KR100748852B1 - 미백 활성을 갖는 백량금 추출물을 함유하는 피부외용조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 미백 효과가 뛰어난 백량금 추출물을 함유하는 피부외용 약학조성물 또는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 티로시나제 활성을 저해하고 멜라닌 생성을 억제하여 미백 활성을 갖는 백량금 추출물을 포함하는 피부외용 약학조성물 또는 화장료 조성물에 관한 것이다.

백량금, 미백, 피부외용, 약학조성물, 화장료 조성물

Description

미백 활성을 갖는 백량금 추출물을 함유하는 피부외용 조성물{A topical composition comprising extract of Ardisia crenata showing skin whitening activity}

본 발명은 백량금 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부외용제 약학조성물 및 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부색은 멜라닌, 카로틴 및 헤모글로빈의 양에 따라 결정되어 지는데 이중 멜라닌이 가장 결정적인 요소이다. 멜라닌은 피부(표피)내 기저층에 존재하는 색소세포인 멜라노사이트(melanocyte)에서 합성되며 주변 각질세포(Keratinocyte)로 전이되어 사람의 피부색을 나타낸다. 멜라닌이 비정상적으로 적게 생산되면 백반증(Vitiligo)과 같은 피부 병변이 유발된다. 반대로 과잉 생산은 중년 여성들의 주요 고민 중 하나인 기미, 주근깨를 형성하며 또한 피부암(Melanoma)과도 밀접한 관계가 있다.

미백 작용을 더욱 자세히 설명하면 다음과 같다. 멜라닌은 피부 표피의 기저층에 존재하는 멜라노사이트라는 세포에서 티로신(Tyrosine)이 효소 및 비효소적 산화반응을 거쳐 생성되며, 표피를 구성하고 있는 각질세포로 전이된다. 멜라닌의 생 합성에 관여하는 중요한 효소로는 티로시나제(Tyrosinase), 티로시나제 관련 프로테인 1(Tyrosinase-Related protein 1) 및 도파크롬 토토머라제(dopachrome tautomerase)가 있다. 티로시나제 외의 두 효소는 비교적 최근에 개발되어 최근에 주목을 끌고 있으나 멜라닌 합성에 결정적인 역할을 하는 효소는 티로시나제이다. 멜라닌의 생합성 첫 단계는 티로시나제에 의하여 유발된다. 티로시나제에 의해 티로신이 도파(Dopa)로 되고, 이 도파(Dopa)를 도파퀴논(Dopa-quinone)으로 만든다. 이 두 반응의 다음단계 과정들은 비효소적인 반응에 의해서도 가능한 것으로 알려져 있으며 티로시나제 단독으로도 멜라닌 생성이 가능하다고 알려져 있다.

최근에는 피부 세포내의 신호 전달물질의 발현에 따른 멜라닌 형성과정에 대한 새로운 이론이 제시되고 있다. 즉, 피부가 자외선에 노출되면 염증을 유발시키는 인터루킨-알파(Interlukin-)가 상피(Epidermis) 내에 있는 케라티노사이트(Keratinocyte)로부터 발현되고, 이 인터루킨-알파가 케라티노사이트 엔도셀린(Endothelin) 발현을 촉진시킨다. 이러한 일련의 과정이 멜라노사이트의 형성을 증가시키고 멜라노사이트를 활성화시킨다. 이렇게 형성된 멜라노사이트내 멜라노좀에서 티로신이 티로시나제에 의해 멜라닌이 형성된다.

이미 아스코르빈산(일본특허공개평 4-9320호), 하이드로퀴논(일본특허공개평 6-192062호), 코직산(일본특허공개평 56-7710호), 알부틴(일본특허공개평 4-9315호) 및 일부의 화합물들이 티로시나제 저해 활성을 가지고 있어 미백 화장료의 원료로 이용되고 있으나, 처방계 중에서의 안정성이 떨어져 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제 한되고 있는 실정이다. 그리고 티로시나제의 억제 효과는 입증되었으나, 실제 생체 레벨과 유사한 실험에서는 그 효과가 낮게 나타난다. 따라서 생체레벨과 유사한 멜라노마 세포 배양에 의한 저해 효과가 요구되고 있는 실정이다. 또한 하이드로퀴논은 발암성 물질로 규정되어 사용이 금지되고 있다. 코직산과 아스코르빈산은 매우 불안정한 물질이다. 소량 함유한 화장료를 실온에서 수주일동안 보관하면 갈변 현상이 발생한다. 식물성 천연물들은 안전성이 뛰어날 뿐만 아니라 여러 가지 유익한 성분들을 가지고 있어 미백 물질의 좋은 검색대상이 되고 있다.

오래전부터 멜라닌 생성을 억제하여 미백 효과 기능을 지닌 기존원료가 갖는 문제점을 해결하기 위해서 한방제로 사용되고 있는 생약, 야채, 과일, 꽃 등의 안전성이 뛰어난 식물추출물로부터 비정상적인 멜라닌 생성을 억제할 수 있는 여러 가지 효과를 가진 추출물을 찾고자 하는 노력이 있어 왔다.

백량금(Ardisia crenata)은 쌍떡잎식물 앵초목 자금우과의 식물로 섬 골짜기나 숲의 그늘에서 자라는 높이 약 1m의 상록관목이다. 잎은 어긋나고 긴 타원형이며 짙은 초록빛으로서 윤이 나고 가장자리의 둔한 톱니 사이에는 선모(腺毛)가 있다. 꽃은 양성화로서 6∼8월에 피는데, 흰 바탕에 검은 점이 있으며 가지와 줄기 끝에 산형꽃차례로 달린다. 열매는 핵과로서 둥글고 9월에 붉게 익으며 다음해 새꽃이 필 때까지 달리며 한국(홍도·제주도)·일본·타이완·중국·인도에 분포한다.

백량금은 동의치료에서 뿌리를 독풀이 약으로 달여 쓰였으며 민간에서는 기생충 약으로도 사용되어져 왔다. 함유되어져 있는 성분으로는 트리터페노이드사포닌류가 알려져 있으며(Jia et al, Phytochemistry , 37(5), pp1389-1396, 1994; Jia et al, Tetrahedron 50(41), pp11853-11864, 1994) 또한 지방산류와 스테롤(sterol)류의 화합물도 함유된 것으로 알려져 있다.(Han et al, Zhonggou Zhong Yao Za Zhi, 14(12), pp737-739, 1989)

이에 본 발명자들은 예의 연구한 결과 피부에 안전성이 우수하며 화장료 배합 시 보존안정화가 쉽고 실질적으로 우수한 미백 효과가 있는 백량금 추출물을 제조하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 미백 활성을 갖는 백량금 추출물을 포함하는 피부외용 약학조성물 및 화장료 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 미백 활성을 갖는 백량금(Ardisia crenata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 과다 생성으로 인한 피부 질환 치료 및 예방용 피부외용 약학조성물을 제공한다.

상기 약학 조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 제형을 포함한다.

또한 본 발명은 미백 활성을 갖는 백량금(Ardisia crenata) 추출물을 유효 성분으로 함유하는 멜라닌 과다 생성으로 인한 피부 질환 예방 및 개선용 화장료 조 성물을 제공한다.

또한, 상기 화장료 조성물은 화장수, 스킨, 로션, 영양로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 팩의 제형을 포함한다.

본원에서 정의되는 추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 프로판올, 부탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 헥산, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 함수에탄올, 함수부틸렌글리콜, 함수프로필렌글리콜, 함수글리세린으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 용매로 하여 추출된 것임을 특징으로 하고, 상기 추출물은 50-100 ℃, 2-5시간 가열하여 추출하거나 5-37 ℃에서 1-3일간 추출한 것임을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 멜라닌 과다 생성으로 인한 피부 질환은 기미, 주근깨, 피부암, 잡티, 흑색종, 반점, 바람직하게는 기미, 주근깨 등의 질환을 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 백량금(Ardisia crenata) 추출물은, 백량금 전초를 건조하여 무게(㎏)의 5 내지 20배, 바람직하게는 8 내지 10배 중량비의 물, 에탄올, 메탄올, 프로판올, 부탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 헥산, 함수부틸렌글리콜, 함수프로필렌글리콜, 함수글리세린으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 용매로 하여 20 내지 200℃, 바람직하게는 50 내지 100℃에서 30분 내지 20시간, 바람직하게는 2 내지 5시간 동안 추출하여 수득하거나, 5 내지 37℃, 바람직하게는 상온에서 2시간 내지 15일간, 바람직하게는 1 내지 3일간 추출하여 수득할 수 있다.

상기 백량금 추출물은 피부외용 약학조성물 또는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 90 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%로 사용이 가능하다.

본 발명의 백량금 추출물을 함유하는 피부외용 약학조성물은 피부 미백용 피부외용제로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 10 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 백량금 추출물은 피부의 미백을 활성시키는 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다.

본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 화장수, 스킨, 로션, 영양로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 팩 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산 dl-알파 토코페롤, 니코틴산 dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황 산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산 이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산 트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀 린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌) 솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이 미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어 느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이 용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용 이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 백량금 열수 추출물(1)의 제조

건조된 백량금 전초 500 g을 증류수 5 kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기를 사용하여 70℃에서 3시간 가온하여 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각한 후 5-15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 0.45 필터로 여과하였다.

여액을 감압회전증발기에서 용매를 완전히 제거하여 백량금 열수 추출물(1) 15.1 g

을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 2. 백량금 에탄올 추출물(1)의 제조

추출 용매로 에탄올을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 백량금 에탄올 추출물(1) 17.2 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 3. 백량금 메탄올 추출물(1)의 제조

추출 용매로 메탄올을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 백량금 메탄올 추출물(1) 16.9 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 4. 백량금 부틸렌글리콜 추출물(1)의 제조

추출 용매로 부틸렌글리콜을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 백량금 부틸렌글리콜 추출물(1) 17.3 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 5. 백량금 프로필렌글리콜 추출물(1)의 제조

추출 용매로 프로필렌글리콜을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 백량금 프로필렌글리콜 추출물(1) 16.2 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 6. 백량금 함수 에탄올 추출물(1)의 제조

추출 용매로 30%함수 에탄올을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 백량금 함수 에탄올 추출물(1) 14.7 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 7. 백량금 함수 부틸렌글리콜 추출물(1)의 제조

추출 용매로 30% 함수 부틸렌글리콜을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 백량금 함수 부틸렌글리콜 추출물(1) 14.5 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 8. 백량금 함수 프로필렌글리콜 추출물(1)의 제조

추출 용매로 30%함수 프로필렌글리콜을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 백량금 함수 프로필렌글리콜 추출물(1) 17.7 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 9. 백량금 열수 추출물(2)의 제조

건조된 백량금 전초 500 g을 증류수 5 kg에 넣고 상온에서 1일간 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각한 후 5-15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 0.45 필터로 여과하였다. 여액을 감압회전증발기에서 용매를 완전히 제거하여 백량금 열수 추출물(2) 15.1 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 10. 백량금 에탄올 추출물(2)의 제조

추출 용매로 에탄올을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 9와 동일한 방법을 수행하여 백량금 에탄올 추출물(2) 12.3 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 11. 백량금 메탄올 추출물(2)의 제조

추출 용매로 메탄올을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 9와 동일한 방법을 수행하여 백량금 메탄올 추출물(2) 11.0 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 12. 백량금 부틸렌글리콜 추출물(2)의 제조

추출 용매로 부틸렌글리콜을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 9와 동일한 방법을 수행하여 백량금 부틸렌글리콜 추출물(2) 13.5 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 13. 백량금 프로필렌글리콜 추출물(2)의 제조

추출 용매로 프로필렌글리콜을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 9와 동일한 방법을 수행하여 백량금 프로필렌글리콜 추출물(2) 12.8 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 14. 백량금 함수 에탄올 추출물(2)의 제조

추출 용매로 30% 함수 에탄올을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 9와 동일한 방법을 수행하여 백량금 함수 에탄올 추출물(2) 12.9 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 15. 백량금 함수 부틸렌글리콜 추출물(2)의 제조

추출 용매로 30%함수 부틸렌글리콜을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 9와 동일한 방법을 수행하여 백량금 함수 부틸렌글리콜 추출물(2) 13.5 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

실시예 16. 백량금 함수 프로필렌글리콜 추출물(2)의 제조

추출 용매로 30% 함수 프로필렌글리콜을 사용한 것을 제외하고 상기 실시예 9와 동일한 방법을 수행하여 백량금 함수 프로필렌글리콜 추출물(2) 10.7 g을 수득하여 하기 실험의 시료로 사용하였다.

참고예 1. 제형예 1 및 비교제형예 1의 제조

백량금추출물을 함유한 제형예 1 및 비교제형예 1을 하기 표 1에 기재된 배합성분으로 제조하여 하기 임상예 1의 시료로 사용하였다. 비교제형예 1은 백량금추출물 대신 동량의 1,3-부틸렌글리콜을 추가하여 첨가하였다.

배합성분	제형예(중량%)1	비교제형예(중량%)1
실시예 2의 백량금 추출물	2.0	-
1,3-부틸렌글리콜	2.00	4.00
글리세린	3.00	3.00
올레일알코올	2.00	2.00
폴리솔베이트 20	1.00	1.00
에탄올	6.00	6.00
방부제	미량	미량
향	미량	미량
정제수	잔량	잔량
계	100.00	100.00

참고예 2. 제형예 2 및 비교제형예 2의 제조

백량금추출물을 함유한 제형예 2 및 비교제형예 2를 하기 표 2에 기재된 배합성분으로 제조하여 하기 임상예 1의 시료로 사용하였다. 비교제형예 2는 백량금추출물 대신 동량의 1,3-부틸렌글리콜을 추가하여 첨가하였다.

원 료	제형예2	비교제형예2
실시예 2의 백량금 추출물	2.0	-
1,3-부틸렌글리콜	4.00	6.00
글리세린	3.00	3.00
올레일알코올	0.05	0.05
폴리솔베이트 20	1.00	1.00
방부제	미량	미량
향	미량	미량
정제수	잔량	잔량
계	100.00	100.00

참고예 3. 제형예 3 및 비교제형예 3의 제조

백량금추출물을 함유한 제형예 3 및 비교제형예 3을 하기 표 3에 기재된 배합성분으로 제조하여 하기 임상예 1의 시료로 사용하였다. 비교제형예 3은 백량금추출물 대신 동량의 1,3-부틸렌글리콜을 추가하여 첨가하였다.

원 료	제형예3	비교제형예3
실시예 2의 백량금추출물	2.00	-
글리세린	5.00	7.00
트리에탄올아민	0.50	0.50
토코페릴 아세테이트	1.00	1.00
유동파라핀	5.00	5.00
스쿠알란	5.00	5.00
마카다미아너트 오일	15.00	15.00
폴리솔베이트 60	1.00	1.00
솔비탄세스퀴올레이트	1.00	1.00
카르복실비닐포리머	0.20	0.20
방부제	미량	미량
향	미량	미량
정제수	잔량	잔량
계	100.00	100.00

실험예 1. 세포 독성에 관한 실험

세포 독성 및 세포 생존율을 알아보기 위하여 살아있는 세포는 미토콘드리아 내에서 수용성이고 노란색의 염인 MTT(3-[4,5- dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)가 숙신산탈수소효소(succinate dehydrogenase or mitochondrial dehydrogenase)에 의해 수불용성인 파란색의 포르마잔(formazan) 유도체로 환원되는 원리를 이용한 MTT 분석법을 실시하였다.

MTT 분석(assay)은 살아있는 세포의 수를 측정함으로서 세포 증식이나 독성에 많이 사용되는 실험법으로 살아있는 세포는 미토콘드리아내에서 수용성이고 노란색의 염인 MTT(3-[4,5- dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide)가 숙신산탈수소효소(succinate dehydrogenase 또는 mitochondrial dehydrogenase라고도 불림)에 의해 수불용성인 파란색의 포르마잔(formazan) 유도체로 환원되는 원리를 이용하는 것이다. 생성된 포르마잔(formazan) 유도체는 용해제(보통 dimethylsulfoxide 사용)를 넣고 용해시킨 후 흡광도를 측정한다. 좀 더 자세히 설명하면, 인간 섬유아세포 세포주(human fibroblasts cell line; ATCC, CRL-2310)를 1x10⁴cells/ml의 농도로 하여 24웰 플레이트(well plate)에 접종하였다. 배지는 소혈청 10%를 함유한 DMEM (Dubelcco'S Modified Eagle Medium, BRL, USA)을 사용하였다. 접종 후 24시간 후 소혈청 2%를 함유한 DMEM (Dubelcco'S Modified Eagle Medium, BRL, USA)를 교체하고, 시험 시료를 50 ㎍/㎖ 의 농도로 10 ㎕ 첨가 한 후 3일 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 배양이 끝난 후 상등액을 제거 하고 다시 5% PBS(phosphate buffered saline) 200㎕ 씩을 가하여 세척하고 MTT 용액을 웰(well)당 1.0㎖ 씩 가한 후 4시간 후에 MTT를 제거하고 DMSO를 웰(well)당 1.0 ㎖ 씩 가한 후 하룻밤 37℃에서 인큐베이션 후 570 nm 에서 흡광도를 측정 하였고, 그 실험 결과를 표 4에 나타내었다.

실험 결과, 실시예 1 내지 16에서 모두 세포 독성이 거의 없고 세포 생존능이 매우 우수함을 확인할 수 있었다.

백량금 추출물의 단층 세포배양에서의 세포독성

실 시 예	세포 생존율(%)
실시예 1	101.2
실시예 2	102.5
실시예 3	100.9
실시예 4	103.2
실시예 5	104.7
실시예 6	100.7
실시예 7	101.9
실시예 8	101.4
실시예 9	100.2
실시예 10	103.1
실시예 11	103.6
실시예 12	101.8
실시예 13	103.1
실시예 14	106.2
실시예 15	102.4
실시예 16	105.5

실험예 2. 프리라디칼 (free radical) 소거능 실험

상기 백량금 추출물에 대하여, 박의 실험방법(Park, S. N, 대한화장품학회지, 23(1), pp75-132, 1997)에 따라 DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical)을 사용하여 프리라디칼 소거 효과를 측정하였다.

0.2 mM 의 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 용액 1 ㎖ 에 백량금 추출물을 각 농도별로 2 ㎖ 를 첨가하고, 상온에서 10 분간 반응 시킨 후, 520 nm 에서 흡광도를 측정하여 프리라디칼 소거효과(%)를 구하였다. 이 때 대조군은 DPPH 대신 메탄올을 사용하며, 실험군과 동일한 농도의 백량금 추출물 2 ㎖ 를 첨가하였다. 또한, 프리라디칼 소거능의 양성 대조군으로는 프리라디칼 소거능이 뛰어난 플라보노이드 성분을 다량 함유하고 있는 녹차 추출물과 비교하였다.

프리라디칼 소거활성 SC₅₀ 은 프리라디칼을 50% 소거하는데 요구되는 백량금 추출물의 농도(㎍/㎖) 로써 표시하였다.

하기 표 5의 결과를 보면, 실시예의 백량금 추출물은 녹차 추출물의 프리라디칼 소거능보다 비교하여 볼 때, 유사하거나 또는 더 낮은 농도에서 SC₅₀ 농도를 나타내어 프리라디칼 소거능이 뛰어남을 확인할 수 있었다.

백량금의 프리라디칼 소거 효과

실 시 예	SC50(㎍/㎖)
실시예 1	56
실시예 2	23
실시예 3	32
실시예 4	47
실시예 5	57
실시예 6	48
실시예 7	52
실시예 8	49
실시예 9	54
실시예 10	37
실시예 11	55
실시예 12	36
실시예 13	49
실시예 14	39.6
실시예 15	42
실시예 16	44
녹차추출물	45

실험예 3. 세포내 티로시나제 활성 저해 효과

상기 백량금 추출물에 대하여 하기와 같이 티로시나제의 저해활성을 측정하였다.

모든 농도에 따른 웰 수는 3배수로 준비하였다. B16 멜라노마 세포(ATCC CRL6323)를 10% 소혈청과 1% 의 항생제를 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's Medium)에 1x10⁵ 세포의 밀도로 접종하고 하루 동안 5% CO₂, 37℃에서 배양시켰다. 그 후 α-MSH(melanocyte stimulating hormone; 멜라닌세포자극호르몬, 0.34 ug/mL, Sigma)가 처리된 DMEM 10% 배지로 갈아준 후 실시예의 시료들을 농도별로 웰에 처리하여 3일간 배양하였다. 배지를 제거하고 세포들은 트립신을 처리하여 떼어낸 후 1.5 ㎖ 튜브에 넣어 12,000 rpm에서 5분간 원심분리 하여 상층액을 버리고 PBS로 2회 세척한다. 세포 침전물에 1% 트리톤 X-100과 2 mM PMSF(Phenylmethylsulfonyl Fluoride; 단백질 분해 억제제)가 포함된 80mM 포타슘 포스페이트 완충용액(pH6.8) 1 ㎖ 를 첨가하여 얼음 속에서 20분간 진탕혼합하여 4℃에서 1시간 동안 방치한다. 그 후 4℃, 20분, 12,000 rpm에서 원심분리하여 상층액을 모은다. 상층액 0.3 ㎖ 와 1.5 ㎖ 티로신 0.3 mL 를 37℃에서 3시간 반응시킨다음, 강하게 진탕혼합하여 475 nm 에서 흡광도를 측정하였다. 상층액의 단백질 정량은 Bio-rad 단백질 정량 프로토콜에 따라 분석하였으며, 생성된 멜라닌의 흡광도를 단백질량으로 나누어 주었다. 대조군으로 사용된 상백피 추출물은 좋은 티로시나제 활성 저해 효능을 가지고 있어 화장품 원료로 널리 사용되고 있는 물질이다. 티로시나제 활성 저해 효과는 하기 수학식 1의 계산식에 의해 구하였으며, 그 실험 결과는 하기 표 6에 나타내었다.

티로시나제 활성 억제율(%) = [(A-B)/A]x100

A : 시료를 첨가하지 않은 반응용액의 475nm에서 흡광도

B : 시료를 첨가한 반응용액의 475nm에서 흡광도

티로시나제 활성 저해 효과

시 료	티로시나제 저해율(%)
	50㎍/㎖	100㎍/㎖
실시예1	35.2	43.8
실시예2	53.6	72.8
실시예3	42.7	54.9
실시예4	37.3	43.9
실시예5	39	49.1
실시예6	42	49.5
실시예7	47.8	55.9
실시예8	36.2	45.1
실시예9	48.2	58.6
실시예10	46.8	63.1
실시예11	39.5	58.0
실시예12	39.8	51.7
실시예13	44.3	53.8
실시예14	42.9	57.7
실시예15	47.4	59.6
실시예16	37.6	48.6
상백피 추출물	33.1	42.5

실험예 4. B16 멜라노마(melanoma)를 이용한 멜라닌 생성 억제 작용 실험

백량금추출물에 대하여 B16 멜라노마의 멜라닌 생성 억제작용효과를 측정 하였다. B16 멜라노마 세포 배양을 통하여 멜라닌 생성 억제 기능을 세포 수준에서 검정 하였다. B16 멜라노마 세포는 10 % 소혈청을 함유한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's Medium)에서 5% CO₂, 37℃의 조건에서 2일간 배양하여 1.0 X 10⁸ 세포 / T25 프라스크가 될 때까지 배양한다. 그 다음 농도별로 백량금추출물 및 대조군 시료를 넣고 5% CO₂, 37℃에서 2일간 배양한다. 그 후 트립신을 첨가하여 세포들을 수거하여 세포의 흑화 정도를 관찰한다. 멜라닌이 생성되어 배출된 T25 프라스크의 상층액을 취해 475 nm 에서 흡광도를 측정하여 멜라닌을 정량하고, 세포수는 수거된 세포: 트리판 블루(tryphan blue) = 1 : 9 의 비율로 혼합하여 현미경으로 관찰하여 살아있는 세포수를 세어 단위 세포당 생성된 멜라닌의 양을 정량하여 저해 효과를 나타낸다. 대조군으로 사용된 상백피 추출물은 좋은 티로시나제 활성 저해 효능을 가지고 있어 화장품 원료로 널리 사용되고 있는 물질이다. 멜라닌 생성 억제 효과는 하기 수학식 2의 계산식에 의해 구하였으며, 그 실험 결과는 하기 표 7에 나타내었다.

B16 멜라노마(melanoma)에서 멜라닌 생합성 저해 효과

실시예	멜라닌 생성 저해효과(%)
	50㎍/㎖	100㎍/㎖
실시예1	23	32
실시예2	48	69
실시예3	35	47
실시예4	29	38
실시예5	25	32
실시예6	17	39
실시예7	22	28.7
실시예8	28	21.3
실시예9	19.7	25
실시예10	27.5	48.6
실시예11	26.5	35
실시예12	31	32.7
실시예13	26.4	30.1
실시예14	29	51.3
실시예15	18.8	38.5
실시예16	24	31.6
상백피추출물	38	53

임상예 1. 인체 피부 수준에서의 미백 효과 평가

건강한 남녀 20명을 대상으로 피검자의 윗 팔뚝 부위에 직경 1.5㎝ 의 구멍 6개가 뚫린 불투명 테이프를 부착한 다음, 각 피검자의 최소 홍반량(MED ; Minimal Erythema Dose)의 1.5∼2배 정도의 자외선(UVB)을 조사하여 피부의 색소 침착을 유도하고, 시험 물질들을 도포하여 두 달 후에 색차계를 이용하여 피부의 명암을 측정하였다. 각 시험 물질들은 제형예 1~3 및 비교제형예 1∼3을 아침과 저녁에 걸쳐 매일 2회 바르도록 하였다.

효과의 판정은 피부의 명암을 나타내는 L^* 값을 구하여 결정하였다. 일반적으로 인공적인 색소 침착을 유도하지 않은 한국인 피부의 L^* 값은 50∼70의 영역에 속한다.

시험 물질들을 도포하여 효과가 있을 경우에는 L^* 값이 점차 증가하게 된다. 도포 시작 시점과 완료 시점에서의 피부색의 차이(ΔL^*)는 하기 수학식 3의 계산식에 의해 구하였으며, 그 실험 결과는 하기 표 8에 나타내었다.

피부 명암 측정 결과

시험 물질	미백 효과(ΔL*)
제형예 1	3.93
비교제형예 1	1.20
제형예 2	5.12
비교제형예 2	1.56
제형예 3	4.83
비교제형예 3	0.94

상기 실험결과와 같이 백량금 추출물을 첨가하여 제조한 제형예 1~3의 화장료가 첨가되지 않고 제조한 비교제형예 1~3 보다 피부 미백 효과가 우수하다는 것을 알 수 있다.

제제예 1. 친수성 연고제의 제조

원 료	중량%
실시예 1의 백량금 추출물	9.00
백색 바세린	36.00
스테아릴 알콜	31.00
에칠(또는 메칠)p-옥시벤조에이트	미량
프로필렌 글리콜	19.00
라우릴 황산 나트륨	2.40
프로필 p-옥시벤조에이트	미량
계	100.00

제제예 2. 유연화장수( 스킨 )의 제조

원 료	중량%
실시예 2의 백량금추출물	2.0
글리세린	5.00
트리에탄올아민	0.50
토코페릴 아세테이트	1.00
유동파라핀	5.00
스쿠알란	5.00
마카다미아너트 오일	15.00
폴리솔베이트 60	1.00
솔비탄세스퀴올레이트	1.00
카르복실비닐폴리머	0.20
방부제	미량
향	미량
정제수	잔량
계	100.00

제제예 3. 밀크로션의 제조

원 료	중량%
실시예 2의 백량금추출물	5.0
1,3-부틸렌글리콜	4.00
글리세린	3.00
올레일알코올	0.05
폴리솔베이트 20	1.00
방부제	미량
향	미량
정제수	잔량
계	100.00

제제예 4. 영양 크림의 제조

원 료	중량%
실시예 2의 백량금 추출물	2.0
글리세린	5.00
트리에탄올아민	0.50
토코페릴 아세테이트	1.00
유동파라핀	5.00
스쿠알란	5.00
마카다미아너트 오일	15.00
폴리솔베이트 60	1.00
솔비탄세스퀴올레이트	1.00
카르복실비닐폴리머	0.20
방부제	미량
향	미량
정제수	잔량
계	100.00

제제예 5. 맛사지 크림의 제조

원 료	중량%
실시예 2의 백량금 추출물	2.0
바세린	5.00
유동파라핀	30.00
밀납	3.00
폴리솔베이트 60	1.00
솔비탄세스퀴올레이트	1.00
1,3-부틸렌글리콜	5.00
글리세린	5.00
방부제	미량
향	미량
정제수	잔량
계	100.00

상술한 바와 같이, 본 발명은 티로시나제 활성을 저해하고 멜라닌 생성을 억제하여 미백 활성을 갖는 백량금 추출물을 포함하는 피부외용제 조성물 또는 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 추출물을 함유하는 미백용 피부외용제 또는 화장품으로 사용할 수 있다.

Claims (8)

1. 피부미백활성을 갖는 백량금 전초의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 과다 생성으로 인한 피부 질환의 치료 및 예방용 피부외용 약학 조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 피부미백활성을 갖는 백량금 전초의 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 과다 생성으로 인한 피부 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물.
6. 삭제
7. 삭제
8. 삭제