KR20210020817A

KR20210020817A - 망고스틴 추출물을 포함하는 여드름 원인균에 대한 항균용 조성물 및 이를 포함하는 여드름의 예방 또는 치료용 제제

Info

Publication number: KR20210020817A
Application number: KR1020200101328A
Authority: KR
Inventors: 이대성; 김진희
Original assignee: 주식회사 메디바이오랩
Priority date: 2019-08-14
Filing date: 2020-08-12
Publication date: 2021-02-24

Abstract

본 발명은 망고스틴 추출물을 포함하는 큐티박테리움 아크네(Cutibacterium acnes) 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 등과 같은 여드름 원인균에 대한 항균용 조성물 및 이를 포함하는 여드름 치료, 경감, 처치 또는 예방용 약학적 조성물 및 여드름 개선, 경감 또는 예방용 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

망고스틴 추출물을 포함하는 여드름 원인균에 대한 항균용 조성물 및 이를 포함하는 여드름의 예방 또는 치료용 제제{Antimicrobial composition against acne-inducing bacteria comprising extract of Garcinia mangostana L., and formulation for preventing or treating acne comprising the same}

본 발명은 망고스틴 추출물을 포함하는 항균용 조성물 및 이를 포함하는 여드름의 예방 또는 치료용 제제에 관한 것이다.

여드름은 피부의 여포성 피지선(follicular sebaceous glands)에 발생하는 만성 염증성 질환으로 구진(papules), 농포(pustules), 낭종(cysts), 결절(nodules)과 같은 다양한 병변이 나타난다. 여드름의 발병요인으로는 피지선의 비정상적인 각질화, 체내 호르몬 불균형에 의한 피지 분비의 증가, 여드름 원인균의 증식 및 염증반응 등이 있다. 이러한 여드름의 대표적인 원인균으로는 큐티박테리움 아크네(Cutibacterium acnes) 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)인 것으로 알려져 있다. C. acnes는 그람 양성이면서 절대 혐기성 세균으로, 피부의 정상 세균총에 속하지만, 모낭에 과도하게 증식하면서 여드름의 원인 인자로 작용한다. C. acnes는 중성지방을 분해할 수 있는 지방분해효소를 분비하여, 모낭의 중성지방을 가수분해하여 유리 지방산 생성을 증가시키고, 이들 유리 지방산들은 일종의 “위험 신호 (danger signal)”로 작용하여 피부 염증을 유발시키는 것으로 조사 되었다. S. aureus는 그람 양성이면서 호기성 세균으로 사람의 비강이나 피부에 많이 존재하며, 화농성 특징을 갖기 때문에 상처난 피부의 염증반응을 악화시키는 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 이들 균주의 증식을 억제하기 위해 에리스로마이신이나 클린다마이신 같은 항생제를 국소적으로 도포하여 사용하기도 한다. 그러나 항생제 과다 사용 시 피부 건조증, 피부 자극성, 접촉성 피부염, 항생제에 대한 내성 발생과 부작용이 유발될 수 있음이 보고되었다. 그러므로, 이러한 문제를 해결하기 위해 부작용이 없으면서 여드름 원인균에 대한 항균능이 뛰어난 천연 소재 개발 연구가 이루어지고 있으나 여전히 천연 소재 기반의 여드름에 대한 예방 또는 치료제제의 개발이 요구되고 있는 실정이다.

한편 망고스틴(Garcinia mangostana L.)은 태국, 인도네시아 등의 동남아시아에서 널리 재배되는 약용식물이다. 이러한 망고스틴 과피 추출물에는 알파-망고스틴(α-mangostin) 또는 감마-망고스틴(γ-mangostin) 함량이 높음이 알려져 있다.

이러한 배경하에서, 본 발명자들은 낮은 부작용을 나타낼 수 있는 여드름의 예방 또는 치료제제 및 기능성 화장품에 사용될 수 있는 소재를 개발하고자 예의 연구를 거듭한 결과, 망고스틴 추출물이 여드름의 원인균, 특히 한국인 유래의 C. acnes 및 S. aureus 균주들에 대해 탁월한 항균능을 나타내며, 특히 이들을 적정 농도로 사용하는 경우 여드름 치료 및 기능성 화장품의 소재로서 매우 유용한 효과를 나타내는 것임을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명은 망고스틴 추출물을 포함하는 항균용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 바람직하게, 망고스틴 추출물을 포함하는 여드름 원인균에 대한 항균용 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 망고스틴 추출물을 포함하는 여드름의 치료, 경감, 처치 또는 예방용 약학적 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 망고스틴 추출물을 포함하는 여드름의 개선, 제거 또는 예방용 화장품 조성물에 관한 것이다.

하나의 양태로서, 본 발명은 망고스틴 추출물을 유효성분으로 포함하는, 여드름 원인균에 대한 항균용 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 여드름 원인균에 대한 항균용 조성물에 포함되는 망고스틴 추출물은 말레이시아, 태국, 베트남 본 연구에 사용된 원료는 말레이시아, 태국, 베트남, 인도네시아등에 분포된 열대 과일인 망고스틴(Garcinia Mangostana)으로부터 제조되는 것으로 상기 망고스틴은 약 40여종의 잔톤 성분이 함유되어 있는 것으로 알려져 있어, 단일 과일류로서는 상당한 양의 잔톤 성분이 함유되어 있다. 특히, 망고스틴 추출물은 잔톤계 성분으로서 알파-망고스틴 및 감마-망고스틴으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

일 예에 따르면 상기 망고스틴 추출물은 망고스틴 과피 (果皮, pericarp, 망고스틴 열매의 껍질) 추출물일 수 있고, 일 예에 따라 망고스틴 과피 추출물을 포함하는 조성물은 망고스틴 과육 (果肉), 망고스틴 과경 (果梗), 및/또는 망고스틴 씨 추출물을 포함하는 조성물보다 여드름 원인균에 대한 항균 활성이 우수한 것일 수 있다. 망고스틴 과피는 통상적으로 섭취되지 않고 버려지는 부분으로서 이를 활용한 일 예에 따른 조성물은 불용자원의 재이용, 환경 보존, 및/또는 경제성 측면에서 장점을 갖는다.

본 발명에서, "추출물(extract)"이란, 생약을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물, 및/또는 정제물일 수 있다. 상기 망고스틴 추출물은 당업계에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는 구체적으로 여과 추출, 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있다.

일 예에서, 상기 망고스틴 추출물은 시판되는 것을 구입하거나, 의약 또는 화장품 업계에 통상 알려진 추출방법 및 추출용매를 적절히 선택하여 제조할 수 있다. 예를 들면, 상기 추출방법은 통상적인 추출방법은 용매 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 및/또는 환류 추출법 등을 포함할 수 있다.

일 예에서, 상기 망고스틴 추출물은 추출용매로 추출하거나 추출용매로 추출하여 제조한 추출물에 분획용매를 가하여 분획함으로써 제조할 수 있다. 예를 들면, 상기 망고스틴 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 알코올, 헥세인, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 클로로포름, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용한 용매 추출방법으로 추출된 것일 수 있다. 구체적으로 상기 탄소수 1 내지 4개의 알코올은 에탄올, 메탄올, 프로판올, 또는 부탄올일 수 있다. 상기 추출용매를 건조된 망고스틴 (또는 바람직하게, 망고스틴 추출물의 제조를 위해, 망고스틴의 여러 부분 중에서 특히 과피 부분을 사용하여 추출할 수 있다.) 분량에 1배 내지 10배 첨가하여 추출할 수 있으며, 구체적으로 2배 내지 3배 첨가하여 추출할 수 있다.

상기 탄소수 1 내지 4개의 알코올의 농도는 70 내지 100%(v/v), 70 내지 95%(v/v), 70 내지 90%(v/v), 75 내지 100%(v/v), 75 내지 95%(v/v), 75 내지 90%(v/v), 80 내지 100%(v/v), 80 내지 95%(v/v), 80 내지 90%(v/v), 85 내지 100%(v/v), 85 내지 95%(v/v), 85 내지 90%(v/v), 90 내지 100%(v/v) 또는 90 내지 95%(v/v)일 수 있다. 추출온도는 30℃ 내지 100℃일 수 있고, 구체적으로 50℃ 내지 90℃일 수 있다. 또한, 추출시간은 10시간 내지 48시간일 수 있고, 구체적으로 15시간 내지 30시간일 수 있다. 아울러, 추출횟수는 1회 내지 5회일 수 있고, 구체적으로 3회 내지 4회 반복 추출할 수 있다.

망고스틴 추출물의 여드름 원인균에 대해 항균 효과를 나타내는 주요한 성분은 상기 잔톤 성분인 알파-망고스틴(α-mangostin) 및 감마-망고스틴(γ-mangostin)이다. 상기 물질들은 여드름 원인균에 대한 항균 효과를 나타낼 뿐만 아니라 여드름 원인균에 의해 유도되는 피부각화상피세포의 증식 및 염증 유도 억제, 그리고 세균에 의해 분비되는 지방가수분해효소 활성 억제 등을 통하여 항-여드름 기능을 갖는다. 그러므로 상기 물질들의 함량이 최대가 되는 추출법이 중요하다.

한편, 본 발명에 따른 망고스틴 추출물에 포함된 알파-망고스틴 또는 감마-망고스틴의 함량은 0 내지 60%(w/v), 0 내지 50%(w/v), 0 내지 45%(w/v), 0 내지 40%(w/v), 0 내지 35%(w/v), 0 내지 30%(w/v), 5 내지 50%(w/v), 5 내지 45%(w/v), 5 내지 40%(w/v), 5 내지 35%(w/v), 5 내지 30%(w/v), 10 내지 50%(w/v), 10 내지 45%(w/v), 10 내지 40%(w/v), 10 내지 35%(w/v), 10 내지 30%(w/v), 15 내지 50%(w/v), 15 내지 45%(w/v), 15 내지 40%(w/v), 15 내지 35%(w/v), 15 내지 30%(w/v), 20 내지 50%(w/v), 20 내지 45%(w/v), 20 내지 40%(w/v), 20 내지 35%(w/v), 20 내지 30%(w/v), 25 내지 50%(w/v), 25 내지 45%(ws/v), 25 내지 40%(w/v), 25 내지 35%(w/v), 25 내지 30%(w/v), 30 내지 50%(w/v), 30 내지 45%(w/v), 30 내지 40%(w/v), 30 내지 35%(w/v), 35 내지 50%(w/v), 35 내지 45%(w/v) 또는 35 내지 40%(w/v)일 수 있다.

구체적인 일 실시예에서, 망고스틴 추출물은 80(v/v)% 에탄올을 사용하여 추출하였으며, 이러한 망고스틴 추출물 중의 알파-망고스틴 함량은 40(w/v)% (400mg/ml)이었다.

또한, 본 발명에 따른 망고스틴 추출물은 필요한 경우 효과적인 제제화 및 체내 흡수를 위하여 물에 대한 용해도를 높이는 수용화 공정을 통해 포접 화합물(inclusion compound)형태인 수용성 망고스틴 추출물 분자캡슐(molecular encapsulation)형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물이 항균성을 나타내는 상기 여드름 원인균은 피부 상재균(정상세균총)인 방선균(Actinobacteria), 후벽균(Firmicutes), 프로테오박테리아(Proteobacteria) 및 의간균(Bacteroidetes) 문(phylum)으로 이루어지는 군에서 선택될 수 있으며, 예를 들어 큐티박테리움 아크네(Cutibacterium acnes) 또는 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)일 수 있다.

상기 여드름 원인균은 C. acnes KCOM 1315, C. acnes KCOM 1466, C. acnes KCOM 1543, C. acnes KCOM 1627, C. acnes KCOM 1899, C. acnes KCTC 3314^T, S. aureus KCOM 1025, S. aureus KCOM 1335, S. aureus KCOM 1395, S. aureus KCOM 1455, S. aureus KCOM 1491 및 S. aureus KCTC 1621^T으로 이루어지는 군에서 선택되는 것일 수 있다.

바람직하게, 본 발명에 따른 항균용 조성물은 조성물 중에 포함되는 망고스틴 추출물의 농도로서 특정 농도로 처리되기 위한 것일 수 있다.

예를 들어, 본 발명에 따른 항균용 조성물은 여드름 원인균에 처리되는 망고스틴 추출물의 농도로서, 1 내지 16μg/ml, 2 내지 16μg/ml, 4 내지 16μg/ml, 6 내지 16μg/ml, 8 내지 16μg/ml, 10 내지 16μg/ml, 12 내지 16μg/ml, 14 내지 16μg/ml, 1 내지 14μg/ml, 2 내지 14μg/ml, 4 내지 14μg/ml, 6 내지 14μg/ml, 8 내지 14μg/ml, 10 내지 14μg/ml, 12 내지 14μg/ml, 1 내지 12μg/ml, 2 내지 12μg/ml, 4 내지 12μg/ml, 6 내지 12μg/ml, 8 내지 12μg/ml, 10 내지 12μg/ml, 1 내지 10μg/ml, 2 내지 10μg/ml, 4 내지 10μg/ml, 6 내지 10μg/ml, 8 내지 10μg/ml, 1 내지 8μg/ml, 2 내지 8μg/ml, 4 내지 8μg/ml, 6 내지 8μg/ml, 1 내지 6μg/ml, 2 내지 6μg/ml, 4 내지 6μg/ml, 1 내지 4μg/ml, 2 내지 4μg/ml 또는 1 내지 2μg/ml로 처리되기 위한 것일 수 있다.

특정 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주의 경우, 적절한 농도의 망고스틴 추출물이 처리되도록 항균용 조성물을 적용하는 것이 특히 바람직하다. 망고스틴 추출물의 농도가 적절한 농도 미만인 경우, 10분 내지 1시간 처리한 경우 높은 사멸율을 보이지만 24시간 처리한 경우 오히려 사멸율이 급격하게 낮아질 수 있기 때문이다. 반면 망고스틴 추출물의 농도가 적절한 농도를 초과하는 경우 독성이 커져 세포가 사멸하는 등 바람직하지 않은 결과를 낳을 수 있다.

바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 망고스틴 추출물을 유효성분으로 하는 여드름 원인균에 대한 항균용 조성물은 짧은 시간동안 처리되어 여드름 원인균을 효과적으로 살균할 수 있는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따른 망고스틴 추출물은 여드름 원인균에 대해 처리되는 시간은 5분 내지 10분, 5분 내지 1시간, 5분 내지 2시간, 5분 내지 3시간, 5분 내지 4시간, 5분 내지 6시간, 5분 내지 12시간, 5분 내지 24시간, 10분 내지 1시간, 10분 내지 2시간, 10분 내지 3시간, 10분 내지 4시간, 10분 내지 6시간, 10분 내지 12시간, 10분 내지 24시간, 1시간 내지 2시간, 1시간 내지 3시간, 1시간 내지 4시간, 1시간 내지 6시간, 1시간 내지 12시간, 1시간 내지 24시간, 2시 내지 3시간, 2시간 내지 4시간, 2시간 내지 6시간, 2시간 내지 12시간, 2시간 내지 24시간, 3시간 내지 4시간, 3시간 내지 6시간, 3시간 내지 12시간, 3시간 내지 24시간, 4시간 내지 6시간, 4시간 내지 12시간, 4시간 내지 24시간, 6시간 내지 12시간, 6시간 내지 24시간 또는 12시간 내지 24시간일 수 있다.

본 발명에 따른 항균용 조성물은 상기와 같이 단시간 정도만 국소로 도포를 하더라도 여드름 원인균에 대한 충분한 항균능을 나타낼 수 있는바, 여드름 원인균을 효과적으로 살균할 수 있을 뿐 아니라, 항균성 조성물을 적용하는 경우 혹여 발생할 수 있는 피부 자극 등의 문제를 최소화 할 수 있다.

본 발명에 따른 항균용 조성물에 포함된 망고스틴 추출물의 농도 및 항균용 조성물이 여드름 원인균에 대해 처리되는 시간을 동시에 조절하여 여드름 원인균을 효과적으로 살균할 수 있다. 일 예에서, 항균용 조성물에 포함된 망고스틴 추출물의 농도를 8 내지 16μg/ml로 하고, 10분 내지 1시간 처리한 경우 그렇지 않은 대조군과 비교하여 높은 사멸율을 보일 수 있다.

본 발명에 따른 항균용 조성물의 유효성분인 망고스틴 추출물의 경우, 천연물이며 취식가능한 과일인 망고스틴으로부터 유래하는 물질이기 때문에 그 자체의 독성은 낮으나, 예를 들어 여드름 원인균에 대한 항균 효과를 나타내는 다른 성분들, 예를 들어 살리실산, 클린다마이신 등과 같은 항생제 등과 같은 자극이 강한 성분들과 함께 사용시, 탁월한 항균능을 나타냄으로 인해, 이들의 피부 적용시간을 최소화할 수 있을 것이다.

또한, 여드름은, 그 원인균도 하나의 원인일 수 있으나, 피지 분비에도 불구하고 모공이 각질이나, 먼지, 화장품 등에 의해 막혀있는 경우 피지가 잘 배출되지 않아 발생하기도 한다. 특히 과도한 양의 약품이나 화장품을 사용하는 경우 이들에 포함된 담체 및/또는 첨가물이 모공을 막아 오히려 여드름이 발생하는 경우가 많다. 그러나 본 발명에 따른 항균용 조성물의 경우, 단시간에만 적용시켜도 탁월한 여드름 원인균에 대한 활성을 나타낼 수 있는바, 단시간 적용시킬 수 있는 형태, 예를 들어 세안제, 샤워젤 등으로도 적용가능하다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 망고스틴 추출물을 포함하는 여드름의 치료, 경감, 처치 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 약학적 조성물은 여드름의 치료, 경감, 처치 또는 예방에 효과적일 수 있다. 상기 약학적 조성물은 알파-망고스틴(α-mangostin) 또는 감마-망고스틴(γ-mangostin)을 유효성분으로 포함할 수 있다. 또한 상기 약학적 조성물은 여드름 원인균, 예를 들어 큐티박테리움 아크네(Cutibacterium acnes) 또는 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)에 대해 항균성을 가질 수 있다. 상기 여드름 원인균은 C. acnes KCOM 1315, C. acnes KCOM 1466, C. acnes KCOM 1543, C. acnes KCOM 1627, C. acnes KCOM 1899, C. acnes KCTC 3314^T, S. aureus KCOM 1025, S. aureus KCOM 1335, S. aureus KCOM 1395, S. aureus KCOM 1455, S. aureus KCOM 1491 및 S. aureus KCTC 1621^T으로 이루어지는 군에서 선택되는 것일 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있으나, 바람직하게는 비경구 제제, 더욱 바람직하게 피부 외용제제일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화 제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비 이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다. 상기 약학적 조성물 피부 외용제 제형으로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크 림 또는 분무제와 같은 제형을 가질 수 있다.

바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 발명의 약학적 조성물은 5분 내지 10분, 5분 내지 1시간, 5분 내지 2시간, 5분 내지 3시간, 5분 내지 4시간, 5분 내지 6시간, 5분 내지 12시간, 5분 내지 24시간, 10분 내지 1시간, 10분 내지 2시간, 10분 내지 3시간, 10분 내지 4시간, 10분 내지 6시간, 10분 내지 12시간, 10분 내지 24시간, 1시간 내지 2시간, 1시간 내지 3시간, 1시간 내지 4시간, 1시간 내지 6시간, 1시간 내지 12시간, 1시간 내지 24시간, 2시 내지 3시간, 2시간 내지 4시간, 2시간 내지 6시간, 2시간 내지 12시간, 2시간 내지 24시간, 3시간 내지 4시간, 3시간 내지 6시간, 3시간 내지 12시간, 3시간 내지 24시간, 4시간 내지 6시간, 4시간 내지 12시간, 4시간 내지 24시간, 6시간 내지 12시간, 6시간 내지 24시간 또는 12시간 내지 24시간 투여, 적용 또는 처리용 조성물일 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 여드름이 있는 환부에 상기한 특정 시간 내에 투여, 적용 또는 처리되는 용도로 특히 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성믈은 유효량의 망고스틴 추출물을 포함함으로써, 여드름에 대한 바람직한 치료, 경감, 처치 또는 예방 효과를 제공할 수 있다. 유효량은 조성물이 제품화되는 형태, 상기 화합물이 피부에 적용되는 방법 및 피부에 머무르는 시간 등에 따라 달라질 것이다. 예컨대, 상기 조성물이 의약품으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 망고스틴 추출물을 포함할 수 있을 것이다.

또 다른 예에서, 본 발명은 망고스틴 추출물을 포함하는 여드름의 개선, 제거 또는 예방용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화장료 조성물은 여드름의 개선, 제거 또는 예방에 효과적일 수 있다. 상기 화장료 조성물은 알파-망고스틴(α-mangostin) 또는 감마-망고스틴(γ-mangostin)을 유효성분으로 포함할 수 있다. 또한 상기 화장료 조성물은 여드름 원인균, 예를 들어 큐티박테리움 아크네(Cutibacterium acnes) 또는 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)에 대해 항균성을 가질 수 있다. 상기 여드름 원인균은 C. acnes KCOM 1315, C. acnes KCOM 1466, C. acnes KCOM 1543, C. acnes KCOM 1627, C. acnes KCOM 1899, C. acnes KCTC 3314^T, S. aureus KCOM 1025, S. aureus KCOM 1335, S. aureus KCOM 1395, S. aureus KCOM 1455, S. aureus KCOM 1491 및 S. aureus KCTC 1621^T으로 이루어지는 군에서 선택되는 것일 수 있다.

상기 화장료 조성물은 또한, 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 제형에 따라 다양하다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은, 다양한 형태의 제형으로 제형화될 수 있으며, 예를 들어, 연고, 페이스트, 크림, 젤, 파우더, 파운데이션, 컨실러, 스프레이, 용액, 유탁액, 현탁액, 폼클렌징, 세안젤, 비누, 마스크팩 등 다양한 제형으로 제조될 수 있으나, 상기 화장료 조성물의 형태는 특별히 제한되지 않는다. 바람직하게, 본 발명에 따른 화장료 조성물의 기능성 성분인 망고스틴 추출물은 단기간 피부에 적용하는 경우에도 탁월한 여드름 원인균에 대한 항균 활성을 나타내는바, 마스크팩, 폼클렌징, 세안젤, 비누 등에 적용시 더욱 유용한 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 유효성분으로 포함되는 망고스틴 추출물은 여드름 원인균에 대한 탁월한 항균 활성을 나타내는바, 이를 포함하는 조성물은 여드름 원인균에 대한 항균용 조성물, 또는 여드름의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 여드름의 예방 또는 개선용 화장료 조성물로 유용하다.

도 1은 인간 태아 신장 293 세포(HEK 293)에서의 망고스틴 추출물의 세포 생존력 시험 결과 그래프이다. 이는 세포계수법(cell counting method)에 의해 수행되었다.
도 2는 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 C. acnes KCOM 1315 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 3은 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 C. acnes KCOM 1466 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 4는 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 C. acnes KCOM 1543 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 5는 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 C. acnes KCOM 1627 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 6은 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 C. acnes KCOM 1899 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 7은 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 C. acnes KCTC 3314T 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 8은 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 S. aureus KCOM 1025 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 9는 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 S. aureus KCOM 1335 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 10은 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 S. aureus KCOM 1395 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 11은 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 S. aureus KCOM 1455 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 12는 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 S. aureus KCOM 1491 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.
도 13은 망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 S. aureus KCTC 1621T 균주에 대한 살균율을 나타내는 그래프이다.

본 발명을 하기의 실시예에서 보다 상세하게 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.

1. 망고스틴 추출물의 HEK 239 세포주에 대한 세포 독성 실험

본 발명에서 사용한 망고스틴 추출물은 Maypro Industries, Ltd (Purchase, NY, USA)에서 구입하여 사용하였다. 망고스틴 추출물은 80%(v/v) 에탄올을 이용하여 추출한 것으로, 알파-망고스틴(α-mangostin)이 40%(w/v) (400mg/ml) 함유된 것이다. 망고스틴 추출물은 다이메틸 설폭사이드(Dimethyl sulfoxide) (DMSO; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)를 용매로 사용하여 아래 실험에 사용하였다.

본 발명에서 사용한 HEK 293 세포주(Human embryonic kidney 293 cells)는 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank, Seoul, Korea)으로부터 분양받아 사용하였다. HEK 293 세포는 DMEM (GibcoBRL-Life Technologies, Gaithersburg, MD, USA), 10% 태아 소 혈청(fetal bovine serum) (FBS, HyClone, Logan, UT, USA), 1% 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin) (Invitrogen, Grand Island, NY, USA)을 이용하여 37℃, 5% CO₂, 100% 습도가 유지되는 세포 배양기에서 배양하였다.

HEK 293 세포를 24-well plate에 4×10⁴ cells을 시딩(seeding) 하여 하룻밤 배양한 후, 세포가 80% 컨플루언스(confluence) 했을 때 망고스틴 추출물을 0.5, 1, 2, 4, 8, 16, 32μg/ml로 최종농도가 되도록 첨가하여 24시간 더 배양하였다. PBS로 세척 후 0.25% Trypsin-EDTA (Welgene, Gyeongsan, Korea)을 이용하여 세포를 배양기로부터 떼어내고, 곧바로 10% FBS가 함유된 배지를 첨가하여 세포를 현탁하였다. 세포의 수는 혈구계산기(Hemocytometer)를 이용하여 측정하였으며, 그 결과를 대조군(1% DMSO)에 대한 백분율을 산출하여 평균 및 표준편차로 제시하여 도 1에 나타내었다. 각 반응은 3회 반복 실시하였다.

도 1에 나타난 바와 같이, 망고스틴 추출물의 HEK 293 세포주에 대한 독성실험 결과, 본 시험에서 사용한 망고스틴 추출물 0.5 내지 16μg/ml의 농도에서 대조군에 비해 80.5% 이상의 세포 생존율을 보여, HEK 293 세포주에 대한 독성이 없는 것을 확인할 수 있었다. 하지만, 망고스틴 추출물의 32μg/ml의 농도에서는 48%의 세포 생존율을 보였다. 따라서, C. acnes 및 S. aureus 균주들에 대한 망고스틴 추출물의 항균능 조사 시 16μg/ml 이하의 농도를 사용하였다.

2. 망고스틴 추출물의 큐티박테리움 아크네( Cutibacterium acnes )에 대한 항균 효과

본 발명에 사용된 균주는 C. acnes KCOM 1315, C. acnes KCOM 1466, C. acnes KCOM 1543, C. acnes KCOM 1627, C. acnes KCOM 1899 및 C. acnes KCTC 3314^T-이었다. C. acnes KCOM 1315, C. acnes KCOM 1466, C. acnes KCOM 1543, C. acnes KCOM 1627, C. acnes KCOM 1899 균주는 한국구강미생물자원은행(Korean Collection for Oral Microbiology, Gwangju, Korea)에서 분양받아 사용하였다. 그리고 C. acnes KCTC 3314^T 균주는 한국생명공학연구원 생명자원센터(Korean Collection for Type Culture, Daejeon, Korea)에서 분양받아 사용하였다.

본 발명에 사용된 C. acnes 균주들은 Tryptic Soy broth (BD Difco Laboratories, Franklin Lakes, NJ, USA)에 0.5% 효모 추출물(yeast extract), 0.05% 시스테인 염산-물(cysteine HCl-H₂O), 0.5 mg/ml 헤민(hemin)및 2μg/ml 비타민 K₁(vitamin K₁)가 포함된 배지에서 37℃ 혐기성 배양기(anaerobic chamber) (Bactron I, Sheldon Manufacturing Inc., Cornelius, OR, USA)와 혐기성 조건(10% H₂, 5% CO₂, 85% N₂)에서 배양하였다.

망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 Cutibacterium acnes 균주들에 대한 살균율을 도 2 내지 도 7 및 아래 표 1에 나타내었다.

도 2 내지 도 7 및 아래 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 망고스틴 추출물 8μg/ml 농도로 10분만 처리 시 C. acnes 균주들은 KCOM 1899 균주를 제외하고는 53.3% 내지 97.4% 사멸율을 보였으며, 1시간 처리한 경우 본 발명에서 사용된 모든 균주들에서 93.4% 내지 100%의 사멸율을 보였다. 또한 망고스틴 추출물 16μg/ml 농도로 처리한 경우에는 모든 C. acnes 균주들에 대해서 10분만 처리한 경우에도 79.8% 이상의 사멸율을 보였으며, 1시간 처리한 경우 99.9% 이상의 사멸율을 보였다. 망고스틴 추출물 2μg/ml 농도로 24시간 처리한 경우에 있어서는 KCOM 1899 균주만 99.6%의 사멸율을 보였고, 나머지 모든 균주들은 99.9% 이상의 사멸율을 보였다. 이러한 결과는 여드름 병소에 망고스틴 추출물을 짧은 시간 국소도포를 하더라도, 여드름 원인균에 대한 충분한 항균능이 있음을 보여준다.

	살균율 (평균; %)
균주	Cutibacterium acnes KCOM 1315			Cutibacterium acnes KCOM 1466			Cutibacterium acnes KCOM 1543
시간	10분	1시간	24시간	10분	1시간	24시간	10분	1시간	24시간
1% DMSO	0	0	0	0	0	0	0	0	0
0.5 μg/ml	0	0	0	7.3	32.7	0	0	0	0
1 μg/ml	0	0	0	14.1	55.1	0	0	0	0
2 μg/ml	0	0	100	77.6	94.7	100	0	11.9	99.9
4 μg/ml	52.9	97.0	100	93.3	99.5	100	0	64.6	100
8 μg/ml	92.1	100	100	97.4	100	100	53.3	93.4	100
16 μg/ml	87.0	99.9	100	99.7	100	100	98.6	100	100
균주	Cutibacterium acnes KCOM 1627			Cutibacterium acnes KCOM 1899			Cutibacterium acnes KCTC 3314^T
시간	10분	1시간	24시간	10분	1시간	24시간	10분	1시간	24시간
1% DMSO	0	0	0	0	0	0	0	0	0
0.5 μg/ml	0	0	0	0	0	0	0	0	0
1 μg/ml	0	0	0	0	0	0	0	0	0
2 μg/ml	0	0	99.9	0	0	99.6	0	82.0	100
4 μg/ml	65.8	97.4	100	0	61.8	100	79.8	96.9	100
8 μg/ml	93.9	100	100	0	91.3	100	85.1	100	100
16 μg/ml	87.0	100	100	79.8	99.9	100	94.7	99.9	100

3. 망고스틴 추출물의 스타필로코커스 아우레우스( Staphylococcus aureus )에 대한 항균 효과

본 발명에 사용된 균주는 S. aureus KCOM 1025, S. aureus KCOM 1335, S. aureus KCOM 1395, S. aureus KCOM 1455, S. aureus KCOM 1491 및 S. aureus KCTC 1621^T들이었다. S. aureus KCOM 1025, S. aureus KCOM 1335, S. aureus KCOM 1395, S. aureus KCOM 1455, S. aureus KCOM 1491 균주는 한국구강미생물자원은행(Korean Collection for Oral Microbiology, Gwangju, Korea)에서 분양받아 사용하였다. 그리고 S. aureus KCTC 1621^T 균주는 한국생명공학연구원 생명자원센터(Korean Collection for Type Culture, Daejeon, Korea)에서 분양받아 사용하였다.

본 발명에 사용된 S. aureus 균주들은 Brain Heart Infusion (BD Difco Laboratories) 배지에 접종하여 호기성 조건의 37℃ 세균배양기에서 배양하였다.

망고스틴 추출물의 농도 및 처리 시간에 따른 Staphylococcus aureus 균주들에 대한 살균율을 도 8 내지 도 13 및 아래 표 2에 나타내었다.

도 8 내지 도 13 및 아래 표 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 망고스틴 추출물 8μg/ml 농도로 10분 처리 시 S. aureus 균주들은 KCOM 1025 균주를 제외하고는 53.8% 내지 98.3% 사멸율을 보였으며, 1시간 처리한 경우 본 발명에서 사용된 모든 균주들에서 96.7% 내지 100%의 사멸율을 보였다. 또한, 망고스틴 추출물 16μg/ml 농도로 처리한 경우에는 모든 S. aureus 균주들에 대해서 10분만 처리한 경우에도 98.9% 이상의 사멸율을 보였으며, 1시간 처리한 경우 100%의 사멸율을 보였다. S. aureus KCOM 1335, KCOM 1491 및 KCTC 1621 균주들은 망고스틴 추출물 4μg/ml 농도에서 1시간 처리 시 96.4% 이상의 사멸율을 보였으며, 24시간 처리군에서는 100%의 사멸율을 보였다. 이러한 결과는 여드름 병소에 망고스틴 추출물을 짧은 시간 국소도포를 하더라도, 여드름 원인균에 대한 충분한 항균능이 있음을 보여준다.

	살균율 (평균; %)
균주	Staphylococcus aureus KCOM 1025			Staphylococcus aureus KCOM 1335			Staphylococcus aureus KCOM 1395
시간	10분	1시간	24시간	10분	1시간	24시간	10분	1시간	24시간
1% DMSO	0	0	0	0	0	0	0	0	0
0.5 μg/ml	0	0	0	0	0	0	0	0	0
1 μg/ml	0	0	0	0	32.7	0	0	30	0
2 μg/ml	0	0	0	0	34.6	100	0	38.7	0
4 μg/ml	0	80.3	0	16.1	99.7	100	40.0	97.5	0
8 μg/ml	0	96.7	100	92.9	100	100	79.4	100	100
16 μg/ml	98.9	100	100	99.9	100	100	99.0	100	100
균주	Staphylococcus aureus KCOM 1455			Staphylococcus aureus KCOM 1491			Staphylococcus aureus KCTC 1621^T
시간	10분	1시간	24시간	10분	1시간	24시간	10분	1시간	24시간
1% DMSO	0	0	0	0	0	0	0	0	0
0.5 μg/ml	0	0	0	0	0	0	0	0	0
1 μg/ml	0	0	0	0	43.3	0	0	35.9	0
2 μg/ml	0	0	0	0	60.0	100	0	43.9	0
4 μg/ml	14.7	97.3	0	80.0	100	100	30.8	96.4	100
8 μg/ml	78.7	100	0	98.3	100	100	53.8	99.3	100
16 μg/ml	99.3	100	100	99.9	100	100	100	100	100

한편, S. aureus KCOM 1025, S. aureus KCOM 1335, S. aureus KCOM 1395, S. aureus KCOM 1491 및 S. aureus KCTC 1621^T 균주의 경우, 망고스틴 추출물 1 내지 4μg/ml 농도로 10분 내지 1시간 처리 시 30% 내지 97.5%의 사멸율을 보였지만, 24시간 처리 시 0%의 사멸율을 보였다.

이러한 결과는 어떤 S. aureus 균주들에 망고스틴 추출물을 특정 농도, 예컨대 4 내지 8μg/ml 이하의 농도에서 오랜 기간 처리할 경우에는 충분한 항균능이 나타나지 않을 수 있다는 것을 나타낸다.

4. 큐티박테리움 아크네( Cutibacterium acnes ) 및 스타필로코커스 아우레우스( Staphylococcus aureus ) 균주들에 대한 최소살균농도(MBC) 값 측정

MBC 측정은 Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)에서 제시한 미세희석(micro-dilution) 법을 변형하여 사용하였다. 각 세균들을 각각에 적절한 배지에 접종하여 37℃에서 16시간 동안 배양한 후 1×10⁶ CFU/ml가 되도록 배지를 이용하여 희석한 다음 96-well plate에 분주하였다. 그 후 망고스틴 추출물이 0.5, 1, 2, 4, 8, 16μg/ml 농도가 되도록 세균 배양액에 첨가하였다. 이때 음성 대조군은 망고스틴 추출물 분말의 용매인 DMSO를 배양액에 1%를 첨가하여 세균을 배양한 군으로 설정하였고, 양성 대조군은 앰피실린(ampicillin)을 100μg/ml 첨가한 배양액으로 세균을 배양한 군으로 설정하였다. 이들을 37℃에서 10분, 1시간, 24시간 동안 배양하였다. 10분, 1시간의 세균배양액은 10배 희석하여 10μl를 취하여 한천배지에 도말하고 24시간의 세균배양액은 원액, 1000배, 10000배 희석하여 10μl를 취하여 한천배지에 도말하였다. 이를 37℃에서 24시간 동안 배양한 뒤 형성된 군락수를 세었다. 음성 대조군과 비교하여 99.9% 세균이 자라지 않는 최소 농도를 MBC 값으로 결정하였다. 각 반응은 3회 반복 실시하였다.

망고스틴 추출물의 처리 시간에 따른 큐티박테리움 아크네(Cutibacterium acnes) 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주들에 대한 최소살균농도를 아래 표 3에 정리하였다.

종 / 균주		최소살균농도(MBC) (μg/ml)
종 / 균주		10분	1시간	24시간
Cutibacterium acnes	KCOM 1315	>　16	8	2
	KCOM 1466	>　16	8	2
	KCOM 1543	>　16	16	2
	KCOM 1627	>　16	8	2
	KCOM 1899	>　16	16	4
	KCTC 3314^T	>　16	8	2
Staphylococcus aureus	KCOM 1025	>　16	16	8
	KCOM 1335	16	8	2
	KCOM 1395	>　16	8	8
	KCOM 1455	>　16	8	16
	KCOM 1491	16	4	2
	KCTC 1621^T	16	16	4

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 망고스틴 추출물을 1시간 처리한 경우 C. acnes 및 S. aureus 균주들에 대한 최소살균농도는 각각 8μg/ml 내지 16μg/ml이었으며 (S. aureus KCOM 1491 균주의 경우 4μg/ml), 24시간 처리한 경우에 C. acnes 및 S. aureus 균주들에 대한 최소살균농도는 각각 2μg/ml 내지 4μg/ml 및 2μg/ml 내지 16μg/ml이었다.

Claims

망고스틴 추출물을 포함하는 여드름 원인균에 대한 항균용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 여드름 원인균은 큐티박테리움 아크네(Cutibacterium acnes) 또는 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)인 것인, 항균용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 여드름 원인균은 C. acnes KCOM 1315, C. acnes KCOM 1466, C. acnes KCOM 1543, C. acnes KCOM 1627, C. acnes KCOM 1899, C. acnes KCTC 3314^T, S. aureus KCOM 1025, S. aureus KCOM 1335, S. aureus KCOM 1395, S. aureus KCOM 1455, S. aureus KCOM 1491 및 S. aureus KCTC 1621^T으로 이루어지는 군에서 선택되는 것인, 항균용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 망고스틴 추출물은 망고스틴 과피의, 물, 탄소수 1 내지 4개의 알코올, 헥세인, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 클로로포름, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 용매 추출물인 것인, 항균용 조성물.
제4항에 있어서,
상기 망고스틴 추출물은 망고스틴 과피의 80 내지 100%(v/v) 에탄올 수용액 추출물인 것인, 항균용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 망고스틴 추출물은 알파-망고스틴(α-mangostin) 또는 감마-망고스틴(γ-mangostin)을 30 내지 50%(w/v) 함량으로 함유하는 것인, 항균용 조성물.
제1항에 있어서,
여드름 원인균에 대해 10분 내지 24시간 처리되는 것을 특징으로 하는, 항균용 조성물.
제1항에 있어서,
여드름 원인균에 대해 10분 내지 1시간 처리되는 것을 특징으로 하는, 항균용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 망고스틴 추출물의 농도로서 여드름 원인균에 대해 1 내지 16μg/ml의 농도로 처리되는 것을 특징으로 하는, 항균용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 망고스틴 추출물의 농도로서 여드름 원인균에 대해 8μg/ml 내지 16μg/ml의 농도로 처리되는 것을 특징으로 하는, 항균용 조성물.
망고스틴 추출물을 포함하는 여드름의 치료, 경감, 처치 또는 예방용 약학적 조성물.
제11항에 있어서,
10분 내지 24시간 투여, 적용 또는 처리용인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제11항에 있어서,
10분 내지 1시간 투여, 적용 또는 처리용인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
망고스틴 추출물을 포함하는 여드름의 개선, 제거 또는 예방용 화장료 조성물.
제14항에 있어서,
마스크팩, 폼클렌징, 세안젤 및 비누로 이루어지는 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것인, 화장료 조성물.