una primera cantidad efectiva de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad efectiva de gemcitabina . La presente invención también proporciona un método para el tratamiento del cáncer, que comprende la administración a un sujeto que necesite dicho tratamiento de (i) una primera cantidad subterapéutica de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad subterapéutica de gemcitabina.

De forma adicional, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que contiene un inhibidor del EGFR y gemcitabina en un portador farmacéuticamente aceptable. La presente invención también proporciona una composición farmacéutica, en particular destinada al tratamiento del cáncer, que contiene (i) una primera cantidad efectiva de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad efectiva de gemcitabina. Esta composición contiene de forma opcional portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables . La presente invención también proporciona una composición farmacéutica, en particular destinada al tratamiento del cáncer, que contiene (i) una primera cantidad subterapéutica de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad subterapéutica de gemcitabina. Esta composición contiene de forma opcional portadores y/o excipientes farmacéuticamente aceptables. Preferiblemente, el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es erlotinib. Tal como se utiliza aquí, el término «paciente» se refiere preferiblemente a una persona que necesita un tratamiento con un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR para cualquier finalidad, y más preferiblemente a una persona que necesita este tratamiento para tratar el cáncer o un trastorno o lesión precanceroso. Sin embargo, el término «paciente» también puede referirse a animales no humanos, preferiblemente mamíferos como perros, gatos, caballos, vacas, cerdos, ovejas o primates no humanos, entre otros, que necesitan un tratamiento con un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR. En una modalidad preferida, el paciente es una persona que necesita tratamiento para el cáncer o para una lesión o trastorno precanceroso. Preferiblemente, se trata de cualquier cáncer tratable, de forma tanto parcial como completa, mediatne la adminstración de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR. El cáncer puede ser, por ejemplo: cáncer de pulmón, cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) , cáncer de pulmón de células bronquioloalveolares, cáncer óseo, cáncer pancreático, cáncer de piel, cáncer de cabeza y cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de las trompas de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cérvix, carcinoma vaginal, carcinoma vulvar, enfermedad de Hodgkin, cáncer de esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de tiroides, cáncer de paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, cáncer de riñon o de uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de pelvis renal, mesotelioma, cáncer hepatocelular, cáncer biliar, leucemia crónica o aguda, linfomas linfocíticos, neoplasmas del sistema nervioso central (SNC) , tumores en la columna vertebral, glioma del tronco encefálico, glioblastoma multiforme, astrocitomas, schwannomas, ependimomas, meduloblastomas, meningiomas, carcinomas de células escamosas, adenoma hipofisario, incluyendo versiones refractarias de cualquiera de los cánceres mencionados o una combinación de los mismos. El trastorno o la lesión precancerosa incluye, por ejemplo, el grupo formado por: leucoplasia oral, queratosis actínica (queratosis solar) , pólipos precancerosos de colon o recto, displasia epitelial gástrica, displasia adenomatosa, síndrome de cáncer de colon hereditario no asociado a poliposis (CCHNP) , esófago de Barrett, displasia vesicular y alteraciones cervicales precancerosas . En este caso se prefiere que el cáncer sea cáncer de colon y, se prefiere de forma especial que sea cáncer colorrectal. También se prefeire que sea cáncer de pulmón y, en especial, cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) . En el caso de la presente invención, «co-administrar» y «co-administración de» gemcitabina con un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR (ambos componentes a partir de ahora denominados los «dos agentes activos») hacen referencia a cualquier administración de los dos agentes activos, de forma separada o conjunta, en la que los dos agentes activos son administrados dentro de un régimen apropiado de dosis para obtener los efectos beneficiosos del tratamiento combinado. Por lo tanto, los dos agentes activos pueden administrarse como parte de la misma composición farmacéutica o en composiciones farmacéuticas separadas. La administración de gemcitabina puede ser previa o posterior a la administración del inhibidor de la actividad cinasa del EGFR, a la vez que ésta, o en cualquier combinación de estas tres formas . En los casos en que el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es administrado al paciente en intervalos repetidos, por ejemplo durante un ciclo estándar de tratamiento, la gemcitabina puede administrarse de forma previa, a la vez o de forma posterior a cada administración del inhibidor de la actividad cinasa del EGFR, o en alguna combinación de las mismas, o a intervalos diferentes en relación con el tratamiento con el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR, o en una dosis única previa a, en cualquier momento durante o posteriormente al ciclo de tratamiento con el inhibidor de la actividad cinasa EGFR. El inhibidor de la actividad cinasa del EGFR se administrará al paciente de forma característica en un régimen de dosis que proporcione el tratamiento más efectivo del cáncer (desde las dos perspectivas de eficacia y seguridad) por el que se está tratando al paciente, tal como se conoce en la materia y como se describe, por ejemplo, en la Publicación de Patente Internacional núm. WO 01/34574. Al llevar a cabo el método de tratamiento de la presente invención, el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR puede administrarse de cualquier forma efectiva conocida en el ámbito, como vía oral, tópica, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intrarticular, subcutánea, intranasal, intraocular, vaginal, rectal o intradérmica; dependiendo del tipo de cáncer a tratar, del tipo de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR utilizado (por ejemplo, molécula pequeña, anticuerpo, RNAi o constructo antisentido) y del juicio médico del profesional sanitario que lo prescribe basándose en, por ejemplo, los resultados de estudios clínicos publicados. La cantidad de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR administrado y la pauta de administración del inhibidor de la actividad cinasa del EGFR dependerá del tipo (especie, sexo, edad, peso, etc.) de paciente y del trastorno del paciente que está siendo tratado, de la gravedad de la enfermedad o trastorno que está siendo tratado y de la vía de administración. Por ejemplo, pueden administrarse moléculas pequeñas inhibidoras de la actividad cinasa el EGFR a pacientes a dosis de 0,001 a 100 mg/kg de peso corporal por día o semana en dosis únicas o divididas, o mediante infusión continua (véase, por ejemplo, Publicación de Patente Internacional núm. WO 01/34574) . En particular, se puede administrar erlotinib HCl en pacientes a dosis que oscilan entre 5 y 200 mg por día, o entre 100 y 1600 mg por semana, en una dosis única o dividida, o mediante infusión continua. Una dosis preferida es 150 mg/día. Se puede administrar un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR basado en anticuerpos, RNAi o constructos de tipo ribozima en pacientes a dosis que oscilan entre 0,1 y 100 mg/kg de peso corporal por día o por semana en una dosis única o dividida, o mediante infusión continua. En algunos casos, niveles de dosificación por debajo del límite inferior de los intervalos mencionados pueden resultar más adecuados, mientras que, en otros casos, deben utilizarse dosis todavía mayores sin causar efectos adversos dañinos, siempre y cuando dichas dosis mayores se dividan primero en varias dosis más pequeñas para su administración a lo largo del día. Los inhibidores de la actividad cinasa del EGFR y la gemcitabina pueden administrarse de forma separada o a la vez por la misma vía de administración o por vías distintas y en una amplia variedad de formas de dosificación distintas. Por ejemplo, es preferible la administración del inhibidor de la actividad cinasa del EGFR por vía oral o parenteral, mientras que es preferible la administración de la gemcitabina por vía parenteral . Cuando el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es erlotinib HCl (Tarceva™) se prefiere la administración oral. El inhibidor de la actividad cinasa del EGFR se puede administrar con diversos portadores inertes farmacéuticamente aceptables en forma de comprimidos, cápsulas, pastillas romboidales, troches, grageas, polvos, espráis, cremas, ungüentos, supositorios, gelatinas, geles, pastas, lociones, pomadas, elixires, jarabes y similares. La administración de dichas formas farmacéuticas puede llevarse a cabo en dosis únicas o múltiples. Entre los portadores se encuentran diluyentes sólidos o sustancias de relleno, medios acuosos estériles y diversos disolventes orgánicos no tóxicos. Las composiciones farmacéuticas de administración oral pueden endulzarse y/o aromatizarse apropiadamente. El inhibidor de la actividad cinasa del EGFR se puede administrar con diversos portadores inertes farmacéuticamente aceptables en forma de comprimidos, cápsulas, pastillas romboidales, troches, grageas, polvos, espráis, cremas, ungüentos, supositorios, gelatinas, geles, pastas, lociones, pomadas, elixires, jarabes y similares. La administración de dichas formas farmacéuticas puede llevarse a cabo en dosis únicas o múltiples. Entre los portadores se encuentran diluyentes sólidos o sustancias de relleno, medios acuosos estériles y diversos disolventes orgánicos no tóxicos, etc. Todas las formulaciones que constan de un inhibidor proteínico de la actividad cinasa del EGFR se deben seleccionar de manera que se evite la desnaturalización o degradación y la pérdida de la actividad biológica del inhibidor . Se conocen en el ámbito los métodos de preparación de composiciones farmacéuticas que constan de un inhibidor de la actividad cinasa de EGFR y se han descrito, por ejemplo en la Publicación de Patente Internacional núm. WO 01/34574. También se conocen bien en el ámbito los métodos de preparación de composiciones farmacéuticas que contienen gemcitabina. En vista de lo que se ha comentado en la presente invención, los métodos de preparación de una composición farmacéutica que consta de un inhibidor de la actividad cinasa de EGFR y gemcitabina serán evidentes a partir de las publicaciones citadas antes y de otras referencias conocidas, como Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 18th edición (1990) . En el caso de la administración oral de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR, se combinan comprimidos que contienen uno de los principios activos o ambos con cualquier excipiente, por ejemplo, celulosa microcristalina, citrato sódico, carbonato calcico, fosfato dicálcico y glicina, junto con diversos desintegrantes como el almidón (preferiblemente, almidón de maíz, patata o tapioca), ácido algínico y determinados silicatos complejos, junto con aglutinantes como la pirrolidona de polivinilo, la sacarosa, la gelatina y la acacia. Adicionalmente, los agentes lubricantes como el estearato de magnesio, el lauril sulfato sódico y el talco a menudo son muy útiles para la formación del comprimido. También se pueden utilizar composiciones sólidas de un tipo similar como relleno en cápsulas de gelatina; entre los materiales preferidos con relación a esto también incluye lactosa o azúcar de la leche, así como polietilenglicol de elevado peso molecular. Cuando se prefieren suspensiones acuosas o elixires para su administración oral, el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR puede combinarse con diversos agentes endulzantes o aromatizantes, sustancias colorantes o colorantes y, si se desea, también con agentes emulsionantes o de suspensión, junto con diluyentes como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y diversas combinaciones de los mismos . Para la administración parenteral de uno de los agentes o de ambos, se pueden utilizar soluciones en aceite de sésamo o cacahuete o en solución acuosa de propilenglicol, así como, soluciones acuosas estériles que constan del principio activo o de la correspondiente sal soluble en agua del mismo. Es preferible que dichas soluciones acuosas estériles estén adecuadamente tamponadas y, también es preferible que sean isotónicas, por ejemplo, con la cantidad de sal o glucosa suficiente. Estas soluciones acuosas en particular son especialmente apropiadas para su administración mediante inyección intramuscular, subcutánea e intraperitoneal. Las soluciones oleosas son apropiadas para la inyección por vía intrarticular, intramuscular y subcutánea. La preparación de todas estas soluciones en condiciones estériles se consigue fácilmente mediante procedimientos farmacéuticos estándar bien conocidos por los expertos en la materia. Cualquier formulación parenteral seleccionada para la administración de inhibidores proteínicos de la actividad cinasa del EGFR deben seleccionarse de manera que se evite la desnaturalización y la pérdida de actividad biológica del inhibidor. Adicionalmente, es posible administrar por vía tópica uno o ambos de los principios activos, a través de, por ejemplo, cremas, lociones, gelatinas, geles, pastas, pomadas, ungüentos y similares, de acuerdo con procedimientos farmacéuticos estándar. Por ejemplo, se puede preparar una formulación tópica que contenga tanto un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR como gemcitabina en una concentración que oscile entre 0.1% (w/v) y 5% (w/v) . Cuando se utiliza con fines veterinarios, los principios activos se pueden administrar en animales de forma separada o a la vez utilizando cualquiera de las formas y de las vías de administración descritas anteriormente. En una realización preferida, el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR se administra en forma de cápsula, bolo, comprimido, líquido para administración oral, inyección o implante. Como alternativa, el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR se puede administrar con la comida y, con ese objetivo, se puede preparar un aditivo concentrado para el alimento o una premezcla para un animal normal. La gemcitabina se administra, preferentemente, de forma oral con pistola dosificadora, mediante inyección o como implante. Dichas formulaciones se preparan de forma convencional de acuerdo con procedimientos veterinarios estándar. La presente invención proporciona un equipo que consta de un envase único que contiene un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina. La presente invención además proporciona un primer envase que consta de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y un segundo envase que contiene gemcitabina. En una realización preferida, el equipo de envases puede incluir además un portador farmacéuticamente aceptable. Además, el equipo puede incluir un diluyente estéril, que se almacena preferiblemente en un envase adicional separado. El equipo además incluye un documento anexo adicional con las instrucciones impresas para dirigir el uso del tratamiento combinado como un método para el tratamiento del cáncer. Tal como se utiliza aquí, el término «inhibidor de la actividad cinasa del EGFR» se refiere a cualquier inhibidor de la actividad cinasa del EGFR que se conozca actualmente en el ámbito o que se identifique en el futuro e incluye cualquier entidad química que, tras su administración al paciente, produce la inhibición de la actividad biológica asociada a la activación del receptor EGF en el paciente, incluyendo los efectos biológicos derivados de la unión del receptor EGF a su ligando natural. Dichos inhibidores de la actividad cinasa del EGFR incluyen cualquier agente que pueda bloquear la activación de EGFR o cualquier de los efectos biológicos derivados de su activación que son importantes en el tratamiento del cáncer en un paciente. Dicho inhibidor puede actuar mediante la unión directa al dominio intracelular y la inhibición de su actividad cinasa. Alternativamente, dicho inhibidor puede actuar ocupando el sitio de unión del ligando o una porción del mismo en el receptor EGFR, de ese modo el receptor resulta inaccesible a su ligando natural y su actividad biológica se ve reducida o impedida. Alternativamente, dicho inhibidor puede actuar modulando la dimerización de los polipéptidos EGFR o la interacción del polipéptido EGFR con otras proteínas, estimulando la ubiquitinización y la degradación endocítica del EGFR. Entre los inhibidores de la actividad cinasa del EGFR se encuentran, pero no son los únicos, inhibidores de bajo peso molecular, anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, constructos antisentido, inhibidores pequeños del RNA [es decir, RNA interferencia mediante dsRNA (RNA de doble cadena, del inglés double stranded) ; RNAi] y ribozimas. En una realización preferida, el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es una pequeña molécula orgánica o un anticuerpo que se une específicamente al EGFR humano. Los inhibidores de la cinasa EGFR que incluyen, por ejemplo, inhibidores quinazolina de la cinasa del EGFR, inhibidores piridopirimidina de la cinasa del EGFR, inhibidores pirimidopirimidina de la cinasa del EGFR, inhibidores pirrolpirimidina de la cinasa del EGFR, inhibidores pirazolopirimidina de la cinasa del EGFR, inhibidores fenilaminopirimidina de la cinasa del EGFR, inhibidores oxindol de la cinasa del EGFR, inhibidores indolocarbazol de la cinasa del EGFR, inhibidores ftalazina de la cinasa del EGFR, inhibidores quinalona de la cinasa del EGFR, inhibidores tirfostin de la cinasa del EGFR, los cuales han sido descritos en las siguientes publicaciones de patentes y todas las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de dichos inhibidores de la actividad cinasa del EGFR: Publicación de Patente Internacional núm WO 96/33980, WO 96/30347, WO 97/30034, WO 97/30044, WO 97/38994, WO 97/49688, WO 98/02434, WO 97/38983, WO 95/19774, WO 95/19970, WO 97/13771, WO 98/02437, WO 98/02438, WO 97/32881, WO 98/33798, WO 97/32880, WO 97/3288, WO 97/02266, WO 97/27199, WO 98/07726, WO 97/34895, WO 96/31510, WO 98/14449, WO 98/14450, WO 98/14451, WO 95/09847, WO 97/19065, WO 98/17662, WO 99/35146, WO 99/35132, WO 99/07701, y WO 92/20642; Solicitud de Patente Europea núm. EP 520722, EP 566226, EP 787772, EP 837063 y EP 682027; Patente U.S. núm. 5,747,498, 5,789,427, 5,650,415, y 5,656,643; y Solicitud de Patente Alemana núm. DE 19629652. Ejemplos adicionales no limitados a inhibidores de la actividad cinasa de EGFR de bajo peso molecular se encuentran cualquiera de los inhibidores de la actividad cinasa descritos en Traxler, P., 1998, Exp. Opin. Ther. Patents 8 (12) .1599-1625. Ejemplos específicos preferidos de inhibidores de la actividad cinasa de EGFR de bajo peso molecular que se pueden utilizar de acuerdo con la presente invención incluyen [6,7-bis (2-metoxietoxi) -4-quinazolin-4-il] - (3-etinilfenil) amina (también conocida como OSI-774, erlotinib o Tarceva™ (erlotinib HCl) ; OSI Pharmaceuticals/Genentech/Roche) (Pat U.S. núm. 5,747,498; Publicación de Patente Internacional núm. WO 01/34574, y Moyer, J.D. et al. (1997) Cáncer Res. 57:4838-4848); CI-1033 (conocida anteriormene como PD183805; Pfizer) (Sherwood et al., 1999, Proc. Am. Assoc. Cáncer Res. 40:723); PD-158780 (Pfizer); AG-1478 (University of California); CGP-59326 (Novartis); PKI-166 (Novartis); EKB-569 (Wyeth) ; GW-2016 (también conocida como GW-572016 o lapatinib ditosilato ; GSK) ; y gefitinib (también conocido como ZD1839 o Iressa™; Astrazeneca) (Woodburn et al., 1997, Proc. Am. Assoc . Cáncer Res. 38:633). Un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR de bajo peso molecular especialmente escogido que se puede utilizar de acuerdo con la presente invención es [6, 7-bis (2-metoxietoxi) -4-quinazolin-4-il] - (3-etinilfenil) amina (es decir, erlotinib) , su clorhidrato (es decir, erlotinib clorhidrato, Tarceva™) , u otras sales (por ejemplo erlotinib mesilato) . Entre los inhibidores de la actividad cinasa del EGFR basados en anticuerpos se encuentra cualquier anticuerpo anti-EGFR o fragmento de anticuerpo que pueda bloquear parcial o totalmente la activación de EGFR por su ligando natural. Ejemplo de inhibidores de la actividad cinasa del EGFR basados en anticuerpos, aunque no se limitan a estos, son los que se describen en Modj tahedi , H., et al . , 1993, Br . J. Cáncer 67:247-253; Teramoto, T., et al., 1996, Cáncer 77:639-645; Goldstein et al., 1995, Clin. Cáncer Res. 1:1311-1318; Huang, S. M. , et al., 1999, Cáncer Res. 15 : 59 (8) : 1935-40; y Yang, X., et al . , 1999, Cáncer Res. 59:1236-1243. Así, el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR puede ser el anticuerpo monoclonal Mab E7.6.3 (Yang, X.D. et al. (1999) Cáncer Res. 59:1236-43), o Mab C225 (Acceso ATCC núm. HB-8508) , o un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que posea la especificidad de unión del mismo. Entre los anticuerpos monoclonales apropiados como inhibidores de la actividad cinasa del EGFR se encuentran, aunque no están limitados a ellos, IMC-C225 (también conocido como cetuximab o Erbitux™; Imclone Systems), ABX-EGF (Abgenix) , EMD 72000 (Merck KgaA, Darmstadt) , RH3 (York Medical Bioscience Inc.), y MDX-447 (Medarex/ Merck KgaA) . Se pueden obtener inhibidores adicionales de la actividad cinasa del EGFR basados en anticuerpos mediante la administración del antígeno o epítopo apropiado en un animal huésped seleccionado, por ejemplo cerdos, vacas, caballos, conejos, cabras, ovejas y ratones, entre otros. Se pueden utilizar diversos adyuvantes conocidos en el ámbito para estimular la producción de anticuerpos. Aunque los anticuerpos útiles para la puesta en práctica de la invención pueden ser policlonales, se prefieren los anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos monoclonales contra EGFR se pueden preparar y aislar utilizando cualquier técnica que proporcione la producción de moléculas de anticuerpo mediante líneas celulares establecidas en cultivo. Entre dichas técnicas de producción y aislamiento, aunque no son las únicas, se encuentran la técnica del hibridoma descrita originalmente por Kohler y Milstein; la técnica del hibridoma de linfocitos B humanos (Kosbor et al., 1983, Immunology Today 4:72; Cote et al., 1983, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 80: 2026-2030); y la técnica del hibridoma EBV (Colé et al, 1985, Monoclonal Antibodies y Cáncer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96). Alternativamente, se pueden adaptar las técnicas descritas para la producción de anticuerpos de una sola cadena (véase, por ejemplo, Patente U.S. núm. 4,946,778) para producir anticuerpos anti-EGFR de cadena única. Entre los inhibidores de la actividad cinasa de EGFR basados en anticuerpos que son útiles para la puesta en práctica de la presente invención también se encuentran, aunque no están limitados a fragmentos F(ab').sub.2 de anticuerpo anti-EGFR, que se pueden generar por digestión con pepsina de una molécula de anticuerpo intacta, y fragmentos Fab, que se pueden generar mediante la reducción de los puentes disulfuro de los fragmentos F (ab' ) . sub.2. Alternativamente, se pueden construir bibliotecas de expresión Fab o scFv (véase, por ejemplo, Huse et al., 1989, Science 246: 1275-1281) para permitir la rápida identificación de fragmentos que poseen la especificidad deseada frente a EGFR. Las técnicas de producción y aislamiento de anticuerpos monoclonales y fragmentos de anticuerpo son ampliamente conocidas en el campo y están descritas en Harlow y Lañe, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, y en J. W. Goding, 1986, Monoclonal Antibodies: Principies y Practice, Academic Press, London.

También es posible preparar anticuerpos y fragmentos de anticuerpos humanizados anti-EGFR de acuerdo con técnicas conocidas como las descritas en Vaughn, T. J. et al., 1998, Nature Biotech. 16:535-539 y en referencias allí citadas, y estos anticuerpos o fragmentos de los mismos también son útiles en la práctica de la presente invención. Los inhibidores de la actividad cinasa del EGFR que se utilizan en la presente invención pueden estar basados de forma alternativa en constructos oligonucleotídicos antisentido. Los oligonucleótidos antisentido, que incluyen moléculas de RNA antisentido y de DNA antisentido, actuarían para bloquear de forma directa la traducción del mRNA del EGFR al unirse al mismo y así evitar la traducción de proteínas o aumentar la degradación del mRNA, dando lugar a un descenso del nivel de proteína cinasa del EGFR y, por tanto, de la actividad en una célula. Por ejemplo, se pueden sintetizar oligonucleótidos antisentido de al menos 15 bases, complementarios a regiones únicas de la secuencia del transcrito de mRNA que codifica el EGFR, y esto se puede realizar mediante, p.ej., técnicas fosfodiéster convencionales, y administrar por, por ejemplo, inyección o infusión intravenosa. Los métodos de uso de técnicas antisentido para inhibir de forma específica la expresión génica de genes cuya secuencia se conoce son vastamente conocidos en el ámbito (véanse por ejemplo los n?ms . de Patente estadounidense 6 566 135, 6 566 131, 6 365 354, 6 410 323, 6 107 091, 6 046 321 y 5 981 732). Los RNA inhibidores pequeños (siRNA, del inglés small inhibi tory RNA) también pueden funcionar como inhibidores de la actividad cinasa del EGFR, de utilidad en la presente invención. La expresión génica del EGFR se puede reducir poniendo en contacto el tumor, el sujeto o la célula con un RNA de doble cadena (dsRNA, del inglés double stranded RNA) pequeño, o con un vector o un constructo, que cause la producción de un RNA de doble cadena pequeño de forma que la expresión del EGFR esté inhibida de forma específica (es decir, RNA interferencia o RNAi) . Los métodos de selección de un dsRNA o un vector que codifique dsRNA apropiados son ampliamente conocidos en el ámbito en el caso de genes cuya secuencia se conoce (véanse, p.ej., Tuschi, T. et al . (1999) Genes Dev. 13 (24) : 3191-3197 ; Elbashir, S.M. et al. (2001) Nature 411:494-498; Hannon, G.J. (2002) Nature 418:244-251; McManus, M.T. and Sharp, P. A. (2002) Nature Reviews Genetics 3:737-747; Bremmelkamp, T.R. et al. (2002) Science 296:550-553; Patentes Estadounidenses núm. 6 573 099 y 6 506 559; y las Publicaciones de Patente Internacional núm. WO 01/36646, WO 99/32619 y WO 01/68836) . Las ribozimas también pueden actuar como inhibidores de la actividad cinasa del EGFR de uso en la presente invención. Las ribozimas son moléculas de RNA enzimático capaces de catalizar la escisión específica del RNA. Los mecanismos de acción de las ribozimas implican la hibridación específica de secuencia de la molécula de ribozima con un RNA diana complementario, seguida de una escisión endonucleolítica. Por esta razón, las moléculas de ribozima con motivo ha merhead modificadas que catalizan de forma específica y eficiente la escisión endonucleolítica de la secuencia de mRNA del EGFR son de utilidad dentro del ámbito de la presente invención. Inicialmente se identifican los sitios específicos de escisión para ribozimas de cualquier posible RNA diana mediante el cribado de la molécula diana en busca de sitios de escisión para ribozimas, que de forma característica incluyen las siguientes secuencias: GUA, GUU y GUC. Una vez identificados, es posible evaluar las características estructurales predichas, como la estructura secundaria, que puedan hacer que la secuencia oligonucleotídica no sea apropiada, de secuencias cortas de RNA de unos 15 a 20 ribonucleótidos que corresponden a la región del gen diana que contiene el sitio de escisión. También se puede evaluar la adecuación de posibles dianas mediante el análisis de su accesibilidad a la hibridación con oligonucleótidos complementarios utilizando, por ejemplo, ensayos de protección frente a la ribonucleasa. Tanto los oligonucleótidos antisentido como las ribozimas que son de utilidad como inhibidores de la actividad cinasa del EGFR se pueden preparar mediante métodos conocidos. Estos incluyen técnicas de síntesis química como, por ejemplo, la síntesis química en fase sólida por el método de la fosoramidita. Alternativamente, se pueden generar moléculas de RNA antisentido mediante la transcripción in vi tro o in vivo de secuencias de DNA que codifican la molécula de RNA. Estas secuencias de DNA se pueden incorporar en una amplia variedad de vectores que incorporan promotores adecuados de la RNA polimerasa como los promotores de la polimerasa T7 o SP6. Es posible introducir diversas modificaciones en los oligonucleótidos de la invención como medio para incrementar la estabilidad y la semivida intracelular. Las modificaciones posibles incluyen, entre otras, la adición de secuencias flanqueantes de ribonucleótidos o desoxirribonucleótidos en los extremos 5' o 3' terminales de la molécula, o el uso de enlaces fosforotioato o 2 '-O-metilo, en lugar de enlaces fosfodiéster, en la estructura del esqueleto oligonucleótidico . La invención también comprende una composición farmacéutica que está formada por una combinación de inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina, a su vez combinada con un portador farmacéuticamente aceptable. De forma preferible, la composición está formada por un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva y no tóxica de una combinación de un compuesto inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de estos componentes) . Además, en esta misma modalidad, la invención engloba una composición farmacéutica destinada al tratamiento de enfermedades y cuyo uso da lugar a la inhibición del crecimiento de células neoplásicas, tumores benignos o malignos o metástasis, que contiene un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéutiamente efectiva y no tóxica de una combinación de compuesto inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de estos componentes) . El término «sales farmacéuticamente aceptables» hace referencia a sales preparadas a partir de bases o ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables . Cuando un compuesto de la presente invención es ácido, su sal correspondiente puede prepararse de forma práctica a partir de bases no tóxicas farmacéuticamente aceptables, que incluye bases inorgánicas y bases orgánicas . Las sales derivadas de estas bases inorgánicas incluyen sales de aluminio, amonio, calcio, cobre (cúprica y cuprosa) , sales férricas, ferrosas, de litio, magnesio, manganeso (mangánica y manganosa) , de potasio, sodio, cinc y sales similares. En particular se prefieren las sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio. Las sales derivadas de bases no tóxicas orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias o terciarias, así como aminas cíclicas y aminas sustituidas como las aminas sustituidas naturales o las sintéticas. Otras bases no tóxicas orgánicas farmacéuticamente aceptables a partir de las que se pueden formar sales incluyen resinas de intercambio iónico como, por ejemplo, arginina, betaína, cafeína, colina, N' ,N' -dibenciletilenodiamino, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol , etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares. En los casos en que un compuesto de la presente invención sea básico, su sal correspondiente puede prepararse de forma práctica a partir de ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables, que incluye ácidos orgánicos e inorgánicos. Estos ácidos incluyen, entre otros, los siguientes: ácido acético, bencenosulfónico, benzoico, alcanforsulfónico, cítrico, etanosulfónico, fumárico, glucónico, glutámico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, nítrico, pamóico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenosulfónico y similares. Los ácidos particularmente preferidos son el cítrico, hidrobrómico, clorhídrico, maleico, fosfórico, sulfúrico y tartárico. Las composiciones farmcéuticas de la presente invención contienen una combinación de compuesto inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de estos componentes) como ingrediente activo, un portador farmacéuticamente aceptable y, de forma opcional, otros ingredientes terapéuticos o adyuvantes. Otros agentes terapéuticos pueden incluir aquellos agentes citotóxicos, quimioterapéuticos o antineoplásicos, o agentes que potencien los efectos de los primeros agentes antes enumerados. Las composiciones incluyen composiciones adecuadas para su administración oral, rectal, tópica y parenteral (incluyendo la subcutánea, intramuscular e intravenosa) , aunque la vía más adecuada en cada caso en particular dependerá del sujeto en particular y de la naturaleza y gravedad de los trastornos para los que se administra el ingrediente activo. Las composiciones farmacéuticas se pueden presentar de forma conveniente en forma de dosis unitaria y se pueden preparar mediante cualquiera de los métodos ampliamente conocidos en el ámbito de la farmacia. En la práctica, los compuestos de esta invención representados por una combinación de compuesto inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de estos componentes) se pueden combinar como el ingrediente activo mezclado de forma homogénea con un portador farmacéutico según las técnicas farmacéuticas convencionales de formación de compuestos. El portador puede ser de una gran variedad de formas en función de la forma de presentación deseada para la administración, p.ej. oral o parenteral (incluida la intravenosa) . Por esta razón, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden presentarse en forma de unidades discretas adecuadas para la administración oral, como cápsulas, cachets o comprimidos, cada uno de ellos conteniendo una cantidad predeterminada del ingrediente activo. Además, las composiciones pueden presentarse en forma de polvos, granulos, en solución, en suspensión en un líquido acuoso, como un líquido no acuoso, como una emulsión de aceite en agua o como una emulsión de agua en aceite. Aparte de las formas de administración habituales descritas, también se puede administrar una combinación de compuesto inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de estos componentes) mediante sistemas de liberación controlada o mecanismos de administración. Las composiciones combinadas pueden prepararse empleando cualquiera de los métodos farmacéuticos habituales. De forma general, estos métodos incluyen un paso de asociación de los ingredientes activos con el portador que constituye uno o más ingredientes necesarios. Generalmente, las composiciones se preparan mediante la mezcla uniforme y homogénea del ingrediente activo con portadores líquidos, portadores sólidos finamente fraccionados o con ambos. A continuación, ya se puede dar al producto la forma de la presentación deseada. Por lo tanto, las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden incluir un portador farmacéuticamente aceptable y una combinación de compuesto inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina (incluidas sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de estos componentes) . También es posible incluir una combinación de compuesto inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina (incluidas sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de estos componentes) en composiciones farmacéuticas de forma conjunta con uno o más compuestos terapéuticamente activos . Otros compuestos terapéuticamente activos incluyen esos agentes citotóxicos, quimioterapéuticos o antineoplásicos, o agentes que potencien los efectos de estos primeros, antes citados. Así, en una modalidad de esta invención, una composición farmacéutica puede comprender un compuesto inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina en combinación con un agente antineoplásico, en la que dicho agente antineoplásico es un miembro seleccionado del grupo formado por fármacos alquilantes, antimetabolitos, inhibidores de los microtúbulos, podofilotoxinas, antibióticos, nitrosoureas, tratamientos hormonales, inhibidores de cinasas, activadores de la apoptosis de células tumorales y agentes antiangiogénicos . El portador farmacéutico empleado puede ser, por ejemplo, un sólido, un líquido o un gas. Algunos ejemplos de portadores sólidos son: lactosa, térra alba, sacarosa, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, estearato de magnesio y ácido esteárico. Algunos ejemplos de portadores líquidos son el jarabe de glucosa, el aceite de cacahuete, el aceite de oliva y el agua. Y ejemplos de portadores gaseosos incluyen el dióxido de carbono y el nitrógeno. Para la preparación de composiciones de administración oral, es posible emplear cualquier medio farmacéutico conveniente. Por ejemplo, se puede utilizar agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes, agentes colorantes y similares, para formar preparaciones líquidas orales como suspensiones, elixires y soluciones; mientras que para formar preparaciones sólidas orales como polvos, cápsulas o comprimidos, es posible utilizar portadores como almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes granulantes, lubricantes, aglutinadores, agentes desintegrantes y similares. Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas son las unidades de administración oral preferidas cuando se emplean portadores farmacéuticos sólidos. Los comprimidos pueden estar recubiertos de forma opcional mediante técnicas acuosas o anhidras estándar. Un comprimido que contenga la composición de esta invención puede prepararse por compresión o molienda, opcionalmente con uno o más ingredientes coadyuvantes o adyuvantes . Los comprimidos pueden prepararse mediante compresión, en una máquina adecuada, del ingrediente activo en forma de fluido libre, como polvos o granulos, mezclada de forma opcional con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, agente tensioactivo o dispersante. Los comprimidos triturados se pueden preparar mediante molienda en una máquina adecuada de una mezcla de compuesto en polvos humedecido con un diluyente líquido inerte. Cada comprimido contiene de forma preferible de unos 0.05 mg a unos 5 g del ingrediente activo y cada cápsula o sello contiene de forma preferible de unos 0.05 mg a unos 5 g del ingrediente activo. Por ejemplo, una formulación destinada a la administración oral en humanos puede contener de unos 0.5 mg a unos 5 g de agente activo, formando un compuesto con una cantidad adecuada y conveniente de material portador que puede variar de un 5 a un 95% de la composición total. Las formas de administración unitarias contienen generalmente entre cerca de 1 mg y cerca de 2 g del ingrediente activo, de forma característica 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 800 mg o 1000 mg. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención que son adecuadas para su administración parenteral pueden prepararse como soluciones o suspensiones de los compuestos activos en agua. Es posible añadir un tensioactivo adecuado como, por ejemplo, hidroxipropilcelulosa. Las dispersiones también se pueden preparar en glicerol, polietilenglicoles líquidos o mezclas de los mismos en aceites. Además, se puede incluir un conservante para evitar el crecimiento perjudicial de microorganismos. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención adecuadas para su uso inyectable incluyen soluciones acuosas estériles o dispersiones. Además, las composiciones pueden estar en forma de polvos estériles para la preparación extemporánea de estas soluciones o dispersiones estériles inyectables. En todos los casos, la forma inyectable final debe estar esterilizada y ser fluida de forma efectiva para una fácil inyección mediante jeringa. Las composiciones farmacéuticas deben ser estables bajo las condiciones de fabricación y conservación; por tanto, es preferible que se preserven frente a la acción contaminante de microorganismos como bacterias u hongos . El portador puede ser un disolvente o un medio dispersante que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (p.ej., glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido) , aceites vegetales y mezclas adecuadas de los mismos. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden presentar en una forma adecuada para el uso tópico como, por ejemplo, aerosol, crema, pomada, loción, polvo o similares. Además, las composiciones pueden estar en una forma adecuada para su uso en dispositivos transdérmicos . Estas formulaciones se pueden preparar utilizando una combinación de compuesto inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de estos componentes) de esta invención, a través de los métodos de procesado convencionales. A modo de ejemplo, una crema o una pomada se preparan mediante la mezcla de material hidrófilo y agua, junto con de un 5% en peso a un 10% en peso del compuesto, para producir una crema o una pomada que tenga la consistencia deseada. Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden presentarse en una forma adecuada para la administración rectal en la que el portador sea un sólido. Es preferible que la mezcla se presente en forma de supositorios de dosis unitaria. Los portadores adecuados incluyen manteca de cacao y otros materiales de uso habitual en el ámbito. Los supositorios pueden estar formados de forma práctica mediante una primera mezcla de la composición con el portador o los portadores ablandados o fundidos, seguida de la congelación y su colocación en moldes para dar la forma deseada. Aparte de los ingredientes portadores antes mencionados, las formulaciones farmacéuticas descritas anteriormente pueden incluir, si es pertinente, uno o varios ingredientes portadores, como diluyentes, soluciones tamponadoras , agentes aromatizantes, aglutinantes, agentes tensioactivos, espesantes, lubricantes, conservantes (incluidos los antioxidantes) y similares. Además, se pueden añadir otros adyuvantes para convertir la formulación en isotónica respecto de la sangre del receptor previsto. Las composiciones que contienen una combinación de compuesto inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de estos componentes) también pueden prepararse en forma de polvos o líquido concentrados. Los niveles de dosis de los compuestos de la combinación de esta invención son aproximadamente los descritos en este documento, o los descritos para estos compuestos en las técnicas conocidas del ámbito. Sin embargo, se cree que el nivel de dosis específico para cualquier paciente en particular dependerá de una diversidad de factores que incluyen: edad, peso corporal, estado general de salud, sexo, pauta alimentaria, tiempo de adminstración, vía de administración, tasa de excreción, combinación de fármacos y gravedad de la enfermedad en particular que se está tratando. Esta invención se comprenderá mejor a partir de los Datos Experimentales que aparecen a continuación. Sin embargo, el experto en la materia podrá apreciar fácilmente que los métodos y resultados específicos comentados meramente ilustran la invención que se describe de forma más completa en las reivindicaciones que siguen a continuación, y no deben considerarse de ningún modo limitados por los mismos. Detalles Experimentales: Introducción El receptor del factor de crecimiento epidérmico (HERÍ/EGFR) específico de células cancerosas es una diana molecular valiosa para el tratamiento del cáncer (Ciardiello, F and Tortora G. (2002) Expert Opin. Investig. Drugs 11:755-768) . Gran cantidad de cánceres presentan una sobreexpresión del HERÍ/EGFR: carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (70-100% ) , cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) (50-90% ), cáncer de próstata (40-70% ), glioma (10-50% ), cáncer gástrico (30-60% ) , cáncer de mama (35-70% ) , cáncer colorectal (45-80% ) , cáncer pancreático (30-50% ) y cáncer de ovario (35-60% ) (Ciardiello, F y Tortora G. (2002) Expert Opin. Investig. Drugs 11:755-768); Salomón D.S., et al. (1995) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 19:183-232). Salomón et al también destacaron la relación entre la sobrexpresión del HERÍ/EGFR y los pacientes con enfermedad avanzada, metástasis o mal pronóstico. CPNM es la forma más común de cáncer de pulmón. El enfoque del tratamiento será diferente en función del grado de extensión de la enfermedad. En el caso de estadios inicales de la enfermedad, la cirugía es el único tratamiento curativo. Aún así, también se puede asociar un enfoque multimodal de quimio/radioterapia a mejorías de la enfermedad. En estadios de enfermedad avanzada, la quimioterapia, que ofrece leves mejorías en la supervivencia general, es la opción principal. Por lo tanto, sigue existiendo una gran necesidad médica de buscar regímenes de tratamiento más efectivos y mejor tolerados para el CPNM. Se han utilizado muchos citotóxicos como monoterapia para CPNM, que incluyen: vindesina, carboplatino, etopósido, ifosfamida, ciclofosfamida, vincristina y mitomicina y cisplatino (Rajkumar S.V., y Adjei AA. (1998) Cáncer Treat Rev. 24:35-53). La monoterapia con estos fármacos solamente produce ligeras mejorías, pero el tratamiento combinado con cisplatino ha disminuido la gravedad de la enfermedad de los pacientes y mejorado su calidad de vida en ensayos clínicos aleatorizados (Bunn P.A. Jr, y Kelly K. (1998) Clin Cáncer Res. 4(5) :1087-1100) .

La gemcitabina se desarrolló en los años 90 e inhibe la ribonucleasa reductasa. La monoterapia con gemcitabina tiene una mayor probabilidad de obtener respuesta tumoral y mejoría en la calidad de vida del paciente (en términos de pérdida del cabello, náuseas o vómitos reducidos, y pérdida del apetito) que la quimioterapia estándar con cisplatino/etopósido (ten Bokkel W.W. , et al. (1999) Lung Cáncer 26(2) :85-94) . La Organización Europea para la Investigación y el Tratamiento del Cáncer (EORTC) ha realizado ensayos de combinación en los que compara cisplatino y tenipósido con cisplatino y paclitaxel (Giaccone G, et al. (1998) J Clin. Oncol. 16:2133-2141). Dado que la última combinación proporcionó una mejor paliación del CPNM avanzado (a pesar de que no se alcanzó una mejora clara de la supervivencia) , ha pasado a ser recomendado como uno de los tratamientos estándar para pacientes con CPNM avanzada. Además, se ha demostrado que una combinación de gemcitabina y cisplatino actúa de forma sinérgica in vi tro e in vivo al menos de forma aditiva (Peters G.J. et al. (1995) Semin. Oncol. 22(4 Suppl. 11): 72-79). En ensayos de fase II, la tasa de respuesta de gemcitabina y cisplatino fue del 47% y la mediana de la supervivencia de 57 semanas, con una tasa del 48% de supervivencia de un año (Bunn P.A. Jr, y Kelly K. (1998) Clin Cáncer Res. 4 (5) : 1087-1100) .

Los tratamientos nuevos para el cáncer tienen un enfoque de especificidad en células cancerosas y auguran una menor toxicidad que los fármacos citotóxicos utilizados con anterioridad. Los tratamientos que combinan fármacos convencionales y fármacos dirigidos pueden tener un efecto sinérgico, ya que las dianas específicas de células cancerosas solamente forman parte de la etiología de la enfermedad. Es probable que el tratamiento óptimo del CPNM consista en inhibidores de EGFR en combinación con la quimioterapia tradicional. Erlotinib (Tarceva™, OSI-774) es una molécula pequeña selectiva, disponible por vía oral e inhibidora del dominio tirosina-cinasa del HERÍ/EGFR. Posee una potente actividad antitumoral en modelos preclínicos en animales de carcinoma de cabeza y cuello y de vulva (Pollack V.A. , et al. (1999) J. Pharmacol. Exp. Ther. 291:739-48). Erlotinib induce la apoptosis in vi tro y está activo frente a varios xenoinjertos in vivo de tumor humnano que expresan EGFR (Moyer J.D. et al. (1997) Cáncer Res. 57:4838-4848). En un ensayo abierto, de fase II en pacientes con CPNM cuyo tratamiento de quimioterapia con platino había fallado (Pérez-Soler R. et al. (2001) Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 20:310a (Abstract 1235)), se observó una actividad antineoplásica de erlotinib esperanzadora . En este estudio investigamos si la combinación de erlotinib y cisplatino o gemcitabina en modelos de ratones nude atímicos con xenoinjertos de CPNM actúa de forma sinérgica o antagonista en la inhibición del crecimiento tumoral. Los modelos tumorales de CPNM H460a y A549 se escogieron porque expresan EGFR de forma clara, con un número aproximado de 70.000-80.000 sitios de unión por célula (Bianco, C. et al. (2002) Clin. Cáncer Res. 8 (10) : 3250-3258; Lee, M. et al. (1992) J Nati. Cáncer Inst. Monogr. (13):117-123). El modelo A549 es de crecimiento lento y H460a es más agresivo y de crecimiento más rápido. Materiales y Métodos Animales Se utilizaron ratones nude nu/nu-nuBR atímicos hembra (Charles River Labs, Wilmington, EE. UU.) de unas 10-12 semanas y con un peso de 23-25 g. La salud de los ratones se valoró diariamente mediante observación y análisis de muestras de sangre tomadas de animales centinela de un mismo estante. Se permitió durante una semana que todos los animales se aclimatasen y se recuperasen del estrés relacionado con el transporte. Se proporcionó agua autoclavada y alimento irradiado (5058-ms Pico Lab [mouse] breed chow, Purina Mills, Richmond, IN) ad libi tum, y los animales se mantuvieron con un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas. Las jaulas, los lechos y las botellas de agua se autoclavaron antes de su uso y se cambiaron cada semana. Todos lo experimentos en animales siguieron los protocolos aprobados por el Comité de Cuidados y Uso de Animales de Roche. Estudios en cultivos celulares y en animales Se cultivaron células H460a (provided by Dr Jack Roth, MD, Anderson) en Medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) complementado con 10% Suero Fetal Bovino (SFB) , y células A549 (American Type Culture Collección [Manassas, VA]) en medio Roswell Park Memorial Institute (RPMl) 1640 + 10% FBS. Las concentraciones celulares de los implantes fueron de 1 x 107 células/0.2 ml para las H460a y 7.5 x 105 células/O.2 ml para las A549. Las células se suspendieron en solución salina tamponada con fosfato y se implantaron de forma subcutánea en el costado derecho de cada ratón. Una vez establecidos los tumores palpables, se aleatorizó a los animales de modo que todos los grupos tuviesen una media similar de volumen tumoral de 100-150 mm3. Las mediciones de los tumores y del peso de los ratones se realizaron tres veces por semana. A lo largo del experimento se monitorizó a los animales de forma individual . Agentes de ensayo y tratamiento farmacológico. Erlotinib (OSI Pharmaceuticals, Uniondale, NY) se formuló como una suspensión fina inyectable, con carboximetilcelulosa sódica y Tween 80 en agua. Erlotinib (0,2 ml/animal) se administró por vía oral mediante una jeringa de 1 ml y sonda gástrica del calibre 18. Todos los grupos se trataron diariamente durante 3 semanas . Se formuló gemcitabina liofilizada (Ge zar™, Lilly Research Center Ltd) en el vial preenvasado con solución salina estéril siguiendo las instrucciones de la marca, dando lugar a una solución que contenía 38 mg/ml de compuesto activo. Se tomo una alícuota de los viales de solución madre para cada grupo de dosis, formada por el fármaco necesario para el estudio completo, y se volvió a diluir con solución salina estéril para proporcionar una solución de 0,5 ml de volumen de dosis para cada animal. Se administró gemcitabina por vía intraperitoneal (i.p.) utilizando una jeringa de 3 ml y una sonda gástrica de calibre 26. Todos los grupos se trataron cada 3 días durante 3 semanas (un total de seis inyecciones ) . Cálculos y análisis estadístico. La pérdida de peso se calculó según el porcentaje de cambio del peso corporal medio del grupo, utilizando la fórmula : ( (W-W0) /Wo) x 100 en la que «W» representa el peso corporal medio del grupo tratado en un día en particular, y «Wo» representa el peso corporal medio del mismo grupo al inicio del tratamiento. La pérdida máxima de peso se calculó también mediante la fórmula anterior, dando el máximo porcentaje de pérdida de peso corporal en cualquier momento dado del experimento completo para un grupo en concreto. La eficacia del tratamiento se evaluó mediante la inhibición del crecimiento tumoral . El volumen tumoral de los grupos tratados se proporcionó en porcentajes de volumen tumoral de los grupos control (%T/C) , utilizando la fórmula: 100 x ((T-T0)/(C-Co)) en la que «T» representa volumen tumoral medio de un grupo tratado en un día específico durante el experimento, «T0» representa el volumen tumoral medio del mismo grupo el primer día de tratamiento, C representa el volumen tumoral medio de un grupo control en un día en concreto del experimento y Co representa el volumen tumoral medio del mismo grupo el primer día de tratamiento. La inhibición del crecimiento tumoral se calculó mediante la fórmula siguiente: 100 -% T/C. El volumen tumoral (mm3) se calculó utilizando la fórmula del volumen del elipsoide: (Dx(d2) )/2 en la que «D» representa el diámetro mayor del tumor, y «d» representa el diámetro menor. En algunos casos, la regresión del tumor o el porcentaje de cambio de volumen tumoral se calculó utilizando la siguiente fórmula: ( (T-T0)/T0)xl00 en la que «T» representa el volumen tumoral medio del grupo tratado en un día en particular, y «T0» representa el volumen tumoral medio del mismo grupo tratado al inicio del tratamiento. El análisis estadístico se realizó mediante el test de suma de rangos y el análisis de la varianza (ANOVA) de un factor y el test t Bonferroni en el análisis post hoc (SigmaStat, versión 2.03, Jandel Scientific, San Francisco, CA) . El nivel de significación se estableció en p = 0.05. Análisis Farmacocinético Para la farmacocinética (FC) de dosis única, se extrajeron muestras de sangre de tres ratones por cada tiempo mediante punción cardiaca a los 5, 15, 30, 60 minutos y 2, 4, 8, 16, 24 horas posteriores a la dosis. En el caso de animales en tratamiento crónico, se extrajeron muestras de sangre de dos o tres ratones por cada tiempo a través del seno retroorbital tras 1 y 6 horas. Los tubos de extracción contenían ácido tetraacético de etilendiamina (EDTA) como anticoagulante. Las muestras se conservaron a -70°C. Las concentraciones plasmáticas de erlotinib se determinaron mediante un método de cromatografía líquida y espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) con límites de cuantificación de 1 ng/ml. Los parámetros de FC se estimaron mediante el análisis no compartimental de los datos compuestos, utilizando el programa de evaluación de FC WinNonlin PRO® versión 3.1 (Pharsight Inc) . En un estudio se determinó la concentración tumoral de erlotinib (H460a) utilizando un método LC-MS/MS selectivo con un límite de cuantificación de 1 ng/g tejido. Anatomía patológica/necropsia Al final del estudio se realizó una necropsia completa a cinco ratones por tratamiento de todos los grupos restantes. También se extrajo sangre total de estos ratones para su análisis bioquímico y hematológico . Las muestras de tumor se fijaron por inmersión en formalina-cinc al 10% y a continuación se procesaron en un Tissue-Tek® VIP (Sakura) y se incluyeron en parafina. Se realizaron secciones de 5 µ para el análisis inmunohistoquímico. Como control negativo se utilizó suero de cabra o de conejo preinmunizado (Dako Ltd) . Las secciones se sumergieron en solución de recuperación antigénica Target Retrieval (Dako Ltd) y se calentaron a 94 °C en un autoclave (Black & Decker) durante 20 minutos. La actividad de la peroxidasa endógena se paró con H202 al 6% en metanol durante 15 minutos. Para bloquear los sitios de unión a tejidos no específico, se bloquearon secciones en suero normal al 10% de la especie en la que se había generado el anticuerpo secundario. Las secciones se incubaron durante 20 minutos a temperatura ambiente en suero preparado bajo radiación ultravioleta (Lab Vision) . En el caso del antígeno de la molécula plaquetaria 1 de adhesión celular al endotelio (PECAM-1, CD31) y el antígeno de EGFR, las secciones se incubaron durante la noche a temperatura ambiente con una IgG policlonal anti-PECAM-1 de cabra (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) diluida a 1:800 en Diluyente de Anticuerpos (Dako Ltd) o con una IgG policlonal anti-EGFR de conejo (BioGenex, San Ramón, CA) diluido a 1:50 en diluyente de anticuerpos Antibody Diluent (Dako Ltd) . Las secciones se incubaron con peroxidasa-ABC Vectastain Élite (Vector Laboratories) durante 45 minutos a temperatura ambiente. Para el caso del antígeno Ki-67, se incubaron secciones durante 1 hora a temperatura ambiente con una IgG policlonal anti Ki-67 (NeoMarkers, Fremont, CA) diluida a 1:2.000 en Antibody Diluent (Dako Ltd), seguido por la adición de un complejo de estreptavidina marcada con peroxidasa de rábano picante durante 30 minutos. Para detectar apoptosis se utilizó el equipo de detección de fragmentación de DNA TÚNEL TdT-FragEL™ (Oncogene Research Products, San Diego, CA) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. En el caso de los cuatro antígenos, se utilizó Vector Nova Red (Vector Laboratories) como el cromógeno final y hematoxilina para la contratinción nuclear. Resultados y Discusión Resultados Tinción inmunohistoquímica de EGFR en xenoinjertos de CPNM El patrón de expresión de EGFR en los tumores H460a y A549 se examinó mediante análisis inmunohistoquímico. Ambas líneas celulares presentaban un patrón similar de tinción de membrana para EGFR (datos no mostrados) . Esto confirma resultados previos que mostraban una expresión equivalente de EGFR en estas dos líneas tumorales (Bianco, C. et al . (2002) Clin. Cáncer Res. 8 (10) : 3250-3258 ; Lee, M. et al. (1992) J Nati. Cáncer Inst. Monogr . (13 ): 117-123 ) . Evaluación farmacocinética de dosis única o crónica de erlotinib en ratones nude atímicos En ratones sin tumor. Se administraron 20 y 100 mg/kg de erlotinib mediante sonda a ratones nu/nu atímicos hembra. La dosis se refiere a la sal de hidrocloruro con un contenido de fármaco activo (base libre) del 91.5% . Las formulaciones eran suspensiones de carboximetilcelulosa sódica que contenían 2.5 mg/ml y 12.5 mg/ml de erlotinib, respectivamente. Se evaluaron tres animales por momento temporal para la obtención de los datos de FC (Figura 4) . Los ratones a los que se administraron 100 mg/kg sufrieron exposiciones sistémicas elevadas a erlotinib, con un valor de AUC0-t de aproximadamente 196,000 h*ng/ml . El AUC0-t correspondeiente a la administración de 20 mg/kg fue de 33,500 h*ng/ml. La exposición (AUC) fue proporcional a la dosis. La concentración plasmática máxima media fue de aproximadamente 24,000 ng/ml tras la administración de 100 mg/kg, y de 9,100 ng/ml tras 20 mg/kg. La concentración plasmática tuvo su máximo a las 0.5-1.0 horas tras la dosis. La semivida aparente terminal media fue de unas 4 horas y el promedio del tiempo de residencia medio fue de unas 7 horas. En ratones con tumor. Después de la administración de 6.3; 12.5; 25.0; 100.0 y 150.0 mg/kg de erlotinib por vía oral a ratones nu/nu atímicos, la concentración plasmática alcanzó los 16.700 ng/ml y 8.870 ng/ml 1 hora y 6 horas después de la dosis, respectivamente (Figura ÍA) . Las concentraciones tumorales medias respectivas tras las dosis orales de 150 mg/kg, medidas en los mismos momentos temporales que las muestras plasmáticas, fueron de 4.800 y 3.090 ng/g tejido. La variabilidad interindividual de las concentraciones plasmáticas era moderada, con una desviación estándar relativa (DER) de 35-40% aproximadamente (intervalo: 5.2-120% ) . La exposición fue dependiente de la dosis y más que proporcional a la dosis, con dosis ascendentes. Las concentraciones tumorales también mostraban una buena correlación con las concentraciones plasmáticas de este estudio (Figura IB) . Determinación de dosis máximas toleradas (DMT) en ratones nude atímicos. DMT de Erlotinib La DMT de erlotinib fue de 100 mg/kg (Figura 6) . Todos los ratones que mostraban signos de toxicidad presentaban lesiones similares. Se hallaron signos evidentes de toxicidad en la piel y en el tracto gastrointestinal. Falleció un ratón del grupo de 400 mg/kg. El resto de animales de este grupo fueron sacrificados por causas de morbilidad. Los ratones a los que se administraron 200 mg/kg presentaban una marcada pérdidad de peso y todos fueron sacrificados. Sin embargo, nuestros estudios de eficacia previos han mostrado que 150 mg/kg de erlotinib en esta formulación también se tolera bien durante 3 semanas (observación no publicada por los autores) . DMT de gemcitabina En un estudio de DMT de dos semanas en ratones nude a los que se administraba gemcitabina, no se observaron signos manifiestos de toxicidad (pérdida de peso o signos clínicos evidentes) en ninguno de los grupos tratados. La toxicidad principal de gemcitabina es la mielosupresión (Hoang, T. et al. (2003) Lung Cáncer 42 (1) : 97-102; Philip PA. (2002) Cáncer 95(4 Suppl) : 908-911; Tripathy, D. (2002) Clin. Breast Cáncer 3 (Suppl 1) :8-ll) . Dado que no se tomaron muestras de sangre terminales para realizar recuentos sanguíneos completos, no se sabe si hubo mielosupresión en alguno de los distintos grupos de dosis. Basándonos en estos resultados y en datos hallados en la literatura médica (Rajkumar S.V., y Adjei AA. (1998) Cáncer Treat Rev. 24:35-53; Bunn P.A. Jr, y Kelly K. (1998) Clin Cáncer Res. 4 (5) : 1087-1100; ten Bokkel W.W. , et al. (1999) Lung Cáncer 26 (2 ) : 85-94) , decidimos utilizar en próximos estudios de eficacia una dosis máxima de 120 mg/kg cada 3 días. Estábamos siendo prudentes respecto al uso de dosis más elevadas ya que se han observado sensibilidades diferentes en animales con tumores e incluso el nivel de tolerancia puede ser específico de la línea tumoral (Merriman, R.L. et al. (1996) Invest. New Drugs 14(3) :243-247) . Efectos de erlotinib sobre xenoinjertos de CPNM establecidos . Estudio de respuesta a la dosis en H460a. Erlotinib en forma de monoterapia mostró una eficacia significativa dependiente de dosis al final del estudio en el xenoinjerto de CPNM H460a (día 28 tras la implantación tumoral) . En el grupo de 100 mg/kg se observó una inhibición del crecimiento del 61% (p < 0.001 frente al vehículo control) .

El resto de los grupos mostraron la siguiente inhibición del crecimiento: 25 mg/kg: 46% (p < 0.001 frente al vehículo control); 12.5 mg/kg: 36% (p = 0.003 frente al vehículo control); y 6.25 mg/kg: 28% (p = 0.014 frente al vehículo control) (Figura 2) . No hubo regresiones parciales o completas . Actividad combinada de erlotinib y gemcitabina en H460a. En el punto final de día 28, la dosis de erlotinib de 100 mg/kg había inhibido de forma significativa el crecimiento tumoral en un 71% (p = 0.002) (Figura 3). La dosis de erlotinib de 25 mg/kg presentaba una eficacia subóptima del 30% . Se ensayó una monoterapia con gemcitabina a la DMT de 120 mg/kg cada 3 días y a una cuarta parte de la DMT, 30 mg/kg, cada 3 días. La dosis de 120 mg/kg de gemcitabina cada 3 días inhibió de forma significativa el crecimiento tumoral (93% , p < 0.001) . Con la fracción de la DMT, la inhibición de crecimiento tumoral fue del 64% (p < 0.001). La combinación de 120 mg/kg de gemcitabina cada 3 días y 100 mg/kg de erlotinib por vía oral fue letal, con signos de toxicidad en el quinto día tras la implantación tumoral. Todos los ratones habían muerto ya a los 25 días posteriores a la implantación tumoral (día 15 del tratamiento) .

La combinación de gemcitabina a 30 mg/kg cada 3 días y erlotinib a 25 mg/kg inhibió el crecimiento tumoral en un 86% (p = 0.001 frente al vehículo control). No hubo regresiones ni parciales ni totales. Esta inhibición no fue aditiva ya que no fue significativamente mejor que la obtenida con gemcitabina o erlotinib administrados al 25% de la DMT. Esta combinación tampoco fue significativamente mejor que erlotinib a 100 mg/kg o gemcitabina a 120 mg/kg. Actividad de la combinación de erlotinib y gemcitabina en A549. Al final de este estudio (día 47 tras la implantación tumoral, día 19 de tratamiento), erlotinib 100 mg/kg inhibía de forma significativa el crecimiento tumoral en un 87% (p < 0.001) (Figura 5). Hubo dos regresiones parciales (16% y 7%). Igual que en los estudios previos, erlotinib a 25 mg/kg presentaba una eficacia subóptima de un 48% de inhibición del crecimiento tumoral (p = 0.004). La dosis de 120 mg/kg de gemcitabina inhibió de forma significativa el crecimiento tumoral en un 75% (p < 0.001) con una regresión parcial (5% ) . La dosis de 30 mg/kg de gemcitabina inhibió el crecimiento tumoral en un 42% (p = 0.001). Debido a la toxicidad de estudios previos, gemcitabina y erlotinib no se combinaron a las dosis más elevadas . Todos los ratones toleraron bien la combinación de gemcitabina a 30 mg/kg y erlotinib a 25 mg/kg, sin pérdida de peso o signos generales de toxicidad significativos. Esta combinación inhibió de forma significativa el crecimiento tumoral en un 103% (p < 0.001 frente al vehículo control), con seis regresiones parciales (margen: 5 - 67%) . Esta inhibición del crecimiento tumoral fue aditiva, ya que era significativamente mejor que la obtenida con gemcitabina o erlotinib administrados a un cuarto de la DMT (p < 0.05). La combinación no fue significativamente mejor que erlotinib a 100 mg/kg, o gemcitabina a 120 mg/kg. Efectos relacionados con el tratamiento sobre tejido normal y tejido tumoral. Necropsia a animales que recibieron monoterapia. En aquellos animales que recibieron monoterapia de erlotinib no se observaron cambios en los parámetros hematológicos o de la bioquímica clínica (datos no mostrados) . Sí hubo cambios macroscópicos de la piel relacionados con el tratamiento. Los ratones presentaron un enrojecimiento y formación de costras en la piel del hocico (Figure 7) posiblemente debido al elevado nivel de expresión de EGFR en la piel. Estas lesiones fueron transitorias y se disiparon con tratamiento continuado. Los efectos antitumorales relacionados con el tratamiento consitieron en un leve descenso del índice proliferativo de Ki-67 en el caso de erlotinib a 100 mg/kg en ambos modelos tumorales de xenoinjerto de CPNM (Figura 8) . No se observó ninguna diferencia significativa en la frecuencia de apoptosis en las células tumorales de los xenoinjertos tratados, ni ningún efecto claro sobre la angiogénesis medida por densidad microvascular (DM) mediante tinción inmunohistoquímica para el marcador endotelial, CD31. Necropsia a animales tratados con combinación de erlotinib y gemcitabina. En el caso de ratones tratados con erlotinib y gemcitabina a una cuarta parte de la DMT, no hubo resultados significativos en la evaluación histológica de los órganos principales. Los efectos sobre los parámetros hematológicos y séricos relacionados con el tratamiento fueron mínimos . No hubo suficientes datos que demostraran una toxicidad relacionada con el tratamiento bajo las condiciones de este estudio. Por esta razón, a pesar de que la combinación de erlotinib a 25 mg/kg más gemcitabina a 30 mg/kg presentaba unos efectos antineoplásicos claros, no parecía incrementar la toxicidad. Los efectos sobre la proliferación observados en el grupo tratado con la combinación (evaluados mediante tinción para Ki67) fueron similares a aquellos observados en los ratones bajo monoterapia con erlotinib (Figura 8b) . Discusión Estos resultados muestran que erlotinib, una potente molécula pequeña inhibidora del HERÍ/EGFR, selectiva y disponible por vía oral, posee una poderosa actividad antitumoral en modelos de xenoinjerto de CPNM humano que expresan cantidades similares del HERl/EGFR, en forma de monoterapia o en combinación con sustancias convencionales de quimioterapia . El modelo H460a de xenoinjerto mostró una relación dosis-respuesta excelente y la concentración tumoral presentó una buena correlación con la concentración plasmática. Las dos líneas celulares de CPNM humano, al ser cultivadas como tumores subcutáneos en ratones atímicos, manifestaron cinéticas de crecimiento tumoral diferentes, con un tiempo de duplicación de 5 días para H460a y 10 días para A549. La monoterapia con erlotinib a 100 mg/kg inhibió de forma significativa el crecimiento tumoral en el modelo H460a de xenoinjerto. Con la combinación de gemcitabina y erlotinib, administrada a un 25% de la DMT, se observó una inhibición significativa del crecimiento tumoral y una remisión parcial en el tumor A549 de crecimiento lento (>100% ) . La inhibición del crecimiento tumoral con erlotinib en combinación con gemcitabina se vio aumentada de forma significativa en comparación con la monoterapia con erlotinib (p = 0,05). En el tumor H460a, de crecimiento más rápido, se observó una inhibición sustancial del crecimiento tumoral con la combinación de gemcitabina y erlotinib (86% ) utilizando una cuarta parte de la DMT de los dos compuestos. Sin embargo, la inhibición del crecimiento tumoral con esta combinación no fue significativamente diferente de la observada con la monoterapia. A549 es de crecimiento lento y por tanto se asume que es más dependiente de la angiogénesis. Se cree que erlotinib es un agente antiangiogénico indirecto (Kerbel, R. y Folkman, J. (2002) Nat. Rev. Cáncer 2 (10) : 727-39) , por lo que no sorprende el hecho de que tenga una mayor eficacia frente a A549. Erlotinib inhibe la unión de adenosintrifosfato (ATP) al dominio tirosina cinasa intracelular del HERl/EGFR, bloqueando así la fosforilación del receptor y la cascada de señalización asociada a esta (Moyer J.D. et al. (1997) Cáncer Res. 57:4838-4848). El resultado de esto es la inhbición de los procesos celulares asociados con el crecimiento y la progresión tumoral como son la proliferación, la angiogénesis, la metástasis y la protección frente a la apoptosis (Moyer J.D. et al. (1997) Cáncer Res. 57:4838-4848). Desafortunadamente, en los tumores tratados con erlotinib no se detectaron los efectos antiangiogénicos mediante DM, lo que posiblemente se deba a que el ensayo no fuera suficientemente sensible. En ambos modelos de CPNM, la administración de gemcitabina (30 mg/kg) con erlotinib (25 mg/kg) a una cuarta parte de la DMT fue bien tolerada con una pérdida de peso insignificante o nula, lo que sugiere la posibilidad de aportar efectos beneficiosos en la calidad de vida de los pacientes al mantener la eficacia junto con un menor riesgo de efectos secundarios. Por el contrario, no se toleró la combinación a dosis elevadas de erlotinib y agentes convencionales a sus dosis máximas toleradas individuales. Esto puede estar relacionado con el hecho de que en los estudios preclínicos no es posible aplicar medidas paliativas . Los ensayos de fase III con erlotinib en combinación con gemcitabina y cisplatino, o con carboplatino y paclitaxel, en humanos con CPNM, no han dado ningún resultado esperado ya que no se ha demostrado una mejora concluyente de la supervivencia. No obstante, los estudios preclínicos aquí presentados han mostrado de forma clara que erlotinib en combinación con quimioterapia posee un efecto aditivo sobre la inhibición del crecimiento tumoral. Estos resultados enfatizan la necesidad de un examen más extenso de los efectos de erlotinib en diversos marcos clínicos, como su uso secuencial con otros agentes quimioterapéuticos, y en poblaciones de pacientes seleccionados. Además, HERl/EGFR está sobreexpresado en un gran número de cánceres que incluyen: de cabeza y cuello, de próstata, de glioma, gástrico, de mama, de cuello del útero, pancreático y de ovario (Ciardiello, F y Tortora G. (2002) Expert Opin. Investig. Drugs 11:755-768); Salomón DS, et al. (1995) Crit. Rev. Oncol. Hematol . 19:183-232). Por tanto, erlotinib en combinación con gemcitabina puede representar una mejora de la eficacia en el tratamiento de otros cánceres de tumores sólidos que expresan HERl/EGFR. En conclusión, en el CPNM, la actividad antitumoral de erlotinib en xenoinjertos de tumores con niveles similares de expresión de EGFR es robusta, tanto administrado en forma de monoterapia como en combinación con gemcitabina. Es necesario realizar más estudios para evaluar de forma exhaustiva esta prometedora vía en el tratamiento del cáncer. Incorporación por referencias Todas las patentes, solicitudes de patente publicadas y otras referencias descritas en este documento están por la presente expresamente incorporadas aquí mediante referencias . Equivalentes Los expertos en la materia reconocerán o podrán establecer, utilizando exclusivamente el tipo de experimentación rutinaria, gran cantidad de equivalentes de realizaciones específicas de la invención descritas en este documento de forma específica. Se supone que estos equivalentes están comprendidos dentro del alcance de las reivindicaciones que aparecen a continuación.

Tabla 1 Farmacocinética de dosis única de erlotinib a 20 y 100 mg/kg en ratones hembra nu/nu atímicos sin tumores. 20 mg/kg 100 mg/kg Cmáx (ng/ml) 9100 24 000 Cmáx/dosis 455 240 ([ng/ml] /[mg/kg]) Tmáx (h) 0.5-1 0.5-1 Tlast (h) 8 24 AUCo-t (h*ng/ml) 33500 196000 AUCo-t/dosis 1680 1960 ( [h*ng/ml]/ [mg/kg] ) CL/F ( l/min/kg) 7.6 8.0 ?z (1/hora) 0.17 0.19 T?/2(h) 4.1 4.0 MRT (h) 5.6 8.2 Vz/F (1/kg) 2.7 2.8 Cmáx = máxima concentración plasmática; Tmáx = tiempo hasta alcanczar la máxima concentración plasmática; T0-t = tiempo de la última concentración cuantificable; AUC0-t = área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo desde el tiempo cero hasta el tiempo de la última concentración cuantificable; CL/F = aclaramiento aparente; ?z = constante de la tasa de eliminación; = semivida plasmática terminal; MRT = tiempo de residencia medio; Vz/F = volumen aparente de distribución.

Tabla 2 Evaluación de la dosis máxima tolerada en ratones nude atímicos sin tumores tratados durante 14 días (n=5) . Cambio en el Compuesto Dosis (mg/kg) peso corporal Mortalidad al final del estudio {%) Vehículo control 0 0 0 Erlotinib en 400 N/D 5 CMC/Tween Erlotinib en 200 N/D CMC/Tween Erlotinib en 100 CMC/Tween Erlotinib en 50 -1 CMC/Tween Vehículo control 0 -1 0 Gemcitabina 150 -3 0 Gemcitabina 120 -1 0 Gemcitabina 90 -2 0 Gemcitabina 60 4 0 Gemcitabina 30 -3 0 N/D = no disponibles; los animales murieron antes de la finalización del estudio. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Una composición farmacéutica, en particular para su uso en el tratamiento del cáncer, caracterizada porque contiene un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina, con un portador farmacéuticamente aceptable.

2. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es erlotinib.

3. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque erlotinib en la composición está presente en forma de una sal de hidrocloruro .

4. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque además comprende uno o más agentes anticáncer diferentes.

5. Un método de fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de tumores o metástasis tumorales, caracterizado porque se utiliza un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina.

6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el medicamento está destinado al tratamiento del cáncer.

7. El método de conformidad con la reivindicación 5 o 6, caracterizado porque el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y la gemcitabina se encuentran dentro de la misma formulación.

8. El método de conformidad con la reivindicación 5 o 6, caracterizado porque el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y la gemcitabina se encuentran dentro de formulaciones diferentes .

9. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, caracterizado porque el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y la gemcitabina están destinados a ser administrados al paciente por la misma vía.

10. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, caracterizado porque el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y la gemcitabina están destinados a ser administrados al paciente por vías diferentes .

11. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 10, caracterizado porque se utiliza el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR erlotinib.

12. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11, caracterizado porque erlotinib está destinado a ser administrado al paciente por vía parenteral u oral .

13. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 12, caracterizado porque gemcitabina está destinada a ser administrada al paciente por vía parenteral .

14. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 13, caracterizado porque contiene de forma adicional uno o más agentes antineoplásicos diferentes.

15. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 14, caracterizado porque los agentes antineoplásicos diferentes son seleccionados de entre: un agente alquilante, ciclofosfamida, clorambucil, cisplatino, busulfano, melfalano, carmustina, estreptozotocina, trietilenomelamina, mitomicina C, un antimetabolito, metotrexato, etopósido, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracilo, capecitabina, dacarbazina, un antibiótico, actinomicina D, doxorubicina, daunorubicina, bleomicina, mitramicina, un alcaloide, vinblastina, paclitaxel, un glucocorticoide, dexametasona, un corticosteroide, prednisona, un inhibidor enzimático de nucleósidos, hidroxiurea, una enzima reductora de aminoácidos, asparaginasa, leucovorina y un derivado del ácido fólico.

16. Un método de preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de tumores o metástasis tumorales en un paciente, caracterizado porque comprende la combinación de gemcitabina con un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR.

17. Un método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es erlotinib.

18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque también comprende la combinación de un portador farmacéuticamente aceptable con la gemcitabina y erlotinib.

19. Un equipo, caracterizado porque comprende un envase que contiene gemcitabina y un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR.

20. El equipo de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque además contiene un diluyente estéril.

21. El equipo de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es erlotinib.

22. El equipo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, caracterizado porque además contiene un documento anexo con instrucciones impresas de información indicando el uso de un tratamiento combinado de gemcitabina y erlotinib a un paciente como método para el tratamiento de tumores, metástasis tumorales u otros cánceres en un paciente.

23. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque además contiene uno o más agentes antineoplásicos diferentes.

24. Una composición de conformirdad con la reivindicación 23, caracterizada porque los agentes antineoplásicos diferentes son miembros seleccionados del grupo formado por: fármacos alquilantes, antimetabolitos, inhibidores de los microtúbulos , podof ilotoxinas , antibióticos, ni trosoureas , tratamientos hormonales, inhibidores de cinasas, activadores de la apoptosis de células tumorales y agentes antiangiogénicos .

25. Uso de una primera cantidad efectiva de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y una segunda cantidad efectiva de gemcitabina para la manufactura de un tratamiento del cáncer.

26. Uso de una primera cantidad subterapéutica de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad subterapéutica de gemcitabina para la manufactura de un tratamiento del cáncer.

27. Uso del inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es erlotinib, para la manufactura del tratamiento contra el cáncer de conformidad con la reivindicación 25 o 26.

28. El uso de conformidad con la reivindicación 5, en donde los tumores o las metástasis tumorales a tratar son tumores colorrectales o metástasis tumorales.

29. Una composición farmacéutica, en particular destinada al tratamiento del cáncer, caracterizada porque contiene (i) una primera cantidad efectiva de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad efectiva de gemcitabina.

30. Una composición farmacéutica, en particular destinada al tratamiento del cáncer, caracterizada porque contiene (i) una primera cantidad subterapéutica de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad subterapéutica de gemcitabina.

31. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 29 o 30, caracterizada porque el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es erlotinib.

32. Un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina para su uso como medicamentos, caracterizado porque es en particular para su uso en el tratamiento del cáncer.

33. Erlotinib y gemcitabina caracterizadas porque son para su uso como medicamentos, en particular para su uso en el tratamiento del cáncer.

34. El uso de un inhibidor de la actividad cinasa del EGFR y gemcitabina para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de tumores o de metástasis tumorales .

35. El uso de conformidad con la reivindicación 34, en la que el inhibidor de la actividad cinasa del EGFR es erlotinib.