KR100533483B1

KR100533483B1 - 티에노피리미딘 화합물, 그 제조법 및 용도

Info

Publication number: KR100533483B1
Application number: KR10-2000-7011511A
Authority: KR
Inventors: 후루야슈이찌; 스즈끼노부히로; 쵸노부오; 나라요시
Original assignee: 다케다 야쿠힌 고교 가부시키가이샤
Priority date: 1999-03-24
Filing date: 2000-03-23
Publication date: 2005-12-05
Also published as: CN1349536A; CZ294747B6; TWI225863B; KR20010090430A; PL351202A1; PT1163244E; MXPA01009566A; ATE261449T1; DK1163244T3; EP1163244A1; IL145549A0; JP2001278884A; NZ514737A; AU764019B2; NO20014603D0; CA2368108C; HK1042495A1; HUP0200550A2; WO2000056739A1; SK13552001A3

Abstract

하기 화학식 1의 화합물 또는 그 염은 우수한 Gn-RH 길항 활성을 가지고, 성호르몬 의존성 질환의 예방 또는 치료에 유용하다:

[화학식 1]

[식에서, R¹ 및 R²는 각각 수소 원자, 히드록시기, C_1-4 알콕시기, C_1-4 알콕시-카르보닐기 또는 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기를 나타내고; R³는 수소 원자, 할로겐 원자, 히드록시기 또는 치환될 수 있는 C_1-4 알콕시기를 나타내거나; 또는 인접한 2개의 R³는 함께 C_1-4 알킬렌디옥시기를 형성할 수 있고; R⁴는 수소 원자 또는 C_1-4 알킬기를 나타내고; R⁶는 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기 또는 하기 화학식 A의 기를 나타내고:

[화학식 A]

(식에서, R⁵는 수소 원자를 나타내거나 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 헤테로고리를 형성할 수 있다); n은 0 내지 5의 정수를 나타낸다].

Description

티에노피리미딘 화합물, 그 제조법 및 용도{THIENOPYRIMIDINE COMPOUNDS, THEIR PRODUCTION AND USE}

본 발명은 고나도트로핀 방출 호르몬(GnRH) 길항작용을 보이는 티에노[2,3-d]피리미딘 화합물, 그 제조법 및 용도에 관한 것이다.

뇌하수체 전엽 호르몬의 분비는 개별적인 호르몬의 목표 기관으로부터 분비되는 주변 호르몬에 의해 그리고 뇌하수체 전엽의 상부 중심 기관인 시상하부로부터의 분비-조절 호르몬(이하, 본 명세서에서는 이러한 호르몬을 집합적으로 "시상하부 호르몬"이라 칭함)에 의해 피드백 제어된다. 현 단계에서는, 시상하부 호르몬으로서, 예를 들면, 갑상선 자극 호르몬 방출 호르몬(TRH), 및 고나도트로핀 방출 호르몬[GnRH, 간혹 LH-RH(황체 형성 호르몬 방출 호르몬)으로 불림]을 포함하는 9가지 호르몬의 존재가 확인되어 있다. 이러한 시상하부 호르몬은 뇌하수체의 전엽 내에 존재한다고 여겨지는 수용체에 의해 그 작용을 나타내는 것으로 여겨지고, 사람의 경우를 포함하는, 이러한 호르몬에 대해 특이성을 갖는 수용체-유전자 발현을 찾기 위한 노력이 이루어져 왔다. 따라서, 이러한 수용체에 대해 특이성을 갖고 선택적으로 작용을 하는 길항제 또는 작용제는 시상하부 호르몬의 작용 및 뇌하수체 전엽 호르몬의 분비를 제어해야 한다. 그 결과로서, 이러한 길항제 또는 작용제는 뇌하수체 전엽 호르몬 질환을 예방 또는 치료할 것으로 기대된다.

GnRH-길항 활성을 갖는 공지의 화합물로는 GnRH-유도된 선형 펩티드(USP 5,140,009 및 USP 5,171,835), 고리형 헥사펩티드 유도체(JP-A-61-191698), 2고리형 펩티드 유도체[Journal of Medicinal Chemistry, Vol. 36, pp. 3265-3273(1993)] 등을 들 수 있다. GnRH-길항 활성을 갖는 비펩티드 화합물로는 WO 95/28405(JP-A-8-295693), WO 97/14697(JP-A-9-169767), WO 97/14682(JP-A-9-169735) 및 WO 96/24597(JP-A-9-169768) 등에 기재된 화합물을 들 수 있다.

펩티드 화합물은 경구 흡수성, 복용 형태, 복용량, 약물 안정성, 유지되는 작용, 신진대사 안정성 등에 관한 해결해야 할 많은 문제점들이 있다. 예를 들면, 전립선암과 같은 호르몬-의존성 암, 자궁내막증, 조발청춘기 등에 우수한 치료적 효과를 갖고, 전이성 뇌하수체-성선자극 작용(급성 작용)을 보이지 않고, 우수한 생체이용률을 갖는, 경구용 GnRH 길항제, 특히 비펩티드 화합물을 주성분으로 하는 GnRH 길항제가 절실히 요구된다.

본 발명자들은 다양한 화합물들을 조사하였고, 그 결과로서, 치환기인 화학식 -NH-CO-NR¹R²[식에서, 각각의 기호는 하기 정의한 바와 같다]의 기를 티에노[2,3-d]피리미딘 골격의 파라-위치에 갖는 다음의 신규 화합물, 또는 그 염[이하 때때로 간략하게 화합물 I로 칭함]을 최초로 발견하였다. 또한, 본 발명자들은 화합물 I이 상기 특정한 치환기에 의해 예기치 않게 우수한 GnRH-길항 활성 및 낮은 독성을 갖고, 따라서 GnRH-길항 활성을 갖는 약제로서 만족스럽다는 것을 발견하고, 이 발견에 기초하여 본 발명을 진전시켰다.

[식에서, R¹ 및 R²는 각각 수소 원자, 히드록시기, C_1-4 알콕시기, C_1-4 알콕시-카르보닐기 또는 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기를 나타내고;

R³는 수소 원자, 할로겐 원자, 히드록시기 또는 치환될 수 있는 C_1-4 알콕시기를 나타내거나; 또는 인접한 2개의 R³는 함께 C_1-4 알킬렌디옥시기를 형성할 수 있고;

R⁴는 수소 원자 또는 C_1-4 알킬기를 나타내고;

R⁶는 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기 또는 하기 화학식의 기를 나타내고:

(식에서, R⁵는 수소 원자를 나타내거나 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 헤테로고리를 형성할 수 있다);

n은 0 내지 5의 정수를 나타낸다].

따라서, 본 발명은 다음에 관한 것이다:

[1] 화합물 I;

[2] 하기 화학식의 화합물인, 상기 [1]의 화합물 또는 그 염:

[식에서, R¹ 및 R²는 각각 수소 원자, 히드록시기, C_1-4 알콕시기 또는 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기이고; R³는 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C_1-4 알콕시기이고; R⁴는 C_1-4 알킬기이고; R⁵는 상기 정의한 바와 같다];

[3] R¹이 C_1-3 알콕시기인 상기 [1]의 화합물 또는 그 염;

[4] R²가 수소 원자인 상기 [3]의 화합물 또는 그 염;

[5] R³가 수소 원자인 상기 [1]의 화합물 또는 그 염;

[6] R⁶가 하기 화학식의 기인 상기 [1]의 화합물 또는 그 염:

[식에서, R⁵는 상기 정의한 바와 같다];

[7] R⁴가 C_1-3 알킬기이고, R⁵가 수소 원자인 상기 [2]의 화합물 또는 그 염;

[8] n가 1 또는 2인 상기 [1]의 화합물 또는 그 염;

[9] R¹이 (i) 히드록시기, (ii) C_1-4 알콕시기, 또는 (iii) 히드록시 또는 C_1-4 알킬-카르보닐옥시에 의해 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기이고; R²가 수소 원자, C_1-4 알킬기 또는 C_1-4 알콕시-카르보닐기이고; R³가 수소 원자, 할로겐 원자, 히드록시기 또는 C_1-4 알콕시-C_1-4 알콕시기이거나; 또는 인접한 2개의 R³가 함께 C_1-3 알킬렌디옥시기를 형성하고; R⁴가 수소 원자 또는 C_1-3 알킬기이고; R⁶이 C_1-4 알콕시-C_1-4알킬기 또는 하기 화학식의 기이고:

(식에서, R⁵가 수소 원자이거나 또는 R⁴ 및 R⁵가 함께 5원 또는 6원 헤테로고리를 형성한다); n은 1 또는 2인 상기 [1]의 화합물 또는 그 염;

[10] R¹이 히드록시기, 메톡시기 또는 C_1-3 알킬기이고; R²가 수소 원자 또는 C_1-3 알킬기이고; R⁴가 C_1-3 알킬기이고; R⁶가 벤질기이고; n이 0인 상기 [1]의 화합물 또는 그 염;

[11] 5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 또는 그 염;

[12] 하기 화학식의 화합물 또는 그 염[이하, 때때로 간략하게 화합물 II로 칭함]을 카르보닐디이미다졸 또는 포스겐과 반응시킨 후에,

[식에서, 각각의 기호는 상기 정의한 바와 같다]

하기 화학식의 화합물 또는 그 염[이하, 때때로 간략하게 화합물 III으로 칭함]과 반응시키는 것을 포함하는,

[식에서, 각각의 기호는 상기 정의한 바와 같다] 제 1 항의 화합물 또는 그 염의 제조방법;

[13] 상기 [1]의 화합물 또는 그 염을 포함하는 약제학적 조성물;

[14] 고나도트로핀-방출 호르몬의 길항을 위한 상기 [13]의 약제학적 조성물;

[15] 성호르몬의존성 질환의 예방 또는 치료를 위한 상기 [14]의 약제학적 조성물;

[16] 포유동물에 상기 [1]의 화합물 또는 그 염의 유효량을 약제학적으로 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제와 함께 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 포유동물에서의 고나도트로핀-방출 호르몬의 길항을 위한 방법;

[17] 고나도트로핀-방출 호르몬 등의 길항용 약제학적 조성물의 제조를 위한 상기 [1]의 화합물 또는 그 염의 용도.

상기 화학식에서의 각각의 기호를 이하 더욱 상세하게 기술한다.

R¹ 또는 R²를 위한 "C_1-4 알콕시기"로서는, 예를 들면, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 이소프로폭시, t-부톡시 등을 들 수 있다. 그 밖의 것들 중에서는, C_1-3 알콕시가 바람직하다. 메톡시가 더욱 바람직하다.

R¹ 또는 R²를 위한 "C_1-4 알콕시-카르보닐기"로서는, 예를 들면, 메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐, 프로폭시카르보닐, 이소프로폭시카르보닐, 부톡시카르보닐, t-부톡시카르보닐 등을 들 수 있다. 그 밖의 것들 중에서는, C_1-3 알콕시-카르보닐이 바람직하다. 메톡시카르보닐이 더욱 바람직하다.

R¹ 또는 R²를 위한 "치환될 수 있는 C_1-4 알킬기"의 "C _1-4 알킬기"로서는, 예를 들면, 직쇄 C_1-4 알킬기(예를 들면, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 분기된 C_3-4 알킬기(예를 들면, 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸 등) 등을 들 수 있다. 그 밖의 것들 중에서는, C_1-3 알킬기가 바람직하다. 에틸이 더욱 바람직하다.

R¹ 또는 R²를 위한 "치환될 수 있는 C_1-4 알킬기"의 "치환기"로서는, 예를 들면, (i) 히드록시, (ii) C_1-7 아실옥시(예를 들면, 아세톡시, 프로피오닐옥시 등의 C_1-6 알킬-카르보닐옥시), (iii) 벤조일옥시, (iv) C_1-6 알콕시-카르보닐(예를 들면, 메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐 등), 벤질옥시카르보닐, C_1-4 아실(예를 들면, 아세틸, 프로피오닐 등의 C_1-3 알킬카르보닐), C_1-4 알킬(예를 들면, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등) 및 C_1-3 알킬술포닐(예를 들면, 메탄술포닐 등) 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 또는 2개의 치환기에 의해 치환될 수 있는 아미노[예를 들면, 아미노, 디메틸아미노, 메톡시카르보닐아미노, 에톡시카르보닐아미노, tert-부톡시카르보닐아미노, 벤질옥시카르보닐아미노, 아세틸아미노, 메탄술포닐아미노 등], (v) C_1-10 알콕시(예를 들면, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, tert-부톡시 등), (vi) C_3-7 시클로알킬옥시카르보닐-C_1-3 알콕시(예를 들면, 시클로헥실옥시카르보닐옥시-1-에톡시 등), (vii) C_1-3 알콕시-C_1-3 알콕시(예를 들면, 메톡시메톡시, 메톡시에톡시 등) 등을 들 수 있다. 그 밖의 것들 중에서는, 히드록시가 바람직하다.

R¹ 또는 R²를 위한 "치환될 수 있는 C_1-4 알킬기"의 "C _1-4 알킬기"는 가능한 위치에서 상기 언급한 바와 같은 치환기를 1개 내지 5개, 바람직하게는 1개 내지 3개 가질 수 있고, 치환기의 수가 2개 이상인 경우에는, 그 치환기들은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.

바람직하게는, R¹ 및 R² 중 하나가 수소 원자이고, 다른 하나는 C_1-3 알콕시기이다.

R³를 위한 "할로겐 원자"로서는, 예를 들면, 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도 등을 들 수 있다. 그 밖의 것들 중에서는, 클로로가 바람직하다.

R³를 위한 "치환될 수 있는 C_1-4 알콕시기"의 "C_1-4 알콕시기"로서는, 예를 들면, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, t-부톡시 등을 들 수 있다. 그 밖의 것들 중에서는, 메톡시가 바람직하다.

R³를 위한 "치환될 수 있는 C_1-4 알콕시기"의 "치환기"는 R¹ 또는 R²를 위한 "치환될 수 있는 C_1-4 알킬기"의 "치환기"에 대해 상기 언급된 것들과 동일하다. 그 밖의 것들 중에서는, C_1-4 알콕시기가 바람직하다.

"C_1-4 알콕시기"는 가능한 위치에서 상기 언급한 바와 같은 치환기를 1개 내지 5개, 바람직하게는 1개 내지 3개 가질 수 있고, 치환기의 수가 2개 이상인 경우에는, 그 치환기들은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.

인접한 2개의 R³에 의해 형성된 "C_1-4 알킬렌디옥시기"로서는, 예를 들면, 메틸렌디옥시, 에틸렌디옥시 등을 들 수 있다.

R³가 수소 원자인 것이 바람직하다.

R⁴를 위한 "C_1-4 알킬기"로서는, 예를 들면, 직쇄 C_1-4 알킬기(예를 들면, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 분기된 C_3-4 알킬기(예를 들면, 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸 등) 등을 들 수 있다. 그 밖의 것들 중에서는, C_1-3 알킬기가 바람직하다. 메틸이 더욱 바람직하다.

R⁶를 위한 "치환될 수 있는 C_1-4 알킬기"는 R¹ 또는 R²를 위한 "치환될 수 있는 C_1-4 알킬기"를 위해 상기 언급된 것들과 동일하다.

R⁴ 및 R⁵에 의해 형성된 "헤테로고리"로서는, 예를 들면, 5원 또는 6원 N-함유 헤테로고리 등을 들 수 있다. R⁴ 및 R⁵가 함께 형성하는 경우에는, 하기 화학식:

의 기의 예는 하기 화학식의 기를 포함한다:

그 밖의 것들 중에서는, 하기 화학식의 기가 바람직하다:

바람직하게는, R⁶은 하기 화학식의 기이다:

[식에서, R⁵는 상기 정의한 바와 같다].

바람직하게는, R⁴는 C_1-3 알킬이고, R⁵는 수소 원자이다.

바람직하게는, n은 1 또는 2이다.

화합물 I의 바람직한 예로는 화합물 Ia를 들 수 있다.

R¹이 히드록시기, 메톡시기 또는 C_1-3 알킬기이고; R²가 수소 원자 또는 C_1-3 알킬기이고; R⁴가 C_1-3 알킬기이고; R⁶가 벤질기이고; n이 0인 화합물 또는 그 염이 더욱 바람직하다.

그 밖의 것들 중에서는, R¹이 C_1-3 알콕시기이고; R² 및 R⁵가 각각 수소 원자이고; R⁴가 C_1-3 알킬기이고; R⁶가 벤질기이고; n이 0인 화합물 또는 그 염이 더욱 바람직하다.

화합물 I의 다른 바람직한 예로서는, R¹이 (i) 히드록시기, (ii) C_1-4 알콕시기, 또는 (iii) 히드록시 또는 C_1-4 알킬-카르보닐옥시에 의해 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기이고; R²가 수소 원자, C_1-4 알킬기 또는 C_1-4 알콕시-카르보닐기이고; R³가 수소 원자, 할로겐 원자, 히드록시기 또는 C_1-4 알콕시-C_1-4 알콕시기이거나; 또는 인접한 2개의 R³가 함께 C_1-3 알킬렌디옥시기를 형성하고; R⁴가 수소 원자 또는 C_1-3 알킬기이고; R⁶가 C_1-4 알콕시-C_1-4 알킬기이거나 하기 화학식의 기이고:

(식에서, R⁵는 수소 원자이거나 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 5원 또는 6원 헤테로고리를 형성한다); n은 1 또는 2인 화합물 또는 그 염을 들 수 있다.

화합물 I로서는, 구체적으로

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 또는 그 염,

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-히드록시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 또는 그 염,

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-메틸우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 또는 그 염,

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-에틸우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 또는 그 염, 등을 언급할 수 있다.

그 밖의 것들 중에서는, 5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 또는 그 염이 바람직하다.

화합물 I의 염은 생리학적으로 허용가능한 산부가염인 것이 바람직하다. 이러한 염으로서는, 예를 들면, 무기산(예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 질산, 황산, 인산)과의 염, 유기산(예를 들면, 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 푸마르산, 옥살산, 타르타르산, 말레산, 시트르산, 숙신산, 말산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 등)과의 염 등을 들 수 있다. 화합물 I이 산성기를 가지는 경우에는, 무기 염기(예를 들면, 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘 등의 알칼리 금속 및 알칼리토금속, 암모니아) 또는 유기 염기(예를 들면, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 피리딘, 피콜린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 디시클로헥실아민, N,N'-디벤질에틸렌디아민 등)와 생리학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있다.

화합물 I은 공지된 방식 그대로, 예를 들면, JP-A-9-169768, WO 96/24597에 개시되어 있는 방법들 또는 그와 유사한 방법들에 따라서 제조될 수 있다. 구체적으로는 다음의 제조방법 1 및 제조방법 2를 언급할 수 있다. 다음의 공정에서 기술된 화합물 II 내지 VII은 그 염을 포함한다. 그 염에 대해서는, 예를 들면, 화합물 I의 염과 동일한 염을 언급할 수 있다.

제조방법 1

상기 화학식에서 L은 이탈기를 나타내고, 다른 기호는 상기 정의한 바와 같다.

L에 대한 "이탈기"로서는, 예를 들면, 1-이미다졸릴, 할로겐, 치환될 수 있는 알콕시기 등을 들 수 있다. "치환될 수 있는 알콕시기"로서는, 예를 들면, 클로로, 브로모 등의 1개 내지 3개의 할로겐에 의해 치환될 수 있는 C_1-4 알콕시기(예를 들면, 2,2,2-트리클로로에톡시 등)를 들 수 있다.

화합물 II는 JP-A-9-169768에 개시되어 있는 방법 또는 그와 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다.

화합물 II를 카르보닐디이미다졸(N,N'-카르보닐디이미다졸; CDI) 또는 포스겐(단량체, 이량체 또는 삼량체)과 반응시켜 화합물 IV를 수득한 후에, 화합물 III과 반응시킴으로써 화합물 I을 제조할 수 있다. 반응은 화합물 IV의 단리없이 수행될 수 있거나, 또는 화합물 IV가 다음 반응에서 정제된 형태로서 사용될 수 있다.

또한, 화합물 II를, 예를 들면, 클로로포름산 에스테르 화합물(예를 들면, 클로로포름산 2,2,2-트리클로로에틸 에스테르, 클로로포름산 1-클로로에틸 에스테르 등)과 반응시킴으로서 화합물 IV를 제조할 수 있다.

화합물 II의 카르보닐디이미다졸 또는 포스겐 등과의 반응에서, 카르보닐디이다졸 또는 포스겐 등은 화합물 II의 1몰에 대해 약 1 내지 3몰의 양으로 사용된다.

이 반응은 반응에 대해 불활성인 용매 중에서 수행되는 것이 유리하다.

용매의 예로서는 에테르(예를 들면, 에틸 에테르, 디옥산, 디메톡시에탄, 테트라히드로푸란 등), 방향족 탄화수소(예를 들면, 벤젠, 톨루엔 등), 아미드(예를 들면, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드 등), 할로겐화 탄화수소(예를 들면, 클로로포름, 디클로로메탄 등) 등을 들 수 있다.

반응온도는 일반적으로는 약 0 내지 150℃, 바람직하게는 실온(약 15 내지 25℃)이다. 반응시간은 일반적으로는 약 1 내지 36시간이다.

또한, 이 반응은 염기의 존재 하에서 수행된다. "염기"의 예로서는 탄산나트륨, 탄산수소나트륨, 탄산칼륨, 탄산수소칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨 및 수산화탈륨 등의 무기 염기, 그리고 트리에틸아민 및 피리딘 등의 유기 염기 등을 들 수 있다.

"염기"의 양은 화합물 II 1몰에 대해 약 2 내지 20몰, 바람직하게는 약 5 내지 12몰이다.

하기 화합물 III과의 반응은 상기 화합물 II의 카르보닐디이미다졸 또는 포스겐과의 반응과 동일한 조건에서 수행될 수 있다. 화합물 III의 양은 화합물 II 또는 화합물 IV 1몰에 대해 약 2 내지 20몰, 바람직하게는 약 5 내지 10몰이다. 반응온도는 일반적으로는 약 0 내지 150℃, 바람직하게는 실온(약 15 내지 25℃)이다. 반응시간은 일반적으로는 약 1 내지 6시간이다.

화합물 III 및 카르보닐디이미다졸 또는 포스겐은 화합물 II와 동시에 반응될 수 있다.

제조방법 2

상기 화학식에서, R⁷은 수소 원자 또는 알킬기를 나타내고, R⁸은 알킬기를 나타내고, 다른 기호들은 상기 정의한 바와 동일하다.

R⁷ 또는 R⁸을 위한 "C_1-4 알킬기"로서는, 예를 들면, R¹ 또는 R²를 위한 "치환될 수 있는 C_1-4 알킬기"의 "C_1-4 알킬기"를 들 수 있다.

화합물 V는 공지된 방식 그대로 제조될 수 있는데, 예를 들면, p-니트로페닐아세톤을 시아노아세트산 에스테르 화합물 및 황과 반응시키고[예를 들면, Chem. Ber., 99, 94-100(1966)], 이렇게 하여 수득한 2-아미노-4-메틸-5-(4-니트로페닐)티오펜에 JP-A-9-169768, WO 96/24597에 개시되어 있는 방법들 또는 그와 유사한 방법들을 적용한다.

1) R⁷이 수소 원자인 경우에는, 축합제의 존재 하에서 화합물 V를 하기 화학식의 화합물 또는 그 염[이하, 때때로 간략하게 화합물 VI라 칭함]과 반응시킴으로써, 화합물 VII를 수득한 후에, 고리화하여 화합물 I을 제조할 수 있다:

[식에서, 각각의 기호는 상기 정의한 바와 같다].

"축합제"로서는, 예를 들면, 벤조트리아졸-1-일옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP) 등을 들 수 있다.

"축합제"의 양은 화합물 V 1몰에 대해 약 1 내지 3몰이다.

용매의 예로서는 알코올(예를 들면, 에탄올, 메탄올 등), 방향족 탄화수소(예를 들면, 벤젠, 톨루엔 등), 아미드(예를 들면, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드 등), 할로겐화 탄화수소(예를 들면, 클로로포름, 디클로로메탄 등) 등을 들 수 있다.

상기 언급한 방식으로 제조된 생성물은 아직 반응혼합물 내에서 미정제 상태에 있는 동안에 다음 반응에 적용될 수 있거나, 또는 임의의 통상적인 방식으로 반응혼합물로부터 단리될 수 있다.

염기의 존재 하에서 화합물 VII를 고리화한다.

"염기"의 예로서는 나트륨 메톡시드, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨, 탄산칼륨, 탄산수소칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨 및 수산화탈륨 등의 무기 염기, 그리고 트리에틸아민 및 피리딘 등의 유기 염기 등을 들 수 있다.

"염기"의 양은 화합물 VII 1몰에 대해 약 2 내지 20몰, 바람직하게는 약 5 내지 12몰이다.

이 반응은 반응에 대해 불활성인 용매 중에서 수행되는 것이 바람직하다.

2) R⁷이 알킬기인 경우에는, 화합물 V를 화합물 VI와 반응시킴으로써 화합물 I을 제조할 수 있다.

임의의 공지된 방식 그대로, 예를 들면, 반응에 대해 불활성인 용매 중에서 유기-알루미늄 시약을 활성화된 화합물 VI와 반응시킴으로써 활성화된 화합물 VI를 제조할 수 있다.

"유기-알루미늄 시약"으로서는, 예를 들면, 트리메틸 알루미늄, 디메틸 알루미늄 클로리드 등, 그리고 이것들을 포함하는 용액 등을 들 수 있다.

"유기-알루미늄 시약"의 양은 화합물 VI 1몰에 대해 약 1 내지 5몰, 바람직하게는 약 1몰이다.

용매의 예로서는 할로겐화 탄화수소(예를 들면, 클로로포름, 디클로로메탄 등) 등을 들 수 있다.

반응온도는 일반적으로는 약 0 내지 150℃, 바람직하게는 실온(약 15 내지 25℃)이다. 반응시간은 일반적으로는 약 1 내지 6시간이다.

화합물 V를 활성화된 화합물 VI와 반응시켜 화합물 I을 수득함으로써 고리화를 수행할 수 있다.

"화합물 V" 의 양은 화합물 VI 및 유기-알루미늄 시약의 혼합물의 약 1/5 부피이다.

이 반응은 이롭게는 반응에 대해 불활성인 용매 중에서 수행된다.

이러한 용매는 활성화된 화합물 VI을 수득하기 위한 반응에 사용되는 것들과 동일하다.

반응온도는 일반적으로는 약 0 내지 150℃, 바람직하게는 실온(약 15 내지 25℃)이다. 반응시간은 일반적으로는 약 1 내지 48시간이다.

화합물 I은 재결정화, 증류 및 크로마토그래피 등의 통상적인 분리 수단에 의해 단리 및 정제될 수 있다.

화합물 I이 유리된 형태로 수득되는 경우에는, 공지되어 있는 방법 그대로 또는 그와 유사한 방법에 의해 염으로 전환될 수 있다. 화합물 I이 염 형태로 수득되는 경우에는, 공지되어 있는 방법 그대로 또는 그와 유사한 방법에 의해 유리된 형태 또는 다른 염으로 전환될 수 있다.

화합물 I은 수화물이거나 또는 비수화물일 수 있다. 수화물의 예로는 일수화물, 세스퀴 수화물 및 이수화물을 들 수 있다.

화합물 I이 광학적으로 활성인 배열의 혼합물로서 수득되는 경우에는, 통상적인 광학적 분해 기법에 의해 (R)- 및 (S)-형태로 분해될 수 있다.

화합물 I은 동위원소(예를 들면, ³H, ¹⁴C, ³⁵S 등)로 분류될 수 있다.

본 발명의 화합물 I(이하, "본 발명의 화합물"로도 불림)은 우수한 GnRH-길항 작용 및 낮은 독성을 갖는다. 또한, 경구 흡수성, 활성 유지성, 안정성 및 약물동력학에 있어서 우수하다. 본 발명의 화합물도 또한 용이하게 제조될 수 있다. 그러므로, 본 발명의 화합물은 GnRH 수용체-길항작용에 의해 고나도트로핀 분비를 억제하여 혈장 성호르몬 농도를 제어함으로써, 남성 또는 여성 호르몬에 의존하는 질환, 이러한 호르몬이 과다하여 발생한 질환을 예방 및/또는 치료하기 위해, 포유동물(예를 들면, 사람, 원숭이, 소, 말, 개, 고양이, 토끼, 쥐, 마우스 등)에서 안전하게 사용될 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 화합물은 성호르몬-의존성 암(예를 들면, 전립선암, 자궁암, 유방암, 뇌하수체 종양 등), 전립선 비대증, 자궁근종, 자궁내막증, 조발청춘기, 무월경, 월경전 증후군, 다방성 난소 증후군, 구진 등을 예방 및/또는 치료하는데 유용하다. 또한, 본 발명의 화합물은 남성 및 여성의 생식의 조절에 유용하다(예를 들면, 임신 조절제, 월경 주기 조절제 등). 또한, 본 발명의 화합물은 남성 또는 여성 피임약으로서, 또는 여성 배란 유도물질로서 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 사용을 중단한 후의 반발 효과를 근거로 하여 불임을 치료하는데 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은 축산 분야에서 동물의 발정, 육류의 품질 개선 및 동물 성장의 촉진을 조절하는데 유용하다. 또한, 본 발명의 화합물은 어류의 산란 촉진제로서도 유용하다.

또한, 본 발명의 화합물은 류프로렐린 아세테이트 등의 GnRH 초길항제의 투여에서 관찰되는 혈장 테스토스테론 농도의 일시적 상승(플레어 현상(flare phenomenon))을 억제하는데 사용될 수도 있다. 본 발명의 화합물은 류프로렐린 아세테이트, 고나드렐린, 부세렐린, 트립토렐린, 고세렐린, 나파렐린, 히스트렐린, 데슬로렐린, 메테렐린, 레시렐린 등의 GnRH 초길항제와 조합되어 사용될 수 있다. 다른 것들 중에서, 류프로렐린 아세테이트가 바람직하다.

또한, 다른 것들 중에서, 스테로이드계 또는 비스테로이드계 안드로겐 길항제 또는 항에스트로겐제, 화학치료제, GnRH 길항성 펩티드, -환원효소 저해제, -수용체 저해제, 아로마타제 저해제, 17-히드록시스테로이드 탈수소효소 저해제, 부신 안드로겐 생성 저해제, 단백질 키나아제 저해제, 호르몬 치료용 약물, 및 성장 인자에 길항작용을 하는 약물 또는 그 수용체 중에서 선택되는 1가지 이상과 함께(조합하여 또는 동시에) 본 발명의 화합물을 사용하는 것도 유리하다.

상기 "화학치료제"로는 이포스파미드, UTF, 아드리아마이신, 페플로마이신, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 5-FU, UFT, 메토트렉세이트, 미토마이신 C, 미톡산트론 등을 들 수 있다.

상기 "GnRH 길항성 펩티드"로는 세트로렐릭스, 가니렐릭스, 아바레릭스 등의 비경구 GnRH 길항성 펩티드를 들 수 있다.

상기 "부신 안드로겐 생성 저해제"로는 리아제 (C_17,20-리아제) 저해제 등을 들 수 있다.

상기 "단백질 키나아제 저해제"로는 티로신 키나아제 저해제 등을 들 수 있다.

"호르몬 치료용 약물"로는 다른 것들 중에서 항에스트로겐제, 프로게스테론(예를 들면, MPA 등), 안드로겐, 에스트로겐 및 안드로겐 길항제를 들 수 있다.

"성장 인자"는 세포의 증식을 촉진하고, 일반적으로는 수용체에 대한 결합을 통해 저농도에서의 활성을 발현하는 20,000 이하의 분자량을 갖는 펩티드를 포함할 수 있다. 구체적으로는, 다른 것들 중에서, (1) EGF(상피 성장 인자) 또는 실질적으로 동일한 활성을 갖는 물질(예를 들면, EGF, 헤레굴린(HER2 리간드) 등), (2) 인슐린 또는 실질적으로 동일한 활성을 갖는 물질(예를 들면, 인슐린, IGF(insulin-like growth factor; 유사 인슐린 성장 인자)-1, IGF-2 등), (3) FGF(섬유아세포 성장 인자) 또는 실질적으로 동일한 활성을 갖는 물질(aFGF, bFGF, KGF(각질세포 성장 인자), HGF(간세포 성장 인자), FGF-10 등), 및 (4) 기타 성장 인자(예를 들면, CSF(콜로니 자극 인자), EPO(에리트로포이에틴), IL-2(인터류킨-2), NGF(신경 성장 인자), PDGF(혈소판-유래의 성장 인자) 및 TGF(변환 성장 인자 ) 등)를 언급할 수 있다.

상기 "성장 인자 수용체"는 상기 성장 인자를 결합할 수 있는 어떠한 수용체일 수 있고, 그 예로서는 EGF 수용체, 헤레굴린 수용체(HER2), 인슐린 수용체-1, 인슐린 수용체-2, IGF 수용체, FGF 수용체-1, FGF 수용체-2 등을 들 수 있다.

상기 성장 인자에 길항작용을 하는 약물로는, 다른 것들 중에서, 헤르셉틴(항-HER2 수용체 항체)를 들 수 있다.

상기 성장 인자 또는 성장 인자 수용체에 길항작용을 하는 약물로는 헤르비마이신, PD153035[예를 들면, Science, 265(5175) p1093, (1994)] 등을 언급할 수 있다.

상기 성장 인자 또는 성장 인자 수용체에 길항작용을 하는 다른 부류의 약물로는 HER2 길항제를 들 수 있다. HER2 길항제는 HER2의 활성(예를 들면, 포스포릴화 활성)을 저해하는 어떠한 물질일 수 있고, 따라서 항체, 저분자량 화합물(합성 또는 천연 생성물), 안티센스, HER2 리간드, 헤레굴린을 포함하고, 이것들 중에서 구조가 부분적으로 변형되거나 변이된 것들 중 임의의 것을 포함한다. 또한, HER2 수용체(예를 들면, HER2 수용체 항체)에 길항작용을 함으로써 HER2 활성을 저해하는 물질일 수 있다. HER2 길항 활성을 갖는 저분자량 화합물의 예로는, WO 98/03505에 기재된 화합물, 즉 1-[3-[4-[2-((E)-2-페닐에텐일)-4-옥사졸릴메톡시]페닐]프로필]-1,2,4-트리아졸 등을 들 수 있다.

전립선 비대증에 대해서, 이러한 조합의 예로는 GnRH 초길항제, 안드로겐 길항제, 항에스트로겐제, GnRH 길항성 펩티드, -환원효소 저해제, -수용체 저해제, 아로마타제 저해제, 17-히드록시스테로이드 탈수소효소 저해제, 부신 안드로겐 생성 저해제, 포스포릴라제 저해제 등과 조합된 본 발명의 화합물을 들 수 있다.

전립선 암에 대해서, 이러한 조합의 예로는 GnRH 초길항제, 안드로겐 길항제, 항에스트로겐제, 화학치료제(예를 들면, 이포스파미드, UTF, 아드리아마이신, 페플로마이신, 시스플라틴 등), GnRH 길항성 펩티드, 아로마타제 저해제, 17-히드록시스테로이드 탈수소효소 저해제, 부신 안드로겐 생성 저해제, 포스포릴라제 저해제, 에스트로겐(예를 들면, DSB, EMP 등)과 같은 호르몬 치료용 약물, 안드로겐 길항제(예를 들면, CMA 등), 성장 인자에 길항작용을 하는 약물 또는 그 수용체 등과 조합된 본 발명의 화합물을 들 수 있다.

유방암에 대해서, 이러한 조합의 예로는 GnRH 초길항제, 화학치료제(예를 들면, 시클로포스파미드, 5-FU, UFT, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 미토마이신 C, 미톡산트론 등), GnRH 길항성 펩티드, 아로마타아제 저해제, 부신 안드로겐 생성 저해제, 포스포릴라제 저해제, 항에스트로겐(예를 들면, 타목시펜 등), 프로게스테론(예를 들면, MPA 등), 안드로겐, 에스트로겐 등의 호르몬 치료용 약물, 성장 인자에 길항작용을 하는 약물 또는 그 수용체 등과 조합된 본 발명의 화합물을 들 수 있다.

본 발명의 화합물이 상기 질병에 대해 예방제 및/또는 치료제로서 사용되거나 또는 축산 또는 수산 분야에서 사용되는 경우에, 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 조제되어, 통상적으로는 경구 투여를 위한 정제, 캡슐, 과립 및 분말과 같은 고체 제제의 형태로, 또는 비경구 투여를 위한 정맥내 주사, 경피 주사, 근육내 주사 또는 기타 주사, 좌약 또는 설하 정제의 형태로, 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 설하 투여, 경피 투여, 근육내 투여되거나, 또는 그렇지 않은 경우에는 설하 정제, 마이크로캡슐 등의 서방성 제제의 형태로 투여될 수 있다. 증상의 정도; 시술대상의 연령, 성별, 체중 및 민감도; 투여 기간 및 간격; 약제학적 제제의 특성, 조제 및 종류; 활성 성분의 종류 등에 따라서, 1일 투여량이 제한되지 않는다. 상기 성호르몬-의존성 암(예를 들면, 전립선암, 자궁암, 유방암, 뇌하수체 종양), 전립선 비대증, 자궁근종, 자궁내막증, 조발청춘기 등의 치료에 사용하기 위해서는, 1일 복용량은 통상적으로는 포유동물의 kg체중 당 약 0.01 내지 30 mg, 바람직하게는 약 0.02 내지 10 mg, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 10 mg, 특히 바람직하게는 0.1 내지 5 mg이고, 통상적으로는 1회 내지 4회 분량으로 분할된다.

상기 복용량은 축산 또는 수산 분야에서의 본 발명의 화합물의 용도에 적용가능하다. 1일 복용량은 포유동물의 kg체중 당 약 0.01 내지 30 mg, 바람직하게는 약 0.1 내지 10 mg이고, 통상적으로는 1회 내지 3회 분량으로 분할된다.

본 발명의 약제학적 조성물에서, 화합물 I의 양은 조성물의 총중량의 0.01 내지 100 중량%이다.

상기 약제학적으로 허용가능한 담체는 약제학적 재료로서 통상적으로 사용되는 다양한 유기 또는 무기 담체 물질이고, 그 예로서는 고체 제제용 부형제, 윤활제, 바인더 및 붕괴제, 및 액체 제제용 용매, 용해 보조제, 현탁화제, 등장화제, 완충액 및 완화제를 들 수 있다. 보존제, 산화방지제, 착색제 및 감미제와 같은 기타 약제학적 첨가제를 필요에 따라서 사용할 수 있다.

바람직한 부형제의 예로는, 락토스, 수크로스, D-만니톨, 전분, 결정질 셀룰로스 및 경질 규산 무수물을 들 수 있다. 바람직한 윤활제의 예로는, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 활석 및 콜로이드성 실리카를 들 수 있다. 바람직한 바인더의 예로는, 결정질 셀룰로스, 수크로스, D-만니톨, 덱스트린, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필메틸 셀룰로스 및 폴리비닐피롤리돈을 들 수 있다. 바람직한 붕괴제의 예로는, 전분, 카르복시메틸 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스 칼슘, 가교된 카르멜로스 나트륨 및 카르복시메틸 전분 나트륨을 들 수 있다. 바람직한 용매의 예로는, 주사용 수, 알코올, 프로필렌 글리콜, 마크로골, 참기름 및 옥수수유를 들 수 있다. 바람직한 용해 보조제의 예로는, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, D-만니톨, 벤질 벤조에이트, 에탄올, 트리스아미노메탄, 콜레스테롤, 트리에탄올아민, 탄산나트륨 및 시트르산나트륨을 들 수 있다. 바람직한 현탁화제의 예로는, 스테아릴트리에탄올아민, 나트륨 라우릴 술페이트, 라우릴아미노프로피온산, 레시틴, 벤즈알코늄 클로리드, 벤즈에토늄 클로리드 및 모노스테아르산 글리세롤과 같은 계면활성제; 그리고 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 카르복시메틸 셀룰로스 나트륨, 메틸 셀룰로스, 히드록시메틸 셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스 및 히드록시프로필 셀룰로스와 같은 친수성 중합체를 들 수 있다. 바람직한 등장화제의 예로는, 염화나트륨, 글리세롤 및 D-만니톨을 들 수 있다. 바람직한 완충액의 예로는, 인산염, 아세트산염, 탄산염, 시트르산염 등의 완충용액을 들 수 있다. 바람직한 완화제의 예로는, 벤질 알코올을 들 수 있다. 바람직한 보존제의 예로는, 파라옥시벤조산 에스테르, 클로로부탄올, 벤질 알코올, 페네틸 알코올, 탈수소아세트산 및 소르브산을 들 수 있다. 바람직한 산화방지제의 예로는 아황산염 및 아스코르브산을 들 수 있다.

현탁화제, 용해 보조제, 안정화제, 등장화제, 보존제 등을 첨가함으로써, 본 발명의 화합물은 통상적으로 공지된 방법에 의해 정맥내, 경피 또는 근육내 주사액으로서 제조될 수 있다. 이러한 경우에, 통상적으로 공지된 방법에 의해 필요에 따라서 동결건조될 수 있다. 예를 들면, 사람에 대한 투여에 있어서, 본 발명의 화합물은 그대로 또는 적절하게 선택된 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및 희석제와 혼합하여 제조된 약제학적 조성물로서 안전하게 경구 또는 비경구 투여될 수 있다.

이러한 약제학적 조성물로는 경구 제제(예를 들면, 분말, 과립, 캡슐, 정제), 주사액, 점적 주입액, 외용 제제(예를 들면, 비용 제제, 경피 제제) 및 좌약(예를 들면, 직장 좌약, 질 좌약)을 들 수 있다.

이러한 제제는 약제학적 제조방법을 위한 통상적인 용도에서 통상적으로 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 화합물을 분산제(예를 들면, 미국 Atlas Powder사제 Tween 80, Nikko Chemicals Co., Ltd.제 HCO 60, 폴리에틸렌 글리콜, 카르복시메틸 셀룰로스, 나트륨 알기네이트), 보존제(예를 들면, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 벤질 알코올), 등장화제(예를 들면, 염화나트륨, 만니톨, 소르비톨, 글루코스) 및 기타 첨가제와 함께 수성 주사액으로서, 또는 올리브유, 참기름, 면실유 또는 옥수수유, 프로필렌 글리콜 등의 식물성 오일 중의 용액, 현탁액 또는 에멀션 중의 유성 주사액으로서 제조함으로써 주사액을 제조할 수 있다.

부형제(예를 들면, 락토스, 수크로스, 전분), 붕괴제(예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트), 바인더(예를 들면, 전분, 아라비아 고무, 카르복시메틸 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로스), 윤활제(예를 들면, 활석, 마그네슘 스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜 6000) 및 기타 첨가제의 첨가 이후에, 통상적으로 공지된 방법에 의해 본 발명의 화합물을 배합함으로써, 그리고 필요한 경우에는, 통상적으로 공지된 방법에 의해 맛의 차폐, 장용성 또는 서방성을 위하여 제품을 코팅함으로써 경구 제제를 제조할 수 있다. 이러한 목적을 위한 코팅제로서는, 예를 들면, 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 히드록시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 폴리옥시에틸렌 글리콜, Tween 80, Prulonic F68, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 히드록시프로필메틸 셀룰로스 프탈레이트, 히드록시메틸 셀룰로스 아세테이트 숙시네이트, Eudragit(독일 Rohm사제; 메타크릴산/아크릴산 공중합체) 및 염료(예를 들면, 산화철, 티타늄 디옥시드)를 들 수 있다. 장용성 제제를 위하여, 장용성 상과 약물-함유 상 사이에 2가지 상의 분리를 위한 중간 상을 통상적으로 공지된 방법에 의해 제공할 수 있다.

본 발명의 화합물을 통상적으로 공지된 방법에 의해 고체, 반고체 또는 액체 조성물로서 배합함으로써 외용 제제를 제조할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화합물을 그대로 또는 부형제(예를 들면, 글리콜, 만니톨, 전분, 미세결정질 셀룰로스), 증점화제(예를 들면, 천연 고무, 셀룰로스 유도체, 아크릴산 중합체) 및 기타 첨가제와의 혼합물로서 분말화함으로써 이러한 고체 조성물을 제조한다. 본 발명의 화합물을 주사액과 거의 동일한 방식으로 유성 또는 수성 현탁액으로서 제조함으로써 이러한 액체 조성물을 제조한다. 반고체 조성물은 바람직하게는 수성 또는 유성 겔이거나, 또는 연고이다. 이러한 모든 조성물은 pH 조절제(예를 들면, 탄산, 인산, 시트르산, 염산, 수산화나트륨), 보존제(예를 들면, 파라옥시벤조산 에스테르, 클로로부탄올, 벤즈알코늄 클로리드) 및 기타 첨가제를 함유할 수 있다.

본 발명의 화합물을 통상적으로 공지된 방법에 의해 유성 또는 수성 고체, 반고체 또는 액체 조성물로서 제조함으로써 좌약을 제조한다. 이러한 조성물을 위해 유용한 유성 기제로는 고급 지방산(예를 들면, 카카오 지방, 독일의 Dynamite Nobel Company제 우이텝솔), 중간 지방산(예를 들면, 독일의 Dynamite Nobel Company제 MIGLYOL), 및 식물성 오일(예를 들면, 참기름, 대두유, 면실유)의 글리세리드를 들 수 있다. 수성 기제로는, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜을 들 수 있다. 수성 겔용 기제로는, 예를 들면, 천연 고무, 셀룰로스 유도체, 비닐 중합체 및 아크릴산 중합체를 들 수 있다.

발명을 수행하기 위한 최량의 형태

이하 본 발명을 다음의 참조예, 실시예, 제조예 및 실험예에 의해 더욱 상세하게 기술하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

Varian GEMINI 200(200 MHz) 분광계, JEOL LAMBDA 300(300MHz) 분광계 또는 Bruker AM500(500MHz) 분광계를 사용하여 내부 표준으로서의 테트라메틸실란에 의해 ¹H-NMR 스펙트럼을 측정하고; 모든 δ값들은 ppm으로 나타낸다. 특별하게 달리 표시되지 않은 경우에는, "%" 는 중량 단위이다. 수율은 몰/몰%를 나타낸다.

여기에서 사용되는 기타 기호는 다음의 정의를 갖는다:

s: 단일선

d: 이중선

t: 삼중선

dt: 이중 삼중선

m: 다중선

br: 광폭부

TFA: 트리플루오로아세트산

THF: 테트라히드로푸란

Me: 메틸

Et: 에틸

용어 "실온"은 약 15 내지 25℃의 범위를 나타내지만, 이에 엄격하게 제한하는 것으로 이해해서는 안된다.

실시예

참조예 1

에틸 2-아미노-4-메틸-5-(4-니트로페닐)티오펜-3-카르복실레이트

4-니트로페닐아세톤(35.0g, 195mmol), 에틸 시아노아세테이트(23.8g, 195mmol), 암모늄 아세테이트(3.1g, 40mmol) 및 아세트산(9.1ml, 159mmol)의 혼합물을 24시간 동안 환류하면서 가열하고, Dean-Stark 트랩으로 반응을 통해 생성된 물을 제거하였다. 냉각 이후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하였고, 잔류물을 티클로로메탄과 탄산수소나트륨 수용액 사이에서 분배하였다. 유기 추출물을 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 오일 화합물을 수득하였다. 이렇게 수득된 오일을 에탄올 중에 용해한 후에 황(5.0g, 160mmol) 및 디에틸아민(16.0ml, 160mmol)을 첨가하고, 혼합물을 60 내지 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각한 후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 산출하고, 이것을 디클로로메탄과 탄산수소나트륨 수용액 사이에서 분배하였다. 유기 추출물을 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 미정제 생성물을 수득하고, 이것을 에테르-헥산으로부터 재결정화하여 표제 화합물을 적색 플레이트(22.2g, 52%)로서 수득하였다.

융점: 168-170℃(에테르-헥산으로부터 재결정화됨).

C₁₄H₁₄N₂O₄S에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 54.89 ; 4.61 ; 9.14

실측치: 54.83 ; 4.90 ; 9.09

참조예 2

5-메틸-6-(4-니트로페닐)-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

참조예 1에서 수득된 화합물(5.00g, 16.32mmol)의 피리딘(30ml) 중의 용액에 페닐 이소시아네이트(2.66ml, 24.48mmol)를 첨가하였다. 45℃에서 6시간 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔류물을 에탄올(6ml) 중에 용해시켰다. 이 용액에 28% 나트륨 메톡시드(7.86g, 40.80mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그리고나서, 2N-염산(25ml, 50mmol)을 첨가하고, 용매 에탄올을 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 여과하고, 물-에탄올로 세정하고, 진공 하에서 건조하고, 에탄올로부터 재결정화하여 표제 화합물을 황색 분말(6.09g, 98%)로서 수득하였다.

융점: > 300℃.

C₁₉H₁₃N₃O₄Sㆍ0.3H₂O에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 59.30 ; 3.56 ; 10.92

실측치: 59.56 ; 3.52 ; 10.93

참조예 3

1-(2,6-디플루오로벤질)-5-메틸-6-(4-니트로페닐)-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

참조예 2에서 수득된 화합물(52.54g, 0.131mmol)의 N,N-디메틸포름아미드(1.0L) 중의 용액에 탄산칼륨(19.00g, 0.138mmol), 요오드화 칼륨(22.90g, 0.138몰) 및 2,6-디플루오로벤질 클로리드(22.40g, 0.138몰)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득하고, 이것을 클로로포름과 염화나트륨 수용액 사이에서 분배하였다. 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 합한 추출물을 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 옅은 황색 결정(61.50g, 93%)으로서 수득하였다.

융점: 280-282℃.

C₂₆H₁₇N₃O₄SF₂에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 61.78 ; 3.39 ; 8.31

실측치: 61.67 ; 3.46 ; 8.21

참조예 4

5-브로모메틸-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-(4-니트로페닐)-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

참조예 3에서 수득된 화합물(30.34g, 0.060몰), N-브로모숙신이미드(12.81g, 0.072몰), ,'-아조비스이소부티로니트릴(1.15g, 0.007몰) 및 클로로벤젠(450ml)의 혼합물을 85℃에서 3시간 동안 교반하였다. 냉각한 후에, 반응 혼합물을 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고나서, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트로부터 재결정화하여 표제 화합물을 황색 침상 결정(80.21g, 100%)으로서 수득하였다.

융점: 228-229℃.

FAB-Mass m/z 584(MH)⁺

참조예 5

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-(4-니트로페닐)-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

참조예 4에서 수득된 화합물(80.00g, 0.119몰)의 N,N-디메틸포름아미드(600ml) 중의 용액에 에틸디이소프로필아민(27.00ml, 0.155몰) 및 벤질메틸아민(18.45ml, 0.143몰)을 빙냉과 함께 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 농축하고, 잔류물을 에틸 아세테이트와 탄산수소나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 황색 오일(74.90g, 100%)을 수득하고, 이것을 에틸 아세테이트로부터 재결정화하여 표제 화합물을 황색 침상물로서 수득하였다.

융점: 173-174℃.

C₃₄H₂₆N₄O₄SF₂ㆍ0.5H₂O에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 64.45 ; 4.29 ; 8.84

실측치: 64.50 ; 4.24 ; 8.82

참조예 6

6-(4-아미노페닐)-5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

참조예 5에서 수득된 화합물(3.00g, 4.80mmol)의 포름산(30ml) 중의 용액에 에테르 중의 1M 염화수소 용액(14.4ml, 14.4mmol) 및 10% 팔라듐-온-카본(palladium-on-carbon)을 빙냉과 함께 첨가하고, 2시간 동안 일정하게 교반하면서 실온에서 대기 조건 하에서 수소화를 수행하였다. 이 반응 혼합물을 셀라이트(Celite)를 통해 여과하고, 여액을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 디클로로메탄과 탄산수소나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하였다. 수층을 디클로로메탄으로 추출하고, 유기 추출물을 합하고, 건조(MgSO₄)하였다. 그리고나서, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 백색 결정(2.41g, 84%)으로서 수득하였다.

융점: 205-207℃.

C₃₄H₂₈N₄O₂SF₂ㆍ0.1AcOEtㆍ1.2H₂O에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 66.09 ; 5.03 ; 8.96

실측치: 66.93 ; 4.94 ; 8.67

참조예 7

5-클로로메틸-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

하기 실시예 화합물 No.1(2.00g, 3.00mmol)의 테트라히드로푸란(90ml) 중의 용액에 -78℃의 1-클로로에틸 클로로로포르메이트(0.42ml, 3.89mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 데우고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 클로로포름과 염화나트륨 수용액 사이에서 분배하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 백색 분말(1.68g, 96%)로서 수득하였다.

융점: 217-219℃.

FAB-Mass m/z 583(MH)⁺

참조예 8

참조예 6에서 수득된 화합물을 출발물질로서 사용하여, 다음의 참조예 화합물 No. 8-1 내지 8-3을 하기 실시예 1 및 2와 동일한 방식으로 수득하였다.

참조예 화합물 No. 8-1:

수율: 64%

융점: 190-194℃.

참조예 화합물 No. 8-2:

수율: 91%

융점: 210-215℃.

참조예 화합물 No. 8-3:

수율: 82%

융점: 254-257℃.

참조예 9

에틸 2-에톡시카르보닐아미노-4-메틸-5-(4-니트로페닐)티오펜-3-카르복실레이트

참조예 1에서 수득된 화합물(500mg, 1.63mmol)을 톨루엔(9ml) 중에 용해시킨 후에, 에틸 클로로포르메이트(0.19ml, 1.96mmol)를 첨가하고, 혼합물을 5시간 동안 환류 하에서 가열하였다. 냉각한 후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 황색 분말(90mg, 79%)로서 수득하였다.

융점: 130-131℃(에틸 아세테이트-헥산으로부터 재결정화됨).

참조예 10

에틸 2-[N-(2,6-디플루오로벤질)-N-에톡시카르보닐아미노]-4-메틸-5-(4-니트로페닐)티오펜-3-카르복실레이트

참조예 9에서 수득된 화합물(490mg, 1.30몰)의 N,N-디메틸포름아미드(20ml) 중의 용액에 탄산칼륨(196mg, 1.42몰), 요오드화 칼륨(236mg, 1.42몰) 및 2,6-디플루오로벤질 클로리드(232mg, 1.42mmol)를 첨가하고, 혼합물을 5시간 동안 실온에서 교반하였다. 이 반응 혼합물을 농축하고, 잔류물을 클로로포름과 염화나트륨 수용액 사이에서 분배하였다. 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하고, 수득된 비정질 분말을 메탄올로부터 재결정화하여 표제 화합물을 황색 분말상 결정(520mg, 79%)으로서 수득하였다.

융점: 91-92℃.

참조예 11

에틸 4-브로모메틸-2-[N-(2,6-디플루오로벤질)-N-에톡시카르보닐아미노]-5-(4-니트로페닐)티오펜-3-카르복실레이트

참조예 10에서 수득된 화합물(20g, 39.64몰), N-브로모숙신이미드(7.76g, 43.60몰), ,'-아조비스이소부티로니트릴(0.72g, 4.36몰) 및 사염화탄소(300ml)의 혼합물을 2시간 동안 100℃에서 교반하였다. 냉각한 후에, 이 반응 혼합물을 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 비정질 분말(23g, 100%)로서 수득하였다.

융점: 105-108℃.

FAB-Mass m/z 582(MH⁺).

참조예 12

에틸 4-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-2-[N-(2,6-디플루오로벤질)-N-에톡시카르보닐아미노]-5-(4-니트로페닐)티오펜-3-카르복실레이트

참조예 11에서 수득된 화합물(2.0g, 3.43mmol)의 N,N-디메틸포름아미드(20ml) 중의 용액에 에틸디이소프로필아민(0.90ml, 5.15mmol) 및 벤질메틸아민(0.53ml, 4.11mmol)을 빙냉과 함께 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 이 반응 혼합물을 농축하고, 잔류물을 에틸 아세테이트와 탄산수소나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 황색 오일(2.1g, 48%)로서 수득하였다.

참조예 13

에틸 5-(4-아미노페닐)-4-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-2-[N-(2,6-디플루오로벤질)-N-에톡시카르보닐아미노]티오펜-3-카르복실레이트

참조예 12에서 수득된 화합물(10.0g, 16.03mmol)의 포름산(100ml) 중의 용액에 에테르 중의 1M HCl 용액(48ml, 48mmol) 및 10% 팔라듐-온-카본(1000mg)을 빙냉과 함께 첨가하고, 5시간 동안 실온에서 대기 조건 하에서 수소화를 수행하였다. 이 반응 혼합물을 셀라이트의 도움으로 여과하고, 여액을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 디클로로메탄과 탄산수소나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하고, 수층을 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 건조하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 백색 비정질 분말(7.9g, 83%)로서 수득하였다.

참조예 14

에틸 4-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-2-[N-(2,6-디플루오로벤질)-N-에톡시카르보닐아미노]-5-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]티오펜-3-카르복실레이트

참조예 13에서 수득된 화합물(0.9g, 1.52mmol)의 디클로로메탄(20ml) 중의 용액에 트리에틸아민(0.43ml, 3.09mmol)을 빙냉과 함께 첨가하였다. 이 용액에 N,N'-카르보닐디이미다졸(0.492g, 3.03mmol)을 빙냉과 함께 첨가하고, 혼합물을 실온까지 데우고, 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 다시 빙냉하고, O-메틸히드록실아민 염산염(1.27g, 15.2mmol), 트리에틸아민(2.2ml, 15.8mmol) 및 디클로로메탄(5ml)을 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 실온까지 데우고, 3시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 클로로포름과 탄산수소나트륨 수용액 사이에서 분배하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 옅은 황색 비정질 분말(0.93g, 92%)로서 수득하였다.

참조예 15

4-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-2-[N-(2,6-디플루오로벤질)-N-에톡시카르보닐아미노]-5-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]티오펜-3-카르복실산

참조예 14에서 수득된 화합물(0.1g, 0.15mmol)의 에탄올(2.5ml) 중의 용액에 물 중의 2N-수산화나트륨 용액(0.37ml, 0.74mmol)을 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 추가로 18시간 동안 55℃에서 교반하였다. 냉각한 후에, 반응 혼합물을 2N-염산으로 중화시키고, 에틸 아세테이트와 탄산수소나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 무색 비정질 분말(0.078g, 81%)로서 수득하였다.

C₃₂H₃₂N₄O₆SF₂에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 60.18 ; 5.05 ; 8.77

실측치: 60.00 ; 5.18 ; 8.83

참조예 16

4-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-2-[N-(2,6-디플루오로벤질)-N-에톡시카르보닐아미노]-3-(4-메톡시메톡시페닐아미노카르보닐)-5-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]티오펜

참조예 15에서 수득된 화합물(0.80g, 1.23mmol), 트리에틸아민(0.88ml, 6.31mmol) 및 4-메톡시메톡시아닐린(0.96g, 6.27mmol)의 디클로로메탄(25ml) 중의 용액에 벤조트리아졸-1-일옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBOP) (0.72g, 1.38mmol)를 빙냉과 함께 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 데우고, 14시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 클로로포름과 탄산수소나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 옅은 황색 비정질 분말(0.82g, 93%)로서 수득하였다.

참조예 17

에틸 2-[N-(2,6-디플루오로벤질)-N-에톡시카르보닐아미노]-4-[N-(2-메톡시에틸)-N-메틸아미노메틸]-5-(4-니트로페닐)티오펜-3-카르복실레이트

참조예 11에서 수득된 화합물(12.82g 22.0mmol)의 용액에 에틸 아세테이트(120ml) 중의 에틸 디이소프로필아민(7.7ml, 44.2mmol) 및 N-(2-메톡시에틸)메틸아민(3.5ml, 32.6mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 탄산수소나트륨 포화 용액 사이에서 분배하고, 수층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 갈색 오일(10.27g, 79%)로서 수득하였다.

FAB-Mass m/z 592(MH)⁺

참조예 18

1-(2,6-디플루오로벤질)-5-[N-(2-메톡시에틸)-N-메틸아미노메틸]-3-(3,4-메틸렌디옥시페닐)-6-(4-니트로페닐)티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

톨루엔(80ml) 중의 3,4-메틸렌디옥시아닐린(3.30g, 24.3mmol)의 용액에 헥산 중의 1.01M 디메틸알루미늄 클로리드의 용액(22.2ml, 22.0mmol)을 빙냉과 함께 첨가하였다. 이 혼합물을 빙냉과 함께 1시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물에 참조예 17에서 수득된 화합물(2.20g 3.70mmol)의 톨루엔(30ml) 중의 용액을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수에 붓고, 에틸 아세테이트와 탄산수소나트륨 포화 용액 사이에서 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(Na₂SO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 미정제 생성물을 수득하고, 이것을 에틸 아세테이트-헥산으로부터 재결정화하여 표제 화합물을 갈색 결정(0.60g, 68%)으로서 수득하였다.

융점: 190-192℃.

C₃₁H₂₆N₄O₇SF₂에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 58.49 ; 4.12 ; 8.80

실측치: 58.50 ; 3.91 ; 8.61

참조예 19

6-(4-아미노페닐)-1-(2,6-디플루오로벤질)-5-[N-(2-메톡시에틸)-N-메틸아미노메틸]-3-(3,4-메틸렌디옥시페닐)티에노[2,3-d]피리미딘-2,4-(1H,3H)-디온

참조예 18(1.56g, 2.50mmol)에서 수득된 화합물의 포름산(30ml) 중의 용액에 에테르 중의 1M 염화수소(7.4ml, 7.4mmol)의 용액 및 10% 팔라듐-온-카본(200mg)을 빙냉과 함께 첨가하고, 2시간 동안 일정하게 교반하면서 실온에서 대기 조건 하에서 수소화를 수행하였다. 이 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 클로로포름과 탄산수소나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하였다. 수층을 클로로포름으로 추출하고, 유기 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(Na₂SO₄)하였다. 그리고나서, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 미정제 생성물을 수득하고, 이것을 에틸 아세테이트-헥산으로부터 재결정화하여 표제 화합물을 갈색 결정(1.46g, 96%)으로서 수득하였다.

융점: 200-202℃.

C₃₁H₂₈N₄O₅SF₂ㆍ1.0H₂O에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 59.61 ; 4.84 ; 8.97

실측치: 59.27 ; 4.53 ; 8.48

참조예 20

5-클로로메틸-1-(2,6-디플루오로벤질)-3-(3,4-에틸렌디옥시페닐)-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

다음의 실시예 8에서 수득된 화합물을 출발물질로서 사용하여, 표제 화합물을 참조예 7과 동일한 방식으로 수득하였다.

수율: 63%

융점: 204-209℃.

실시예 1

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온(실시예 화합물 No.1)

참조예 6에서 수득된 화합물(5.0g, 8.41mmol)의 디클로로메탄(120ml) 중의 용액에 트리에틸아민(2.34ml, 16.82mmol)을 빙냉과 함께 첨가한 후에 교반하였다. 이 반응 혼합물에 N,N'-카르보닐디이미다졸(2.73g, 16.82mmol)을 빙냉과 함께 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 데우고, 42시간 동안 교반하였다. 그리고나서, 혼합물을 다시 빙냉하고, O-메틸히드록실아민 염산염(7.02g, 84.08mmol) 및 트리에틸아민(11.7ml, 84.08mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 데우고, 3시간 동안 교반하였다. 그리고나서, 이 반응 혼합물을 클로로포름과 탄산수소나트륨 포화 용액 사이에서 분배하였다. 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 옅은 황색 고체를 수득하고, 이것을 클로로포름-에테르로부터 재결정화하여 표제 화합물을 백색 결정(4.52g, 80%)으로서 수득하였다.

융점: 204-205℃.

C₃₆H₃₁N₅O₄SF₂에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 64.75 ; 4.68 ; 10.49

실측치: 64.61 ; 4.67 ; 10.31

실시예 2

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 염산염(실시예 화합물 No.2)

실시예 1에서 수득된 백색 결정(38.34g, 57.42mmol)의 디클로로메탄(800ml) 중의 용액에 염화수소(디에틸 에테르 중의 1M 용액)(100ml)를 빙냉과 함께 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 동일한 온도에서 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔류물을 메탄올-에테르로부터 재결정화하여 표제 화합물을 백색 분말(40.0g, 99%)로서 수득하였다.

융점: 182-185℃.

C₃₆H₃₁N₅O₄SF₂ㆍHClㆍ0.5H₂O에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 60.63 ; 4.66 ; 9.82

실측치: 60.45 ; 4.68 ; 9.62

FAB-Mass m/z 668(MH)⁺

실시예 3

참조예 6에서 수득된 화합물을 출발물질로서 사용하여, 실시예 화합물 No. 3-1 내지 3-9를 실시예 1 및 2와 동일한 방식으로 수득하였다.

실시예 화합물 No. 3-1:

수율: 91%

융점: 175-180℃[염산염].

실시예 화합물 No. 3-2:

수율: 81%

융점: 179-182℃[염산염].

실시예 화합물 No. 3-3:

수율: 80%

융점: 172-177℃[염산염].

실시예 화합물 No. 3-4:

수율: 99%

융점: 193-197℃[염산염].

실시예 화합물 No. 3-5:

수율: 91%

융점: 201-204℃[염산염].

실시예 화합물 No. 3-6:

수율: 89%

융점: 210-215℃[염산염].

실시예 화합물 No. 3-7:

수율: 89%

융점: 199-200℃[유리 아민].

실시예 화합물 No. 3-8:

수율: 93%

융점: 195-198℃[염산염].

실시예 화합물 No. 3-9:

수율: 95%

융점: 165-170℃[염산염].

실시예 4

참조예 7에서 수득된 화합물을 출발물질로서 사용하여 실시예 화합물 No. 4-1 내지 4-5를 참조예 5와 동일한 방식으로 수득하였다.

실시예 화합물 No. 4-1:

수율: 80%

융점: 177-180℃[염산염].

실시예 화합물 No. 4-2:

수율: 77%

융점: 205-210℃[염산염].

실시예 화합물 No. 4-3:

수율: 77%

융점: 182-185℃[염산염].

실시예 화합물 No. 4-4:

수율: 14%

융점: 270℃(분해)[염산염].

실시예 화합물 No. 4-5:

수율: 26%

융점: 260℃(분해)[유리 아민].

실시예 5

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-히드록시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

참조예 6에서 수득된 화합물(2.0g, 3.36mmol)의 디클로로메탄(40ml) 중의 용액에 트리에틸아민(0.94ml, 6.73mmol)을 빙냉과 함께 첨가한 후에, 교반하였다. 그리고나서, N,N'-카르보닐디이미다졸(1.09g, 6.73mmol)을 반응 혼합물에 빙냉과 께 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 데우고, 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 다시 빙냉하고, O-(2,4-디메톡시벤질)히드록실아민(3.11g, 16.98mmol)을 첨가하였다. 그리고나서, 반응 혼합물을 실온으로 되돌리고, 19시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 클로로포름과 탄산수소나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 디클로로메탄(50ml) 중의 잔류물 용액에 트리플루오로아세트산(5ml)을 첨가한 후, 실온에서 20 분간 교반하였다. 이 반응 혼합물을 클로로포름과 탄산수소나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압하에 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 백색 비정질 분말을 수득하고, 이것을 클로로포름-에테르로부터 재결정화하여 표제 화합물을 백색 결정(2.2g, 100%)으로서 수득하였다.

융점: 164-165℃

FAB-Mass m/z 654(MH)⁺

실시예 6

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-히드록시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 염산염

실시예 5에서 수득된 백색 결정(60mg, 0.094mmol)의 디클로로메탄(5ml) 중의 용액 내에 염화수소(디에틸 에테르 중의 1M 용액)(0.2ml)를 빙냉과 함께 첨가한 후에, 10분 동안 동일한 온도에서 교반하였다. 이 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔류물을 메탄올-에테르로부터 재결정화하여 표제 화합물을 백색 분말(72mg, 100%)로서 수득하였다.

융점: 180-186℃.

C₃₅H₂₉N₅O₄SF₂ㆍ0.1HClㆍ1.0H₂O에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 59.36 ; 4.55 ; 9.89

실측치: 59.37 ; 4.60 ; 9.87

실시예 7

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-[3-(2-히드록시에틸)우레이도]페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

실시예 화합물 No. 3-7(900mg, 1.24mmol)의 THF(20ml) 중의 용액에 물 중의 5N-수산화칼륨 용액(7ml)을 빙냉과 함께 첨가한 후, 60 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 염화나트륨 포화 용액 사이에서 분배하고, 수층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 추출하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 백색 비정질 분말을 수득하고, 이것을 클로로포름-메탄올-에테르로부터 재결정화하여 표제 화합물을 백색 결정(850mg, 88%)으로서 수득하였다.

융점: 220-222℃.

C₃₇H₃₃N₅O₄SF₂에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 65.18 ; 4.88 ; 10.27

실측치: 65.08 ; 5.01 ; 10.29

FAB-Mass m/z 682(MH)⁺

실시예 8

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-3-(3,4-에틸렌디옥시페닐)-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온

3,4-에틸렌디옥시아닐린(3.90g, 25.8mmol)의 디클로로메탄(100ml) 중의 용액에 헥산 중의 1.01M 디메틸알루미늄 클로리드 용액(25.5ml, 25.8mmol)을 빙냉 하에서 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반과 함께 실온까지 데웠다. 이 용액에 참조예 14에서 수득된 화합물(3.44g, 5.16mmol)의 디클로로메탄(60ml) 중의 용액을 첨가하고, 혼합물을 1일 동안 실온에서 교반하였다. 이 반응 혼합물을 클로로포름과 염화나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 백색 비정질 분말(3.2g, 85%)로서 수득하였다.

융점: 185-187℃.

C₃₈H₃₄N₅O₆SF₂ClㆍH₂O에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 58.50 ; 4.65 ; 8.98

실측치: 58.73 ; 4.48 ; 9.07

실시예 9

참조예 14에서 수득된 화합물을 출발물질로서 사용하여, 실시예 화합물 No. 9-1 내지 9-2를 실시예 8과 동일한 방식으로 수득하였다.

실시예 화합물 No. 9-1:

수율: 60%

융점: 148-151℃[유리 아민].

실시예 화합물 No. 9-2:

수율: 54%

융점: 169-170℃[염산염].

실시예 10

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-3-[4-(메톡시메톡시)페닐]-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]티에노[2,3-d]피리미딘-2,4-(1H,3H)-디온(실시예 화합물 No. 10)

참조예 16에서 수득된 화합물(0.84g, 1.09mmol)의 무수 메탄올(50ml) 중의 용액에 무수 메탄올(20ml) 중의 나트륨 메톡시드(2.10g, 10.4mmol)의 용액을 빙냉과 함께 첨가하였다. 이 혼합물을, 온도를 실온까지 데우면서, 2.5시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 1N-염산(10.9ml, 10.9mmol)으로 중화시키고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 클로로포름과 염화나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트-이소프로필 에테르로부터 재결정화하여 표제 화합물을 백색 결정(0.632g, 80%)으로서 수득하였다.

융점: 189-191℃.

C₃₈H₃₅N₅O₆SF₂에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 62.71 ; 4.85 ; 9.62

실측치: 62.56 ; 4.69 ; 9.33

실시예 11

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-3-(4-히드록시페닐)-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]티에노[2,3-d]피리미딘-2,4-(1H,3H)-디온

실시예 화합물 No. 10(0.35g, 0.48mmol)을 아세톤(10ml) 중에 용해시키고나서, 6N-염산(1.0ml, 6.0mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 6시간 동안 실온에서 교반하고, 물 중의 2N-수산화나트륨 용액(3ml, 6.0mmol)으로 빙냉과 함께 중화하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 클로로포름과 염화나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하고, 수층을 클로로포름으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 무색 비정질 분말(0.18g, 55%)을 수득하고, 이것을 클로로포름-메탄올로부터 재결정화하여 표제 화합물을 백색 결정(0.067g)으로서 수득하였다.

융점: 178-182℃.

C₃₆H₃₁N₅O₅SF₂ㆍ0.4H₂O에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 62.58 ; 4.64 ; 10.14

실측치: 62.78 ; 4.57 ; 9.86

실시예 12

5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-메톡시-3-메톡시카르보닐)우레이도]페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4-(1H,3H)-디온

실시예 화합물 No. 1(0.334g, 0.5mmol)의 테트라히드로푸란(10ml) 중의 용액에 트리에틸아민(0.08ml, 0.6mmol) 및 메틸 클로로포르메이트(0.0425ml, 0.55mmol)를 빙냉과 함께 첨가하고, 혼합물을 빙냉과 함께 1시간 동안 교반하고나서, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물에 트리에틸아민(0.08ml, 0.6mmol) 및 에틸 클로로포르메이트(0.0425ml, 0.55mmol)를 첨가하고, 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하고나서 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물에 염화나트륨 수용액을 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 합하고, 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 미정제 생성물을 수득하고, 이것을 에틸 아세테이트-디에틸 에테르로부터 재결정화하여 표제 화합물을 무색 결정(0.204g, 56%)으로서 수득하였다.

융점: 150-152℃.

C₃₈H₃₃N₅O₆SF₂에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 62.89 ; 4.58 ; 9.65

실측치: 62.68 ; 4.69 ; 9.44

실시예 13

1-(2,6-디플루오로벤질)-5-[N-(2-메톡시에틸)-N-메틸아미노메틸]-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4-(1H,3H)-디온

참조예 7에서 수득된 화합물(0.86g, 1.48mmol)의 N,N-디메틸포름아미드(15ml) 중의 용액에 에틸디이소프로필아민(0.34ml 1.92mmol), 요오드화 칼륨(245mg, 1.48mmol) 및 N-(2-메톡시에틸)메틸아민(0.19ml, 1.78mmol)을 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 이 반응 혼합물을 농축하여 잔류물을 수득하고, 이것을 에틸 아세테이트와 탄산수소나트륨 포화 수용액 사이에서 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 추출물을 염화나트륨 수용액으로 세정하고, 건조(MgSO₄)하고, 용매를 감압 하에서 증류하여 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 백색 결정(840mg, 89%)으로서 수득하였다.

융점: 161-163℃.

C₃₂H₃₁N₅O₅SF₂ㆍ0.5H₂O에 대한 원소 분석

C(%) H(%) N(%)

계산치: 59.62 ; 5.00 ; 10.86

실측치: 59.73 ; 4.99 ; 10.85

실시예 14

1-(2,6-디플루오로벤질)-3-(3,4-에틸렌디옥시페닐)-5-[N-(2-메톡시에틸)-N-메틸아미노메틸]-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]티에노[2,3-d]피리미딘-2,4-(1H,3H)-디온

참조예 20에서 수득된 화합물을 출발물질로서 사용하여, 표제 화합물을 실시예 13과 동일한 방식으로 수득하였다.

수율: 79%

융점: 155-156℃[유리 아민].

실시예 15

1-(2,6-디플루오로벤질)-5-[N-(2-메톡시에틸)-N-메틸아미노메틸]-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]-3-(3,4-메틸렌디옥시페닐)티에노[2,3-d]피리미딘-2,4-(1H,3H)-디온

참조예 19에서 수득된 화합물을 출발물질로서 사용하여, 표제 화합물을 실시예 1과 동일한 방식으로 수득하였다.

수율: 72%

융점: 150-152℃[유리 아민]

제조예 1

실시예 화합물 No. 1 100mg, 락토스 165mg, 옥수수 전분 25mg, 폴리비닐 알코올 4mg 및 마그네슘 스테아레이트 1mg을 사용하여, 통상적인 방법에 의해 정제를 제조한다.

제조예 2

실시예 화합물 No. 2(5g)를 증류수 중에 용해시켜 주사액의 총부피가 100ml가 되도록 한다. 이 용액을 0.22㎛ 멤브레인 필터(Sumitomo Electric Industries, Ltd. 또는 Sartorius제)를 통해 무균 여과하고, 세정된 무균 유리병당 2ml로 분배한 후, 통상적인 방법에 의해 동결-건조하여 100mg/유리병 동결-건조된 주사용 제제를 산출한다.

제조예 3

실시예 화합물 No. 4-2 100mg, 락토스 165mg, 옥수수 전분 25mg, 폴리비닐 알코올 4mg 및 마그네슘 스테아레이트 1mg을 사용하여, 통상적인 방법에 의해 정제를 제조한다.

제조예 4

실시예 화합물 No. 4-2(5g)를 증류수 중에 용해시켜 주사액의 총부피가 100ml가 되도록 하였다. 이 용액을 0.22㎛ 멤브레인 필터(Sumitomo Electric Industries, Ltd. 또는 Sartorius제)를 통해 무균 여과하고, 세정된 무균 유리병당 2ml로 분배한 후, 통상적인 방법에 의해 동결-건조하여 100mg/유리병 동결-건조된 주사용 제제를 산출한다.

제조예 5

(1) 실시예 화합물 No. 1 또는 No. 4-2 5g

(2) 락토스/결정질 셀룰로스(입자) 330g

(3) D-만니톨 29g

(4) 저치환 히드록시프로필 셀룰로스 20g

(5) 활석 25g

(6) 히드록시프로필 셀룰로스 50g

(7) 아스파르탐 3g

(8) 이칼륨 글리시리지네이트 3g

(9) 히드록시프로필메틸 셀룰로스 2910 30g

(10) 산화티탄 3.5g

(11) 황색 철 세스퀴옥시드 0.5g

(12) 경질 규산 무수물 1g

성분 (1), (3), (4), (5), (6), (7) 및 (8)을 순수 중에 현탁화 또는 용해시키고, 코어 입자 (2) 상에 코팅시켜 염기성 미세 서브틸레(subtilae)를 수득하고, 이어서 이를 성분 (9) 내지 (11)로 추가로 코팅하여, 코팅된 미세 서브틸레를 수득한 후, 성분 (12)와 혼합하여 화합물의 1 % 미세 서브틸레 500 g을 수득한다. 이러한 서브틸레를 500 mg씩 나누어 포장한다.

실험예 1

(1) ¹²⁵I-류프로렐린의 제조

10 ㎕의 3 ×10^-4 M 류프로렐린 수용액 및 10 ㎕의 0.01 mg/ml 락토퍼옥시다아제를 함유하는 튜브에 Na¹²⁵I 의 용액 10 ㎕(37 MBq)을 첨가하였다. 교반 후, 10 ㎕의 0.001 % H₂O₂를 첨가하고, 실온에서 20 분간 반응을 수행하였다. 700 ㎕의 0.05 % TFA(트리플루오로아세트산) 용액을 첨가하여 반응을 중단시킨 후, 역상 HPLC에 의해 정제한다. 사용된 HPLC 조건이 이하에 나타나 있다. ¹²⁵I-류프로렐린은 26 내지 27 분의 체류 시간으로 용출되었다.

칼럼: TSKgel ODS-80^TM (TM 은 등록 상표를 나타내고; 이하에도 동일하게 적용됨) CTR (4.6 mm × 10 cm)

용출액: 용매 A (0.05 % TFA)

용매 B (40 % CH₃CN-0.05 % TFA)

0 분(100 % 용매 A) - 3 분(100 % 용매 A) - 7 분(50 % 용매 A + 50 % 용매 B) - 40 분(100 % 용매 B)

용출 온도: 실온

용출 속도: 1 ml/분

(2) GnRH 수용체를 함유하는 쥐 뇌하수체 전엽 호르몬 막분획의 제조

뇌하수체선의 전엽을 40 마리의 위스타 쥐(생후 8 주, 수컷)으로부터 분리하고, 빙냉된 균질화물 완충액[25 mM 트리스(트리스(히드록시메틸)아미노메탄)-HCl, 0.3 M 수크로스, 1 mM EGTA(글리콜-에테르디아민-N,N,N',N'-테트라아세트산), 0.25 mM PMSF(페닐메틸술포닐 플루오리드), 10 U/ml 아프로티닌, 1 ㎍/ml 펩스타틴, 20 ㎍/ml 류펩틴, 100 ㎍/ml 포스포라미돈, 0.03 % 나트륨 아지드, pH 7.5]으로 세정하였다. 뇌하수체 조직을 2 ml의 균질화물 완충액에 부유시키고, 폴리트론 균질화기를 사용하여 균질화하였다. 균질화물을 700 x g 에서 15 분간 원심분리하였다. 상청액을 초원심분리 튜브에 취하고, 100,000 x g에서 1 시간 동안 원심분리하여 막분획 펠렛을 수득하였다. 이 펠렛을 2 ml의 분석시험 완충액[25 mM 트리스-HCl, 1 mM EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산), 0.1 % BSA(소 혈청 알부민), 0.25 mM PMSF, 1 ㎍/ml 펩스타틴, 20 ㎍/ml 류펩틴, 100 ㎍/ml 포스포라미돈, 0.03 % 나트륨 아지드, pH 7.5]에 현탁시키고, 현탁액을 100,000 x g에서 1 시간 동안 원심분리하였다. 펠렛으로서 회수된 막분획을 -80 ℃로 유지된 10 ml의 분석시험 완충액에 부분씩 나누어 다시 현탁시키고, 필요시에 해동하였다.

(3) 인간 GnRH 수용체를 함유하는 CHO(중국 햄스터 난소) 세포막 분획의 제조

인간 GnRH 수용체 발현 CHO 세포(10⁹ 세포)를 5 mM EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산)가 첨가된 인산염 완충액 염수(PBS-EDTA)에 현탁시키고, 100 x g에서 5 분간 원심분리하였다. 세포 펠렛에 10 ml의 세포 균질화물 완충액(10 mM NaHCO₃, 5mM EDTA, pH 7.5)를 첨가한 후, 폴리트론 균질화기를 사용하여 균질화하였다. 400 x g에서 15 분간 원심분리한 후, 상청액을 초원심분리 튜브로 이동시키고, 100,000 x g에서 1 시간 동안 원심분리하여, 막분획 침전물을 수득하였다. 이 침전물을 2 ml의 분석시험 완충액에 현탁시키고, 100,000 x g에서 1 시간 동안 원심분리하였다. 침전물로서 회수된 막분획을 20 ml의 분석시험 완충액에 다시 현탁시키고, 분배하고, -80 ℃로 저장하고 사용하기 전에 해동하였다.

(4) ¹²⁵I-류프로렐린 결합 저해율의 측정

상기 (2) 및 (3)에서 제조한 쥐 및 인간 막분획을 분석시험 완충액으로 희석하여 200 ㎍/ml 희석액을 수득하고, 이어서 이를 튜브당 188 ㎕로 분배하였다. 쥐 뇌하수체 전엽 막분획을 사용하는 경우, 각 튜브에 0.1 mM 화합물의 60% DMSO(디메틸 술폭시드) 중의 용액 2 ㎕ 및 38 nM ¹²⁵I-류프로렐린 10 ㎕을 동시에 첨가하였다. 발현된 인간 GnRH 수용체를 가진 CHO의 세포막 분획을 사용하는 경우, 각 튜브에 2 mM 화합물의 60% DMSO 중의 용액 2 ㎕ 및 38 nM ¹²⁵I-류프로렐린 10 ㎕을 동시에 첨가하였다. 최대 결합량을 측정하기 위해, 60% DMSO 2 ㎕ 및 38 nM ¹²⁵I-류프로렐린 10 ㎕의 반응 혼합물을 제조하였다. 비특이적 결합량을 측정하기 위해, 100 μM 류프로렐린의 60% DMSO 중의 용액 2 ㎕ 및 38 nM ¹²⁵-I 류프로렐린 10 ㎕의 반응 혼합물을 제조하였다.

쥐 뇌하수체 전엽 막분획을 사용하는 경우, 반응을 4 ℃에서 90 분간 수행하였다. 발현된 인간 GnRH 수용체를 가진 CHO의 막분획을 사용하는 경우, 반응을 25 ℃에서 60 분간 수행하였다. 각 반응 후, 반응 혼합물을 흡출하고 폴리에틸렌이민 처리된 와트만 유리 필터(GF-F)를 통해 여과시켰다. 여과 후, 여과지에 남아있는 ¹²⁵I-류프로렐린의 방사능을 -카운터로 측정하였다.

(TB-SB)/(TB-NSB) ×100(SB = 첨가된 화합물의 방사능, TB=최대 결합 방사능, NSB = 비특이적 결합 방사능)이라는 식으로 계산하여 각 시험 화합물의 결합 저해율(%)을 찾았다. 또한, 시험 물질의 농도를 변화시켜서 저해율을 측정하고, 화합물의 50% 저해 농도(IC₅₀ 값)는 힐 플롯(Hill plot)으로부터 계산하였다. 결과를 하기에 나타내었다.

시험 화합물	결합 저해율(%)		IC₅₀값 (μM)
시험 화합물	쥐(1μM)	인간(20μM)	쥐	인간
실시예 화합물 No.2	27	NT	NT	0.0001
실시예 화합물 No.4-2	64	NT	0.5	0.0002

NT: 측정되지 않음

실험예 2

거세한 원숭이의 혈청 LH의 저해

실시예 화합물 No. 2를 거세한 수컷 시노몰구스 원숭이(마카카 파쉬쿨라리스)에 경구 투여하고, 혈청 LH를 정량하였다. 실험시에 생후 4년 9 개월 내지 6년 3 개월인 수컷 시노몰구스 원숭이를 실험 3 개월 이상 전에 거세하였다. 시험 동물[n = 3]에게는 1 %의 최종 농도에서 0.5 % 메틸 셀룰로스에 현탁된 화합물 III mg/kg을 경구 투여하고, 대조 동물[n = 2]에게는 0.5% 메틸 셀루로스 분산액 단독을 3 ml/kg 경구 투여한다. 투여 24 시간 전과 투여 직전 및 투여 후 2, 4, 6, 8, 24 및 48 시간에, 헤파린 처리된 혈청 샘플을 위해 대퇴부 정맥을 통해 혈액을 수집하고, 즉시 동결 조건하에 저장하였다.

마우스 정소 세포를 사용하여 생물학적 검정에 의해 혈청 LH 농도를 측정하였다. 수컷 BALB/c 마우스(생후 8 내지 9 주)들로부터 정소 세포를 수집하고, 정소당 20 mM HEPES 및 0.2 % BSA를 함유하는 1 ml의 둘베코(Dulbecco)의 변형된 이글 매질(DMEM-H)로 3 회 세정하였다. 37 ℃에서 1 시간 동안 배양한 후, 세포를 나일론 메쉬 필터(70 ㎛)에 통과시키고, 8 ×10⁵ 세포/튜브로 시험관에 분배하였다. 0.4 ml의 DMEM-H로 세포를 2 회 세정한 후, 표준 LH로서 말 LH(Sigma Company) 또는 시험 샘플로서 미리 300 배 희석한 원숭이 혈청을 함유하는 0.4 ml의 DMEM-H 용액을 첨가한 후, 37 ℃에서 2 시간 동안 반응시켰다. 배지 상청액 중의 테스토르테론 농도를 방사면역분석(CIS Diagnostics Company)에 의해 측정하고, 시험 원숭이 혈청 중의 LH 농도를 표준 말 LH에 대한 표준 곡선으로부터 계산하였다.

결과를 도 1에 함께 나타내었다.

LH 농도는 각 개별 시노몰구스 원숭이에 투여하기 직전의 기준 LH 농도의 백분율(%)로 표시하고, 0 으로 표시한(화살표로 표시됨) 투여 시간과 함께 시간 진행에 따라 나타내어지고, 투여 전후의 값은 각각 마이너스 및 플러스 부호로 표시된다. 대조군-1(--) 및 대조군-2(--)를 0.5% 메틸셀룰로스 분산액(3 ml/kg)만으로 경구 투여하는 한편, 화합물군-1(-△-), 화합물군-2(--) 및 화합물군-3(--)을 유사하게 0.5% 메틸셀룰로스 중의 실시예 화합물 No.2의 분산액(30 mg/kg, 3 ml/kg)으로 한다.

대조군은 투여후에도 혈청 LH 농도에서 변화를 거의 나타내지 않았다. 한편 화합물군에서는, 혈청 LH 농도가 투여 직후부터 시작하여 급격히 떨어지고, 투여 24 시간 후에는 기준의 20% 이하로 떨어진다. 이어서 투여 48 시간 후에는 혈청 LH 농도의 재상승이 관찰되었다.

상기 결과들은 경구 투여된 실시예 화합물 No. 2가 혈액 LH 농도에 대해 상당한 감소 효과를 가진다는 것을 보여준다.

상기 결과들로부터, 본 발명의 화합물이 뇌하수체 LH-RH 수용체를 길항화하여, Lh-RH 자극을 시상하부로부터 방어하여 LH 방출을 저해한다는 것이 분명하다.

본 발명의 화합물은 우수한 고나도프로핀 방출 호르몬 길항 활성을 가진다. 이는 또한 경구 흡수성이 우수하고 안정성과 약학동태학이 뛰어나다. 저독성으로 안정성도 우수하다. 따라서 본 발명의 화합물은 호르몬 의존성 질환 등의 예방약 또는 치료제로서 사용할 수 있다. 구체적으로 성호르몬 의존성 암(예, 전립선암, 자궁암, 유방암, 조발청춘기 등), 전립선 비대증, 자궁근종, 자궁내막증, 조발청춘기, 무월경, 다방성 난소 증후군, 구진 등에 대한 예방약 또는 치료제로서, 또는 임신 조절제(예, 피임약), 불임 치료제 또는 월경 조절제로서 유효하다. 또한 축산 분야에서 동물의 발정기 조절제, 육류 식품 품질 개선제 또는 동물 성장 조절제로서도 유효하고, 수산 분야에서 어류의 산란 촉진제로서도 유효하다.

도 1은 시험 원숭이 혈장 중의 LH 백분율 농도를 나타낸다. 도에서, --는 대조군-1, --는 대조군-2, -△-는 화합물군-1, --는 화합물군-2, 그리고 --는 화합물군-3을 각각 나타낸다.

Claims

하기 화학식의 화합물 또는 그 염:

[식에서, R¹ 및 R²는 각각 수소 원자, 히드록시기, C_1-4 알콕시기, C_1-4 알콕시-카르보닐기 또는 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기를 나타내고;

R³는 수소 원자, 할로겐 원자, 히드록시기 또는 치환될 수 있는 C_1-4 알콕시기를 나타내거나; 또는 인접한 2개의 R³는 함께 C_1-4 알킬렌디옥시기를 형성할 수 있고;

R⁴는 수소 원자 또는 C_1-4 알킬기를 나타내고;

R⁶는 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기 또는 하기 화학식의 기를 나타내고:

(식에서, R⁵는 수소 원자를 나타내거나 또는 R⁴ 및 R⁵는 함께 헤테로고리를 형성할 수 있다);

n은 0 내지 5의 정수를 나타낸다]

(단, 5-(N-벤질-N-메틸아미노메틸)-1-(2,6-디플루오로벤질)-6-[4-(3-메톡시우레이도)페닐]-3-페닐티에노[2,3-d]피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 또는 이의 염은 배제됨).
제 1 항에 있어서, 하기 화학식의 화합물인 화합물 또는 그 염:

[식에서, R¹ 및 R²는 각각 수소 원자, 히드록시기, C_1-4 알콕시기 또는 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기이고;

R³는 수소 원자, 할로겐 원자 또는 C_1-4 알콕시기이고;

R⁴는 C_1-4 알킬기이고;

R⁵는 제 1 항에 정의한 바와 같다].
제 1 항에 있어서, R¹이 C_1-3 알콕시기인 화합물 또는 그 염.
제 3 항에 있어서, R²가 수소 원자인 화합물 또는 그 염.
제 1 항에 있어서, R³가 수소 원자인 화합물 또는 그 염.
제 1 항에 있어서, R⁶가 하기 화학식의 기인 화합물 또는 그 염:

[식에서, R⁵는 제 1 항에 정의한 바와 같다].
제 2 항에 있어서, R⁴가 C_1-3 알킬기이고, R⁵가 수소 원자인 화합물 또는 그 염.
제 1 항에 있어서, n가 1 또는 2인 화합물 또는 그 염.
제 1 항에 있어서, R¹이 (i) 히드록시기, (ii) C_1-4 알콕시기, 또는 (iii) 히드록시 또는 C_1-4 알킬-카르보닐옥시에 의해 치환될 수 있는 C_1-4 알킬기이고;

R²가 수소 원자, C_1-4 알킬기 또는 C_1-4 알콕시-카르보닐기이고;

R³가 수소 원자, 할로겐 원자, 히드록시기 또는 C_1-4 알콕시-C_1-4 알콕시기이기거나;

또는 인접한 2개의 R³가 함께 C_1-3 알킬렌디옥시기를 형성하고;

R⁴가 수소 원자 또는 C_1-3 알킬기이고;

R⁶이 C_1-4 알콕시-C_1-4알킬기 또는 하기 화학식의 기이고:

(식에서, R⁵가 수소 원자이거나 또는 R⁴ 및 R⁵가 함께 5원 또는 6원 헤테로고리를 형성한다);

n은 1 또는 2인 화합물 또는 그 염.
제 1 항에 있어서, R¹이 히드록시기, 메톡시기 또는 C_1-3 알킬기이고;

R²가 수소 원자 또는 C_1-3 알킬기이고;

R⁴가 C_1-3 알킬기이고;

R⁶가 벤질기이고;

n이 0인 화합물 또는 그 염.
하기 화학식의 화합물:

[상기 식에서, 각각의 기호는 제 1 항에 정의한 바와 같다] 또는 그 염을 카르보닐디이미다졸 또는 포스겐과 반응시킨 후에, 하기 화학식의 화합물:

[상기 식에서, 각각의 기호는 제 1 항에 정의한 바와 같다] 또는 그 염과 반응시키는 것을 포함하는, 제 1 항의 화합물 또는 그 염의 제조방법.
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