KR100502947B1

KR100502947B1 - 뇌혈관 질환을 예방하고 치료하기 위한 전통 중국 약제조성물

Info

Publication number: KR100502947B1
Application number: KR10-2002-0025338A
Authority: KR
Inventors: 후앙켄슝
Original assignee: 브레인제니시스 바이오테크놀러지 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2002-05-08
Filing date: 2002-05-08
Publication date: 2005-07-25
Also published as: KR20030087324A

Abstract

본 발명은 인삼, 당귀, 황기, 감초, 시호, 황련, 천축황, 황금의 적어도 여섯가지 전통 중국 약제를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 혈소판 응집을 저해하고 출혈 시간을 연장시키는 약리학적 활성을 보유하고 뇌혈관 질환을 예방 및 치료하는데 사용될 수 있다.

Description

뇌혈관 질환을 예방하고 치료하기 위한 전통 중국 약제 조성물{Composition of traditional chinese medicines for preventing and treating cerebrovascular disease}

본 발명은 혈소판 응집을 저해하고 출혈시간을 연장하는 능력을 갖는 전통 중국 약제 조성물에 관한 것으로, 이 조성물은 허혈성 뇌혈관 질환(허혈성 뇌졸중)을 예방하고 치료하는데 사용될 수 있다.

지금까지, 몇몇 중국 약제들이 혈소판 응집을 저해하거나 출혈시간을 연장하는데 있어 약리학적 활성을 갖는 것으로 주장되었으나, 아직 어떠한 중국 약제도 허혈성 뇌혈관 질환을 예방하고 치료하는데 중요한 약리적 가능성을 가지는 것을 증명하지 못했다.

본 발명은 신규한 전통 중국 약제 조성물을 제공하려는 것이다.

보다 구체적으로, 본 발명은 혈소판 응집을 저해하는 능력을 갖는 신규한 전통 중국 약제 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 출혈시간을 연장할 수 있는 신규한 전통 중국 약제 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 뇌혈관 질환, 특히 허혈성 뇌혈관 질환을 예방하고 치료하는데 사용될 수 있는 신규한 전통 중국 약제 조성물에 관한 것이다.

한편, 본 발명은 또한 환자의 뇌혈관 질환, 특히 허혈성 뇌혈관 질환을 예방하고 치료하기 위한 약제의 제조에서 전통 중국 약제의 사용을 개시한다.

본 발명의 신규한 전통 중국 약제 조성물은 다음의 적어도 여섯가지를 포함한다: 인삼(Ren Shen), 당귀(Dang Gui), 황기(Huang Qi), 감초(Gan Cao), 시호(Chai Hu), 황련(Huang Lian), 천축황(Tian Zhu Huang), 황금(Huang Qin). 이러한 중국 전통 약제는 표준 중국어(Mandarin)에서 이들의 발음에 따라 영어로 번역되었다.

본 발명은 다음의 적어도 여섯가지, 바람직하게 일곱가지, 보다 바람직하게 모두를 포함하는 신규한 전통 중국 약제 조성물을 제공한다: 인삼, 당귀, 황기, 감초, 시호, 황련, 천축황, 황금. 이러한 전통 중국 약제는 표준 중국어에서 이들의 발음에 따라 영어로 번역되고 이들의 한자는 도 1에 나타내었다. 본 발명의 전통 중국 약제 조성물이 여섯가지의 전통 중국 약제를 포함할 때, 시호와 황련은 생략된다. 본 발명의 전통 중국 약제의 조성물이 일곱가지의 전통 중국 약제를 포함할 때 황련이 생략된다.

또한 본 발명은 환자의 뇌혈관 질환, 바람직하게 허혈성 뇌혈관 질환을 예방 및 치료하기 위한 약의 제조에서 본 발명의 전통 중국 약제 조성물의 사용을 개시한다.

본 발명은 또한 환자에게 본 발명의 전통 중국 약제 조성물의 치료학적으로 유효량을 투여하는 것을 포함하는 뇌혈관 질환, 바람직하게 허혈성 뇌혈관 질환을 예방하고 치료하기 위한 방법을 개시한다.

본 발명의 바람직한 실시예의 하나에 따라 제조된 전통 중국 약제 조성물은 혈소판 응집을 저해하고 출혈시간을 연장하는 약리학적 활성을 갖는 것이 입증되었다. 또한 동일한 전통 중국 약제 조성물은 동물 실험을 통해 허혈성 뇌혈관 질환을 예방하고 치료하는데에 치료학적 효과를 가짐이 증명되었고 또한 약리학적 안전 시험 및 급성 독성 시험(28일)을 통해 안전성에 문제가 없음이 밝혀졌다.

바람직하게, 여덟가지의 전통 중국 약제는 건조 분말의 형태이다. 여덟가지의 전통 중국 약제는 일반적인 전통 중국 약방(traditional chinese medicine store)으로부터 얻을 수 있는데 이들은 각각 구워 건조시키고 분말로 간다.

본 발명에 따르면, 여덟가지의 전통 중국 약제의 비율(중량)은 중량부로서 나타내며 바람직하게, 인삼:당귀:황기:감초:시호:황련:천축황:황금=140±10%:166±10%:180±10%:67±10%:140±10%:120±10%:120±10%:67±10%이다. 본 발명의 조성물이 여덟가지의 전통 중국 약제 중 여섯 또는 일곱가지의 전통 중국 약제를 포함하는 조성물의 경우에는 사용되지 않은 하나 또는 둘의 전통 중국 약제의 양은 0이며 나머지 다른 것의 중량비율은 변하지 않는다.

본 발명의 전통 중국 약제 조성물은 경구적으로 투여되는 것이 적합하다.

본 발명에서 사용되는 인삼(Ginseng radix)은 한정되지는 않지만 파낙스 진성 씨. 에이. 메이어(Panax ginseng C.A.Meyer) 및 파낙스 퀸퀘폴리움 린네우스(Panax quinquefolium Linnaeus)를 함유하고 전자가 바람직하다. 전통 중국 약방이나 무역 회사로부터 구입한 인삼은 순수한 물과 탁주(rice wine)의 혼합물(3:1)이 들어있는 망 찜통(meshed steamer)에서 강한 불에서 빠르게 끓인 다음 중불에서 90분 동안 끓여 찌고, 식힌 다음 쪄진 인삼을 건조하고 썰어 처리된다. 그런 다음, 상기 인삼 조각을 오븐에 올리고 50℃에서 13시간동안 굽고 분말로 간다. 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 1000g은 상기 과정후에 약 930g이 된다.

본 발명에 사용되는 당귀(Angelica sinensis radix)는 한정되지는 않지만 안젤리카 시넨시스(Angelica sinensis, Oliv.) 디엘스(Diels)의 뿌리를 포함한다. 중국 전통 약방이나 무역회사로부터 수입한 절단되지 않은 당귀는 물 분무기로 씻겨진 물이 맑아질 때까지 빠르게 씻고 그런 다음 증류수로 씻어 처리한다. 깨끗한 당귀(20㎏)는 R.O.워터 3㎏, 탁주 1㎏ 및 시페리 리조마(Cyperi Rhizoma)(Cyperus rotundus L.) 100g의 혼합물을 끓임으로써 망 찜통에서 찌는데, 강한 불에서 빠르게 끓인 다음 중불에서 60분 동안 끓이고 식힌 다음 썬다. 당귀 조각을 자동화된 오븐에 올리고 55℃에서 10시간동안 굽고 분말로 간다. 당귀 1000g은 건조 분말로 처리된 후 약 600g이 된다. 미국 특허 제4843067호에 따르면, 레비스티컴 오피시날 코츠(Levisticum officinale Koch) 및 안젤리카 아르첸젤리카(Angelica archangelica) 둘 다 당귀의 대용으로 기대될 수 있다.

본 발명에 사용되는 황기(Astragali radix)는 한정되지는 않지만 아스트라갈루스 멤브라나세우스(Astragalus membranaceus, Fisch) 번즈 바. 멤브라나세우스(Bunge var. membranaceus), 아스트라갈루스 멤브라나세우스(Fisch.) 번즈 바. 몽골리쿠스(Bunge var.momgholicus, Bunge) 흐시아오(Hsiao) 및 헤디사룸 폴리보트리스 핸드.-매즈(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz)의 뿌리를 포함한다. 전통 중국 약방이나 무역 회사로부터 구입한 황기는 황기를 물로 씻고 자르고 50℃의 오븐에서 16시간 동안 구워서 건조시키며 건조된 조각을 분말로 가는 것을 포함하여 처리된다. 황기의 1000g은 상기 과정후에 약 650g이 된다.

본 발명에 사용되는 감초는 글리시르히자 우랄렌시스 피츠.(Glycyrrhiza uralensis Fisch.), 글리시르히자 글라브라 엘.(Glycyrrhiza glabra L.) 또는 글리시르히자 인플라타 배트(Glycyrrhiza inflata Bat) 및 바람직하게 글리시르히자 우랄렌시스 피츠.의 뿌리줄기(rhizome)이다. 전통 중국 약방이나 공급자로부터 구입한 감초는 물로 씻고 자르고 50℃에서 12시간동안 굽고 분말로 간다. 감초 1000g 은 상기 과정 후 약 720g이 된다.

본 발명에 사용되는 시호(Bupleurum radix)는 부플레우룸 치넨시스 디씨(Bupleurm chinensis DC), 부를레우룸 스코르조네리폴리움 윌드.(Bupleurum scorzonerifolium Willd.) 및 동일한 종의 다른 식물의 뿌리이고, 바람직하게는 부플레우룸 치넨시스 디씨이다. 전통 중국 약방이나 공급자로부터 구입한 시호는 물로 씻고 12시간동안 구워 건조시키고 분말로 갈아 처리한다. 시호의 1000g은 상기 과정 후 약 720g이 된다.

본 발명에 사용되는 황련은 콥티스 치넨시스 프란츠.(Coptis chinesis Franch.), 콥티스 델토이디아 씨. 와이.청 에 흐시아오(Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao), 콥티스 티토이데스 씨.와이. 청(Coptis teetoides C.Y.Cheng) 및 동일한 종에 있는 다른 식물들의 뿌리줄기이다. 전통 중국 약방이나 공급자로부터 구입한 황련은 물로 씻고 50℃에서 12시간동안 굽고 분말로 갈아 처리한다. 황련 1000g은 상기 과정 후 약 750g이 된다.

본 발명에 사용되는 천축황(Bambusae concretio silicea)은 필로스타치스 니그라 문로 바. 헤노니스 스탑프 엑스 렌들(Phylllostachys nigra MUNRO var. henonis STAPF ex RENDLE) 및 동일한 종의 다른 식물의 줄기 마디 사이에 축적된 것이다. 전통 중국 약방이나 공급자로부터 구입한 천축황은 물에 뜨는 것을 골라내어 선별하고 이를 55℃에서 18시간동안 굽고 분말로 간다. 천축황 1000g은 상기 과정 후에 약 850g이 된다.

본 발명에 사용되는 황금(Scutellariae radix)은 스쿠텔라리애 바이칼렌시스 게오르기(Scutellaria baicalensis Georgi)의 뿌리이다. 전통 중국 약방이나 공급자로부터 구입한 황금은 물로 씻어 처리한다. 깨끗한 황금(10㎏)은 R.O. 워터 3㎏과 산수유(corni fructus) 100g의 혼합물을 끓임으로써 망 찜통에서 찌는데 강한 불에서 빨리 끓인 다음 중불에서 60분 동안 끓이고 식힌 후에 자른다. 황금 조각은 자동 오븐에 넣고 50℃에서 11시간동안 굽고 분말로 간다. 황금 1000g은 상기 과정 후 약 700g이 된다.

제조 실시예

인삼, 당귀, 황기, 감초, 시호, 황련, 천축황, 황금을 전통 중국 약제상으로부터 구입하였다. 원료의 동정을 기초로 하면, 인삼은 파낙스 진성 씨. 에이. 메이어(Panax ginseng C.A.Meyer)에 속하고, 당귀는 안젤리카 시넨시스(Angelica sinensis, Oliv.) 디엘스(Diels)에 속하고, 황기는 헤디사룸 폴리보트리스 핸드.-매즈.(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.)에 속하고, 감초는 글리시르히자 우랄렌시스 피츠.(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)에 속하고, 시호는 부플레우룸 롱제사디아툼 투르카.(Bupleurum longesadiatum Turca.)에 속하고, 황련은 콥티스 치넨시스 프란츠.(Coptis chinensis Franch.)에 속하고, 천축황은 밤부사 텍스틸리스 맥컬츠; 스키조스타츔 치넨시스 렌들(Schizostachyum chinense Rendle)로부터 오고, 황금은 스큐텔라리아 바이칼렌시스 게오르기(Scutellaria baicalensis Georgi)에 속한다. 이러한 여덟가지 전통 중국 약제는 앞에서 기술한 처리 단계에 따라 제조되고 결과 얻어진 건조 분말은 메쉬 No. 10의 체로 치고 통과한 부분을 사용한다.

분말 형태의 여덟가지 전통 중국 약제는 인삼:당귀:황기:감초:시호:황련:천축황:황금=140:166:180:67:140:120:120:67의 중량비율에 따라 혼합되어 분말의 약제학적 조성물을 얻으며, BNG-1으로 칭해진다.

실시예 1

1. 실험물질 및 투여양식

BNG-1은 대만의 브레인제네시스 바이오테크날러지 캄퍼니, 리미티드(BrainGenesis Biotechnology Co., Ltd.)로부터 제공받아 증류수에 용해시킨다. 생체내(in vivo) 실험에서 경구 투여(PO)에 대해서, 투여량은 생쥐에게 20㎖/㎏이다. 실험 동물은 연속 8일 동안 매일 1000㎎/㎏의 최초 투여량(initial dosage)을 공급받았다. 시험관내(in vitro) 분석에서는, 실험물질 0.1㎖을 10㎖ 용액에 첨가하여 1000㎍/㎖의 최종 농도를 얻은 후 아라키돈산 혈소판 응집에서 가능한 아고니스트(agonist) 반응 또는 아고니스트로 챌린지(challenge) 전에 5분 동안 분리된 조직과 함께 인큐베이트하였다.

2. 동물

본 연구에서는, MDS 팬랩스 타이완, 리미티드(Panlabs Taiwan, Ltd.)의 동물사육센터에 의해 공급된 암컷/수컷 ICR 유래 생쥐 및 뉴질랜드 유래 알비노 암컷/수컷 토끼를 사용하였다. 모든 동물은 사용되기전에 MDS 팬랩스 타이완의 실험실에서 적어도 일주일동안 빛과 어둠을 12시간동안 교대로 하는 조절된 온도(22℃-24℃) 및 습도(60%-80%)에서 유지시켰다.

3. 방법

아라키돈산, 혈소판 응집 아고니즘/안타고니즘

2.5-3㎏의 뉴질랜드 유래 알비노 토끼의 수컷 또는 암컷으로부터 얻은 정맥혈을 사용하였다. 혈액 샘플은 구연산삼나트륨(0.13M) 10에 1의 부피로 혼합한 다음 실온에서 10분동안 220g에서 원심분리하였다. 실험물질을 0.025㎖의 부피로 0.45㎖ 조직액에 첨가하여 1000㎍/㎖의 실험 농도를 얻었다. 광학 응집측정기(optical aggregometer)에 의해 측정된 바와 같이 37℃에서 100μM 아라키돈산 조절 반응에 대하여 5분이내에 50% 이상까지 혈장을 진하게(6×10⁸ 혈소판/㎖)하는 혈소판 응집은 가능한 아라키돈산 수용체 아고니스트 활성을 가리킨다. 중대한 아고니스트 활성이 관찰되지 않는 실험물질 농도에서 아라키돈산-유발 최대 비-가역적 응집반응을 50% 이상(≥50) 감소시키는 능력은 아라키돈산 수용체 안타고니스트의 활성을 가리킨다. 각 농도는 두번 별개의 제조물에서 실험되었다.

또한 BNG-1의 100μM 아라키돈산에 의해 유발된 50% 응집 저해의 농도(IC₅₀)는 176.5㎍/㎖로 측정되었다.

출혈시간(PO)

22±2g의 5마리의 ICR 유래 수컷 생쥐그룹에 7일동안 매일 1000㎎/㎏의 투여량으로 경구 투여하였고 1000㎎/㎖의 한번 투여량을 여덟째 날에 각 꼬리의 끝(0.5㎜)을 통상적인 방법으로 자르기 한시간 전에 경구적으로 투여하였다. 케이스안의 생쥐를 각 꼬리 끝 2㎝를 생리식염수를 함유하는 37℃의 시험관에 담군 상태로 즉시 고리에 수직으로 매달았다. 그런 다음 15초 주기로 출혈이 멈추는데 걸리는 시간을 측정하였다. 최대 180초까지만 측정하였다. 동물의 대조군에 대하여 50% 이상(≥50%)의 출혈시간 연장을 중요하게 고려하였다.

4. 결과

AA-혈소판 응집-안타고니스트	시험관내(in vitro)	1000㎍/㎖	100%	n=2
AA-혈소판 응집-안타고니스트	시험관내	300㎍/㎖	100%	n=2
AA-혈소판 응집-안타고니스트	시험관내	100㎍/㎖	0%	n=2
출혈 시간	PO	1000㎎/㎏×8	60%	n=5
출혈 시간	PO	1000㎎/㎏×8	63%	반복 n=5
출혈 시간	PO	300㎎/㎏×8	0%	n=5

대조예 1

BNG-4, BNG-5, BNG-6 및 BNG-7을 BNG-1의 여덟가지 중국 허브 약물의 어떤 것을 생략하고 반면에 동일하게 중량부분으로 남아있게 하는 것을 제외하고는 제조 실시예에서의 BNG-1과 유사하게 제조하였다.

실시예 1에서의 아라키돈산, 혈소판 응집 아고니즘/안타고니즘 실험 방법의 절차를 BNG-4, BNG-5, BNG-6 및 BNG-7의 IC₅₀을 측정하기 위해 반복하였다. BNG-4, BNG-5, BNG-6 및 BNG-7의 처방 및 결과는 BNG-1의 IC₅₀과 비교하여 다음 표에 나타내었다.

실험물질	IC₅₀(100μM 아라키돈산에 의해 유발된 응집의 50% 저해 농도)
BNG-1	176.5㎍/㎖
BNG-4(당귀 및 황기 생략)	406.6㎍/㎖
BNG-5(당귀 및 시호 생략)	379.2㎍/㎖
BNG-6(황금 및 황련 생략)	393.7㎍/㎖
BNG-7(당귀, 시호, 황금 및 황련 생략)	>1000㎍/㎖

실시예 2

1. 실험물질 및 투여양식

그룹 1(5마리 쥐): 비히클 조절

생리식염수(saline)를 10㎖/㎏의 투여량으로 1일의 MCAO 후 즉시 그리고 연속 7일동안 매 24시간마다 경구적(PO)으로 공급하였다.

그룹 2(5마리 쥐): 포지티브 조절(MK-801)

MK-801은 MCAO후 0, 6, 24, 30, 48 및 54시간에 5㎖/㎏의 투여로 0.3㎎/㎏의 투여량으로 복강내(IP) 주사되었다.

그룹 3(5마리 쥐): BNG-1 처리

생리식염수에 용해시킨 BNG-1을 1일의 MCAO후 즉시 그리고 연속 7일동안 매 24시간마다 10㎖/㎏의 투여로 1000㎎/㎏의 투여량으로 경구(PO) 투여하였다.

2. 동물

대만 국립 의과대학의 동물센터(Animal Resources Center, Medical Colleage of National Taiwan University)로부터 180-240g의 수컷 스프라우즈 다웰리 쥐(10주령)를 사용하였다. 이 동물은 사용전에 MDS 팬랩스 타이완 리미티드 실험실에서 적어도 일주일동안 12시간의 광암 주기(6:00 a.m./6:00 p.m.)로 조절된 온도(22℃-24℃) 및 습도(60%-80%)에서 유지시켰다.

3. 장비

치과용 드릴(UPOWER UG 33, SELECTOR-M), 이미지 분석기(Life Science Resources VISTA Version 3.0), 초기 인큐베이터(Infant Incubator, Brighten Life BL-90-SC), 확대 입체현미경(ZEISS, Stemi 1000), 미세 가위(Microscissors, A. Heiss), 마이크로톰(SHANDON, Varistain 24-4 Automatic Slide, U.K.)및 직장 서미스터 프로브(Rectal thermistor probe, Harvard Homeothermic Blanket Control Unit)을 사용하였다.

4. 방법

뇌경색(Brain Ischemia), 중간대뇌동맥폐색(Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO)

중간대뇌동맥폐색을 통한 영구 뇌경색을 수화클로랄(500㎎/10㎖/㎏IP) 마취하에 수행하였다. 측두두정 영역을 면도하고 안와 측면과 외이도 사이의 피부를 절개하였다. 이하선 상극(superior pole of the parotid gland)은 두개골 유착의 부분 절개후 측두근과 마찬가지로 아래로 반사되어진다. 그런 다음 중간대뇌동맥의 원심 진행이 투명한 두개골을 통해 보여진다.

10배 확대 입체현미경하에서 치과용 드릴로 두개국부절제를 하고 그런 다음 예리한 활막절제 골겸자로 확대하였다. 내부 경동맥으로부터 비롯된 가지의 기부에서 중간대뇌동맥을 미세 가위로 자르고 그런 다음 측두 근육과 이하선은 되돌려졌다. 절개부위에 카나마이신을 약간 뿌리고 머리가죽은 봉합하였으며 10% 포비돈 요오드 용액을 국소적으로 적용하였다. 수술동안에 동물들은 직장 서미스터 프로브와 결합된 항온 가열 시스템에 의하여 정상 체온을 유지시켰다. 이러한 조건하에서 직장 온도는 생리적 한계(37.5±1.0℃)내에서 유지되었다. 수술 후, 동물은 1시간동안 마취에서 회복되는동안 초기 인큐베이터(37.5±1.0℃)에 두었다. 회복 후 쥐를 음식 및 물에 자유롭게 접근가능한 우리당 5마리씩 수용하고 깨끗한 동물실(23.0±℃)에 놓아두었다.

비히클로 생리식염수에 용해시킨 BNG-1을 MCAO후에 즉시 시작하는 연속 7일 동안 매일 10㎖/㎏의 투여 부피로 경구적(PO)으로 1000㎎/㎏(n=5)의 투여량으로 투여하였다. 비히클-대조 그룹(n=5)은 생리식염수만으로 유사하게 처리하였다. 포지티브 조절 참조 시약 MK-801(RBI, Natick, MA 01760-2447, US)을 생리식염수에 용해시켜 MCAO후 0, 6, 24, 30, 48 및 54 시간에 5㎖/㎏의 투여부피로 복강내(IP)에 0.3㎎/㎏의 투여량으로 주사하였다.

경색 손상후 8일째에 모든 동물을 목을 베어 희생시켰다. 이들의 뇌를 빨리 제거하여 급속 냉동 냉장고(deep freezer, NUAIR^TM, NU-6511)의 -70℃에 빠르게 냉동시켰다. 24시간 후에, 마이크로톰("SHANDON" Varistain 24-4 Automatic Slide)의 사용에 의해 전체 뇌의 관상 절개부분(30㎛)을 얻었다. 12㎜ 길이의 경색 부위를 전체적으로 포함하는 매 13번째 부분(즉, 390㎛ 떨어짐)을 조직시험(histological examination)을 위해 선택하였다. 2% 크레실 바이올렛으로 염색된 전부 30조각을 경색 손상 영역을 측정하기 위해 사용하였다. 이는 이미지 분석기에 의해 정량적으로 평가되었다. 각 동물로부터의 각 관상 조각의 전체 경색 부위(㎟)는 합해져서 평균±SEM으로 표현되었다. 그런 다음 ㎟의 계산된 경색 부피(㎣)×특정 거리(390㎛)는 각 실험 그룹에 대해 평균±SEM으로 표현하였다. BNG-1 및 MK-801 처리의 효과는 홀체 스튜던트의 t 검정(the unpaired Student's t test)에 의해 비히클 대조 그룹과 비교하여 P<0.05에서 중요한 것으로 고려되는 차이로 계산되었다. 각 동물에 대해 체온은 각 경구 투여 0분(전 투여)전 및 각 경구 투여 30분 후(후 투여)에 기록되었다. 전 투여 및 후 투여 온도사이의 비교를 위해 튜키 복수 비교 시험(Tukey multiple comparison test)을 적용하였다.

5. 결과

7일 연속 후 처리에 대한 1000㎎/㎏ PO의 투여량으로 계산된 BNG-1은 한쪽 및 영구 중간 대뇌 동맥 폐색을 유발시킨 쥐에서 뇌 경색을 의미있게 감소시켰다 (46.29%). 연속 7일의 연구동안에 독성이나 폐사는 실험동물에서 관찰되지 않았다. 체온에서의 큰 변화도 관찰되지 않았다. MK-801은 뇌경색을 현저하게 감소시켰다(48.38%).

실시예 3

실시예 2에서와 동일한 과정에 의해 수컷 스프레인즈 다웰리 쥐에서 중간 대뇌 동맥 폐색(MCAO)을 통한 영구 뇌 경색을 실행하였다.

비히클로서 생리식염수에 용해시킨 BNG-1을 MCAO 전 매일 7일 동안 및 MCAO 후 매일 3일 동안 1000㎎/㎏ 및 500㎎/㎏의 투여량으로 경구적으로(PO) 투여하였다. 비히클 대조 그룹은 생리식염수만으로 유사하게 처리하였다. 포지티브 대조 참조 시약 MK-801은 MCAO 후 즉시 및 MCAO 후 6, 24, 30, 48 및 54시간에 0.3㎎/5㎖/㎏의 투여량으로 복강내(IP) 주사하였다.

경색 손상 4일째에 모든 동물들을 목을 베어 희생시켰다. 이들 뇌의 전체 경색 부위는 실시예 2에서와 동일한 과정에 따라 결정하였다.

사용된 실험 조건하에서, MCAO는 영향받은 뇌반구의 약 50-60%의 재생 경색(reproducible ischemia)을 일으켰다. 가장 많은 부분에 대해, 손상 부위는 여러 피질 영역(즉, 전두, 감각운동기, 청각 및 후두 피질)에 크게 제한되었고 극히 드물게 대뇌기저핵의 성분 손상을 포함하였다. 비히클 처리 대조 그룹에 관하여 MK-801은 0.3㎎/㎏ IP ×6의 투여량에서 66.30±10.50%로 전체 경색 부피를 의미있게 감소시켰다. 1000㎎/㎏ PO ×10 투여량 수준에서, BNG-1은 전체 경색 부피를 44.09±9.01%로 의미있게 감소시키고 반면에 500㎎/㎏ ×10 후에는 14.17±19.43%의 의미없는 감소가 관찰되었다. 어떠한 화합물도 체온에서 큰 변화를 일으키지 않았다.

BNG-1의 안전 약리학^?은 엠디에스 팬랩스(MDS Panlabs) 타이완 리미티드에서 책임진 안전 약리학^?실험 패키지에 따라 평가되었다.

안전 약리학^??실험 결과

실험	투여 경로	투여량 또는 농도	활성
쥐행동반응-어윈 관찰 스크리닝(일반 행동, 자율, 신경학 신호 등, 38 실험 및 7일 독성 치사율 관찰)	경구	0.5, 1.0 및 2.0(㎎/㎏)	영향 없음
중추신경계(생쥐에서의 수족협조기능에서의 자발성 운동, 헥소바르비탈 수면 시간의 연장, 최대 전기쇼크 또는 펜틸렌테트라졸-유발 경련에 대한 보호 및 폐사, 전경련 또는 항경련반응 및 진통작용(꼬리를 가볍게 튀기기 및 페닐퀴논-유발 꿈틀거림) 및 쥐에서의 체온)	경구	0.5, 1.0 및 2.0(㎎/㎏)	영향 없음
호흡-순환계(개에서의평균혈압, 수축기혈압 및 확장기혈압의 교대, 대퇴부혈류, 심박수, QT 간격, PR 간격, QRS 지속시간 및 S-T절부 및 호흡수)	경구	1(㎎/㎏)	영향 없음
쥐에서의 소변 생산 부피, 전해질 배출 및 소변의 pH값	경구	1(㎎/㎏)	영향 없음
위장관계(쥐에서 위장관 운동성)	경구	1(㎎/㎏)	영향 없음
아세틸콜린, 히스타민 및 염화바륨에 의해 유발된 기니피그의 수축반응	시험관내	1(㎎/㎖)	감소된 수축
아세틸콜린에 의해 유발된 기니 피그 회장의 수축반응	시험관내	0.3(㎎/㎖)	감소된 수축

결과는 쥐에 BNG-1 1㎎/㎏을 경구 투여했을 때 안전에 대한 염려가 없다는 것을 제안한다.

BNG-1의 급성 독성 실험

BNG-1의 점성 서스펜션 투여량(5㎎/㎏)을 6마리의 수컷쥐와 6마리의 암컷쥐에 경구 투여하였고 대조군은 실험 물질(1% CMC용액)없는 대조 용액을 투여하였으며 쥐에의 BNG-1의 급성 독성을 측정하였다. 각 쥐에게 BNG-1 또는 대조 용액을 두번(2시간 간격) 투여하였고 14일동안 임상 관찰을 수행하였다. 어떤 것도 임상 독성 증상을 보이지 않았고 쥐를 해부한 후 눈으로 관찰하였을 때 유기체나 조직에서 아무런 증상도 관찰할 수 없었다. 그러므로 BNG-1의 5㎎/㎏의 투여량으로 쥐에서 주목할만한 급성 독성을 일으키지 않았다. 따라서 5㎎/㎏은 BNG-1에 대하여 "관찰될만한 효과가 없는 수준(no observable effect level, NOEL)"이고 실제적으로 비독성 물질로 분류될 수 있다.

위에서 얻어진 실험 결과를 요약하면, 1㎎/㎏의 BNG-1은 쥐에서 허혈성 뇌혈관 질환을 예방하고 치료할 수 있고 그러한 투여량은 안전에 대한 걱정이 없으며, 급성 독성을 나타내지 않는다는 것을 제안한다. 이러한 결과는 BNG-1이 인간의 허혈성 뇌혈관 질환을 예방하고 치료하는데에 큰 가능성을 가지는 증거가 된다.

또한 BNG-1의 1㎎/㎖를 투여하는 실험관내 실험하에서, 기니 피그 회장에서 기도의 자발 긴장에 대하여 67%의 이완 활성을 관찰하였고 또한 기니 피그 회장의 심근의 수축력에서 31% 증가를 관찰함을 발견하였다.

비록 본 발명은 이의 어떠한 양태의 구체적인 설명을 참조하여 본 발명을 기재하였을지라도 이러한 기재는 다음의 특허청구범위에 포함된 정도외로 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 인정될 수 없다. 많은 개질과 변형이 상기 기재를 바탕으로 가능하다.

도 1은 본 발명에 사용되는 전통 중국 약제의 한자 및 이들의 표준 중국어(Mandarin)에 따른 영어 번역을 나타낸다.

Claims

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인삼, 당귀, 황기, 감초, 시호, 황련, 천축황, 황금의 여덟가지 전통 중국 약제를 활성 성분으로 포함하는 환자에게 허혈성 뇌혈관 질환을 예방하고 치료하기 위한 약리학적 조성물.
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제16항에 있어서, 상기 여덟가지 전통 중국 약제가 건조 분말의 형태인 약리학적 조성물.
제19항에 있어서, 상기 여덟가지 전통 중국 약제가 인삼:당귀:황기:감초:시호:황련:천축황:황금=140±10%:166±10%:180±10%:67±10%:140±10%:120±10%:120±10%:67±10%의 중량비율인 약리학적 조성물.
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제20항에 있어서, 경구 투여되는 약리학적 조성물.
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