KR100780180B1

KR100780180B1 - 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물 및 그제조방법

Info

Publication number: KR100780180B1
Application number: KR1020060121060A
Authority: KR
Inventors: 정대현; 모상현; 이정훈; 김수정; 최선애; 김현; 박광재; 이정구
Original assignee: (주)바이오에프디엔씨; 주식회사 서울화장품
Priority date: 2006-12-01
Filing date: 2006-12-01
Publication date: 2007-11-28

Abstract

본 발명은 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, (a) 숙지황, 산수유, 택사, 산약, 복령 및 목단피를 혼합하여 열수추출하는 단계; 및 (b) 상기 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 증류액을 수득하여 한방 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물의 제조방법 및 그 방법으로 제조된 한방 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 조성물은 각질형성세포(keratinocyte)에 대한 독성이 없으며, 항산화능이 강력하고, 장기간 보관에도 미생물의 천이가 생기기 않아 장기간 사용시 피부 자극을 유발할 수 있는 방부제 첨가가 불필요하다. 또한, 피부 자극이 거의 없으면서도 탈모 방지 및 모발 생장에 효과적이다.

탈모, 한방, 열수추출

Description

탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물 및 그 제조방법{Chinese Composition Preventing Loss of Hair and Promoting Growth of Hair and Method for Preparing the Same}

도 1은 본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물의 인간 각질형성 세포에 대한 비세포 독성을 측정한 그래프이다.

도 2는 본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물의 항산화능 정도를 DPPH의 자유라디컬 소거능으로 확인한 그래프이다.

도 3은 본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물의 정균능을 나타낸 그래프이다 (A 및 B: 한방 조성물 제조 직후의 세균 및 진균; C 및 D: 상온에서 30일간 방치 후 세균 및 진균).

도 4는 본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물을 도포하고, 시간 경과에 따른 실험 마우스의 모발 생장 과정을 나타낸 외부 형태학적 사진이다. 도 4a는 음성대조군의 실험결과를 나타낸 사진이고, 도 4b는 본 발명에 따른 조성물 처리군의 실험결과를 나타낸 사진이다.

머리카락은 건강을 나타내는 중요한 척도로 건강이 나빠졌을 때는 머리카락이 거칠어지거나 빠지는 등의 현상이 나타난다. 인간의 머리에는 보통 평균적으로 100,000개의 성모가 있으며, 이들은 생장기 (anagen), 퇴행기 (catagen), 휴지기 (telogen), 탈모기(exogen)의 주기적인 변화를 하면서 생성, 소멸을 반복한다. 모발을 구성하는 기본 성분으로는 18종의 아미노산으로 구성된 90% 케라틴과 10% 정도의 수분으로 이루어지며, 구성 원소는 탄소, 산소, 질소, 수소, 유황으로 이루어져 있다. 머리카락은 하루에 80∼100개 정도가 정상적으로 빠지며 빠진 자리에는 새로운 모발이 형성되게 된다. 탈모란 머리카락이 새로 나는 숫자보다 빠지는 숫자가 많은 상태를 말하는 것으로, 탈모의 원인은 개인에 따라 다르지만, 유전적인 요인을 포함하여 노화에 의한 두피 세포의 퇴화, 모근에 공급되는 영양소의 부족, 두피 지방질 과다로 인한 산소공급 부족, 지방질이나 이물질 또는 두피 질환에 의한 염증과 모공 폐쇄 현상, 스트레스 등을 들 수 있다. 또한, 혈액순환이 잘 되면 모 근에 영양분과 산소가 원활하게 공급되어 모발이 건강하게 자라지만, 고지방식이나 흡연 등으로 혈액순환이 원활하지 않으면 탈모가 촉진된다.

유전적 요인에 의한 탈모의 유전자 발현에는 남성호르몬이 관여한다. 따라서 탈모가 되려면 일단 유전적 소인이 있어야 하고 발현 유무는 남성호르몬에 의해서 좌우된다. 남성 호르몬의 하나인 테스토스테론 (testosterone)은 5 알파-리덕타아제 (5α-reductase)라는 효소에 의해서 활성형 남성 호르몬인 디하이드로테스토스테론 (dihydrotestosterone)으로 전환된다. 5 알파-리덕타아제 (5α-reductase)는 모근에 존재하며 디하이드로테스토스테론이 모낭의 생장기를 단축시키고 모낭의 크기도 감소시키는 역할을 한다. 즉, 굵고 검은 머리털이 충분히 자라지 못하고 점점 가늘어지고 힘이 없어지면서 정상보다 훨씬 빨리 빠지도록 작용하고, 헤어 사이클을 단축시키기 때문에 처음에는 머리카락이 힘이 없고 가늘어지다 점차로 머리가 빠지고 새로 나지 않게 된다.

또한, 두피의 기저부에서는 끊임없이 세포분열이 일어나 점차 피부표면으로 밀려가면서 각화하여 두피의 제일 바깥쪽에 각질층을 형성하게 되는데 이는 시간이 지나면 표피가 떨어져 나가 비듬을 형성하게 된다. 이 비듬이 피지선에서 나오는 피지와 혼합하여 지루가 되는데, 이것이 모공을 막아 영양장애와 위축작용을 일으키면서 머리카락이 빠지게 된다. 그러나 지루 자체 역시 남성 호르몬 작용에 의한 이차적인 현상이며, 지루 자체가 탈모의 원인은 아니다. 즉 남성호르몬은 머리카락은 가늘게 하지만 피지선은 비대시켜 피지의 분비를 증가시킨다. 피지선이 비대해지고 기능이 활발해지면, 머리의 표면에 잔비듬이 많아지고 5 알파-리덕타아제 (5 α-reductase)의 분비도 늘어나 모발의 발육과 성장에 영향을 주게 된다.

유전적 요인과 호르몬에 의한 탈모의 생리적 인자들과 더불어, 모발 손상의 원인은 물리적 원인과 화학적 원인으로 나눌 수 있다.

물리적이라고 하는 것은 기술적인 자극 (브러싱이나 역모), 열 등에 의한 것으로 주로 형태적인 변화를 주지만, 웨이브제나 염색제 등에 의해 모발성분에 화학적 변화를 주어 질적 손상을 일으키는 경우가 있다. 파마는 모간의 구조를 파괴한 후 다시금 화학약품으로 고정시키는 것이며, 염색 염료 역시 염료의 주성분인 과산화수소로 인해 모발의 단백질이 파괴된다. 또한 습관적인 드라이 역시 열에 약한 모발을 계속적으로 자극하는 결과를 초래하게 되며, 이런 모든 것이 탈모의 직간접적인 원인으로 작용한다. 자외선에 의한 손상은 모발이 건조해지고, 약해지며, 거칠어지고, 색이 바래고, 윤기가 없어지며, 잘 부러지게 되는 것이 특징이다. 모발의 큐티클에서 시작된 손상은 모피질에까지 영향을 주게 되며, 모발의 멜라닌 색소가 자외선에 의해 산화 반응이 일어나 탈색된다. 이외에 커트, 대기오염, 마찰, 과도한 다이어트, 편식 등에 의하여도 모발의 손상이 일어난다. 특히, 현대사회는 다양한 오염물질, 물리적 자극인자, 과도한 흡연, 음주 및 스트레스에 의해 여러 종류의 산화적 스트레스를 받게 된다.

최근의 연구 보고에 의하면 화학적으로 유도된 산화적 스트레스를 두피에 가할 경우, 모발의 주기가 유의적으로 단축되고, 피지의 산화에서 유발되는 탈모가 일어난다고 알려져 있다. 또한, 다양한 항산화 물질들이 탈모의 예방 및 발모 촉진에 효과가 있음이 알려지고 있다.

탈모 방지 또는 모발 생장 촉진에 관한 종래 다수의 특허가 있는데, 대한민국공개특허 10-2004-0008916호 “탈모방지 및 발모촉진 성분을 함유하는 머리비누 및 그 제조방법”은 우골, 우담낭, 기타 우지에서 추출된 기름, 카세인 등을 함유한 머리비누이고, 대한민국등록특허 제10-0609210호 “탈모방지 기능을 가진 샴푸 조성물”은 당귀뿌리 및 우엉뿌리에서 에탄올에 의해 추출된 추출물을 함유하는 샴푸 조성물로 본 발명에서의 제조방법과는 상이한 방법으로 제조되었으며, 대한민국공개특허 제10-2004-0105048호 “약초 추출물을 이용한 탈모 방지 및 발모촉진용 조성물 및 그 제작방법”은 인삼, 뽕잎, 솔입, 감초, 백작약 및 하수오를 물에 넣고 감압 저온 중탕하여 추출한 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명에서의 열수 추출과는 상이하고, 대한민국공개특허 제10-2004-0030036호 “한약재를 이용한 탈모 방지제 및 발모제”는 하수오, 석창포, 생지황, 단삼, 잔대, 천문동, 상엽, 오가피, 복분자, 행인을 믹싱하여 혼합물로 제조하고, 혼합물에 증류수를 가해 달인 후 엑기스를 추출하는 방법으로 제조하여, 열수추출을 이용하기는 하였으나, 일정 온도 이상에서 일부 정유성분, 방향족 성분, 그리고 항산화 성분이 그대로 공기중으로 휘발되어 소실되는 단점이 있다.

또한, 탈모 방지 또는 모발 생장 촉진 조성물의 제조방법에 관한 종래 기술로, 대한민국특허출원 제10-1997-034216호 "생약 탈모 방지액"은 숙지황 등을 포함한 16종의 생약을 에틸알콜 및 생수에 담아 15일이상 숙성시켜 추출액을 제조하는 것이고, 대한민국등록특허 제10-0603122호 "생약재 조성물 및 이를 포함하는 탈모방지 및 모발생장 촉진용 약학적 조성물"은 당약, 감국, 측백엽 및 상백을 포함하 는 생약재를 물로 추출하고, 천초, 백지 등의 생약재를 식물성 기름으로 추출하고, 생강을 테틸알콜 또는 에틸알콜과 물의 혼합용매로 추출한 조성물을 혼합하여 제조하는 생약재 조성물의 제조방법 등이 개시되어 있으나, 본 발명의 제조방법과는 상이하다. 그 외에도, 대한민국공개특허 제10-2005-0050321호 "탈모방지 및 발모촉진용 조성물", 대한민국공개특허 제10-2004-0030036호 "한약재를 이용한 탈모방지제 및 발모제", 대한민국등록특허 제10-0624544호 “탈모방지용 조성물 및 그 제조방법” 등 다수의 특허출원이 존재하나, 일정온도 이상에서 정유 성분, 방향족 성분, 항산화 성분이 그대로 소실되는 문제점이 여전히 존재하였다.

이에 본 발명자들은 열수 추출 시 일정 온도 이상에서 휘발되는 증류성분을 냉각 회수하면, 정유성분, 방향족 성분, 및 항산화 성분이 풍부한 열수 증류 분획을 확보할 수 있다는 것을 확인하고, 각질형성세포(keratinocyte)에 대한 독성이 없으며, 항산화능이 강력하고, 장기간 보관에도 미생물의 천이가 생기기 않아, 피부 자극을 유발할 수 있는 방부제 첨가가 필요하지 않는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물을 개발하고, 본 발명을 완성하였다.

결국, 본 발명의 주된 목적은 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물의 제조방법 및 그 조성물을 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 탈모 방지 모발 생장 촉진용 한방 조성물의 제조방법을 제공한다:

(a) 숙지황, 산수유, 택사, 산약, 복령 및 목단피를 혼합하여 열수추출하는 단계; 및

(b) 상기 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 증류액을 수득하여 한방 조성물을 제조하는 단계.

본 발명은 또한, 다음의 단계를 포함하는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물의 제조방법을 제공한다:

(a) 숙지황, 산수유, 택사, 산약, 복령 및 목단피 각각을 열수추출하는 단계; 및

(b) 상기 각각의 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 각각의 증류액을 얻은 후 혼합하여 한방 조성물을 제조하는 단계.

본 발명에 있어서, 숙지황 30~35중량부, 산수유 15~20중량부, 택사 15~20중량부, 산약 10~15중량부, 복령 10~15중량부 및 목단피 10~15중량부로 혼합하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 방법에 의해 제조되고, 숙지황, 산수유, 택사, 산약, 복령 및 목단피를 함유하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 한방 조성물은 숙지황 30~35중량부, 산수유 15~20중량부, 택사 15~20중량부, 산약 10~15중량부, 복령 10~15중량부 및 목단피 10~15중 량부를 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 한방 조성물에 사용된 6가지의 생약 성분들의 문헌적 약리 작용을 살펴보면 다음과 같다.

숙지황은 현삼과(玄蔘科)에 속하는 다년생초인 생지황의 뿌리를 술에 담갔다가 9번 찌고, 9번 건조한 한약재로써 지황소(地黃素)와 만니톨 및 당질을 많이 함유하고 있다. 맛은 달면서도 쓴맛이 돌고 따뜻한 성질이 있어 혈을 보(補)하고 정(精:생명이 발생하고 활동하는 데 기본이 되는 물질)을 보충해서 허리와 무릎이 시리고 아픈 증상이나 월경이상, 어지럼증 등을 치료하고 머리를 검게 하는 효능이 있다. 숙지황은 사물탕(四物湯)의 주요 약재이며, 각종 만성병 중 몸이 허약하여 나타나는 내열(內熱), 인후건조(咽喉乾燥), 갈증 등의 증상에 쓰인다. 사물탕은 여성의 출산 후나 월경 등으로 인한 과다출혈, 허약, 어지럼증 등에 널리 쓰인다. 예로부터 허담(虛痰)을 치료하는 데 효과가 있어 차로 달여 마셨으며, 기침과 천식에 복령(茯笭)·반하(半夏) 등과 배합하여 사용하였다. 이밖에도 돼지고기를 삶은 국물과 함께 복용하면 습관성 변비에 효과가 있다. 영양분이 많고 기름기가 있어 장기간 복용하면 소화장애를 일으켜 설사·복창(腹脹) 등 부작용이 생긴다.

산수유는 층층나무과의 낙엽교목으로 산수유나무의 열매로 약간의 단맛과 함께 떫고 강한 신맛이 난다. 산수유에는 코르닌, 모노니사이드, 로가닌, 탄닌, 사포닌등의 배당체와 포도주산, 사과산, 주석산 등의 유기산이 함유되어 있으며, 비타 민 A와 다량의 당도 함유하고 있다. 산수유는 몸을 보하는 효과가 있어 내과, 부인과, 소아질환의 허증에 쓰이며, 기운을 돕고 몸을 가볍게 하며, 항균력과 항산화능이 뛰어나 특히 머리털이 희어지지 않게 하는 효능이 있다.

택사는 여러해살이 풀로 성미는 차가우며, 뿌리줄기에 정유, 수지, 아세틸콜린, 레시틴, 아스파라긴을 비롯한 많은 양의 당분, 피토스테롤, 피토스테롤린, 팔미틴, 스테아린, 올레인, 알리솔, 알칼로이드, 녹말, 단백질 등이 있다. 택사는 이뇨작용, 혈압과 혈당을 강화, 혈중 콜레스테롤을 낮추는 효능이 있다. 또한, 실험동물의 지방간 치료에도 효과가 있으며, 콜레스테롤의 침착에 의한 혈관벽의 상처를 아물게 하는데도 효과가 있다.

산약은 참마과 참마속 식물로 그 덩이줄기를 약용으로 쓰인다. 주로 글루코스, 프록토오스 등의 당성분과 글루코사민, 티로신, 루신 등의 점질물을 함유하고 있으며, “신농본초경”에서 허를 보하고 한열의 사기를 없애며 기력을 보하고 피부를 튼튼히 한다고 하였다. 특히, 산약의 약리작용으로는 자신의 직접적인 향균작용은 하지 않지만 백혈구가 황색포도구균에 대한 탐식능역을 촉진하는 작용이 있다. 또한 알레르기 전달물질의 방출 억제와 항히스타민 촉진작용이 있으며, 예로부터 만성 기관지염, 폐결핵, 만성종양, 비뇨계 감염, 부인과 감염 등 각종 감염성 질환으로 기와 음이 허한 자에게는 택사를 배합하여 육미지황환, 팔미지황환, 우거신기환 등으로 사용하기도 한다.

복령은 송진이 땅으로 들어가 오랜 세월이 흘러 복령이 되는데 베어낸지 오러 해 지난 소나무 뿌리에 기생하여 혹처럼 크게 자라는데, “신농본처경”에서는 복령을 오래 복용하면 안혼·양신하여 장수한다고 적혀있다. 또한, “동의보감”에서는 입맛을 좋게 하고 구역을 멈추며 마음과 정신을 안정시키며, 폐위로 담이 막힌 것을 낫게 하며 신장에 있는 나쁜 기운을 몰아 내 소변을 잘 나오게 한다고 하였다. “선경(仙經)”에서는 음식대신 먹으면 정신을 맑게 하고, 혼백을 안정시키며 9규(九竅)를 잘 통하게 하며 살을 찌게 하고, 대·소장을 좋게 하며 가슴을 시원하게 한다고 기록되어 있다. 복령에는 복령당이라는 펙틴이 84% 함유되어 있으며, 물에 녹이면 98% 포도당으로 바뀐다. 또한, 철, 마그네슘, 칼슘, 칼륨, 나트륨, 인, 셀렌 등이 함유되어 있으며, 이 밖에 단백질, 지방, 레시틴 등이 포함되어있다. 복령의 다당류는 면역 부활작용, 항암작용을 나타내며, 특히 본 발명에 쓰인 백복령은 비를 보하고 담을 삭이는 작용이 있다.

목단피는 모란의 뿌리껍질을 말린 것으로 “동의보감”에서는 성질은 약간 차며 맛은 쓰고 매우며 독이 없다. 어혈을 없애고 여자의 월경불순, 요통을 낫게 하며, 유산시키고 태반을 나오게 하고 산후의 모든 혈병(血病), 기병(氣病)을 치료한다고 기록되어 있다. 목단피는 혈액순환을 촉진하여 어혈을 없애고 과로로 발생한 요통이나 관절통의 진통작용이 있다. 또한 혈압 강화 작용, 항균작용이 뛰어나며, 본 발명에서는 혈액순환작용을 향상시켜 모발의 탈모를 막고 발모를 촉진하여 검고 윤기있는 모발을 유지시키는 효과를 나타낸다.

본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물을 획득하기 위하여, 숙지황 30~35g, 산수유 15~20g, 택사 15~20g, 산약 10~15g, 복령 10~15g 및 목단피 10~15g의 한약재들을 정제수에 충분히 세척한 후, 혼합한다. 열탕증류기에서 10L의 정제수를 이용하여 8 ~ 48시간 정도, 80 ~ 100℃로 가열하여 열수 추출물을 얻는다. 추출 후, 사용된 한약재들을 제거하고 열수 추출물을 90 ~ 100℃로 가열하면서, 4 ~ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하여 한방 증류액을 획득한다. 획득된 상기 한방 혼합 증류액을 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 고형분을 제거하고, 본 발명에 따른 한방 조성물을 획득한다.

유사한 항산화능을 갖는 한방 조성물을 획득하는 두 번째 방법으로는 사용되는 각각 한약재들을 별도로 추출, 증류하고, 상기의 중량비대로 혼합하는 방법이다. 이를 위해, 숙지황, 산수유, 택사, 산약, 복령 및 목단피 각각 1000g씩을 10L의 정제수를 이용하여 8 ~ 48시간 정도, 80 ~ 100℃로 가열하여 따로 열수 추출물을 얻는다. 추출 후, 사용된 한약재들을 제거하고 각각의 열수 추출물을 90 ~ 100℃로 가열하면서, 4 ~ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하여 개별적인 한방 증류액들을 수득한다. 획득된 각각의 증류액들은 12000 rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 불용성 고형분을 제거한다. 상기 각각의 증류액들을 혼합하여 한방 조성물 10L를 획득하기 위하여 숙지황 3.0~3.5L, 산수유 1.5~2.0L, 택사 1.5~2.0L, 산약 1.0~1.5L, 복령 1.0~1.5L 및 목단피 1.0~1.5L를 혼합한다.

본 발명에 따른 한방 조성물이 항산화능을 보임으로써 탈모 방지 및 모발 생장 촉진 효과를 갖을 수 있는지를 DPPH의 자유라디컬 소거능으로 확인가능하다. 또한, 본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물이 방부제 처리 없 이도 미생물이 생존되지 않는 정균능이 세균 및 진균에 대하여 존재하는지를 확인가능하다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

특히, 하기 실시예에서는 표 1에 제시된 함유량에 따른 제조만이 기재되어 있으나, 이를 포함하여 숙지황 30~35중량부, 산수유 15~20중량부, 택사 15~20중량부, 산약 10~15중량부, 복령 10~15중량부 및 목단피 10~15중량부로 혼합하는 것 또한 당업자에게 용이할 것이다.

실시예 1: 본 발명에 따른 한방 조성물의 제조

본 발명에서 사용된 한약재들은 선행시험을 통하여 단일 한방 증류액으로서 세포 독성을 보이지 않는 6가지로 구성되어 있다. 그 생약명과 학명, 함유량은 표 1과 같다.

(1) 첫 번째 방법은 사용되는 상기 한약재들을 추출 및 증류전에 미리 혼합하는 것으로, 본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물을 획득하기 위하여 상기 표 1의 한약재들을 정제수에 충분히 세척한 후, 상기에 제시된 함량비대로 혼합하였다.

구체적으로, 본 발명에 따른 한방 조성물 10L를 획득하기 위하여, 숙지황 32g, 산수유 16g, 택사 16g, 산약 12g, 복력 12g, 목단피 12g을 열탕증류기에서 8 ~ 48시간 정도, 80 ~ 100℃로 가열하여 열수 추출물을 얻었다. 추출 과정 중에 상기 추출온도에서 휘발되는 증류성분들을 획득하기 위하여 4 ~ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하였다. 열수 추출 중 휘발되는 증기 등을 상기 냉수 냉각관에 통과시킴으로써 응결되어 열탕 증류기로 회수하였다. 획득된 한방 열수 추출액 조성물을 12,000rpm에서 4℃, 30분간 원심분리하여 고형분을 제거하고, 상등액을 하기의 실험에 사용하였다.

(2) 두 번째 방법으로는 사용되는 각각 한약재들을 별도로 추출, 증류하고, 상기의 중량비대로 혼합하였다. 또한, 본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물을 제조하기 위하여 숙지황, 산수유, 택사, 산약, 복령, 그리고 목단피 1,000g씩을 10L의 정제수를 이용하여 8 ~ 48시간에서 80 ~ 100℃로 가열하여 따로 열수 추출물을 얻었다. 추출과정 중 상기 추출 온도에서 휘발되는 증류 성분들을 회수하기 위하여 4 ~ 10℃의 냉수 냉각관을 이용하였다. 구체적으로 열수 추출 중 휘발되는 중기들은 냉수 냉각관을 통과하는 동안 응결되어 열탕 증류기로 회수되었다. 상기 각각의 증류액들을 혼합하여 한방 열수 추출액 조성물 10L를 획득하기 위하여 숙지황 열수 추출액 3.2L, 산수유 열수 추출액 1.6L, 택사 열수 추출액 1.6L, 산약 열수 추출액 1.2L, 복령 열수 추출액 1.2L, 목단피 열수 추출액 1.2L를 혼합하여 제조하였다. 상기 한방 조성물은 (1)의 방법과 같이 각각의 한약재들을 상기와 같은 방법으로 먼저 각각 한방 열수 추출액을 획득한 후, 표 1에 제시된 함량비로 혼합하여도 동일한 탈모 방지 및 모발 생장 촉진 효과를 나타내었다.

실시예 2: 본 발명에 따른 한방 조성물의 세포 독성 시험

(1) 인간 각질형성 세포 배양

인간 각질형성 세포인 HaCaT 세포주(Cell Lines Service, Germany)는 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양되었다. 배양 용기의 85 ~ 90%의 면적만큼의 배양도를 보이면, trypsin 처리로 세포를 탈착시켜 계수 후, 5 × 10³ cells/cm²으로 계대 배양하였다. 세포의 배양에는 10% Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO, Cat. No., 26140-079, USA)과 100 U/ml penicillin 및 100 ㎍/ml streptomycin이 첨가된 Delbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, GIBCO, Cat. No. 11995-065, USA)을 사용하였다. 계대 배양을 위하여 75 T-flask (NUNC, Cat. No. 156499, Danmark)가 사용되었으며, 세포 독성 시험을 위해서는 24 well plate (NUNC, Cat. No., 142475, Danmark)가 사용되었다.

(2) 세포 독성 시험

MTT 분석법은 살아있는 세포에서만 활성을 보이는 미토콘드리아의 탈수소 효소 작용을 이용하여 최종적으로 formazan이라는 색소 산물을 형성시켜 그것을 측정함으로 시험물질의 세포 독성 정도를 측정하는 방법이다.

실시예 1에서 제조된 본 발명에 따른 한방 조성물이 장기간 사용 시에도 피부자극 없이 개선 효과를 보일 수 있는 지를 확인하기 위하여, 인간 각질형성 세포에 대한 세포 독성 유무를 시험하였다. 상기에서 배양된 인간 각질형성 세포를 24 well plate에 5 × 10³ cells/well 씩 동일하게 heamacytometer를 이용하여 계수한 후 분주하였다. 10% FBS를 함유하는 DMEM에서 48시간 배양하여 배양용기 표면적의 25 ~ 30%만큼 배양되면, 본 한방 조성물이 10% ~ 0.1% 함유된 FBS-free DMEM으로 교체하여 24시간 더 배양하였다. 배양 후 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT, Sigma M5655, USA) 용액 (2.5 mg/ml)을 50㎕ 첨가하고 3시간 추가로 배양하였다. 그 후, 세포 배양액을 전부 버리고, 200㎕의 dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma D2650, USA)를 각 well 당 200㎕ 처리하여 교반한 후, 100㎕ 씩을 96 well로 취하여 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 독성 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.

그 결과, well 당 초기 배양 5 × 10³ 세포들이 배양용기 표면적의 25 ~ 30% 만큼 배양된 시점에서 10% 까지의 한방 조성물을 첨가하여 대조군과 비교한 세포 독성은 도 1에 나타난 바와 같다. 도 1에서 나타난 바와 같이, 무처리군(C)과 비교하여 10% 처리시 100.87, 5% 처리 시 95.38, 및 1% 처리 시 94.80, 0.5% 처리시 99.31, 0.1% 처리 시 97.25로 무처리군을 100으로 환산하였을때 무처리군과 통계적인 차이가 없음을 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 한방 조성물은 장기간 사용하여도 세포독성에 의한 두피자극이 유발되지 않음을 알 수 있었다.

실시예 3: 본 발명에 따른 한방 조성물의 농도별 항산화 시험

상기 실시예 1에서 제조된 본 발명에 따른 한방 조성물의 개선효과에 대한 주요한 메커니즘의 하나로 항산화능을 보임으로써 탈모 방지 및 모발 생장 촉진 효과를 갖을 수 있는지를 DPPH의 자유라디컬 소거능으로 확인하였다.

화합물 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH, Sigma D9132-1G, USA)는 에탄올 내에서 자유라디칼을 발생하는데, 상기 실시예 1에서 제조된 본 발명에 따른 한방 조성물과 일정 비율로 혼합하여 생성된 자유라디칼의 양이 어느 정도 감소하는지를 확인하였다. 에탄올을 0.2 ml에 에탄올로 제조된 0.1 mM DPPH 용액 0.5 ml 및 정제수를 이용하여 최종농도가 10% ~ 0.1% 되도록 한방 조성물을 0.3ml을 첨가하였다. 10초간 강하게 vortexing 하고, 냉암소에서 30분간 보관한 다음, ELISA를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 항산화능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.

도 2에서 나타난 바와 같이, 정제수를 사용한 대조군과 비교하여 10% 처리시 반응계의 DPPH 자유라디칼이 44.28%, 5% 처리 시 26.53%, 및 1% 처리 시 8.55%, 0.5% 처리시 5.68% 감소됨을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 본 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물을 샴푸 등 모발제품에 응용할 경우, 1~10%의 높은 함량을 사용하여도 세포 독성이 적으면서 유의적인 항산화능으로 탈모 방지 및 모발 생장 촉진 효과를 갖을 수 있음을 보여주는 것이다.

실시예 4: 본 발명에 따른 한방 조성물의 잔존 생균 시험을 통한 정균능

본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물이 자발적 정균능을 통하여, 첨가되는 방부제 처리 없이 미생물의 천이를 억제할 수 있는지를 확인하였다.

본 발명에 따른 한방 조성물 내 발생 가능한 생균의 수를 확인하기 위하여 상기 실시예 1에서의 조성물을 제조한 직후, 그리고 30일간 상온에서 방치한 후 생균수 확인 시험을 실시하였다. 실시예 1에서 제조된 한방 조성물 0.1 ml을 레틴 한천배지 (Difco, USA)에 도말하고, 30℃에서 48시간동안 배양하여 세균의 존재를 확인하였으며, 0.1ml을 사브로우드 덱스트로즈 한천배지 (Difco, USA)에 도말하고 25℃에서 72시간동안 배양하여 진균의 존재를 확인하였다.

도 3에서 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 한방 조성물 제조 직후 세균(A)과 진균(B)의 존재를 한천 배지에 도말 후 배양하는 방법으로 확인한 결과 생균이 존재하지 않았으며, 상온에서 30일간 방치 후에도 세균(C)과 진균(D)이 존재하지 못하였음을 확인할 수 있었다. 따라서, 상온에서 장기간 보관에도 방부제의 첨가 없이 미생물의 천이를 억제하는 본 발명에 따른 한방 조성물의 정균능은 비듬 생성균 등의 비정상적 천이를 억제함으로써 탈모 방지 및 모발 생장 촉진 효과를 가능하게 할 수 있을 것이다.

실시예 5: 본 발명에 따른 한방 조성물의 모발 생장 촉진 효과 시험

본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물의 효과를 알아보기 위하여 C57BL/6N 마우스를 이용하여 본 조성물의 모발 생장 촉진 효과를 확인하였다. C57BL/6N 마우스가 두번째 catagen(퇴행기)시기로 진입하는 생후 49-51일째에 왁스를 이용하여 등의 털을 완전히 제거하고, 상기 실시예 1에서 제조된 본 발명에 따른 한방 조성물을 15일간 하루 2회씩 100ul씩 발라주어 모발 생장 효과를 확인하였다.

대조군으로는 모발 생장 촉진 효과가 없는 순수한 물을 사용하였으며, 결과는 시간 경과에 따른 모발의 길이를 측정하여 모발 생장 촉진 정도를 비교하였다.

실험결과는 아래 표 2와 같으며, 도 4는 대표적 예로써 시간의 경과에 따른 모발의 생장과정을 나타내는 외부형태학적인 변화 사진이다. 도 4에 나타난 바와 같이, 5일 경과후에는 거의 차이가 없으나, 10일 후에는 약간의 차이가 생겼고, 15일 후에는 대조군과 확연한 차이가 있어, 모발 생장효과가 있음을 알 수 있었다.

실시예 6: 본 발명에 따른 한방 조성물의 피부 자극 시험

대부분의 한방 추출물의 경우 일반 화학제품들에 비해 피부자극이 적은 것은 사실이나 피부 유해물질들이 제대로 제거되지 않을 경우 피부 트러블이나 두피 가려움증을 유발한다. 이에 본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진 한방 조성물의 피부자극 정도를 측정하기 위해, 11명의 피험자들을 대상으로 patch test를 실시하였다.

본 조성물 및 대조군을 100㎕ 함유하는 patch를 피험자의 팔 안쪽 깨끗한 부위에 부착하고 48시간 후에 흐르는 물로 씻어 낸 후 30분 후의 자극 정도를 판정하였다. 음성대조군은 순수한 물을 사용하였으며, 양성대조군은 5%의 SLS(Sodium Laureth Sulfate)를 사용하였다.

피부 반응의 평가는 자극 수치를 5단계로 나누어 판정한 결과, 본 발명에 따른 한방 조성물의 피부자극성은 음성대조군에서 4.5, 양성대조군에서 52.2, 본 발명에 따른 조성물은 9.0으로 피부자극성이 거의 존재하지 않음을 확인하였다.

* 피부자극 평균정도(%) :

{(4자극수치×해당피검자수)+(3자극수치×해당피검자수)+(2자극수치×해당피검자수)+(1자극수치×해당피검자수)+(0자극수치×해당피검자수)×100} / (최고자극수치(4) × 전체피검자수)

* 자극성 판정 : 1(10이하, 최소자극), 2(10∼20, 온화한 자극) 3(20∼30, 보통자극), 4(30이상, 심한자극)

이상 상세히 기술한 바와 같이, 본 발명에 따른 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 조성물은 각질형성세포(keratinocyte)에 대한 독성이 없으며, 항산화능이 강력하고, 장기간 보관에도 미생물의 천이가 생기기 않아 장기간 사용시 피부 자극을 유발할 수 있는 방부제 첨가가 불필요하다. 또한, 피부 자극이 거의 없으면서도 탈모 방지 및 모발 생장에 효과적이다.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

다음의 단계를 포함하는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물의 제조방법:

(a) 숙지황, 산수유, 택사, 산약, 복령 및 목단피를 혼합하여 열수추출하는 단계; 및

(b) 상기 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 증류액을 수득하여 한방 조성물을 제조하는 단계.
다음의 단계를 포함하는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물의 제조방법:

(a) 숙지황, 산수유, 택사, 산약, 복령 및 목단피 각각을 열수추출하는 단계; 및

(b) 상기 각각의 열수추출물을 가열하여 생성된 증기를 냉각시켜 각각의 증류액을 얻은 후 혼합하여 한방 조성물을 제조하는 단계.
제1항 또는 제2항에 있어서, 숙지황 30~35중량부, 산수유 15~20중량부, 택사 15~20중량부, 산약 10~15중량부, 복령 10~15중량부 및 목단피 10~15중량부로 혼합 하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 또는 제2항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조되고, 숙지황, 산수유, 택사, 산약, 복령 및 목단피를 함유하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물.
제4항에 있어서, 상기 조성물은 숙지황 30~35중량부, 산수유 15~20중량부, 택사 15~20중량부, 산약 10~15중량부, 복령 10~15중량부 및 목단피 10~15중량부를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제3항의 방법에 의해 제조되고, 숙지황, 산수유, 택사, 산약, 복령 및 목단피를 함유하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물.
제6항에 있어서, 상기 조성물은 숙지황 30~35중량부, 산수유 15~20중량부, 택사 15~20중량부, 산약 10~15중량부, 복령 10~15중량부 및 목단피 10~15중량부를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.