KR20210010873A

KR20210010873A - 제한된 t 세포 염증 반응으로 표적화된 항체 생산을 용이하게 하는 인공 무차별적 t 헬퍼 세포 에피토프

Info

Publication number: KR20210010873A
Application number: KR1020207034978A
Authority: KR
Inventors: 창 이 왕
Original assignee: 유비아이 아이피 홀딩스
Priority date: 2018-05-04
Filing date: 2019-05-03
Publication date: 2021-01-28
Also published as: CA3099296A1; BR112020022443A2; TW201946649A; EP3790581A4; WO2019213555A1; SG11202010942WA; EP3790581A1; AU2019262609A1; US20220023400A1; CN112218655A; MX2020011733A; TWI754817B; JP2021523127A

Abstract

본 발명은 표적 항원 부위의 최적 면역원성을 제공하도록 설계된 신규한 이종성 무차별적 및 인공 T 헬퍼 세포 에피토프(Th 에피토프)에 관한 것이다. 개시된 Th 에피토프는, 펩타이드 면역원 작제물에서 B 세포 에피토프에 공유 결합된 경우, 표적 항원 부위의 B 세포 에피토프에 강력한 항체 반응을 유도한다. Th 에피토프는 스스로 면역침묵성이며, 즉, 존재하는 경우, 펩타이드 면역원 작제물에 의해 생성된 항체의 소수만, Th 에피토프로 향하게 되므로, 표적화된 항원 부위로 지향된 매우 집중된 면역 반응을 가능하게 할 것이다. 이종성 무차별적 Th 에피토프는 투여 후 염증성 항자기 세포-매개 면역 반응을 발생하는 효과적이고도 안전한 펩타이드 면역원을 제공한다.

Description

제한된 T 세포 염증 반응으로 표적화된 항체 생산을 용이하게 하는 인공 무차별적 T 헬퍼 세포 에피토프

본 출원은 2018년 5월 4일자로 출원한 미국 가출원 일련 번호 62/667,123의 이익을 주장하는 PCT 국제 출원이며, 상기 가출원은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다.

면역 반응은 항원-제시 세포와 T 헬퍼 세포 간의 협업적인 상호작용을 필요로 한다. 유효한 항체 반응의 유발은 항원-제시 세포가 대상 면역원의 표적 항원 부위를 인식하고 T 헬퍼 세포가 T 헬퍼 세포 에피토프를 인식하는 것을 필요로 한다. 일반적으로, 대상 면역원 상의 T 헬퍼 에피토프는 이의 B 세포 에피토프(들)와는 상이하다. B 세포 에피토프는 B 세포에 의해 인식되는 목적하는 표적 상의 부위이며, 이는 목적하는 표적 부위에 대한 항체의 생산을 초래한다. 표적의 천연 형태는 항체가 직접 결합하는 부위를 결정한다. Th 세포 반응의 유발은 표적 단백질의 처리된 펩타이드 단편과 연관된 클래스 II 주조직 적합성 복합체(major histocompatibility complex: MHC) 간에 형성된 항원-제시 세포의 막 상에 복합체를 인식하는 Th 세포 수용체를 필요로 한다. 따라서, 표적 단백질의 펩타이드 처리 및 3-방식 인식이 Th 세포 반응을 위하여 요구된다. 3 부분 복합체는, 1) 중요한 MHC 클래스 II 접촉 잔기가 상이한 MHC 결합 펩타이드(Th 에피토프) 내에 가변적으로 위치되고; 2) 상이한 MHC 결합 펩타이드가 가변 길이 및 상이한 아미노산 서열을 갖고; 그리고 3) MHC 클래스 II 분자가 숙주의 유전적 구성에 따라서 고도로 다양할 수 있기 때문에 정의되기 어렵다. 특정 Th 에피토프에 대한 면역 반응성은 부분적으로는 숙주의 MHC 유전자에 의해 결정되고, Th 에피토프의 반응성은 모집단의 개체 간에 상이하다. 무차별적 Th 에피토프(promiscuous Th epitope), 즉, 단일 종 내 개체 및 종에 걸쳐 반응성인 Th 에피토프는 식별되기 어렵다.

다수의 인자는 T 세포 인식의 각 성분 단계, 예컨대, 항원-처리 세포에 의한 적절한 펩타이드 처리, 유전적으로 결정된 클래스 II MHC 분자에 의한 펩타이드의 제시, 및 Th 세포에 대한 수용체에 의한 MHC 분자 또는 펩타이드 복합체의 인식을 위해 요구된다. 넓은 반응성을 제공하기 위한 무차별적 Th 에피토프 인식에 대한 요건은 결정되기 어려울 수 있다.

항체의 유도를 위하여, 면역원은 B 세포 결정자 및 Th 세포 결정자(들) 둘 다를 포함해야만 하는 것은 명백하다. 통상, 표적의 면역원성을 증가시키기 위하여, Th 반응은 표적을 운반 단백질(carrier protein)에 커플링시킴으로써 제공된다. 이 기술의 단점은 많다. 이하의 이유 때문에 잘 정의된 안전하고도 효과적인 펩타이드-운반 단백질 접합체를 제조하기 어렵다:

a. 화학적 커플링은 크기 및 조성물의 이질성을 도입하는 무작위 반응, 예컨대, 글루타르알데하이드와의 접합이다(Borras-Cuesta et al., Eur J Immunol, 1987; 17: 1213-1215);

b. 운반 단백질은 알러지 및 자가면역 반응과 같은 바람직하지 않은 면역 반응에 대한 잠재성을 유도한다(Bixler et al., WO 89/06974);

c. 커다란 펩타이드-운반 단백질은 표적 부위보다 오히려 운반 단백질로 주로 잘못 지향된 무관한 면역 반응을 유발한다(Cease et al., Proc Natl Acad Sci USA, 1987; 84: 4249-4253); 그리고

d. 운반 단백질은 또한 동일한 운반 단백질을 포함하는 면역원으로 미리 면역화된 숙주에서 에피토프 억제를 위한 가능성을 도입한다. 숙주가 다른 면역원으로 후속적으로 면역화된 경우, 동일한 운반 단백질이 상이한 합텐에 커플링되고, 얻어지는 면역 반응은 운반 단백질에 대해서 증강되지만 합텐에 대해서는 저해된다(Schutze et al., J Immunol, 1985; 135: 2319-2322).

위에서 기재된 위험을 피하기 위하여, 전통적인 운반 단백질의 사용 없이도 T 세포를 유도해내는 것을 돕는 것이 바람직하다.

참조에 의한 포함

본 출원에 인용된 각 특허, 간행물 및 비특허 문헌은 마치 각각이 개별적으로 참조에 의해 포함된 것처럼 이들의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함된다.

도면의 간단한 설명

도 1: 정상 공여자의 미경험 말초 혈액 단핵세포에서의 무차별적 인공 Th 펩타이드 반응성 T 세포의 검출.

본 개시내용은 치료 효과에 대한 기능적 부위지정(site-directed) 항체 반응을 자극시킬 수 있는 펩타이드 면역원을 생산하는데 사용될 수 있는 무차별적 인공 T 헬퍼 세포(Th) 에피토프를 제공한다. 개시된 인공 Th 에피토프는, 선택적 스페이서를 통해서 합성 펩타이드 B 세포 에피토프("표적 항원 부위")에 연결되어, 면역원성 펩타이드를 생산할 수 있다. 면역원성 펩타이드는 또한 일반적인 면역 자극제 서열을 비롯한 기타 성분을 포함할 수 있다.

인공 Th 에피토프는 "표적 항원 부위"로 지향된 높은 수준의 항체의 생산과 함께 강력한 T 헬퍼 세포-매개 면역 반응을 유도하는 가능성을 펩타이드 면역원에 부여한다. 본 발명은 또한 확립된 펩타이드 면역원에서 운반 단백질 및 병원체-유래 T 헬퍼 세포 부위를 이들의 면역원성을 개선하도록 특이적으로 설계된 인공 Th 에피토프로의 유리한 대체를 제공한다. 본 발명의 인공 Th 에피토프를 가진 짧은 펩타이드 면역원은 유의한 염증 반응을 초래하는 일 없이 특정 표적 항원 부위 B 세포 에피토프에 표적화된 높은 수준의 항체를 유발한다.

본 발명의 인공 Th 에피토프는 표적 항원 부위에 그리고 선택적으로 면역자극 서열에 연결될 수 있다. 본 발명의 면역원성 펩타이드는 하기 화학식으로 표시될 수 있다:

식 중,

각각의 A는 독립적으로 아미노산이고;

각각의 B는 독립적으로 아미노산, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO-, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO(εN)Lys-, -NHCH(X)CH₂S-석신이미딜(εN)Lys-, 또는 -NHCH(X)CH₂S-(석신이미딜)-이고;

각각의 Th는 독립적으로 인공 Th 세포 에피토프, 이의 유사체 또는 세그먼트이고;

표적 항원 부위는 B 세포 에피토프, 펩타이드 합텐, 또는 이의 면역학적 반응 유사체이고;

X는 아미노산, α-COOH 또는 -CONH₂이고;

n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;

m은 1, 2, 3 또는 4이고; 그리고

o는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.

표적 항원 부위로서의 펩타이드 합텐의 일례는 베타-아밀로이드(Aβ) 단백질(Aβ_1-14)의 아미노산 1 내지 14(서열번호 56)이다.

본 발명의 조성물은 목적하는 표적 항원 부위에 면역화된 숙주에서의 항체 반응을 유발할 수 있는 펩타이드를 포함한다. 표적 항원 부위는 병원성 유기체 및 정상적 면역침묵 자기-항원(normally immunosilent self-antigen) 및 종양-연관 표적으로부터 유래될 수 있다.

따라서, 본 발명의 조성물은 많은 다양한 의학적 및 수의학적 응용에 유용할 수 있다. 이들은 감염성 질환으로부터의 보호 면역력을 제공하는 백신, 정상 생리학적 과정의 기능부전에 기인하는 장애의 치료에 대한 면역요법, 암의 치료를 위한 면역요법, 및 정상 생리학적 과정을 바람직하게는 개입하여 변형시키는 제제를 포함한다.

본 발명의 인공 Th 에피토프에 공유 결합될 수 있는 표적 항원의 몇몇은, 몇 가지 예를 들면, 알츠하이머병의 치료를 위한 베타-아밀로이드(Aβ), 파킨슨병의 치료를 위한 알파-시누클레인(alpha-synuclein)(α-Syn), 알러지 질환의 치료를 위한 막-결합된 IgE의 세포외 막-근위 도메인(또는 IgE EMPD), 알츠하이머병을 비롯한 타우병증의 치료를 위한 타우(Tau), 및 아토피성 피부염의 치료를 위한 인터류킨-31(IL-31)의 부분들을 포함한다. 보다 구체적으로는, Aβ_1-14(미국 특허 제9,102,752호에 기재된 바와 같음), α-Syn_126-135(미국 가출원 제62/521,287호에 기재된 바와 같음), IgE EMPD_1-39(미국 PCT 출원 제PCT/US2017/069174호에 기재된 바와 같음), 타우_379-408(미국 가출원 제62/578,124호에 기재된 바와 같음) 및 IL-31_97-144(미국 가출원 제62/597,130호에 기재된 바와 같음)를 포함한다.

몇몇 실시형태에서, 본 발명은 병태를 치료하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 펩타이드를 투여하는 단계를 포함하고, 펩타이드는 T 헬퍼 세포 에피토프 및 항원-제시 에피토프를 포함하고, 펩타이드는 양성 대조군의 면역원성 염증 반응보다 적어도 약 3-배 더 낮은 면역원성 염증 반응을 생산한다.

본 개시내용은 치료 효과를 위하여 자극 기능적 부위지정 항체 반응을 가능하게 하는 펩타이드 면역원을 생산하는데 사용될 수 있는 무차별적 인공 T 헬퍼 세포(Th) 에피토프를 제공한다. 개시된 인공 Th 에피토프는, 선택적 스페이서를 통해서 합성 펩타이드 B 세포 에피토프("표적 항원 부위")에 연결되어, 면역원성 펩타이드를 생산할 수 있다.

인공 Th 에피토프는 "표적 항원 부위"로 지향된 높은 수준의 항체의 생산과 함께 강력한 T 헬퍼 세포-매개 면역 반응을 유도하는 가능성을 펩타이드 면역원에 부여한다. 본 발명은 또한 확립된 펩타이드 면역원에서 운반 단백질 및 병원체-유래 T 헬퍼 세포 부위를 이들의 면역원성을 개선하도록 특이적으로 설계된 인공 Th 에피토프로의 유리한 대체를 제공한다. 본 발명의 인공 Th 에피토프를 가진 짧은 펩타이드 면역원은 상당한 염증 반응을 초래하는 일 없이 특정 표적 항원 부위 B 세포 에피토프로 표적화된 높은 수준의 항체를 유발한다.

본 개시내용의 펩타이드 면역원은 목적하는 표적 항원 부위에 대해서 면역화된 숙주에서 항체 반응을 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 항원 부위는 병원성 유기체(예컨대, FMDV VP1, PRRSV GP5 등)로부터 취해진다. 몇몇 실시형태에서, 항원 부위는 정상 면역침묵 자기-항원 또는 종양-연관 표적(예컨대, Aβ, 타우, 알파 시누클레인(Alpha Synuclein), IgE EMPD, IL-31 등)으로부터 취해진다.

본 개시내용은 특정 단백질에 표적화된 항체를 유도하는 펩타이드 면역원을 제공하는데 사용될 수 있는 인공 Th 에피토프를 기재한다. 표적 항원 부위는 임의의 표적 펩타이드 또는 단백질로부터 임의의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 아밀로이드 β(Aβ), 구제역(FMD) 캡시드 단백질, 돼지 호흡기 및 생식 증후군 바이러스(PRRSV)로부터의 당단백질, 황체형성 호르몬-방출 호르몬(Luteinizing Hormone-Releasing Hormone: LHRH), 및 기타 임의의 펩타이드 또는 단백질 서열로 표적화된 항체를 유발하는 펩타이드 면역원을 제공하는데 사용될 수 있는 인공 Th 에피토프를 기술한다.

본 발명의 펩타이드는 의학적 및 수의학적 응용에 유용할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 감염성 질환 또는 신경퇴행성 질환으로부터의 보호 면역력을 제공하고, 정상 생리학적 과정의 기능부전에 기인하는 장애를 치료하기 위한 백신으로서, 암을 치료하기 위한 면역요법으로서, 그리고 정상 생리학적 과정에 개입하기 위한 제제로서 사용될 수 있다.

펩타이드 면역원

본 명세서에서 이용되는 바와 같은 용어 "펩타이드 면역원"은, 단일의 보다 큰 펩타이드를 형성하기 위하여 통상의 펩타이드 결합을 통해서 또는 공유 결합, 예컨대, 티오에스터의 다른 형성을 통해서 표적 항원 부위에 공유 결합된 Th 에피토프를 포함하는 분자를 지칭한다.

본 개시내용은 펩타이드 면역원 및 펩타이드 면역원을 포함하는 조성물을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 면역원성 펩타이드는 인공 이종성 Th 에피토프, B 세포 에피토프를 함유하는 표적 항원 부위, 및 선택적 이종성 스페이서를 포함한다.

펩타이드 면역원 내 인공 Th 에피토프의 존재는 강력한 Th 세포-매개 면역 반응을 유도할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 면역원성 펩타이드 내 인공 이종성 Th 에피토프의 존재는 표적 항원 부위에 지향된 높은 수준의 항체를 생산할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 면역원성을 개선시키도록 설계된 인공 이종성 Th 세포 에피토프를 갖는 확립된 펩타이드 면역원에서 운반 단백질 및 병원체-유도 Th 세포 부위의 유리한 대체를 기술한다. 몇몇 실시형태에서, 인공 Th 에피토프를 갖는 펩타이드 면역원은 B 세포 에피토프(예컨대, Aβ, 타우, 알파 시누클레인, IgE EMPD, IL-31 등)로 표적화된 높은 수준의 항체 생산을 유도할 수 있다.

몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 면역원성 펩타이드는 하기 화학식으로 나타낼 수 있다:

식 중,

각각의 A는 독립적으로 아미노산이고;

각각의 B는 독립적으로 아미노산, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO-, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO(εN)Lys-, -NHCH(X)CH₂S-석신이미딜(εN)Lys- 또는 -NHCH(X)CH₂S-(석신이미딜)-이고;

X는 아미노산, α-COOH 또는 -CONH₂이고;

n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;

m은 1, 2, 3 또는 4이고; 그리고

o는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.

본 개시내용의 펩타이드 면역원은 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95 또는 약 100개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 펩타이드 면역원은 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70 또는 약 80개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.

A - 아미노산

본 개시내용의 면역원성 펩타이드에서의 각각의 A는 독립적으로 이종성 아미노산 서열이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "이종성"은, 표적 항원 부위(B 세포 에피토프)의 야생형 아미노산 서열의 일부가 아니거나 또는 이와 상동성이 아닌 아미노산 서열을 지칭한다. 따라서, A의 이종성 아미노산 서열은 표적 항원 부위의 단백질 또는 펩타이드에서 천연에서 발견되지 않는 아미노산 서열을 함유한다. 성분 A의 서열이 표적 항원 부위에 대해 이종성이므로, 표적 항원 부위의 천연 아미노산 서열은 성분 A가 표적 항원 부위에 공유 결합된 경우 N-말단 또는 C-말단 방향으로 연장되지 않는다.

몇몇 실시형태에서, 각각의 A는 독립적으로 비-천연 유래 또는 천연 유래 아미노산이다.

천연 유래 아미노산은 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 아이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린을 포함한다.

비-천연 유래 아미노산은 ε-N 라이신, β-알라닌, 오르니틴, 노르류신, 노르발린, 하이드록시프롤린, 티로신, γ-아미노 부티르산, 호모세린, 시트룰린, 아미노벤조산, 6-아미노카프로산(Aca; 6-아미노헥산산), 하이드록시프롤린, 머캅토프로피온산(MPA), 3-나이트로-티로신, 피로글루탐산 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

몇몇 실시형태에서, n은 1 초과이고, 각각의 A는 독립적으로 동일한 아미노산이다. 몇몇 실시형태에서, n은 1보다 크고 각각의 A는 독립적으로 상이한 아미노산이다.

B - 선택적 이종성 스페이서

본 개시내용의 면역원성 펩타이드에서의 각각의 B는 선택적 이종성 스페이서이다.

위에서 논의된 바와 같이, 용어 "이종성"은 표적 항원 부위(B 세포 에피토프)의 야생형 아미노산 서열의 일부가 아니거나 상동성이 아닌 아미노산을 지칭한다. 따라서, 스페이서가 아미노산인 경우, 스페이서는 표적 항원 부위의 단백질 또는 펩타이드에서 천연에서 발견되지 않는 아미노산 서열을 함유한다. 성분 B의 서열이 표적 항원 부위에 대해서 이종성이므로, 성분 B가 표적 항원 부위에 공유 결합된 경우 표적 항원 부위의 천연 아미노산 서열은 N-말단 방향 또는 C-말단 방향의 어느 쪽으로도 연장되지 않는다.

성분 B의 선택적 이종성 스페이서는 독립적으로 아미노산, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO-, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO(εN)Lys-, -NHCH(X)CH₂S-석신이미딜(εN)Lys-, -NHCH(X)CH₂S-(석신이미딜)-, 및/또는 이들의 임의의 조합이다. 스페이서는 성분 A에 대해서 위에서 기재된 바와 같은 1개 이상의 천연 또는 비-천연 유래 아미노산 잔기를 함유할 수 있다.

스페이서는 Th 에피토프와 표적 항원 부위의 분리를 증대시키기 위한 가요성 힌지 스페이서일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 가요성 힌지 서열은 프롤린 풍부일 수 있다. 소정 실시형태에서, 가요성 힌지는 서열 Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro(서열번호 55)를 가지며, 면역글로불린 중쇄에서 발견되는 가요성 힌지 영역으로부터 모델링된다. 그 안의 Xaa는 임의의 아미노산일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Xaa는 아스파르트산이다. 몇몇 실시형태에서, 스페이서에 의해 제공된 입체배치 분리는 제시된 펩타이드 면역원과 적절한 Th 세포 및 B 세포 더욱 효율적인 상호작용을 허용할 수 있다. Th 에피토프에 대한 면역 반응은 개선된 면역 반응성을 제공하도록 증대될 수 있다.

o>1일 경우, 각각의 B는 독립적으로 동일 또는 상이하다. 몇몇 실시형태에서, B는 Gly-Gly, Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro(서열번호 55), εNLys, εNLys-Lys-Lys-Lys(서열번호 53), Lys-Lys-Lys, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO-, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO(εNLys)-, -NHCH(X)CH₂S-석신이미딜-εNLys- 또는 -NHCH(X)CH₂S-(석신이미딜)-, 및/또는 이들의 조합이다.

예시적인 이종성 스페이서는 표 2에 나타낸다.

표적 항원 부위

본 개시내용은 특정 단백질에 표적화된 항체를 유발하는 펩타이드 면역원을 제공하는데 사용될 수 있는 인공 Th 에피토프를 기술한다. 표적 항원 부위는 외래(foreign)- 또는 자기(self)-펩타이드 또는 단백질을 비롯한 임의의 표적 펩타이드 또는 단백질로부터의 임의의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 황체형성 호르몬-방출 호르몬(LHRH)에 표적화된 항체를 유발하는 펩타이드 면역원을 제공하는데 사용될 수 있는 인공 Th 에피토프(예컨대, 미국 특허 제6,025,468호, 제6,228,987호, 제6,559,282호 및 미국 특허 공개 제US2017/0216418호); 아밀로이드 β(Aβ)(예컨대, 미국 특허 제6,906,169호, 제7,951,909호, 제8,232,373호 및 제9,102,752호); 구제역 캡시드 단백질(예컨대, 미국 특허 제6,048,538호, 제6,107,021호 및 미국 특허 공개 제2015/0306203호); HIV 감염의 예방 및 치료를 위한 HIV 비리온 에피토프(예컨대, 미국 특허 제5,912,176호, 제5,961,976호 및 제6,090,388호); 돼지 서코바이러스 제2형(PCV2)으로부터 캡시드 단백질(예컨대, 미국 특허 공개 제2013/0236487호), 돼지 호흡기 및 생식 증후군 바이러스(PRRSV)로부터의 당단백질(예컨대, 미국 특허 공개 제2014/0335118호), IgE(예컨대, 미국 특허 제7648701호 및 제6811782호), 알파-시누클레인(α-Syn)(미국 가출원 제62/521,287), 막-결합된 IgE의 세포외 막-근위 도메인(또는 IgE EMPD)(미국 PCT 출원 제PCT/US2017/069174호), 타우(미국 가출원 제62/578,124호) 및 인터류킨-31(IL-31)(미국 가출원 제62/597,130호), 말라리아의 예방을 위한 말라리아원충의 CS 항원; 동맥경화증의 예방 및 치료를 위한 CETP; 및 임의의 다른 펩타이드 또는 단백질 서열을 기재한다. 모든 특허 및 특허 공보는 이들의 전문이 참조에 의해 포함된다.

예시적인 표적 항원 부위는 표 3에 나타낸다.

Th - T 헬퍼 에피토프

펩타이드 면역원 작제물의 Th 에피토프는 표적 항원 부위의 면역원성을 증대시키며, 이는 합리적인 설계를 통해서 최적화된 표적 B 세포 에피토프에 대해서 지향된 특정 고역가 항체의 생산을 용이하게 한다.

몇몇 실시형태에서, Th 에피토프는 이종성 서열이다. 위에서 논의된 바와 같이, 용어 "이종성"은 표적 항원 부위의 야생형 서열의 일부가 아니거나 상동성이 아닌 아미노산 서열로부터 유래된 아미노산 서열을 지칭한다. 따라서, 이종성 Th 에피토프는 표적 항원 부위에서 자연에서 발견되지 않는 아미노산 서열로부터 유래된 Th 에피토프이다. Th 에피토프가 표적 항원 부위에 대해서 이종성이므로, 표적 항원 부위의 천연 아미노산 서열은 이종성 Th 에피토프가 표적 항원 부위에 공유 결합된 경우 N-말단 방향 또는 C-말단 방향 중 어느 한쪽으로 연장되지 않는다.

Th 에피토프는 임의의 종(예컨대, 인간, 돼지, 소, 개, 래트, 마우스, 기니피그 등)으로부터 유래된 아미노산 서열을 가질 수 있다. Th 에피토프는 또한 다수 종의 MHC 클래스 II 분자에 대하여 무차별적 결합 모티프를 가질 수 있다. 소정 실시형태에서, Th 에피토프는 다수의 무차별적 MHC 클래스 II 결합 모티프를 포함하여 T 헬퍼 세포의 최대 활성화를 가능하게 하여, 면역 반응의 개시 및 조절을 초래한다. Th 에피토프는 바람직하게는 스스로 면역침묵성(immunosilent)이며, 즉, 존재하는 경우 타우 펩타이드 면역원 작제물에 의해 생성된 항체의 소수만 Th 에피토프로 향하게 되어, 표적화된 항원 부위로 지향된 매우 집중된 면역 반응을 가능하게 할 것이다.

Th 에피토프는 대략 15 내지 대략 50개의 아미노산 잔기의 크기의 범위일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Th 에피토프는 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45 또는 약 50개의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. Th 에피토프는 공통 구조적 특징 및 특정 랜드마크 서열을 공유할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Th 에피토프는 양친매성 나선, 즉, 나선의 한쪽면을 지배하는 소수성 아미노산 잔기와 그 둘레면을 지배하는 극성 잔기를 가진 알파-나선 구조을 갖는다.

Th 에피토프 및 WO 1999/066957의 개시내용, 그리고 대응하는 미국 특허 제6,713,301호는 이들의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 편입된다.

무차별적 Th 결정자는 불량한 면역원성 펩타이드를 강화시킴에 있어서 효과적일 수 있다. 잘-설계된 무차별적 Th/B 세포 에피토프 키메라 펩타이드는, 유전적으로 다양한 모집단의 대부분의 구성원에서 B 세포 부위에 표적화된 항체 반응을 갖는 Th 반응을 유도할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Th 세포는 펩타이드-운반체를 잘-특성규명된 무차별적 Th 결정자에 공유 결합시킴으로써 표적 항원 펩타이드로 공급될 수 있다.

무차별적 Th 에피토프는 추가의 1차 아미노산 패턴을 함유할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 무차별적 Th 에피토프는 로스바드(Rothbard) 서열을 함유할 수 있는데, 여기서 무차별적 Th 에피토프는 하전된 잔기(예컨대, -Gly-)를 함유하고, 이어서 2 내지 3개의 소수성 잔기를, 이어서 하전된 또는 극성 잔기를 함유한다(Rothbard and Taylor, EMBO J, 1988; 7:93-101). 무차별적 Th 에피토프는 1, 4, 5, 8개 규칙을 따를 수 있는데, 여기서 양으로 하전된 잔기에 후속하여 동일 면 상에 위치된 1, 4, 5 및 8번 위치를 갖는 양친매성 나선과 일치하는 제4, 제5 및 제8번 위치에 소수성 잔기가 이어진다. 몇몇 실시형태에서, 소수성 및 하전된 및 극성 아미노산의 1, 4, 5, 8개의 패턴은 단일 Th 에피토프 내에서 반복될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 무차별적 T 세포 에피토프는 1, 4, 5, 8 규칙을 따르는 로스바드 서열 또는 에피토프 중 적어도 하나를 함유할 수 있다. 다른 실시형태에서, Th 에피토프는 1개 초과의 로스바드 서열을 함유한다.

병원체부터 유래된 무별적 Th 에피토프는, B형 간염 표면 Th 세포 에피토프(HBsAg Th), B형 간염 코어 항원 Th 세포 에피토프(HBc Th), 백일해 독소 Th 세포 에피토프(PT Th), 파상풍 독소 Th 세포 에피토프(TT Th), 홍역 바이러스 F 단백질 Th 세포 에피토프(MVF Th), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis) 주요 외막 단백질 Th 세포 에피토프(CT Th), 디프테리아 독소 Th 세포 에피토프(DT Th), 플라스모듐 팔시파룸(Plasmodium falciparum) 포자소체 Th 세포 에피토프(PF Th), 만손주혈흡충(Schistosoma mansoni) 트라이오스 포스페이트 이성질화효소 Th 세포 에피토프(SM Th) 및 에쉐리키아 콜라이(Escherichia coli) TraT Th 세포 에피토프(TraT Th), 파상풍균(Clostridium tetani), 백일해균(Bordetella pertussis), 콜레라 독소, 인플루엔자 MP1, 인플루엔자 NSP1, 엡스타인바 바이러스(EBV), 인간 거대세포바이러스(HCMV)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 특허의 개시내용에서 사용되는 Th 에피토프의 예는 표 1에 나타낸다.

몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 Th 에피토프는 유사한 아미노산 서열을 함유하는 펩타이드의 혼합물을 함유하는 조합 Th 에피토프일 수 있다. 조합 인공 Th 에피토프라고도 지칭되는 구조화된 합성 항원 라이브러리(SSAL)는, 특정 위치에 치환을 가진 불변 잔기의 구조적 프레임워크 둘레에 조직된 아미노산 서열을 가진 Th 에피토프의 크기를 포함한다. SSAL 에피토프의 서열은 다양한 MHC 제한 요소의 인식을 제공하기 위하여 상대적으로 불변 잔기를 유지하고 다른 잔기를 변화시킴으로써 결정된다. SSAL 에피토프의 서열은 무차별적 Th의 1차 아미노산 서열을 정렬시키고, 골격 프레임워크로서 Th 펩타이드의 고유한 구조를 담당하는 잔기를 선택하여 유지시키고, 공지된 MHC 제한 요소에 따라서 잔류 잔기를 변화시킴으로써 결정될 수 있다. MHC 제한 요소의 바람직한 아미노산을 가진 불변 위치와 가변 위치는 MHC-결합 모티프를 얻는데 사용될 수 있으며, 이는 Th 에피토프의 SSAL을 설계하는데 사용될 수 있다.

조합 서열로서 제시된 이종성 Th 에피토프 펩타이드는, 그 특정 펩타이드에 대한 상동체의 가변 잔기에 기초하여 펩타이드 프레임워크 내의 특정 위치에 나타난 아미노산 잔기의 혼합물을 함유한다. 몇몇 실시형태에서, Th 에피토프 라이브러리 서열은 무차별적 Th 에피토프의 구조 모티프를 유지하고 보다 넓은 범위의 일배체형에 대한 반응성을 수용하도록 설계된다. 몇몇 실시형태에서, SSAL의 구성원은 무차별적 에피토프가 홍역 바이러스(예컨대, 서열번호 1 내지 5)의 F 단백질로부터 취해진 후에 모델링된 Th 에피토프 SSAL1 Th1을 지칭할 수 있다. 다른 실시형태에서, SSAL의 구성원은 무차별적 에피토프가 HBsAg1(예컨대, 서열번호 19 내지 24)로부터 취해진 후에 모델링된 Th 에피토프 SSAL2 Th2를 지칭할 수 있다.

합성 후의 조합 인공 Th 에피토프들(또는 SSAL)의 혼합물에 존재하는 펩타이드의 총수는 각각 가변적인 위치에서 함께 입수 가능한 선택지의 수를 곱함으로써 계산될 수 있다. 예를 들어, 서열번호 16은 5개의 가변적인 위치를 함유하기 때문에 32개의 상이한 펩타이드의 조합을 나타내는데, 여기서 각각의 가변적인 위치는 2개의 상이한 잔기의 옵션을 갖는다(즉, 2×2×2×2×2 = 2⁵ = 32). 유사하게, 서열번호 5는 524,288개의 상이한 펩타이드의 조합을 나타낸다(즉, 2×4×2×4×2×4×4×4×2×4×2×4 = 2⁵x4⁷ = 524,288). 조합 인공 Th 에피토프 서열은 (a) 가변 서열에 의해 포괄되는 모든 펩타이드의 혼합물 및 (b) 그 조합 내의 단일-서열을 함유하는 각각 개별적인 펩타이드를 포함한다.

몇몇 실시형태에서, 하전된 잔기 Glu 또는 Asp는 Th의 소수성 면을 둘러싸고 있는 전하를 증가시키도록 1번 위치에 부가될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 양친매성 나선의 소수성 면은 2, 5, 8, 9, 10, 13 및 16번의 소수성 잔기에 의해 유지될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 2, 5, 8, 9, 10 및 13번의 아미노산 잔기는 광범위한 MHC 제한 요소에의 결합 가능성을 갖는 표면을 제공하도록 변화될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 아미노산 잔기의 변화는 인공 Th 에피토프의 면역 반응성의 범위를 확대시킬 수 있다.

인공 Th 에피토프는 공지된 무차별적 Th 에피토프의 모든 특성 및 특징을 혼입할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 인공 Th 에피토프는 SSAL의 구성원이다. 몇몇 실시형태에서, 인공 Th 부위는 부위-특위적 표적에 대한 증대된 항체 반응을 제공하기 위하여 자기-항원 및 외래 항원으로부터 취한 펩타이드 서열과 조합될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 인공 Th 에피토프 면역원은 효과적이면서도 안전한 항체 반응을 제공할 수 있고, 높은 면역효능을 나타낼 수 있으며, 광범위한 반응성 응답을 입증할 수 있다.

이상적인 인공 Th 에피토프가 또한 제공된다. 이들 이상적인 인공 Th 에피토프는 WO 95/11998에 개시된, 2가지 공지된 천연 Th 에피토프 및 SSAL 펩타이드 프로토타입에 대해 모델링된다. SSALS는 유전적으로 다양한 모집단의 수 중에서 광범위한 면역 반응을 유발하도록 의도된 조합 MHC 분자 결합 모티프(Meister et al., 1995)를 혼입한다. SSAL 펩타이드 프로토타입은, 다수의 MHC-결합 모티프를 도입함으로써 변형된 홍역 바이러스 및 B형 간염 바이러스 항원의 Th 에피토프에 기반하여 설계되었다. 다른 Th 에피토프의 설계는 일련의 신규한 인공 Th 에피토프를 생산하도록 다수의 MHC-결합 모티프를 간단화, 부가 및/또는 변형시킴으로써 다른 공지된 Th 에피토프 후에 모델링되었다. 무차별적 인공 Th 부위는 다양한 표적 항원 부위를 보유하는 합성 펩타이드 면역원에 혼입되었다. 얻어지는 키메라 펩타이드는 표적 항원 부위에 대한 효율적인 항체 반응을 자극시킬 수 있었다.

4가지 펩타이드(서열번호 1 내지 4)의 화합물인 "SSAL1 TH1"로서 표 1에 나타낸 프로토타입 인공 헬퍼 T 세포(Th) 에피토프는 홍역 바이러스의 F 단백질의 무차별적 Th 에피토프로부터 모델링된 이상적인 Th 에피토프이다(Partidos et al. 1991). "MVF Th(UBITh®5)"(서열번호 6)으로서 표 1에 나타낸 모델 Th 에피토프는홍역 바이러스 F 단백질의 288 내지 302번 잔기에 대응한다. MVF Th(서열번호 6)는, "로스바드 규칙(Rothbard Rule)"에 따라서, 에피토프의 소수성 면을 둘러싸고 있는 전하를 증가시키기 위하여 1번 위치에 하전된 잔기 Glu/Asp를 부가하고; 4, 6, 12 및 14번 위치에 하전된 잔기 또는 Gly를 부가 또는 유지하고; 7 및 11번 위치에 하전된 잔기 또는 Gly를 부가 또는 유지함으로써 SSAL1 Th1 프로토타입(서열번호 1 내지 4)으로 변형되었다. Th 에피토프의 소수성 면은 2, 5, 8, 9, 10, 13 및 16번 위치에 잔기를 포함한다. 무차별적인 에피토프와 공통적으로 연관된 소수성 잔기는 이들 위치에서 치환되어 조합 Th SSAL 에피토프, SSAL1 Th1(서열번호 1 내지 4)을 제공하였다. 프로토타입 SSAL1 Th1(서열번호 1 내지 4)의 또 다른 유의한 특징은 1 및 4번 위치가 9번 위치의 어느 한쪽에 회문구조(palindrome)로서 불완전하게 반복되어, MHC-결합 모티프를 모방하는 것이다. SSAL1 Th1의 이러한 "1, 4, 9" 회문구조 패턴은 서열번호 2에서 더욱 변형되어(표 1) 원래의 MvF 모델 Th의 서열(서열번호 6)을 더욱 면밀히 반영하였다.

조합 인공 Th 에피토프는 일련의 단일-서열 에피토프를 제공하도록 간단화될 수 있다. 예를 들어, 서열번호 5의 조합 서열은 서열번호 1 내지 4로 표시되는 단일 서열 Th 에피토프로 간단화될 수 있다. 이들 단일 서열 Th 에피토프는 증대된 면역원성을 제공하도록 표적 항원 부위에 커플링될 수 있다.

몇몇 실시형태에서, Th 에피토프의 면역원성은 비극성 및 극성의 하전되지 않은 아미노산, 예컨대, Ile 및 Ser을 가진 N 말단을 연장시키고, C 말단을 하전된 소수성 아미노산, 예컨대, Lys 및 Phe만큼 연장시킴으로써 개선될 수 있다. 부가에 있어서, Th 에피토프에의 라이신 잔기 또는 다수의 라이신 잔기(예컨대, KKK)의 부가는 수중 펩타이드의 용해도를 개선시킬 수 있다. 추가의 변형은 MHC-결합 모티프 AxTxIL에 의한 C-말단의 치환을 포함하였다(Meister et al, 1995).

인공 Th 에피토프는 공지된 천연 Th 에피토프 또는 SSAL 펩타이드 프로토타입일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, SSAL로부터의 Th 에피토프는 유전적으로 다양한 모집단의 구성원 중에서 넓은 면역 반응을 유발하도록 의도된 조합 MHC 분자 결합 모티프를 혼입시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에서, SSAL 펩타이드 프로토타입은 다수의 MHC-결합 모티프를 도입함으로써 변형된, 홍역 바이러스 및 B형 간염 바이러스 항원의 Th 에피토프에 기초하여 설계될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 인공 Th 에피토프는 일련의 신규한 인공 Th 에피토프를 생산하기 위하여 다수의 MHC-결합 모티프를 간단화, 부가 또는 및/또는 변형시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 새롭게 조정된 무차별적 인공 Th 부위는 다양한 표적 항원 부위를 보유하는 합성 펩타이드 면역원에 혼입될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 얻어지는 키메라 펩타이드는 표적 항원 부위에 대해서 효과적인 항체 반응을 자극시킬 수 있다.

본 개시내용의 인공 Th 에피토프는 클래스 II MHC 분자 결합 부위를 포함하는 천연 또는 비천연 아미노산의 인접 서열일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 인공 Th 에피토프는 표적 항원 부위의 항체 반응을 증대 또는 자극할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Th 에피토프는 연속 또는 불연속 아미노산 세그먼트로 이루어질 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Th 에피토프의 모든 아미노산이 MHC 인식과 연루되는 것은 아니다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 Th 에피토프는 면역학적 기능성 상동체, 예컨대, 면역-증대 상동체, 교차 반응성 상동체, 및 이들의 세그먼트를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 기능성 Th 상동체는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 잔기의 보존적 치환, 부가, 결실 및 삽입을 더 포함할 수 있고, Th 에피토프의 Th-자극 기능을 제공할 수 있다.

Th 에피토프는 표적 부위에 직접 부착될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Th 에피토프는 선택적 이종성 스페이서, 예컨대, 펩타이드 스페이서, 예컨대, Gly-Gly 또는 (ε-N)Lys를 통해서 표적 부위에 부착될 수 있다. 스페이서는 Th 에피토프를 B 세포 에피토프로부터 물리적으로 분리시키고, Th 에피토프 또는 기능성 상동체를 표적 항원 부위와 연결함으로써 생성된 임의의 인공적 2차 구조의 형성을 방해할 수 있으므로, Th 및/또는 B 세포 반응과의 임의의 간섭을 제거할 수 있다.

Th 에피토프는, 표 1에 나타낸 바와 같은, 이상적인 인공 Th 에피토프 및 조합성 이상적인 인공 Th 에피토프를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, Th 에피토프는 서열번호 1 내지 52의 무차별적 Th 세포 에피토프, 이들의 임의의 상동체 및/또는 이들의 임의의 면역학적 유사체이다. Th 에피토프는 또한 Th 에피토프의 면역학적 유사체를 포함한다. 면역학적 Th 유사체는 표적 항원 부위에 대한 면역 반응을 증대 또는 자극시키는데 충분한 이들 Th 에피토프의 임의의 것의 면역-증대 유사체, 교차-반응성 유사체 및 세그먼트를 포함한다.

Th 에피토프 펩타이드의 기능성 면역학적 유사체는 또한 효과적이고 본 발명의 일부로서 포함된다. 기능성 면역학적 Th 유사체는 Th 에피토프의 Th-자극 기능을 본질적으로 변경시키지 않는 Th 에피토프의 1 내지 5개의 아미노산 잔기의 보존적 치환, 부가, 결실 및 삽입을 포할 수 있다. 보존적 치환, 부가 및 삽입은, 표적 항원 부위에 대해서 위에서 기재된 바와 같이, 천연 또는 비천연 아미노산으로 달성될 수 있다. 표 1은 Th 에피토프 펩타이드의 기능적 유사체의 또 다른 변이를 식별한다. 특히, MvF1 및 MvF2 Th의 서열번호 6 및 7은 N-말단 및 C-말단에서 각각 두 아미노산의 결실(서열번호 6 및 7) 또는 봉입(서열번호 16 및 17)만큼 아미노산 프레임이 상이하다는 점에서 MvF4 및 MvF5의 서열번호 16 및 17의 기능적 유사체이다. 이들 2가지 시리즈의 유사한 서열 간의 차이는 이들 서열 없이 혼합된 Th 에피토프의 기능에 영향을 미치지 않을 것이다. 따라서, 기능성 면역학적 Th 유사체는 홍역 바이러스 융합 단백질 MvF1-4 Th(서열번호 6 내지 18)로부터 그리고 간염 표면 단백질 HBsAg 1-3 Th(서열번호 19 내지 31)로부터 유래된 Th 에피토프의 몇 가지 버전을 포함한다.

펩타이드 면역원 작제물 내 Th 에피토프는 표적 항원 부위의 N- 또는 C- 말단 단부에 공유 결합되어 키메라 Th/B 세포 부위 펩타이드 면역원을 생성할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Th 에피토프는 화학적 커플링을 통해서 또는 직접 합성을 통해서 표적 항원 부위에 공유 부착될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Th 에피토프는 표적 항원 부위의 N-말단 단부에 공유 결합된다. 다른 실시형태에서, Th 에피토프는 표적 항원 부위의 C-말단 단부에 공유 결합된다. 소정 실시형태에서, 하나 초과의 Th 에피토프가 표적 항원 부위에 공유 결합된다. 하나 초과의 Th 에피토프가 표적 항원 부위에 연결될 경우, 각각의 Th 에피토프는 동일한 아미노산 서열 또는 상이한 아미노산 서열을 가질 수 있다. 또한, 하나 초과의 Th 에피토프가 표적 항원 부위에 연결될 경우, Th 에피토프는 임의의 수순으로 배열될 수 있다. 예를 들어, Th 에피토프는 표적 항원 부위의 N-말단 단부에 연속하여 연결될 수 있거나 또는 표적 항원 부위의 C-말단 단부에 연속하여 연결될 수 있거나, 또는 Th 에피토프는 표적 항원 부위의 N-말단 단부에 연속하여 연결될 수 있는 한편 개별의 Th 에피토프는 표적 항원 부위의 C-말단 단부에 연속하여 연결된다. 표적 항원 부위와 관련하여 Th 에피토프의 배열에 제한은 없다.

몇몇 실시형태에서, Th 에피토프는 표적 항원 부위에 직접 공유 결합된다. 다른 실시형태에서, Th 에피토프는 이하에 더욱 상세히 기재된 이종성 스페이서를 통해서 표적 항원 부위에 공유 결합된다.

합성 방법

본 개시내용의 펩타이드 면역원은 화학적 방법을 이용해서 합성될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 펩타이드 면역원은 고체상 펩타이드 합성을 이용해서 합성될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 α-NH₂ 또는 곁사슬 아미노산을 보호하기 위하여 t-Boc 또는 Fmoc를 이용하는 자동화 메리필드 고체상(automated Merrifield solid phase) 펩타이드 합성을 이용해서 합성된다.

조합 서열로서 제시된 이종성 Th 에피토프 펩타이드는 그 특정 펩타이드에 대한 상동체의 가변 잔기에 기초한 펩타이드 프레임워크 내의 특정 위치에 나타낸 아미노산 잔기들의 혼합물을 함유한다. 조합 펩타이드의 조립체는 합성 과정 동안 특정 위치에서, 하나의 특정 아미노산 대신에, 설계된 보호된 아미노산의 혼합물을 첨가함으로써 하나의 과정에서 합성될 수 있다. 이러한 조합적 이종성 Th 에피토프 펩타이드 조립체는 광범위한 유전적 배경을 가진 동물에 대해서 광범위한 Th 에피토프 범위를 허용할 수 있다. 이종성 Th 에피토프 펩타이드의 대표적인 조합 서열은 표 1에 나타낸 서열번호 5, 10, 13, 16, 24 및 27을 포함한다. 본 발명의 Th 에피토프 펩타이드는 유전적으로 다양한 집단으로부터의 동물 및 환자에 광범위한 반응성 및 면역원성을 제공한다.

흥미롭게도, Th 에피토프, B 세포 에피토프, 및/또는 Th 에피토프와 B 세포 에피토프를 함유하는 펩타이드 면역원 작제물의 합성 동안 도입될 수도 있는 불일치 및/또는 오류는 가장 흔히 치료된 동물에서 목적하는 면역 반응 방해 또는 예방하지 않는다. 사실상, 펩타이드 합성 동안 도입될 수도 있는 불일치/오류가 표적화된 펩타이드 합성과 함께 다수의 펩타이드 유사체를 생성한다. 이들 유사체는 아미노산 삽입, 결실, 치환 및 조기 종결을 포함할 수 있다. 위에서 기재된 바와 같이, 이러한 펩타이드 유사체는, 면역진단의 목적용의 고체상 항원으로서 또는 백신 접종 목적용의 면역원으로서 면역학적 응용에 사용될 경우 항원성 및 면역원성에 대한 기여자로서 펩타이드 제조에 적합하다.

Th 에피토프를 포함하는 펩타이드 면역원 작제물은 표적 항원 부위와 나란히 단일 고체상 펩타이드 합성에서 동시에 생산된다. Th 에피토프는 또한 Th 에피토프의 면역학적 유사체를 포함한다. 면역학적 Th 유사체는 표적 항원 부위에 대한 면역 반응을 증대 또는 자극하는데 충분한 면역-증대 유사체, 교차-반응성 유사체 및 이들 Th 에피토프 중 임의의 것의 세그먼트를 포함한다.

목적하는 펩타이드 면역원의 완전한 조립 후, 고체상 수지는 해당 수지로부터 펩타이드를 절단하고 아미노산 곁사슬 상의 작용기를 제거하도록 처리될 수 있다. 유리 펩타이드는 HPLC에 의해 정제될 수 있고 생화학적으로 특성규명될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 유리 펩타이드는 아미노산 분석을 이용해서 생화학적으로 특성규명된다. 몇몇 실시형태에서, 유리 펩타이드는 펩타이드 서열을 이용해서 특성규명된다. 몇몇 실시형태에서, 유리 펩타이드는 질량 분광분석법을 이용해서 특성규명된다.

본 발명의 펩타이드 면역원은 티오에터 결합의 형성을 통해서 할로아세틸화 및 시스테인화 펩타이드를 사용해서 합성될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 시스테인은 Th-함유 펩타이드의 C 말단에 부가될 수 있고, 시스테인 잔기의 티올기는 N^α 콜레스테릴-변형기 또는 라이신 잔기의 말레이미드-유도체화 α- 또는 ε-NH₂기와 같은 친전자성 기에 대한 공유결합을 형성하는데 사용될 수 있다. 얻어지는 합성 중간체는 표적 항원 부위 펩타이드의 N-말단에 부착될 수 있다.

더 긴 합성 펩타이드 접합체는 핵산 클로닝 수법을 이용해서 특성 규명될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 Th 에피토프는 재조합 DNA 및 RNA를 발현시킴으로써 합성될 수 있다. 본 발명의 Th/표적 항원 부위 펩타이드를 발현시키는 유전자를 작제하기 위하여, 아미노산 서열은 핵산 서열로 역번역될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 아미노산 서열은 유전자가 발현될 유기체에 대해서 최적화된 코돈을 이용해서 핵산 서열로 역번역된다. 몇몇 실시형태에서, 펩타이드를 암호화하는 유전자는 펩타이드를 암호화하는 중첩하는 올리고뉴클레오타이드 및 필요한 조절 요소를 합성함으로써 만들어질 수 있다. 합성 유전자는 목적하는 발현 벡터에 조립 및 삽입될 수 있다.

본 개시내용의 합성 핵산 서열은 본 발명의 Th 에피토프를 암호화하는 핵산 서열, Th 에피토프를 포함하는 펩타이드, 이의 면역학적 기능성 상동체, 및 펩타이드 또는 암호화된 Th 에피토프의 면역원성 특성을 변화시키지 않는 비-암호화 서열의 변화를 특징으로 하는 핵산 작제물을 포함할 수 있다. 합성 유전자는 적합한 클론 벡터에 삽입될 수 있고, 재조합체가 수득되어 특성 규명될 수 있다. 이어서, Th 에피토프 및 Th 에피토프를 포함하는 펩타이드는 선택된 발현 시스템 및 숙주에 적절한 조건하에서 발현될 수 있다. Th 에피토프 또는 펩타이드는 정제되고 특성규명될 수 있다.

약제학적 조성물

본 개시내용은 또한 본 개시내용의 펩타이드 면역원을 포함하는 약제학적 조성물을 기술한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 펩타이드 면역원의 투여를 위하여 약제학적으로 허용 가능한 전달 시스템으로서 사용될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 면역학적 유효량의 펩타이드 면역원 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

본 발명의 펩타이드 면역원은 면역원성 조성물로서 제형화될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 면역원성 조성물은 아쥬반트, 유화제, 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 백신 조성물에 통상 제공되는 기타 성분을 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 아쥬반트 또는 유화제는 명반, 불완전 프로인트 아쥬반트(IFA), 리포신(liposyn), 사포닌, 스쿠알렌, L121, 에멀시겐(emulsigen), 모노포스포릴 지질 A(MPL), 다이메틸다이옥타데실암모늄 브로마이드(DDA), QS21, 및 ISA 720, ISA 51, ISA 35, ISA 206, 및 기타 효율적인 아쥬반트 및 유화제를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 조성물은 즉시 방출용으로 제형화될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 조성물은 서방출용으로 제형화될 수 있다.

약제학적 조성물에 사용되는 아쥬반트는 오일, 알루미늄 염, 비로좀, 인산알루미늄(예컨대, ADJU-PHOS®), 수산화알루미늄(예컨대, ALHYDROGEL®), 리포신, 사포닌, 스쿠알렌, L121, Emulsigen®, 모노포스포릴 지질 A(MPL), QS21, ISA 35, ISA 206, ISA50V, ISA51, ISA 720뿐만 아니라, 다른 아쥬반트 및 유화제를 포함할 수 있다.

몇몇 실시형태에서, 약제학적 조성물은 Montanide™ ISA 51(유중수 에멀션의 제조를 위한 식물성 오일 및 만나이드 올레에이트로 구성된 오일 아쥬반트 조성물), TWEEN® 80(또한 폴리솔베이트(Polysorbate) 80 또는 폴리옥시에틸렌(20) 솔비탄 모노올레에이트로도 알려짐), CpG 올리고뉴클레오타이드, 및/또는 이들의 임의의 조합물을 함유한다. 다른 실시형태에서, 약제학적 조성물은 아쥬반트로서 EMULSIGEN 또는 EMULSIGEN D를 갖는 수중유중수(즉, w/o/w) 에멀션이다.

몇몇 실시형태에서, 조성물은 백산으로서 사용하기 위하여 제형화된다. 백신 조성물은 피하, 경구, 근육내, 복강내, 비경구, 또는 장관 투여를 비롯한 임의의 통상의 경로에 의해 투여될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 면역원은 단회 투여량으로 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 면역원은 다회 용량으로 투여된다.

약제학적 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사제로서 제조될 수 있다. 타우 펩타이드 면역원 작제물을 함유하는 액체 비히클은 또한 주사 직전에 제조될 수 있다. 약제학적 조성물은 임의의 적합한 적용 방식, 예를 들어 i.d., i.v., i.p., i.m., 비강내, 경구, 피하 등에 의해, 그리고 임의의 적합한 전달 디바이스로 투여될 수 있다. 소정 실시형태에서, 약제학적 조성물은 정맥내, 피하, 피내 또는 근육내 투여용으로 제형화된다. 경구 및 비강내 적용을 포함하여 다른 투여 방식에 적합한 약제학적 조성물이 또한 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물은 유효량의 하나 이상의 펩타이드 면역원 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 함유할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 적합한 투약 단위 형태의 조성물은 대상체의 체중 ㎏당 약 0.5㎍ 내지 약 1㎎의 펩타이드 면역원을 함유할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 적합한 투약 단위 형태의 조성물은 대상체의 체중 ㎏당 약 10㎍, 약 20㎍, 약 30㎍, 약 40㎍, 약 50㎍, 약 60㎍, 약 70㎍, 약 80㎍, 약 90㎍, 약 100㎍, 약 200㎍, 약 300㎍, 약 400㎍, 약 500㎍, 약 600㎍, 약 700㎍, 약 800㎍, 약 900㎍ 또는 약 1000㎍의 펩타이드 면역원을 함유할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 적합한 투약 단위 형태의 조성물은 대상체의 체중 ㎏당 약 100㎍, 약 150㎍, 약 200㎍, 약 250㎍, 약 300㎍, 약 350㎍, 약 400㎍, 약 450㎍ 또는 약 500㎍의 펩타이드 면역원을 함유할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 적합한 투약 단위 형태의 조성물은 대상체의 체중 ㎏당 약 0.5㎍ 내지 약 1㎎의 펩타이드 면역원을 함유할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 적합한 투약 단위 형태의 조성물은 대상체의 체중 ㎏당 약 10㎍, 약 20㎍, 약 30㎍, 약 40㎍, 약 50㎍, 약 60㎍, 약 70㎍, 약 80㎍, 약 90㎍, 약 100㎍, 약 200㎍, 약 300㎍, 약 400㎍, 약 500㎍, 약 600㎍, 약 700㎍, 약 800㎍, 약 900㎍ 또는 약 1000㎍의 펩타이드 면역원을 함유할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 적합한 투약 단위 형태의 조성물은 약 100㎍, 약 150㎍, 약 200㎍, 약 250㎍, 약 300㎍, 약 350㎍, 약 400㎍, 약 450㎍ 또는 약 500㎍의 펩타이드 면역원을 함유할 수 있다.

조성물은, 다회 투여량으로 전달될 경우, 투여량당 적절한 양으로 분할될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 투여량은 약 0.2㎎ 내지 약 2.5㎎이다. 몇몇 실시형태에서, 용량은 약 1㎎이다. 몇몇 실시형태에서, 투여량은 약 1㎎이고, 주사에 의해 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 투여량은 약 1㎎이고 근육내로 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 투여량은 반복 (부스터) 투여량이 후속될 수 있다. 투여량은 대상체의 연령, 체중 및 일반적 건강에 따라서 최적화될 수 있다.

펩타이드 면역원의 혼합물을 포함하는 백신은 보다 넓은 모집단에서 증대된 면역효능을 제공할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 펩타이드 면역원의 혼합물은 MVF Th 및 HBsAg Th로부터 유래된 Th 부위를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 펩타이드 면역원의 혼합물을 포함하는 백신은 표적 항원 부위에 대한 개선된 면역 반응을 제공할 수 있다.

Th/표적 항원 부위 접합체에 대한 면역 반응은 생분해성 미세입자에서 또는 그 위에서의 포착을 통한 전달에 의해 개선될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 펩타이드 면역원은 아쥬반트로 또는 이것 없이 캡슐화될 수 있고, 이러한 미세입자는 면역 자극을 보유할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 미세입자는 면역 반응을 강화시키기 위하여 펩타이드 면역원과 공동-투여될 수 있다.

면역자극성 복합체

본 개시내용은 또한 CpG 올리고뉴클레오타이드와의 면역자극성 복합체의 형태로 타우 펩타이드 면역원 작제물을 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 예시적인 CpG 올리고뉴클레오타이드는 표 5에 나타낸다. 이러한 면역자극성 복합체는 구체적으로 아쥬반트로서 그리고 펩타이드 면역원 안정화제로서 작용하도록 조정된다. 면역자극성 복합체는 미립자의 형태이며, 이는 면역계의 세포에 타우 펩타이드 면역원을 효율적으로 제시하여 면역 반응을 생성할 수 있다. 면역자극성 복합체는 비경구 투여를 위한 현탁액으로 제형화될 수 있다. 면역자극성 복합체는 또한 w/o 에멀션의 형태로, 비경구 투여 후 숙주의 면역계의 세포에 타우 펩타이드 면역원을 효율적으로 전달하기 위해 미네랄 염 또는 인시튜(in-situ) 겔화 중합체와 조합한 현탁액으로서 제형화될 수 있다.

안정화된 면역자극성 복합체는 정전기적 회합을 통해 타우 펩타이드 면역원 작제물을 음이온성 분자, 올리고뉴클레오타이드, 폴리뉴클레오타이드, 또는 이들의 조합과 복합체화함으로써 형성될 수 있다. 안정화된 면역자극성 복합체는 면역원 전달 시스템으로서 약제학적 조성물에 혼입될 수 있다.

소정 실시형태에서, 타우 펩타이드 면역원 작제물은 5.0 내지 8.0의 범위의 pH에서 양으로 하전된 양이온성 부분을 함유하도록 설계된다. 타우 펩타이드 면역원 작제물, 또는 작제물의 혼합물의 양이온성 부분에 대한 순 전하는 각각의 라이신(K), 아르기닌(R) 또는 히스티딘(H)에 대하여 +1 전하를, 각각의 아스파르트산(D) 또는 글루탐산(E)에 대하여 -1 전하를, 그리고 서열 내 다른 아미노산에 대하여 0의 전하를 할당함으로써 계산된다. 전하는 타우 펩타이드 면역원 작제물의 양이온성 부분 내에서 합산되어 순 평균 전하로 표현된다. 적합한 펩타이드 면역원은 +1의 순 평균 양전하를 갖는 양이온성 부분을 갖는다. 바람직하게는, 펩타이드 면역원은 +2보다 큰 범위의 순 양전하를 갖는다. 몇몇 실시형태에서, 타우 펩타이드 면역원 작제물의 양이온성 부분은 이종성 스페이서이다. 소정 실시형태에서, 타우 펩타이드 면역원 작제물의 양이온성 부분은 스페이서 서열이 (α, ε-N)Lys 또는 ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys(서열번호 53)일 때 +4의 전하를 갖는다.

본 명세서에 기재된 바와 같은 "음이온성 분자"는 5.0 내지 8.0 범위의 pH에서 음으로 하전된 임의의 분자를 지칭한다. 소정 실시형태에서, 음이온성 분자는 올리고머 또는 중합체이다. 올리고머 또는 중합체에 대한 순 음전하는 올리고머 내 각각의 포스포다이에스터 또는 포스포로티오에이트기에 대하여 -1을 할당함으로써 계산된다. 적합한 음이온성 올리고뉴클레오타이드는 8 내지 64개의 뉴클레오타이드 염기를 갖는 단일-가닥 DNA 분자이고, CpG 모티프의 반복부의 수는 1 내지 10의 범위이다. 바람직하게는, CpG 면역자극성 단일-가닥 DNA 분자는 18 내지 48개의 뉴클레오타이드 염기를 함유하며, CpG 모티프의 반복부의 수는 3 내지 8의 범위이다.

더욱 바람직하게는. 음이온성 올리고뉴클레오타이드는 화학식: 5' X¹CGX² 3'으로 표현되며, 여기서 C 및 G는 메틸화되지 않은 것이고; X1은 A(아데닌), G(구아닌) 및 T(티민)이고; X²는 C(사이토신) 또는 T(티민)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또는, 음이온성 올리고뉴클레오타이드는 화학식: 5' (X³)₂CG(X⁴)₂ 3'으로 표현되며, 여기서 C 및 G는 메틸화되지 않은 것이고; X³은 A, T 또는 G로 이루어진 군으로부터 선택되고; X⁴는 C 또는 T이다.

얻어진 면역자극성 복합체는 전형적으로 1 내지 50 미크론의 범위의 크기를 갖는 입자의 형태이며, 상호작용 종의 분자량 및 상대 전하 화학량론을 포함하는 다수의 인자의 함수이다. 미립화된 면역자극성 복합체는 생체 내 특이적 면역 반응의 상향조절 및 보조를 제공하는 이점을 갖는다. 추가적으로, 안정화된 면역자극성 복합체는 유중수 에멀션, 미네랄 염 현탁액 및 중합체 겔을 포함하는 다양한 공정에 의해 약제학적 조성물을 제조하는 데 적합하다.

응용

본 발명의 펩타이드는 의학적 및 수의학적 응용에 유용할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 감염성 질환으로부터의 보호 면역력을 제공하기 위한 백신으로서, 정상 생리학적 과정의 기능부전에 기인하는 장애를 치료하기 위한 면역요법, 및 정상 생리학적 과정을 개입 또는 조절하는 제제로서 사용될 수 있다.

본 개시내용의 인공 Th 에피토프는, 각종 미생물, 단백질 또는 펩타이드의 표적 B 세포 에피토프와 조합된 경우 면역 반응을 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 인공 Th 에피토프는 하나의 표적 항원 부위에 연결될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 인공 Th 에피토프는 두 개의 표적 항원 부위에 연결될 수 있다.

본 개시내용의 인공 Th 에피토프는 각종 질환 및 병태를 예방 및/또는 치료하기 위하여 표적 항원 부위에 연결될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 조성물은 신경퇴행성 질환, 감염성 질환, 동맥경화증, 전립선암의 예방 및/또는 치료, 웅취(boar taint)의 예방, 동물의 면역거세, 자궁내막증, 유방암 및 생식선 스테로이드 호르몬에 의해 영향받은 기타 부인과 암의 치료를 위하여, 그리고 수컷 및 암컷의 피임을 위하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 인공 Th 에피토프는 이하의 단백질의 항원 부위에 연결될 수 있다:

a. 농장 동물의 성장을 촉진시키기 위한 소마토스타틴.

b. 알러지 질환을 치료하기 위한 IgE.

c. 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염 및 면역 장애를 예방 및/또는 치료하기 위한 Th 세포의 CD4 수용체.

d. FMD를 예방하기 위한 구제역(FMD) 바이러스 캡시드 단백질.

e. HIV 감염을 예방 및 치료하기 위한 HIV 비리온 에피토프.

f. 말라리아를 예방 및 치료하기 위한 플라스모듐 팔시파룸의 포자소체 항원.

g. 동맥경화증을 예방 및 치료하기 위한 CETP.

h. 알츠하이머병에 대한 치료 및 백신접종을 위한 Aβ.

i. 파킨슨병에 대한 치료 및 백신접종을 위한 알파-시누클레인.

j. 알츠하이머병을 비롯한 타우병증에 대한 치료 및 백신접종을 위한 타우.

k. 아토피성 피부염을 치료하기 위한 IL-31.

이종성 인공 Th 에피토프의 사용은 신경퇴행성 질환에 연루된 단백질(예컨대, Aβ, 알파-시누클레인, 타우)을 표적화하는데 특히 중요한 것으로 판명되었다. 구체적으로, 표적화된 신경퇴행성 단백질의 내인성 Th 에피토프를 함유하는 펩타이드 면역원은 대상체에게 투여된 경우 뇌의 염증을 초래할 수 있다. 이와 대조적으로, 신경퇴행성 단백질의 항원 부위에 연결된 이종성 인공 Th 에피토프를 함유하는 펩타이드 면역원 작제물은 뇌 염증을 초래하지 않는다.

아밀로이드 β

Aβ 펩타이드는 알츠하이머병의 개시 및 진행을 위한 핵심인 것으로 여겨진다. Aβ 올리고머 및 Aβ 원섬유의 독성 형태는 알츠하이머병 및 치매의 병적 측면을 초래하는 시냅스 및 뉴론의 사멸을 담당하는 것으로 시사되어 있다. 알츠하이머병을 위한 성공적인 질환-변환 요법은 뇌에서의 Aβ의 침착에 영향을 미치는 생성물을 포함할 수 있다.

본 개시내용의 펩타이드 면역원은 Th 세포 에피토프 및 Aβ-표적화 펩타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Th 세포 에피토프는 Th1 또는 Th2이다. 몇몇 실시형태에서, 펩타이드 면역원은 Th1 및 Th2를 포함할 수 있다. Aβ-표적화 펩타이드, 또는 B 세포 에피토프는, Aβ_1-14, Aβ_1-16, Aβ_1-28, Aβ_17-42 또는 Aβ_1-42일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, Aβ_--표적화 펩타이드는 Aβ_1-14이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 Aβ_x-y는 전장 야생형 Aβ단백질의 아미노산 x에서부터 아미노산 y까지의 Aβ서열을 나타낸다.

본 개시내용의 펩타이드 면역원은 1개 초과의 Aβ-표적화 펩타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 펩타이드 면역원은 2개의 Aβ-표적화 펩타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 펩타이드 면역원은 1개의 Aβ_1-14 및 1개의 Aβ_1-42 펩타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 펩타이드 면역원은 2개의 Aβ_1-14-표적화 펩타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 펩타이드 면역원은 2개의 Aβ_1-14-표적화 펩타이드를 포함할 수 있는데, 이들 각각의 표적화 펩타이드는 키메라 펩타이드로서 상이한 Th 세포 에피토프에 연결된다.

본 개시내용은 또한 2개의 Aβ_1-14-표적화 펩타이드를 포함하는 Aβ_1-14 펩타이드 백신을 제공하는데, 각각의 표적화 펩타이드는 키메라 펩타이드로서 상이한 Th 세포 에피토프에 연결된다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 Aβ_1-14 펩타이드는 T-세포 염증 반응성을 최소화하기 위하여 Th1-편향된 전달 시스템으로 제형화될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키메라 Aβ_1-14 펩타이드는 T-세포 염증 반응성을 최소화하기 위하여 Th2-편향된 전달 시스템으로 제형화될 수 있다.

개론

본 명세서에서 사용된 섹션 제목은 단지 조직적 목적을 위한 것이지, 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 출원에서 인용된 모든 참조문헌 또는 참조문헌의 일부분은 명확하게 임의의 목적을 위해 본 명세서에 전문이 참조에 의해 편입된다.

달리 설명되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 단수 용어는 문맥이 달리 분명하게 나타내지 않는 한, 복수 대상을 포함한다. 유사하게, 용어 "또는"은 문맥이 달리 분명하게 나타내지 않는 한, "및"을 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, "A 또는 B를 포함하는"은 A, 또는 B, 또는 A 및 B를 포함하는 것을 의미한다. 폴리펩타이드에 대해 제공된 모든 아미노산 크기, 및 모든 분자량 또는 분자 질량 값은 대략적이며, 설명을 위해 제공된 것임이 추가로 이해되어야 한다. 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 개시된 방법의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 하기 기재되어 있다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 다른 참조문헌은 전문이 참조에 의해 편입된다. 상충되는 경우, 용어의 설명을 포함하여 본 명세서가 우선할 것이다. 추가적으로, 재료, 방법 및 실시예는 단지 예시적인 것이며 제한하려는 것으로 의도되지 않는다.

실시예 1

펩타이드 및 펩타이드 면역원 작제물의 제조

펩타이드 면역원 작제물을 비롯한 펩타이드는 자동화 고체상 합성을 이용해서 합성되고, 분취 HPLC에 의해 정제되고, 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화 비행시간(MALDI-TOF) 질량 분광분석, 아미노산 분석 및 역상 HPLC를 특징으로 한다.

Aβ 백신(UB-311)은 2가지 펩타이드 면역원을 포함하되, 각각은 2가지 병원체 단백질, 즉, B형 간염 표면 항원 및 홍역 바이러스 융합 단백질로부터 유래된 상이한 Th 세포 에피토프 펩타이드(UBITh® 에피토프)에 아미노산 스페이서를 통해서 합성적으로 연결된 N-말단 Aβ_1-14 펩타이드를 갖는다. 구체적으로, 홍역 바이러스 융합 단백질에 연결된 펩타이드 면역원은 Aβ_1-14-εK-KKK-MvF5 Th(서열번호 67)였고, B형 간염 표면 항원에 연결된 펩타이드 면역원은 Aβ_1-14-εK-HBsAg3 Th(서열번호 68)였다.

UB-311은 명반-함유 Th2-편향된 전달 시스템으로 제형화되었고 등몰비의 펩타이드 Aβ_1-14-εK-HBsAg3 및 Aβ_1-14-εK-KKK-MvF5 Th를 함유하였다. 2가지 Aβ 면역원을 다가음이온성 CpG 올리고데옥시뉴클레오타이드(ODN)와 혼합하여 미크론-크기 미립자의 안정적인 면역자극성 복합체를 형성하였다. 알루미늄 미네랄 염(ADJU-PHOS®)을 등장성용의 염화나트륨과 보존제로서의 0.25% 2-페녹시에탄올과 함께 최종 제형에 첨가하였다.

몇 가지 예시적인 표적 항원 부위(B 세포 에피토프)의 서열은 표 3에 나타낸다. Th 에피토프에 공유 결합된 표적 항원 부위로서 Aβ_1-14를 함유하는 몇 가지 예시적인 펩타이드 면역원 작제물의 서열은 표 4에 나타낸다.

실시예 2

Th 에피토프가 아니라 Aβ 펩타이드를 표적화하는 기니피그에서의 펩타이드 면역원 작제물의 배타적 면역원성

6마리의 기니피그를 등몰비로 함께 제형화된 펩타이드 면역원 작제물 Aβ_1-14-εK-KKK-MvF5(서열번호 67) 및 Aβ_1-14-εK-HBsAg3(서열번호 68)으로 제0주 및 제4주에 면역화시켰다. 제8주에, ELISA 검사에 의해 항-Aβ 펩타이드 및 항-Th 에피토프 항체 역가(log₁₀)를 결정하기 위하여 동물에서 채혈하고 혈청 샘플을 수집하였다. 모두 6마리의 기니피크의 항체 반응은, 표 6에 나타낸 바와 같이, Aβ_1-42 펩타이드를 특이적으로 표적화하였고 2개의 인공 Th 에피토프(MvF5 Th 및 HBsAg3 Th)는 그러하지 못하였다.

실시예 3

개코원숭이 및 마카크(MACAQUE) 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 배양액에서의 세포 면역 반응

개코원숭이로부터 그리고 시노몰구스 마카크로부터의 말초 혈액 단핵세포(PBMC)는 피콜-하이팩 구배 원심분리(Ficoll-hypaque gradient centrifugation)에 의해 단리시켰다. 펩타이드-유도 증식 및 사이토카인 생산을 위하여, 세포(2×10⁵/웰)를 단독으로 또는 첨가된 개별적인 펩타이드 도메인(Aβ_1-14, Aβ_1-42, UBITh®, 및 비-관련 펩타이드 포함)과 함께 배양하였다. 미토겐(PHA, PWM, Con A)은 양성 대조군(1% v/v의 배양액 중 10 ㎍/㎖)으로서 사용되었다. 제6일째에, 1μCi의 3H-티민(3H-TdR)을 3개의 복제 배양 웰의 각각에 첨가하였다. 18시간의 인큐베이션 후에, 세포를 수거하고, 3H-TdR 혼입을 결정하였다. 자극 지수(S.I.)는 항원 존재 시의 cpm을 항원 부재 시의 cpm으로 나눈 것을 나타내며; S.I. > 3.0이 유의한 것으로 간주되었다.

시노몰구스 마카크 PBMC 배양액으로부터의 사이토카인 분석(IL2, IL6, IL10, IL13, TNFα, IFNγ)은 배양 배지 분취액 단독에 대해 또는 펩타이드 도메인 또는 미토겐의 존재 하에 수행되었다. 원숭이-특이적 사이토카인 샌드위치 ELISA 키트(U-CyTech Biosciences, 네덜란드 위트레흐트 소재)는 키트 설명에 따라서 개별적인 사이토카인의 농도를 결정하는데 사용되었다.

PBMC는 15, 21 및 25.5주에 마카크로부터 채혈된 전혈로부터 단리되었다. 단리된 PBMC는 각종 Aβ 펩타이드(Aβ_1-14 및 Aβ_1-42)의 존재하에 배양되었다.

Aβ_1-14 펩타이드가 배양 배지에 첨가된 경우 림프구에 의한 증식 반응은 관찰되지 않았다. 그러나, Aβ_1-42 펩타이드가 PBMC 배양액에 첨가된 경우 양성 증식 반응이 확인되었다.

15, 21 및 25.5주에 수집된 PBMC 샘플은 또한 Aβ 펩타이드 또는 PHA 미토겐의 존재하에 사이토카인 분비에 대해서 시험되었다. 표 7에 나타낸 바와 같이, 3가지 사이토카인(IL2, IL6, TNFα)은 Aβ_1-14 펩타이드가 아니라 전장 Aβ_1-42 펩타이드에 대한 반응에서 검출 가능한 분비를 보였고; 사이토카인 분비의 상향 조절은, 위액 백신 샘플과 비교해서 UBITh® AD 백신-처리된 샘플에서 검출되지 않았다. Aβ 펩타이드의 존재하에 시험된 3가지 다른 사이토카인(IL-10, IL-13, IFNγ)은 모든 PBMC 배양액에서 검정 검출 한계 미만이었다.

마카크는 Aβ_17-42 펩타이드 도메인 없이, 외래 T 헬퍼 에피토프를 갖는 N-말단 Aβ_1-14 펩타이드 면역원만을 가진 UB-311 백신으로 면역화시켰으며, 이것은 Aβ_1-42 펩타이드의 존재하의 PBMC 배양액 중에서 주목된 양성 증식 결과가 UB-311 백신 반응에 관련되지 않았지만, 오히려 천연 Aβ에 대한 배경 반응이었음을 나타내었다.

이들 결과는 단지 Aβ_1-14 및 외래 T 헬퍼 에피토프를 갖는 UB-311 백신의 안전성을 뒷받침하며, 이는 정상 마카크에서 Aβ 펩타이드에 대하여 잠재적으로 염증성 항자기(anti-self) 세포-매개 면역 반응을 일으키지 않는 것을 나타낸다. 이와 대조적으로, AN-1792 백신의 임상 시험 연구에서 뇌염과 연관된 부작용은 그 백신의 원섬유성/응집된 Aβ_1-42 면역원 내에 T 세포 에피토프의 봉입에 부분적으로 기인되었다.

실시예 4

림프구 증식 분석 및 사이토카인 분석

알츠하이머병을 지닌 환자로부터의 말초 혈액 단핵세포(PBMC)는 피콜-하이팩 구배 원심분리에 의해 단리되었다. 펩타이드-유도 증식 및 사이토카인 생산을 위하여, 세포(2.5×10⁵/웰)를 단독으로 또는 Aβ_1-14(서열번호 56), Aβ_1-16(서열번호 57), Aβ_1-28(서열번호 59), Aβ_17-42(서열번호 58), Aβ_1-42(서열번호 60) 및 비-관련 38량체 펩타이드(p1412)를 포함하는 첨가된 개별적인 펩타이드 도메인(10 ㎍/㎖의 최종 농도에서)과 삼중으로 배양하였다. 배양액은 72시간 동안 5% CO₂로 37℃에서 인큐베이션하고, 이어서 100㎕의 상청액을 각 웰로부터 제거하고, 사이토카인 분석에 대해서 -70℃에서 냉동시켰다. 0.5μCi의 ³H-티민(³H-TdR, Amersham, 카탈로그 번호 TRK637)을 함유하는 10㎕의 배양 배지를 각 웰에 첨가하고, 18시간 동안 인큐베이션하고 나서, 액체 섬광 계수에 의해 방사성동위원소 혼입의 검출을 행하였다. 미토겐 파이토헤마글루티닌(phytohemagglutinin)(PHA)은 림프구 증식에 대해서 양성 대조군으로서 사용되었다. Aβ 펩타이드 또는 PHA 미토겐이 없이 단독으로 배양된 세포는 음성 및 양성 대조군으로서 사용되었다. 자극 지수(SI)는 Aβ 펩타이드를 가진 3중 실험 배양액의 분당 평균 계수치(count per min: cpm)를 3중 음성 대조군 배양액의 평균 cpm으로 나눈 값으로서 계산되었으며; SI > 3.0은 유의한 증식 반응인 것으로 간주되었다.

a. 증식 분석

말초 혈액 단핵 세포 샘플을 제0주(기준선) 및 제16주(제3회 투여 후 4주)에 수집된 전혈로부터 수집하고, 이어서 각종 Aβ 펩타이드의 부재 또는 존재하에 배양하였다. 표 8에 나타낸 바와 같이, Aβ_1-14, 다른 Aβ 펩타이드, 또는 p1412(비-관련 대조 펩타이드)가 배양 배지에 첨가된 경우 림프구에 의한 유의한 증식 반응이 관찰되지 않았다. 예상되는 바와 같이, PHA 미토겐이 배양 배지에 첨가된 경우 양성 증식 반응이 주목되었다. UB 311 면역화 전후의 PHA에 대한 유사한 반응이 관찰되었는데(p=0.87), 이는 연구 대상체의 면역 기능의 상당한 변화를 시사하지 않는다(표 8).

통계학적 분석. 제0주 내지 제16주의 림프구 증식의 차이는 대조표면 t-검정(paired t-test)에 의해 조사되었다. 통계학적 유의성 수준은 양측 검정(2-tailed test)에 의해 결정되었다(p <0.05). R 버전 2.14.1은 모든 통계학적 분석에 대해서 사용되었다.

b. 사이토카인 분석

PBMC 배양액으로부터의 사이토카인 분석(IL-2, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ)은 세포 단독으로 또는 Aβ 펩타이드 도메인 또는 PHA의 존재하에 배양 배지의 분취액에 대해 수행되었다. 인간-특이적 사이토카인 샌드위치 ELISA 키트(U-CyTech Biosciences, 네덜란드 위트레흐트 소재)는 제조사의 지시(Clin Diag Lab Immunol. 5(1):78-81 (1998))에 따라서 개별적인 사이토카인의 농도(pg/㎖)를 결정하는데 사용되었다.

제0주 및 제16주에 수집된 PBMC 샘플은, 3일 동안 배양된 후에, 세포 단독(음성 대조군)으로 또는 Aβ 펩타이드인 p1412(비-관련 펩타이드) 또는 PHA 미토겐(양성 대조군)의 존재하에 사이토카인 분비에 대해서 시험되었다. 키트의 정량화 가능한 범위는 5 내지 320 pg/㎖였다. 5 pg/㎖ 미만 또는 320 pg/㎖ 초과의 임의의 측정된 농도는 각각 정량 한계 미만(below quantification limit: BQL) 또는 정량 한계 초과(above quantification limit: AQL)로서 나타내었다. 그러나, 표준 고려사항에 대해서, BQL 또는 AQL은 각각 정량 가능한 하한(5 pg/㎖) 또는 상한(320 pg/㎖)으로 대체되었다. 제0주 및 제16주에 각 사이토카인의 평균 농도는 표 9에 나타낸다. 예상된 바와 같이, IL-2를 제외하고, 양성 대조군인 PHA의 존재하에 사이토카인 생산의 상당한 증가가 있었다. Aβ_1-14, 또는 기타 Aβ 펩타이드에 의한 자극에 대한 반응에서의 사이토카인의 생산은 기준선(제0일) 및 제16일에 관찰되었지만, 대부분의 값은 대응하는 음성 대조군(세포 단독)과 유사하게 나타났다.

면역화 후의 세포-매개 면역 반응의 변화를 평가하기 위하여, 기준선으로부터 제16주까지의 평균 사이토카인 농도의 변화는 음성 대조군의 것과 비교되어, 대응표본 윌곡슨 부호순위 검정(paired Wilcoxon signed-rank test)에 의해 조사되었다. 4가지 사이토카인(IFN-γ, IL-6, IL-10, TNF-α)은, 전장 Aβ_1-42 펩타이드로의 반응에서 분비의 현저한 증가를 나타내었으며; 이 관찰은 Aβ_1-42응집체의 입체형태 에피토프로 인한 것일 수 있다. 사이토카인 분비의 상향 조절은 Aβ_1-14 또는 다른 Aβ 펩타이드에서 검출되지 않았다.

c. 요약

UB-311 백신은 MvF5 Th 에피토프 및 HBsAg3 Th 에피토프에 각각 합성적으로 결합된 N-말단 Aβ_1-14 펩타이드를 각각 갖는 2가지 펩타이드 면역원을 함유한다. 시험관내 림프구 증식 사이토카인 분석은 세포 면역 반응에 대한 UB-311 백신의 면역화의 영향을 평가하는데 사용되었다. Aβ_1-14 펩타이드 또는 임의의 다른 Aβ 펩타이드가 표 8에 나타낸 바와 같이 배양 배지에 첨가된 경우 림프구에 의한 증식 반응은 관찰되지 않았다. UB-311 백신-면역화된 환자의 림프구에 의한 사이토카인 분비의 상향 조절은, 치료 전의 제0주 수준에 비해서, Aβ_1-42를 제외하고 Aβ_1-14 및 다른 Aβ 펩타이드에 의한 치료 시 검출되지 않았는데, 제16주의 UB-311 면역화 후에 4가지 사이토카인(IFN-γ, IL-6, IL-10, TNF-α)의 상당한 증가를 유발하였다(표 9). Th2형 T 세포 반응을 통한 사이토카인 방출의 증가는, Aβ_1-14 단독으로 검출된 상향 조절이 없으므로 UB-311 백신 반응과 더 무관한 가능성이 있다. Aβ_1-42에 대한 반응은 Aβ_1-42에 대해 식별된 천연 T 헬퍼 에피토프와 관련될 수도 있는 천연 Aβ에 대한 배경 반응인 것으로 의심된다. PHA에 대한 반응에서의 IL-2 생산의 부족이 관찰되었는데, 이는 정상 인간 PBMC에 의한 유사한 실험 조건하에 문헌[Clin Diagn Lab Immunol 1998; 5:78-81]에서 Katial RK 등에 의해 보고된 지견과 일치한다. 결론적으로, 이들 결과는, UB-311 백신이 제I상 임상시험에 참여한 경도 내지 증등도의 알츠하이머병을 가진 환자에서 잠재적으로 염증성 항-자기, 세포-매개 면역 반응을 일으키지 않았던 것을 나타내었으므로, UB-311 백신의 안전성을 더욱 입증하였다.

실시예 5

무차별적 인공 Th 반응성 세포는 음성 대조군과 비교해서 보통의 면역원성 염증 반응을 가진 정상 혈액 공여자 내 미경험 말초 혈액 단핵세포(PMBC)에서 검출될 수 있다

ELISpot 검정법이 강력한 미토겐 파이토헤마글루티닌(PHA) 및 음성 대조군과 비교해서 염증 반응을 유발하는 효능을 평가하기 위하여 정상 혈액 공여자 내 미경험 말초 혈액 단핵세포에서 무차별적 인공 Th 반응성 세포를 검출하는데 사용되었다.

ELISpot 검정법은 샌드위치 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)을 이용한다. T 세포 활성화의 검출을 위하여, IFN-γ 또는 관련된 사이토카인이 피분석물로서 검출되었다. 선택된 피분석물에 특이적인 단클론성 또는 다클론성 항체는 PVDF(폴리비닐리덴 다이플루오라이드)-배킹된(backed) 마이크로플레이트 상에 사전 코팅되었다. 적절하게 자극된 세포를 웰에 피펫팅하고, 마이크로플레이트를 특정 시간 기간 동안 가습된 37℃ CO₂ 인큐베이터에 배치하였다. 이 인큐베이션 기간 동안, 분비 중인 세포의 바로 근방에 있는 고정화된 항체는, 분비된 피분석물에 결합되었다. 임의의 세포 및 미결합 물질을 세척 제거후, 선택된 피분석물에 대해서 특이적인 바이오티닐화된 다클론성 항체를 웰에 첨가하였다. 임의의 비결합된 바이오티닐화된 항체를 제거하기 위한 세척 후에, 스트렙타비딘에 접합된 알칼리성-포스파타제를 첨가하였다. 비결합 효소를 후속하여 세척에 의해 제거하고, 기질 용액(BCIP/NBT)을 첨가하였다. 청색-흑색 석출물이 형성되었고, 사이토카인 국재화 부위에 스팟으로서 나타났는데, 각 개별적인 스팟은 개별적인 피분석물-분비 세포를 나타낸다. 스팟은 자동화 ELISpot 리더 시스템으로 또는 입체 현미경을 이용해서 수동으로 계수되었다.

수행된 시험관내 연구에서, 10㎍/㎖ 배양액에서의 PHA는 양성 대조군으로서 사용되었다. UBITh®1(서열번호 17) 및 UBITh®5(서열번호 6) 펩타이드는 보통의 정상 혈액 공여자에서 말초 혈액 단핵세포에 존재하는 반응성 세포의 수에 대해서 시험되었다. 서열번호 33 내지 52를 가진 무차별적 인공 Th 에피토프 펩타이드의 혼합물은 다른 양성 대조군으로서 제조되었다. 배지 단독은 표준 T 세포 자극 세포 배양 조건에서 음성 대조군으로서 사용되었다. 간단히 말해서, 미토겐(10㎍/㎖의 PHA)으로 자극된 100 ㎕/웰의 PBMC(2×10⁵개 세포), 또는 Th 항원(10㎍/㎖의 UBITh®1, UBITh®5 또는 멀티-Th의 혼합물)을 48시간 동안 CO₂ 인큐베이터에서 37℃에서 인큐베이팅하였다. 웰/플레이트로부터의 상청액을 수집하였다. 플레이트 상의 세포를 세척하고 표적 피분석물, IFN-γ의 검출을 위하여 처리하였다.

도 1에 도시된 바와 같이, 대표적인 공여자 1, 2 및 3은 무차별적 인공 UBITh®1 또는 UBITh®5 에피토프 펩타이드에 대해서 이들의 반응성 세포를 시험하였다. 압도적인 IFN-γ ELISPOT 수는 항상 미경험 공여자(PHA와 배양된 PBMC; 너무 많아 계수되지 못함)에 의해 검출되는 한편 대조 배지와 배양된 PBMC는 5 내지 50개의 배경 IFN-γ ELISPOT 수를 제공하였다. 적절한 ELISPOT 수가 20 내지 대략 120개의 UBITh®1 또는 UBITh®5와 배양된 미경험 공여자 PBMC에 대해서 검출되었다. 서열번호 33 내지 52를 가진 다수 Th 펩타이드의 혼합물이 또한 예상된 바와 같이 20 내지 약 300개에서 비롯된 ELISPOT 수와 비교를 위하여 미경험 공여자 PBMC와 함께 배양되었다. UBITh®1 또는 UBITh®5 펩타이드에 의해 촉발된 이러한 자극 반응은 음성 대조군에 비해서 약 3 내지 5배이다.

요약하면, 무차별적 인공 Th 반응성 세포는 시그니처 사이토카인을 분비함으로써 B 세포 항체 생산 및 대응하는 효과기 T 세포 반응을 돕도록 면역 반응을 시작할 준비가 된 미경험 공여자 PBMC에서 용이하게 검출될 수 있다. IFN-γ는 이들 Th 에피토프 펩타이드의 이 자극 특성을 예시하기 위하여 여기에서 일례로서 사용되었다. 그러나, 이러한 자극 염증 반응은 백신접종 과정 동안 불리한 염증성 병리생리학적 반응을 일으키지 않도록 적합한 효과기 세포 반응(항체 생산용의 B 세포, 표적 항원 세포를 사멸시키기 위한 세포독성 T 세포)을 시작하기에 충분하게 적당하다.

SEQUENCE LISTING <110> UBI IP Holdings <120> ARTIFICIAL PROMISCUOUS T HELPER CELL EPITOPES THAT FACILITATE TARGETED ANTIBODY PRODUCTION WITH LIMITED T CELL INFLAMMATORY RESPONSE <130> WO2019/213555 <140> PCT/US2019/030649 <141> 2019-05-03 <150> US 62/667,123 <151> 2018-05-04 <160> 71 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Measles virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(16) <223> MvF Th <400> 1 Asp Leu Ser Asp Leu Lys Gly Leu Leu Leu His Lys Leu Asp Gly Leu 1 5 10 15 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Measles virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(16) <223> MvF Th <400> 2 Glu Ile Ser Asp Glu Ile Arg Leu Ile Ile Ile Lys Arg Ile Glu Ile 1 5 10 15 <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213> Measles virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(16) <223> MvF Th <400> 3 Asp Val Ser Asp Val Lys Gly Val Val Val His Lys Val Asp Gly Val 1 5 10 15 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Measles virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(16) <223> MvF Th <400> 4 Asp Phe Ser Asp Phe Lys Gly Phe Phe Phe His Lys 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PEPTIDE <222> (1)..(19) <223> MvF4 Th <400> 14 Ile Ser Ile Ser Glu Ile Lys Gly Val Ile Val His Lys Ile Glu Thr 1 5 10 15 Ile Leu Phe <210> 15 <211> 19 <212> PRT <213> Measles virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(19) <223> MvF4 Th <400> 15 Ile Ser Ile Thr Glu Ile Arg Thr Val Ile Val Thr Arg Ile Glu Thr 1 5 10 15 Ile Leu Phe <210> 16 <211> 19 <212> PRT <213> Measles virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(19) <223> MvF4 Th (UBITh3) <220> <221> SITE <222> (4)..(4) <223> S or T <220> <221> SITE <222> (7)..(7) <223> K or R <220> <221> SITE <222> (8)..(8) <223> G or T <220> <221> SITE <222> (12)..(12) <223> H or T <220> <221> SITE <222> (13)..(13) <223> K or R <400> 16 Ile Ser Ile Xaa Glu Ile Xaa Xaa Val Ile Val Xaa Xaa Ile Glu Thr 1 5 10 15 Ile Leu Phe <210> 17 <211> 19 <212> PRT <213> Measles virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(19) <223> MvF5 Th (UBITh1) <400> 17 Ile Ser Ile Thr Glu Ile Lys Gly Val Ile Val His Arg Ile Glu Thr 1 5 10 15 Ile Leu Phe <210> 18 <211> 22 <212> PRT <213> Measles virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(22) <223> KKKMvF5 Th (UBITh1a) <400> 18 Lys Lys Lys Ile Ser Ile Thr Glu Ile Lys Gly Val Ile Val His Arg 1 5 10 15 Ile Glu Thr Ile Leu Phe 20 <210> 19 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> HBsAg1 Th <400> 19 Lys Lys Lys Leu Phe Leu Leu Thr Lys Leu Leu Thr Leu Pro Gln Ser 1 5 10 15 Leu Asp <210> 20 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> HBsAg1 Th <400> 20 Arg Arg Arg Ile Lys Ile Ile Thr Arg Ile Ile Thr Ile Pro Leu Ser 1 5 10 15 Ile Arg <210> 21 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> HBsAg1 Th <400> 21 Lys Lys Lys Val Arg Val Val Thr Lys Val Val Thr Val Pro Ile Ser 1 5 10 15 Val Asp <210> 22 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> HBsAg1 Th <400> 22 Lys Lys Lys Phe Phe Phe Phe Thr Lys Phe Phe Thr Phe Pro Val Ser 1 5 10 15 Phe Asp <210> 23 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> HBsAg1 Th <400> 23 Lys Lys Lys Leu Phe Leu Leu Thr Lys Leu Leu Thr Leu Pro Phe Ser 1 5 10 15 Leu Asp <210> 24 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> HBsAg 1 Th <220> <221> SITE <222> (1)..(1) <223> K or R <220> <221> SITE <222> (2)..(2) <223> K or R <220> <221> SITE <222> (3)..(3) <223> K or R <220> <221> SITE <222> (4)..(4) <223> L or I or V or F <220> <221> SITE <222> (5)..(5) <223> F or K or R <220> <221> SITE <222> (6)..(6) <223> L or I or V or F <220> <221> SITE <222> (7)..(7) <223> L or I or V or F <220> <221> SITE <222> (9)..(9) <223> K or R <220> <221> SITE <222> (10)..(10) <223> L or I or V or F <220> <221> SITE <222> (11)..(11) <223> L or I or V or F <220> <221> SITE <222> (13)..(13) <223> L or I or V or F <220> <221> SITE <222> (15)..(15) <223> Q or L or I or V or F <220> <221> SITE <222> (17)..(17) <223> L or I or V or F <220> <221> SITE <222> (18)..(18) <223> D or R <400> 24 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Pro Xaa Ser 1 5 10 15 Xaa Xaa <210> 25 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> HBsAg2 Th <400> 25 Lys Lys Lys Ile Ile Thr Ile Thr Arg Ile Ile Thr Ile Pro Gln Ser 1 5 10 15 Leu Asp <210> 26 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> HBsAg2 Th <400> 26 Lys Lys Lys Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Ile Thr Thr 1 5 10 15 Ile Asp <210> 27 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> HBsAg 2 Th <220> <221> SITE <222> (4)..(4) <223> I or F <220> <221> SITE <222> (5)..(5) <223> I or F <220> <221> SITE <222> (6)..(6) <223> T or L <220> <221> SITE <222> (7)..(7) <223> I or L <220> <221> SITE <222> (11)..(11) <223> I or L <220> <221> SITE <222> (14)..(14) <223> P or I <220> <221> SITE <222> (15)..(15) <223> Q or T <220> <221> SITE <222> (16)..(16) <223> S or T <220> <221> SITE <222> (17)..(17) <223> L or I <400> 27 Lys Lys Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Arg Ile Xaa Thr Ile Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Asp <210> 28 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> HBsAg 3 Th <400> 28 Lys Lys Lys Ile Ile Thr Ile Thr Arg Ile Ile Thr Ile Ile Thr Thr 1 5 10 15 Ile Asp <210> 29 <211> 15 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(15) <223> HBsAg4 Th (UBITh4) <400> 29 Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp 1 5 10 15 <210> 30 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> KKK-HBsAg Th <400> 30 Lys Lys Lys Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser 1 5 10 15 Leu Asp <210> 31 <211> 14 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> HBsAg Th <400> 31 Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu 1 5 10 <210> 32 <211> 24 <212> PRT <213> Bordetella pertussis <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(24) <223> Bordetella pertussis Th <400> 32 Gly Ala Tyr Ala Arg Cys Pro Asn Gly Thr Arg Ala Leu Thr Val Ala 1 5 10 15 Glu Leu Arg Gly Asn Ala Glu Leu 20 <210> 33 <211> 25 <212> PRT <213> Cholera Toxin <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(25) <223> Cholera Toxin Th <400> 33 Ala Leu Asn Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Cys Thr Leu Gly Ala 1 5 10 15 Thr Thr Gly Tyr Leu Lys Gly Asn Ser 20 25 <210> 34 <211> 15 <212> PRT <213> Clostridium tetani <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(15) <223> Clostridium tetani TT1 Th <400> 34 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu 1 5 10 15 <210> 35 <211> 17 <212> PRT <213> Clostridium tetani <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(17) <223> Clostridium tetani 1 Th <400> 35 Lys Lys Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu 1 5 10 15 Leu <210> 36 <211> 21 <212> PRT <213> Clostridium tetani <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(21) <223> Clostridium tetani TT2 Th <400> 36 Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 1 5 10 15 Ala Ser His Leu Glu 20 <210> 37 <211> 16 <212> PRT <213> Clostridium tetani <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(16) <223> Clostridium tetani TT3 Th <400> 37 Lys Phe Ile Ile Lys Arg Tyr Thr Pro Asn Asn Glu Ile Asp Ser Phe 1 5 10 15 <210> 38 <211> 16 <212> PRT <213> Clostridium tetani <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(16) <223> Clostridium tetani TT4 Th <400> 38 Val Ser Ile Asp Lys Phe Arg Ile Phe Cys Lys Ala Leu Asn Pro Lys 1 5 10 15 <210> 39 <211> 17 <212> PRT <213> Clostridium tetani <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(17) <223> Clostridium tetani 2 Th <400> 39 Trp Val Arg Asp Ile Ile Asp Asp Phe Thr Asn Glu Ser Ser Gln Lys 1 5 10 15 Thr <210> 40 <211> 23 <212> PRT <213> diphtheria bacilli <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(23) <223> Diphtheria Th <400> 40 Asp Ser Glu Thr Ala Asp Asn Leu Glu Lys Thr Val Ala Ala Leu Ser 1 5 10 15 Ile Leu Pro Gly His Gly Cys 20 <210> 41 <211> 19 <212> PRT <213> Epstein-Barr virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(19) <223> EBV BHRF1 Th <400> 41 Ala Gly Leu Thr Leu Ser Leu Leu Val Ile Cys Ser Tyr Leu Phe Ile 1 5 10 15 Ser Arg Gly <210> 42 <211> 20 <212> PRT <213> Epstein-Barr virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(20) <223> EBV EBNA-1 Th <400> 42 Pro Gly Pro Leu Arg Glu Ser Ile Val Cys Tyr Phe Met Val Phe Leu 1 5 10 15 Gln Thr His Ile 20 <210> 43 <211> 18 <212> PRT <213> Epstein-Barr virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(18) <223> EBV CP Th <400> 43 Val Pro Gly Leu Tyr Ser Pro Cys Arg Ala Phe Phe Asn Lys Glu Glu 1 5 10 15 Leu Leu <210> 44 <211> 15 <212> PRT <213> Epstein-Barr virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(15) <223> EBV GP340 Th <400> 44 Thr Gly His Gly Ala Arg Thr Ser Thr Glu Pro Thr Thr Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 45 <211> 13 <212> PRT <213> Epstein-Barr virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(13) <223> EBV BPLF1 Th <400> 45 Lys Glu Leu Lys Arg Gln Tyr Glu Lys Lys Leu Arg Gln 1 5 10 <210> 46 <211> 11 <212> PRT <213> Epstein-Barr virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(11) <223> EBV EBNA-2 Th <400> 46 Thr Val Phe Tyr Asn Ile Pro Pro Met Pro Leu 1 5 10 <210> 47 <211> 14 <212> PRT <213> Human cytomegalovirus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> HCMV IE1 Th <400> 47 Asp Lys Arg Glu Met Trp Met Ala Cys Ile Lys Glu Leu His 1 5 10 <210> 48 <211> 11 <212> PRT <213> Influenza virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(11) <223> Influenza Matrix protein 1 _1 Th <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(11) <223> Influenza Matrix protein 1_1 Th <400> 48 Phe Val Phe Thr Leu Thr Val Pro Ser Glu Arg 1 5 10 <210> 49 <211> 15 <212> PRT <213> Influenza virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(15) <223> Influenza Matrix protein 1_2 Th <400> 49 Ser Gly Pro Leu Lys Ala Glu Ile Ala Gln Arg Leu Glu Asp Val 1 5 10 15 <210> 50 <211> 9 <212> PRT <213> Influenza virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(9) <223> Influenza Non-structural protein 1 Th <400> 50 Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser 1 5 <210> 51 <211> 21 <212> PRT <213> Plasmodium falciparum <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(21) <223> Plasmodium falciparum Th <400> 51 Asp His Glu Lys Lys His Ala Lys Met Glu Lys Ala Ser Ser Val Phe 1 5 10 15 Asn Val Val Asn Ser 20 <210> 52 <211> 17 <212> PRT <213> Schistosoma mansoni <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(17) <223> Schistosoma mansoni Th <400> 52 Lys Trp Phe Lys Thr Asn Ala Pro Asn Gly Val Asp Glu Lys His Arg 1 5 10 15 His <210> 53 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic peptide <220> <221> SITE <222> (1)..(1) <223> epsilon-K <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(4) <223> epsilon-K-KKK as a spacer <400> 53 Lys Lys Lys Lys 1 <210> 54 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(4) <223> KKK-epsilon-K as a spacer <220> <221> SITE <222> (4)..(4) <223> epsilon-K <400> 54 Lys Lys Lys Lys 1 <210> 55 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(6) <223> Flexible Hinge Spacer <400> 55 Pro Pro Xaa Pro Xaa Pro 1 5 <210> 56 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> Abeta 1-14 <400> 56 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His 1 5 10 <210> 57 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(16) <223> Abeta 1-16 <400> 57 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys 1 5 10 15 <210> 58 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(26) <223> Abeta 17-42 <400> 58 Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile 1 5 10 15 Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala 20 25 <210> 59 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(28) <223> Abeta 1-28 <400> 59 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys 1 5 10 15 Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys 20 25 <210> 60 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(42) <223> Abeta 1-42 <400> 60 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys 1 5 10 15 Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile 20 25 30 Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala 35 40 <210> 61 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <223> Alpha-Syn 126-135 (Derived from GenBank: NP_000336) <400> 61 Glu Met Pro Ser Glu Glu Gly Tyr Gln Asp 1 5 10 <210> 62 <211> 39 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(39) <223> IgE-EMPD1-39 <400> 62 Gly Leu Ala Gly Gly Ser Ala Gln Ser Gln Arg Ala Pro Asp Arg Val 1 5 10 15 Leu Cys His Ser Gly Gln Gln Gln Gly Leu Pro Arg Ala Ala Gly Gly 20 25 30 Ser Val Pro His Pro Arg Cys 35 <210> 63 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(30) <223> Tau 379-408 (Derived from GenBank: AGF19246.1) <400> 63 Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr 1 5 10 15 Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 20 25 30 <210> 64 <211> 48 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(48) <223> IL-31 97-144 (Derived from Uniprot C7G0W1-1; GenBank: BAH97742.1) <400> 64 Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys 1 5 10 15 Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp 20 25 30 Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser 35 40 45 <210> 65 <211> 37 <212> PRT <213> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> Abeta 1-14 <220> <221> PEPTIDE <222> (15)..(18) <223> epsilon-K-KKK as a spacer <220> <221> SITE <222> (15)..(15) <223> epsilon-K <220> <221> PEPTIDE <222> (19)..(37) <223> MvF 4 Th <220> <221> SITE <222> (22)..(22) <223> S or T <220> <221> SITE <222> (25)..(25) <223> K or R <220> <221> SITE <222> (26)..(26) <223> G or T <220> <221> SITE <222> (30)..(30) <223> H or T <220> <221> SITE <222> (31)..(31) <223> K or R <400> 65 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Lys Lys 1 5 10 15 Lys Lys Ile Ser Ile Xaa Glu Ile Xaa Xaa Val Ile Val Xaa Xaa Ile 20 25 30 Glu Thr Ile Leu Phe 35 <210> 66 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> Abeta 1-14 <220> <221> SITE <222> (15)..(15) <223> epsilon-K <220> <221> PEPTIDE <222> (16)..(33) <223> HBsAg 2 Th <220> <221> SITE <222> (19)..(19) <223> I or F <220> <221> SITE <222> (20)..(20) <223> I or F <220> <221> SITE <222> (21)..(21) <223> T or L <220> <221> SITE <222> (22)..(22) <223> I or L <220> <221> SITE <222> (26)..(26) <223> I or L <220> <221> SITE <222> (29)..(29) <223> P or I <220> <221> SITE <222> (30)..(30) <223> Q or T <220> <221> SITE <222> (31)..(31) <223> S or T <220> <221> SITE <222> (32)..(32) <223> L or I <400> 66 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Lys Lys 1 5 10 15 Lys Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Arg Ile Xaa Thr Ile Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Asp <210> 67 <211> 37 <212> PRT <213> Synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> Abeta 1-14 <220> <221> SITE <222> (15)..(15) <223> epsilon K <220> <221> PEPTIDE <222> (15)..(18) <223> epsilon K-KKK as a spacer <220> <221> PEPTIDE <222> (19)..(37) <223> MvF5 Th (UBITh1) <400> 67 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Lys Lys 1 5 10 15 Lys Lys Ile Ser Ile Thr Glu Ile Lys Gly Val Ile Val His Arg Ile 20 25 30 Glu Thr Ile Leu Phe 35 <210> 68 <211> 33 <212> PRT <213> Synthetic peptide <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> Abeta 1-14 <220> <221> SITE <222> (15)..(15) <223> epsilon K <220> <221> PEPTIDE <222> (16)..(33) <223> HBsAg3 Th <400> 68 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Lys Lys 1 5 10 15 Lys Lys Ile Ile Thr Ile Thr Arg Ile Ile Thr Ile Ile Thr Thr Ile 20 25 30 Asp <210> 69 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG1 oligonucleotide ODN <400> 69 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgttttgtcg tt 32 <210> 70 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG2 oligonucleotide ODN <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> phosphorothioate group <400> 70 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 71 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG3 Oligonucleotide ODN <400> 71 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24

Claims

병태의 치료 방법으로서, 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 펩타이드를 투여하는 단계를 포함하되, 상기 펩타이드는 T 헬퍼 세포 에피토프 및 항원-제시 에피토프를 포함하고, 상기 펩타이드는 양성 대조군의 면역원성 염증 반응보다 적어도 약 3-배 낮은 면역원성 염증 반응을 생성하는, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 B 세포 에피토프인, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 펩타이드 합텐인, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 β-아밀로이드(Aβ)인, 병태의 치료 방법.
제4항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 Aβ_1-14, Aβ_1-16, Aβ_1-28, Aβ_17-42 및 Aβ_1-42로 이루어진 군으로부터 선택되는, 병태의 치료 방법.
제5항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 Aβ_1-14인, 병태의 치료 방법.
제5항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 Aβ_1-42인, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프는 Th1 에피토프인, 병태의 치료 방법.
(누락).
제1항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프는 Th2 에피토프인, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프와 상기 항원-제시 에피토프는 공유 결합되는, 병태의 치료 방법.
제11항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프는 상기 항원-제시 에피토프의 N-말단 또는 C-말단에 공유 결합되는, 병태의 치료 방법.
제11항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프와 상기 항원-제시 에피토프는 티오에스터 결합에 의해 공유 결합되는, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프는 스페이서를 통해서 상기 항원-제시 에피토프에 부착되는, 병태의 치료 방법.
제14항에 있어서, 상기 스페이서는 Gly-Gly인, 병태의 치료 방법.
제14항에 있어서, 상기 스페이서는 (ε-N)Lys인, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 펩타이드는 면역 자극제 서열을 더 포함하는, 병태의 치료 방법.
제17항에 있어서, 상기 면역 자극제 서열은 인바신(invasin) 단백질의 도메인인, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 병태는 알츠하이머병인, 병태의 치료 방법.
제19항에 있어서, 상기 병태는 초기 알츠하이머병인, 병태의 치료 방법.
제19항에 있어서, 상기 병태는 경도 알츠하이머병인, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 면역학적 염증 반응은 말초 혈액 단핵세포에서 측정되는, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 면역학적 염증 반응은 단리된 말초 혈액 단핵세포에서 측정되는, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 면역학적 염증 반응은 사이토카인 농도의 증가인, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 사이토카인 농도의 증가는 IL-2, IL-6, IL-10, INF-γ 또는 TNF-α의 농도의 증가인, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 투여는 정맥내로 행하는, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 투여는 근육내로 행하는, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 양성 대조군은 파이토헤마글루티닌 미토겐(phytohaemagglutinin mitogen)인, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 투여는 약 150㎍의 상기 펩타이드를 투여하는 것을 포함하는, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 투여는 약 750㎍의 상기 펩타이드를 투여하는 것을 포함하는, 병태의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 펩타이드는 하기 화학식을 갖는, 병태의 치료 방법:

식 중,
- A는 아미노산 또는 면역자극 서열이고;
- B는 적어도 하나의 아미노산, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO-, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO(εN)Lys-, -NHCH(X)CH₂S-석신이미딜(εN)Lys- 또는 -NHCH(X)CH₂S-(석신이미딜)-이고;
- Th는 상기 헬퍼 T 세포 에피토프, 이의 유사체 또는 세그먼트이고;
- 표적 항원 부위는 B 세포 에피토프 또는 이의 면역학적 반응 유사체이고;
- X는 아미노산 α-COOH, -CONH₂이고;
- n은 1 내지 약 10이고;
- m은 1 내지 약 4이고; 그리고
- o는 0 내지 약 10이다.
제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포 에피토프는 인공 T 세포 에피토프인, 병태의 치료 방법.
병태의 치료 방법으로서, 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 펩타이드를 투여하는 단계를 포함하되, 상기 펩타이드는 T 헬퍼 세포 에피토프 및 항원-제시 에피토프를 포함하고, 상기 펩타이드는 음성 대조군의 면역원성 염증 반응보다 적어도 약 3-배 미만 더 높은 면역원성 염증 반응을 생성하는, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 B 세포 에피토프인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 펩타이드 합텐인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 β-아밀로이드(Aβ)인, 병태의 치료 방법.
제36항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 Aβ_1-14, Aβ_1-16, Aβ_1-28, Aβ_17-42 및 Aβ_1-42로 이루어진 군으로부터 선택되는, 병태의 치료 방법.
제37항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 Aβ_1-14인, 병태의 치료 방법.
제37항에 있어서, 상기 항원-제시 에피토프는 Aβ_1-42인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프는 Th1 에피토프인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프는 Th2 에피토프인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프와 상기 항원-제시 에피토프는 공유 결합되는, 병태의 치료 방법.
제42항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프는 상기 항원-제시 에피토프의 N-말단 또는 C-말단에 공유 결합되는, 병태의 치료 방법.
제42항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프와 상기 항원-제시 에피토프는 티오에스터 결합에 의해 공유 결합되는, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 T 헬퍼 세포 에피토프는 스페이서를 통해서 상기 항원-제시 에피토프에 부착되는, 병태의 치료 방법.
제45항에 있어서, 상기 스페이서는 Gly-Gly인, 병태의 치료 방법.
제45항에 있어서, 상기 스페이서는 (ε-N)Lys인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 펩타이드는 면역 자극제 서열을 더 포함하는, 병태의 치료 방법.
제48항에 있어서, 상기 면역 자극제 서열은 인바신 단백질의 도메인인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 병태는 알츠하이머병인, 병태의 치료 방법.
제50항에 있어서, 상기 병태는 초기 알츠하이머병인, 병태의 치료 방법.
제50항에 있어서, 상기 병태는 경도 알츠하이머병인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 면역학적 염증 반응은 말초 혈액 단핵세포에서 측정되는, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 면역학적 염증 반응은 단리된 말초 혈액 단핵세포에서 측정되는, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 면역학적 염증 반응은 사이토카인 농도의 증가인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 사이토카인 농도의 증가는 IL-2, IL-6, IL-10, INF-γ 또는 TNF-α의 농도의 증가인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 투여는 정맥내로 행하는, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 투여는 근육내로 행하는, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 양성 대조군은 파이토헤마글루티닌 미토겐인, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 투여는 약 150㎍의 상기 펩타이드를 투여하는 것을 포함하는, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 투여는 약 750㎍의 펩타이드를 투여하는 것을 포함하는, 병태의 치료 방법.
제33항에 있어서, 상기 펩타이드는 하기 화학식을 갖는, 병태의 치료 방법:

식 중,
- A는 아미노산 또는 면역자극 서열이고;
- B는 적어도 하나의 아미노산, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO-, -NHCH(X)CH₂SCH₂CO(εN)Lys-, -NHCH(X)CH₂S-석신이미딜(εN)Lys- 또는 -NHCH(X)CH₂S-(석신이미딜)-이고;
- Th는 상기 헬퍼 T 세포 에피토프, 이의 유사체 또는 세그먼트이고;
- 표적 항원 부위는 B 세포 에피토프 또는 이의 면역학적 반응 유사체이고;
- X는 아미노산 α-COOH, -CONH₂이고;
- n은 1 내지 약 10이고;
- m은 1 내지 약 4이고; 그리고
- o는 0 내지 약 10이다.
제33항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포 에피토프는 인공 T 세포 에피토프인, 병태의 치료 방법.