KR100600988B1 - Ｄｎａ 면역화에서 인플루엔자 ｎｐ 유전자 ｄｎａ를 함께투여하여 면역반응을 증가시키는 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 인플루엔자 NP(nucleoprotein) 유전자 DNA를 면역반응 증강제(adjuvant)로 사용하는 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 면역 항원에 대한 DNA 백신과 함께 투여하여 면역반응을 증가시키는 방법 및 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA 및 면역 항원에 대한 DNA 백신을 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 면역 항원에 대한 DNA 백신과 함께 투여하면 항원에 대한 면역반응이 증가하기 때문에, 인플루엔자 뿐만 아니라 AIDS, C형 및 B형 간염, 암, 결핵 및 말라리아 등을 효과적으로 예방 또는 치료하기 위한 유전자 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
Description
도 1의 A는 pTV2 벡터에 인플루엔자 NP 유전자 DNA(이하 'NP DNA'라 약칭함; 1.5 kb) 및 HA DNA(1.7 kb)가 삽입되는 부위를 나타낸 벡터 모식도이고,
도 1의 B는 pTV-NP 및 pTV-HA를 COS-7 세포에서 발현시켰을 때 방사선 면역침전 방법으로 확인한 사진이고,
도 2의 A는 NP DNA, HA DNA 또는 NP DNA + HA DNA로 생쥐를 면역화시켰을 때 HA-특이 항체 또는 NP-특이 항체를 가지고 ELISA를 수행하여 항체반응을 분석한 그래프이고,
도 2의 B는 NP DNA, HA DNA 또는 NP DNA + HA DNA로 생쥐를 면역화시켰을 때 HA-특이 또는 NP-특이 CTL 반응을 분석한 그래프이고,
도 3의 A 및 B는 NP DNA를 env 또는 E2와 함께 생쥐에 면역화시켰을 때 HIV 특이 항체, E2 특이 항체 또는 NP-특이 항체를 가지고 ELISA를 수행하여 항체반응을 분석한 그래프이고,
도 3의 C 및 D는 NP DNA를 env 또는 E2와 함께 생쥐에 면역화시켰을 때 env 특이 CTL, E2 특이 CTL 또는 NP-특이 CTL 반응을 분석한 그래프이고,
도 4은 HA DNA, NP DNA, HA DNA + NP DNA 또는 대조군 DNA를 가지고 생쥐를 면역화하였을 때 HA-자극 림프구에서 분비되는 IFN-γ를 ELISA로 분석한 그래프이고,
도 5는 NP DNA를 함께 면역화시켰을 때 NP 펩타이드, OVA257-264 펩타이드 또는 OVA323-339 펩타이드에 의해 IFN-γ 분비세포의 수를 ELISPOT로 분석한 그래프이고,
도 6은 NP DNA를 함께 면역화시켰을 때 CFSE-표지 OT-Ⅰ 세포의 증식을 유세포 분석기로 분석한 사진이고,
도 7은 NP DNA를 함께 면역화시켰을 때 CFSE-표지 OT-Ⅱ 세포의 증식을 유세포 분석기로 분석한 사진이고,
도 8은 NP DNA를 함께 면역화시킨 후 치사 인플루엔자 챌린지하였을 때 생존률(A)과 몸무게의 변화(B)를 나타낸 그래프이다.
본 발명은 인플루엔자 NP(nucleoprotein) 유전자 DNA를 면역반응 증강제(adjuvant)로 사용하는 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 면역 항원에 대한 DNA 백신과 함께 투여하여 면역반응을 증가시키는 방법 및 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA 및 면역 항원에 대한 DNA 백신을 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다.
최근, DNA를 면역화하여 인플루엔자(influenza)와 같은 감염성 질병들을 예방하는 방법이 최근에 개발되었으며, 인플루엔자 바이러스의 뉴클레오단백질(nucleoprotein; 이하 'NP'라 약칭함)이나 헤마글루티닌(hemagglutinin; 'HA'라 약칭함), 또는 매트릭스(matrix; M1,M2) 유전자를 가진 DNA를 근육주사, 진건(gene gun) 등의 방법으로 동물에 면역화하면 인플루엔자 바이러스의 감염으로부터 방어효능을 유도할 수 있다는 보고가 있다(Ulmer JB, Science 259:1745, Robinson HL, Vaccine 11:957, Okuda K, Vaccine 19:3681). 이때, DNA 면역화에 의하여 생성되는 인플루엔자 항원에 대한 CTL(Cytotoxic T lymphocyte) 반응을 포함한 세포면역반응과 중화항체 면역반응이 바이러스 감염에 대항하는 방어정도와 상관관계가 있는 것으로 알려졌다(Fu TM, J. Immunol. 162:4163, Ulmer, J. Virol. 72:5648, Robinson HL, J. Infect. Dis. 176:S50). 인플루엔자 바이러스의 유전자인 NP(Ulmer JB, Science, 259:1745), HA(Robinson HL, Vaccine, 11:957), 매트릭스(Okuda K, Vaccine, 19:3681), 뉴라미니다제(neuraminidase; Chen Z, Vaccine, 18:3214) 중 한가지 유전자의 DNA 면역화로도 생쥐모델에서 특정 인플루엔자 바이러스 감염에 대한 방어를 유도할 수 있으나, B 타입 바이러스 감염의 경우에는 동종의(homologous) NP DNA의 면역화로도 방 어해내지 못하는 사례(Chen Z, Vaccine, 19:1446)로 알 수 있듯이 다양한 종의 인플루엔자 바이러스로부터 방어되기 위해서는 여러 가지 바이러스 DNA의 혼합물을 면역화하는 것이 필요하다.
여러 항원의 유전자를 가진 DNA 혼합물의 면역화가 필요한 경우는 첫째, 한 바이러스의 감염에 대한 방어효과를 얻으려 함에 있어 여러 가지 항원에 대한 면역반응이 방어에 필수적일 때(Chen Z, Vaccine, 17:653; Bot A, Vaccine, 16:1675), 둘째 빠른 변이의 성질을 가진 바이러스를 방어하기 위해 다양한 변종의 항원들을 암호화하고 있는 DNA를 동시에 면역하고자 할 때(Lu S., J. Virol. 70:3978), 세 번째, 두 가지 이상의 바이러스에 대한 면역반응을 동시에 간편하게 얻고 싶은 경우이다.
여러 가지 항원에 대한 유전자를 암호화한 DNA를 동시에 면역화하는 다중(multivalent) DNA 백신 기법은 HIV(Amara RR, Science, 292:69), SIV(Lu S. J. Virol. 70:3978), HBV(Musacchiro A, BBRC, 282:442) 등 여러 가지 바이러스에 대한 DNA 면역화에 사용되고있다. 인플루엔자 DNA 면역화에서도 NP DNA + HA DNA 면역화, 또는 NA DNA + HA DNA의 면역화 등이 시도되었으며, 이때 한가지 항원의 DNA 만을 면역하였을 경우와 비교하여 더 높은 방어효능을 보인다는 사실이 확인되었다(Chen Z, Vaccine, 17:653; Bot A, Vaccine, 16:1675). 그러나 인플루엔자 DNA 백신의 혼합물을 동시에 면역화할 때 한가지 DNA 만을 면역화 한 경우와 비교하여 각 DNA 백신이 유도하는 세포면역반응이나 항체형성에 있어 어떤 차이를 보이 는 지는 확실히 알려지지 않았다. 한 DNA가 다른 DNA와 혼합되어 면역화 하였을 때 같이 혼합되어지는 DNA가 바뀜에 따라 생성하는 IgG1/IgG2a 비율이 변화될 수 있다는 보고(Braun R, J. Gen. Virol. 79:2965)와 HIV rev 유전자와 rev 유전자를 함께 면역화한 경우 각각의 유전자를 한가지만 면역화한 경우와 비교하여 T 세포면역반응이 저해될 수 있다는 최근 보고(Kjerrstorm A., Virology, 284:46)는 혼합하여 면역화된 DNA가 다른 DNA유도하는 면역반응에 영향을 줄 수 있음을 시사한다.
한편, DNA 면역화가 유도하는 항체반응, 세포면역반응, 방어효능을 증가시키기 위하여 다양한 유전자 면역반응 증강제(genetic adjuvant)의 사용이 시도되었다. IL-2(Lee et al, Vaccine, 17:473), GMCSF(Lee et al, J. Virol. 72:8430; Cho et al, Vaccine, 17:1136), IL-12(Kim JJ et al, J. Immunol. 158:186)와 같은 사이토카인(Cytokine) 유전자의 사용이나 CD40L(Gurunathan S et al., J. Immunol. 161:4563; Mendoza RB et al, 159:5777), ICAM-1(Kim JJ et al., J. Clin. Invest. 103:869), B7-1, B7-2(Tsuji T et al., Eur. J. Immunol. 27:78287; Kim JJ et al., Nat. Biotechnol. 15:641)와 같은 동시자극 분자 유전자의 공동운반(codelivery)이 면역반응의 유도를 증가시키는 것으로 알려졌다. 또한 유비퀴틴(ubiquitin) 유전자의 융합(Rodriguez F et al., J. Virol. 71:8497)과 CpG 모티프와 같은 특정 DNA의 서열을 포함하는 것이 항원에 대한 면역반응을 증가시키는 것으로 밝혀졌다(Sato Y et al., Science, 273:352). 그러나 백신 구성 중의 한가지가 다른 항원에 대한 면역반응 증강제 효능에 미치는 영향에 대해서는 잘 알 려지지 않았다.
이에, 본 발명자들은 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 DNA 백신과 함께 투여하였을 때 DNA 백신만을 투여한 것과 비교하여 DNA 백신에 대한 항체 반응 및 CTL 반응을 증가되고, IFN-γ의 분비가 증가되어 DNA 백신이 유도하는 항체 면역반응을 증진시킨다는 것을 확인하였고, 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 유전자 면역반응 증강제로 사용할 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 면역 항원에 대한 DNA 백신과 함께 투여하여 면역반응을 증가시키는 방법 및 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA 및 면역 항원에 대한 DNA 백신을 포함하는 백신 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 면역 항원에 대한 DNA 백신과 함께 투여하여 면역반응을 증가시키는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA 및 면역 항원에 대한 DNA 백신을 포함하는 백신 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 DNA 백신과 함께 투여하여 면역반응을 증가시키는 방법 및 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 면역반응 증강제(adjuvant)로 사용하는 용도를 제공한다.
본 발명의 인플루엔자 NP 유전자 DNA는 인플루엔자 NP 단백질과 90% 이상의 아미노산 서열 상동성을 갖는 단백질을 암호화하는 염기서열을 갖는 DNA이고, 상기 DNA의 전체를 사용하거나 또는 일부를 사용하는 것이 바람직하고, 서열번호 1로 기재되는 염기서열을 갖는 DNA의 전체 또는 일부인 것이 더욱 바람직하다. 인플루엔자 NP 유전자의 일부분을 사용할 때는 인플루엔자 NP 단백질의 N-말단 50% 이상 또는 C-말단 50% 이상을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 염기서열을 갖는 DNA를 사용하더라도 같은 효과를 보인다.
본 발명의 인플루엔자 NP 유전자 DNA는 발현벡터에 삽입하여 DNA 백신과 함께 투여하는 것이 바람직하다. 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 삽입하는 발현벡터로는 CMV(cytomegalovirus) 프로모터, RSV(Rous sarcoma virus) 프로모터, β-액틴 프로모터, SV40(simian virus 40) 프로모터, 근육 크레아틴 키나제(muscle creatine kinase) 프로모터로 구성되는 군으로부터 선택되는 전사 프로모터 및 SV40 폴리(A) 및 BGH 터미네이터로 구성되는 군으로부터 선택되는 전사 터미네이터를 갖는 발현벡터인 것이 바람직하고, 사이토메갈로 바이러스의 초기 프로모터/인핸서(early promotor/enhancer) 서열과 아데노바이러스 삼부 리더/인트론 서열(adenovirus tripartite leader/intron sequence)을 가지며 SV40의 복제기점 및 폴리(A) 서열을 포함하는 발현벡터가 더욱 바람직하다.
본 발명에서는 서열번호 1로 기재되는 염기서열을 갖는 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 pTV2 발현벡터에 삽입시킨 pTV-NP를 제조하여 이를 대장균(Escherichia coli)에 형질전환시키고, 이를 "XL1-blue/pTNV-NP"라 명명하고 2002년 2월 27일자로 한국생명공학연구원 유전자은행에 기탁하였다(수탁번호 : KCTC 10193BP).
본 발명의 DNA 백신은 인플루엔자, 바리셀라, 폴리오, 말라리아, 허피스, HIV, 파필로마 바이러스, B형 또는 C형 간염 바이러스, 로타, 콜레라, 홍역 및 결핵으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상의 면역항원에 대한 DNA백신 접종시에 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 함께 투여하여 항원 특이 항체 반응 및 CTL(cytotoxic T lymphocytes) 반응을 증강시키고, IFN-γ의 분비를 증가시켜 Th-1(helper T cell) 반응을 증가시킴으로써 백신이 유도하는 항체 면역반응을 증진시킨다.
본 발명에서는 바람직한 실시예에서, 서열번호 1로 기재되는 염기서열을 갖는 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 pTV2 벡터에 삽입한 pTV-NP를 제조하여 인플루엔자 NP 유전자 DNA에 의한 면역반응을 알아보았다.
본 발명의 인플루엔자 NP 유전자 DNA(이하 'NP DNA'라 약칭함)를 인플루엔자 HA DNA와 동시에 면역화하여 NP DNA 단독으로 면역화하였을 때와 비교하면 NP DNA에 특이적인 면역반응은 변화시키지 않았지만, HA DNA에 의한 면역화와 비교하여 HA에 특이적인 항체 형성과 Th-1(helper T cell 1), CTL 반응을 증가시켰다(도 2 참조). 따라서, HA 특이적인 면역반응의 증가는 NP DNA의 동시면역(coimmunization)으로 유발되는 여러가지 효과 때문에 발생한 것임을 알 수 있다. NP DNA의 면역화는 적은 DNA 양으로도 짧은 시간 안에 강력한 항체반응과 CTL 반응이 유도됨이 본 발명자와 다른 연구자들에 의해 알려졌다(Lee SW, Immunology 94:285). NP DNA 면역화로 유도된 강력한 헬퍼 T 세포 반응은 사이토카인 분비 등과 같은 비특이적(nonspecific)인 면역반응을 활성화할 수 있는 인자가 미세환경(microenvironment)에 존재하게 만들고, 이를 매개로 하여 HA에 특이적인 면역반응(antibody, CD4 and CD8 responses)을 증가시켰을 것이다. 최근에 HIV-1 rev-env 유전자에 있는 V3 부위를 HBV S2-S 유전자의 일부분과 교체하여 DNA 면역화하여 주면 rev-env DNA의 면역화와 비교하여 V3 특이 항체반응과 CTL 반응을 증가시켜 줄 수 있다는 보고가 발표되었다(Fomsgaard A Scand. J. Immunol. 47:289). 본 발명에 있어 NP DNA는 위의 사례의 HBV S유전자와 유사한 유전자 담체(genetic carrier)의 작용이 있다는 것을 알 수 있다. 반대로 HA DNA의 면역화는 NP에 특이적인 면역반응에 영향을 주지 못했는데, NP DNA에 의해 생성되는 특이적인 면역반응이 상대적으로 HA DNA에 의한 HA 특이 면역반응 보다 강력하기 때문일 수 있다. 상기 결과로부터, NP DNA의 동시면역은 자신이 유도하는 NP 특이 항체반응을 증가시키지 않으면서 함께 면역화한 다른 DNA 백신이 유도하는 항체 면역반응을 증가시킨다.
또한, NP DNA의 동시면역에 의한 다른 항원에 특이적인 면역반응의 증가는 HA DNA의 면역화뿐만 아니라 HCV E2 DNA와의 동시면역, HIV env DNA와의 동시면역 에도 나타났다(도 3 참조). 따라서 NP DNA는 인플루엔자, HIV 및 C형 간염 바이러스, 결핵 및 홍역 등에 대한 DNA 백신의 유전자 면역반응 증강제로 사용될 수 있다. 또한, NP DNA를 면역반응 증강제로 사용할 수 있는 것은 상기 바이러스에만 한정되는 것은 아니고 상기 바이러스와 유사한 성질을 갖는 바이러스에 대한 DNA 백신에도 모두 사용할 수 있다.
또한, NP DNA 또는 HA DNA에 의해 면역화된 쥐의 림프구에서 분비되는 IFN-γ의 농도를 측정한 결과, NP DNA의 면역화에 의해 IFN-γ의 분비량이 증가하였다(도 4 참조). 상기 결과로부터 NP DNA를 DNA 백신과 함께 면역화하면 항체 반응 및 CTL 반응 뿐만 아니라 Th-1 반응도 증가시키는 것을 알 수 있다.
또한, 본 발명의 NP DNA는 HA, HIV env 및 HCV E2 이외의 OVA(ovalbumin)와 같은 다른 종류의 항원을 이용했을 때도 면역반응 증강제 효과가 나타나는지 알아보면, NP DNA를 OVA DNA와 함께 투여하였을 때 OVA DNA 만을 투여한 것과 비교하여 NP DNA에 의해 OVA에 특이적인 IFN-γ 생산 T 세포가 현저히 증가하는 것으로 나타났다(도 5 참조). 상기 결과로부터 NP DNA의 면역반응 증강제 효과가 비교적 광범위한 항원에 적용되어 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응의 증가에 기여하는 것을 알 수 있다.
또한, 본 발명의 NP DNA에 의한 유전자 면역반응 증강제 효과는 생체내(in vivo)에서도 직접 관찰할 수 있는데, NP DNA가 함께 투여된 다른 항원(HA, Env, E2 등)에 의해 유도되는 CD4+ 또는CD8+ T 세포 반응, 특히 세포분열의 강도를 증가시 켰다. 또한, OVA DNA 자체만으로는 관찰되지 않았던 OT-II 세포분열이 NP DNA를 같이 주입함으로서 현저하게 유도될 수 있음을 보였다(도 6 참조). 상기 결과는 시험관(in vitro) 혹은 생체내(in vivo) 조건에서 OT-II의 세포분열을 유도하기 위해서는 OT-I에 비해 약 100배 정도 더 높은 항원이 필요함을 보인 기존의 보고(Ming L et al., J. Immunol. 2001, 166:6099)에 비추어 볼 때 아마도 NP DNA는 T 세포 활성을 위한 활성 역치(activation threshold)를 조절하는 방식으로 OVA DNA에 의해 유도되는 OVA-특이 T 세포분열에 영향을 줄고, 또한 기존의 보고에서 CTL 반응의 형성 및 강도에 CD4+ T 세포의 작용이 중요함을 보인바 있으므로 NP DNA에 의해 증가된 OVA-특이 CD4+ T 세포반응이 순차적으로 CD8+ T 세포반응의 형성 및 강도를 증가시킨다는 것을 알 수 있다.
NP DNA의 면역화가 다른 항원 DNA가 유도하는 면역반응을 증가시키는 것과는 다르게 HIV env DNA와 HCV E2 DNA 혼합물의 면역화는 각각의 DNA가 유도하는 CTL 반응을 저해할 수 있다. E2 특이 CTL 반응은 env DNA가 함께 면역화한 경우 두번의 분석에서 각각 10.6%와 13.6%의 용해(lysis) 값을 보인 반면, env DNA가 없을 경우 45.1%와 33.4%의 용해 값을 나타냈다. env 특이 CTL 반응도 E2 DNA가 함께 면역화 했을 경우(4.1%, 0.2%)가 그렇지 않은 경우(26.7%, 18.3%)와 비교하여 더 낮았다. 따라서 두 가지 항원 DNA의 혼합물을 면역화 하였을 경우 어느 한가지 항원에 특이적인 면역반응의 증가는, 항원에 의존적으로, NP DNA와 같은 특정 항원의 유전자를 사용했을 경우에만 발생한다.
NP DNA + HA DNA 면역화는 NP DNA 면역화 또는 HA DNA 면역화와 비교하여 치사량의 바이러스를 감염시켰을 때 초기 생존률 및 평균 체중이 증가시킨다(도 8 참조). 상기 결과로부터 NP DNA의 면역반응 증강제 효과는 최종 생존율은 증가시키지 못하지만 감염 초기 생존률을 증가시켜 생존 기간을 더 연장시킬 수 있다는 것을 알 수 있다. 이미 발표된 보고(Bot A Vaccine 16:1675)에 의하면 NP DNA(PR/8) 백신과 HA DNA(WSN) 백신의 혼합물을 면역화하고 WSN 타입의 인플루엔자 바이러스를 챌린지(challenge)하였을 경우 HA나 NP DNA 중 한가지 DNA를 면역화 하였을 때와 비교하여 생존률이 증가함이 알려졌다. 그러나 위의 사례에서, 동일한 그룹의 쥐를 PR/8 바이러스로 시도하였을 경우는 생존률의 증가가 나타나지 않는 것으로 보고되었다. HA 대한 항체 반응이나 NP에 특이적인 CTL 반응이 인플루엔자 바이러스의 감염으로부터의 방어와 상관관계가 있다고 알려졌지만(Ulmer JB, J. Virol. 72:5648, Robinson HL, J Infect Dis. 176:S50-5) 시도하는 인플루엔자 바이러스의 종에 따라 생존률을 증가시키는데 필요한 면역반응의 강도가 차이가 있을 것이다.
본 발명의 NP DNA를 유전자 면역반응 증강제로 사용하는 방법은 효과적인 인플루엔자 백신의 개발에 관한 정보를 줄 뿐만 아니라, AIDS 및 간염(Hepatitis) 백신의 면역반응 증강제 연구, 그리고 두 가지 이상의 DNA 구성물을 가진 백신의 효능 증진연구에 유익한 도움을 줄 것이며, 본 발명에 사용한 시스템은 다중요소(multi-component)를 가진 DNA 면역화에 있어 면역방해(interference)나 증강(enhancement)의 연구모델로 적용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA 및 면역항원에 대한 DNA 백신을 포함하는 백신 조성물을 제공한다.
본 발명의 인플루엔자 NP 유전자 DNA는 인플루엔자 NP 단백질과 90% 이상의 아미노산 서열 상동성을 갖는 단백질을 암호화하는 염기서열을 갖는 DNA이고, 상기 DNA의 전체를 사용하거나 또는 50% 이상의 일부분을 사용하는 것이 바람직하고, 서열번호 1로 기재되는 염기서열을 갖는 DNA의 전체 또는 50% 이상을 포함하는 더욱 바람직하다.
본 발명의 백신 조성물에서 인플루엔자 NP 유전자 DNA는 발현벡터에 삽입하여 포함하는 것이 바람직하다. 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 삽입하는 발현벡터로는 CMV(cytomegalovirus) 프로모터, RSV(Rous sarcoma virus) 프로모터, β-액틴 프로모터, SV40(simian virus 40) 프로모터, 근육 크레아틴 키나제(muscle creatine kinase) 프로모터로 구성되는 군으로부터 선택되는 전사 프로모터 및 SV40 폴리(A) 및 BGH 터미네이터로 구성되는 군으로부터 선택되는 전사 터미네이터를 갖는 발현벡터인 것이 바람직하고, 사이토메갈로 바이러스의 초기 프로모터/인핸서(early promotor/enhancer) 서열과 아데노바이러스 삼부 리더/인트론 서열(adenovirus tripartite leader/intron sequence)을 가지며 SV40의 복제기점 및 폴리(A) 서열을 포함하는 발현벡터가 더욱 바람직하고, 서열번호 1로 기재되는 염기서열을 갖는 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 pTV2 발현벡터에 삽입시킨 pTV-NP인 것이 가장 바람직하다.
본 발명의 백신 조성물에서 DNA 백신은 인플루엔자, 바리셀라, 폴리오, 말라리아, 허피스, HIV, 파필로마 바이러스, B형 또는 C형 간염 바이러스, 로타, 콜레라, 홍역 및 결핵으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상의 면역항원에 대한 DNA 백신인 것이 바람직하고, 반드시 상기 DNA 백신에만 한정되는 것은 아니다.
DNA 면역화의 장점 중의 한 가지는 여러 가지 항원에 특이적인 면역반응을 동시에 얻기 위한 제조(formulation) 과정이 매우 간편하다는 점이다. 각 항원의 유전자를 가진 DNA를 단순히 섞어 면역화하면 여러 가지 항원에 대한 면역반응을 얻을 수 있다. 따라서 본 발명의 백신 조성물은 조성물 전체 중량에 대해 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 1-99 중량%의 양으로 포함할 수 있으며, 25-60 중량% 인 것이 바람직하고, 반드시 여기에 한정되는 것은 아니며 함께 포함되는 DNA 백신의 종류 및 환자의 상태에 따라 변화될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물에는 상기 NP DNA 및 DNA 백신 외에도 항원의 안정성을 증대시킬 목적으로 수용성 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 탄수화물, 아미노산, 지방산, 무기염, 계면 활성제, 폴리에틸렌 글리콜 및 이들의 혼합물을 들 수 있다. 상기 탄수화물의 대표적인 예로는 하이드로프로필셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 소듐카르록시셀룰로스, 히알루론산, 키토산, 알지네이트, 글루코스, 크실로스, 갈락토스, 프럭토스, 말톳, 사카로스, 텍스트란, 콘드로이친 설페이트와 같은 수용성 당류가 있다. 상기 단백질의 대표적인 예로는 알부민, 젤라틴이 있으 며, 상기 아미노산의 대표적인 예로는 글리신, 알라닌, 글루탐산, 아르기닌, 리신 및 이들의 염의 형태가 있다.
본 발명의 백신 조성물은 인플루엔자 NP 유전자 DNA 및 DNA 백신에 추가로 첨가되는 수용성 부형제를 제외한 나머지는 증류수, 생리식염수 및 PBS(phosphate buffered saline)로 구성되는 군으로부터 선택되는 것으로 채울 수 있다.
본 발명의 백신 조성물은 일반적인 DNA 백신의 투여 방법 및 제형을 따른다(Wolff et al., Science, 1990, 247:1465). DNA 백신은 직접적인 주입, 입자 충격 또는 전기 천공법에 의해 외피에 전달될 수 있고, 복합 및/또는 반복적인 투여에 의해 외피에 송달될 수 있다. DNA 백신은 금 비드(bead)에 DNA를 코팅하고 그 때 세포에 비드를 송달할 진건(gene gun)을 사용하여 투여할 수 있다(Porgador et al., The Journal of Experimental Medicine, 1998, 188:1075). 또한, 본 발명의 백신 조성물은 통상적인 방법으로 경구 또는 비경구용 제제로 제형화되어 경구 또는 비경구 경로를 통해 투여할 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜 (Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용 될 수 있다. 특히, 본 발명의 조성물은 점막(비내)에 투여할 때에는 투여용 조성물은 에어로졸 점적양(drops) 형태로 투여할 수 있는 액상 또는 건조 분말로 제제화 될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물의 투여량 및 투여횟수는 사용된 항원의 공지된 적정 투여량 및 투여횟수 범위내에서 결정될 수 있으며, 특정 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
본 발명의 백신 조성물에 포함되는 인플루엔자 NP 유전자 DNA의 유효용량은 10 ㎍ - 10 ㎎/㎏ 체중이며, 100 ㎍ - 5 ㎎/㎏ 체중인 것이 바람직하다. 또한, 본 발명의 백신 조성물은 DNA 백신으로 독성이 없고 매우 안전하다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> DNA 백신의 제조
본 발명자들은 DNA 백신을 제조하기 위하여, 바이러스로부터 원하는 유전자를 얻고 이를 이용하여 DNA 백신을 제조하였다. 구체적으로, 인플루엔자 A/PR/8/34와 인플루엔자 A/Jap/57 바이러스를 MDCK 세포에 감염시킨 다음 전체 RNA를 분리하고, 분리된 RNA를 주형으로 RT-PCR하여 인플루엔자 A/PR/8/34의 서열번호 1로 기재되는 염기서열을 갖는 NP 유전자(Genebank accession No. M38279)와 인플루엔자 A/Jap/57의 서열번호 2로 기재되는 염기서열을 갖는 HA 유전자(Genebank accession No. L20407)를 얻었다. 상기에서 얻은 NP 및 HA 유전자를 XhoI 및 XbaI 그리고 KpnI 및 XhoI으로 자른 후 이를 pTV2 벡터(Lee SW, J. Virol. 72:8430)에 삽입하여 각각 pTV-NP와 pTV-HA를 제작하였다(도 1의 A). 상기 pTV 벡터는 사이토메갈로 바이러스(Cytomegalovirus)의 초기 프로모터/인핸서(early promotoer/enhancer) 서열과 아데노바이러스 삼부 리더/인트론 서열(adenovirus tripartite leader/intron sequence)를 가지며 SV40 의 복제기점 및 폴리A 서열을 포함한다.
또한, HIV env 유전자를 포함한 pTX GE(Lee AH et al., Vaccine, 17:473)를 MluI과 HpaI으로 잘라 항원유전자를 포함하는 DNA 단편을 pTV2 벡터에 삽입하여 pTV-GE를 제조하였고, HCV E2 DNA로는 pTV-gDs-E2t(Lee SW, J. Virol. 72:8430)를 그대로 사용하였다. Tc-OVA 벡터로부터 닭 OVA(chicken ovalbumin) cDNA를 PCR한 후 pTV2 벡터에 삽입하여 pTV-OVA를 제조하였다. 각 DNA 백신은 대장균(E. coli)으로부터 증폭하고 이를 킷트(Endotoxin free kit, QIAGEN)를 이용하여 정제하여 사용하였다.
본 발명자들은 상기에서 제작한 DNA 백신을 일시적 감염 분석(Transient transfection assay)을 통해 확인하였다. 구체적으로, 3X105의 COS-7 세포에 10 ㎍의 pTV-NP, pTV-HA 또는 pTV-OVA를 칼슘 포스페이트(calcium phosphate) 방법으로 감염(transfection)하였다. 감염 후 48시간이 경과 한 뒤 세포를 32S-Met으로 12시간 동안 표지하고 수확한 다음 항-Flu(anti-Flu; PR/8/34) 생쥐 혈청을 이용하여 방사선면역침전(radioimmunoprecipitation; RIP) 방법으로 NP와 HA 단백질의 발현을 확인하였고(도 1의 B), 항-OVA(Sigma)를 이용하여 OVA 단백질을 확인하였다. pTV-GE의 발현은 웨스턴 블럿 방법을 이용하였다(Lee AH et al., Vaccine, 17:473).
<실시예 2> NP DNA의 동시면역에 의한 HA 특이 항원 및 CTL 반응 증가
본 발명자들은 상기 실시예 1에서 제작한 NP DNA 백신을 HA DNA 백신과 함께 투여하여 면역시켰을 때 항원 특이 반응 및 CTL 반응을 분석하기 위하여, NP DNA + HA DNA, NP DNA + 벡터, 또는 HA DNA + 벡터의 혼합물을 4주 간격으로 2회 생쥐(BALB/c)를 면역화한 후, 최종 면역한지 4주가 경과하였을 때 각 그룹의 생쥐 혈액을 채취하여 항 NP 반응과 항 HA 반응을 ELISA로 측정하였다.
본 발명에서는 4-5주령의 BALB/c 혹은 C57BL/6 형질의 암컷(female) 생쥐(B & K Universal Inc.으로부터 구입)가 6-7주령이 된 생쥐를 사용하였다. 또한, 상기 생쥐를 DNA 면역화하기 위하여, pTV-NP(50 ㎍)과 pTV-HA(50 ㎍), pTV-gDs-E2t(50 ㎍), 또는 pTV-GE(50 ㎍)를 100 ㎕의 PBS(phosphate buffered saline)에 녹여 50 ㎕ 씩 BALB/c 생쥐의 양쪽 다리 경골근육(tibialis muscle)에 주입하였다. 처음 면역화한지 4주가 경과한 후 같은 DNA 혼합물로 동일한 부위에 부스트(boost) 면역화하였다.
항-NP 항체 반응과 항-HA 항체반응을 측정하기 위한 ELISA는 이미 기술된 방법(Sin JI, Vaccine, 15:1827)으로 수행하였다. 단백질을 얻기 위해서는 인플루엔자 벌크 백신 용액(Influenza bulk vaccine solution; LG chemical Co. Korea)을 Con-A 세파로스(Pharmacia) 컬럼을 이용하여 제조사가 제공한 방법으로 HA와 NP 단백질을 부분정제한 다음 각각의 단백질 용액을 SDS-PAGE로 전개하여 NP 및 HA 단백질 밴드에 해당하는 젤을 오려낸 후 전기용출(electroelution) 방법으로 각 단백질을 얻었다. 정제된 NP 단백질과 HA 단백질을 각각 2 ㎍/㎖이 되도록 PBS로 희석한 다음 50 ㎕의 단백질 용액을 ELISA 플레이트에 코팅하여 분석을 수행하였다.
그 결과, 항 NP 반응은 NP DNA + 벡터 면역화와 NP DNA + HA DNA 면역화간의 차이가 크지 않았다(p > 0.2)(도 2의 A). 그러나 항 HA 반응은 NP DNA + HA DNA를 면역화한 쥐에서 HA DNA + 벡터를 면역화한 쥐와 비교하여 통계학적으로 의미 있는 증가(p < 0.05)를 보였다.
또한, 본 발명자들은 NP DNA + HA DNA를 4주 간격으로 2회 면역화 한 후 NP 특이 CTL과 HA 특이 CTL 반응을 측정하였다.
구체적으로, 부스트 면역화(Boost immunization)한지 4주 후에 각 그룹의 생쥐의 비장세포(splenocyte)를 CTL 분석 배지(RPMI 1640 supplemented with 10% FBS, 2 mM L-glutamine, 50 uM b-mercaptoethanol, and 10U/ml recombinant murine IL-2)에 보존하였다. NP와 HA 특이 림프구(lymphocyte)를 자극하기 위해 최종 7 uM이 되도록 서열번호 3으로 기재되는 NP 펩타이드와 서열번호 4로 기재되는 HA 펩타이드를 처리한 후 6일간 37℃ CO2 배양기에서 자극하였다. 세포독성(Cytotoxicity)은 P815(H2d) 적중세포를 5 uM의 NP 또는 HA 펩타이드로 펄스(pulse)한 후 51Cr으로 표지한 다음, 자극한 효과 세포(effector cell)와 반응시켜 측정하였다.
그 결과, NP 특이 CTL 반응은 HA DNA의 동시면역으로 영향 받지 않았으나, HA 특이 CTL 반응은 NP DNA의 동시면역에 의해 100% 이상(15% 용해(lysis)에서 33% 용해 값으로 증가) 증가하였다(도 2의 B). 반면 HA DNA로 면역화한 생쥐나 NP DNA로 면역화한 생쥐는 각각 NP 특이 CTL과 HA 특이 CTL이 관찰되지 않았다(5% 미만의 용해).
상기 결과로부터 NP DNA의 동시면역이 자신이 유도하는 NP 특이 항체반응을 변화시키지 않으면서 함께 면역화한 다른 DNA 백신이 유도하는 항체 면역반응을 증가시키는 것을 알 수 있었다.
<실시예 3> NP DNA의 의해 다른 바이러스 항원의 항체 반응 및 CTL 반응에 미치는 영향 분석
본 발명자들은 NP DNA를 다른 DNA 백신 함께 면역화 함으로써 그 DNA가 유도하는 면역반응의 증가 현상, 즉 NP DNA의 면역반응 증강제 효과가 HA DNA 면역화의 경우뿐만 아니라 다른 바이러스에 대한 DNA 백신의 면역화에서도 일어나는지를 확인하기 위하여, NP DNA와 함께 HIV env DNA(pTV-GE) 또는 HCV E2 DNA(pTV-gDs-E2t)를 4주 간격으로 2회 생쥐(Balb/c)에 면역화하고, NP 특이 항체 반응과 CTL 반응, env 특이 항체 반응과 CTL 반응, 또는 E2 특이 항체 반응과 CTL 반응을 측정하였다.
구체적으로 생쥐에 면역화는 실시예 2와 동일한 방법으로 수행하였고, HA DNA, env DNA, E2 DNA 또는 NP DNA를 투여하는 경우는 50 ㎍의 각 DNA 백신(pTV-HA, pTV-GE, pTV-gDs-E2t)과 50 ㎍의 벡터(pTV2)를 섞어 같은 방법으로 투여하였다. 또한, HIV env 특이 CTL 반응을 측정하기 위해 면역화하지 않은 BALB/c 쥐의 췌장세포를 HIV env를 발현하는 재조합 백신 바이러스(rVV-env, NIH)로 감염시켜 자극(stimulator) 세포를 만들고 면역화한 쥐의 췌장세포와 함께 6일간 배양한 다 음 rVV-env를 20 moi로 감염시킨 51Cr로 표지한 P815 세포와 반응시켰다. HCV E2 특이 CTL 반응을 측정하기 위하여 송 등의 방법(Song et al., J. Virol. 74:2920)을 따랐으며 자극 세포와 적중세포로 CT26-hgh-E2를 사용하였다.
그 결과, NP DNA + 벡터의 면역화에 의한 NP 항체는 NP DNA + E2 DNA 또는 NP DNA + HIV env DNA 면역화의 경우와 차이가 없었다(도 3의 A 및 B). 그러나 HIV-1 특이 항체 반응은 NP DNA의 동시면역으로 증가된 값을 보이며, 특히 E2 DNA + NP DNA 면역화에 의한 E2에 특이적인 항체 생성 현상은 매우 증가되어 E2 DNA + 벡터 그룹과 통계학적으로 의미 있는 차이를 보였다 (p<0.05).
한편 NP DNA + 벡터의 면역화에 의해 유도된 NP CTL 반응은 NP DNA + E2 DNA 또는 NP DNA + HIV env DNA 면역화의 경우와 차이가 없었다. 그러나 NP DNA가 HIV env DNA 또는 HCV E2 DNA와 함께 면역화 될 때 NP DNA가 사용되지 않은 경우와 비교하여 각각 env에 특이적인 CTL 반응(19% 에서 51% 용해로 증가)과 E2에 특이적인 CTL 반응(33%에서 48% 용해로 증가)을 증가시킬 수 있다(도 3의 C 및 D).
상기 결과로부터 NP DNA가 인플루엔자 백신에서 뿐만이 아니라 HIV나 HCV와 같은 다른 바이러스에 대한 DNA 백신의 면역반응 증강제로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
<실시예 4> NP DNA + HA DNA로 면역시킨 생쥐의 HA-자극 림프구에서 증강된 IFN-γ 분비
림프구에서 분비되는 IFN-γ의 농도를 분석하면 항원에 특이적인 Th-1 반응의 강도를 추정할 수 있기 때문에, 본 발명자들은 최종 면역화한지 4주가 경과한 후 각 그룹 쥐의 췌장세포를 HA 단백질, 또는 NP 단백질로 자극하여 생성되는 IFN-γ의 농도를 측정하였다.
구체적으로, DNA로 면역화한 쥐의 췌장을 취해 췌장세포를 분석 배지(RPMI 1640 supplemented with 10% FBS, 2 mM L-glutamine, 50 uM b-mercaptoethanol)로 유지하였다. 96 웰 원형 바닥 플레이트에 각 웰 당 2 x 105 림프구를 넣고 최종 농도가 5 ㎍/㎖가 되도록 NP 단백질, 또는 HA 단백질을 넣어 37℃ CO2 배양기에서 자극하였다. 4일이 경과한 후 상층액을 취하여 킷트(murine IFN-γ ELISA kit; Phamingen)를 이용하여 IFN-γ의 농도를 측정하였다.
그 결과, NP DNA + HA DNA를 면역화 한 쥐의 림프구를 NP 단백질의 자극으로 분비되는 IFN-γ의 농도는 NP DNA + 벡터를 면역화 한 쥐의 림프구의 경우와 큰 차이가 없었지만(각각 307 pg/㎖, 352 pg/㎖), HA 단백질의 자극에 의한 IFN-γ의 분비량의 경우 NP DNA + HA DNA를 면역화 쥐의 림프구의 값은 590 pg/㎖으로 HA DNA + 벡터를 면역화한 쥐의 285 pg/㎖ 값과 비교하여 2배 이상의 차이를 보였다(도 4). 이것은 NP DNA의 동시면역은 HA에 대한 항체 반응, CTL 반응뿐만 아니라 HA에 특이적인 Th-1 반응도 증가시켜 줄 수 있음을 의미한다. 반면 대조군 DNA로 면역 화한 쥐의 림프구를 인플루엔자 단백질로 자극한 경우나, NP DNA + 벡터로 면역화한 쥐의 림프구를 HA 단백질로 자극한 경우, HA DNA + 벡터로 면역화한 쥐의 림프구를 NP 단백질로 자극한 경우는 항원을 넣어주지 않았을 때 분비되는 IFN-g의 농도와 유사한 60 pg/㎖ 미만의 값을 나타내어 항원을 넣어주지 않았을 때(media control) 분비되는 IFN-γ의 농도와 비슷하였다.
<실시예 5> NP DNA + OVA DNA로 동시면역에 의한 OVA 특이 IFN-γ 생산 T 세포 분석
본 발명자들은 다른 형질의 생쥐를 사용했을 때 또는 HA, Env 및 E2t가 아닌 다른 종류의 항원을 이용했을 때도 NP DNA에 의한 면역반응 증강제 효과가 나타나는지를 알아보기 위해, C57BL/6 형질의 생쥐에 OVA DNA를 주입하여 OVA에 대한 CD4+ 및 CD8+ T 세포반응을 관찰하였다. 이를 위해 OVA DNA, OVA DNA + NP DNA, 혹은 NP DNA를 C57BL/6 생쥐에 주입하고 4주 경과 후 I-Ab-제한(restricted) OVA 펩타이드, H-2b-제한 OVA 혹은 NP 펩타이드를 이용하여 정량적인 IFN- ELISPOT 분석을 수행하였다.
OVA DNA와 NP DNA를 함께 면역화하는 경우는 pTV-NP 50 ㎍과 pTV-OVA 50 ㎍을 100 ㎕의 PBS에 녹여 50 ㎕ 씩 C57BL/6 생쥐의 양쪽 다리 경골근육에 일회 주입하였다. NP DNA 또는 OVA DNA만을 면역화한 경우 50 ㎍의 각 DNA 백신과 50 ㎍의 공벡터(empty vector; pTV2)를 섞어 같은 방법으로 주입하였다.
니트로셀룰로스-기반(Nitrocellulose-based) 96-웰 플레이트(Millipore)에 5 ㎍/㎖의 항-IFN 포획 Ab(BD Pharmingen)를 4℃에서 하루동안 처리한 후 RPMI 배지(10% FBS)로 2시간 동안 블로킹 처리하였다. OVA DNA 주입된 생쥐의 췌장을 분리하여 단세포 현탁액을 얻고 1/2씩 희석하여 4X105, 2X105 및 1X105 세포를 각각 3겹(triplicate)으로 상기 플레이트에 넣고 10 uM의 OVA 257-264 혹은 OVA 323-339 펩타이드를 처리하여 37℃ CO2 배양기에서 하루동안 배양하였다. 배양 후 플레이트를 PBS(0.05% Tween 20)로 5번 세척한 후 2.5 ㎍/㎖의 바이오틴(biotin)-접합 항-IFN 검출 Ab(BD Pharmingen)를 상온에서 2시간 동안 처리한 후 PBST로 6번 플레이트를 세척하였다. PBST에 1/2,000로 희석된 스트렙타비딘(streptavidin)-접합 알카라인 포스파타제(alkaline phosphatase)를 상온에서 1시간 동안 처리한 후 미리 준비해둔 BCIP/NBT 혼합액을 플레이트에 처리하여 약 15분 동안 상온에서 반응시켰다. 시간 경과 후 발색에 의해 파란 스팟이 관찰되면 물로 세척하여 반응을 정지시켰다. 상온에서 플레이트를 건조시킨 후 광학현미경을 이용하여 스팟의 개수를 측정하였다.
그 결과, 예상대로 NP DNA만을 주입한 그룹과 NP DNA + OVA DNA를 주입한 그룹에서 H-2b-제한 NP 펩타이드에 대한 현저한 IFN-γ 생산 T 세포 빈도(frequency)가 관찰되었으며 두 그룹간에 유사한 수준의 반응을 나타내었다(도 5의 A). 한편 OVA DNA 주입에 의해 H-2b-제한 OVA 펩타이드에 대한 현저한 IFN-γ 생산 T 세포가 형성되었으며 이러한 반응은 NP DNA를 함께 주입하였을 때 약 4-5배정도 더 증가되 는 양상을 보였다(도 5의 B). 이와 유사하게 NP DNA + OVA DNA를 주입한 그룹이 OVA DNA만을 주입한 그룹에 비해 약 3-4배 정도 더 높은 I-Ab-제한 OVA 펩타이드-특이 IFN-γ 생산 T 세포 빈도를 나타내었다(도 5의 C). 반면 NP 펩타이드를 이용한 경우 OVA DNA를 주입한 그룹에서 그리고 OVA 펩타이드를 이용한 경우 NP DNA를 주입한 그룹에서는 특이적인 IFN-γ 생산 T 세포를 거의 관찰할 수 없었으며, 이는 상기 반응이 주입한 DNA에 대한 항원 특이적 반응임을 암시한다.
상기의 결과는 NP DNA의 유전자 면역반응 증강제 효과가 생쥐의 형질에 관계없이 비교적 광범위한 항원에 적용되어 CD4+ 및 CD8+ T 세포반응의 증가에 기여할 수 있음을 나타낸다.
<실시예 6> NP DNA + OVA DNA에 의한 CD8+ 혹은 CD4+ T 세포 증식반응 분석
본 발명자들은 NP DNA가 함께 주입된 다른 항원에 대한 CD8+ 혹은 CD4+ T 세포 증식반응에 영향을 줄 수 있는지의 여부를 생체내(in vivo)에서 직접 관찰하기 위해 OVA 특이적인 CD8+ 혹은 CD4+ T 세포로서 OT-I 및 OT-II 세포를 각각 이용하여 CD8+ 혹은 CD4+ T 세포 증식반응을 분석하였다.
구체적으로, H-2b 혹은 I-Ab에 제한적이며 OVA(ovalbumin) 에피토프 257-264 혹은 323-339 부위에 특이적인 TCR(T Cell Receptor) 형질전환(transgenic) OT-I 혹은 OT-II 생쥐(Kurts C et al., J. Exp. Med. 188:409)가 이용되었다. 6주된 OT-I(또는 OT-II) 생쥐의 림프절(lymph node)로부터 단세포 현탁(single cell suspension)을 얻고 항-HSA(J11d), 항-B220, 항-MHC 클래스 Ⅱ, 및 항-CD4(또는 항-CD8) 단일항체를 4℃에서 30분 동안 처리한 후, 토끼 보체(rabbit complement)를 37℃에서 45분 동안 처리하여 95% 이상의 순도로 OT-I(또는 OT-II)세포를 얻었다. 분리된 OT-I(또는 OT-II) 세포는 2X107 세포/㎖의 농도로 PBS에 희석한 후 생체내(in vivo)에서 세포분열을 추적하기 위해 5 uM의 CFSE(Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester)를 37℃에서 10분 동안 처리하여 CFSE-표지된 OT-I(또는 OT-II)세포를 얻었다. 생체내에서 특정 세포의 분열여부를 추적하기 위해 상기 2X106의 세포에 CFSE 형광물질을 표지한 후 6-7주된 암컷 C57BL/6 생쥐의 혈관에 주입하였다. 하루 경과 후 NP DNA + OVA DNA, OVA DNA 혹은 NP DNA를 상기 생쥐에 근육주입하고 9일 경과 후 각 생쥐의 유출 림프절(draining lymph node)을 분리하여 CFSE-표지 OT-I 또는 OT-II 세포의 분열여부를 유세포 분석기(flow cytometry)를 이용하여 분석하였다. 유세포 분석은 OVA DNA 주입된 생쥐로부터 오금(popliteal) 및 서혜(inguinal)의 림프절을 분리하여 단세포 현탁액을 얻고 PerCP-접합 항-CD4 또는 CD8 mAb 및 PE-접합 V2 mAb를 4℃에서 15분 동안 처리한 후 FACScalibur(BD science)를 이용하여 50,000-100,000개의 세포를 수집하고 CellQuest 소프트웨어를 이용하여 세포분열 여부를 분석하였다.
그 결과, OVA DNA 주입에 의해 5-6번의 OT-I 세포분열이 관찰되었고(도 6의 B), 여기에 NP DNA가 OVA DNA와 함께 동시면역되었을 때 OT-I 세포분열의 강도가 더욱 더 증가되는 현상을 관찰할 수 있었다(도 6의 A). OT-I 세포와는 달리 OT-II 세포는 OVA DNA 주입에 의해 세포분열을 거의 관찰할 수 없었다(도 6의 B). 하지만 NP DNA가 OVA DNA와 함께 주입되었을 때에는 OT-I 세포에서 관찰된 것처럼 현저한 OT-II 세포분열 반응을 관찰할 수 있었다(도 7의 A). 반면 NP DNA 주입시에는 어떠한 OT-I 또는 OT-II 세포분열도 관찰되지 않았으며(도 6의 C 및 도 7의 C), 이는 상기 OT-I 혹은 OT-II 세포분열이 OVA DNA에 의해 유도되는 OVA 항원 특이적 반응임을 의미한다.
상기 결과는 NP DNA가 함께 주입된 다른 항원 DNA(HA, Env, E2 또는 OVA)에 의해 유도되는 CD8+ 혹은 CD4+ T 세포반응, 특히 세포분열의 강도에 영향을 줄 수 있음을 나타낸다.
<실시예 7> 치사 인플루엔자 챌린지 후 초기 생존률의 증가
본 발명자들은 HA DNA와 NP DNA의 혼합물로 면역화한 쥐와 HA DNA + 벡터, NP DNA + 벡터로 면멱화한 쥐를 부스트 면역한지 6주가 경과했을 때 50 LD50의 인플루엔자 A/Jap/57로 챌린지(challenge)하였다. 구체적으로, 부스트 면역(Boost immunization) 후 6주가 지났을 때 각 그룹의 생쥐를 애버틴 용액(avertin solution)으로 마취하고 50 LD50의 인플루엔자 A/Jap/57를 비강내(intranasal) 방법으로 시도하였다. 선택된 날짜에서 각 생쥐의 체중과 생존을 모니터 하였다. 각 그룹 생쥐의 평균체중은 생존한 쥐의 체중과 인플루엔자 감염에 의해 사망한 쥐의 체중을 0으로 한 값을 감염시키기 전의 체중과 비교하여 계산하였다. 각 쥐의 생 존과 체중의 변화를 모니터 하였으며 감염 후 20일까지 관찰하였다.
그 결과, 20일 후 NP DNA + HA DNA 면역화 쥐는 42%의 생존률을 보여 NP DNA + 벡터, HA DNA + 벡터를 면역화한 그룹의 생존률 각 50%, 45%와 비교하여 비슷하거나 약간 낮았다(p>0.2). 그러나 감염 후 4-8일 사이 생존률은 NP DNA + HA DNA 면역화 그룹의 경우 NP DNA + 벡터, 또는 HA DNA + 벡터를 면역화한 그룹보다도 높았다(도 8의 A). 또한, 이 기간 동안의 평균체중 역시 NP DNA + HA DNA 면역화 그룹이 가장 높았다(도 8의 B).
상기 결과로부터 NP DNA + HA DNA 면역화는 최종 생존율은 증가시키지 못하지만 감염 초기 생존률을 증가시켜 쥐의 생존기간을 더 연장시킬 수 있다는 것을 알 수 있었다.
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 유전자 면역반응 증강제로 사용하여 DNA 백신을 함께 면역화하면 DNA 백신에 대한 면역 반응이 증가하여, 인플루엔자, AIDS, C형 및 B형 간염, 암, 결핵 및 말라리아 등에 대한 효과적인 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있고, 인플루엔자 백신의 개발에 관한 정보를 줄 뿐만 아니라, AIDS 및 간염(Hepatitis) 백신의 면역반응 증강제 연구, 그리고 두 가지 이상의 DNA 구성물을 가진 백신의 효능 증진연구에 유익한 도움을 줄 것이며, 또한 본 발명에 사용한 시스템은 다중요소(multi-component) 를 가진 DNA 면역화에 있어 면역 방해(interference)나 증강(enhancement)의 연구모델로 적용될 수 있다.
<110> LG Chem Investment, Ltd.
<120> Method for enhancing immune responses by codelivering influenza
NP DNA in DNA immunization
<130> 2p-01-02
<160> 4
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 1497
<212> DNA
<213> Influenza A/PR/8/34 (H1N1) nucleoprotein
<400> 1
atggcgtctc aaggcaccaa acgatcttac gaacagatgg agactgatgg agaacgccag 60
aatgccactg aaatcagagc atccgtcgga aaaatgattg gtggaattgg acgattctac 120
atccaaatgt gcaccgaact caaactcagt gattatgagg gacggttgat ccaaaacagc 180
ttaacaatag agagaatggt gctctctgct tttgacgaaa ggagaaataa ataccttgaa 240
gaacatccca gtgcggggaa agatcctaag aaaactggag gacctatata caggagagta 300
aacggaaagt ggatgagaga actcatcctt tatgacaaag aagaaataag gcgaatctgg 360
cgccaagcta ataatggtga cgatgcaacg gctggtctga ctcacatgat gatctggcat 420
tccaatttga atgatgcaac ttatcagagg acaagagctc ttgttcgcac cggaatggat 480
cccaggatgt gctctctgat gcaaggttca actctcccta ggaggtctgg agccgcaggt 540
gctgcagtca aaggagttgg aacaatggtg atggaattgg tcagaatgat caaacgtggg 600
atcaatgatc ggaacttctg gaggggtgag aatggacgaa aaacaagaat tgcttatgaa 660
agaatgtgca acattctcaa agggaaattt caaactgctg cacaaaaagc aatgatggat 720
caagtgagag agagccggaa cccagggaat gctgagttcg aagatctcac ttttctagca 780
cggtctgcac tcatattgag agggtcggtt gctcacaagt cctgcctgcc tgcctgtgtg 840
tatggacctg ccgtagccag tgggtacgac tttgaaaggg agggatactc tctagtcgga 900
atagaccctt tcagactgct tcaaaacagc caagtgtaca gcctaatcag accaaatgag 960
aatccagcac acaagagtca actggtgtgg atggcatgcc attctgccgc atttgaagat 1020
ctaagagtat taagcttcat caaagggacg aaggtgctcc caagagggaa gctttccact 1080
agaggagttc aaattgcttc caatgaaaat atggagacta tggaatcaag tacacttgaa 1140
ctgagaagca ggtactgggc cataaggacc agaagtggag gaaacaccaa tcaacagagg 1200
gcatctgcgg gccaaatcag catacaacct acgttctcag tacagagaaa tctccctttt 1260
gacagaacaa ccgttatggc agcattcagt gggaatacag aggggagaac atctgacatg 1320
aggaccgaaa tcataaggat gatggaaagt gcaagaccag aagatgtgtc tttccagggg 1380
cggggagtct tcgagctctc ggacgaaaag gcagcgagcc cgatcgtgcc ttcctttgac 1440
atgagtaatg aaggatctta tttcttcgga gacaatgcag aggaatacga taattaa 1497
<210> 2
<211> 1689
<212> DNA
<213> Influenza A/Japan/305-/57 (H2N2) haemagglutinin
<400> 2
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<400> 4
Leu Tyr Gln Asn Val Gly Thr Tyr Val
1 5
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- 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 포함하는 면역반응 증강제(adjuvant).
- 인플루엔자 NP 유전자 DNA 및 면역항원에 대한 DNA 백신을 포함하는 백신 조성물.
- 제 8항에 있어서, 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA는 인플루엔자 NP 단백질과 90% 이상의 아미노산 서열 상동성을 갖는 단백질을 암호화하는 염기서열을 갖는 DNA 전체 또는 50% 이상의 염기서열을 포함하는 DNA인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
- 제 9항에 있어서, 상기 DNA는 서열번호 1로 기재되는 염기서열을 갖는 DNA인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
- 제 8항에 있어서, 상기 인플루엔자 NP 유전자 DNA를 CMV(cytomegalovirus) 프로모터, RSV(Rous sarcoma virus) 프로모터, β-액틴 프로모터, SV40(simian virus 40) 프로모터, 근육 크레아틴 키나제(muscle creatine kinase) 프로모터로 구성되는 군으로부터 선택되는 전사 프로모터 및 SV40 폴리(A) 및 BGH 터미네이터로 구성되는 군으로부터 선택되는 전사 터미네이터를 갖는 발현벡터에 삽입하여 포함하는 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
- 제 11항에 있어서, pTV-NP(수탁번호 : KCTC 10193BP)인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
- 제 8항에 있어서, 상기 DNA 백신은 인플루엔자, 바리셀라, 디프테리아, 테타누스, 폴리오, 말라리아, 허피스 바이러스, HIV, 파필로마 바이러스, B형 또는 C형 간염 바이러스, 로타 바이러스, 콜레라, 홍역 및 결핵으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상의 면역항원에 대한 DNA 백신인 것을 특징으로 하는 백신 조성물.
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| US8158354B2 (en) | 2003-05-13 | 2012-04-17 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture |
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| US8546082B2 (en) | 2003-09-11 | 2013-10-01 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for identification of sepsis-causing bacteria |
| US8163895B2 (en) | 2003-12-05 | 2012-04-24 | Ibis Biosciences, Inc. | Compositions for use in identification of orthopoxviruses |
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| US20050266411A1 (en) | 2004-05-25 | 2005-12-01 | Hofstadler Steven A | Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA |
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| WO2006104615A2 (en) * | 2005-02-24 | 2006-10-05 | University Of Massachusetts | Influenza nucleic acids, polypeptides, and uses thereof |
| EP1869180B1 (en) | 2005-03-03 | 2013-02-20 | Ibis Biosciences, Inc. | Compositions for use in identification of polyoma viruses |
| US8084207B2 (en) | 2005-03-03 | 2011-12-27 | Ibis Bioscience, Inc. | Compositions for use in identification of papillomavirus |
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| KR101586968B1 (ko) | 2006-08-09 | 2016-01-20 | 메디뮨 엘엘씨 | 인플루엔자 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제 변이체 |
| US9149473B2 (en) | 2006-09-14 | 2015-10-06 | Ibis Biosciences, Inc. | Targeted whole genome amplification method for identification of pathogens |
| JP5680304B2 (ja) | 2007-02-23 | 2015-03-04 | アイビス バイオサイエンシズ インコーポレイティッド | 迅速な法医学的ｄｎａ分析法 |
| US9598724B2 (en) | 2007-06-01 | 2017-03-21 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods and compositions for multiple displacement amplification of nucleic acids |
| EP2344893B1 (en) | 2008-09-16 | 2014-10-15 | Ibis Biosciences, Inc. | Microplate handling systems and methods |
| WO2010033627A2 (en) | 2008-09-16 | 2010-03-25 | Ibis Biosciences, Inc. | Sample processing units, systems, and related methods |
| US8550694B2 (en) | 2008-09-16 | 2013-10-08 | Ibis Biosciences, Inc. | Mixing cartridges, mixing stations, and related kits, systems, and methods |
| WO2010093943A1 (en) | 2009-02-12 | 2010-08-19 | Ibis Biosciences, Inc. | Ionization probe assemblies |
| CA2752205A1 (en) * | 2009-02-12 | 2010-08-19 | Medimmune, Llc | Influenza hemagglutinin and neuraminidase variants |
| US9194877B2 (en) | 2009-07-17 | 2015-11-24 | Ibis Biosciences, Inc. | Systems for bioagent indentification |
| US8950604B2 (en) | 2009-07-17 | 2015-02-10 | Ibis Biosciences, Inc. | Lift and mount apparatus |
| WO2011047307A1 (en) | 2009-10-15 | 2011-04-21 | Ibis Biosciences, Inc. | Multiple displacement amplification |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996001207A1 (es) | 1994-07-05 | 1996-01-18 | Subibor, S.A. | Embarcacion sumergible |
| KR20000021490A (ko) * | 1998-09-29 | 2000-04-25 | 정명식 | 독감 바이러스에 대한 디엔에이 백신 |
| US6214804B1 (en) | 1989-03-21 | 2001-04-10 | Vical Incorporated | Induction of a protective immune response in a mammal by injecting a DNA sequence |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU1651992A (en) * | 1991-03-19 | 1992-10-21 | United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The | Expression of influenza nucleoprotein antigens in baculovirus |
-
2002
- 2002-03-13 KR KR1020020013574A patent/KR100600988B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-03-11 AU AU2003212692A patent/AU2003212692A1/en not_active Abandoned
- 2003-03-11 WO PCT/KR2003/000471 patent/WO2003075955A1/en not_active Application Discontinuation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6214804B1 (en) | 1989-03-21 | 2001-04-10 | Vical Incorporated | Induction of a protective immune response in a mammal by injecting a DNA sequence |
| WO1996001207A1 (es) | 1994-07-05 | 1996-01-18 | Subibor, S.A. | Embarcacion sumergible |
| KR20000021490A (ko) * | 1998-09-29 | 2000-04-25 | 정명식 | 독감 바이러스에 대한 디엔에이 백신 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
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| 1985.05 |
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| AU2003212692A1 (en) | 2003-09-22 |
| KR20030073827A (ko) | 2003-09-19 |
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