KR100564811B1

KR100564811B1 - 리코칼콘 ｅ 및 이를 포함하는 항암 조성물

Info

Publication number: KR100564811B1
Application number: KR1020040093903A
Authority: KR
Inventors: 천승훈; 윤구; 정영도
Original assignee: 천승훈
Priority date: 2004-11-17
Filing date: 2004-11-17
Publication date: 2006-03-27

Abstract

본 발명은 알릴 레트로 칼콘 구조의 리코칼콘 E에 관한 것으로, 구체적으로는 감초로부터 추출한 성분으로서, 알릴 레트로 칼콘 구조를 갖는 리코칼콘 E 및 이를 유효성분으로 포함하는 항암 조성물에 관한 것이다.

감초, 알릴 레트로 칼콘, 리코칼콘 E, 항암 조성물

Description

리코칼콘 Ｅ 및 이를 포함하는 항암 조성물{Licochalcone E and anticancer composition comprising the same}

본 발명은 알릴 레트로 칼콘(retrochalcone) 구조의 리코칼콘(licochalcone) E에 관한 것으로, 구체적으로는 감초로부터 추출한 성분으로서, 알릴 레트로 칼콘 구조를 갖는 리코칼콘 E 및 이를 유효성분으로 포함하는 항암 조성물에 관한 것이다.

예로부터, 감초(Glycyrrhiza uralensis)는 콩과(Leguminosae)에 속하는 식물로서 약용 및 식용으로 사용되는 다년생 초본이며, 분포지역은 주로 중국 동북부, 시베리아·몽골 등지이다. 그 줄기에는 백색의 단모가 있으며 근경은 원주상으로서 주근은 길고 조대하며, 외피는 홍갈에서 암갈색이다. 특히 감초 추출물은 글리시리진(Glycyrrhizine), 글리시레틴산(Glycyrrhetic acid), 리코리시딘(licoricidin) 등을 주요 성분으로 하여 항염작용, 해독작용, 항궤양작용, 수전해질 호르몬 작용 등에 사용되고 있으며 글리시리진의 경우 식용인 감미료로 사용되어진다.

이처럼 감초는 다양한 용도의 전통약재와 단미제로 사용되어 왔으며 현재에는 위염, 십이지장염, 기관지염, 일반 염증 등에 효과가 있다는 것이 과학적으로 입증되고 있다(Fukai T., Nomura T., Progress in the chemistry of organic natural products, 1998, 73, 2~3. 73~75). 특히 중국의 신장감초나 서북감초의 경우 지금까지 감초의 주성분으로 알려진 사포닌(saponin)과 플라보노이드 (flavonoid) 이외에 특이적인 구조의 레트로 칼콘 구조가 추출되고 있다(Kajiyama K., Demizu S., Hiraga Y., Kinoshita K., Koyama K., Takahash K., Tamura Y., Okada K., Kinoshita T., Two prenylated retrochalcones from Glycyrrhiza inflata. Phytochemistry, 1992, 31, 3229~3232).

본 발명에서는 중국산 감초에서 항암활성이 있는 유효성분을 추적하는 중 위와 같은 레트로 칼콘 구조에 기존에 보고 되지 않은 알릴 그룹이 붙어 있는 새로운 물질을 규명하였다. 또한 동시에 추출된 유사한 알릴 레트로 칼콘 구조인 리코칼콘 A와 리코칼콘 C, 그리고 칼콘 구조의 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin)에 비하여 탁월한 항암활성을 보였다.

본 발명은 중국산 감초에서 기존의 리코칼콘 A, 리코칼콘 C, 이소리퀴리티게닌 등에 비해 탁월한 함암활성을 나타내는 레트로 칼콘 구조에 기존에 보고되지 않은 알릴기가 결합되어 있는 리코칼콘 E 성분을 추출하고, 리코칼콘 E 성분의 구조를 규명한 것이다.

따라서 본 발명의 목적은 새로운 알릴 레트로 칼콘 구조를 갖는 리코칼콘 E및 이를 유효성분으로 포함하는 항암 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 하기 화학식 1의 리코칼콘 E에 관한 것이다.

본 발명자들은 새로운 알릴 레트로 칼콘 구조를 갖고 종래의 리코칼콘 A, B, C 및 D 와는 상이한 구조를 갖는 신규의 리코칼콘을 추출단리하고 구조를 특정하였고, 이를 리코칼콘 E라 명명하였다.

또한, 본 발명은 상기 리코칼콘 E 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 항암 조성물을 제공한다.

본 발명의 리코칼콘 E는 감초를 약탕기를 이용하여 추출하고, 헥산으로 수추출액에서 지방을 제거한 후, 남은 수층을 메틸렌클로라이드 등으로 용매 추출하고, 이어서 크로마토그래피를 이용하여 얻는다.

본 발명의 항암용 조성물은 약제학적으로 통상 사용되는 담체, 희석제, 용해보조제, 안정화제, 산화방지제, 유화제, 계면활성제로 이루어지는 군으로부터 하나 이상의 조합에 의해 경구 또는 비경구용 제제 형태로 제제화하여 사용될 수 있다.

상기 경구용 제제로는 액제, 시럽제, 현탁제, 캡슐제 및 정제 등이 가능하 며, 비경구용 제제로는 주사제 등을 들 수 있다.

상기 리코칼콘 E의 양은 환자의 건강정도, 나이, 성별, 체중 등에 따라서 달라질 수 있으나, 통상 10~1000 mg 의 양으로 투여하며 일반적으로 1일 1회 내지 수회 분할하여 투여할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예를 통해 더욱 상세히 기술하고자 한다. 다만, 하기 실시예는 본 발명을 구체적으로 설명하는 것으로서, 하기 실시예에 의해 본 발명의 범위가 제한되지는 않는다.

실험 재료 및 방법

실시예 1: 리코칼콘 E의 추출

중국산 감초 400 g 을 전통적인 방법으로 추출하기 위해, 시중에 시판 중인 약탕기(대웅사, DWP-3800T)를 이용하여, 증류수 800~1000 mL 를 가하여 2회 추출한 후, 300 mL의 헥산으로 수추출액에서 지방을 제거하였다. 남은 수층을 각각 두 차례씩 순차적으로 300 mL 의 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올로 용매 추출하여 항암활성을 측정하였다. 가장 효과가 좋은 메틸렌클로라이드 층을 칼럼크로마토그래피를 이용하여, 헥산:에틸아세테이트:메탄올 = 2:1:0.1 ~ 1:1:0.1 ~ 0:0:1의 용매시스템으로 세 개의 소분획으로 분리하였다. 다시 효과가 좋은 1번 소분획을 헥산:에틸아세테이트:메탄올 = 2:1:0.1의 용매시스템으로 분취박층크로마토그래피(preparative thin layer chromatography: PREPTLC)를 통해 세 개의 소분획으로 분리하였다. 상기 분취박층크로마토그래피법으로 효과가 좋은 2번 소분획을 헥산:에틸아세테이트:메탄올 = 1:1:0.1과 클로로포름:메탄올 = 9:1으로 순차적으로 전개시켜 세 개의 소분획을 얻을 수 있었다. 이 중 효과가 좋은 2번 소분획을 클로로포름:에틸아세테이트:메탄올 = 9:1:0.1으로 전개시켜 세 개의 소분획으로 나누었다. 이 중 효과가 좋은 3번 소분획을 헥산:메틸아세테이트:메탄올 = 1:1:0.1로 전개하여 3개의 소분획중 1번과 2번 분획이 효과가 좋은 것을 확인하였다.

실시예 2: 리코칼콘 E의 추출

감초 50 kg을 실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여 메틸렌클로라이드 층을 확보한 후 중압액체크로마토그래피(medium pressure liquid chromatography: MPLC)를 이용하여 실시예 1에서 확인한 최종 유효분획의 박층크로마토그래피(thin layer chromatography: TLC) Rf 값과 동일한 분획을 얻었다. 역상크로마토그래피를 이용, 메탄올:물 = 4:1의 용매를 사용하여 두 분획으로 나눈 뒤, 각각을 헥산:에틸아세테이트:메탄올 = 1:1:0.1과 클로로포름:메탄올 = 10:1 용매로 분취박층크로마토그래법을 실시하여 1번 분획에서 리코칼콘 A와 리코칼콘 C, 그리고 이소리퀴리티게닌을, 2번 분획에서 리코칼콘 E를 얻었다.

리코칼콘 E: 비결정성 고체. [α]_D= -10°(c 0.2, 아세톤). FT-IR(neat): Vmax = 3347 (OH), 1637, 1602, 1585, 1560,1287,1260,1211, 1166 cm 1. EI-MS: m/z = 338(M+), 323, 307([M-OCH3]+), 121. 1H-NMR (500 MHz, 아세톤-d6, , J = Hz): 1.34(3H, d, J = 7Hz, H-4"), 1.67(3H, s, H-5"), 3.83(3H, s, OMe), 3.84(1H, m, H-1"), 4.89(2H, d, J = 16, H-3"), 6.64(1H, s, H-3), 6.93(2H, d, J =8.7Hz, H-3', 5'), 7.47(1H, s, H-6), 7.62(1H,d, J = 15.5Hz, H- ), 7.96(2H,d, J = 8.7Hz, H-2', 6'), 8.00(1H, d, J = 15.5Hz, H-β). 13C-NMR(125 MHz, 아세톤-d6): 187.5(C=O), 162.9(C-4'), 159.7(C-4), 158.8(C-2), 149.2(C-2"), 139.0(C- ), 130.6(C-2', C-6'), 130.0(C-1'), 128.3(C-6), 124.3(C-5), 118.1(C- α), 115.5(C-3', C-5'), 114.9(C-1), 109.1(C-3"), 99.1(C-3), 55.0(OMe), 37.7(C-1"), 21.5(C-5"), 18.8(C-4").

실험예 1: MTT 어세이에 의한 항암활성 측정

본 발명의 리코칼콘 E를 비롯하여 기존의 리코칼콘 A와 리코칼콘 C, 그리고 이소리퀴리티게닌 등 감초에서 추출된 성분들의 항암활성을 측정하는 실험을 하였다.

실험방법은 다음과 같다.

HT1080 세포(미국 ATCC (American type culture collection)에서 구입) 2×10⁴ 개를 96 웰에 도포한 후 8 내지 12 시간에 걸쳐 부착하였다. 시험시약을 가하기 전에 DMEM(Dulbeco's Modified Eagle's Medium: 미국 Gibco사)을 포함한 0.5% 소태아혈청(fetal bovine serum: FBS) 매질로 바꾸어 주었다. 세포독성을 판독하는 방 법으로서는 세포 증식을 측정하는 비색분석법(colorimetric assay)인 MTT 어세이를 이용하였다. 시험시약을 가한 24시간 경과 후 MTT(3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐 테트라졸리움 브로마이드)가 세포배양배지에 최종농도 0.5 mg/mL에 맞추어 가해졌다. 4 내지 6시간 배양한 후 매질은 버렸고, 남은 세포는 100 ㎕ 의 DMSO로 용해 시켰다. 540 nm 필터에서 흡광도 측정기(Molecular Devices사)로 흡광도를 측정하여 대조군에 대한 시험군의 세포 생존율을 백분율로 계산하였다. 결과를 표 1에 나타내었다.

감초 추출 성분의 세포 생존율(%)

	리코칼콘 A	리코칼콘 C	이소리퀴리티게닌	리코칼콘 E
100 ㎍/mL	2.5	3.2	3.0	3.2
50 ㎍/mL	2.3	4.8	8.5	2.7
25 ㎍/mL	19.1	49	49.6	2.6
10 ㎍/mL	100	87.5	78.7	75.7

상기 결과로부터 25 ㎍/mL에서 리코칼콘 E는 기존에 항암활성 물질로 알려진 리코칼콘 A (일본국 특허공개 제(평)6-122625호 공보) 등에 비해 낮은 세포 생존율을 보이는 것으로 보아, 본 발명의 리코칼콘 E의 항암활성이 탁월하다는 것을 확인하였다.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 의해 제공되는 새로운 알릴 레트로 칼콘 구조의 리코칼콘 E는 항암 효과가 뛰어남을 알 수 있다. 암세포 증식을 방지하는 항암 활성을 나타내므로 암질환에 대한 예방 및 치료에 효과적인 약학 조성물 을 제공한다.

Claims

하기 화학식 1의 리코칼콘 E.

[화학식 1]
제1항의 리코칼콘 E 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 항암 조성물.