KR20070083719A

KR20070083719A - 보르테조밉 및 표피 성장 인자 수용체 키나아제 억제제로의병용 치료

Info

Publication number: KR20070083719A
Application number: KR1020077008837A
Authority: KR
Inventors: 빌랄 피퍼디
Original assignee: 빌랄 피퍼디
Priority date: 2004-10-18
Filing date: 2005-10-18
Publication date: 2007-08-24
Also published as: JP2008516983A; US20060084691A1; WO2006110175A3; BRPI0517104A; MX2007004549A; WO2006110175A9; WO2006110175A2; CN101043892A; CA2583520A1; EP1804809A2; AU2005330507A1; IL182584A0

Abstract

본 발명은 다른 항암 약물 또는 방사선요법과 같은 추가 제제 또는 치료법과 함께 또는 없이, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉이 사용되는 것을 특징으로 하는 환자의 종양 또는 종양 전이 치료를 위해 의도된 약제의 제조 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 조합된 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물로 이루어진 약제학적 조성물을 포함한다. 본 발명을 실시하는데 사용될 수 있는 EGFR 키나아제 억제제의 바람직한 예는 화합물 엘로티닙 HCl (Tarceva™으로도 공지됨)이다.

Description

보르테조밉 및 표피 성장 인자 수용체 키나아제 억제제로의 병용 치료 {COMBINED TREATMENT WITH BORTEZOMIB AND AN EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR KINASE INHIBITOR}

본 발명은 암 환자 치료를 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 보르테조밉(bortezomib) 및 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 키나아제 억제제를 함유하는 약제를 제조하기 위한 방법에 관한 것이다.

암은 비(非)조절 성장, 분화의 결여, 국부 조직으로의 침범 및 전이 능력의 특징을 갖는 광범위한 세포성 암에 대한 총칭이다. 이러한 신생물성 암은 다양한 정도의 유병율로 신체의 모든 조직 및 장기에 영향을 미친다.

다수의 치료제가 지난 수십년 동안 여러 종류의 암 치료를 위해 개발되어 왔다. 가장 흔히 사용되는 항암제의 종류는 하기를 포함한다: DNA-알킬화제 (예를 들어, 시클로포스파미드, 이포스파미드), 항대사물질 (예를 들어, 메토트렉세이트, 엽산 길항제, 및 5-플루오로우라실, 피리미딘 길항제), 미세소관 붕괴제 (예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 파클리탁셀), DNA 삽입제 (intercalator) (예를 들어, 독소루비신, 다우노마이신, 시스플라틴), 및 호르몬 요법 (예를 들어, 타목시펜, 플루타미드).

국제 암 기구(National Cancer Institute) 에 의하면, 폐암은 미국 내에서 암 사망의 단독적으로 가장 큰 원인이며, 미국 내 암 사망의 대략 30% 의 원인이다. 세계 보건 기구 (World Health Organization) 에 의하면, 매년 세계적으로 백이십만 건 이상의 폐 및 기관지 암이 있으며, 연간 약 백십만 명의 사망을 초래한다. NSCLC 는 폐암의 가장 흔한 형태이며, 모든 사례의 거의 80% 를 차지한다. 폐암의 치료 옵션은 암의 형태 및 단계에 따라, 수술, 방사선 요법 및 화학요법의 단독 또는 조합이다. 진행된 NSCLC 의 경우, 활성인 것으로 나타난 제제는 시스플라틴, 카르보플라틴, 파클리탁셀, 도세탁셀, 토포테칸, 이리노테칸, 비노렐빈, 젬시타빈 (예를 들어, gemzar^®), 및 EGFR 키나아제 억제제 게피티닙 및 엘로티닙 (erlotinib) 을 포함한다. 엘로티닙 HCl (또한 OSI-774 또는 Tarceva™으로도 공지됨) 은 EGFR 의 티로신 키나아제 활성을 억제하고 세포자멸사(apoptosis) 및 세포 주기 정지를 유도하는 퀴나졸린이다 (Moyer, J.D. 등 (1997) Cancer Res. 57: 4838 - 4848; Norman P. (2001) Curr. Opin. Investing. Drugs 2:298-304). 시스플라틴-함유 및 카르보플라틴-함유 조합 화학요법은 단일-제제 화학요법으로 달성된 것보다 높은 목표 응답율을 수득하는 것으로 나타났다 (Weick, J. K., et al. (1991) J. Clin. Oncol.9(7):1157-1162). 파클리탁셀이 제 IV 단계 환자에서 21% 내지 24% 범위의 응답율의 단일-제제 활성을 갖는 것이 보고되었다 (Murphy W. K., 등 (1993) J. Natl. Cancer Inst. 85 (5):384-388). 파클리탁셀 조합은 비교적 높은 응답율, 상당한 1 년 생존, 및 폐암 증 상의 완화를 나타내었다 (Johnson D. H., 등 (1996) J. Clin. Oncol. 14 (7):2054-2060). 파클리탁셀 및 카르보플라틴 요법으로, 32% 내지 54% 의 1 년 생존율과 함께 27% 내지 53% 범위의 응답율을 나타내었다. 그러나, 이러한 치료의 효능은, 어떠한 특정 요법도 현재 표준적인 치료로 고려될 수 없는 상태이다.

표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 키나아제, 또는 그의 리간드 TGF-α 의 과발현은 유방암, 폐암, 직장결장암, 뇌암 및 두경부암을 포함하는 여러 암과 흔히 관련되며 (Salomon D.S. 등. (1995) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 19:183-232; Wells, A. (2000) Signal, 1:4-11), 이들 종양의 악성 성장에 기여하는 것으로 생각된다. EGFR 유전자의 특정 결손-돌연변이 또한 세포성 종양발생력 (tumorigenicity) 을 증가시키는 것으로 확인되었다 (Halatsch, M-E. 등. (2000) J. Neurosurg. 92:297-305; Archer, G. E. 등 (1999) Clin. Cancer Res. 5: 2646-2652). EGFR 자극 신호 경로의 활성화는 암-촉진 가능성이 있는 다중 과정, 예를 들어, 증식, 혈관형성, 세포 운동성 및 침입, 감소된 세포자멸사 및 약물 저항의 유도를 촉진한다. 항종양제로서의 용도를 위한, EGFR 의 키나아제 활성을 직접적으로 억제하는 화합물, 및 EGFR 활성화를 차단하여 EGFR 키나아제 활성을 감소시키는 항체의 개발은 집약적 연구의 분야이다 (de Bono J. S. 및 Rowinsky, E. K. (2002) Trends in Mol. Medicine 8:S19-S26; Dancey, J. 및 Sausville, E. A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2:92-313). 다수의 연구는 EGFR 키나아제 억제제 중 일부가 임의의 기타 항암제 또는 화학요법제 또는 치료와 함께 사용되는 경우 종양 세포 또는 신생물 치사를 개선할 수 있다는 것을 보여주거나 개시하였다 (예를 들어, Raben, D. 등 (2002) Semin. Oncol. 29: 37-46; Herbst, R. S. 등 (2001) Expert Opin. Biol. Ther. 1: 719-732; Magne, N 등 (2003) Clin. Can. Res. 9: 4735-4732; Magne, N. 등 (2002) British Journal of Cancer 86: 819-827; Torrance, C. J. 등 (2000) Nature Med. 6:1024-1028; Gupta, R.A. 및 DuBois, R. N. (2000) Nature Med. 6: 974-975; Tortora, 등 (2003) Clin. Cancer Res. 9: 1566-1572; Solomon, B. 등 (2003) Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 55: 713-723; Krishnan, S. 등 (2003) Frontiers in Bioscience 8, el-13; Huang, S 등. (1999) Cancer Res. 59: 1935-1940; Contessa, J. N. 등 (1999) Clin. Cancer Res. 5: 405-411; Li, M. 등 Clin. (2002) Cancer Res. 8: 3570-3578; Ciardiello, F. 등 (2003) Clin. Cancer Res. 9: 1546-1556; Ciardiello, F. 등 (2000) Clin. Cancer Res. 6: 3739-3747; Grunwald, V. 및 Hidalgo, M. (2003) J. Nat. Cancer Inst. 95:851-867; Seymour L. (2003) Current Opin. Investig. Drugs 4 (6):658-666; Khalil M. Y. 등 (2003) Expert Rev. Anticancer Ther.3:367-380; Bulgaru, A.M. 등 (2003) Expert Rev. Anticancer Ther. 3:269-279; Dancey, J. 및 Sausville, E. A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2: 92-313; Kim, E. S. 등 (2001) Current Opinion Oncol. 13:506-513; Arteaga, C. L. 및 Johnson, D. H. (2001) Current Opinion Oncol. 13: 491-498; Ciardiello, F. 등 (2000) Clin. Cancer Res. 6: 2053-2063; 특허 공보: US 2003/0108545; US 2002/0076408; 및 US 2003/0157104; 및 국제 특허 공보: WO 99/60023; WO 01/12227; WO 02/055106; WO 03/088971; WO 01/34574; WO 01/76586; WO 02/05791; 및 WO 02/089842).

폐 및 다른 종양 세포에 대해 심한 세포독성을 가진 또 다른 신규 화합물은 보르테조밉이다 (Adams, J. 등 (2003) Drug Discovery Today 8(7):307-315; Lenz, H.J. (2003) Cancer Treat. Rev. 29 (Suppl.1):41-48). 보르테조밉(또한 Velcade

또는 PS-341 로도 공지됨)은 불응성 다발골수종 치료에 있어서 근래에 FDA 로부터 승인받은 소분자 프로테아좀 억제제이다. 보르테조밉은 NSCLC 세포주에서 활성을 가짐이 보고되어 왔는데, 여기서 농도 및 시간-의존성 G2/M 세포 주기 정지를 유도한다는 것이 발견되었다(Ling, Y-H 등 (2003) Clin. Cancer Res. 9(3):1145-1154). 이는 주요 세포 조절 분자(p53, p21) 의 안정화, 카스파아제 경로의 활성화 및 최종적 세포자멸사를 수반한다. 생체 내 활성은 NSCLC 이종이식뿐 아니라, 인간 NSCLC 이종이식 모델에서 관찰되었으며, 제 I 상 및 제 II 상 시험에서 불응성 NSCLC 를 앓고 있는 환자에서 임상 활성이 관찰되었다(Mack P.C. 등(2003) Lung Cancer 41 (Suppl.1):S89-S96). 무작위 제 III 상 시험이 NSCLC 의 제 2 차 치료로서 표준 도세탁셀과 조합된 보르테조밉 대 보르테조밉 단독을 비교하면서 진행되고 있다.

항신생물성 약물은 이상적으로 암 세포를 선택적으로 죽일 수 있고, 비-악성 세포에 대한 그의 독성에 대해 넓은 치료 지수를 갖을 것이다. 이는 또한 약물에 장기간 노출된 후에도 악성 세포에 대한 효능을 유지할 것이다. 불행하게도, 현재의 화학요법 중 아무것도 이러한 이상적인 프로파일을 갖지 않는다. 대신, 대부분이 매우 좁은 치료 지수를 갖는다. 또한, 약간 치사량에 가까운 농도의 화학요법제에 노출된 암 세포는 매우 종종 그러한 제제에 대해 내성을 갖게 되며, 기타 여러 항신생물제에도 더욱 종종 교차 내성을 갖게 될 것이다.

따라서, 신생물 및 기타 증식성 장애에 대해 더욱 효과적인 치료에 대한 요구가 있다. 기존의 약물의 치료 효능을 증대시키기 위한 방법은 그의 투여 일정(schedule)의 변화, 및 또한 기타 항암제 또는 생화학 조절제와 조합한 그의 사용을 포함한다. 병용 치료는 각 제제의 치료적으로 적절한 투여량 단독 사용에 비해 보다 큰 효능 및 감소된 부작용을 초래할 수 있는 방법으로 잘 알려져 있다. 일부 경우, 약물 조합의 효능은 부가적 (조합물의 효능이 각 약물 단독의 효과의 합과 대략 같음) 이나, 기타 경우에는 효과가 상조적 (조합물의 효능이 주어진 각 약물 단독의 효과의 합보다 더 큼) 이다.

그러나, 여전히 NSCLC 및 기타 암 치료 개선에 대한 중대한 요구가 존재한다. 본 발명은 효능에 요구되는 개별 성분에 대한 투여량을 감소시킴으로써, 치료적 가치를 유지하거나 또는 증가시키는 동안 각 제제와 관련된 부작용을 감소시키는, 항암 병용 치료를 제공한다. 본원에 기술된 발명은 신규한 약물 조합, 및 NSCLC 및 기타 암의 치료에 약물 조합을 사용하는 방법을 제공한다.

본 발명의 개요

본 발명은 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합이 사용되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법을 제공한다. 바람직하게는, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉의 조합은 기타 항암 약물 또는 방사선 치료와 같은 추가의 제제 또는 치료와 함께 또는 없이, 동시에 또는 순차적으로 환자에게 투여하기 위한 의도이다.

본 발명은 또한 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합된 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물로 이루어진 약제학적 조성물을 포함한다.

본 발명을 수행하는데 사용될 수 있는 EGFR 키나아제 억제제의 바람직한 예는 엘로티닙 HCl (Tarceva^TM으로도 공지됨) 화합물이다.

도면의 간단한 설명

도 1: 엘로티닙 및 보르테조밉에 대한 NSCLC 세포주의 민감도

도 2: 4 개의 인간 NSCLC 세포주에 대한 엘로티닙 및 보르테조밉의 세포독성 조합 효과(조합 지수(CI))

도 3: H358 기관지폐포성 세포주에 대한 엘로티닙 및 보르테조밉의 조합 효과. A) 시간에 따라 작도(plotting)된 분획 세포수, B) 3 가지 시간 기간에 있어서 작도된 세포자멸사 백분율.

본 발명의 상세한 설명

동물에서의 "암" 이란 용어는 제어되지 않는 증식, 불멸성, 전이 가능성, 빠른 성장 및 증식 속도와 같은, 암-유발 세포에 전형적인 특징, 및 임의의 독특한 형태학적 특징을 갖는 세포의 존재를 나타낸다. 흔히, 암 세포는 종양의 형태일 것이나, 그러한 상기 세포는 동물 내에서 단독으로 존재하거나, 백혈병 세포와 같이 독립적인 세포로서 혈류 내에서 순환될 수 있다.

본원에 사용된 "비정상적 세포 성장" 은 달리 제시되지 않는 한, 정상적 조절 기작으로부터 독립적인 세포 성장 (예를 들어, 접촉 억제의 손실) 을 나타낸다. 이는 다음의 비정상적 성장을 포함한다: (1) 돌연변이된 티로신 키나아제를 발현시키거나 티로신 키나아제 수용체의 과발현으로 증식되는 종양 세포 (종양); (2) 비정상적 티로신 키나아제 활성화가 발생하는 기타 증식성 질환의 양성 및 악성 세포; (4) 티로신 키나아제 수용체에 의해 증식하는 임의의 종양; (5) 비정상적 세린/트레오닌 키나아제 활성화에 의해 증식하는 임의의 종양; (6) 비정상적 세린/트레오닌 키나아제 활성화가 발생하는 기타 증식성 질환의 양성 및 악성 세포.

본원에 사용된 용어 "치료함" 은 달리 제시되지 않는 한, 환자에서의 종양의 성장, 종양 전이, 또는 기타 암-유발 또는 신생물성 세포를 부분적으로, 또는 완전히 전환, 완화, 진행 억제 또는 방지하는 것을 의미한다. 본원에 사용된 용어 "치료" 는 달리 제시되지 않는 한, 치료 행위를 나타낸다.

"치료 방법" 이란 구 또는 그의 동가물은 예를 들어 암에 적용될 경우, 동물에서의 몇몇의 암 세포를 감소 또는 제거하거나, 암의 증상이 완화되도록 하는 방법 또는 방책을 나타낸다. 암 또는 또 다른 증식성 장애의 "치료 방법" 은 반드시 암 세포 또는 기타 질병이 실제로 제거되거나, 이들 세포 또는 장애의 수가 실제로 감소하거나, 암 또는 기타 장애의 증상이 실제로 완화된다는 의미는 아니다. 흔히, 암 치료 방법은 성공 가능성이 낮지만, 동물의 병력 및 추정 생존 수명을 고려하여 종합적으로 이로운 방책인 것으로 생각되는 경우에서도 수행될 것이다.

"치료적 유효제" 란 용어는 연구자, 수의학자, 의사 또는 기타 임상학자가 추구하는, 조직, 시스템, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 응답을 유도하는 조성물을 의미한다.

"약제 제조 방법" 이란 용어는 본원에 명시된 징후에서의 사용, 및 특히 종양, 종양 전이, 또는 일반적으로 암에서의 사용을 위한 약제 제조에 관련된다. 상기 용어는 명시된 징후에서 소위 "스위스-타입" 청구 형식에 관련된다.

"치료적 유효량" 또는 "유효량" 이란 용어는 연구자, 수의학자, 의사 또는 기타 임상학자가 추구하는, 조직, 시스템, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 응답을 유도하는 대상 화합물 또는 조합물의 양을 의미한다.

본원에서 사용되는, 용어 "EGFR 키나아제 억제제" 는 당해 분야에 현재 공지되었거나 또는 미래에 확인될 임의 EGFR 키나아제 억제제를 지칭하고, 그리고 환자에게 투여했을 때 달리, EGFR 에 그의 천연 리간드가 결합함으로써 야기되는 임의의 하류 생물학적 효과를 포함하는, 환자의 EGF 수용체의 활성화와 관련된 생물학적 활성을 억제시키는 임의의 화학적 실체를 포함한다. 이러한 EGFR 키나아제 억제제는 EGFR 활성화 또는 환자의 암 치료와 관련된 EGFR 활성화의 임의 하류 생물학적 효과를 방해할 수 있는 임의 제제를 포함한다. 이러한 억제제는 수용체의 세포내 도메인과 직접적으로 결합하고 그 키나아제 활성을 억제함으로써 작용할 수 있다. 대안적으로 이러한 억제제는 리간드 결합 부위 또는 EGFR 수용체의 그 일부를 점유하여 수용체에 그의 천연 리간드가 접근하지 못하게 함으로써 그의 정상적인 생물학적 활성이 방지 또는 감소되도록 함으로써 작용할 수 있다. 대안적으로 이러한 억제제는 EGFR 폴리펩티드의 이량화 또는 EGFR 폴리펩티드와 다른 단백질의 상호작용을 조절하여 작용하거나, 또는 EGFR 의 유비큐틴화 및 세포내이입 분해를 증강시켜 작용할 수 있다. EGFR 키나아제 억제제는 비제한적으로, 저분자량 억제제, 항체 또는 항체 단편, 안티센스 구조물, 소형 억제성 RNA (즉, dsRNA 를 통한 RNA 방해; RNAi) 및 리보자임을 포함한다. 바람직한 구현예에서, EGFR 키나아제 억제제는 인간 EGFR 에 특이적으로 결합하는 소형 유기 분자 또는 항체이다.

EGFR 키나아제 억제제는 예를 들어 퀴나졸린 EGFR 키나아제 억제제, 피리도-피리미딘 EGFR 키나아제 억제제, 피리미도-피리미딘 EGFR 키나아제 억제제, 피롤로-피리미딘 EGFR 키나아제 억제제, 피라졸로-피리미딘 EGFR 키나아제 억제제, 페닐아미노-피리미딘 EGFR 키나아제 억제제, 옥신돌 EGFR 키나아제 억제제, 인돌로카르바졸 EGFR 키나아제 억제제, 프탈라진 EGFR 키나아제 억제제, 이소플라본 EGFR 키나아제 억제제, 퀴날론 EGFR 키나아제 억제제, 및 티르포스틴 EGFR 키나아제 억제제, 예컨대 하기 특허 공보에 기재된 것 및 상기 EGFR 키나아제 억제제의 모든 약제학적으로 허용가능한 염 및 용매화물을 포함한다: 국제 특허 공보 번호 WO 96/33980, WO 96/30347, WO 97/30034, WO 97/30044, WO 97/38994, WO 97/49688, WO 98/02434, WO 97/38983, WO 95/19774, WO 95/19970, WO 97/13771, WO 98/02437, WO 98/02438, WO 97/32881, WO 98/33798, WO 97/32880, WO 97/3288, WO 97/02266, WO 97/27199, WO 98/07726, WO 97/34895, WO 96/31510, WO 98/14449, WO 98/14450, WO 98/14451, WO 95/09847, WO 97/19065, WO 98/17662, WO 99/35146, WO 99/35132, WO 99/07701 및 WO 92/20642; 유럽 특허 출원 번호 EP 520722, EP 566226, EP 787772, EP 837063 및 EP 682027; 미국 특허 번호 5,747,498, 5,789,427, 5,650,415 및 5,656,643; 및 독일 특허 출원 번호 DE 19629652를 포함한다. 부가적인 저분자량 EGFR 키나아제 억제제의 비제한적 예는 "Traxler, P., 1998, Exp. Opin. Ther. Patents 8(12):1599-1625" 에 기재된 임의의 EGFR 키나아제 억제제를 포함한다.

본 원에 사용된 바와 같이 "EGFR 키나아제 억제제" 는 하기 화학식 1 의 화합물인 것이 바람직하다:

[식 중,

m 은 1, 2 또는 3 이고;

각 R¹ 은 수소, 할로, 히드록시, 아미노, 히드록시아미노, 카르복시, (C₁-C₄)알콕시카르보닐, 니트로, 구아니디노, 우레이도, 카르바모일, 시아노, 트리플루오로메틸, (R⁶)₂N-카르보닐 및 페닐-W-알킬 (식 중, W 는 단일 결합, O, S 및 NH 로부터 선택됨)로부터 독립적으로 선택되거나;

또는 각 R¹ 은 시아노-(C₁-C₄)-알킬 및 R⁹ {식 중, R⁹ 는 R⁵, R⁵O, (R⁶)₂N, R⁷C(=O), R⁵ONH, A 및 R⁵Y 로 이루어진 군으로부터 선택되고; R⁵ 는 (C₁-C₄)알킬이고; R⁶ 은 수소이거나 또는 상동이거나 상이한 R⁵ 이고; R⁷ 는 R⁵, R⁵O 또는 (R⁶)₂N 이고; A 는 피페리디노-, 모르폴리노, 피롤리디노 및 4-R⁶-피페라진-1-일, 이미다졸-1-일, 4-피리돈-1-일, 카르복시-(C₁-C₄)-알킬, 페녹시, 페닐, 페닐술파닐, (C₂-C₄)-알케닐, (R⁶)₂-N-카르보닐-(C₁-C₄)-알킬로부터 선택되고; Y 는 S, SO, SO₂ 로부터 선택되고; (R⁶)₂N 에서 알킬 부분은 할로 또는 R⁹ (식 중, R⁹는 상기에서 정의된 바와 같음)로 임의 치환되고, R⁵ 및 R⁵O에서 알킬 부분은 할로, R⁶O 또는 R⁹ (식 중, R⁶ 및 R⁹ 는 상기에서 정의된 바와 같음)로 임의 치환되고, 여기서 생성 기는 할로 또는 R⁹ 로 임의 치환되나, 단 질소, 산소 또는 황 원자 및 또 다른 헤테로원자는 동일한 탄소 원자에 부착될 수 없으며, 또한 3 개 이하의 "R⁹" 단위가 R¹ 에 포함될 수 있음} 이거나;

또는, 각 R¹ 는 R⁵-술포닐아미노, 프탈이미도-(C₁-C₄)-알킬술포닐아미노, 벤즈아미도, 벤젠술포닐아미노, 3-페닐우레이도, 2-옥소피롤리딘-1-일, 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 및 R¹⁰-(C₂-C₄)-알카노일아미노 (식 중, R¹⁰ 은 할로, R⁶O, (C₂-C₄)-알카 노일옥시, R⁷C(=O) 및 (R⁶)₂N 으로부터 선택됨)으로부터 선택되고; 여기서, R¹ 에서 상기 벤즈아미도 또는 벤젠술포닐아미노 또는 페닐 또는 페녹시 또는 아닐리노 또는 페닐술파닐 치환기는 1 또는 2 개의 할로겐, (C₁-C₄)알킬, 시아노, 메탄술포닐 또는 (C₁-C₄)-알콕시 치환기를 임의로 포함할 수 있거나;

또는, 임의의 2 개의 R¹ 은 이들이 부착되는 탄소와 함께, 산소, 황 또는 질소로부터 선택된 적어도 1 또는 2 개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 8 원 고리를 포함하고; 여기서, 알킬기 및 알콕시 또는 알킬아미노기의 알킬부분은 직쇄형일 수 있거나 또는 3 개 이상의 탄소로 이루어진 경우에는 분지형 또는 환형일 수 있고;

R² 는 수소 및 임의 치환된 (C₁-C₆)-알킬로부터 선택되고;

n 은 1 또는 2 이고, 각 R³ 은 수소, (C₁-C₆)-알킬, 아미노, 할로, 히드록시로부터 독립적으로 선택되고;

R⁴ 는 아지도 또는 R¹¹-에티닐(식 중, R¹¹ 은 수소, 임의 치환된 (C₁-C₆)알킬로부터 선택되며, 여기서 치환기는 수소, 아미노, 히드록시, R⁵O, R⁵NH 및 (R⁵)₂N 으로부터 선택됨)이다].

더욱 특히, 본 발명에 따른 EGFR 키나아제 억제제는 하기 화학식 1 의 화합 물에 관한 것이다: 화학식 1 중, m, n, R¹ 및 R³ 이 상기에서 정의된 바와 같고, R² 는 수소이고, R⁴ 는 R¹¹-에티닐(식 중, R¹¹ 은 수소, 임의 치환된 (C₁-C₆)-알킬로부터 선택되고, 여기서 치환기는 수소, 아미노, 히드록시, R⁵O, R⁵NH 및 (R⁵)₂N 으로부터 선택됨)이거나 또는 R⁴ 는 아지도임.

본 발명에 따른 EGFR 키나아제 억제제는 또한 하기 화학식 1 의 화합물에 관한 것이다: 화학식 1 중, n 은 상기에서 정의된 바와 같고, m 은 1 또는 2 이고, 각 R¹ 은 수소, 히드록시, 아미노, 히드록시아미노, 카르복시, 니트로, 카르바모일, 우레이도; R⁶O, (C₂-C₄)-알카노일옥시, HOC(=O), A 및 (R⁶)₂N, R⁶OKO, R⁶OKNH, CN 및 페닐; R⁵NH 임의 치환된 할로, (C₂-C₄)-알카노일옥시, R⁶O, R⁷C(=O), (R⁶)₂N,A, R⁶OKO, R⁶OKNH, C₆H₅Y, CN; (R⁶)₂N(C=O), R⁵ONH, R⁵S, (C₁-C₄)-알킬술포닐아미노, 프탈이미도-(C₁-C₄)-알킬술포닐아미노, 3-페닐우레이도, 2-옥소피롤리딘-1-일, 2,5-디옥소피롤리딘-1-일, 할로-(C₂-C₄)-알카노일아미노, 히드록시-(C₂-C₄)-알카노일아미노, (C₂-C₄)-알카노일옥시-(C₂-C₄)알카노일아미노, (C₁-C₄)-알콕시-(C₂-C₄)-알카노일아미노, 카르복시-(C₂-C₄)-알카노일아미노, (C₁-C₄)-알콕시카르보닐-(C₂-C₄)-알카노일아미 노, 카르바모일-(C₂-C₄)-알카노일아미노, N-(C₁-C₄)알킬카르바모일-(C₂-C₄)-알카노일아미노, N,N-디-[(C₁-C₄)-알킬]카르바모일-(C₂-C₄)-알카노일아미노, 아미노-(C₂-C₄)-알카노일아미노, (C₁-C₄)-알킬-아미노-(C₂-C₄)-알카노일아미노, 디-(C₁-C₄)-알킬-아미노-(C₂-C₄)-알카노일아미노로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R¹ 내 상기 페닐 또는 페녹시 또는 아닐리노 치환기는 1 또는 2 개의 할로겐, (C₁-C₄)-알킬 또는 (C₁-C₄)-알콕시치환기를 임의로 가질 수 있거나; 또는 임의의 2 개의 R¹ 은 이들이 부착되는 탄소와 함께, 산소, 황 또는 질소로부터 선택된 적어도 1 개 또는 2 개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 8 원 고리를 포함하고; 여기서 알킬기 및 알콕시 또는 알킬아미노기의 알킬부분은 직쇄형일 수 있거나 또는 3 개 이상의 탄소로 이루어진 경우에는 분지형 또는 환형일 수 있고; 각 R³ 은 수소, 메틸, 에틸, 아미노, 할로 및 히드록시로부터 독립적으로 선택되고; R⁴ 는 R¹¹-에티닐(식 중, R¹¹ 이 수소임)임.

더욱 특히, 본 발명에 따른 EGFR 키나아제 억제제는 하기 화학식 1 의 화합물에 관한 것이다: 화학식 1 중, m, n, R¹, R² 및 R³ 이 상기에서 정의된 바와 같고, 각 R¹ 은 수소, 히드록시, 아미노, 히드록시아미노, 니트로, 카르바모일, 우레 이도, R⁶O, HOC(=O), H2NC(=O), 할로로 임의 치환된 R⁵ ; R⁶O, (C₂-C₄)-알카노일옥시, HOC(=O), (R⁶)2N, A, 페닐, 할로로 임의 치환된 R⁵O; R⁵NH, (R⁵)₂N, R⁵NH₂, (R⁵)₂NH, R⁵NHC(=O), (R⁵)₂NC(=O), R⁵S, 페닐-(C₂-C₄)-알콕시이고, 여기서 R¹ 내 상기 페닐 치환기는 1 또는 2 개의 할로, R⁵ 또는 R⁵O 치환기를 임의로 가질 수 있거나; 또는 임의의 2 개의 R¹ 은 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 산소, 황 또는 질소로부터 선택된 적어도 1 또는 2 개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 8 원 고리를 포함하고; 여기서 알킬기 및 알콕시 또는 알킬아미노기의 알킬 부분은 직쇄형일 수 있거나 또는 3 개 이상의 탄소로 이루어진 경우에는 분지형 또는 환형일 수 있음.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 저분자량 EGFR 키나아제 억제제의 구체적인 바람직한 예는, 하기를 포함한다: [6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린-4-일]-(3-에티닐페닐) 아민 (또한 OSI-774, 엘로티닙, 또는 Tarceva™ (엘로티닙 HCl) 로 도 공지됨; OSI Pharmaceuticals/Genentech/Roche) (미국 특허 제 5,747,498 호; 국제 특허 공보 제 WO 01/34574 호, 및 Moyer, J.D. 등 (1997) Cancer Res. 57:4838-4848); CI-1033 (이전에는 PD183805 로 공지됨; Pfizer) (Sherwood 등, 1999, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 40:723); PD-158780 (Pfizer); AG-1478 (University of California); CGP-59326 (Novartis); PKI-166 (Novartis); EKB-569 (Wyeth); GW-2016 (또한 GW-572016 또는 라파티닙 디토실레이트로도 공지됨; GSK); 및 제피티닙 (또한 ZD 1839 또는 Iressa™ 로도 공지됨; Astrazeneca) (Woodburn 등, 1997, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 38:633). 본 발명에 따라 사용할 수 있는 특히 바람직한 저분자량 EGFR 키나아제 억제제는 [6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린-4-일]-(3-에티닐페닐) 아민(즉, 엘로티닙), 그의 염산염 (즉, 엘로티닙 HCl, Tarceva™), 또는 기타 염 형태 (예, 엘로티닙 메실레이트) 이다.

가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 EGFR 키나아제 억제제는 화합물 엘로티닙 HCl (또한 Tarceva™ 으로도 공지됨)에 관한 것이다.

바람직한 항체-기재 EGFR 키나아제 억제제는, 그의 천연 리간드를 통해서 EGFR 활성화를 부분적 또는 완전히 차단할 수 있는 임의의 항-EGFR 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 항체-기재 EGFR 키나아제 억제제의 비제한적인 예는 하기에 기재된 것을 포함한다: Modjtahedi, H., 등, 1993, Br. J. Cancer 67:247-253; Teramoto, T., 등, 1996, Cancer 77:639-645; Goldstein 등, 1995, Clin. Cancer Res. 1:1311-1318; Huang, S. M., 등, 1999, Cancer Res. 15:59(8):1935-40; 및 Yang, X., 등, 1999, Cancer Res. 59:1236-1243. 따라서, EGFR 키나아제 억제제는 단일클론 항체 Mab E7.6.3 (Yang, X.D. 등 (1999) Cancer Res. 59:1236-43), 또는 Mab C225 (ATCC Accession No. HB-8508) 일 수 있고, 또는 이의 결합 특이성을 가지는 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 적합한 단일클론 항체 EGFR 키나아제 억제제의 비제한적인 예는 IMC-C225 (또한 세툭시마브 또는 Erbitux™ 로 공지됨; Imclone Systems), ABX-EGF (Abgenix), EMD 72000 (Merck KgaA, Darmstadt), RH3 (York Medical Bioscience Inc.), 및 MDX-447 (Medarex/Merck KgaA) 를 포함한 다.

선택된 숙주 동물, 예를 들어 돼지, 소, 말, 토끼, 염소, 양 및 쥐에 적합한 항원 또는 항원요소를 투여하는 공지된 방법을 통해, 부가적인 항체-기재 EGFR 키나아제 억제제를 만들 수 있다. 항체 생산을 증강시키기 위해 당해 분야에 공지된 다양한 보조제를 사용할 수 있다.

본 발명을 실시하는데 유용한 항체는 다중클론일 수 있지만, 단일클론 항체가 바람직하다. 배양 중 계속적인 세포주를 통해 항체 분자의 생산을 제공하는 임의 기술을 이용해 EGFR 에 대항한 단일클론 항체를 제조 및 단리 할 수 있다. 제조 및 단리 기술은 비제한적으로, 문헌 [Kohler and Milstein (Nature, 1975, 256: 495-497)] 에 처음으로 기재된 하이브리도마 기술; 인간 B-세포 하이브리도마 기술 (Kosbor 등, 1983, Immunology Today 4:72; Cote 등, 1983, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 80: 2026-2030); 및 EBV-하이브리도마 기술 (Cole 등, 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96) 을 포함한다.

대안적으로 단일 사슬 항체 생산에 대해 설명한 기술 (미국 특허 제 4,946,778 호 참고) 을 항-EGFR 단일 사슬 항체 생산에 채택할 수 있다. 본 발명을 실행하는데 유용한 항체-기재 EGFR 키나아제 억제제는 또한 비제한적으로, 무손상 항체 분자의 펩신 소화를 통해 생성된 F(ab').서브.2 단편, 및 F(ab').서브.2 단편의 이황가교를 환원시켜 생성된 Fab 단편을 포함하는 항-EGFR 항체 조각을 포함한다. 대안적으로 Fab 및/또는 scFv 발현 라이브러리를 구축하여 (Huse 등, 1989, Science 246: 1275-1281 참고) EGFR 에 대한 요구되는 특이성을 가지는 단편의 빠른 확인을 가능하게 할 수 있다.

모노클론 항체 및 항체 단편의 제조 및 단리 기술은 당업계에 익히 공지되어 있고, 문헌 [Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory 및 J.W. Goding, 1986, Monovolonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, London]에 기재되어 있다. 인간화 항-EGFR 항체 및 항체 단편이 또한 문헌 [Vaughn, T.J. 등 1998, Nature Biotech. 16:535-539] 및 이 문헌에 인용문에 기재된 것과 같은 공지된 기술에 따라 제조될 수 있고, 상기 항체 또는 이의 단편은 또한 본 발명을 실시하는데 유용하다.

본 발명에 사용하기 위한 EGFR 키나아제 억제제는 대안적으로는 안티센스 올리고뉴클레오티드 구축물을 기재로 할 수 있다. 안티센스 RNA 분자 및 안티센스 DNA 분자를 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 세포내 EGFR mRNA 에 결합해서 단백질 번역을 방지하거나 mRNA 분해를 증가시켜, EGFR 키나아제 단백질 및 이에 따른 활성 수준을 감소시킴으로써 EGFR mRNA 의 번역을 직접 차단하도록 작용할 것이다. 예를 들어, EGFR 을 인코딩하는 mRNA 전사 서열의 독특한 영역에 상보적인 약 15 개 이상의 염기의 안티센스 뉴클레오티드는 종래의 포스포디에스테르 기술에 의해 합성될 수 있고, 예를 들어 정맥내 주사 또는 주입에 의해 투여될 수 있다. 그 서열이 공지된 유전자의 유전자 발현을 특이적으로 억제하는 안티센스 기술을 사용하는 방법은 당업계에 주지되어 있다 (예를 들어, 미국 특허 6,566,135; 6,566,131; 6,365,354; 6,410,323; 6,107,091; 6,046,321; 및 5,981,732 참조).

작은 억제성 RNA (small inhibitory RNA (siRNA)) 는 또한 본 발명에 사용하기 위한 EGFR 키나아제 억제제로도 기능할 수 있다. EGFR 유전자 발현은 종양, 대상체 또는 세포를 작은 이중 가닥 RNA (small double stranded RNA (dsRNA)), 또는 작은 이중 가닥 RNA 의 제조를 야기하는 벡터 또는 구축물과, EGFR 의 발현이 특이적으로 억제 (즉, RNA 간섭 (RNA interference) 또는 RNAi) 되도록 접촉시킴으로써 감소될 수 있다. 적절한 dsRNA 또는 dsRNA-인코딩 벡터의 선택 방법은 그 서열이 공지된 유전자에 대해 당업계에 주지되어 있다 (예를 들어, Tuschi, T. 등 (1999) Genes Dev. 13(24):3191-3197; Elbashir, S. M. 등 (2001) Nature 411: 494-498; Hannon, G.J. (2002) Nature 418:244- 251; McManus, M. T. 및 Sharp, P. A. (2002) Nature Reviews Genetics 3:737-747; Bremmelkamp, T. R. 등 (2002) Science 296: 550-553; 미국 특허 6,573,099 및 6,506,559; 및 국제 특허 공개공보 WO 01/36646, WO 99/32619, 및 WO 01/68836 참조).

리보자임은 본 발명에 사용하기 위한 EGFR 키나아제 억제제로도 작용할 수 있다. 리보자임은 RNA 의 특이적 절단을 촉매작용할 수 있는 효소성 RNA 분자이다. 리보자임 작용 메카니즘은 상보적인 표적 RNA 에 대한 리보자임 분자의 서열 특이적 혼성화(hybridization)에 이은 핵분해적 절단을 수반한다. 이로 인해, EGFR mRNA 서열의 핵분해적 절단을 특이적이고도 효율적으로 촉매작용하는 유전자조작된 해머헤드 모티프 리보자임 분자 (engineered hammerhead motif ribozyme molecule) 는 본 발명의 범주 내에서 유용하다. 임의의 잠재적인 RNA 표적 내의 특이적 리보자임 절단 부위는 초기에는, 전형적으로 하기의 서열, GUA, GUU 및 GUC 를 포함하는, 리보자임 절단 부위에 대한 표적 분자를 스캐닝함으로써 동정된다. 절단 부위를 함유하는 표적 유전자의 영역에 대응하는 약 15 내지 20 개의 리보뉴클레오티드의 짧은 RNA 서열이 일단 동정되면, 올리고뉴클레오티드 서열을 부적합하게 만들 수 있는 이차 구조물과 같은 예상된 구조적 특징에 대해 평가될 수 있다. 후보 표적의 적합성은 또한 예를 들어, 리보뉴클레아제 보호 검정을 이용하여, 상보적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화에 대한 이의 접근성을 시험함으로써 평가할 수 있다.

EGFR 키나아제 억제제로서 유용한 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 리보자임은 둘 다 공지된 방법으로 제조될 수 있다. 이는 예를 들어, 고체 상 포스포라마다이트 화학적 합성 (solid phase phosphoramadite chemical synthesis) 과 같은 화학적 합성 기술을 포함한다. 대안적으로는, 안티-센스 RNA 분자는 RNA 분자를 인코딩하는 DNA 서열의 시험관 내 또는 생체 내 전사에 의해 생성될 수 있다. 이러한 DNA 서열은 T7 또는 SP6 폴리머라아제 촉진제와 같은 적합한 RNA 폴리머라아제 촉진제를 혼입한 다양한 벡터 내로 혼입될 수 있다. 세포내 안정성 및 반감기를 증가시킴으로써 본 발명의 올리고뉴클레오티드에 대한 각종 변형이 도입될 수 있다. 가능한 변형에는, 이에 제한되지는 않으나, 분자의 5' 및/또는 3' 말단에의 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드의 측면 서열 (flanking sequence) 의 첨가, 또는 올리고뉴클레오티드 백본 내에서 포스포디에스테라제 연결보다는 포스포로티오에이트 또는 2'-O-메틸의 사용이 포함된다.

본원 하기에 나타낸 데이타는 보르테조밉과 EGFR 키나아제 억제제의 공동투여가 NSCLC, 직장결장암 또는 췌장암과 같은 진행 암의 치료에 효과적인 것을 보여준다. 따라서, 본 발명은 환자의 종양 또는 종양 전이를 치료하기 위한 약제 제조 방법을 제공하며, 이는 치료적 유효량의 EGFR 키나제 억제제 및 보르테조밉 조합이 사용되는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 조합은 환자에게 동시 또는 순차적 투여하기 위한 의도이다. 이러한 방식에서, 환자의 암은 NSCLC, 직장결장암 또는 췌장암을 포함해 본원 하기에 지칭되는 것 중 어느 것일 수 있다. 바람직한 구현예에서, 화합물이 순차적으로 투여되는 경우에, 보르테조밉이 EGFR 키나아제 억제제보다 먼저 투여된다. 한 구현예에서, 치료될 종양 또는 종양 전이는 직장결장 종양 또는 종양 전이이다.

본 발명의 임의 방법 중에서, 제제의 동시 투여는 동시에 제제를 개별적으로 투여함으로써 수행될 수 있거나 또는 고정된 조합으로서 함께 투여됨으로써 수행될 수 있다. 또한, 본 발명의 임의 방법 중에서, 제제의 순차적 투여는 임의 순서대로 일 수 있다.

더욱이, 바람직하게는, 하나 이상의 기타 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 상기 제제의 효과를 증대시키는 화합물이 사용된다.

본 발명의 문맥에서, 추가의 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 그러한 제제의 효과를 증대시키는 화합물에는 예를 들면 하기가 포함된다: 알킬화제, 또는 알킬화 작용을 지닌 제제, 예컨대 시클로포스파미드 (CTX; 예를 들면 cytoxan®), 클로람부실 (CHL; 예를 들면 leukeran®), 시스플라틴 (CisP; 예를 들면 platinol®) 부술판 (예를 들면 myleran®), 멜팔란, 카르무스틴 (BCNU), 스트렙토조토신, 트리에틸렌멜라민 (TEM), 미토마이신 C, 등; 항대사물질, 예컨대 메토트렉세이트 (MTX), 에토포사이드 (VP16; 예를 들면 vepesid®), 6-메르캅토퓨린 (6MP), 6-티옥구아닌 (6TG), 시타라빈 (Ara-C), 5-플루오로우라실 (5-FU), 카페시타빈 (예를 들면 Xeloda®), 다카르바진 (DTIC), 등; 항생제, 예컨대 악티노마이신 D, 독소루비신 (DXR; 예를 들면 adriamycin®), 다우노루비신 (다우노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신 등; 알칼로이드, 예컨대 빈카 알칼로이드 예컨대 빈크리스틴 (VCR), 빈블라스틴, 등; 및 기타 항종양제, 예컨대 파클리탁셀 (예를 들면 taxol®) 및 팩티탁셀 유도체, 세포증식 억제제, 글루코코르티코이드 예컨대 덱사메타손 (DEX; 예를 들면 decadron®) 및 코르티코스테로이드 예컨대 프레드니손, 뉴클레오시드 효소 억제제 예컨대 히드록시우레아, 아미노산 감손 효소 예컨대 아스파라기나아제, 류코보린 및 기타 폴산 유도체, 및 유사한 다른종류의 항종양제. 하기 제제가 또한 추가 제제로서 사용될 수 있다: 아르니포스틴 (예를 들면 ethyol®), 댁티노마이신, 메클로레타민 (질소 머스타드), 스트렙토조신, 시클로포스파미드, 로르누스틴 (CCNU), 독소루비신 리포 (예를 들면 doxil®), 젬시타빈 (예를 들면 gemzar®), 다우노루비신 리포 (예를 들면 daunoxome®), 프로카르바진, 미토마이신, 도세탁셀 (예를 들면 taxotere®), 알데스류킨, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 클라드리빈, 캄프토테신, CPT 11 (이리노테칸), 10-히드록시 7-에틸-캄프토테신 (SN38), 플록스우리딘, 플루다라빈, 이포스파미드, 이다루비신, 메스 나, 인터페론 알파, 인터페론 베타, 미톡산트론, 토포테칸, 류프롤리드, 메게스트롤, 멜팔란, 메르캅토퓨린, 플리카마이신, 미토탄, 페가스파르가아제, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 타목시펜, 테니포시드, 테스토락톤, 티오구아닌, 티오테파, 우라실 머스타드, 비노렐빈, 클로람부실.

본 발명에서는, 추가로 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물이 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 사용 및 의도되고, 여기서 더욱이 하나 이상의 항 호르몬제가 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법이 제공된다. 본원에서 사용된 바와 같이 용어 "항 호르몬제"에는 종양 상에 호르몬의 작용을 조절 또는 억제작용하는 천연 또는 합성 유기 또는 펩티드성 화합물이 포함된다.

항호르몬제에는 예를 들면 하기가 포함된다: 스테로이드 수용체 길항제, 항-에스트로겐 예컨대 타목시펜, 라록시펜, 아로마타아제 억제 4(5)-이미다졸, 다른 아로마타아제 억제제, 42-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY 117018, 오나프리스톤 및 토레미펜 (예를 들면 Fareston®); 항-안드로겐 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세레린; 및 상기 중 임의의 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 여포자극호르몬 (FSH), 갑상선자극호르몬 (TSH) 및 황체형성호르몬 (LH) 및 LHRH (황체형성호르몬 방출호르몬)과 같은 당단백질 호르몬의 작용제 및/또는 길항제; Zoladex® (AstraZeneca)로 시판되고 있는 LHRH 작용제 고세레린 아세테이트; LHRH 길항제 D-알라닌아미드 N-아세틸-3-(2-나프탈레닐)-D-알라닐-4-클로로-D-페닐알라닐-3-(3-피리디닐)-D-알라닐-L-세릴-N6- (3-피리디닐카르보닐)-L-리실-N6-(3-피리디닐카르보닐)-D-리실-L-류실-N6-(1-메틸에틸)-L-리실-L-프롤린 (예를 들면, Antide®, Ares-Serono); LHRH 길항제 가니레릭스 아세테이트; 스테로이드성 항-안드로겐 시프로테론 아세테이트 (CPA) 및 Megace® (Bristol-Myers Oncology)로 시판되고 있는 메게스트롤 아세테이트; Eulexin® (Schering Corp.)로 시판되고 있는 비스테로이드성 항-안드로겐 플루타미드 (2-메틸-N-[4,20-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐프로판아미드; 비스테로이드성 항-안드로겐 닐루타미드, (5,5-디메틸-3-[4-니트로-3-(트리플루오로메틸-4'-니트로페닐)-4,4-디메틸-이미다졸리딘-디온); 및 기타 비허용 수용체에 대한 길항제, 예컨대 RAR, RXR, TR, VDR 등에 대한 길항제.

화학요법에서 상기에 기재된 세포독성제 및 다른 항암제의 사용은 일반적으로 암치료 기술에서는 익히 특징적이며, 본원에서의 이들의 용도는 내성 및 효능의 모니터링 및 투여 경로 및 투여량의 제어에 대한 동일한 고려사항 하에서는 약간의 조정으로 부합된다. 예를 들면, 세포독성제의 실질적 투여량은 조직배양법(histoculture method)으로 측정된 환자의 배양 세포 반응에 따라 가변적일 수 있다. 일반적으로 투여량은 추가 다른 제제의 부재하에서 사용된 양과 비교시 감소될 것이다.

유효 세포독성제의 전형적인 투여량은 제조자가 제안하는 범위내에 있을 수 있고, 실험관 내 반응 또는 동물 모델에서의 반응들에 의해 지적되는 경우에는, 상기 투여량은 농도 또는 양 크기의 약 1 자리수까지 감소될 수 있다. 따라서, 실질적 투여량은 일차 배양된 악성 세포 또는 조직배양된 조직 시료의 실험관내 응 답성 또는 적절한 동물 모델에서 관찰되는 응답을 기준으로 하는 치료방법의 효능, 의사의 판단 및 환자의 상태에 따라 좌우된다.

본 발명의 문맥에서, 상기 추가의 기타 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제 중에서 젬시타빈, 시스플라틴 및 카르보플라틴의 군으로부터 선택된 화합물 중 임의의 하나 또는 조합한 것이 바람직하다.

본 발명은 추가로 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물이 동시 또는 순차적으로 환자에게 투여되도록 사용 및 의도되며, 여기서 더욱이 하나 이상의 혈관형성 억제제가 사용되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법을 제공한다.

항혈관형성제에는 예를 들면 하기가 포함된다: VEGFR 억제제, 예컨대 SU-5416 및 SU-6668 (South San Francisco, Calif., USA의 Sugen Inc.), 또는 예를 들면 국제출원 WO 99/24440, WO 99/62890, WO 95/21613, WO 99/61422, WO 98/50356, WO 99/10349, WO 97/32856, WO 97/22596, WO 98/54093, WO 98/02438, WO 99/16755 및 WO 98/02437 및 U.S. 특허 5,883,113, 5,886,020, 5,792,783, 5,834,504 및 6,235,764에 기재된 것; VEGF 억제제, 예컨대 IM862 (Kirkland, Wash., USA의 Cytran Inc.); Ribozyme (Boulder, Colo.)사의 합성 리보자임인 엔지오자임(angiozyme) 및 VEGF 에 대한 항체, 예컨대 베바시주마브 (예를 들면 Avastin™, Genentech, South San Francisco, CA), VEGF 에 대한 재조합 인간화 항체; 인테그린 수용체 길항제 및 인테그린 길항제, 예컨대 α_vβ₃, α_vβ₅ 및 α_vβ₆ 인테그린, 및 이의 서브타입, 예를 들면 실렌지타이드 (EMD 121974), 또는 항-인테그린 항체, 예컨대 α_vβ₃ 특이적 인간화 항체 (예를 들면 Vitaxin®); 인자, 예컨대 IFN-알파 (U.S. 특허 41530,901, 4,503,035 및 5,231,176); 혈관형성억제인자 및 플라스미노겐 단편 (예를 들면 크링글 1-4, 크링글 5, 크링글 1-3 (O'Reilly, M. S. 등 (1994) Cell 79:315-328; Cao 등 (1996) J. Biol. Chem. 271: 29461-29467; Cao 등 (1997) J. Biol. Chem. 272:22924-22928); 엔도스타틴 (O'Reilly, M. S. 등 (1997) Cell 88:277; 및 국제특허공보 WO 97/15666); 트롬보스폰딘 (TSP-1; Frazier, (1991) Curr. Opin. Cell Biol. 3:792); 혈소판 인자 4 (PF4); 플라스미노겐 활성인자/유로키나아제 억제제; 유로키나아제 수용체 길항제; 헤파리나아제; 퓨마질린 유사체, 예컨대 TNP-4701; 수라민 및 수라민 유사체; 혈관억제 스테로이드; bFGF 길항제; flk-1 및 flt-1 길항제; 항-혈관형성제, 예컨대 MMP-2 (매트릭스-메탈로프로티나아제 2) 억제제 및 MMP-9 (매트릭스-메탈로프로티나아제 9) 억제제. 유용한 매트릭스 메탈로프로티나아제 억제제의 예는 국제특허 공보 WO 96/33172, WO 96/27583, WO 98/07697, WO 98/03516, WO 98/34918, WO 98/34915, WO 98/33768, WO 98/30566, WO 90/05719, WO 99/52910, WO 99/52889, WO 99/29667 및 WO 99/07675, 유럽 특허 818,442, 780,386, 1,004,578, 606,046, 및 931,788; 영국 특허 공보 9912961 및 U.S. 특허 5,863,949 및 5,861,510 에 기재되어 있다. 바람직한 MMP-2 및 MMP-9 억제제는 MMP-1 을 억제하는 활성이 거의 없거나 전혀 없는 것이다. 다른 매트릭스 메탈로프로티나아제(즉, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-1O, MMP-11, MMP-12 및 MMP-13)와 비교시 MMP-2 및/또는 MMP-9를 선택적으로 억제하는 것이 더욱 바람직하다.

본 발명은 추가로, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물이 환자에게 동시에 또는 순차적으로 투여되도록 사용 및 의도되며, 여기서 더욱이 하나 이상의 종양 세포 친-세포자멸사제(pro-apoptotic) 또는 세포자멸사 자극제가 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법을 제공한다.

본 발명은 추가로, 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물이 환자에게 동시에 또는 순차적으로 투여되도록 사용 및 의도되며, 여기서 더욱이 하나 이상의 신호전달 억제제가 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법을 제공한다.

신호 전달 억제제에는 예를 들면 하기가 포함된다: erbB2 수용체 억제제, 예컨대 유기분자, 또는 erbB2 수용체에 결합하는 항체, 예를 들면 트라스튜주마브 (예를 들면 Herceptin®); 다른 단백질 티로신-키나아제의 억제제, 예를 들면 이미티닙 (예를 들면 Gleevec®); 라스 억제제; 라프 억제제; MEK 억제제; mTOR 억제제; 사이클린 의존 키나아제 억제제; 단백질 키나아제 C 억제제; 및 PDK-1 억제제 (상기 억제제의 여러 예 및 암치료 임상 시험에서의 이들 용도 설명에 대한 Dancey, J. 및 Sausville, E.A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2:92-313 참조).

ErbB2 수용체 억제제에는 예를 들면 하기가 포함된다: ErbB2 수용체 억제제, 예컨대 GW-282974 (Glaxo Wellcome plc), 단일클론 항체, 예컨대 AR-209 (The Woodlands, Tex., USA의 Aronex Pharmaceuticals Inc.) 및 erbB2 억제제, 예컨대 국제 공보 WO 98/02434, WO 99/35146, WO 99/35132, WO 98/02437, WO 97/13760, 및 WO 95/19970, 및 U.S. 특허 5,587,458, 5,877,305, 6,465,449 및 6,541,481 에 기재된 것.

본 발명은 추가로 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물이 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 사용 및 의도되며, 여기서 더욱이 항-HER2 항체 또는 이의 면역치료적으로 활성인 단편이 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법을 제공한다.

본 발명은 추가로 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물이 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 사용 및 의도되며, 여기서 더욱이 하나 이상의 항-증식제가 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법을 제공한다.

추가의 항증식제에는 예를 들면 하기가 포함된다: U.S.특허 6,080,769, 6,194,438, 6,258,824, 6,586,447, 6,071,935, 6,495,564, 6,150,377, 6,596,735 및 6,479,513, 및 국제 특허 공보 WO 01/40217 에 개시되고 청구된 화합물을 포함하는 효소 파르네실 단백질 전이효소의 억제제 및 수용체 티로신 키나아제 PDGFR의 억제제.

본 발명은 추가로 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물이 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 사용 및 의도되며, 여기서 더욱 이 COX II (시클로옥시게나아제 II) 억제제가 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법을 제공한다. 유용한 COX-II 억제제의 예에는 알레콕십 (예를 들면 Celebrex™), 발데콕십 및 로페콕십이 포함된다.

본 발명은 추가로 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물이 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 사용 및 의도되고, 여기서 더욱이 유효량의 이온 방사선으로 치료가 실시되며/실시되거나, 방사성 의약품이 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법을 제공한다.

방사선 원은 치료될 환자 외부 또는 내부일 수 있다. 상기 원이 환자 외부인 경우에, 상기 치료는 외부 방사선 요법(EBRT)으로서 공지된다. 상기 방사선 원이 환자 내부인 경우, 그 치료법은 급전치료(BT) 로 불리운다. 본 발명의 문맥에 사용되기 위한 방사성 원자는 이에 제한되는 것은 아니지만 라듐, 세슘-137, 이리듐-192, 아메리슘-241, 금-198, 코발트-57, 구리-67, 테크네튬-99, 요오드-123, 요오드-131 및 인듐-111을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 본 발명에 따른 EGFR 키나아제 억제제가 항체인 경우, 그 항체를 상기 방사선 동위 원소로 표지하는 것이 가능하다.

방사선 요법은 절개 불가능 또는 수술불가능 종양 및/또는 종양 전이 제어용 표준 치료법이다. 방사선 요법이 화학요법과 조합된 경우에 향상된 결과가 나타났다. 방사선 요법은, 목적 지역으로 전달된 고선량 방사가 종양 및 정상 조직 양자 모두 내의 생식 세포의 사멸을 초래한다는 원리에 기초한다. 방사 선 조사 요법은 일반적으로 방사선 흡수 선량률(Gy), 시간 및 분류 면에서 정의되고 종양학자에 의해 조심스럽게 정의되어야만 한다. 환자가 수용하는 방사선 양은 다양한 고려사항에 따라 좌우되나 두 가지 가장 중요한 것은 신체의 다른 결정적인 구조 또는 기관에 대한 종양의 위치 및 종양이 퍼진 정도이다. 방사선요법을 받고 있는 환자 치료의 전형적인 과정은, 1 주일에 5 일 동안 하루 1회 선량을 약 1.8 내지 2.0 Gy 으로, 환자에게 투여된 총 선량이 10 내지 80 Gy 으로 하여 1 내지 6 주 기간에 걸친 치료 일정일 것이다. 본 발명의 바람직한 구현예에는 인간 환자의 종양을 본 발명의 병용 치료 및 방사선으로 치료하는 경우, 상조 효과가 존재한다. 즉, 본 발명의 조합물을 포함하는 제제에 의한 종양 성장 억제는 방사선, 임의적으로는 추가의 화학요법제 또는 항암제와 조합되는 경우에 강화된다. 보조 방사선 요법의 파라미터는 예를 들어 국제 특허 공보 WO 99/60023 에 포함된다.

본 발명은 추가로 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물이 환자에게 동시에 또는 순차적으로 투여되도록 사용 및 의도되며, 여기서 더욱이 하나 이상의 항종양 면역 반응을 강화할 수 있는 제제가 사용되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이 치료를 위한 약제 제조 방법을 포함한다.

항종양 면역 반응을 강화할 수 있는 제제에는 예를 들면 하기가 포함된다: CTLA4 (cytotoxic lymphocyte antigen 4: 세포독성 림프구 항원) 항체 (예를 들면 MDX-CTLA4), 및 CTLA4를 차단할 수 있는 기타 제제. 본 발명에 사용될 수 있는 특이적 CTLA4 항체에는 U.S. 특허 6,682,736 에 기재된 것이 포함된다.

본 발명은 추가로 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물이 부가적 또는 초부가적 또는 상조적인 항암 효과를 나타내기에 유효하고 종양 성장을 억제하는데 유효한 양으로 환자에게 동시 또는 순차적으로 투여되도록 사용 및 의도되는 것을 특징으로 하는 종양 또는 종양 전이에 의해 야기된 부작용 감소를 위한 약제 제조 방법을 제공한다.

본 발명은 추가로 (i) 제 1 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 및 (ⅱ) 제 2 유효량의 보르테조밉을 암 치료를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법을 제공한다. 상기 방법에서, 암은 폐암 및 NSCLC 를 포함하여 본원 하기에 지칭된 임의의 암일 수 있다.

본 발명은 또한 (i) 제 1 치료 미달량(sub therapeutic first amount)의 EGFR 키나아제 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 및 (ⅱ) 제 2 치료 미달량의 보르테조밉을 암 치료를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법을 제공한다. 상기 방법에서, 암은 폐암 및 NSCLC 를 포함하여 본원 하기에 지칭된 임의의 암일 수 있다.

상술된 방법에서, 제 1 및 제 2 량의 투여 순서는 동시 또는 순차적일 수 있으며, 즉, 보르테조밉이 EGFR 키나아제 억제제 이전, EGFR 키나아제 억제제 이후, 또는 EGFR 키나아제 억제제와 동시에 투여될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 보르테조밉은 EGFR 키나아제 억제제 이전에 투여된다.

추가적으로, 본 발명은 EGFR 억제제 및 보르테조밉을 약제학적으로 허용가능한 담체 내에 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 추가로, (i) 제 1 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염; 및 (ii) 제 2 유효량의 보르테조밉을 포함하는, 특히 암에 사용되기 위한 약제학적 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 임의적으로 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 부형제를 포함한다.

본 발명은 추가로 (i) 제 1 치료 미달량의 EGFR 키나아제 억제제 엘로티닙 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염; 및 (ii) 제 2 치료 미달량의 보르테조밉을 포함하는, 특히 암에서 사용하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 임의적으로는 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 부형제를 포함한다.

바람직하게는, EGFR 키나아제 억제제는 엘로티닙이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "환자" 는 임의의 목적용으로 EGFR 키나아제 억제제를 이용하는 치료를 필요로 하는 인간, 더욱 바람직하게는 암 또는 전암증상 병태 또는 병변을 치료하기 위한 그러한 치료를 필요로 하는 인간을 지칭한다. 그러나, 용어 "환자"는 또한 다른 것들 중에서 EGFR 키나아제 억제제로 치료를 필요로 하는 비인간 동물, 바람직하게는 포유류, 예컨대 개, 고양이, 말, 소, 돼지, 양 및 비인간 영장류를 지칭할 수 있다.

바람직한 구현예에서, 환자는 암, 또는 전암 병태 또는 병변의 치료가 필요한 인간이다. 암은 바람직하게, EGFR 키나아제 억제제를 투여함으로써 부분적으로 또는 완전하게 치료가능한 임의 암이다. 암은, 예를 들어, 폐암, 비세포성폐 (NSCL) 암, 세기관지 세포 폐암, 골암(bone cancer), 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부의 암, 위장암, 위암, 결장암, 유방암, 자궁암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 호지킨 질병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직의 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장 또는 요관암, 신장세포 암종, 신우 암종, 중피종, 간세포암, 담도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 중추 신경계 (CNS) 신생물, 척추 종양, 신경아교종, 뇌줄기신경아교종, 다형성아교모세포종, 별아교세포종, 신경초종, 뇌실막세포종, 속질모세포종, 수막종, 편평세포 암종, 뇌하수체 샘종, 상기 임의 암들의 난치성 형태, 또는 상기 암들의 하나 이상의 조합일 수 있다. 전암 병태 또는 병변은 예를 들어, 구강 백반, 광선각화증 (태양각화증), 결장 또는 직장의 전암 용종, 위상피 이형성, 샘종 이형성, 유전성 비용종성 결장암 증후군 (HNPCC), 바레트 식도, 방광 이형성, 및 전암 자궁경부 병태일 수 있다. 바람직하게 암은 결장암, 가장 바람직하게 직장결장암이다. 또한 바람직하게 암은 폐암, 가장 바람직하게 비소세포성 폐암 (NSCL) 이다. 또한 바람직하게는 암은 췌장암이다.

본 발명의 목적 상, 보르테조밉과 EGFR 키나아제 억제제 (두 성분은 이후 "두 활성제" 라고 지칭함) 의 "공동 투여" 및 "공동 투여함" 은, 병용 요법의 이점을 얻기 위해 고안된 적합한 투여 계획의 일부로서 두 활성제가 투여되는, 개별적으로 또는 함께 두 활성제를 임의 투여하는 것을 의미한다. 따라서 두 활성제는 동일한 약제학적 조성물의 일부로서 또는 개별 약제학적 조성물로서 투여될 수 있다. 보르테조밉은 EGFR 키나아제 억제제의 투여 이전, 동시 또는 이후에, 또는 이와 조합하여 투여될 수 있다. EGFR 키나아제 억제제가 환자에게 반복되는 간격으로 예를 들어 표준 치료 과정 중에 투여될 때, 보르테조밉은 EGFR 키나아제 억제제의 각 투여 이전, 동시 또는 이후에, 또는 이와 조합하여, 또는 EGFR 키나아제 억제제 치료와는 다른 간격으로, 또는 EGFR 키나아제 억제제의 치료 과정 이전, 치료 동안 임의 시간에 또는 이후에 단독 투여될 수 있다.

당해 분야에 공지되고, 예를 들어 국제 특허 출원 제 WO 01/34574 호 에 기재된 바와 같이, 환자가 치료받고 있는 암에 (효능 및 안정성 둘 모두의 관점에서)가장 효과적인 치료를 제공하기 위한 투여 계획에 따라 환자에게 EGFR 키나아제 억제제가 통상적으로 투여될 것이다. 본 발명의 치료 방법을 수행할 때, EGFR 키나아제 억제제는 당해 분야에 공지된 효과적인 임의 방식으로, 예컨대 경구, 국소, 정맥내, 복막내, 근육내, 관절내, 피하조직, 비강내, 안구내, 질, 직장, 또는 진피내 경로로, 치료되는 암의 유형에 따라서, 사용되는 EGFR 키나아제 억제제의 유형에 따라서 (예, 소분자, 항체, RNAi 또는 안티센스 구조물), 및 처방 의사의 의학적 판단에 기초하여, 예를 들어 출판된 임상 연구 결과에 기초하여 투여할 수 있다.

EGFR 키나아제 억제제의 투여량 및 EGFR 키나아제 억제제의 투여 시기는 치료되는 환자의 유형 (종, 성별, 연령, 체중 등) 및 병태, 치료되는 질병 또는 병태의 중증도, 및 투여 경로에 의존적일 것이다. 예를 들면, 소분자 EGFR 키나아제 억제제는 환자에게 체중 1 kg 당 0.001 내지 100 mg 범위의 투여량을, 하루 또는 1 주일 당 단독 또는 분할 투여로, 또는 계속적인 주입 (예를 들어 국제 특허 공보 제 WO 01/34574 호 참고) 을 통해 투여될 수 있다. 특히 엘로티닙 HCl 을 환자에게 하루에 5 ~ 200 mg 범위, 또는 1 주일당 100 ~ 1600 mg 범위로, 단독 또는 분할 투여로, 또는 계속적인 주입을 통해 투여할 수 있다. 바람직한 투여량은 150 mg/일 이다. 항체-기재 EGFR 키나아제 억제제, 또는 안티센스, RNAi 또는 리보자임 구조물을 환자에게 체중 1 kg 당 0.1 내지 100 mg 범위의 투여량을 하루 또는 1 주일 당 단독 또는 분할 투여로, 또는 계속적인 주입을 통해 투여할 수 있다. 일부 경우, 상기 범위의 하한 미만 수준의 투여도 매우 적절할 수 있는 반면, 다른 경우에는 어떠한 해로운 부작용을 야기하지 않는 한 여전히 더 많은 투여량이 사용될 수 있는데, 단 이러한 더 많은 투여량은 하루 동안 투여하기 위해 수개의 작은 투여량으로 우선적으로 나누어진다.

EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉은 동일 또는 상이한 경로를 통해, 그리고 여러 상이한 투여 형태로, 개별적으로 또는 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, EGFR 키나아제 억제제는 바람직하게 경구 또는 비경구 투여되는 것이 바람직하다. 보르테조밉은 바람직하게 비경구 투여된다. EGFR 키나아제 억제제가 엘로티닙 HCl (Tarceva™) 인 경우 경구 투여가 바람직하다.

EGFR 키나아제 억제제는 다양한 약제학적으로 적합한 불활성 담체와 함께 정제, 캡슐, 마름모꼴 정제(lozenge), 트로치, 중질 캔디(hard candy), 분말, 스프레이, 크림, 고약, 좌약, 젤리, 젤, 페이스트, 로션, 연고, 엘릭시르, 시럽 등의 형태로 투여될 수 있다. 이러한 투여 형태의 투여는 단독 또는 다중 투여로 수행될 수 있다. 담체는 고체 희석제 또는 충전제, 멸균 수성 매질 및 다양한 비독성 유기 용매 등을 포함한다. 경구 약제학적 조성물은 적합하게 감미료 및/또 는 향료일 수 있다.

EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉은 다양한 약제학적으로 허용가능한 불활성 담체와 함께 스프레이, 크림, 고약, 좌약, 젤리, 젤, 페이스트, 로션, 연고 등의 형태로 함께 조합될 수 있다. 이러한 투여 형태의 투여는 단독 또는 다중 투여로 수행될 수 있다. 담체는 고체 희석제 또는 충전제, 멸균 수성 매질 및 다양한 비독성 유기 용매 등을 포함한다.

단백질성 EGFR 키나아제 억제제를 포함하는 모든 제형은 억제제의 변성 및/또는 분해 및 생물학적 활성의 손실을 피하도록 선택해야 한다.

EGFR 키나아제 억제제를 함유하는 약제학적 조성물의 제조 방법은 당해 분야에 공지되고, 예를 들어 국제 특허 출원 제 WO 01/34574 호에 기재되어 있다. 보르테조밉을 함유하는 약제학적 조성물의 제조 방법 또한 당해 분야에 공지되어 있다(예를 들어, Singh, N.P. and Verma, K.B.(2002) Archieve Oncol. 10(4):279-280). 본 발명의 교시의 관점에서, EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉을 모두 함유하는 약제학적 조성물의 제조 방법은, 상기 인용한 공보 및 다른 공지된 참고 문헌, 예컨대 "Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 18^th edition (1990)" 에 명확히 기재되어 있을 것이다.

EGFR 키나아제 억제제의 경구 투여를 위해, 하나 또는 두 활성제를 함유하는 정제는 다양한 임의 부형제 예컨대, 미세결정질 셀룰로오스, 나트륨 시트레이트, 칼슘 카르보네이트, 디칼슘 포스페이트 및 글리신과, 다양한 붕해제 예컨대, 전분 (및 바람직하게 옥수수, 감자 또는 타피오카 전분), 알긴산 및 특정 복합 실리케이트와 함께, 및 과립화 바인더, 예컨대 폴리비닐 피롤리돈, 수크로오스, 젤라틴 및 아카시아와 함께 조합된다. 부가적으로 윤활제 예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 라우릴 술페이트 및 탈크가 정제화 목적으로 종종 매우 유용하다. 유사한 유형의 고체 조성물 또한 젤라틴 캡슐 중 충전제로 사용될 수 있고; 이러한 맥락에서 바람직한 재료는 또한 락토오스 또는 유당, 또한 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 수성 현탁액 및/또는 엘릭시르가 경구 투여로 요구될 때, EGFR 키나아제 억제제는 다양한 감미료 또는 향미료, 색소 또는 염료와 조합될 수 있고, 만약 요구된다면, 유화제 및/또는 현탁제 또한, 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 글리세린 및 다양한 이의 조합과 같은 희석제와 함께 조합될 수 있다.

두 활성제의 각각 또는 모두의 비경구 투여를 위해, 참기름 또는 땅콩 오일 또는 수성 프로필렌 글리콜 중의 용액이 사용될 수 있고, 또한 활성제 또는 이의 해당 수용성 염을 함유하는 멸균 수용액을 사용할 수 있다. 이러한 멸균 수용액은 바람직하게, 적합하게 완충된 것이고, 또한 바람직하게, 예를 들어 충분량의 식염수 또는 포도당을 통해 등장성이 부여된 것이다. 이러한 특정 수용액은 특히 정맥내, 근육내, 피하조직 및 복강내 주사 목적으로 적합하다. 유성 용액은 관절내, 근육내 및 피하조직 주사 목적으로 적합하다. 멸균 조건하 이러한 모든 용액의 제조는 당업자에게 공지된 표준 약제학적 기술을 통해 쉽게 이루어진다. 단백질성 EGFR 키나아제 억제제의 투여를 위해 선택된 임의 비경구 제형은 억제제의 변성 및 생물학적 활성의 손실을 피할 수 있도록 선택되어야 한다.

부가적으로 두 활성제를 각각 또는 모두를, 예를 들어 크림, 로션, 젤리, 젤, 페이스트, 연고, 고약 등을 통해, 표준 약제학적 관행에 따라 국소적으로 투여할 수 있다. 예를 들어, EGFR 키나아제 억제제 또는 보르테조밉을 약 0.1% (w/v) 내지 약 5% (w/v) 의 농도로 포함하는 국소 제형을 제조할 수 있다.

수의학적 목적상, 활성제는 상기한 임의 형태 및 임의 경로를 통해 동물에게 개별적으로 또는 함께 투여될 수 있다. 바람직한 구현예에서, EGFR 키나아제 억제제는 캡슐, 볼루스 (bolus), 정제, 액체 드렌치의 형태로 주사 또는 임플란트를 통해서 투여된다. 대안적으로 EGFR 키나아제 억제제는 동물 사료와 함께 투여될 수 있고, 이러한 목적상 농축 사료 첨가물 또는 프리믹스 (premix) 를 보통 동물 사료와 함께 제조할 수 있다. 보르테조밉은 바람직하게 액체 드렌치의 형태로 주사 또는 임플란트를 통해서 투여된다. 이러한 제형은 통상적인 방식으로 표준 수의학적 관행에 따라 제조된다.

본 발명은 또한, EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉을 모두 포함하는 단독 용기를 포함하는 키트 (kit) 를 제공한다. 또한 본 발명은 EGFR 키나아제 억제제를 포함하는 제 1 용기, 및 보르테조밉을 포함하는 제 2 용기를 포함하는 키트를 제공한다. 바람직한 구현예에서 키트 용기는 또한 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 키트는 또한, 부가적 개별 용기에 저장되는 멸균 희석제를 포함할 수 있다. 키트는 또한 암 치료 방법으로서 병용 치료의 용도에 대해 나타내는 인쇄된 지시사항을 포함하는 의약품 첨부문서(package insert)을 포함한다.

본 발명은 또한 약제학적으로 허용가능한 담체와 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉 조합물로 이루어진 약학 조성물을 포함한다.

바람직하게는, 상기 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체 및 비독성인 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 보르테조밉 조합물 (이들의 각 성분의 약제학적으로 허용가능한 염 포함) 로 이루어진다.

또한, 이러한 바람직한 구현예 내에서, 본 발명은 약제학적으로 허용가능한 담체 및 비독성인 치료적 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 보르테조밉 조합물 (이들의 각 성분의 약제학적으로 허용가능한 염 포함) 을 함유하는, 질환의 치료용 약제학적 조성물, 및 신생물 세포의 성장, 양성 또는 악성 종양, 또는 전이를 억제하는 그의 용도를 포함한다.

용어 "약제학적으로 허용가능한 염" 은 약제학적으로 허용가능한 비독성 염기 또는 산으로부터 제조된 염을 말한다. 본 발명의 화합물이 산성인 경우, 그의 대응 염은 무기 염기 및 유기 염기를 포함하는 약제학적으로 허용가능한 비독성 염기로부터 편리하게 제조될 수 있다. 이러한 무기 염기로부터 유도된 염에는, 알루미늄 염, 암모늄 염, 칼슘 염, 구리 (제 2 구리 및 제 1 구리) 염, 제 2 철 염, 제 1 철 염, 리튬 염, 마그네슘 염, 망간 (제 2 망간 및 제 1 망간) 염, 칼륨 염, 나트륨 염, 아연 염 등이 포함된다. 암모늄 염, 칼슘 염, 마그네슘 염, 칼륨 염 및 나트륨 염이 특히 바람직하다. 약제학적으로 허용가능한 유기 비독성 염기로부터 유도된 염에는, 1 차, 2 차 및 3 차 아민, 및 시클릭 아민 및 치환 아민, 예컨대 자연 발생 및 합성 치환 아민의 염이 포함된다. 염을 형성할 수 있 는 기타 약제학적으로 허용가능한 유기 비독성 염기에는, 이온 교환 수지, 예를 들어 아르기닌, 베타인, 카페인, 콜린, N',N'-디벤질에틸렌디아민, 디에틸아민, 2-디에틸아미노에탄올, 2-디메틸아미노에탄올, 에탄올아민, 에틸렌디아민, N-에틸모르폴린, N-에틸피페리딘, 글루카민, 글루코사민, 히스티딘, 히드라바민, 이소프로필아민, 리신, 메틸글루카민, 모르폴린, 피페라진, 피페리딘, 폴리아민 수지, 프로카인, 퓨린, 테오브로민, 트리에틸아민, 트리메틸아민, 트리프로필아민, 트로메타민 등이 포함된다.

본 발명의 화합물이 염기성인 경우, 그의 대응 염은 무기산 및 유기산을 포함하는 약제학적으로 허용가능한 비독성 산으로부터 편리하게 제조될 수 있다. 이러한 산에는, 예를 들어 아세트산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캄포르술폰산, 시트르산, 에탄술폰산, 푸마르산, 글루콘산, 글루탐산, 브롬화수소산, 염산, 이세티온산, 락트산, 말레산, 말산, 만델산, 메탄술폰산, 뮤스산, 질산, 팜산, 판토텐산, 인산, 숙신산, 황산, 타르타르산, p-톨루엔술폰산 등이 포함된다. 시트르산, 브롬화수소산, 염산, 말레산, 인산, 황산 및 타르타르산이 특히 바람직하다.

본 발명의 약제학적 조성물은 활성 성분으로서 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 보르테조밉 조합물 (이들의 각 성분의 약제학적으로 허용가능한 염 포함), 약제학적으로 허용가능한 담체 및 임의로는 기타 치료 성분 또는 보조제를 함유한다. 기타 치료제는 그러한 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제들의 효과를 증진시키는 상기 나열된 바와 같은 제제를 포함할 수 있다. 상기 조성물에는 경구적, 직장내, 국소적 및 비경구적 (피하, 근육내 및 정맥내 포함) 투 여에 적합한 조성물이 포함되지만, 임의의 주어진 경우에서 가장 적합한 경로는 특정 숙주, 및 활성 성분이 투여되는 상태의 성질 및 중증도에 따라 다를 것이다. 상기 약제학적 조성물은 편리하게는 단위 투여 형태로 제시될 수 있으며, 제약 업계에 주지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다.

실제로, EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 보르테조밉 조합물 (이들의 각 성분의 약제학적으로 허용가능한 염 포함) 으로 대표되는 본 발명의 화합물은 종래의 약제학적 조합 기술에 따라 약제학적 담체와의 친밀한 혼합물 중의 활성 성분으로서 조합될 수 있다. 담체는 투여에 요구되는 제제의 형태, 예를 들어 경구 또는 비경구 (정맥내 포함) 에 따라 다양한 형태를 취할 수 있다. 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 각각 소정량의 활성 성분을 함유하는 캡슐제, 카세제 (cachet) 또는 정제와 같이 경구 투여에 적합한 개별 단위로서 제시될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 분말, 과립제, 용액제, 수성 액체 중의 현탁액, 비수성 액체, 수중유 (oil-in-water) 에멀젼, 또는 유중수 (water-in-oil) 액체 에멀젼으로 제시될 수 있다. 상기 설명한 통상의 투여 형태에 부가하여, EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 보르테조밉 조합물 (이들의 각 성분의 약제학적으로 허용가능한 염 포함) 은 또한 제어된 방출 수단 및/또는 전달 장치에 의해 투여될 수도 있다. 상기 조합 조성물은 임의의 제약 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 방법은 활성 성분을 하나 이상의 필수 성분을 구성하는 담체와 조합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 상기 조성물은 활성 성분을 액체 담체 또는 미세하게 분리된 고체 담체 또는 이들 둘 다와 균질하고도 친밀하게 혼합시킴으로써 제 조된다. 이어서, 생성물을 원하는 제시형으로 알맞게 성형할 수 있다.

따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체 및 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 보르테조밉 조합물 (이들의 각 성분의 약제학적으로 허용가능한 염 포함) 을 포함할 수 있다. EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 보르테조밉 조합물 (이들의 각 성분의 약제학적으로 허용가능한 염 포함) 은 또한 하나 이상의 기타 치료적 활성 화합물과 함께 약제학적 조성물에 포함될 수도 있다. 기타 치료적 활성 화합물은 그러한 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제들의 효과를 증진시키는 상기 나열한 바와 같은 제제를 포함할 수 있다.

따라서, 본 발명의 한 구현예에서, 약제학적 조성물은 항암제와 함께 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 보르테조밉을 함유할 수 있는데, 이 때, 상기 항암제는 알킬화 약물, 항대사물질, 미세소관 억제제, 포도필로톡신, 항생제, 니트로소우레아, 호르몬 요법, 키나아제 억제제, 종양 세포 세포자멸사의 활성화제 및 항혈관형성제로 이루어진 군으로부터 선택된 일원이다.

이용되는 약제학적 담체는 예를 들어, 고체, 액체 또는 기체일 수 있다. 고체 담체의 예에는 락토오스, 백토, 수크로오스, 탈크, 젤라틴, 한천, 펙틴, 아카시아, 마그네슘 스테아레이트 및 스테아르산이 포함된다. 액체 담체의 예는, 설탕 시럽, 땅콩유, 올리브유 및 물이다. 기체 담체의 예에는 이산화탄소 및 질소가 포함된다.

경구 투여 형태용 조성물의 제조 시, 임의의 편리한 약제학적 매질이 이용될 수 있다. 예를 들어, 현탁제, 엘릭시르 및 용액제와 같은 경구용 액체 제제를 형성하기 위해서는 물, 글리콜, 오일, 알콜, 착향료, 방부제, 착색제 등을 사용할 수 있으며; 분말, 캡슐제 및 정제와 같은 경구용 고체 제제를 형성하기 위해서는 전분, 당류, 미세결정질 셀룰로오스, 희석제, 과립화제, 윤활제, 바인더, 붕해제 등과 같은 담체를 사용할 수 있다. 정제 및 캡슐제는 그 투여 용이성으로 인해 바람직한 경구용 투여 단위이므로, 고체 약제학적 담체가 이용된다. 임의로, 정제는 표준 수성 또는 비수성 기술에 의해 코팅될 수 있다.

본 발명의 조성물을 함유하는 정제는 임의로는 하나 이상의 보조 성분 또는 보조제와 함께 압축 또는 성형시킴으로써 제조될 수 있다. 압축 정제는 적절한 기계 내에서, 활성 성분을 분말 또는 과립과 같이 자유롭게 흐르는 형태로 압축시킴으로써 제조될 수 있으며, 임의로 바인더, 윤활제, 불활성 희석제, 계면 활성제 또는 분산제와 혼합될 수 있다. 성형 정제는 적절한 기계 내에서, 불활성 액체 희석제로 습윤된 분말화된 화합물의 혼합물을 성형시킴으로써 제조될 수 있다. 각 정제는 바람직하게는 약 0.05 mg 내지 약 5 g 의 활성 성분을 함유하고, 각 카세제 또는 캡슐제는 바람직하게는 약 0.05 mg 내지 약 5 g 의 활성 성분을 함유한다.

예를 들어, 인간에 경구 투여하기 위한 제형은, 총 조성물의 약 5% 에서 약 95% 까지 변동될 수 있는 적절하고도 알맞은 양의 담체 물질과 조합된 활성 제제를 약 0.5 mg 내지 약 5 g 함유할 수 있다. 단위 투여 형태는 일반적으로 활성 성분을 약 1 mg 내지 약 2 g, 전형적으로는 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 800 mg 또는 1000 mg 함유할 것이다.

비경구 투여에 적합한 본 발명의 약제학적 조성물은 물 중의 활성 성분의 용액 또는 현탁액으로서 제조될 수 있다. 예를 들어, 히드록시프로필셀룰로오스와 같은 적절한 계면활성제가 포함될 수 있다. 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 오일 중 이들의 혼합물 중의 분산액이 제조될 수 있다. 또한, 해로운 미생물 성장을 방지하기 위해 방부제가 포함될 수 있다.

주사용에 적합한 본 발명의 약제학적 조성물에는 멸균 수용액 또는 분산액이 포함된다. 또한, 상기 조성물은 이러한 멸균 주사 용액 또는 분산액의 즉석 제제용 멸균 분말 형태일 수 있다. 모든 경우, 최종 주사 형태는 멸균되어야 하며, 효과적으로는 주사하기 용이하도록 유동성이 있어야 한다. 약제학적 조성물은 제조 및 저장 조건 하에서 안정해야 하며; 이에 따라, 바람직하게는 세균 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용에 대항하여 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 식물유 및 이들의 적절한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 예를 들어, 에어로졸, 크림, 연고, 로션, 살포제 등과 같이 국소용에 적합한 형태일 수 있다. 또한, 상기 조성물은 경피 장치에 사용하기에 적합한 형태일 수 있다. 이러한 제형은, 본 발명의 EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 보르테조밉 조합물 (이들의 각 성분의 약제학적으로 허용가능한 염 포함) 을 이용하여, 종래의 가공법을 통해 제조될 수 있다. 예로서, 약 5 중량% 내지 약 10 중량% 의 화합물과 함께, 친수성 물질 및 물을 혼합하여 크림 또는 연고를 제조하여, 원하는 점조도 (consistency) 를 갖는 크림 또는 연고를 생성한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 담체가 고체인, 직장내 투여에 적합한 형태일 수 있다. 혼합물이 단위 투여 좌제를 형성하는 것이 바람직하다. 적합한 담체에는 코코아 버터 및 당업계에 통상 사용되는 기타 물질이 포함된다. 먼저 조성물을 연화 또는 용융된 담체(들)와 혼합한 후 저온 처리하여 주형 내에서 성형함으로써 좌제를 편리하게 형성할 수 있다.

앞서 언급한 담체 성분에 부가하여, 상술한 약제학적 제형은 적절한 경우, 하나 이상의 추가 담체 성분, 예컨대 희석제, 완충제, 착향료, 바인더, 계면활성제, 증점제, 윤활제, 방부제 (항산화제 포함) 등을 포함할 수 있다. 또한, 기타 보조제를 포함시켜 제형을 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 할 수 있다. EGFR 키나아제 억제제 화합물 및 보르테조밉 조합물 (이들의 각 성분의 약제학적으로 허용가능한 염 포함) 을 함유하는 조성물은 또한 분말 또는 액체 농축 형태로 제조될 수도 있다.

본 발명의 조합물의 화합물에 대한 투여 수준은 대략 본원에 기재된 바와 같거나, 또는 이러한 화합물에 대해 당업계에 기술된 바와 같을 것이다. 그러나, 임의의 특정 환자에 대한 특이적 투여량 수준은 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 투여 경로, 배설률, 약물 조합 및 치료가 진행중인 특정 질환의 중증도를 포함하는 각종 인자에 따라 달라질 것으로 이해된다.

본 발명은 이하의 실험 세부사항으로부터 더 잘 이해될 것이다. 그러나, 당업자는, 논의된 특정 방법 및 결과가 단지, 이후 청구의 범위에서 보다 완전하게 기술되는 바와 같은 본 발명의 본 발명의 예시이며, 어떠한 식으로든 이에 제한되는 것이 아님을 용이하게 이해할 것이다.

실험 세부사항:

도입

엘로티닙 및 보르테조밉의 조합물의 효과를 NSCLC 세포주 패널을 이용해 시험관 내에서 연구하였다. 상기 조합물의 이론적 근거는, 상기 두 제제 각각이 중복되는 유독성 없는 임상적 활성을 보이며, 상이한 세포 주기 부분에서 효과를 가진다는 점이다. 게다가, EGFR 축의 활성화는,

의 프로테오좀 분해와 같이 (Stevenson, J.P. 등 (2004), J. Clin. Oncol. 22(14S): 7145),

경로를 활성화하는 것으로 나타나므로, 상류 및 하류방향 둘 모두의 표적을 억제함으로써 더 많은 세포독성을 도출할 수 있을 것으로 간주하였다.

재료 및 방법

화학약품:

엘로티닙을 OSI Pharmaceuticlas 사로부터 엘로티닙 HCl (Tarceva^TM)으로서 공급 받았으며, 임상 등급의 보르테조밉을 Montifiore Medical Center, NY, 외래 약국으로부터 획득하였다. 두 제제를 저장용액인 DMSO 중에 용해시키고, PBS 를 이용해 원하는 농도로 희석하였다. 단일클론 항체는 Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA) 로부터 획득하고, 기타 화학약품들은 Sigma-Aldrich Chemical Co.(St. Louis, MO)로부터 획득하였다.

세포 배양 및 세포 독성 검정

7 개의 비소세포성 폐암 세포주 (H322, H358, H661, H460, H522, H1299, A549) 를 American Type Culture Collection (Manassas, VA)로부터 획득하였다. 모든 세포를 5% CO₂ 및 95% 공기의 습성 분위기에서 10% 소 태아 혈청으로 보충된 RPMI 1640 에서 키웠다.

대수기(Log-phase) 성장 세포를 72 시간 동안 계속해서 엘로티닙 HCl 및 보르테조밉의 각종 농도에 노출시키고, 약물로 유도되는 세포독성을 상술된 바와 같이 MTT 검정으로 평가하였다(Ling, Y-H 등 (1993) Cancer Res. 53 (7):1583-1589).

조합 연구를 위해, 세포를 엘로티닙 HCl 또는 보르테조밉 단독에 또는 동시 또는 순차적으로 24 시간 간격으로 조합된 것에 노출시키고, 세포 생존을 제 1 약물 노출로부터 72 시간째에 MTT 검정으로 평가하였다.

세포 주기 분석

세포를 엘로티닙 HCl 또는 보르테조밉 단독에 또는 동시 또는 순차적으로 24-시간 간격으로 조합된 것에 처리하였다. 세포를 제 1 약물 노출로부터 48 시간 째에 수확해 -20℃에서 밤새 75% 에탄올로 고정시킨 후, 실온에서 3 시간 동안 5 ㎍/mL 프로피듐 요오다이드 및 5 ㎍/mL RNase I (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN)으로 인큐베이션하였다. 세포 주기 중 상이한 단계에서 세포 및 세포자멸사 세포(sub-G1)의 개수를 유세포 분류기(Epics Profile Analyzer; Coulter Co., Miami, FL)로 측정했다.

웨스턴 블롯 분석

세포를 배양물로부터 스크랩하여 PBS 로 2 회 세정한 후, 15 분 동안 0 ~ 4 ℃ 에서 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 250 mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1mM NaF, 1mM 페닐메틸술포닐 플로라이드, 1mM DTT, 20 ㎍/mL 류펩틴, 20 ㎍/mL 아프로티닌, 0.1% Triton X-100 및 1% SDS를 함유하는 60 ~ 100 ㎕ 의 웨스턴 블롯 파쇄 완충액 중에 현탁시켰다. 1500 ×g 로 10 분간 0 ℃ 에서 원심분리한 후, 상청액을 수집하고, 단백질을 10% SDS-PAGE 상에서 분리시켰다. 전기영동한 후에, 단백질 블롯(blot)을 니트로셀룰로오스 막에 옮겼다. 상기 막을 TBST 중 5% 탈지 우유 분말로 블로킹하고 4 ℃ 에서 대응하는 1차 항체로 밤새 인큐베이션하였다. TBST 로 3 회 세정한 후, 막을 실온에서 1 시간 동안 TBST 로 희석된 양고추냉이 과산화효소-콘쥬게이션된 제 2 차 항체 (1 : 1000) 를 이용해 인큐베이션했다. 검출된 단백질 신호를 강화된 화학발광 반응 시스템으로 시각화하였다(Amersham, Arlington Heights, IL).

통계

모든 결과는 각각의 3 가지 실험들의 평균이다. 그 결과를 평균 +/- 표준편차로 나타내고, 스튜던트 t-검정(student t-test)을 이용해 적절한 경우에 평균들을 비교하였다.

결과

NSCLC 세포의 엘로티닙 및 보르테조밉에 대한 민감도

7 개의 NSCLC 세포주 상에서 엘로티닙 HCl 및 보르테조밉의 세포독성을 도 1 에 나타냈다. 시험한 7 개의 NSCLC 세포주 중 오직 2 개만이 엘로티닙에 민감하였고, 나머지는 10 배 더 높은 IC₅₀ 을 갖거나, 저항적이었다. 한편, 보르테조밉은 10 ~ 66nM 범위의 IC₅₀ 을 가진 보다 좁은 범위의 활성을 지닌다. 본 출원인은 엘로티닙 HCl (H322 및 H358) 에 민감한 2 개의 세포주 및 저항적인 2 개 (A549 및 H1299) 를 두 제제의 조합에 대해 추가로 연구하기 위해 선택하였다.

엘로티닙 및 보르테조밉의 조합된 세포독성 효과

인간 NSCLC 세포에서 엘로티닙 및 보르테조밉의 조합의 조합 지수를 도 2 에 나타냈다. 그 결과가 분명하지 않은 H358 기관지폐포성 세포를 제외하고는, 엘로티닙 및 보르테조밉의 조합의 세포 독성 효과는 상조적이지도 부가적이지도 않았다. 기관지폐포성 암 환자에서 두 제제의 임상 활성 및 상조 분석에서의 분명하지 않은 결과로 인해, 본 출원인은 H358 기관지폐포성 세포에서의 조합을 더 검사하였다. 세포수 및 세포자멸사 양자 모두의 시간 경과에 따른 분석으로 동시에 제공되는 엘로티닙 및 보르테조밉의 조합이 둘 중 하나의 제제를 단독으로 하는 것보다 더 활성적인 것을 확인하였다. 그러나, 조합된 효과는 부가적이지 않는다 (도 3).

세포자멸사 및 세포 주기에 있어서의 엘로티닙의 효과

본 출원인은 세포자멸사 및 세포 주기에 있어서의 엘로티닙의 효과를 조사하였다. 엘로티닙은 가장 현저하게 보다 민감한 세포 중 G1 에서 세포 주기 정지를 야기하였다. 이러한 G1 세포 주기 정지는 저항 세포에서가 아닌 민감 세포에서 세포자멸사의 증가를 수반한다. 민감 세포 및 저항 세포에서 기준선 EGFR 발현의 차이는 없었다. 엘로티닙은 민감 세포 및 저항 세포 둘 모두에서 EGF로 유도된 EGFR-인산화를 억제한다.

세포 주기 및 세포자멸사에 대한 보르테조밉의 효과

본 출원인이 상기에서 보고한 바와 같이, 보르테조밉은 G2/M 에서 세포 주기 정지를 유도하는데, 상기 세포주기 정지는 세포자멸사의 시간에 따른 증가를 수반한다(Ling, Y-H 등 (2003) Clin. Cancer Res 9(3):1145-1154). 보르테조밉 유도된 G2/M 정지 및 세포자멸사의 효과는, 이전에 보고한 돌연변이 p53의 H322 세포주와 비교했을 때 야생형 (A549) 또는 널(null) p53 (H358, H1299)의 세포주에서 더 두드러졌다.

엘로티닙 및 보르테조밉 간의 일정 의존적 상호관계

본 출원인은 두 약물을 24 시간 간격으로 순차적으로 조합한 효과를 조사하였다. 대수기 성장 세포를 엘로티닙 HCl 및 보르테조밉 단독 또는 동시 또는 24-시간 간격으로 순차적으로 조합된 것에 노출시키고, 세포 주기 분석을 상술한 바와 같이 제 1 약물 노출로부터 48 시간 째에 수행하였다. 보르테조밉 후 엘로티닙 HCl 을 이용한 순차적인 요법은 보르테조밉 단독 또는 동시 노출과 유사한 세포 주기 효과를 가졌다. 그러나, 24 시간 동안 엘로티닙을 예비노출한 것은 G1 세포 주기 정지를 야기하고 보르테조밉의 G2/M 효과를 종결시킨다. 이러한 엘로티닙 예비-노출의 길항 효과는 두 민감 세포주(H322 및 H358)에 나타났고, 보다 적은 수준으로 저항 세포(A549 및 H1299) 에도 나타났으며, 엘로티닙에 의해 유도된 G1 정지의 수준에 비례하였다. 상기 세포 주기 길항 효과는 엘로티닙으로 유도된 G1 정지에 가장 저항적인 H1299 세포에서 가장 덜 두드러진다.

본 출원인은 보르테조밉으로 유도된 세포독성 및 세포자멸사의 이러한 세포 주기 효과의 결과를 더 조사하였다. 엘로티닙 예비-노출은 엘로티닙 단독과 비교했을 때 세포 생존률을 증가시켰으며, 세포자멸사를 감소시켰다. 또한, 이러한 효과는 민감성 H358 뿐 아니라 저항성 A549 세포에서도 모두 나타났다. 불행하게도, 보르테조밉 단독과 비교하였을 때, 동시 노출 또는 역순인 보르테조밉 후 엘로티닙으로는 어떠한 증대된 활성도 관찰되지 않았다.

엘로티닙 예비 노출의 길항 효과는 p53 안정화와 무관하다.

p53 은 또한 세포성 스트레스에 응답하는 세포자멸사에 대한 중요한 매개체이다. 정지 세포에서, p53 은 매우 짧은 반감기를 가지며, Mdm-2 에 의해 매우 친밀하게 매개된다. Mdm-2 는 p53 에 결합하고 이의 유비퀴틴 리가아제 작용에 의해, 프로테오좀 분해를 위해 p53을 표적(target)한다. 세포성 스트레스로 인해 일련의 인산화가 p53 상에서 일어나, p53 의 활성화로 Mdm-2 로부터 상기는 분리된다. p53 활성화의 결론에는 세포 주기 정지, DNA 회복이 포함되며, DNA 회복이 성공적이지 않은 경우에는 세포자멸사된다.

본 출원인은, 보르테조밉이 p53 단백질의 분해를 억제하며, 보르테조밉에 의 해 유도된 G2/M 정지는 유비퀴틴화 p53 단백질의 축적과 연관될 수 있음을 기존에 증명하였다. 본 출원인은 엘로티닙 예비 노출에 의해 나타나는 세포 주기 길항 효과를 해명하기 위해 p53에 대해 엘로티닙 및 보르테조밉의 상이한 서열의 효과를 조사했다. 야생형 p53 의 A549 세포를 단독의 보르테조밉 또는 엘로티닙에 동시 또는 순차적으로 24 시간 간격으로 조합한 것에 노출시키고, p53 발현을 웨스턴 블롯으로 평가하였다. 보르테조밉 노출은 포지티브 대조군 파클리탁셀과 비교할 때, 유비퀴틴화 p53 을 축적시켰다. 동시 또는 순차적으로 엘로티닙 노출시키는 것은 유비퀴틴화 p53 의 보르테조밉-유도된 축적에 아무런 영향도 끼치지 않았다. 상기 결과로, 본 출원인이 p53 널 H358 세포에서 유사한 길항 결과를 관찰했다는 사실과 더불어, 엘로티닙 예비-노출의 길항 효과가 보르테조밉-유도 p53 안정화와 무관하다는 것을 확인하였다.

엘로티닙 예비노출은 보르테조밉-유도된 카스파아제 3 활성화를 저지한다.

본 출원인의 기존 연구로 보르테조밉이 활성 산소 종(ROS)의 발생을 유도하며, 이는 보르테조밉으로 유도되는 G2/M 정지 및 세포자멸사에 필수적임을 증명하였다. 상기 ROS 발생은, 시토크롬 c 의 시토졸로의 방출과 함께 사립체 잠재력의 변화를 수반하며, 결국 카스파아제 3 을 포함하는 효과기인 카스파아제를 활성화시킨다. 본 출원인은 PARP 절단 및 카스파아제 3 활성화에 대한 보르테조밉 및 엘로티닙의 상이한 일정 효과를 조사하였다. 24 시간 동안의 엘로티닙 예비-노출은 보르테조밉-유도 카스파아제 3 활성화 및 PARP 절단을 억제시킨다. 상기는 A549 및 H358 세포 모두에서 관찰되었다.

논의

본 결과는 임상적으로 활성인 생물학적 제제를 조합하기 전에 적절한 예비임상 연구의 중요성을 강조한다. 엘로티닙 및 보르테조밉 양자 모두는 NSCLC 를 앓고 있는 환자에게 있어서 임상적 활성을 띠고 있음이 보여졌으며, 이들 제제는 중복되지 않는 독성을 가진다. 본 출원인은 엘로티닙의 세포독성이 본 NSCLC 세포의 패널에서 선택적인 반면에, 보르테조밉은 더 좁은 범위의 세포독성을 가짐을 관찰하였다. 엘로티닙 및 보르테조밉의 조합은 시험된 4 개의 세포주중 3 개에서 부가적이지도 않고, 상조적이지도 않았다. H358 기관지 폐포성 세포에서, 상기 조합은 어느 하나의 단독 제제보다 더 활성이나, 그 효과는 부가적이지 않는다.

본 출원인은, 보르테조밉이 G2/M 세포 주기 정지를 유도하고 시간에 따라 세포자멸사가 증가하는 것이 수반된다는 본 출원인의 이전 보고를 확인시켰다(Ling Y-H 등 (2003) Clin Cancer Res. 9(3):1145-1154). 엘로티닙 예비-노출은 G1 세포 주기 정지를 야기하고 보르테조밉의 활성을 종결시킨다. 엘로티닙은 유비퀴틴화 p53 단백질의 안정화에 어떠한 영향도 끼치지 않는다. 그러나, 보르테조밉에 의한 카스파아제 3 의 활성화는 엘로티닙에 대한 예비-노출로 인해 억제된다. 본 연구에서 관찰되는 일정 의존성 엘로티닙 예비노출의 길항 효과로 인해 활성 항종양제의 조합에 있어서 치료 일정의 중요성은 강조된다.

요약해보면, 본 연구의 결과는 엘로티닙 및 보르테조밉의 조합이, H358 기관지폐포성 세포에서 어느 하나의 제제 단독보다 더 활성적이어서, 특정한 NSCLC 및 암을 앓고 있는 환자의 기타 종양의 치료에 유용할 수 있음을 증명하였다. 일정 선택이 엘로티닙을 보르테조밉과 조합하는데 있어서 매우 중요할 수 있으며, 또한 생체 내 연구가 이러한 조합을 추가로 평가하는데 요구된다.

참고문헌의 포함

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등가물

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Claims

약제학적으로 허용가능한 담체 중에 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉을 포함하는 약제학적 조성물.
제 1 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제가 엘로티닙을 포함하는 약제학적 조성물.
제 2 항에 있어서, 조성물 중의 엘로티닙이 염산염으로 존재하는 약제학적 조성물.
제 1 항 내지 제 3 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 추가 항암제를 부가적으로 포함하는 약제학적 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 추가 항암제가 알킬화 약물, 항대사물질, 미세소관 억제제, 포도필로톡신, 항생제, 니트로소우레아, 호르몬 요법, 키나아제 억제제, 종양 세포 세포자멸사 활성화제 및 항혈관형성제로부터 선택되는 일원인 약제학적 조성물.
EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉이 사용되는 것을 특징으로 하는, 종양 또는 종양 전이 치료를 위해 의도된 약제 제조 방법.
제 6 항에 있어서, 약제가 암을 위해 의도되는 방법.
제 6 항 또는 제 7 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉이 동일한 제형으로 환자에게 공동투여되는 방법.
제 6 항 또는 제 7 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉이 상이한 제형으로 환자에게 공동 투여되는 방법.
제 6 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉이 동일한 경로를 통해 환자에게 공동 투여되도록 의도되는 방법.
제 6 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉이 상이한 경로를 통해 환자에게 공동 투여되도록 의도하는 방법.
제 6 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제가 비경구 또는 경구 투여를 통해 환자에게 투여되도록 의도되는 방법.
제 6 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 보르테조밉이 비경구 투여 를 통해 환자에게 투여되도록 의도되는 방법.
제 6 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료될 종양 또는 종양전이가 폐암, 직장결장암, NSCLC, 세기관지 세포 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 흑색종, 안구 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부 암, 위장암, 위암, 결장암, 유방암, 자궁암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 호지킨 질병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장암, 요관암, 신장세포 암종, 신우 암종, 중피종, 간세포암, 담도암, 만성 백혈병, 급성 백혈병, 림프구 림프종, CNS 신생물, 척추 종양, 신경아교종, 뇌줄기신경아교종, 다형성아교모세포종, 별아교세포종, 신경초종, 뇌실막세포종, 속질모세포종, 수막종, 편평세포 암종 및 뇌하수체 샘종 종양 또는 종양 전이로부터 선택되는 방법.
제 6 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 또는 종양 전이가 불응성(refractory)인 방법.
제 6 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료되도록 의도되는 종양 또는 종양 전이가 폐암 종양 또는 종양 전이인 방법.
제 6 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제가 엘 로티닙을 포함하는 방법.
제 6 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 기타 항암제를 투여하는 것을 부가적으로 포함하는 방법.
제 6 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 기타 항암제가 알킬화제, 시클로포스파미드, 클로람부실, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 부술판, 멜팔란, 카르무스틴, 스트렙토조토신, 트리에틸렌멜라민, 미토마이신 C, 항대사물질, 메토트렉세이트, 에토포시드, 6-메르캅토퓨린, 6-티옥구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실, 카페시타빈, 젬시타빈, 다카르바진, 항생제, 악티노마이신 D, 독소루비신, 다우노루비신, 블레오마이신, 미트라마이신, 알칼로이드, 빈블라스틴, 파클리탁셀, 도세탁셀, 비노렐빈, 글루코코르티코이드, 덱사메타손, 코르티코스테로이드, 프레드니손, 뉴클레오시드 효소 억제제, 히드록시우레아, 아미노산 감손 효소, 아스파라기나아제, 토포테칸, 이리노테칸, 류코보린 및 폴산 유도체로부터 선택되는 방법.
보르테조밉을 EGFR 키나아제 억제제와 조합하는 것을 포함하는, 환자의 종양 또는 종양 전이를 치료하는데 유용한 약제학적 조성물의 제조 방법.
제 20 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제가 엘로티닙인 방법.
제 21 항에 있어서, 약제학적으로 허용가능한 담체를 보르테조밉 및 엘로티닙과 조합하는 것을 추가적으로 포함하는 방법.
보르테조밉 및 EGFR 키나아제 억제제를 포함하는 용기를 포함하는 키트 (kit).
제 23 항에 있어서, 멸균 희석제를 추가적으로 포함하는 키트.
제 23 항 또는 제 24 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제가 엘로티닙인 키트.
제 23 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 종양, 종양 전이 또는 기타 암 환자 치료 방법으로서 환자에게 보르테조밉 및 엘로티닙의 병용 치료의 사용을 나타내는 인쇄된 지시사항을 포함하는 의약품 첨부 문서(package insert)을 추가적으로 포함하는 키트.
제 1 항에 있어서, 하나 이상의 기타 항암제를 부가적으로 포함하는 조성물.
제 27 항에 있어서, 상기 기타 항암제가 알킬화 약물, 항대사물질, 미세소관 억제제, 포도필로톡신, 항생제, 니트로소우레아, 호르몬 요법, 키나아제 억제제, 종양 세포 세포자멸사 활성화제 및 항혈관형성제로 이루어지는 군에서 선택되는 일원인 조성물.
암 치료 방법으로서, 이러한 치료가 필요한 대상체에 (ｉ) 제 1 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 및 (ⅱ) 제 2 유효량의 보르테조밉을 투여하는 것을 포함하는 방법.
암 치료 방법으로서, 이러한 치료가 필요한 대상체에 (ｉ) 제 1 치료 미달량 의 EGFR 키나아제 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 및 (ⅱ) 제 2 치료 미달량의 보르테조밉을 투여하는 것을 포함하는 방법.
제 29 항 또는 제 30 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제가 엘로티닙인 암치료 방법.
제 6 항에 있어서, 치료될 종양 또는 종양 전이가 직장결장 종양 또는 종양 전이인 방법.
(ｉ) 제 1 유효량의 EGFR 키나아제 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 및 (ⅱ) 제 2 유효량의 보르테조밉을 포함하는, 특히 암에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
(ｉ) 제 1 치료 미달량의 EGFR 키나아제 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 및 (ⅱ) 제 2 치료 미달량의 보르테조밉을 포함하는, 특히 암에 사용되는 약제학적 조성물.
제 33 항 또는 제 34 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제가 엘로티닙인 약제학적 조성물.
특히 암에 사용하기 위한 약제용으로서의 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉.
특히 암에 사용하기 위한 약제용으로서의 엘로티닙 및 보르테조밉.
종양 또는 종양 전이 치료용 약제 제조를 위한 EGFR 키나아제 억제제 및 보르테조밉의 용도.
제 38 항에 있어서, EGFR 키나아제 억제제가 엘로티닙인 용도.
본원에 기재되는 바와 같은 신규 화합물, 프로세스, 약제학적 조성물, 방법 및 용도.