KR100563455B1

KR100563455B1 - 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물,이의 제조방법 및 이를 함유하는 약학적 조성물

Info

Publication number: KR100563455B1
Application number: KR1020040041309A
Authority: KR
Inventors: 윤상민; 김은숙; 김희석; 권보성; 김철경; 김한경; 서귀현; 이관순
Original assignee: 한미약품 주식회사
Priority date: 2004-04-09
Filing date: 2004-06-07
Publication date: 2006-03-23
Also published as: ZA200609248B; KR20050099445A; ATE550339T1

Abstract

본 발명은 광학적으로 순수하고 열에 안정하며 비흡습성인 클로피도그렐(clopidogrel)의 신규 결정성 염에 관한 것으로, 구체적으로 하기 화학식 1의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염(clopidogrel naphthalenesulfonate) 또는 이의 수화물, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 혈소판과 관련된 혈관질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

상기 식에서, X는 나프탈렌모노술폰산(이때, n=1) 또는 나프탈렌다이술폰산(이때, n=2) 잔기이다.

Description

결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 약학적 조성물 {CRYSTALLINE CLOPIDOGREL NAPHTHALENESULFONATE OR HYDRATE THEREOF, METHOD FOR PREPARATING SAME AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING SAME}

도 1은 본 발명에 따른 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염의 분말 X-선 회절분광도(Powder X-ray Diffraction Spectrum)를 나타낸 것이고,

도 2는 본 발명에 따른 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염의 시차주사열량도(Differential Scanning Calorimeter)를 나타낸 것이고,

도 3은 본 발명에 따른 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물의 분말 X-선 회절분광도를 나타낸 것이고,

도 4는 본 발명에 따른 클로피도그렐 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물의 시차주사열량도를 나타낸 것이고,

도 5은 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염들의 시간에 따른 수분함량(％)의 변화를 클로피도그렐 황산수소염과 비교한 것이고,

도 6은 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염들의 시간에 따른 클로피도그렐의 함량(％)의 변화를 클로피도그렐 황산수소염과 비교한 것이고,

도 7은 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염들의 시간에 따른 가수분해산물의 생성량(％)의 변화를 클로피도그렐 황산수소염과 비교한 것이고,

도 8은 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염들의 시간에 따른 클로피도그렐의 좌선성 이성체의 생성량(％)의 변화를 클로피도그렐 황산수소염과 비교한 것이다.

본 발명은 광학적으로 순수하고 열에 안정하며 비흡습성인 결정성의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 혈소판 관련 혈관질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

화학명이 메틸(＋)-(S)-α-(o-클로로페닐)-6,7-디히드로티에노[3,2-a]피리딘-5(4H)-아세테이트인 하기 화학식 2의 클로피도그렐은 뇌졸중, 뇌동맥경화증, 심근경색, 협심증, 부정맥, 말초동맥 폐쇄증 및 버거씨병(Buerger's Disease)과 같이 혈소판 관련 각종 혈관질환의 치료 및 예방에 유용한 치료제로 알려져 있다(유럽 특허 제281,459 B1호 및 미국 특허 제4,847,265호).

그러나, 자유염기 상태의 클로피도그렐은 정제하기가 어려운 오일성 물질로 충분히 안정하지 않기 때문에 약학적으로 요구되는 순도를 유지하기가 어려울 뿐만 아니라, 광학활성물질이기 때문에 충분한 광학적 순도를 유지하여야 한다. 따라서, 클로피도그렐을 이용하여 상기의 질환들을 효과적으로 치료 또는 예방하기 위한 약학적 조성물을 제조하기 위해서는 클로피도그렐을 정제가 용이하면서 안정한 결정성 물질로 전환시켜야 하며, 이를 위해 흔히 사용되는 방법이 약학적으로 허용되는 무독성의 무기산 또는 유기산과의 산부가염을 형성하는 것이다. 일례로서, 현재 플라빅스^R(PLAVIX^R, 사노피-신떼라보사)라는 상품명으로 시판중인 정제(tablet) 조성물에 사용되는 산부가염은 클로피도그렐 황산수소염(clopidogrel hydrogensulfate)이다(유럽 특허 제281,459 B1호, 미국 특허 제4,847,265호 및 미국 특허 제6,429,210호 참조).

약학적 조성물의 활성성분으로 클로피도그렐 산부가염을 사용할 때 이들이 임상에서 충분한 효능을 발휘하기 위해서는, 사용되는 활성성분에 대해 통상적으로 요구되는 약학적 조건 중에서도 다음의 몇 가지 사항이 특별히 고려되어야 한다. 첫째는 흡습성이 없어야 하고, 둘째는 열에 대해서 충분히 안정해야 하며, 셋째는 매우 높은 광학순도로 제조되어야 한다는 것이다. 그 이유는 클로피도그렐의 에스터기가 수분에 의해 가수분해되어 효능이 전혀 없는 하기 화학식 3의 분해산물이 생성될 수 있고, 우선성 이성체인 클로피도그렐이 수분 및 열에 의해서 효능이 매우 낮은 하기 화학식 4의 좌선성 이성체로 전환될 수도 있기 때문이다. 뿐만 아니라, 활성성분의 광학순도는 치료효능에 매우 중요한 역할을 하므로 산부가염의 제조단계에서 광학순도가 향상될 수 있는 염을 선택하여 추가의 광학적 정제과정을 수행하지 않고도 약학적으로 요구되는 높은 광학순도를 확보하는 것은 약학적으로나 공업적으로 매우 중요한 과제이다.

유럽 특허 제281,459 B1호 및 미국 특허 제4,847,265호는 다양한 무기산 및 유기산을 이용하여 제조한 다수의 클로피도그렐 산부가염을 개시하고 있는데, 이들 중 대다수의 염은 무정형으로 침전되거나, 흡습성이 매우 크거나, 융점이 매우 낮아 이들을 약학적 조성물에 사용하기에는 부적합한 것으로 기재하고 있으며, 결정 성이면서 비교적 비흡습성인 염으로 염산염, 브롬산염 및 황산수소염과 같은 무기산염과 타우로콜린산염과 같은 유기산염 등을 약학적으로 사용가능한 염의 예로 들고 있다. 그러나, 타우로콜린산은 그 자체가 담즙분비의 약리활성을 갖고 있기 때문에 클로피도그렐의 약학적 산부가염으로 부적당하며, 또한 클로피도그렐의 염산염 및 브롬산염은 온도 60℃, 상대습도 75％의 조건에서 흡습되어 하루 만에 변색되면서 융해되거나, 검(gum) 형태로 굳어져버리는 것으로 나타나 약학적 조성물에 사용하기에 충분할 만큼 비흡습성이거나 안정하지 않다는 것이 본 발명자들에 의해 확인되었다.

또한, 클로피도그렐 황산수소염 역시 안정성과 비흡습성이 충분하지 않은 것으로 알려져 있다(H. Agrawal 등, Talanta, 61: 581-589, 2003 참조). 최근에 연구된 바에 따르면 클로피도그렐 황산수소염을 적절한 부형제와 함께 제형화한 플라빅스^R(PLAVIX^R) 조차도 통상의 가속시험조건(40℃, 75％ 상대습도, 3개월)에서 시험초기에 비해 가수분해산물은 8배 정도, 좌선성 이성체는 1.5배 정도, 총 불순물은 3배 정도 증가하는 것으로 보고되어 충분히 안정하지 않은 염으로 판명되었다(Y. Gomez 등, J. Pharm. Biomed. Anal. 34: 341-348, 2004 참조). 더욱이, 클로피도그렐 황산수소염은 물리화학적 성질이 서로 다른 두개의 결정다형(polymorphism)이 존재하기 때문에 제조 회분(batch)에 따라서 두개의 결정형이 서로 다른 비율로 혼합되어 생성될 수 있다. 이는 약학적 조성물에 사용하는 활성성분은 균일성을 유지해야 한다는 점에서 유리하지 못한 것이다.

따라서, 흡습성이 없으면서 수분과 열에 대해 매우 안정하고, 높은 광학순도를 유지시킴으로써 효능이 증강될 수 있는 클로피도그렐의 산부가염의 개발이 요구되어 왔다.

이에 본 발명자들은 종래에 개시된 클로피도그렐 산부가염의 문제점을 해결하고자 예의 연구 노력한 결과, 클로피도그렐의 결정성 나프탈렌술폰산염이 광학적으로 순수하고 열에 안정하며 비흡습성인 것을 발견하였고, 이를 함유하는 약학적 조성물로 혈소판 질환의 예방 또는 치료하는 데 종래의 산부가염보다 더 효과적으로 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 광학적으로 순수하고, 열에 안정하며, 비흡습성인 클로피도그렐의 결정성 신규 염 또는 이의 수화물, 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 상기 클로피도그렐의 결정성 염 또는 이의 수화물을 유효성분으로 하는 혈소판 관련 혈관질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적에 따라, 본 발명은 화학식 1의 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물을 제공한다.

<화학식 1>

또한, 본 발명은 하기 화학식 2의 클로피도그렐 자유 염기를 유기용매 중에서 하기 화학식 5의 나프탈렌술폰산 또는 이의 수화물과 반응시켜 상기 화학식 1의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물을 제조하는 방법을 제공한다.

<화학식 2>

(H^＋)_nX^n-

상기 식에서, X는 나프탈렌모노술폰산(이때, n=1) 또는 나프탈렌다이술폰산( 이때, n=2) 잔기이다.

또한, 본 발명은 화학식 1의 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물을 유효성분으로 함유하는 혈소판 관련 혈관질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 화학식 1의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 광학적으로 순수하고, 열에 안정하며, 비흡습성으로 결정성인 클로피도그렐의 신규한 염이다.

본 발명에 따른 화학식 1의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물에 있어서, 나프탈렌 술폰산기(X)는 2-나프탈렌술폰산, 3-나프탈렌술폰산, 1,2-나프탈렌다이술폰산, 1,3-나프탈렌다이술폰산, 1,4-나프탈렌다이술폰산, 1,5-나프탈렌다이술폰산, 1,6-나프탈렌다이술폰산, 1,7-나프탈렌다이술폰산, 1,8-나프탈렌다이술폰산, 2,3-나프탈렌다이술폰산, 2,6-나프탈렌다이술폰산 또는 2,7-나프탈렌다이술폰산으로부터 유도될 수 있다. 이중에서 바람직한 것으로는 하기 화학식 1a의 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염(국제공용명명법(INN)에 따르면 나프실레이트(napsilate)라고도 함) 및 하기 화학식 1b의 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염(INN에 의하면 나파다이실레이트(napadisilate)라고도 함)을 들 수 있다.

본 발명에 따른 화학식 1의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 무수물 또는 수화물로서 각각의 독특한 결정구조를 가질 수 있다. 이때 수화물이란 일정한 양의 물 분자가 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염이 결정을 형성할 때 결정수로서 참여한 경우를 의미한다.

예를 들어, 화학식 1a의 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염은 무수물로서 결정화되며, 분말 X-선 회절분석도에서 6.7, 8.2, 8.5, 12.4, 13.0, 13.5, 16.8, 17.2, 18.9, 19.6, 20.2, 21.2, 22.3, 22.9, 23.2, 23.6, 24.7, 25.0, 25.3, 25.8, 27.0, 27.5, 28.0, 28.6, 32.1, 32.5, 34.7의 2쎄타(2theta, 2θ, I/I_o≥10％)의 회절각을 특징적으로 나타내는 결정구조를 갖는다(도 1 참조). 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염은 시차주사열량도(10℃/분)에서 시작점이 약 146.7℃이고, 최저점이 약 150.9℃인 1개의 용융점 흡열피크(약 55.3 J/g)를 나타내는데(도 2 참조), 실제로 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염의 융점은 150 내지 151℃로 측정된다.

한편, 화학식 1b의 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염은 일수화물로서 결정화되며, 분말 X-선 회절분석도에서 7.6, 9.7, 10.7, 11.0, 12.1, 13.6, 14.2, 15.3, 16.6, 17.0, 18.1, 18.5, 19.8, 21.5, 22.2, 23.0, 23.5, 24.3, 24.8, 25.7, 26.4, 26.9, 27.3, 28.4, 29.0의 2쎄타(2theta, 2θ, I/I_o≥10％)의 회절각을 특징적으로 나타내는 결정구조를 갖는다(도 3 참조). 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물은 시차주사열량도(5℃/분)에서 시작점이 약 219.3℃이고, 최저점이 약 226.4℃인 1개의 용융점 흡열피크(약 158.3 J/g)를 나타내는데(도 4 참조), 실제로 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물의 융점은 223 내지 225℃로 측정된다.

상기와 같은 특징을 갖는 화학식 1의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 클로피도그렐 자유염기를 유기용매 중에서 나프탈렌모노술폰산, 나프탈렌다이술폰산 또는 이들의 수화물과 반응시켜 제조할 수 있다.

구체적으로, 화학식 1의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 화학식 2의 클로피도그렐 자유염기를 염의 생성에 역효과를 주지 않는 유기용매 중에서 화학식 5의 나프탈렌술폰산 또는 이의 수화물과 반응시켜 결정을 생성시키고, 생성된 결정을 여과하고 건조하여 제조할 수 있다.

본 발명의 제조방법에 사용될 수 있는 유기용매로는 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, n-프로필아세테이트, 이소프로필아세테이트, 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 아세토니트릴, 메탄올, 테트라히드로퓨란, 1,4-디옥산 또는 이들의 혼합물 등이 있으며, 이들 중 에틸아세테이트, 아세톤, 메탄올이 바람직하다. 유기용매는 부피비로 15％까지 물을 함유하는 것이 바람직할 수도 있다. 유기용매의 양은 클로피도그렐 자유염기 1 g 중량에 대하여 1 내지 20 ㎖ 부피, 바람직하게는 3 내지 10 ㎖ 부피의 비로 사용할 수 있다. 나프탈렌술폰산 또는 이의 수화물은 클로피도그렐 자유염기 1 몰 당량에 대하여 1.0 내지 1.2 몰 당량의 비로 사용할 수 있다.

반응은 -10℃ 내지 용매의 비등점 범위 내에서 수행되는데, 바람직하게는 나프탈렌술폰산 또는 이의 수화물을 첨가하고 15 내지 45℃에서 1 내지 24시간 동안 반응시킨 다음, 결정이 생성되면 냉각하여 -10 내지 10℃에서 다시 1 내지 24시간 동안 교반하는 것이 바람직하다. 생성된 결정은 감압하에 여과할 수 있고, 사용한 용매로 충분히 세척한다. 여과된 결정은 40 내지 70℃의 온도에서 대기압 또는 감압하에서 공기 및 질소와 같은 불활성 기체를 이용하여 건조시킨다.

출발물질인 화학식 2의 클로피도그렐 자유염기는 공지된 방법에 따라 제조할 수 있고(국제특허공개 WO 02/59128), 나프탈렌술폰산은 거의 무독성(예를 들어, 쥐에 경구투여시 반수치사량(LD₅₀)이 2-나프탈렌술폰산은 유리산으로서 4,440 ㎎/㎏, 나트륨염으로서 13,900 ㎎/㎏이고, 1,5-나프탈렌다이술폰산은 유리산으로서 3,000 ㎎/㎏으로 알려져 있음; ISAAA, 39(1), 101, 1974 참조)으로서 약물의 산부가염 제조에 일반적으로 사용되어 온 물질(S. M. Berge 등, J. Pharm. Sci. 66: 1, 1977 참조)로 상업적으로 입수가 용이하다.

상기와 같이 제조된, 본 발명의 화학식 1의 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 광학적으로 매우 순수하고, 수분과 열에 안정하며, 비흡습성이기 때문에 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 뇌졸중, 뇌동맥경화증, 심근경색, 협심증, 부정맥, 말초동맥 폐쇄증, 버거씨병 등과 같이 혈소판 관련 각종 혈관질환을 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물에 있어서, 바람직한 투여 형태는 경구투여이며, 이러한 투여수단으로는 용액, 현탁액, 정제, 알약, 캡슐, 산제를 예로 들 수 있다.

이러한 경구투여 조성물은 본 발명의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염을 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제 등과 혼합한 다음 제조할 수 있으며, 이때 사용되는 적합한 담체, 희석제 또는 부형제의 실례로는 전분, 당, 및 마니톨과 같은 부형제; 칼슘 포스페이트 및 규산 유도체와 같은 충전제 및 증량제; 카르복시메틸셀룰로오스 또는 히드록시프로필셀룰로오스 등의 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 알긴산염, 및 폴리비닐 피롤리돈과 같은 결합제; 활석, 스테아린산 칼슘 또는 마그네슘, 수소화 피마자유, 및 고상 폴리에틸렌 글리콜과 같은 윤활제; 포비돈, 나트륨 크로스카멜로스, 및 크로스포비돈과 같은 붕해제; 폴리소르베이트, 세틸(cetyl) 알코올, 및 글리세롤 모노스테아레이트 등과 같은 계면활성제 등을 들 수 있다. 또한, 상기 담체, 희석제 또는 부형제와 같은 첨가제 없이 또는 첨가제와 함께 특정량의 유효성분을 함유하는 다양한 약학적 조성물은 공지된 통상적인 방법에 따라 제조할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 19^th Edition, 1995 참조).

본 발명의 약학적 조성물은 유효성분으로 화학식 1의 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염을 조성물의 총중량을 기준으로 0.1 내지 95 중량％, 바람직하게는 1 내지 70 중량％의 양으로 함유할 수 있다.

유효성분으로서 화학식 1의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 사람을 포함하는 포유동물에 대해 하루에 1 내지 1,000 ㎎/㎏ 체중, 바람직하게는 25 내지 250 ㎎/㎏ 체중의 양으로 1일 1회 이상, 한번에 또는 분할하여 경구를 통해 투여할 수 있다.

이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 좀더 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.

하기의 비교예 및 실시예에서 클로피도그렐 산부가염의 함량, 불순물의 생성량 및 광학순도의 분석에 사용된 고성능 액체크로마토그래피(HPLC)의 분석조건은 각각 다음과 같고, 하기에 기재되는 단위 ％ee는 거울상 이성체 초과량(ee, enantiomeric excess)을 의미한다.

조건 A : 클로피도그렐 산부가염의 함량 측정용

컬럼: 크로마실(Kromasil) C18, 5 ㎛(250 ㎜ × 4.6 ㎜)

검출파장: 220 ㎚

유속: 1.5 ㎖/분

용리액: Na₂HPO₄-NaH₂PO₄ 완충용액:THF:CH₃CN = 5:2:3(v/v)

조건 B : 클로피도그렐 산부가염의 불순물(가수분해산물)의 생성량 측정용

컬럼: 캅셀팩(Capcellpak) C18 MG, 5 ㎛(250 ㎜ × 4.6 ㎜)

검출파장: 210 ㎚

유속: 1.0 ㎖/분

용리액: KH₂PO₄ 완충용액/CH₃CN(70/30):KH₂PO₄ 완충용액/CH₃CN(30/70)= 0:100 → 100:0(v/v, 기울기 용리)

조건 C : 클로피도그렐 산부가염의 광학순도 측정용

컬럼: 카이럴팩(Chiralpak) AD, 5 ㎛(250 ㎜ × 4.6 ㎜)

검출파장: 210 ㎚

유속: 1.0 ㎖/분

용리액: n-헥산:이소프로판올 = 90:10(v/v)

비교예 1: 클로피도그렐 황산수소염의 제조

국제특허공개 WO 02/59128에 기재된 것과 유사한 방법에 따라 제조한, 광학순도 99.3 ％ee의 클로피도그렐 자유염기로부터 미국 특허 제6,429,210호에 기재된 것과 유사한 방법에 따라서 결정형 2 형태로 클로피도그렐 황산수소염을 제조하였다.

융점: 176 ∼ 177℃(문헌치, 176℃)

수분(Karl-Fisher 측정기): 0.1％ 이하

함량(HPLC, 조건 A): 99.94％

광학순도(HPLC, 조건 C): 99.3 ％ee

실시예 1: 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염(클로피도그렐 나프실레이트; 화학식 1a)의 제조

에틸 아세테이트 100 ㎖에 국제특허공개 WO 02/59128에 기재된 것과 유사한 방법에 따라 제조한 광학순도 99.3 ％ee의 클로피도그렐 자유염기 50.0 g을 용해시킨 용액에, 에틸 아세테이트 150 ㎖과 물 5 ㎖의 혼합액에 2-나프탈렌술폰산 일수화물 34.8 g을 용해시킨 용액을 30 분간에 걸쳐 적가한 후, 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이후, 0 내지 5℃에서 4시간 동안 더 교반한 다음, 생성된 결정을 여과하고 에틸 아세테이트 30 ㎖로 세척하였다. 이를 50℃에서 건조하여 백색의 결정으로 표제 화합물 71.6 g(수율: 87％)을 얻었다.

융점: 151℃

수분함량(Karl-Fisher 측정기): 0.1％ 이하

함량(HPLC, 조건 A): 99.95％

광학순도(HPLC, 조건 C): 99.8 ％ee

원소분석(C₁₆H₁₆ClNO₂S·C₁₀H₈O₃S, ％): 이론치 C 58.91, H 4.56, N 2.64, S 12.10; 실측치 C 58.77, H 4.61, N 2.60, S 12.27

수소 핵자기 공명분광도(¹H-NMR, 300 MHz, DMSO-d⁶, ppm): δ 3.08(brs, 2H), 3.50(brs, 2H), 3.74(s, 3H), 4.25(brs, 2H), 5.68(s, 1H), 6.88(d, 1H, J=4.9 Hz), 7.44(d, 1H, J=4.9 Hz), 7.53∼7.60(m, 4H), 7.62∼7.77(m, 3H), 7.80∼7.98(m, 3H), 8.15(s, 1H), 10.85(brs, 1H)

적외선 흡수분광도(IR, KBr, ㎝^-1): 3475, 2967, 1749, 1475, 1438, 1326, 1220, 1165, 1090, 1031

시차주사열량도(DSC, 10℃/분): 시작점 146.67℃, 최저점 150.94℃(흡열 55.33 J/g)

클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염의 결정상태를 분말 X-선 회절분광도(XRD)로 측정한 결과, 결정성 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염는 특징적인 회절각을 갖는 결정이라는 것이 확인되었다(도 1). 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염에 대한 분말 X-선 회절분석광도 스펙트럼에 나타난 특징적인 회절각 피크(peak) 중 I/I_o≥10％인 경우를 표 1에 나타내었다.

실시예 2: 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물(클로피도그렐 나파디실레이트; 화학식 1b)의 제조

아세톤 300 ㎖에 국제특허공개 WO 02/59128에 기재된 것과 유사한 방법에 따라 제조한 광학순도 99.3 ％ee의 클로피도그렐 자유염기 50.0 g을 용해시킨 용액에, 아세톤 290 ㎖과 물 10 ㎖의 혼합액에 1,5-나프탈렌다이술폰산 사수화물 28.9 g을 용해시킨 용액을 30 분간에 걸쳐 적가한 후, 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이후, 0 내지 5℃에서 4시간 동안 더 교반한 다음, 생성된 결정을 여과하고 차가운 아세톤 100 ㎖로 세척하였다. 이를 50℃에서 건조하여 백색의 결정으로 표제 화합물 66.7 g(수율: 90％)을 일수화물로서 얻었다.

융점: 223 내지 225℃

수분함량(Karl-Fisher 측정기): 1.95％(일수화물 이론치: 1.90％)

함량(HPLC, 조건 A): 99.96％

광학순도(HPLC, 조건 C): 99.8 ％ee

원소분석(C₃₂H₃₂Cl₂N₂O₄S₂·C₁₀H₈O₆S₂·H₂O, ％): 이론치 C 53.10, H 4.46, N 2.95, S 13.50; 실측치 C 53.04, H 4.52, N 2.91, S 13.49

수소 핵자기 공명분광도(¹H-NMR, 300 MHz, DMSO-d⁶, ppm): δ 3.08(brs, 2H), 3.47(brs, 2H), 3.76(s, 3H), 4.23(brs, 2H), 5.66(s, 1H), 6.89(d, 1H, J=5.0 Hz), 7.33∼7.74(m, 6H), 7.93(d, 1H, J=7.0 Hz), 8.88(d, 1H, J=8.5 Hz)

적외선 흡수분광도(IR, KBr, ㎝^-1): 3648, 3462, 2956, 1745, 1436, 1338, 1243, 1225, 1155, 1026

시차주사열량도(DSC, 5℃/분): 시작점 219.3℃, 최저점 226.4℃(흡열 158.3 J/g)

클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물의 결정상태를 분말 X-선 회절분광도(XRD)로 측정한 결과, 결정성 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물은 특징적인 회절각을 갖는 결정이라는 것이 확인되었다(도 3). 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물에 대한 분말 X-선 회절분석광도 스펙트럼에 나타난 특징적인 회절각 피크(peak) 중 I/I_o≥10％인 경우를 표 2에 나타내었다.

실시예 3: 클로피도그렐 산부가염의 수분 및 열에 대한 안정성 시험

비교예 1에서 수득한 공지의 클로피도그렐 황산수소염과 실시예 1 및 2에서 제조한 본 발명에 따른 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염 및 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물을 임의의 조건인 60±2℃의 온도와 75±5％의 상대습도에 노출된 상태로 수분 및 열에 대하여 30일 이상 시간경과에 따른 안정성을 시험하였다. 구체적으로, 각각의 화합물을 상기와 같은 조건에서 30일 이상 방치하면서, 7, 14, 21, 28, 35일째에 초기(0일째) 활성성분 값에 대한 잔사율을 HPLC로 측정하여 상대적인 안정값을 비교하였다. 이때, 클로피도그렐 산부가염의 함량은 HPLC 분석조건 A에 의해, 클로피도그렐 산부가염의 불순물(가수분해산물)의 생성량은 HPLC 분석조건 B에 의해, 클로피도그렐 산부가염의 공학순도(좌선성 이성체의 생성량)는 HPLC 분석조건 C에 의해, 클로피도그렐 산부가염의 수분함량은 칼-피셔(Karl-Fisher) 수분 측정기를 이용하여 측정하였고, 그 결과를 하기 표 3 내지 표 6 및 도 5 내지 도 8에 각각 나타내었다.

상기 표 3 내지 표 6에서 알 수 있듯이, 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 흡습성이 거의 없으며, 수분 및 열에 대한 안정성이 매우 우수하여 시험한 장기간의 가혹조건에서도 클로피도그렐의 함량 및 광학순도에 거의 변화가 없었으며, 황산수소염에 비해 가수분해산물도 매우 적게 생성되었다. 이러한 결과는 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염이 약학적 조성물의 활성성분으로 사용하기에 공지의 염보다 우수하다는 것을 입증하는 것이다.

실시예 4: 제조과정에서의 클로피도그렐 산부가염의 광학순도 증가시험

약 90 ％ee, 95 ％ee 및 98 ％ee의 광학순도를 갖는 클로피도그렐 자유염기를 임의로 제조한 후, 이를 이용하여 비교예 1, 실시예 1 및 실시예 2의 방법과 동일하게 공지의 클로피도그렐 황산수소염과 본 발명에 따른 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염 및 2,5-나프탈렌다이술폰산염을 각각 제조하였다. 이로부터 수득된 산부가염들의 광학순도를 상기의 분석조건 C에 따라 측정하여 염 제조과정에서 광학순도가 향상되는지의 여부를 확인하였고, 그 결과를 표 7에 나타냈다.

상기 표 7에서 알 수 있듯이, 공지의 염인 클로피도그렐 황산수소염은 염의 제조단계에서 광학순도가 전혀 향상되지 않는 반면에, 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 제조단계에서 광학순도가 크게 향상되는 것을 알 수 있다. 클로피도그렐은 제조공정 중에 일부 라세미화가 발생되어 좌선성 이성체가 오염될 수 있기 때문에, 약학적으로 요구되는 광학순도에 도달하기 위해서는 다수의 정제공정이 필요하다. 그러나, 본 발명에 따른 나프탈렌술폰산염은 염의 제조만으로도 광학순도가 향상되기 때문에 다수의 정제공정을 수행하지 않고도 약학적으로 허용가능한 수준의 광학순도를 확보할 수 있다.

시험예 1: 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염의 혈소판 응집 억제효과

비교예 1에서 수득한 공지의 클로피도그렐 황산수소염과 실시예 1 및 2에서 제조한 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염의 혈소판 응집 억제효과를 쥐의 혈액을 이용하여 공지의 표준방법(Born G.V.R & Cross, J. Physiol. 168: 178-195, 1963; O. Takahashi, Food & Chemical Toxicology 38: 203-218, 2000 참조)에 따라 조사하였다. 혈소판 응집 억제시험은 생체외(ex vivo)에서 수행하였으며, 아데노신-디포스페이트(ADP), 콜라겐(collagen) 및 트롬빈(thrombin)에 의해 유도된 혈소판 응집을 상기의 산부가염들이 억제하는 능력을 측정하였다.

11 내지 12주령의 스프라그-다울리계(Sprague-Dawley SD; 효찬과학, 한국) 암컷 쥐 5마리씩(체중 270±25 g)을 한 그룹으로 하고, 혈액 채취 2시간 전에 체중 1 ㎏당 20.0 ㎎의 클로피도그렐 황산수소염(클로피도그렐로서 15.3 ㎎/㎏)과 이에 상응하는 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염(25.2 ㎎/㎏) 및 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물(22.6 ㎎/㎏)을 1％ DMSO 수용액에 녹여 체중 1 ㎏당 10 ㎖의 부피로 경구 투여하였다. 대조군으로는 1％ DMSO 수용액만을 투여하였다.

마취 하에 복부 대동맥으로부터 3.8％의 시트르산 용액이 함유된 주사기로 혈액을 채취한 후 4℃, 1,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 혈소판이 풍부한 혈장(platelet-rich plasma, PRP)을 분리하였다. 상기 혈장을 다시 4℃, 1,000 rpm에서 4회 반복적으로 원심분리하여 시험용 PRP를 얻었다. PRP 일부를 다시 4℃, 3,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 침전 혈소판을 얻었고, 침전 혈소판을 세정 완충용액(138 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 12 mM NaHCO₃, 0.36 mM NaH₂PO₄, 5.5 mM 글루코스, 1 mM EDTA: pH 6.5)으로 세척하였다. 이를 다시 완충용액(138 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 12 mM NaHCO₃, 0.36 mM NaH₂PO₄, 0.49 mM MgCl₂, 0.25％ 젤라틴, 5.5 mM 글루코스: pH 7.4)에 현탁시킨 후 260 ㎚에서 OD(optical density) 값을 측정하였을 때, 혈소판 수가 약 1×10⁸개인 시험용 세정 혈소판(washing platelet) 용액을 조제하였다.

혈소판 응집을 유도하기 위하여, 상기에서 준비된 시험용 PRP에 아데노신 디포스페이트(ADP)의 최종농도가 5 μM이 되도록 ADP 표준용액을 가하였다. 또한, 상기 세정 혈소판 용액에는 콜라겐 표준용액(최종농도 5 ㎍/㎖) 및 트롬빈 표준용액(최종농도 0.1 U/㎖)을 가하여 혈소판 응집을 유도하였다. 상기 시료들을 37℃, 900 rpm으로 교반하면서 응집측정기(aggregometer; Chrono-log Platelet Aggregometer)로 혈소판 응집이 유도된 정도를 측정하였다. 약물을 투여하지 않은 경우와 약물을 투여한 경우에 혈소판 응집 및 억제효과는 하기 수학식 1 및 2에 의해 계산하였고, 그 결과를 표 8에 나타냈다.

시험예 2: 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염의 출혈시간에 대한 효과

비교예 1에서 수득한 공지의 클로피도그렐 황산수소염과 실시예 1 및 2에서 제조한 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염의 출혈시간(bleeding time)에 미치는 영향을 쥐를 대상으로 공지의 표준방법(Dejana E & Villa S, Thromb. Haemostas. 48: 108-111, 1982)에 따라 조사하였다. 출혈시간은 혈소판 응집에 따른 혈전의 생성정도를 측정하는 하나의 지표로서 실험은 암컷 쥐와 수컷 쥐를 대상으로 각각 수행하였다.

11 내지 12주령의 스프라그-다울리계(Sprague-Dawley SD; 효찬과학, 한국) 암컷 쥐 및 수컷 쥐 각각 5마리씩(체중 270±25 g)을 한 그룹으로 하고, 출혈시간 측정 2시간 전에 클로피도그렐 황산수소염을 암컷에는 2.50 ㎎/㎏(클로피도그렐로서 1.92 ㎎), 수컷에는 5.0 ㎎/㎏(클로피도그렐로서 3.83 ㎎)의 용량으로 경구 투여하였다. 다른 그룹에는 암·수 쥐 각각에 클로피도그렐 황산수소염의 투여량에 상응하는 본 발명의 클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염를 암컷에는 3.15 ㎎/㎏, 수컷에는 6.30 ㎎/㎏의 용량으로 경구 투여하였다. 또 다른 그룹에는 암·수 쥐 각각에 클로피도그렐 황산수소염의 투여량에 상응하는 본 발명의 클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물을 암컷에는 2.83 ㎎/㎏, 수컷에는 5.65 ㎎/㎏의 용량으로 경구 투여하였다. 이때, 약물은 1％ DMSO 수용액에 녹여 체중 1 ㎏당 10 ㎖의 부피로 경구 투여하였다. 대조군에는 1％ DMSO 수용액만을 투여하였다.

마취하지 않은 상태에서 플라스틱 홀더에 쥐를 고정시키고, 꼬리 끝으로부터 1.5 ㎝ 위치에 바늘(26 G×1/2", 0.45×13 ㎜)로 깊이 1 ㎜ 정도 찌른 다음 바늘을 제거하였다. 매 10초 간격으로 여과지에 흐르는 혈액을 흡수시키면서 출혈이 멈추는 시간을 측정하였고, 그 결과를 표 9에 나타냈다.

시험예 1의 표 8과 시험예 2의 표 9에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 ADP, 콜라겐 및 트롬빈에 의해서 유도된 혈소판 응집을 공지의 황산수소염보다 효과적으로 억제하였으며, 쥐의 꼬리에서 측정한 출혈시간도 상당히 더 연장시켰음을 알 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 클로피도그렐의 나프탈렌술폰산염은 혈소판 관련 질환의 치료 및 예방에 더욱 효과적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 단독 또는 약학적으로 허용되는 부형제들과 함께 약학적으로 통상 사용되는 방법에 따라 연질 또는 경질 캅셀제 및 정제 등과 같은 형태로 제제화하여 사용될 수 있다.

하기에 제제 실시예를 예시하나, 본 발명에 따른 제제가 이에 한정되는 것은 아니다.

<제조예 1> 연질 또는 경질 캡슐제 1

클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염 120 ㎎

락토오스 100 ㎎

옥수수 전분 25 ㎎

이산화규소 콜로이드 3 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

총량 250 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

<제조예 2> 연질 또는 경질 캡슐제 2

클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물 110 ㎎

락토오스 110 ㎎

옥수수 전분 25 ㎎

이산화규소 콜로이드 3 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

총량 250 ㎎

<제조예 3> 정제 1

클로피도그렐 2-나프탈렌술폰산염 120 ㎎

무수 락토오스 90 ㎎

미세경질 셀룰로오스 30 ㎎

히드록시프로필셀룰로오스 5 ㎎

폴리소르베이트 2 ㎎

수소화 피마자유 1 ㎎

스테아린산 마그네슘 1 ㎎

고상 폴리에틸렌 글리콜 1 ㎎

총량 250 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

<제조예 4> 정제 2

클로피도그렐 1,5-나프탈렌다이술폰산염 일수화물 110 ㎎

무수 락토오스 100 ㎎

미세경질 셀룰로오스 30 ㎎

히드록시프로필셀룰로오스 5 ㎎

폴리소르베이트 2 ㎎

수소화 피마자유 1 ㎎

스테아린산 마그네슘 1 ㎎

고상 폴리에틸렌 글리콜 1 ㎎

총량 250 ㎎

상기에서 전술한 바와 같이, 본 발명에 따른 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염은 약학적으로 요구되는 광학순도를 제조단계에서 간편하게 확보할 수 있고, 수분 및 열에 대한 안정성이 매우 우수하여 약학적 조성물의 유효성분으로 장기간 고품질을 유지할 수 있으며, 쥐를 이용한 동물시험에서 공지의 염인 황산수소염보다 더 우수한 효과를 발현하므로 혈소판 관련 각종 질환을 매우 효과적으로 치료하거나 예방할 수 있다.

Claims

하기 화학식 1의 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물:

<화학식 1>

상기 식에서, X는 나프탈렌모노술폰산(이때, n=1) 또는 나프탈렌다이술폰산(이때, n=2) 잔기이다.
제 1항에 있어서,

하기 화학식 1a의 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물:

<화학식 1a>
제 1항에 있어서,

하기 화학식 1b의 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물:

<화학식 1b>
분말 X-선 회절분석에서 2쎄타(2θ, I/I_o≥10％)의 회절각이 6.7, 8.2, 8.5, 12.4, 13.0, 13.5, 16.8, 17.2, 18.9, 19.6, 20.2, 21.2, 22.3, 22.9, 23.2, 23.6, 24.7, 25.0, 25.3, 25.8, 27.0, 27.5, 28.0, 28.6, 32.1, 32.5, 34.7인 것을 특징으로 하는 하기 화학식 1a의 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염:

화학식 1a
분말 X-선 회절분석에서 2쎄타(2θ, I/I_o≥10％)의 회절각이 7.6, 9.7, 10.7, 11.0, 12.1, 13.6, 14.2, 15.3, 16.6, 17.0, 18.1, 18.5, 19.8, 21.5, 22.2, 23.0, 23.5, 24.3, 24.8, 25.7, 26.4, 26.9, 27.3, 28.4, 29.0인 것을 특징으로 하는 하기 화학식 1b의 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염의 일수화물:

화학식 1b
하기 화학식 2의 클로피도그렐 자유 염기를 유기용매 중에서 하기 화학식 5의 나프탈렌술폰산 또는 이의 수화물과 반응시키는 단계를 포함하는, 제 1항의 화학식 1의 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물을 제조하는 방법:

<화학식 2>

<화학식 5>

(H^＋)_nX^n-

상기 식에서, X는 나프탈렌모노술폰산(이때, n=1) 또는 나프탈렌다이술폰산(이때, n=2) 잔기이다.
제 6항에 있어서,

유기용매가 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, n-프로필아세테이트, 이소프로필아세테이트, 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 아세토니트릴, 메탄올, 테트라히드로퓨란, 1,4-디옥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 6항에 있어서,

나프탈렌술폰산 또는 이의 수화물을 클로피도그렐 자유염기 1 몰 당량에 대하여 1.0 내지 1.2 몰 당량의 비로 사용하는 것을 특징으로 하는 방법.
유효성분으로 제1항의 화학식 1의 결정성 클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물을 함유하는, 뇌졸중, 뇌동맥경화증, 심근경색, 협심증, 부정맥, 말초동맥 폐쇄증 및 버거씨병으로 구성된 군으로부터 선택된 혈소판 관련 혈관질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제 9항에 있어서,

경구투여 제제인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 9항에 있어서,

클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물이 조성물의 총 중량을 기준으로 0.1 내지 95 중량％의 양으로 함유되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 9항에 있어서,

클로피도그렐 나프탈렌술폰산염 또는 이의 수화물이 조성물의 총 중량을 기준으로 1 내지 70 중량％의 양으로 함유되는 것을 특징으로 하는 조성물.
삭제
제 6항에 있어서,

나프탈렌술폰산 또는 이의 수화물을 클로피도그렐 자유염기 1 몰 당량에 대하여 0.5 내지 0.6 몰 당량의 비로 사용하는 것을 특징으로 하는 방법.