KR100820010B1

KR100820010B1 - 라벤더，베르가못，후리지아，페퍼민트，카모마일 및 로즈마리를 함유하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR100820010B1
Application number: KR1020060099587A
Authority: KR
Inventors: 정대현; 모상현; 이정훈; 김수정; 최선애; 김현; 박문정; 손영기; 이덕성; 이건봉
Original assignee: (주)바이오에프디엔씨; (주)나투젠
Priority date: 2006-10-13
Filing date: 2006-10-13
Publication date: 2008-04-07

Abstract

본 발명은 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 함유하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, ⅰ) 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합하여 열수추출한 다음 상기 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 증류액을 수득하거나, ⅱ) 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리 각각을 열수추출한 다음, 상기 각각의 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 각각의 증류액을 얻은 후 혼합하여 제조되는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물의 제조방법 및 그 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 항산화 허브 화장료 조성물은 각질형성세포(keratinocyte)에 대한 독성이 없으며, 화학적 항산화능 및 효소의 산화 저해능이 뛰어나며, 장기간 보관에도 미생물의 천이가 생기기 않아 피부 및 두피 보효용 화장품 첨가에 적합하다.또한, 염증 반응에 대한 피부 진정 효과가 뛰어나 손상된 피부를 진정시키는 치료에 효과적이다.

로즈마리, 라벤더, 허브, 항산화

Description

라벤더，베르가못，후리지아，페퍼민트，카모마일 및 로즈마리를 함유하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물 및 그 제조방법{Anti-oxidant Herb Cosmetic Composition Containing Ravendor, Horsemint, Freesia, Peppermint, Camomile and Rosemary for Protecting Skin and Hair skin and Method for Preparing the Same}

도 1은 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물 중 각각의 허브들을 혼합한 다음, 증류하여 제조한 조성물의 항산화능에 의한 피부 및 두피 보호효과를 DPPH의 자유라디컬 소거능으로 확인한 그래프이다.

도 2는 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물 중 각각의 허브들의 증류액을 제조한 다음, 혼합하여 제조한 조성물의 항산화능에 의한 피부 및 두피 보호효과를 DPPH의 자유라디컬 소거능으로 확인한 그래프이다.

도 3은 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물 및 열수 추출물을 혼합하여 제조한 조성물의 항산화능에 의한 피부 및 두피 보호효과를 DPPH의 자유라디컬 소거능으로 확인한 그래프이다.

도 4는 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물의 인간 각질형성 세포에 대한 비세포 독성을 측정한 그래프이다.

도 5는 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물의 에틸리놀리에이트의 산화에 대 한 항산화능 정도를 측정한 그래프이다.

도 6은 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물의 자체 정균능을 나타내는 그래프이다 (A 및 B: 본 발명에 따른 허브 조성물 제조 직후의 세균 및 진균; C 및 D: 상온에서 30일간 방치 후 세균 및 진균).

본 발명은 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 함유하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, ⅰ) 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합하여 열수추출한 다음 상기 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 증류액을 수득하거나, ⅱ) 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리 각각을 열수추출한 다음, 상기 각각의 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 각각의 증류액을 얻은 후 혼합하여 제조되는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 조성물의 제조방법 및 그 조성물에 관한 것이다.

주변 환경과 자외선에 의해 유발되는 활성 산소종 (Reactive Oxygen)은 피부에 매우 지속적이며 치명적인 손상을 유발할 수 있다. 특히 피부는 일상적인 야외생활에서 자외선에 노출되어 있어 활성 산소종을 만드는 광화학적 반응들이 계속해서 일어나고 있다.

화학적으로 자유라디칼 (free radical)이란 1개 또는 그 이상의 짝짓지 않은 전자를 가진 독립적으로 존재하는 화학종을 말한다. 보통의 분자에서는 스핀의 방향이 반대인 2개의 전자들이 하나의 전자쌍을 만들어 안정한 상태로 존재하나, 자유라디칼은 짝을 짓지 않은 활성 전자를 가지고 있기 때문에 일반적으로 불안정하고 이로 인해, 매우 큰 반응성을 가지며 수명이 짧다. 그러므로, 자유라디칼의 표기는 짝짓지 않은 전자를 오른쪽 상단에 점으로 표시한다.

자유라디칼의 종류와 그 특징을 간략하게 분류해 보면 다음과 같다. 첫 번째로 대부분의 금속이온들은 짝짓지 않은 홀전자를 가지고 있기 때문에 넓은 의미에서 전이금속을 자유라디칼로 볼 수 있다. 전이금속은 전자 하나를 주거나 받음으로써 산화수를 바꾸는 능력이 있어서 종종 자유라디칼반응에 대해 강력한 촉진제 역할을 하기도 한다. 두 번째로 하이드록시 라디칼 (Hydroxyl Radical (OH^·))은 다양한 반응에 의해 생물학적으로 관련된 계안에서 발생하며 세포내 DNA, 단백질, 지질의 손상에 많은 영향을 끼친다. 세 번째로 슈퍼옥사이드 라디칼 (Superoxide Radical (O₂ ^·-))은 하이드록시 라디칼에 비해 비라디칼과의 반응성이 약하다 그러나 NO2? 와 같은 특정 라디칼과는 빨리 반응한다. 네 번째, 퍼옥실 라디칼 (Peroxyl Radical (RO₂ ^·-))과 알콕실 라디칼 (Alkoxyl Radical (RO^·))은 좋은 산화제이다. 다섯 번째로, 설퍼 라디칼 (Sulfur Radical)을 들 수 있다. 티올(특히 환원형 글루타티온)은 단백질의 -SH기를 산화로부터 보호하기 때문에 종종 항산화제 로 간주되며 산소라디칼과 몇몇 반응성이 있는 화학종들을 제거할 수 있다. 여섯 번째로 니트릭 옥사이드 (Nitric Oxide (NO^·))이다. 니트릭 옥사이드는 물과 유기용매에서 알맞게 녹을 수 있는 무색의 가스이다. 따라서 니트릭 옥사이드는 세포 안으로 쉽게 확산될 수 있다. 니트릭 옥사이드는 니트릭 옥사이드 합성효소 (nitric oxide synthase, NOS)라는 효소의 활동에 의해서 살아있는 유기체안에서 주로 합성된다. 이들 효소는 아미노산을 니트릭 옥사이드로 전화시키며, 이 과정에서 보조인자를 필요로 하며 활성은 여러 인자에 의해서 조절된다.

생체내에서 활성산소의 생성은 다양한 경로를 거쳐서 생성된다. 정상적인 대사과정에 있어서도 호흡한 산소의 2%가 슈퍼옥사이드 라디칼로 전환되는 것으로 알려져 있다. 자외선에의 노출 후, 피부 세포 및 조직 손상에 대한 자유라디칼의 원인설은 자외선의 피부 작용에 대한 일관된 손상 기전을 제시하고 있으며, 주요한 생리적 설명은 다음과 같다. (1) 자유라디칼은 피부에 대한 자외선 작용으로 생성된다. (2) 피부에는 자유라디칼을 파기하는 항산화 방어계가 있다. 그러나 이러한 방어계는 자외선량이 많으면 한계에 도달되고 세포 및 조직의 산화가 유발된다. (3) 결과적으로 단백질, 지질, DNA와 같은 주요 세포 성분들은 자유라디칼에 의한 손상을 받게되어, 세포 기능이 변질되고 궁극적으로는 피부노화가 촉진되어 피부 손상 및 질환이 유발되게 된다.

피부에서 자유라디칼에 의해서 유발되는 주름의 생성 원인은 대표적인 세 가지를 들 수 있다. 첫째, 자외선에 의한 피부 항산화제의 파괴를 들 수 있으며, 둘 째, 지질 산화, 단백질 산화, 그리고 DNA 산화와 같은 세포 구성 성분의 산화, 마지막으로 매트릭스 메탈로프로테이나아제 (matrix metalloproteinase) 과발현, 콜라겐 사슬의 절단과 비정상적인 교차결합, 히아루론산 (hyaluronic acid) 사슬의 절단 등으로 나타나는 결합조직의 손상이다. 과도한 자외선 노출에 의해 생성된 자유라디칼은 주름 형성을 촉진할 수 있는 다양한 생리적 손상을 유발시킬 뿐아니라, 피부에 존재하는 색소세포를 자극하여 멜라닌 (melanin) 색소의 생성을 가속화시켜 피부를 어둡게 만든다고 알려져 있다. 또한 그 정도와 위치에 따라 심각한 염증 및 피부 면역의 손상을 유발할 수도 있다.

허브 식물같은 천연 식물소재에는 카페인산 유도체들, 플라보노이드류, 그리고 알칼로이드류가 풍부하게 함유되어 있어 자외선 차단에 효과적이다. 또한 발생된 자유라디칼과 반응하여 자유라디칼을 제거할 수 있는 다양한 유용성분들이 들어있다. 이러한 허브 천연물이 보이는 자유라디칼 소거능은 (1) 개시작용을 하는 라디칼을 소거함으로써 연쇄반응의 개시를 억제한다. (2) 촉매작용을 하는 전이금속과 결합함으로써 라디칼 생성의 개시반응을 억제한다. (3) 개시작용을 하는 라디칼로 전환될 수 없도록 과산화물을 분해한다. (4) 활성을 가진 라디칼에 의한 계속된 수소탈취를 할 수 없도록 연쇄반응을 차단시키다. 또한 이러한 항산화 작용은 허브 천연물에 공존하는 다양한 유용 생리물질들과 상승작용을 통해 라디칼의 생성을 차단, 생성된 라디칼의 소거, 및 손상된 세포의 회복 등의 다양한 작용을 동시에 수행하는 다기능성 원료로써 그 이용 가능성이 증대되고 있다.

이에 본 발명자들은 열수 추출 시 일정 온도 이상에서 휘발되는 증류성분을 냉각 회수하면, 정유성분, 방향족 성분, 그리고 항산화 성분이 풍부한 열수 증류 분획을 확보할 수 있다는 것을 확인하고, 각질형성세포(keratinocyte)에 대한 독성이 없으며, 항산화능이 강력하고, 장기간 보관에도 미생물의 천이가 생기기 않아 피부 및 두피 보호용 화장품 첨가에 적합한 항산화 허브 조성물을 개발하고, 본 발명을 완성하였다.

결국, 본 발명의 주된 목적은 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일, 및 로즈마리를 함유하는 항산화 및 피부 진정용 허브 조성물 및 그 제조방법을 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 함유하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 조성물의 제조방법을 제공한다:

(a) 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합하여 열수추출하는 단계; 및

(b) 상기 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 증류액을 수득하여 항산화 허브 조성물을 제조하는 단계.

본 발명은 또한, 다음의 단계를 포함하는 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼 민트, 카모마일 및 로즈마리를 함유하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 조성물의 제조방법을 제공한다:

(a) 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리 각각을 열수추출하는 단계; 및

(b) 상기 각각의 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 각각의 증류액을 얻은 후 혼합하여 항산화 허브 조성물을 제조하는 단계.

본 발명에 있어서, 상기 항산화 허브 조성물은 상기 열수추출물을 더 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 항산화 허브 조성물 70~90중량부에 상기 열수추출물 10~30중량부를 더 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리 각각 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부 및 10~20중량부를 혼합하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 방법에 의해 제조되고, 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 허브 조성물은 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리 각각 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부 및 10~20중량부를 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 항산화 허브 조성물을 획득하기 위하여, 라벤더 167g, 베르가못 166.5g, 후리지아 166.5g, 페퍼민트 166.5g, 카모마일 166.5g, 및 로즈마리 166.5g들을 정제수로 충분히 세척한 후 혼합하였다. 열탕증류기에서 20L의 정제수를 이용하 8 ∼ 48시간 정도, 80 ∼ 100℃로 가열하여 열수 추출물을 얻었다. 추출 후, 사용된 허브들을 제거하고 열수 추출물을 90 ∼ 100℃로 가열하면서, 4 ∼ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하여 허브 조성물을 획득하였다. 획득된 허브 조성물을 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 고형분을 제거하고, 상등액을 아래의 실험에 사용하였다. 상기 허브 조성물은 각각의 허브들을 상기와 같은 방법으로 먼저 증류액을 획득한 후, 표 1에 제시된 함량비로 혼합하여도 동일한 항산화 효과를 나타내었다. 또한 획득된 허브 증류액 7L에, 증류 후 잔류하는 열수 수출물을 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 획득된 상등액을 3L (전체의 30%) 혼합하여도 항산화효과는 크게 차이나지 않았다.

아토피성 피부염의 원인는 매우 다양하나 주로 면역계의 이상 반응 혹은 과반응에 의해 비롯된다. 자유라디칼은 면역계에서도 주요 방어수단으로 쓰이며 외부에서 체내로 침투한 세균을 용균하는 등의 순기능을 수행한다. 그러나 아토피성 피부염 환자에서는 일반적으로 외부자극에 대한 활성산소가 과잉 생산되어 피부 보습층을 파괴하여 피부를 건조하게 하고, 외부 자극에 민감한 면역 반응을 보이는 병리적 인자로 작용하게 된다. 또한 아토피성 피부염을 갖는 환자의 경우 그러한 활성산소를 분해하는 다양한 항산화 시스템이 감소되어있는 것으로 알려져 있다. 따 라서, 본 발명에 따른 한방 증류액 조성물이 항산화능을 보임으로써 아토피성 피부염을 개선할 수 있는지는 DPPH의 자유라디컬 소거능으로 확인가능하다.

또한, 아토피 환자의 피부는 비정상적인 미생물 천이가 유발되며 이는 아토피가 만성 아토피염 피부질환으로 전환되어 피부상에 고착되는 중요한 요인이 된다. 아토피성 피부염의 특징 중의 하나로 피부 천연의 미생물 제어능이 현격히 떨어지고, 정상인의 피부에서 보이는 미생물 천이가 크게 바뀌는 것을 들 수 있다. 정상인의 피부에는 인간 천연 항생물질인 beta-defensin과 cathelicidine이라는 펩타이드성 물질이 분비되나, 아토피성 피부염 환자의 피부에는 그것들의 발현이 현격히 감소됨이 보고되었다. 또한 정상인의 피부에서는 거의 천이를 보이지 않는 아토피 병원균 Staphylococcus aureus, 효모 Malazessia furfur 등이 높은 비율로 발생함이 보고되고 있다. 이에, 본 발명에 따른 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 조성물이 방부제 처리 없이도 미생물이 생존되지 않는 정균능이 세균 및 진균에 대하여 존재하는지 확인가능하다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

특히, 하기 실시예에서는 표 1에 제시된 함유량에 따른 제조만이 기재되어 있으나, 이를 포함하여 상기 항산화 허브 조성물은 라벤더 10~20중량부, 베르가못 10~20중량부, 후리지아 10~20중량부, 페퍼민트 10~20중량부, 카모마일 10~20중량부, 그리고 로즈마리 10~20중량부의 범위로 혼합하는 것 또한 당업자에게 용이할 것이다.

또한, 하기 실시예에서는 본 발명의 항산화 허브 조성물 70중량부 및 열수 추출물 30중량부로 혼합한 조성물에 관한 예가 기재되어 있으나, 이에 한정되는 것은 아니고, 상기 항산화 허브 조성물 70~90중량부 및 상기 열수 추출물 10~30중량부로 함유하는 것 또한 하기 실시예를 근거로 하여 적용가능함은 당업자에게 자명할 것이다.

실시예 1: 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물의 제조

본 발명에서 사용된 허브들은 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일, 그리고 로즈마리로 선행시험을 통하여 단일 허브 증류액으로서 세포 독성을 보이지 않는 것들이다. 첫 번째 방법으로, 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물을 수득하기 위하여 라벤더 167g, 베르가못 166.5g, 후리지아 166.5g, 페퍼민트 166.5g, 카모마일 166.5g, 및 로즈마리 166.5g들을 정제수로 충분히 세척한 후 혼합하였다. 열탕증류기에서 20L의 정제수를 이용하여 8 ~ 48시간동안, 80 ~ 100℃로 가열하여 열수 추출물을 얻었다. 추출 후, 사용된 허브들을 제거하고 열수 추출물을 90 ~ 100℃로 가열하면서, 4 ~ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하여 허브 조성물을 수득하였다. 수득된 허브 조성물을 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 고형 분을 제거하고, 상등액을 허브 조성물로 획득하였다.

두 번째 방법으로, 각각 허브들의 증류액을 따로 제조하여 상기의 비대로, 또는 동량비로 혼합한 증류액 조성물을 획득하기 위해서는 다음과 같이 제조하였다. 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일, 및 로즈마리 각각 1000g씩을 20L의 정제수를 이용하여 8 ~ 48시간동안, 80 ~ 100℃로 가열하여 열수 추출물을 얻었다. 추출 후, 사용된 허브들을 제거하고 각각의 열수 추출물을 90 ~ 100℃로 가열하면서, 4 ~ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하여 각각의 허브 증류액들을 수득하였다. 획득된 각각의 증류액들은 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 불용성 고형분을 제거하였다. 이것들을 혼합하여 허브 조성물 10L를 획득하기 위하여 라벤더 증류액 1.67 L, 베르가못 1.665 L, 후리지아 1.665 L, 페퍼민트 1.665 L, 카모마일 1.665 L, 그리고 로즈마리 1.665 L를 혼합하였다.

세 번째 방법으로, 30%의 열수 추출물을 포함하는 허브 조성물을 제조하기 위하여 다음과 같이 하였다. 허브들을 미리 혼합한 후 증류액을 제조하는 첫 번째 방법에서 얻어지는, 증류 후 잔류한 열수 추출물 3L (전체의 30%)와 동일한 과정에서 획득된 허브 증류액 7L을 혼합하여 10L를 획득하였다. 이것을 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 고형분을 제거한 상등액을 허브 조성물로 획득하였다

실시예 2: 본 발명에 따른 다양한 방식으로 획득된 허브 조성물의 DPPH 를 이용한 항산화 시험

본 발명에 따른 항산화 허브 조성물에 있어서 항산화능은 조성물의 피부 및 두피 보호 효과의 중요한 이유가 된다. 따라서, 자유라디칼을 효과적이고 지속적으로 소거할 수 있는 항산화능의 정도를 조사하였다.

본 발명에 있어서, 첫 번째 방법으로, 항산화 허브 조성물을 수득하기 위하여 라벤더 167g, 베르가못 166.5g, 후리지아 166.5g, 페퍼민트 166.5g, 카모마일 166.5g, 및 로즈마리 166.5g들을 정제수로 충분히 세척한 후 혼합하였다. 열탕증류기에서 20L의 정제수를 이용하여 8 ~ 48시간 정도, 80 ~ 100℃로 가열하여 열수 추출물을 얻었다. 추출 후, 사용된 허브들을 제거하고 열수 추출물을 90 ~ 100℃로 가열하면서, 4 ~ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하여 허브 조성물을 수득하였다. 수득된 허브 조성물을 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 고형분을 제거하고, 상등액을 허브 조성물로 획득한 방법 (도 1), 두 번째 방법으로, 각각 허브들의 증류액을 따로 제조하여 상기의 비대로 또는 동량비로 혼합한 증류액 조성물을 획득하기 위해서는 다음과 같이 제조하였다. 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일, 및 로즈마리 각각 1000g씩을 20L의 정제수를 이용하여 8 ~ 48시간 정도, 80 ~ 100℃로 가열하여 열수 추출물을 얻었다. 추출 후, 사용된 허브들을 제거하고 각각의 열수 추출물을 90 ~ 100℃로 가열하면서, 4 ~ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하여 각각의 허브 증류액들을 수득하였다. 획득된 각각의 증류액들은 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 불용성 고형분을 제거하였다. 이것들의 혼합하여 허브 조성물 10L를 획득하기 위하여 라벤더 증류액 1.67 L, 베르가못 1.665 L, 후리지아 1.665 L, 페퍼민트 1.665 L, 카모마일 1.665 L, 그리고 로즈마리 1.665 L를 혼합하는 방법 (도 2), 그리고 세 번째 방법으로, 30%의 열수 추출물을 포함하는 허브 조 성물을 제조하기 위하여 다음과 같이 하였다. 허브들을 미리 혼합한 후 증류액을 제조하는 첫 번째 방법에서 얻어지는, 증류 후 잔류한 열수 추출물 3L (전체의 30%)와 동일한 과정에서 획득된 허브 증류액 7L을 혼합하여 10L를 획득하였다. 이것을 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 고형분을 제거한 상등액을 허브 조성물로 획득한 방법 (도 3)으로 제조하였고, 그러한 제조상 방법의 차이가 항산화능 효과에 차이를 주는지를 DPPH법을 이용하여 시험하였다.

화합물 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH, Sigma D9132-1G, USA)는 에탄올 내에서 자유라디칼을 발생하는데 상기에서 각각의 방법으로 제조된 항산화 허브 조성물과 일정 비율로 혼합하여 생성된 자유라디칼의 양이 어느 정도 감소하는지를 확인하였다. 에탄올 0.4 ml에 에탄올로 제조된 0.1 mM DPPH 용액 0.5 ml 그리고 정제수를 이용하여 10% ~ 0.5%의 허브 조성물을 함유하는 시험물질 0.1 ml을 첨가하였다. 10초간 강하게 교반하고, 냉암소에서 30분간 보관하였다. 효소결합면역흡수법 (ELISA)를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 항산화능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.

도 1에 나타난 바와 같이 항산화 허브 조성물을 제조 전 사용되는 허브들을 함량비대로 혼합하여 추출, 증류하여 획득한 결과 높은 항산화능을 나타내었다. 반응계에 10% 사용 시 92.2 ± 0.9%, 5% 사용 시 92.6 ± 0.2%, 1% 사용 시 47.6 ± 2.8%, 그리고 0.5% 사용 시 18.6 ± 1.7%의 자유라디칼 소거능을 보였다.

또한, 도 2에 나타난 바와 같이, 항산화 허브 조성물을 각각의 허브들을 개별적으로 증류액으로 제조 후 함량비대로 혼합하여 제조한 경우도 DPPH를 이용하여 시험한 결과 높은 항산화능을 나타내었다. 반응계에 10% 사용시 93.3 ± 0.1 %, 5% 사용 시 76.8 ± 0.1%, 1% 사용 시 8.7 ± 0.9%, 그리고 0.5% 사용 시 2.8 ± 1.2%의 항산화능을 보였다.

마지막으로 항산화 허브 조성물의 제조시, 허브 증류액을 주성분으로(70중량%)하고 열수 추출물을 30중량% 혼합하는 허브 조성물의 항산화능 정도를 시험하였다. 도 3에 나타난 바와 같이, 반응계에 10% 사용시 88.7 ± 0.4%, 5% 사용시 72.3 ± 0.9%, 1% 사용시 21.8 ± 0.1%, 그리고 0.5% 사용시 13.6 ± 0.9% 항산화능을 보였다. 이러한 시험 결과, 항산화 허브 조성물의 제조방법이 항산화능에 큰 영향을 미치지는 않았으나, 허브들을 혼합하여 추출하고 증류하여 얻어진 허브 조성물이 상대적으로 높은 항산화능을 보인 제조방법인 것으로 나타났다.

실시예 3: 본 발명에 따른 한방 조성물의 세포 독성 시험

(1) 인간 각질형성 세포 배양

인간 각질형성 세포인 HaCaT 세포주(Cell Lines Service, Germany)는 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양되었다. 배양 용기의 85 ~ 90%의 면적만큼의 배양도를 보이면, trypsin 처리로 세포를 탈착시켜 계수 후, 5 × 10³ cells/cm²으로 계대 배양하였다. 세포의 배양에는 10% Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO, Cat. No., 26140-079, USA)과 100 U/ml penicillin 및 100 ㎍/ml streptomycin이 첨가된 Delbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, GIBCO, Cat. No. 11995-065, USA)을 사용하였다. 계 대 배양을 위하여 75 T-flask (NUNC, Cat. No. 156499, Danmark)가 사용되었으며, 세포 독성 시험을 위해서는 24 well plate (NUNC, Cat. No., 142475, Danmark)가 사용되었다.

(2) 세포 독성 시험

MTT 분석법은 살아있는 세포에서만 활성을 보이는 미토콘드리아의 탈수소 효소 작용을 이용하여 최종적으로 formazan이라는 색소 산물을 형성시켜 그것을 측정함으로 시험물질의 세포 독성 정도를 측정하는 방법이다.

실시예 1에서 제조된 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물이 장기간 사용 시에도 피부자극 없이 개선 효과를 보일 수 있는 지를 확인하기 위하여, 인간 각질형성 세포에 대한 세포 독성 유무를 시험하였다. 상기에서 배양된 인간 각질형성 세포를 24 well plate에 5 × 10³ cells/well 씩 동일하게 헤마사이토미터(hemacytometer)를 이용하여 계수한 후 분주하였다. 10% FBS를 함유하는 DMEM에서 48시간 배양하여 배양용기 표면적의 25 ~ 30%만큼 배양되면, 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물이 5% ~ 0.1% 함유된 FBS-free DMEM으로 교체하여 24시간 더 배양하였다. 배양 후 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT, Sigma M5655, USA) 용액 (2.5 mg/ml)을 50㎕ 첨가하고 3시간 추가로 배양하였다. 그 후, 세포 배양액을 전부 버리고, 200㎕의 dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma D2650, USA)를 각 well 당 200㎕ 처리하여 교반한 후, 100㎕ 씩을 96 well로 취하여 효소 결합 면역 흡수법(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 독성 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.

Well 당 초기 배양 5 × 10³ 세포들이 배양용기 표면적의 25 ~ 30% 만큼 배양된 시점에서 5% 까지의 항산화 허브 조성물을 첨가하여 대조군과 비교한 세포 독성은 도 4와 같았다. 10%에서 0.1%까지 처리 대조군에 비해 약 5% 전후의 증식 촉진효과가 있었으나 대조군과 통계적인 차이는 없었다. 따라서, 상기 결과로부터 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물은 세포 독성이 없으므로 장시간동안 높은 농도로 피부 및 두피 보호용 화장료에 사용될 수 있음을 알 수 있었다.

실시예 4: 본 발명에 따른 허브 조성물의 Ethyl Linoleate 를 이용한 항산화 시험

본 발명에 따른 항산화 허브 조성물의 보호 효과의 주요 기전인 항산화능 정도를 에틸리놀리에이트(ethyl linoleate)를 이용하여 조사하였다. 펜톤 시약 (Fenton's reagent)을 이용하여 에틸리놀리에이트를 산화시켰다. 1.5 mg/L 에틸리놀리에이트, 0.2% 소디움 도데실 셀페이트 (sodium dodecyl sulfate), 1 mmol 염화제일철 (ferrous chloride), 0.5 mmol 과산화수소 (hydrogen peroxide), 및 0.75 mmol 염화칼륨 (potassium chloride)을 함유하는 0.25 mmol 트리즈마-염산 (Trizma-HCl) 버퍼 (pH 7.4) 5 ml에 제조된 항산화 허브 조성물이 10% ∼ 0.5%가 되게 첨가하였다. 대조군에는 동량의 정제수를 사용하였다. 반응액은 37℃에서 16시간동안 교반하면서 유지하였다. 에탄올에 녹인 4% 부틸화된 하이드록시톨루엔 (butylated hydroxytoluene, BHT) 50 ml를 첨가하여 추가적인 산화를 막았다. 산화의 정도는 티오바르비튜릭산 (thiobarbituric acid, TBA)법을 이용하여 측정하였다. 상기의 반응액 0.2 ml 및 8% 소디움 도데실 셀페이트 0.2 ml, 1 M 아세트산 버퍼 1.5 ml, 및 0.67% 티오바르비튜릭산 용액 1.5 ml를 혼합하였다. 혼합 후 90℃에서 60분간 가열하였다. 상온으로 냉각한 후, 포화된 부탄올 용액 5 ml을 첨가하였다. 혼합 후 3000 rpm으로 20분간 원심분리하고 상부의 부탄올 층의 흡광도를 분광광도계를 이용하여 532 nm에서 측정하였다. 항산화능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조구의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.

반응계에 10%에서 0.5%까지의 항산화 허브 조성물이 존재할 경우, 정제수를 사용한 대조군에 비하여 유의적인 지질과산화 보호 효과 즉 항산화능이 존재함을 알 수 있었다. 도 5에 나타난 바와 같이, 정제수를 사용한 대조군에 비하여 10% 항산화 허브 조성물이 존재 시 83.4 ± 1.8%의 지질과산화 억제를, 5%, 1%, 그리고 0.5% 존재 시 각각 47.3 ± 0.9%, 7.3 ± 2.1%, 그리고 3.6 ± 1.7% 지질과산화 억제 효과를 보였다.

실시예 5: 본 발명에 따른 허브 조성물의 잔존 생균 시험을 통한 정균능

허브 조성물 내 발생 가능한 생균의 수를 확인하기 위하여 조성물을 제조한 직후 그리고 30일간 상온에서 방치한 후 생균수 확인 시험을 실시하였다. 상기 제 조된 허브 조성물 원액 0.1 ml을 레틴 한천배지 (Difco, USA)에 도말하고, 30℃에서 48시간 배양하여 세균의 존재를 확인하였으며, 0.1ml을 사브로우드 덱스트로즈 한천배지 (Difco, USA)에 도말하고 25℃에서 72시간 배양하여 진균의 존재를 확인하였다.

도 6에 나타난 바와 같이, 항산화 허브 조성물을 제조 직후 세균 (A)과 진균 (B)의 존재를 한천 배지에 도말 후 배양하는 방법으로 확인한 결과 생균이 존재하지 않았으며, 아무런 방부제도 첨가하지 않고 상온에서 30일간 방치 후에도 세균 (C)과 진균 (D)이 존재하지 못하였음을 확인할 수 있었다.

따라서, 상온에서 장기간 보관에도 방부제의 첨가 없이 미생물의 천이를 억제하는 정균능은 항산화 허브 조성물이 손상된 피부와 두피에 비정상적으로 천이한 세균 및 효모를 억제함으로써 그 보호 효과를 가능케 할 것이다. 또한 장기간 사용 시에도 보존용 방부제들에 의한 유발될 수 있는 피부 자극을 피할 수 있어 피부 및 두피 보호에 도움을 줄 것이다.

실시예 6: 본 발명에 따른 허브 조성물의 염증반응에 대한 피부 진정 효과 시험

본 발명에 따른 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 조성물의 피부 진정 효과를 측정하기 위하여 실험용 마우스를 이용하였다. 실험용 마우스의 좌측 귀를 대조 부위로, 우측 귀를 시험 부위로 정하고, 에탄올로 귀를 깨끗하게 세척하였다. 제조된 허브 복합체 증류액을 25㎕ 씩을 1일 1회, 4일간 지속적으로 도포하였다. 마지 막 도포 1시간 후에는 좌측 귀에 에탄올을, 우측 귀에 아라키돈산(arachidonic acid) 2㎎을 도포하여, 1시간 후 귀의 부종(ear edema) 정도를 마이크로미터로 3회 반복 측정하였다. 아라키돈산은 염증을 유발하는 물질로, 본 연구에서는 아라키돈산을 처리한 귀를 음성대조군으로 사용하였다. 또한, 소염제인 인도메타신(indomethacin)을 귀에 도포한 쥐도 준비하여 양성대조군으로 사용하였다. 항염증 진정 효과는 아라키돈산 처리군을 기준으로 하였을 때 부종이 억제된 정도를 비교하여 평가하고, 억제율(%)는 (A-B)/A ×100 (A : 대조군 귀의 평균두께(아라키돈산 처리귀의 두께-비처리 귀의 두께), B : 시료 도포군 귀의 두께(시료 처리귀의 두께-비처리 귀의 두께))로 계산하여, 그 결과를 표 1에 나타내었다.

표 1에 나타난 바와 같이, 본 연구에 사용된 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 조성물이 염증반응 유발 후 아무것도 처리하지 않은 경우에 비해 염증반응을 완화시키는 피부 진정효과가 뛰어남을 확인하였다.

시료	농도(%)	용매	아라키돈산 비처리 귀두께 (um)(평균값)	아라키돈산 처리 귀두께 (um) / 억제율 (%)
아라키돈산	2mg/ml	에탄올	245	489 / -
인도메타신	1.0 %	에탄올	238	328 / 63.1 %
본 발명의 항산화 허브 조성물	100 %	정제수	230	378 / 39.3 %
〃	75%	정제수	242	412 / 30.3 %
〃	50%	정제수	232	445 / 12.7 %

상기 표 1에 나타난 바와 같이, 항산화 허브 조성물을 100%, 75%, 그리고 50% 처리한 시험군에서 처리하지 않은 무처리군에 비해 현저히 증가된 항염 진정효과를 확인할 수 있었다. 특히 100% 처리군에서는 염증 완화를 통한 피부 진정효과가 소염작용을 나타내는 약물인 인도메타신의 60.6 % 수준까지 나타났다. 이러한 결과는 항산화 허브 조성물이 사용된 화장료가 강력한 항산화능을 통해 손상된 피부 및 두피의 진정 효과를 나타낼 수 있음을 의미하는 것이다.

이상 상세히 기술한 바와 같이, 본 발명에 따른 항산화 허브 조성물은 각질형성세포(keratinocyte)에 대한 독성이 없으며, 화학적 항산화능 및 효소의 산화 저해능이 뛰어나며, 장기간 보관에도 미생물의 천이가 생기기 않아 장기간 사용 시 피부 자극을 유발할 수 있는 화장품 첨가용 방부제 첨가가 불필요하다. 또한, 염증 반응에 대한 피부 진정 효과가 뛰어나 손상된 피부를 진정시키는 치료에 효과적이다.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

다음의 단계를 포함하는 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 함유하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물의 제조방법:

(a) 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합하여 열수추출하는 단계; 및

(b) 상기 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 증류액을 수득하여 항산화 허브 화장료 조성물을 제조하는 단계.
다음의 단계를 포함하는 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 함유하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물의 제조방법:

(a) 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리 각각을 열수추출하는 단계; 및

(b) 상기 각각의 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 각각의 증류액을 얻은 후 혼합하여 항산화 허브 화장료 조성물을 제조하는 단계.
제1항에 있어서, 상기 (a)단계에서 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리는 각각 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부 및 10~20중량부를 혼합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 (b)단계에서 제조된 항산화 허브 화장료 조성물은 상기 (a)단계의 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합하여 수득한 열수추출물을 추가하여 혼합하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제4항에 있어서, 상기 항산화 허브 화장료 조성물 70~90중량부에 상기 (a)단계의 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합하여 수득한 열수추출물 10~30중량부를 혼합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제2항에 있어서, (b) 단계에서, 상기 각각의 증류액인 라벤더 열수추출물의 증류액, 베르가못 열수추출물의 증류액, 후리지아 열수추출물의 증류액, 페퍼민트 열수추출물의 증류액, 카모마일 열수추출물의 증류액 및 로즈마리 열수추출물의 증류액을 각각 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부 및 10~20중량부를 혼합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항의 방법에 의해 제조되고, 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합한 혼합물의 열수추출물의 증류액을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물.
제7항에 있어서, 상기 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합한 혼합물의 열수추출물은 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리 각각 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부 및 10~20중량부를 혼합하여 수득한 열수추출물인 것을 특징으로 하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물.
제2항의 방법에 의해 제조되고, 각각의 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리의 열수추출물의 증류액들을 혼합한 혼합증류액을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물.
제9항에 있어서, 상기 혼합증류액은 상기 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리 열수추출물의 증류액들을 각각 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부 및 10~20중량부로 혼합한 혼합증류액인 것을 특징으로 하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물.
제4항의 방법에 의해 제조되고, 상기 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합하여 수득한 열수추출물 10~30중량부 및 상기 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합하여 수득한 열수추출물의 증류액 70~90중량부를 혼합하여 수득한 것을 특징으로 하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물.
제11항에 있어서, 상기 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리를 혼합하여 수득한 열수추출물은 상기 라벤더, 베르가못, 후리지아, 페퍼민트, 카모마일 및 로즈마리 각각 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부, 10~20중량부 및 10~20중량부를 혼합하여 수득한 열수추출물인 것을 특징으로 하는 피부 및 두피 보호용 항산화 허브 화장료 조성물.