KR100438855B1 - 송화가루 추출물을 함유하는 여드름 치료용 경구제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 여드름 균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생장을 억제하고 면포 감소효과를 나타냄으로써 여드름 예방 및 치료에 유효한 성질을 갖고 있는 송화가루 추출물을 함유한 경구제에 관한 것이다. 본 발명의 목적은 여드름 균에 대한 우수한 항균효과 및 면포 감소 효과를 가짐으로써 여드름의 예방 및 치료에 유효한 동시에, 종래의 경구용 여드름 치료제의 부작용 및 피부외용제의 단점을 개선할 수 있는 경구제를 제공함에 목적이 있다.

본 발명은 송화가루 추출물을 여드름의 예방 및 치료에 유효한 양으로 함유하는 경구제를 제공한다. 상기 송화가루 추출물의 유효량은 1회의 복용량이 10mg∼20g이며 바람직하게는 300mg∼6g이다. 본 발명에서 사용되는 송화가루 추출물은 여드름 균에 대한 우수한 항균효과 및 면포 감소효과를 나타냈으며 경구로 투여하였을 경우에도 현저한 면포 감소효과를 나타냈으며, 독성이 전혀 없어 안전성 면에서도 우수한 물질임이 확인되었다. 따라서 상기 송화가루 추출물은 여드름예방 및 치료를 위한 각종 경구제의 주요성분으로 이용될 수 있다.

Description

송화가루 추출물을 함유하는 여드름 치료용 경구제 {ORAL ANTI-ACNEPREPARATION CONTAINING PINE POLLEN EXTRACT}

본 발명은 송화가루 추출물을 함유하는 경구제에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 여드름 균에 대한 우수한 항균력 및 면포 감소효과를 갖고 있는 송화가루 추출물을 함유하는 경구제에 관한 것이다.

여드름은 심상성좌창이라고 하는데 성장기의 피부 특징의 하나이다. 일반적으로 여드름의 생성원인은 명확하게 밝혀져 있지 않지만 사람에 따라 차이가 있고 몇몇의 요인이 상호 작용하여 발병하는 것으로 알려져 있다. 그 주된 요인은 첫째 남성호르몬(androgenic hormone)인 테스토스테론의 활발한 피지생성 작용에 의해 생성된 과잉의 피지이며, 둘째 과각화된 모낭에 의한 모공의 폐쇄로 생성된 과잉의 피지가 모낭 내에 정체되어 미면세포의 형성을 촉진하여 그 결과 여드름균이 증가하게 된다. 셋째 피부상재균인 여드름 균(propionibacterium acnes: 프로피오니박테리움 아크네스)으로 리파아제라는 효소를 분비하여 피지선의 비대증식과 모낭공의 각화항진으로 생성된 과잉의 피지성분의 하나인 트리글리세라이드를 분해하여 유리지방산을 생성시킨다.

이렇게 생성된 유리지방산은 피부상피에 작용하여 각종 효소를 생성하고 모낭벽을 파괴하여 모낭 주위의 결합조직에 염증을 일으키며 구진 (papule), 농포 (pustule), 낭종 (cyst), 결절(nodule)로 그 정도가 심해지며 최악의 상태에는 반흔(scar)을 일으킨다.

이러한 여드름을 예방 및 치료하기 위하여 여드름 균에 대한 항균물질로 테트라사이클린 등의 항생물질을 사용할 경우 프로피오니박테리움 아크네스 내성균의 출현 또는 광과민 작용 등의 부작용을 유발할 가능성이 높은 것으로 현재까지 알려져 있다. 또한 케라틴의 제거를 주효능으로 하는 살리실산이나 레티노인산 제제, 그리고 화농균을 억제하는 벤조일퍼옥사이드 제제나 국소 항생제 등은 부작용이 많고 효능 면에서도 여드름을 완치시키지 못하는 것으로 알려져 있다.

살리실산 제제는 화농성 피부염에 사용이 불가능하며 피부발적 및 홍반을 일으킬 수 있고, 벤조일퍼옥사이드 제제는 알레르기성 피부염 및 홍반이 발생할 수 있다. 레티노인산 제제는 발적, 부종이 나타날 수 있으며 계속 사용할 경우 과색소 침착증이 발생한다는 보고가 있다. 기타 국소 항생제는 임산부 및 수유부에 안전성이 확립되어 있지 않으며 항생제 과민성 환자에게는 사용이 불가능한 단점이 있다. 또한 최근에는 5 알파-리덕타아제 활성을 억제하는 물질의 발명에 많은 연구가 행해졌고 몇 개의 물질이 개발되었으나 그 효과가 미미하고 실용적인 측면에서 사용에 어려움이 있는 것으로 알려지고 있다.

본 발명자는 상기 서술한 문제점을 해소하기 위하여 천연물을 장기간 탐색한결과, 송화가루 또는 송화가루 추출물을 피부에 적용할 경우 여드름 치료에 탁월한 효능을 나타낸다는 사실을 발견하고 피부외용제로서의 효능을 밝혀 이에 대한 특허를 이미 출원하였다.(출원 2001-052859, 공개 2002-003313) 동 선행기술상 송화가루 추출물을 피부외용제로 적용하였을 경우 지성, 중성, 건성 등 피부 종류에 따른 효능의 편차가 컸으며, 드물게 얼굴이 다소 붉어지는 사용상의 불편함이 발견되어 이러한 단점을 개선하기 위하여 경구용 치료약제로의 개발 필요성이 대두되었다. 또한 송화가루는 식품공전에 주원료로 등재되어 있는 전통식품으로서 송화다식과 차의 재료로 이미 오랜 세월 식용으로 사용되어 왔기 때문에 경구제로서의 안전성도 우수하다고 판단되어 연구를 계속한 결과, 송화가루 추출물을 일정 기간 지속적으로 복용할 경우 면포 감소효과를 나타내는 동시에 여드름 균인 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 우수한 항균력을 나타내어 기존에 사용되고 있는 경구용 여드름치료제인 Accutane의 부작용과 단점들을 개선할 수 있음을 발견하였다. 이러한 발견에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 여드름 균에 대한 우수한 항균효과 및 면포 감소 효과를 가짐으로써 여드름의 예방 및 치료에 유효한 동시에, 선행기술로 개발된 여드름치료용 화장품제제의 단점을 개선할 수 있는 경구제를 제공함에 목적이 있다.

본 발명은 송화가루 추출물을 여드름의 예방 및 치료에 유효한 양으로 함유하는 경구제를 제공한다. 상기 송화가루 추출물의 유효량은 1회의 복용량이 10mg∼20g이며 바람직하게는 300㎎∼6g이다.

본 발명에서 사용된 송화가루는 예로부터 풍기 예방, 만성설사 및 종기와 피부 습진의 치료에 효험이 있다고 알려져 있으며, 또한 지혈작용이 있어 창상치료에 사용되었다.

본 발명에서 사용되는 송화가루 추출물은 여드름 균에 대하여 우수한 항균작용을 나타내었으며 경구제로 적용하였을 경우에도 물성에 관계없이 항균효과를 보임을 확인하였다. 또한 임상실험을 한 결과, 상기 송화가루 추출물은 여드름 치료 효과가 우수하며 장시간 반복 사용하여도 부작용이 없음을 확인하였다.

본 발명에서 사용되는 송화가루 추출물 경구제는 고형제, 액제 또는 젤리제로서 경구적으로 복용되는 제형을 의미하고, 고형제의 구체적인 예로서 과립제, 세립제, 산제, 정제, 환제 등을 들 수 있고 액제의 구여체로서는 시럽제, 유제, 현탁제등을 들 수 있다.

이하 본 발명을 실시예에서 상세하게 설명하지만, 본 발명의 기술적 범위가 다음의 실시예로 한정되지 아니함을 밝혀 둔다.

[실시 예 1]

송화가루 추출물의 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 항균력 평가

송화가루 추출물의 항균력 실험은, 액체 배지에서 배양시킨 여드름 균에 일정한 농도의 상기 추출물을 가하여 혐기성 배양조에서 배양한 후, 여드름균 (Propionibacterium acnes ATCC 6919)의 발육을 억제하는 최소억제농도(MIC)를 측정함으로써 수행되었다. 실험과정은 아래와 같다.

1. 배양 방법

미국 ATCC 로부터 구입한 대표적 여드름 균이고 Type Strain인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC 6919균을 Reinforced Clostridial Media에서 3일간 배양하여(37℃) 활력이 좋아질 때까지 계속 계대배양한다. 배양방법은 다음과 같다.

a) 액체배양 : Reinforced Clostridial Media를 Screw Cap Tube에 10㎖을 넣고 멸균함(121℃, 20분). 멸균이 끝나면 바로 별개로 멸균한 Liquid Paraffin 0.5㎖을 액체배지 위에 떨어뜨려 산소와의 접촉을 막는다. 배지가 식으면 균을 접종하여 37℃에서 배양하며 통상 72시간 배양을 한다.

b) 고체배양 : 균주보관용 고체배지는 Reinforced Clostridial Media에 Agar 1.0%를 추가하여 배지를 제조하고 Screw Cap Tube에 10㎖을 넣고 멸균한다(121℃, 20분). 배지가 식으면 백금 Loop로 균을 접종하여 Stab Culture한다(37℃, 72시간)

c) Plate배양 : Plate배양 배지는 고체배양 배지와 같으며 Plate에 멸균한 Agar배지를 부은 후 식힌다. 완전히 식어 굳어지면 접종을 하여 Anaerobic Jar에 넣고 Gas-Pak에 10㎖의 물을 넣은 후 뚜껑을 닫아 37℃ 온도에서 72시간 배양한다.

2. 송화가루 추출물의 제조방법

a) 송화가루 100g을 추출기에 넣고 50% 에탄올 2리터를 부어 잘 섞은 후 60℃에서 3일간 추출한다.

b) 추출이 끝나면 추출물을 Wattman Filter Paper No. 2 여과지로 여과후 나온 여과액을 취하고 여과에서 걸린 찌꺼기는 버린다.

c) 여과액을 농축 Flask에 넣고 진공 농축을 하여 에탄올을 전부 제거하고잔존한 물 역시 농축하여 대부분 제거한다.

d) 농축된 송화가루 추출물액을 -80℃의 Deep Freezer에서 얼린 후 Freeze Drying하여 가루로 만든다. (20g의 송화가루 추출물 획득)

3. 송화가루 추출물의 프로피오니박테리움 아크네스 ATCC 6919 균에 대한 억제 실험

a) 충분히 계대 배양을 한 프로피오니박테리움 아크네스 ATCC 6919균의 배양액 1㎖을 취하여 Reinforced Clostridial Media 9㎖씩 넣은 배지에 접종하여 잘 섞는다. (10배 희석됨)

b) 상기와 같은 방법으로 계속 희석하여 10^-1～ 10^-5배까지의 희석배양액을 만든다.

c) Freeze-Drying하여 만든 송화가루 추출물 10g을 10㎖의 50% 에탄올에 잘 녹인 후 2배씩 희석하여 각 농도별 송화가루 추출물 용액을 만든다. 이 용액을 0.2㎛의 Membrane Filter를 이용하여 제균여과 한다.

d) Reinforced Clostridial Agar Media를 멸균한 후 50℃로 식히고 상기 c)의 제균여과한 추출물을 최종 농도가 10㎎/㎖ ～ 0.1㎎/㎖로 되도록 각각 첨가하여 골고루 잘 섞는다.

e) 상기 b)의 희석배양액 1㎖씩을 각각 취하여 Petri Dish에 분주하고 각 농도별 Agar Media를 분주하여 골고루 잘 섞이도록 흔든 후 정치하여 Agar배지를 경화한다.

f) 배지가 경화하면 Anaerobic Jar에 넣고 Gas-Pak을 장치한 후 37℃에서 3일간 배양 후 나타난 Colony수를 측정하여 대조구와 비교, 억제율을 계산한다. 콜로니수 및 억제율의 결과는 하기 표 2 에서 보여진다.

여드름 균에 대한 살균력 평가 결과, 본 발명의 송화가루 추출물은 하기의 표 1 에서와 같이, 0.06%의 아주 낮은 농도에서 살균력이 나타나기 시작하여 0.1% 이상에서 여드름 균을 완전 살균하는 것으로 나타났다. 따라서, 상기 송화가루 추출물은 여드름 균에 대한 매우 탁월한 항균효과를 갖고 있음을 알 수 있었다.

[표 1]

프로피오니박테리움 아크네스 ATCC 6919 에 대한 최소억제농도(MIC) 측정결과

[표 2] 프로피오니박테리움 아크네스 ATCC 6919 에 대한 항균효과 실험 결과

[실시 예 2]

송화가루 추출물의 면포 감소 효과

면포 감소실험을 위한 실험동물은 뉴질랜드산 흰토끼를 사용하였으며 4개월령 전후의 2∼3㎏의 건강한 수컷을 입수 후 1주일의 순화 과정을 거쳐 육안으로 보아 건강한 동물만 사용하였다. 면포실험용 실험물질은 송화가루 추출물의 엑기스를 에탄올에 용해시켜 1% 용액이 되도록 사용하였다. 실험방법은 다음과 같다.

30마리의 토끼에 면포유발물질인 이소프로필 이리스테이트(IPM)를 토끼의 양쪽 귀에 매일 1회 1㎖씩 7일간 도포하여 면포를 유발시켰으며 전형적인 면포가 형성된 25마리를 골라 각 군당 5마리씩 5군으로 분류하여 실험하였다.

면포 감소효과 실험은 면포가 유발된 오른쪽 귀에 상기 제조방법으로 만든 송화가루 추출물의 실험물질을 매일 1회 1㎖씩을 투여한 다음 면봉으로 고르게 도포하였으며 왼쪽 귀에는 기제로 사용한 에탄올을 1㎖씩을 투여한 다음 면봉으로 10회 정도 고르게 도포하여 오른쪽 귀와 비교하였다.

면포 치유기간은 2주간 진행하였으며 실험물질을 투여하면서 면포의 병변 진행정도와 면포 감소효과를 평가하였으며 실험이 끝난 후 각 실험군을 안락사시켜 양쪽 귀를 잘라낸 후 기저부의 조직을 약 2.5㎝×1.5cm로 잘라 50℃의 물에 2분간 담갔다가 꺼내 표피를 박리한 후 슬라이드 글라스에 안쪽 면이 위로 오도록 얹어 건조시킨 후 입체현미경으로 관찰하고 화상분석기로 조직의 면포 수와 면적을 계산하였다. 그 결과 치료군의 면포 면적이 현저히 감소된 것을 알 수 있었다.

[표 3]

송화가루 추출물 적용 2주 후의 면포 감소율

*면포감소율 = (A-B)/A x 100

[실시 예 3]

송화가루 추출물의 경구제 투여 후 면포 감소 효과

면포 감소실험을 위한 실험동물은 뉴질랜드산 흰토끼를 사용하였으며 4개월령 전후의 2∼3㎏의 건강한 수컷을 입수 후 1주일의 순화 과정을 거쳐 육안으로 보아 건강한 동물만 사용하였다. 면포실험용 실험물질은 송화가루 추출물의 엑기스를 멸균수에 현탁시켜 50% 용액이 되도록 만들어 모액으로 사용하였으며 각 실험군당 1회 2㎖씩 투여되도록 농도를 조절하여 실험하였다. 면포 유발방법은 실시예 2 와 동일한 방법으로 하였으며 전형적인 면포가 형성된 30마리를 골라 각 군당 5마리씩 6군으로 분류하여 실험하였다.

면포 감소효과 실험은 면포가 유발된 토끼에 각 군당 매일 1회씩 5, 10, 20, 50, 100mg/kg이 되도록 2㎖의 송화가루 추출물을 경구 투여하였으며 대조구는 멸균수를 매일 1회씩 2㎖씩 경구 투여하였다. 면포 치유기간은 2주간 경구 투여하면서 진행하였으며 실험물질을 투여하면서 면포의 병변 진행정도와 면포 감소효과를 평가하였다. 실험이 끝난 후 각 실험군을 안락사 시켜 양쪽 귀를 잘라낸 후 기저부의 조직을 약 2.5cm×1.5cm로 잘라 50℃의 물에 2분간 담갔다가 꺼내 표피를 박리한 후 슬라이드 글라스에 안쪽 면이 위로 오도록 얹어 건조시킨 후 입체현미경으로 관찰하고 화상분석기로 조직의 면포 수와 면적을 계산하였다. 그 결과 송화가루 추출물의 경구 투여가 면포를 감소시키는 효과가 있음을 알 수 있었고 투여농도가 증가할수록 면포 감소효과가 증가함을 알 수 있었다.

[표 4]

송화가루 추출물 경구 투여 2주 후의 면포 감소율

*면포감소율 = (대조군 면포면적 - 실험군 면포면적) / 대조군 면포면적 x 100

[실시 예 4]

송화가루 추출물의 경구 투여 후 독성조사

송화가루 추출물의 단회 투여 독성을 조사하기 위하여 ICR 계통의 마우스에 1, 2, 3, 4, 5g/㎏ 농도로 각 군당 5마리씩의 암수동물에 경구투여하고 14일간 사망률, 일반증상, 체중변화, 부검 및 병리조직 검사를 실시하였다.

시험법은 식품의약품안전청 고시 제1999-61호의 '의약품 등의 독성 시험기준'에 의하여 실시하였다. 특정병원성 부재(SPF) 마우스(ICR) 5주령을 1주일간 순화시킨 후 건강한 마우스만 사용하였으며 실험군당 암수 각 5마리씩 사용하였다. 시험 결과는 다음과 같다.

[표 5]

시험군의 구성, 투여량 및 투여액량

[표 6] 송화가루 추출물 경구 투여 후 사망률

시험결과에서 보듯이 송화가루 추출물은 경구 투여시 LD₅₀값이 5,000㎎/㎏이상을 나타내어 독성이 전혀 없는 매우 안전한 물질로 판명되었으며, 부검 및 병리조직 검사에서도 아무런 이상을 발견할 수 없었다.

[실시 예 5]

송화가루 추출물의 임상실험

실시예 1 에서 제조한 송화가루 추출물을 사용하여 여드름 예방 및 치료에 대한 임상실험을 실시하였으며 실험대상자는 여드름으로 고생하는 10대 중반에서 30대 중반의 남녀 30명을 선정하여 3g씩 일 2회 4주간 투여한 후 그 결과를 평가하였다. 임상실험 결과는 다음 표 7 과 표 8 에서 보여진다.

[표 7]

객관적 연구 결과: 여드름 병변 개수 측정 및 paired T-test

1) 연구 2주 후

연구 시작전 병변의 개수에 비해 2주후 병변의 수는 감소하였으며, 면포와 구진, 결절의 차이는 통계학적으로 유의하게 감소하였다. (p-value〈0.05)

2) 연구 4주 후

연구 2주 후 병변의 개수에 비해 4주 후 병변 중 면포, 구진과 농포의 수는 감소하였으며, 그 중 구진과 농포의 차이는 통계학적으로 유의하였다. (p-value〈0.05)

[표 8]

주관적 연구 결과

1) 연구자의 주관적 평가

2) 피험자의 주관적 평가

상기 임상시험 결과에서 보듯이 연구 전과 연구 2주 및 4주 후의 객관적 비교 모두에서 유의한 병변의 감소를 나타내어 여드름 개선에 효과가 있는 것으로 판단되었다. 또한 관찰자와 대상자에 의한 주관적 임상 평가에서도 각각 76.7%와 80%에서 효과가 있는 것으로 판단되었다. 부작용은 전혀 발견되지 않았다.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에서 사용되는 송화가루 추출물은 여드름 균에 대한 우수한 항균효과 및 면포 감소효과를 나타냈으며 경구로 투여하였을 경우에도 현저한 면포 감소효과를 나타냈다. 또한 독성이 전혀 없어 안전성 면에서도 우수한 물질임이 확인되었다. 송화가루 추출물을 함유한 피부외용제와 비교하였을 때 경구제는 복용 시 혈액에 잔류하여 항균력이 지속적으로 유지되며, 여름철 외출 시나 운동으로 땀을 많이 흘릴 경우 세안을 할 수 있고, 특히 피부 미용에 민감한 여성의 경우 피부자극에 대한 염려 없이 사용할 수 있는 장점을 갖고 있다. 따라서 상기 송화가루 추출물은 여드름 예방 및 치료를 위한 각종 경구제의 주요성분으로 이용될 수 있다.

Claims (6)

1. 송화가루 추출물을, 여드름의 예방 및 치료에 유효한 양으로 함유하는 것을 특징으로 하는 경구제
2. 제 1항에 있어서, 상기 경구제는 고형제, 액제, 또는 젤리제 중 하나의 형태로 가공된 경구적으로 복용되는 제형을 특징으로 하는 경구제.
3. 제 2항에 있어서 고형제는 과립제, 세립제, 산제, 정제, 환제 중 하나의 형태인 것을 특징으로 하는 경구제.
4. 제 2항에 있어서 액제는 시럽제, 유제, 또는 현탁제 중 하나의 형태인 것을 특징으로 하는 경구제.
5. 제 1항에 있어서 상기 유효량은(성인 60㎏ 기준) 1회에 송화가루 추출물 10㎎∼20g을 투여함을 특징으로 하는 경구제
6. 제 5항에 있어서 상기 유효량은(성인 60㎏ 기준) 1회에 송화가루 추출물 300㎎∼6g을 투여함을 특징으로 하는 경구제